專利名稱：脫氧野尻霉素的一種純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物與新醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及從植物中提取活性化合物，即從桑葉中提取分離高純度的1-脫氧野尻霉素及高附加值副產(chǎn)物桑葉多糖。
背景技術(shù)：
1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin，以下簡(jiǎn)稱“1-DNJ”)是一種多羥基哌啶生物堿，因其結(jié)構(gòu)類似單糖也稱為亞胺基糖，其化學(xué)名稱是3，4，5-三羥基-2-羥甲基四氫吡啶，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如

圖1所示，分子式為C6H13NO4，分子量為163。I-DNJ具有多種生物活性，可用于治療糖尿病、肥胖癥、病毒感染等疾病，同時(shí)可抑制腫瘤，對(duì)α-葡萄糖淀粉酶有抑制作用，并可用作載體用于高純度麥芽糖的酶合成。
權(quán)利要求
1.脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于(1)桑葉藥材除雜，干燥后粉碎，過(guò)篩，得提取用桑葉粉末；(2)原料粉末在乙醇溶液內(nèi)浸泡后，超聲波提取，分離固液相后獲得提取液，提取液濃縮并回收乙醇，離心，去沉淀；(3)將步驟( 得到的的離心濃縮液過(guò)陽(yáng)離子樹脂層析柱上樣后用蒸餾水沖洗至流出液無(wú)色為止，用氨水洗脫，收集PH 9-12段洗脫液，濃縮至小體積；(4)將步驟(3)得到的濃縮液調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，以氯仿萃取，留水相；(5)將步驟的水相用正丁醇萃取，保留正丁醇相，濃縮后收集析出固體；(6)將步驟(5)析出的固體用無(wú)水乙醇進(jìn)行重結(jié)晶；(7)將步驟(6)獲得的晶體溶于水后，過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱，流出液濃縮、干燥獲得1-脫氧野尻霉素精制品，純度不低于98. 5%。
2.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(1)所述的桑葉干燥粉碎后過(guò)30 50目篩。
3.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟( 所述乙醇的浸泡濃度為60% 65%，浸泡時(shí)間為30 40min。
4.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟( 所述超聲波的提取功率為125W，溫度70°C，提取次數(shù)為2 3次，每次30min。
5.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟C3)中所述的陽(yáng)離子樹脂為AB-8、732H、D152，氨水的洗脫濃度為0. 25 0. 30mol/L，洗脫速度為1 2mL/min。
6.如權(quán)利要求1中所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(4)所述 PH值調(diào)節(jié)液為鹽酸、醋酸，氯仿與濃縮液的體積比為1 2-1 4，萃取次數(shù)為2 4次。
7.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(5)所述正丁醇與水相的體積比為1 2-1 4，萃取次數(shù)為4 6次。
8.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(6)所述無(wú)水乙醇重結(jié)晶的次數(shù)為2 3次。
9.如權(quán)利要求1所述的脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于，步驟(7)所述凝膠過(guò)濾層析柱Superose 4B, Sephdex 20等，純水洗脫。
10.脫氧野尻霉素的一種純化方法，其特征在于制備獲得1-脫氧野尻霉素的同時(shí)可制備獲得桑葉多糖(1)將權(quán)利要求1步驟( 超聲波提取后分離獲得的固相加入2-3倍體積的蒸餾水，攪拌均勻后固液分離獲得提取液；(2)將權(quán)利要求10步驟(1)獲得提取液濃縮后加入乙醇、丙酮或異丙醇萃取，除去脂溶性部分，保留水相；(3)將權(quán)利要求10步驟⑵獲得水相內(nèi)加入乙酸乙酯或石油醚萃取，去除葉綠色，保留水相；(4)將權(quán)利要求10步驟C3)獲得水相內(nèi)加入無(wú)水乙醇，使其終濃度達(dá)到80%，攪拌均勻后4°C下靜置48h，抽濾，獲得沉淀物；(5)將權(quán)利要求10步驟(4)獲得沉淀物加水溶解后4°C下加入三氯乙酸，終濃度達(dá)到20%，攪拌20min后離心，保留液相，除蛋白；(6)將權(quán)利要求10步驟( 獲得液相過(guò)AB-8大孔徑吸附樹脂，蒸餾水洗脫，洗脫液濃縮后加活性炭脫色，脫色液加無(wú)水乙醇終濃度達(dá)到80%以上，攪拌均勻后4°C下靜置48h， 抽濾，沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮各洗3-5次，得白色沉淀；(7)將權(quán)利要求10步驟(6)獲得沉淀溶解透析(分子量11000以上)，干燥，獲得白色粉末，多糖含量高于90%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從植物內(nèi)提取化合物的純化技術(shù)，從天然產(chǎn)物桑葉中提取分離高純度1-脫氧野尻霉素，同時(shí)精制獲得桑葉多糖的方法，主要包括以下步驟原料預(yù)處理后溶于乙醇溶液，超聲波提取，提取液濃縮后過(guò)陽(yáng)離子樹脂，洗脫液濃縮后經(jīng)有機(jī)溶劑萃取、重結(jié)晶、凝膠過(guò)濾層析后制備獲得1-脫氧野尻霉素精制品，純度不低于98.5％。本工藝操作簡(jiǎn)單，成本低，環(huán)境污染低，設(shè)備典型，材料易于獲得，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102491938SQ20111042278
公開日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者殷紅 申請(qǐng)人:北京貫虹科技集團(tuán)有限公司