本發(fā)明屬微生物動(dòng)物細(xì)胞系領(lǐng)域，涉及中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株，具體涉及一種未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(TheChineseHumanLungAdenocarcinomacell，Yang6尤其是親代細(xì)胞致瘤但未見轉(zhuǎn)移特性的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(Yang6)及其用途。

背景技術(shù)：
肺癌是嚴(yán)重威脅人類生存和發(fā)展的惡性疾病之一，已成為腫瘤疾病中的頭號(hào)殺手。有統(tǒng)計(jì)顯示，2006年美國(guó)確診肺癌新病例約174470人，約占全部腫瘤的13％(男性)和12％(女性)，發(fā)病率僅次于皮膚癌；死于肺癌者約162460人，約占全部腫瘤的31％(男性)和26％(女性)，死亡率位居第一[1～2]；日本每年肺癌新發(fā)病例超過50000人，死亡率近90％。上海市近年的惡性腫瘤發(fā)病調(diào)查顯示，肺癌(21.56％)高居上海男性惡性腫瘤發(fā)病率榜首，在女性則僅次于乳腺癌。目前，臨床治療中，肺癌死亡率長(zhǎng)期居高不下的主要原因在于難以早期診斷和其高轉(zhuǎn)移性，許多患者首診時(shí)即發(fā)現(xiàn)有多器官轉(zhuǎn)移；由于肺癌轉(zhuǎn)移的生物學(xué)機(jī)制至今尚不明確，臨床缺乏有效的治療方法，因此，研究肺癌轉(zhuǎn)移發(fā)病機(jī)制并探索有效的診療方法是國(guó)內(nèi)外學(xué)者長(zhǎng)期以來的努力方向。當(dāng)前，隨著分子生物學(xué)、信號(hào)傳導(dǎo)途徑、蛋白功能研究等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，人類對(duì)疾病發(fā)病機(jī)理的研究手段有了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，但由于種種客觀限制，該領(lǐng)域的研究仍未有重要突破。雖然宿主微環(huán)境因素，包括破骨細(xì)胞以及一些具有生長(zhǎng)因子功能的基質(zhì)蛋白等對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移具有一定的作用，但有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞自身生物學(xué)特性無疑是骨轉(zhuǎn)移發(fā)生更為主要而直接的原因。由于大多數(shù)晚期肺癌均會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移，卻很少有未發(fā)生轉(zhuǎn)移的臨床現(xiàn)象，因此，如能在建立有效的人肺腺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞模型的同時(shí)建立不發(fā)生轉(zhuǎn)移的人肺腺癌細(xì)胞模型，這不僅能比較、篩選、確定轉(zhuǎn)移標(biāo)志，且能做敲除、轉(zhuǎn)染處置，為肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展、肺腺癌機(jī)制的研究提供更好的模型好研發(fā)平臺(tái)，這將有助于提升肺腺癌轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)研究水平和臨床診療水平。與本發(fā)明有關(guān)的參考文獻(xiàn)有：[1].AmericanCancerSociety.Cancerfactsandfigures2006.Atlanta，GA：AmericanCancerSociety；2006.pp.5～6[2].AlexG.Littlea，E.GreerGayb，LaurieE.Gasparc，AndrewK.Stewartd.Nationalsurveyofnon-smallcelllungcancerintheUnitedStates：Epidemiology，pathologyandpatternsofcare.LungCancer2007，57(2)：253-260[3].SaburoSone&SeijiYano.Molecularpathogenesisanditstherapeuticmodalitiesoflungcancermetastasistobone.CancerMetastasisRev.SpringerScience+BusinessMedia，LLC.2007[4].2003年上海市市區(qū)惡性腫瘤發(fā)病率.腫瘤，2006，26(7)：694.[5].J.S.Nam，A.M.Suchar，M.J.Kang，etal.BoneSialoproteinMediatestheTumorCell-TargetedPrometastaticActivityofTransformingGrowthFactorbetainaMouseModelofBreastCancer.CancerRes.2006；66(12)：6327-35.[6].HayashiC，RittlingS，HayataT，etal.Serumosteopontin，anenhanceroftumormetastasistobone，promotesBl6melanomacellmigration.JCellBiochem.2007；101(4)：979-86.[7].楊順芳，蘇建中，曹杰，張佩玲，陸建英，謝文暉。中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞系CPA-Yang1的建立及其生物學(xué)特性。中國(guó)肺癌雜志2009，12(7)：753-759[8].楊順芳，蘇建中，時(shí)梅萍，趙蘭香，張佩玲，曹杰，陸建英，謝文暉.中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞系CPA-Yang2的建立及生物學(xué)特性.中國(guó)肺癌雜志，2009，12(10)：1055-1060。[9].楊順芳，時(shí)梅萍，曹杰，蘇建中，趙蘭香，雷貝，常城，陸建英，葉劍定，謝文暉。中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞系CPA-Yang3及其骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞的建立。中國(guó)肺癌雜志，2011，14(2)：79-85。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株；本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供所述肺腺癌細(xì)胞株的醫(yī)用用途。本發(fā)明采用取自首診65歲女性肺腺癌患者的胸腔積液作細(xì)胞原代培養(yǎng)材料，通過細(xì)胞培養(yǎng)，獲得未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(Yang6)，已于2011年10月28日保藏，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏編號(hào)：CGMCCNo.5404，分類命名：中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株Yang6(TheChineseHumanLungAdenocarcinomacell，Yang6)。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)裸鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)，所述的未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(Yang6)，貼壁生長(zhǎng)，具有不轉(zhuǎn)移性，細(xì)胞形態(tài)優(yōu)美呈圓形或部分多邊形，生長(zhǎng)速度緩慢。本發(fā)明中，采集晚期肺腺癌首診患者的新鮮胸水50毫升，每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶吸8毫升胸水和雙抗后稍搖勻，放入培養(yǎng)溫度為37℃、CO2濃度為5％的德國(guó)賀利氏BB16型二氧化碳孵養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；一周后光鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶底稀疏長(zhǎng)出細(xì)胞；10天后，光鏡下觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)瓶底長(zhǎng)出細(xì)胞較前幾天略多；所述細(xì)胞生長(zhǎng)增速不快，細(xì)胞很小呈貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，多邊形、均勻；培養(yǎng)初期細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；細(xì)胞形態(tài)不穩(wěn)定，傳至第9代，細(xì)胞形態(tài)基本定型，生長(zhǎng)速度變化不大；裸小鼠皮下種植細(xì)胞2×106/只，每代均致瘤，但是皮下瘤生長(zhǎng)緩慢，3個(gè)月僅生長(zhǎng)出0.2-0.3cm2大小瘤子；凍存復(fù)蘇后性狀不變；在相差倒置顯微鏡下觀察上述細(xì)胞生長(zhǎng)情況：貼壁細(xì)胞中多邊形和圓形約各占70％和30％；細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，可見分裂相，多核，獲得本發(fā)明的未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(Yang6)。本發(fā)明中，上述細(xì)胞各代能使裸鼠皮下致瘤，親代細(xì)胞和瘤細(xì)胞經(jīng)左心室種植5只小鼠2個(gè)月后行99mTc-MDPmicropinhole骨顯像均未檢出骨轉(zhuǎn)移灶；各小鼠生存期均大于6個(gè)月。本發(fā)明所述的細(xì)胞株具有以下生物學(xué)特性：1、致瘤率低，各代細(xì)胞均能皮下種植致瘤但瘤體生長(zhǎng)緩慢；2、無任何骨轉(zhuǎn)移和其他臟器轉(zhuǎn)移。本發(fā)明中所述的未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株Yang6為特殊的國(guó)人肺腺癌細(xì)胞系，其生長(zhǎng)速度緩慢，細(xì)胞形態(tài)異常，各代均致瘤但左心室造模卻未見任何骨轉(zhuǎn)移和其他臟器轉(zhuǎn)移；所述的細(xì)胞株Yang6可作為人肺腺癌的比較研究細(xì)胞模型，其具有獨(dú)特的分子生物學(xué)特性、異質(zhì)性、多態(tài)性，在揭示人肺腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制和抗轉(zhuǎn)移藥物篩選的應(yīng)用中有著廣闊的前景。附圖說明圖1為p2細(xì)胞生長(zhǎng)圖。圖2顯示了p2細(xì)胞生長(zhǎng)情況。圖3顯示了P3細(xì)胞100倍的形態(tài)。圖4顯示了P6細(xì)胞在40倍倒置顯微鏡下形態(tài)，其中，P6后細(xì)胞形態(tài)呈穩(wěn)定、緩慢生長(zhǎng)。圖5顯示了本發(fā)明所述細(xì)胞的第四代送檢染色體分析情況。圖6顯示了本發(fā)明所述細(xì)胞為亞三倍體。圖7顯示了本發(fā)明所述細(xì)胞的培養(yǎng)情況，其中，自采集新鮮胸腔積液細(xì)胞培養(yǎng)出各代細(xì)胞均能皮下種植致瘤，皮下種植100萬細(xì)胞但瘤體生長(zhǎng)緩慢，將3只實(shí)驗(yàn)鼠飼養(yǎng)5個(gè)月后處死后取材細(xì)胞培養(yǎng)。圖8顯示了Yang6p6細(xì)胞H&E染色形態(tài)。圖9顯示99mTc-MDPmicropinhole骨顯像左心室注射百萬Yang6細(xì)胞未見任何骨轉(zhuǎn)移。圖10為熒光定量PCR結(jié)果。具體實(shí)施方式實(shí)施例1取初診肺腺癌患者的淡黃色胸水培養(yǎng)物，首代細(xì)胞培養(yǎng)在其本人胸水中體外培養(yǎng)后，3天后5瓶細(xì)胞培養(yǎng)瓶收集該患者的肺腺癌細(xì)胞達(dá)30萬；以2×106細(xì)胞量/0.1mL/只，種植免疫缺陷小鼠BALB/cnu-nu裸鼠腋下皮下，SPF級(jí)飼養(yǎng)1.5個(gè)月小鼠皮下長(zhǎng)出0.5cm3，2個(gè)月僅長(zhǎng)出0.5-0.8CM3，，結(jié)果顯示，裸鼠SPF環(huán)境下飼養(yǎng)，所述癌細(xì)胞從親代-p9代細(xì)胞都能皮下致瘤，但瘤子生長(zhǎng)緩慢；將皮下瘤取出做細(xì)胞培養(yǎng)，擴(kuò)增后實(shí)驗(yàn)裸鼠左心室注射，3個(gè)月后仍未見小鼠異常。在相差倒置顯微鏡下觀察Yang6細(xì)胞生長(zhǎng)情況：貼壁細(xì)胞中多邊形和圓形約各占70％和30％，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，可見分裂相，多核；在相差顯微鏡下，p2細(xì)胞生長(zhǎng)如圖1，2所示，P3細(xì)胞100倍如圖3所示；40倍倒置顯微鏡P6細(xì)胞如圖4所示；P6后細(xì)胞形態(tài)呈穩(wěn)定、緩慢生長(zhǎng)；相差顯微鏡下活細(xì)胞呈不典型上皮類細(xì)胞生長(zhǎng)，邊界清晰、形態(tài)小而均勻、貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞形態(tài)同乳腺癌MDA-MB-231，獲得本發(fā)明的未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株(Yang6)。所述培養(yǎng)物的培養(yǎng)條件、檢測(cè)存活條件為：培養(yǎng)基為含10％胎牛血清RPMI1640或DMEM培養(yǎng)基，pH＝7，培養(yǎng)溫度為37℃，5％CO2孵養(yǎng)箱培養(yǎng)；5-7天換培養(yǎng)液；所述的人肺腺癌細(xì)胞(Yang6)1×106，注入免疫缺陷小鼠血液系統(tǒng)，兩周后隔天稱重，第三周起每周進(jìn)行核素骨顯像檢測(cè)，核素骨顯像證實(shí)該細(xì)胞無骨轉(zhuǎn)移能力。該人肺腺癌細(xì)胞(Yang6)可作為一個(gè)少見的、不活躍的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞進(jìn)行比較研究。實(shí)施例2基因表達(dá)水平比較試驗(yàn)采用RT-PCR法對(duì)獲得的未具有轉(zhuǎn)移潛能的中國(guó)人肺腺癌細(xì)胞株Yang6與A549進(jìn)行SERPINA1，IGFBP2，CDH1，KRT19，ARG2和TMEM100基因等表達(dá)水平的比較；結(jié)果表明，本發(fā)明的細(xì)胞株Yang6為一特殊的國(guó)人肺腺癌細(xì)胞系，其生長(zhǎng)速度緩慢，細(xì)胞形態(tài)異常，各代均致瘤但左心室造模卻未見任何骨轉(zhuǎn)移和其他臟器轉(zhuǎn)移；進(jìn)一步經(jīng)利用該細(xì)胞做8種化療藥物的敏感性試驗(yàn)后，臨床根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果使用諾維本+順鉑方案臨床治療實(shí)施例1的肺腺癌患者，顯示有一定療效。所述的細(xì)胞株Yang6其具有獨(dú)特的分子生物學(xué)特性、異質(zhì)性、多態(tài)性，可作為人肺腺癌的比較研究細(xì)胞模型，在揭示人肺腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制和抗轉(zhuǎn)移藥物篩選的應(yīng)用中將有著廣闊的前景。