專利名稱：殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體涉及了一種殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法。
背景技術：
目前在臨床上使用最廣泛的抗凝劑是肝素，但是它價格昂貴，不易獲得，且使用時容易出現副作用。在醫(yī)藥領域迫切需要研制價格低廉，方便易得，抗凝效果好的抗凝劑來滿足醫(yī)用需求。殼聚糖廣泛存在于蠶蛹等動物的外表皮中，無毒、無刺激、可自然降解，具有良好的組織相容性和較高的生物活性，完全符合醫(yī)用的條件。且殼聚糖分子上有許多活潑基團，容易進行化學改性。因此，研究殼聚糖甘氨酸衍生物具有重大的理論和實際意義，若衍生物有抗凝活性，便找到了一種可能替代肝素的新型抗凝劑，為開發(fā)新型殼聚糖基抗凝血材料開辟了新的途徑，給其它殼聚糖的改性提供了依據，對醫(yī)藥研發(fā)也有指導意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明為了將甘氨酸分子接枝到殼聚糖分子上，形成對血液中的鈣離子有螯合作用的化合物，通過對不同脫乙酰度的殼聚糖進行反應，提供一種殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法。為了實現上述目的本發(fā)明采用如下技術方案殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)衍生物反應中間體的合成取摩爾比為1 1-1. 5的甘氨酸和氫氧化鈉，在三角瓶中用氫氧化鈉溶液中和甘氨酸至PH = 9. 0，制得甘氨酸鈉溶液，向三角瓶中緩慢加入與甘氨酸等摩爾的環(huán)氧氯丙烷， 室溫下充分攪拌，水浴控制反應在40-50°C攪拌15-45min，至溶液變?yōu)榈S色的澄清液體， 鹽酸中和至中性，產物倒入丙酮，進行脫水、重結晶，乙醇洗滌，旋轉蒸發(fā)儀蒸干后，真空干燥得到反應中間體 C00H-CH2-NH-CH2-CH(OH)-CH2-Cl ；(2)殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的合成取摩爾比為1 1-2的殼聚糖和反應中間產物，將殼聚糖加入到質量分數為 40% -60%的氫氧化鈉水溶液，在-16-20°C冰箱堿化1天，殼聚糖完全溶脹后，加入上述中間體，58-62°C攪拌2-4h，過濾除去未反應的中間體，用丙酮脫水，30% -70%乙醇洗滌至pH =7，真空干燥后得殼聚糖甘氨酸衍生物C6H11NO5-CH2-CH(OH)-CH2-NH-CH2-COOHt5本發(fā)明的技術特點是將氨基酸的氨基端接到含氯原子的烷基化合物上，然后和殼聚糖C6上的的羥基發(fā)生威廉遜合成反應，制成本發(fā)明產物。由于殼聚糖C3和C6上的-OH 及其C2上的-NH2都能發(fā)生取代反應，但是由于C3上的空間位阻效應，以及C2和C3分子間的氫鍵作用，使C3位上較難發(fā)生取代反應，而是以C6位上的取代反應為主。對于C6-OH和 C2-NH2來說，在堿性條件下，羥基上的取代反應活性要高于氨基上的取代活性，因此可以通過控制反應條件——在高濃度堿性(40% -60% )條件下，來控制殼聚糖的反應位點的活性差異，以制備C6-OH羧基化衍生物。本發(fā)明的結構單元為C6H11NO5-C6H12NO4，其中C6H11NO5為殼聚糖的骨架結構，C6H12NO4 為甘氨酸化合物。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明工藝簡單，操作方便，所制備的抗凝血劑具有優(yōu)良的抗凝血性能，其原料具有良好的生物相容性，可以自然降解，沒有毒性和刺激性，可以應用于臨生物醫(yī)藥等領域， 本發(fā)明具有體外抗凝血效果，lmg/ml的衍生物可以使血液凝固時間延長至132秒。
具體實施例方式實例例1 殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法，包括以下步驟本發(fā)明按1 1的摩爾比稱取11. 18g甘氨酸和13.88g環(huán)氧氯丙烷，在三角瓶中用的氫氧化鈉溶液中和甘氨酸至PH = 9. 0，制得甘氨酸鈉溶液，向三角瓶中緩慢加入與甘氨酸等摩爾的環(huán)氧氯丙烷，室溫下充分攪拌，此時溶液為乳濁液，水浴控制反應在50°C左右繼續(xù)攪拌15min，至溶液變?yōu)榈S色的澄清液體，鹽酸中和至中性。經過丙酮脫水重結晶， 30%乙醇洗滌，旋轉蒸發(fā)儀蒸干后，真空干燥得到反應中間體。因此稱取2. Og殼聚糖，置于200ml燒杯中，加入質量分數為55%的氫氧化鈉水溶液，堿溶液完全浸沒殼聚糖后，在-18°C冰箱堿化1天，殼聚糖完全溶脹后。濾去氫氧化鈉， 加入溶于水中的上述中間體3. 4g，60°C攪拌4h，過濾，除去未反應的中間體，用丙酮脫水， 乙醇洗滌至PH = 7，真空干燥后得殼聚糖甘氨酸衍生物。實施例2 本發(fā)明的殼聚糖甘氨酸衍生物使用純化方法由于本發(fā)明制備的殼聚糖甘氨酸衍生物應用于生物醫(yī)藥領域，直接作用于人體， 為避免有害物質混入其中，需要經過純化，除去雜質，除鹽等，本發(fā)明使用透析的方法純化殼聚糖，將殼聚糖和水的懸濁液經過硝酸纖維素膜，使無機鹽和小分子的雜質透過膜，而達到純化殼聚糖的目的。殼聚糖甘氨酸衍生物是用沉淀的方法純化的，首先在衍生物中倒入丙酮，待衍生物完全沉淀后，倒去丙酮，重復操作3次，后用酒精反復洗滌，濾去酒精，真空干燥后備用， 每次使用前，都應將衍生物高壓滅菌，避免微生物的影響。
權利要求
1.殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)衍生物反應中間體的合成取摩爾比為1 1-1. 5的甘氨酸和氫氧化鈉，在三角瓶中用氫氧化鈉溶液中和甘氨酸至pH = 9. 0，制得甘氨酸鈉溶液，向三角瓶中緩慢加入與甘氨酸等摩爾的環(huán)氧氯丙烷，室溫下充分攪拌，水浴控制反應在40-50°C攪拌15-45min，至溶液變?yōu)榈S色的澄清液體，鹽酸中和至中性，產物倒入丙酮，進行脫水、重結晶，乙醇洗滌，旋轉蒸發(fā)儀蒸干后，真空干燥得到反應中間體 C00H-CH2-NH-CH2-CH(OH)-CH2-Cl ；(2)殼聚糖甘氨酸抗凝血類衍生物的合成取摩爾比為1 1-2的殼聚糖和反應中間體，將殼聚糖加入到質量分數為40%-60% 的氫氧化鈉水溶液，在-16--20°C冰箱堿化1天，殼聚糖完全溶脹后，加入上述中間體， 58-62°C攪拌2-4h，過濾除去未反應的中間體，用丙酮脫水，30% -70%乙醇洗滌至pH = 7， 真空干燥后得殼聚糖甘氨酸衍生物C6H11NO5-CH2-CH(OH) -CH2-NH-CH2-C00H。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種殼聚糖甘氨酸衍生物的制備方法，其主要是先通過氫氧化鈉溶液中和甘氨酸制得甘氨酸鈉溶液，使其與環(huán)氧氯丙烷，然后依次通過水浴反應、鹽酸中和至中性、重結晶、洗滌、旋轉蒸發(fā)儀蒸干、干燥得到反應中間體，然后殼聚糖加入到氫氧化鈉水溶液，使其完全溶脹后，加入等摩爾的中間體，攪拌得產物經脫水，乙醇洗滌，真空干燥后得到殼聚糖甘氨酸衍生物。本發(fā)明工藝簡單，操作方便，所制備的抗凝血劑具有優(yōu)良的抗凝血性能，其原料具有良好的生物相容性，可以自然降解，沒有毒性和刺激性，可以應用于臨生物醫(yī)藥等領域。
文檔編號C08B37/08GK102351962SQ201110227348
公開日2012年2月15日 申請日期2011年8月9日 優(yōu)先權日2011年8月9日
發(fā)明者吳大洋, 孫家羿, 漆學文, 石涼, 秦鳳, 童曉琪, 黃德輝 申請人:安徽省農業(yè)科學院蠶桑研究所, 石涼