專利名稱：一種具有雙抗特性(抗高溫、酶解)的無顆粒化交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用生物材料技術(shù)領(lǐng)域，是一種涉及一種新型交聯(lián)透明質(zhì)酸的制備方法，該交聯(lián)透明質(zhì)酸用于醫(yī)學(xué)填充美容。
背景技術(shù)：
透明質(zhì)酸是人和動物皮膚、玻璃體、關(guān)節(jié)潤滑液和軟骨組織的重要成分，它由(I-^ -4) D-葡糖醛酸和(I- ^ -3) N-乙酰基-D-氨基葡糖雙糖單位重復(fù)連接而成，廣泛使用在修復(fù)手術(shù)、眼部手術(shù)或作為美容產(chǎn)品填充皺紋。透明質(zhì)酸具有良好的理化性能及生物相容性。然而，它在體內(nèi)受到透明質(zhì)酸酶的酶解作用而迅速降解，存留時間較短，需要重復(fù)注射才能達(dá)到療效。交聯(lián)透明質(zhì)酸是透明質(zhì)酸經(jīng)交聯(lián)劑交聯(lián)修飾得到的高分子凝膠，可以彌 補(bǔ)透明質(zhì)酸存留時間短等缺點，同時仍具有良好的生物相容性及效果?，F(xiàn)在交聯(lián)透明質(zhì)酸的制備方法，大多采用高濃度的透明質(zhì)酸溶液與交聯(lián)劑反應(yīng)，得到塊狀的交聯(lián)凝膠，然后經(jīng)透析，制?；蚍鬯?，得到一定濃度的交聯(lián)透明質(zhì)酸。該方法的缺點在于透析過程中，需控制透析時間時間，才能得到合適的濃度；同時，制粒或粉碎過程中造成透明質(zhì)酸鈉分子鏈的破化以及酶解位點的無規(guī)暴露，縮短體內(nèi)降解時間，同時粒度不均勻以及交聯(lián)劑殘留的問題造成交聯(lián)產(chǎn)品的可注射性以及生物相容性大大降低，必須通過層層的質(zhì)量控制，不利于大規(guī)模生產(chǎn)?，F(xiàn)如今授權(quán)的發(fā)明專利主要集中在通過高起始濃度的透明質(zhì)酸鈉溶液進(jìn)行交聯(lián)，然后通過改進(jìn)交聯(lián)反應(yīng)的方式得到較為理想的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。ZL101056891B專利中采用10%的起始交聯(lián)濃度然后改進(jìn)傳統(tǒng)的交聯(lián)劑的加入方式，即在溶解前將透明質(zhì)酸鈉和交聯(lián)劑一起溶解，得到一整塊的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，其后續(xù)的處理工藝都是傳統(tǒng)的粉碎或擠壓、透析得到一定濃度范圍的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠；因此如何得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉干粉然后溶解得到可控濃度的制備方法成為交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉的發(fā)展方向，但目前還沒有一項專利涉及到。透明質(zhì)酸鈉的交聯(lián)反應(yīng)的最終目的是在保證其生物相容性的基礎(chǔ)上盡可能的提聞其體內(nèi)的殘留時間，目如的專利雖然通過各種辦法如提聞交聯(lián)度，提聞起始反應(yīng)濃度、縮短反應(yīng)時間等，但是仍擺脫不了傳統(tǒng)的粉碎擠壓等工藝的使用，ZL200480010239. I采用高分子量的纖維狀透明質(zhì)酸鈉樣品，但仍通過傳統(tǒng)的擠壓工藝得到了較長降解時間的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，其高酶濃度(1000U)降解48h后糖醛酸釋放量為75%，該專利考察了物理的機(jī)械作用力對交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉的影響巨大，因此交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉制備工藝中如何有效地減少物理擠壓或粉碎對產(chǎn)品造成的影響是提高體內(nèi)降解時間的有效手段。目前為止，還沒有一項專利涉及到無擠壓或粉碎工藝的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的優(yōu)點
本發(fā)明為一種新型的交聯(lián)透明質(zhì)酸的制備方法。在較低濃度下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，交聯(lián)好的透明質(zhì)酸溶液通過有機(jī)溶劑析出沉淀，析出的沉淀經(jīng)溶劑洗滌后，復(fù)溶得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。該交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠具有低交聯(lián)劑殘留、體內(nèi)存留時間長、凝膠性能好等優(yōu)點。該制備方法易操作、適合大規(guī)模生產(chǎn)。由于在低濃度的透明質(zhì)酸中，透明質(zhì)酸鈉是成線性平行分布，這樣進(jìn)行交聯(lián)主要是分子間交聯(lián)，得到的凝膠性能更好；通過該制備方法，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸的固體沉淀，用有機(jī)溶劑多次洗滌后，可以快速的、有效的去除未反應(yīng)的交聯(lián)劑，經(jīng)檢測，有機(jī)溶劑洗滌后，交聯(lián)劑殘留為0 ;同時，不同于其他交聯(lián)透明質(zhì)酸的制備方法，本發(fā)明可以得到交聯(lián)透明質(zhì)酸的固體沉淀，該沉淀可以根據(jù)實際需要配制各種濃度的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠，便于臨床使用。本發(fā)明專利制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉由于制備過程中擯棄了物理機(jī)械外力對透明質(zhì)酸鈉的破壞，得到的樣品具有抗高溫滅菌和抗高濃度酶的降解的雙抗特性，同時交聯(lián)反應(yīng)是在低濃度線性分子狀態(tài)下進(jìn)行的，因此得到的樣品具有無顆?；Ａ袅嗽蟹肿拥恼んw特性，其注射性顯著提高。


圖I為交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠滅菌前后動力粘度變化比較圖2為不同洗滌次數(shù)洗滌液中交聯(lián)劑殘留量圖3為體外高濃度透明質(zhì)酸鈉酶交聯(lián)樣品的降解率比較
具體實施例方式現(xiàn)結(jié)合實施例，對本發(fā)明作了詳細(xì)描述實施例一Ig透明質(zhì)酸干粉溶2 %的氫氧化鈉溶液50ml中，待完全溶解后，加入交聯(lián)劑二乙烯基砜150微升，水浴加熱40°C，反應(yīng)3h ;反應(yīng)結(jié)束后，緩慢加入95%的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，該白色沉淀用同樣濃度的乙醇溶液洗滌3 4次后，過濾，得到白色顆粒；該白色顆粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。實施例二Ig透明質(zhì)酸干粉溶于2 %的氫氧化鈉溶液50ml中，待完全溶解后，加入交聯(lián)劑二乙烯基砜180微升，水浴加熱45°C，反應(yīng)3h ;反應(yīng)結(jié)束后，緩慢加入95%的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，該白色沉淀用同樣濃度的乙醇溶液洗滌3 4次后，過濾，得到白色顆粒；該白色顆粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。實施例三Ig透明質(zhì)酸干粉溶于2%的氫氧化鈉溶液50ml中，待完全溶解后，加入交聯(lián)劑二乙烯基砜200微升，水浴加熱50°C，反應(yīng)2h ;反應(yīng)結(jié)束后，緩慢加入95%的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，該白色沉淀用同樣濃度的乙醇溶液洗滌3 4次后，過濾，得到白色顆粒；該白色顆粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。實施例四 Ig透明質(zhì)酸干粉溶于20 %的碳酸鈉溶液50ml中，待完全溶解后，加入交聯(lián)劑二乙烯基砜200微升，水浴加熱50°C，反應(yīng)2h ;反應(yīng)結(jié)束后，緩慢加入95%的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，該白色沉淀用同樣濃度的乙醇溶液洗滌3 4次后，過濾，得到白色顆粒；該白色顆粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。實施例五Ig透明質(zhì)酸干粉溶于2%的氫氧化鈉溶液50ml中，待完全溶解后，加入交聯(lián)劑二乙烯基砜250微升，水浴加熱50°C，反應(yīng)2h ;反應(yīng)結(jié)束后，緩慢加入95%的乙醇溶液，直至析出白色沉淀，該白色沉淀用同樣濃度的乙醇溶液洗滌3 4次后，過濾，得到白色顆粒；該白色顆粒用PBS溶液50ml溶解后，透析得到交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。實施例六
分別取實施例一、二、三、四、五制得的交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠20ml，分別裝入10個安培瓶中，分別編號為la、lb、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b，編號為b的5個樣品，進(jìn)行蒸汽滅菌，(121°C、30min)。然后，分別測定每個樣品滅菌前后動力粘度的下降比例，研究樣品對蒸汽滅菌的抗性能力。數(shù)據(jù)見附圖I。實施例七按實施例一的反應(yīng)比例制備透明質(zhì)酸凝膠，析出白色沉淀用95%的乙醇溶液洗滌8次后，每次洗滌用的溶液進(jìn)行交聯(lián)劑殘留檢測。得到的數(shù)據(jù)見附圖2。實施例八由實施例三、四得到的樣品經(jīng)蒸汽滅菌，(121°C、30min)后。取凝膠1ml，加入透明質(zhì)酸酶液4ml (1000UI);同樣取Restylane 凝膠1ml，加入透明質(zhì)酸酶液4ml (1000U)，37°C水浴48h，離心取上清液測定糖醛酸含量。參見附圖3。
權(quán)利要求
1.一種新型的交聯(lián)透明質(zhì)酸的制備過程，其主要特征為以低濃度透明質(zhì)酸為基質(zhì)通過交聯(lián)，再通過有機(jī)溶劑將交聯(lián)好的透明質(zhì)酸沉淀，得到抗高溫滅菌以及抗酶降解的交聯(lián)透明質(zhì)酸干粉。
2.如權(quán)利要求I所述，用于交聯(lián)的透明質(zhì)酸鈉分子量為10 300萬Da。
3.如權(quán)利要求I所述,用于交聯(lián)的透明質(zhì)酸鈉通過Na0H、NaC03以及其他堿性溶液對其進(jìn)行活化。
4.如權(quán)利要求3所述，活化后透明質(zhì)酸的溶液為0.I 5%的Na0H、NaC03以及其他堿性溶液(m/m% )。
5.如權(quán)利要求4所述，透明質(zhì)酸溶液采用低濃度交聯(lián)，其濃度為0.1% 10%(m/m% )。
6.如權(quán)利要求I所述，交聯(lián)采用的交聯(lián)劑為二乙烯基砜、戊二醛、1，4_丁二醇二縮水甘油醚等。
7.如權(quán)利要求I所述，透明質(zhì)酸和交聯(lián)劑的比例為15/1 l/l(m/v)，交聯(lián)時間為0. 5-6小時。
8.如權(quán)利要求I所述，透明質(zhì)酸交聯(lián)反應(yīng)的溫度為30 60°C，低速攪拌，轉(zhuǎn)速為50-300rpmo
9.如權(quán)利要求I所述，沉淀交聯(lián)透明質(zhì)酸的有機(jī)溶劑為乙醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷中的一種或兩種以上的混合溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備方法，該方法通過低濃度線性分子狀態(tài)下進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，擺脫了傳統(tǒng)工藝的粉碎或擠壓對交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉的機(jī)械外力造成的酶解位點的過多暴露。采用有機(jī)溶劑進(jìn)行物理沉淀得到白色粉狀交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉顆粒有效地去除多余的交聯(lián)劑，保證了不同濃度產(chǎn)品的精確配置。該專利制備的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉具有抗高溫和抗酶解的雙抗特性，同時具有無顆?；奶匦?，優(yōu)良的可注射性得以顯著提高。121℃，滅菌30min后動力粘度減少3-10％之間，1000U透明質(zhì)酸鈉酶解48h，糖醛酸釋放量＜40％。
文檔編號C08K5/1515GK102757572SQ20111010810
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者奚宏偉, 蔣麗霞, 魏長征 申請人:上海其勝生物制劑有限公司