專利名稱：離子平衡交換法制備肝素鋰的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及肝素鋰的制備方法，特別涉及以粗品肝素鈉為原料，采用離子平衡交換法制備精品肝素鋰的方法。
背景技術：
肝素是由動物結(jié)締組織的肥大細胞產(chǎn)生的，它廣泛存在于哺乳動物的各器官組織中，如腸粘膜、十二指腸、肺、肝、心、胰臟、胎盤和血液中。國外大多數(shù)藥用肝素是由牛肺中提取的。我國的豬小腸資源豐富，腸粘膜肝素含量又高，所以我國以豬小腸粘膜提取肝素為主。肝素是一種粘多糖的硫酸酯，由糖醛酸(L-艾杜糖醛酸，D-葡糖醛酸)和己糖胺(α-D-葡糖胺)組成，其平均分子質(zhì)量為12000-15000。
肝素鋰在臨床檢驗中有獨特的價值，廣泛應用于臨床生化學檢查和急診生化檢查以及血液流變學檢查等的血液標本的采集和抗凝。它具有上機速度快，操作溫度范圍廣，不導致纖維蛋白二次析出，與血清標本指標兼容性強等優(yōu)點。此外，血氣分析也需采用肝素鋰抗凝，而且一些高檔血氣分析儀必須選用肝素鋰作為抗凝劑。目前大部分醫(yī)院用患者血清進行生化實驗，各種正常值也是根據(jù)血清中的含量所確定。但是用血清測定有其本身的弊端，血液從人體抽出到凝固析出血清一般需要一小時以上的時間，嚴重影響了結(jié)果回報的時間。因此，急診常用肝素鈉抗凝血漿進行生化檢測。而采用肝素鈉抗凝，由于有外源性鈉離子的存在，對血漿鈉和其他離子檢測有一定影響，而肝素鋰沒有影響。由于肝素鋰在檢測非鋰離子時產(chǎn)生干擾的可能性最小，目前在血液檢驗中正在逐漸取代肝素鈉。
肝素鋰的制備目前國內(nèi)尚無報道，國外制備肝素鋰均采用離子交換法，該法需要選用精品肝素鈉為原料，不僅原料成本高，而且在離子交換過程中可引起pH急劇下降。由于肝素分子中的N-硫酸基對酸水解敏感，因而嚴重影響產(chǎn)品的收率和效價，并且交換過程必須在低溫條件下進行，導致肝素鋰的價格昂貴。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術不足，提供一種原料來源廣泛，成本低的肝素鋰的制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣現(xiàn)實的一種制備肝素鋰的方法，以粗品肝素鈉為原料，按下述步驟制備第1、去蛋白質(zhì)用NaCl溶液浸泡粗品肝素鈉，濾出上清液，預冷到10℃以下，用HCl溶液調(diào)pH至1.5，過濾，隨即用NaOH調(diào)pH至11.0，靜置，過濾去沉淀物，得肝素鈉濾液；
第2、脫色按步驟1所得的肝素鈉濾液3wt％-4wt％加入濃度為30wt％的過氧化氫，氧化24-48小時，并不斷調(diào)整pH至11，濾去沉淀物，濾液調(diào)pH至6.8-7.2，加濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，離心收集沉淀物；第3、離子平衡交換步驟2所得的沉淀物用氯化鋰溶液溶解，攪拌，平衡交換15-30分鐘，隨后超濾濃縮至原體積的一半，再補加上述氯化鋰溶液至原體積，重復上述過程，至鈉離子含量達到規(guī)定指標；第4、沉淀與干燥步驟3所得的濃縮液用0.8-1.0倍體積的濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，離心收集沉淀物，用氯化鋰溶液溶解沉淀物中肝素，離心，其上清液加入2-3倍體積的濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，靜置，沉淀用無水乙醇和丙酮反復洗滌，直至成粉末，然后真空干燥，磨細，得肝素鋰精品。
上述制備肝素鋰的方法，在去蛋白質(zhì)過程中，粗品肝素鈉用10-15倍重量的1wt％-2wt％NaCl溶液浸泡，濾出的上清液預冷到10℃以下，用6mol/L HCl調(diào)pH至1.5，過濾，隨即用5mol/L NaOH調(diào)pH至11.0。
上述制備肝素鋰的方法，在脫色過程中，加濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀24小時以上，離心收集沉淀物。
上述制備肝素鋰的方法，在離子平衡交換過程中，所用的氯化鋰溶液的濃度為2wt％-10wt％；其超濾濃縮所用的超濾器為截留分子量為5000的超濾器。
上述制備肝素鋰的方法，在沉淀與干燥步驟中，所用的氯化鋰溶液的濃度為2wt％。。
本發(fā)明選用粗品肝素鈉為原料，原料來源廣泛，成本低。此外，發(fā)明采用離子平衡交換法制備肝素鋰，交換過程在室溫條件下進行，pH保持穩(wěn)定，因此產(chǎn)品回收率提高10wt％以上，產(chǎn)品效價提高到150u/mg以上。由于在離子平衡交換過程中運用超濾技術進行濃縮，工藝流程也明顯縮短。與國外報道的肝素鋰制備方法相比，本發(fā)明具有以下創(chuàng)新(1)國外以精品肝素鈉為原料制備肝素鋰，本發(fā)明以粗品肝素鈉為原料。原料價格低。(2)國外以離子交換法制備肝素鋰，本發(fā)明以離子平衡交換法制備肝素鋰，離子平衡交換不僅能提高效率和降低成本，而且還能提高肝素鋰的效價。
本方法制備的肝素鋰的質(zhì)量指標為物理性狀白色或乳白色，無定形粉末，無嗅，易潮解；效價156u/mg；pH值1wt％溶液的pH值在6.8；溶解度 5wt％溶液是澄清的；干燥失重6.5wt％；
灰分32wt％；蛋白質(zhì) 陰性；氮 2.1wt％；Na+0.12wt％；K+ 0.05wt％；Ca2+ 0.08wt％；Li+: 4.1wt％；重金屬 0.002wt％。
具體實施例方式
實施例1取粗品肝素鈉100g用1000ml的1wt％NaCl溶液浸泡，攪拌溶解。靜置至澄清，虹吸出上清液。再用500ml的1wt％NaCl浸泡沉淀物，濾出上清，合并二次上清液，預冷10℃以下。用6mol/L HCl調(diào)pH至1.5，加硅藻土，過濾。隨即用5mol/L NaOH調(diào)pH至11.0；靜置4小時，過濾去沉淀物。按肝素鈉濾液3wt％加入濃度為30wt％的過氧化氫，氧化24小時，不斷調(diào)整pH至11；次日再按1wt％加過氧化氫，調(diào)整pH至11，繼續(xù)放置，共48小時。濾去沉淀物。濾液調(diào)pH至7.2，加入等量的冷乙醇(濃度95wt％溫度＜10℃的乙醇，以下簡稱冷乙醇)沉淀24小時以上；離心收集沉淀物。沉淀物用4wt％氯化鋰溶液溶解，并將肝素溶液的濃度調(diào)至10000u/ml；啟動磁力攪拌器，攪拌30分鐘。隨后采用截留分子量為5000超濾器進行超濾，將肝素溶液濃縮至原體積的一半；再用4wt％氯化鋰溶液將肝素濃縮液稀釋至原體積，重復上述過程兩次；濃縮液用0.8倍體積的冷乙醇沉淀，次日離心收集沉淀物；用2wt％氯化鋰溶液將沉淀肝素配制成15000u/ml溶液，離心；上清液加入3倍體積的冷乙醇，放入冰箱內(nèi)靜置過夜；離心棄上清液，沉淀用無水乙醇和丙酮反復洗滌，直至成粉末；粉末經(jīng)真空干燥和球磨處理后，得肝素鋰精品。其產(chǎn)品效價為156USPu/mg，收率為86.5wt％。
實施例2取粗品肝素鈉100g用1000ml的2wt％NaCl溶液溶解，離心棄沉淀物，上清液預冷至4℃，用6mol/L HCl溶液調(diào)pH至1.5，離心棄沉淀，隨即用5mol/L NaOH溶液調(diào)pH至11.0，離心棄沉淀；按肝素鈉濾液3wt％加入濃度為30wt％的過氧化氫，氧化24小時，不斷調(diào)整pH至11；次日再按1wt％加過氧化氫，調(diào)整pH至11，繼續(xù)放置24小時；離心，上清液調(diào)pH至6.8，加入等量的95wt％冷乙醇，沉淀24小時以上；離心，沉淀物用6wt％氯化鋰溶液溶解，并將肝素溶液的濃度調(diào)至10000u/ml；啟動超濾器(截留分子量為5000)進行洗濾，至鈉離子含量達到規(guī)定指標；濃縮液用0.8倍體積的冷乙醇沉淀，次日離心收集沉淀物；用2wt％氯化鋰溶液將沉淀肝素配制成30000u/ml溶液，離心；上清液加入2倍體積的冷乙醇，靜置過夜；離心，沉淀用無水乙醇和丙酮反復洗滌至粉末狀；經(jīng)真空干燥和球磨處理后，得肝素鋰精品。
實施例1和2得到的肝素鋰精品，經(jīng)分析均達到上述質(zhì)量指標。
權利要求
1.一種制備肝素鋰的方法，其特征在于以粗品肝素鈉為原料，按下述步驟制備第1、去蛋白質(zhì)用NaCl溶液浸泡粗品肝素鈉，濾出上清液，預冷到10℃以下，用HCl溶液調(diào)pH至1.5，過濾，隨即用NaOH調(diào)pH至11.0，靜置，過濾去沉淀物，得肝素鈉濾液；第2、脫色按步驟1所得的肝素鈉濾液3wt％-4wt％加入濃度為30wt％的過氧化氫，氧化24-48小時，并不斷調(diào)整pH至11，濾去沉淀物，濾液調(diào)pH至6.8-7.2，加濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，離心收集沉淀物；第3、離子平衡交換步驟2所得的沉淀物用氯化鋰溶液溶解，攪拌，平衡交換15-30分鐘，隨后超濾濃縮至原體積的一半，再補加上述氯化鋰溶液至原體積，重復上述過程，至鈉離子含量達到規(guī)定指標；第4、沉淀與干燥步驟3所得的濃縮液用0.8-1.0倍體積的濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，離心收集沉淀物，用氯化鋰溶液溶解沉淀物中肝素，離心，其上清液加入2-3倍體積的濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀，靜置，沉淀用無水乙醇和丙酮反復洗滌，直至成粉末，然后真空干燥，磨細，得肝素鋰精品。
2.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在去蛋白質(zhì)過程中，粗品肝素鈉用10-15倍重量的1wt％-2wt％NaCl溶液浸泡。
3.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在去蛋白質(zhì)過程中，濾出的上清液預冷到10℃以下，用6mol/L HCl調(diào)pH至1.5，過濾，隨即用5mol/LNaOH調(diào)pH至11.0。
4.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在脫色過程中，加濃度為95wt％，溫度＜10℃的乙醇沉淀24小時以上，離心收集沉淀物。
5.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在離子平衡交換過程中，所用的氯化鋰溶液的濃度為2wt％-10wt％。
6.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在離子平衡交換過程中，其超濾濃縮所用的超濾器為截留分子量為5000的超濾器。
7.如權利要求1制備肝素鋰的方法，其特征在于在沉淀與干燥步驟中，所用的氯化鋰溶液的濃度為2wt％。
全文摘要
本發(fā)明提出了一種肝素鋰的制備方法，該法以粗品肝素為原料，采用離子平衡交換法制備肝素鋰，在離子平衡交換過程中運用超濾技術進行濃縮，交換過程在室溫條件下進行，pH保持穩(wěn)定，工藝流程短，不僅能提高效率和降低成本，而且其產(chǎn)品效價≥150u/mg，收率≥85wt％。
文檔編號C08B37/10GK1760215SQ20051001984
公開日2006年4月19日 申請日期2005年11月21日 優(yōu)先權日2005年11月21日
發(fā)明者鄭連爽 申請人:武漢理工大學