專利名稱:低成本黃胞膠的生產(chǎn)方法
一種用微生物發(fā)酵多糖膠地方法，屬于工業(yè)微生物領(lǐng)域。
黃胞膠又稱黃原膠(Xanthan gum)，是一種用微生物發(fā)酵產(chǎn)生的多糖膠。60年代美國開始投產(chǎn)，至今約有十個國家及地區(qū)進行生產(chǎn)。國內(nèi)煙臺味精廠1987年開始少量生產(chǎn)，用乙醇提取黃胞膠，將提取產(chǎn)生的廢乙醇經(jīng)蒸餾回收，能耗大，每生產(chǎn)1噸黃胞膠最后因不能回收而損耗的乙醇約為一噸，其生產(chǎn)成本約為15000元/噸干膠。而別的研究單位生產(chǎn)1噸黃胞膠要耗7-10噸乙醇，故不能投產(chǎn)。
自60年代黃胞膠在美國投產(chǎn)以來，許多廠家采納黃單胞菌屬(Xanthomonas)中不同的菌種或菌株及不同的方法進行生產(chǎn)，出現(xiàn)了各自不盡相同的黃胞膠系列產(chǎn)品，產(chǎn)品都有共同的特性，也有些獨特之處及用途。例如有低丙酮酸含量黃胞膠的生產(chǎn)(EP.Pat.66961 1982);低鈣黃胞膠的生產(chǎn)(US.Pat.4377637 1983);高粘度黃胞膠的生產(chǎn)(J.Pat.52165798 1983);高丙酮酸黃胞膠的生產(chǎn)(US.Pat.4394447 1983);耐熱黃胞膠的生產(chǎn)(US.Pat.4485020 1984)等等。
現(xiàn)有的黃胞膠提取技術(shù)，多為用有機溶劑進行提取，黃胞膠能與甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮等有機溶劑形成均勻溶膠，但有機溶劑在混合液中濃度超過50%時，黃胞膠會形成纖維狀沉淀析出。如美國專利US-4316012，其提取方法，就是在發(fā)酵液中加入一種有機溶劑沉淀膠，再經(jīng)離心、分離、過濾、烘干制成黃胞膠產(chǎn)品，另外，黃胞膠溶液能與鈣鹽如CaCl2、Ca(OH)2作用，在有機溶劑中形成黃胞膠-氫氧化鈣復合物的凝膠沉淀，如歐洲專利EP-0068706，就是用有機溶劑和二價離子沉降黃胞膠。也有采用季胺鹽沉降黃胞膠，即黃胞膠與季胺鹽結(jié)合物生成絮凝沉淀來分離黃胞膠。國外還有采用噴霧干燥、閃蒸、減壓、濃縮、超濾等方法提取黃胞膠。
目前國內(nèi)外提取黃胞膠均采用直接干燥和有機溶劑沉淀提取兩類方法，前者即為噴霧干燥、閃蒸、減壓濃縮等法，能耗太大，在我國行不通;后者離不開價格昂貴的有機溶劑，廢溶劑的回收也很耗能。本發(fā)明是篩選了一種黃單胞桿菌Xanthomonas sp.8420，其發(fā)酵液能用酸絮凝沉降，從而達到減少物耗、能耗，降低成本、設備少、簡便易行的目的。
本發(fā)明是利用一種黃單胞桿菌發(fā)酵，制備黃單胞菌多糖膠的生產(chǎn)方法，其特征是，培養(yǎng)液經(jīng)黃單胞桿菌Xanthomonas sp.8420發(fā)酵，發(fā)酵液加酸，沉淀提取黃胞膠。在發(fā)酵液中加入的酸，可用無機酸或有機酸，pH值調(diào)到3以下，絮凝沉淀。發(fā)酵液除了加酸外，還可輔以添加其它鹽類，如鈣鹽、氯化鉀等助凝物沉淀、提取黃胞膠。黃胞膠的生產(chǎn)方法如下
一、菌種
黃單胞菌Xanthomonas sp.8420于1984年篩選所得，該菌種已保藏在北京中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號0131。該菌特征為桿狀，革蘭氏陰性，端生一根鞭毛，在肉汁胨培養(yǎng)基上產(chǎn)生黃色非水溶性色素，菌落園形，菌苔不擴張、黃色。氧化葡萄糖，所產(chǎn)生的色素在石油醚中有418、437和463毫微米吸收峰。
本發(fā)明的黃單胞桿菌Xanthomonas sp.8420可應用全無機氮源的培養(yǎng)液生產(chǎn)黃胞膠。
二、培養(yǎng)基
1、斜面菌種培養(yǎng)基(配方來源于US.Pat.4394447.1983.7.9)
葡萄糖 1.2% (NH4)2HPO40.15%
酵母膏 0.15% K2HPO40.25%
蛋白胨 0.25% MgSO4·7H2O 0.01%
瓊脂 1.7% pH7
15磅滅菌30分鐘。
2、一級菌種搖瓶用培養(yǎng)基
同上，無瓊脂。
3、二級菌種(或種子罐)培養(yǎng)液

0.2% MgSO4·7H2O 0.05%

0.25% FeSO40.001%
糖(蔗糖或葡萄糖) 1% pH 7.5
15磅滅菌3分鐘，若使用葡萄糖、葡萄糖以8磅20分鐘另行滅菌，然后加入。
4、生產(chǎn)培養(yǎng)液
培養(yǎng)液配方同上，但糖可用蔗糖、葡萄糖或淀粉糖化液。
發(fā)酵期間補料兩次，每次補料，包括占全部發(fā)酵液1.5%的糖和0.05%的植物油，整個發(fā)酵周期中，培養(yǎng)液中投入總糖量為4%。蔗糖滅菌為15磅30分鐘，葡萄糖滅菌為8磅20分鐘。
培養(yǎng)液主要氮源來自無機態(tài)的NaNO3或KNO3、NH4NO3、尿素或再補添酵母膏、蛋白胨、魚粉等，或補添其它各種微量元素者。
三、發(fā)酵工藝
1、過程
斜面菌種 (28℃±2℃)/(2－3) 一級菌種振蕩培養(yǎng) (28℃±2℃)/(24h.) 種子罐 (28℃±2℃)/(24h.) 生產(chǎn)罐
(第一次補料24－30h.)/( ↓) (第二次補料36－42h.)/(↓)
(28-30℃ )/(60h.) 放罐
試管斜面菌種于28℃培養(yǎng)2-3天。一級菌種使用500ml三角瓶，每瓶裝150ml培養(yǎng)基，每瓶用一支試管斜面菌種接種，28℃搖床培養(yǎng)24小時(含菌量達8億/ml以上)，種子罐接種量為2-4%，吹氣量為0.5-1體積/分，罐壓1kg/cm2，溫度28-30℃。生產(chǎn)罐接種量為7-10%，吹氣量0.8-1體積/分，罐壓1kg/cm2罐溫28±2℃，攪拌速度100-200rpm(1-24小時攪拌速度為100rpm，往后遞增，36小時后，攪拌速度200rpm)其間補料兩次，當培養(yǎng)料中殘?zhí)墙抵?.2%時補料，一般在24-30小時和36-42小時補料各一次。
2、設備要求
(1)搖床往返式或旋轉(zhuǎn)式均可用，往返式搖床速度為100次/分以上，旋轉(zhuǎn)式搖床速度170轉(zhuǎn)/分以上。
(2)發(fā)酵罐此為高粘度的發(fā)酵液，罐高與罐直徑比宜大，最理想為5∶1，若采用原有舊設備以不低于2.5∶1為宜。吹氣量不低于1體積/分，攪拌速度200rpm以上。根據(jù)罐高，其攪拌漿應為三至六組，翼應具有渦孔，使之適合于高粘度液體的攪拌。同時發(fā)酵罐還應有相應的補料設備。
四、提煉工藝
發(fā)酵60小時糖含量降至0.2%以下，即可放罐。放罐后發(fā)酵液可用金屬或陶瓷缸槽裝盛，慢慢加入1∶20的鹽酸，并以6-10rpm的速度攪拌，至發(fā)酵液pH下降至2.6時，膠和水分離，可用機械脫水。(該法所產(chǎn)生的發(fā)酵液，在pH2.6時產(chǎn)生膠水分離現(xiàn)象，但這是可逆的變化，應用中干膠能吸水復原，粘度基本不變)。機械脫水可采用離心機或板框壓濾，可去除6/7至7/8的水份再將脫過水的膠于55-65℃烘干，粉碎，過0.25mm篩，含水量不得超過7%，用塑料袋包裝封口。發(fā)酵60小時，每100ml發(fā)酵液可產(chǎn)干膠2.87g，提取率為89.9%，故每100ml發(fā)酵液可得干膠2.58g。碳源轉(zhuǎn)化率為64.5%。
五、理化性質(zhì)
本發(fā)明黃胞膠產(chǎn)品的理化性質(zhì)
1、溶液粘度0.5%水溶液粘度為3200厘泊。
2、丙酮酸含量3.1%
3、鹽類對粘度的影響
在5%至10%Na2CO3溶液中粘度不變。25℃，在10%NaCl或在KCl溶液中粘度降低16%。
4、加熱對粘度的影響
從25℃加熱至95℃有增粘作用。在10%KCl中加熱至95℃粘度變化不大。
5、pH對粘度的影響
在pH3.5至11范圍內(nèi)粘度變化很小。pH11以上有輕微增粘用。pH2.6以下時產(chǎn)生絮凝作用，利用該特性可加稀酸提取。
6、觸變性
有良好的觸變性，1%水溶液3號鉆子轉(zhuǎn)速從每分鐘6次增至12、30、60次時，其粘度則從11，800厘泊降至6800、3320、1990厘泊
本發(fā)明產(chǎn)品和美國Kelco公司生產(chǎn)的黃胞膠作比較，相同的特征與不同的特征如下(1)兩者粘度接近，用旋轉(zhuǎn)粘度計，25℃，4號轉(zhuǎn)子30rpm測定，其0.5%水溶液的粘度為3200厘泊。
(2)在鹽溶液中的穩(wěn)定性基本一致。
(3)本發(fā)明產(chǎn)品對高溫的抗性稍差，在10%KCl存在時，溶液加熱至95℃粘度不變，100℃時凍化，而美國產(chǎn)品能耐120℃。
(4)丙酮酸含量屬于美國商業(yè)產(chǎn)品合格范圍。
(5)美國產(chǎn)品在pH1-11范圍內(nèi)，粘度僅有輕微變化，而本發(fā)明產(chǎn)品，在pH3-11范圍內(nèi)，粘度僅有輕微變化，pH2.6時產(chǎn)生絮凝反應。
(6)觸變性能兩者相近。
六、測定方法
1、粘度測定
用上海天平儀器廠NDJ-1旋轉(zhuǎn)粘度計，25℃，溶液配制24小時后測定。
2、產(chǎn)膠量測定
稱10g發(fā)酵液稀釋成50ml，攪拌均勻，20，000rpm離心30分鐘，上清液用120ml無水乙醇沉淀黃胞膠，沉淀用無水乙醇洗滌兩次，60℃烘干，用0.01%天平稱重。
3、殘?zhí)菧y定
100g發(fā)酵液用15ml1∶20的鹽酸(HCl)沉淀，取濾液用NaOH中和至pH7，再用斐林試劑法測定。
4、菌種鑒定
細菌分類基礎，王大耜編，科學出版社1977年
5、水份測定
用0.01%天平稱1g樣品于60℃烘干，置干燥器中，稱重，計算水份百分比含量。
6、丙酮酸含量測定0.05%的黃胞膠水溶液，用丙酮酸2，4-二硝基苯腙法比色測定。
7、細菌數(shù)檢測
(1)平板計數(shù)法以培養(yǎng)基1澆平皿，28±2℃處培養(yǎng)10天計數(shù)。
(2)比濁法用培養(yǎng)基3培養(yǎng)菌液36小時，再加無菌水稀釋成含原菌液100%，90%，80%，70%，60%，50%，40%的各種稀釋度，一方面用平板計數(shù)法測數(shù)，并用同一系列樣品比濁，繪出表示菌數(shù)與濁度相關(guān)的標準曲線。在測定接種液菌數(shù)時，經(jīng)測濁度，便可從曲線上查出菌數(shù)。
8、灰份測定 用0.01%天平稱取10g樣品置于550℃馬福爐中燃燒1小時，稱重，計算灰份百分比。
七、黃胞膠的用途
黃胞膠用途很廣，適用于石油工業(yè)作泥漿添加劑;用于食品工業(yè)作乳化劑、增稠劑、懸浮劑、助泡劑等;還用于紡織印染、涂料、陶瓷上釉、膠體炸藥、防火材料、醫(yī)藥及農(nóng)藥等工業(yè)。黃胞膠的應用可覆蓋20多個行業(yè)，幾十種產(chǎn)品，使這些行業(yè)的工藝、產(chǎn)品品質(zhì)大為提高。我國每年進口黃胞膠80噸，由于價昂(13000$/噸)，只供中外合資的海濱油田鉆井使用。據(jù)估計2000年左右國內(nèi)黃胞膠的需求量至少在5000-10000噸左右。其中最大市場為石油部門，若每年1/4的油井采用黃胞膠為泥漿處理劑，就需3500-5000噸。黃胞膠有很好的流變性，并且增稠、抗鹽、降失水性能好，有明顯的提高產(chǎn)油量和防止井噴的作用。
按本發(fā)明方法，實驗室生產(chǎn)的黃胞膠樣品已三次送往華北油田測試，認為具有水溶性好、加量小、降低泥漿噴嘴粘度明顯、剪切稀釋性能強、降失水等優(yōu)良性能。認為這是當前最優(yōu)的適合于聚合物泥漿的一種新處理劑。
八、注意事項
1、發(fā)酵罐高徑比宜大，若可能最好為5∶1。
2、根據(jù)發(fā)酵罐的高徑比，罐中攪拌槳應為3-6組。
3、攪拌槳翼數(shù)目上層可為3翼，下層應為6翼，翼中應有孔，以適合高粘度液體攪拌。
4、生產(chǎn)罐發(fā)酵時，前24小時攪拌速度可以為100rpm，隨著膠的產(chǎn)生，攪拌速度增加36小時后應增至200rpm以上。
5、生產(chǎn)罐接種量應為7-10%，過小易污染或使膠產(chǎn)量下降。
6、吹氣量為0.8-1體積/分，或可達1.5體積/分。
7、絮凝時，鹽酸濃度以1∶20(HCl∶H2O)為宜，濃度過大易使膠變性，濃度過小，不易絮凝并排污量增大。
8、絮凝后，固狀物和液體很容易分開，最簡單易行的方法是用機械壓榨，根據(jù)工廠具有的設備，若有工業(yè)離心機、板框過濾也可應用。
9、烘房溫度宜在55-65℃之間。
10、干燥產(chǎn)品粉碎后應過0.25mm篩，并密封防潮，水份應在7%以下。
現(xiàn)有的黃胞膠生產(chǎn)方法都是采用有機溶劑(或有機化合物)提取、或直接干燥。本發(fā)明篩選了特殊的菌株，該菌所產(chǎn)的多糖膠，在pH2.6以下的水溶液中能產(chǎn)生絮凝作用，故只需用酸如稀鹽酸便可使膠絮凝沉降，這在黃胞膠提取工藝中，作出了重大改進。同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和積極的效果。
1、成本低國內(nèi)現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)的黃胞膠成本為15000元/噸，本發(fā)明生產(chǎn)的黃胞膠成本為6000-7000元/噸。
2、能耗低現(xiàn)有技術(shù)每提取一噸黃胞膠要使用40噸以上酒精，對廢有機溶劑(酒精)進行回收，要消耗大量能源，本發(fā)明對廢酸不必回收，能耗大大減少。
3、物耗省國內(nèi)現(xiàn)有技術(shù)生產(chǎn)黃胞膠，因有機溶劑不可能全部回收，每噸產(chǎn)品消耗有機溶劑(如酒精)一噸以上，本發(fā)明生產(chǎn)的黃胞膠每噸產(chǎn)品只需消耗鹽酸0.25噸。
4、設備少?，F(xiàn)有技術(shù)除需要相應的設備外，還要增加廢有機溶劑回收車間。本發(fā)明設備要求低，有拌料缸、壓榨機或工業(yè)離心機即可，一般味精廠、生化制藥廠也均有條件生產(chǎn)。
本發(fā)明實施例如下
實施例14.5升搖床發(fā)酵
1、斜面菌種培養(yǎng)同前培養(yǎng)基1。菌種試管規(guī)格為12×150mm，盛培養(yǎng)基5ml，接種后28-30℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天。
2、二級菌種培養(yǎng)培養(yǎng)液配方為NaNO30.2% MgSO4·7H2O 0.05% K2HPO40.25% FeSO40.001% 糖(蔗糖或葡萄糖)1% pH7.5 15磅滅菌30分鐘，若使用葡萄糖，葡萄糖以8磅20分鐘另行滅菌。用500ml三角瓶，每瓶裝培養(yǎng)液150ml，共3瓶，用上述培養(yǎng)斜面菌種接種，1支菌種接種1瓶，在轉(zhuǎn)速為170rpm，旋轉(zhuǎn)式搖床上28-30℃培養(yǎng)24小時，菌數(shù)達8億/ml以上即可作種子。
3、搖瓶發(fā)酵產(chǎn)膠培養(yǎng)液配方同上。用500ml三角瓶每瓶裝培養(yǎng)液150ml，共30瓶，用上述二級菌種接種，每瓶接種量為15ml，在轉(zhuǎn)速為170rpm的搖床上，28-30℃培養(yǎng)60小時，培養(yǎng)期間，第24-30小時進行第一次補料，每瓶添加45%的糖液5ml，第36-42小時進行第二次補料，每瓶添加45%的糖液5ml。補料時間應根據(jù)發(fā)酵液殘?zhí)橇康臏y定，殘?zhí)橇吭?.2%以下，即應補料。培養(yǎng)液中投入總糖量為4%，發(fā)酵60小時左右，殘?zhí)橇吭俣冉抵?.2%以下時，即可終止發(fā)酵。
4、提取黃胞膠
將發(fā)酵液倒入塑料、玻璃或搪瓷容皿中，緩緩注入1∶20的稀鹽酸0.5升用粗玻棒慢慢攪拌至pH降至2.6以下，此時發(fā)酵液中的膠進行絮凝，10分鐘左右可完成絮凝沉降，靜止30-60分鐘，用1mm尼龍篩或尼龍布過濾，使用篩可用重力壓擠，使用尼龍布則可用雙手擠壓，此法可除去發(fā)酵液中6/7-7/8的水份。
5、成品的制取
將上述擠干的膠團撕散，置55-65℃烘箱干烘干，用小型粉碎機粉碎，過0.25mm篩，貯于玻瓶或塑料袋中。
實施例20.1噸發(fā)酵罐發(fā)酵
1、斜面菌種培養(yǎng)菌種試管規(guī)格為15×200mm，盛培養(yǎng)基8ml，其它同例1。
2、二級菌種培養(yǎng)培養(yǎng)液配方為NaNO30.2% MgSO4·7H2O 0.05% K2HPO40.25% FeSO40.001% 糖(蔗糖或葡萄糖)1% pH7.5
15磅滅菌30分鐘，若使用葡萄糖，葡萄糖以8磅20分鐘另行滅菌。1000ml三角瓶30個，每瓶裝培養(yǎng)液250ml，用上述培養(yǎng)斜面菌種接種，1支菌種接種1瓶，在速率為100次往返式搖床上，28-30℃培養(yǎng)24小時，菌數(shù)達8億/ml以上即可用作種子。
3、發(fā)酵罐生產(chǎn)膠培養(yǎng)液配方同上。經(jīng)無菌操作將上述二級菌種培養(yǎng)液合并，全部接入發(fā)酵罐，發(fā)酵罐投料0.08噸，罐溫28-30℃，培養(yǎng)期間兩次補料，第一次在24-30小時，第二次在36-42小時，補料期間均根據(jù)發(fā)酵液殘?zhí)橇康臏y定而定，殘?zhí)橇拷抵?.2%以下即應補料。每次加入2700ml45%的滅菌糖溶液和0.04公斤植物油的混合液，培養(yǎng)液中投入總糖量為4%。發(fā)酵60小時左右，殘?zhí)橇吭俣冉抵?.2%以下時，即可終止發(fā)酵。
4、提取黃胞膠將發(fā)酵液倒入塑料、搪瓷或不銹鋼槽內(nèi)，最好為配有攪拌漿的拌料桶，緩緩注入1∶20的稀鹽酸10公斤，以每分鐘6-10轉(zhuǎn)的速度緩緩攪拌，充分絮凝后，靜止60分鐘，用工業(yè)離心機1000轉(zhuǎn)/分的速度脫水，或壓榨機脫水?？沙グl(fā)酵液中6/7-7/8的水份。
5、成品制取將上述脫水的膠，置55-65℃烘房中烘干，用粉碎機粉碎，過0.25mm篩，包裝防潮。
實施例320噸發(fā)酵罐發(fā)酵
1、斜面菌種培養(yǎng)同例2。
2、茄瓶菌種培養(yǎng)培養(yǎng)基1(培養(yǎng)基配方同上)。每瓶裝培養(yǎng)基50ml，共50瓶，接種后培養(yǎng)28-30℃，2-3天。
3、種子罐培養(yǎng)培養(yǎng)液配方為NaNO30.2% MgSO4·7H2O 0.05% K2HPO40.25% FeSO40.001% 糖(蔗糖或葡萄糖)1% pH7.5
15磅滅菌30分鐘，若使用葡萄糖，葡萄糖以8磅20分鐘另行滅菌。投料1.6噸，用滅菌的培養(yǎng)液5000ml將茄瓶中菌苔洗下，一次接入種子罐，罐溫28-30℃，吹氣量0.5體積/分，攪拌速度100-150rpm，培養(yǎng)24小時。菌數(shù)達8億/ml以上即可用作種子。
4、大罐發(fā)酵培養(yǎng)液配方同上。20噸發(fā)酵罐，投料14.4噸，將種子罐的1.6噸種子液一次接入，每次殘?zhí)橇拷抵?.2%時補料。補料包括540公斤45%的糖溶液和9公斤植物油，共2次，第一次約在第24-30小時間，第二次約在第36-42小時間，培養(yǎng)液中投入的總糖量為4%。罐溫28-30℃，在1-24小時期間吹氣量為0.8體積/分，攪拌速度100rpm，往后遞增，36小時后，吹氣量達1體積/分，攪拌速度200rpm，罐壓1kg/cm2，罐高與罐直徑比最理想為5∶1，攪拌漿為6組，漿翼上有渦孔。發(fā)酵60小時后，殘?zhí)墙抵?.2%以下時，發(fā)酵完成。
5、成品制取同例2。
參考文獻
1、黃單胞桿菌多糖膠的生產(chǎn)和應用
四川抗菌素研究所 吳林森 蔡順養(yǎng)(應用微生物)1986.5
2、黃原膠簡介
南開大學生物系 刁虎欣 趙大鍵(食品與發(fā)酵工業(yè))1987.1
3、甘蘭黑腐病黃單胞桿菌N.K-01菌株淀粉發(fā)酵黃原膠的研究
南開大學生物系 趙大鍵等(工業(yè)微生物)
4、Production of Polysaccharide with Xanthomonas Campestris S.P.ROGOVIN.J.Bioch.Microbid.Tech.Eng.Vol.111.No.1.1961
5、Production，Properties and Applications of Xanthan JOHN，F(xiàn).Prog.Ind.Microbiol.19.319-371 1984
6.Synthelic Media for production of Quality Xanthan Gum in 20 Liter Fermentors
M.C.Cadmus Biotech.Bioeng.1003-1014(1978)
7、Kinetics of Polysaccharide B-1459 Fermentation R.A.Moraine
Biotech.Bioeng.511-524(1966)
8、Continous Fermentation to Produce Xanthan
Biopolymer，Effect of Dilution Rate R.W.Silman
Biotech.Bioeng.23-31(1972)
9、Growth of Xanthomonas Campestris and Xanthan accumulation S.Fiedler Z.Allg.Mikrobiol，(1984) 4.223-230
10、Calvin W.Schroeck.U.S.Pat. 4，254，257(1981)
11、Williaw P.Weisrock，U.S.Pat. 4，328，308(1982)
12、Geoffrey Talbot Banks.UK.Pat. 2134126A(1984)
13、Ho-Lun Lee，U.S.Pat. 4，299，825(1981)
14、Rodneg，J.Trevor Eur.Pat. 0066957(1982)
15、Martin C.Cadmus，U.S.Pat. 4，394，447(1983)
16、William P.Weisrock，U.S.Pat. 4，328，310(1982)
17、Arnoal L.Demain.U.S.Pat. 4，245，046(1981)
18、Michael B.Inkson，U.S.Pat. 4，316，012(1982)
19、Smith，Ian Humphrey，Eur.Pat. 0068706(1982)
20、Jarman，Trevor Rodney，Eur.Pat. 0068961(1982)
21、N.K-01 黃原膠性能的研究
南開大學生物系 梁鳳來 張鵬(工業(yè)微生物)1987.9.
權(quán)利要求
1、一種黃胞膠的生產(chǎn)方法，由培養(yǎng)液經(jīng)黃單胞桿菌發(fā)酵后提取黃胞膠，本發(fā)明的特征是培養(yǎng)液經(jīng)黃單胞桿菌發(fā)酵，發(fā)酵液加酸沉淀提取黃胞膠。
2、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的生產(chǎn)方法，其特征是所指的黃單胞桿菌是Xanthomonas sp.8420，可應用全無機氮源培養(yǎng)液生產(chǎn)黃胞膠。
3、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的生產(chǎn)方法，其特征是生產(chǎn)培養(yǎng)液配方為NaNO30.2% MgSO4·7H2O 0.05% K2HPO40.25% FeSO40.001%糖(蔗糖或葡萄糖)4% pH7.5
4、根據(jù)權(quán)利要求
3所述的生產(chǎn)方法，其特征是培養(yǎng)液主要氮源來自無機態(tài)的NaNO3或KNO3、NH4NO3、尿素，或再補添酵母膏、蛋白胨、魚粉等，或補添其它各種微量元素者。
5、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的生產(chǎn)方法，其特征是酸可用無機酸或有機酸，pH值調(diào)到3以下，絮凝沉淀，提取黃胞膠。
6、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的生產(chǎn)方法，其特征是發(fā)酵液加酸外還可輔以添加其它鹽類，如鈣鹽、氯化鉀等助凝物沉淀提取黃胞膠。
專利摘要
本發(fā)明是利用微生物發(fā)酵多糖膠及其提取方法，屬于工業(yè)微生物領(lǐng)域?，F(xiàn)有黃胞膠的生產(chǎn)方法，采用有機溶劑或有機物沉淀或直接干燥提取黃胞膠。這種方法，提取工藝復雜，耗能大，設備多，成本高。本發(fā)明篩選了一種黃單胞桿菌，對培養(yǎng)液進行發(fā)酵，其發(fā)酵液可加酸使膠絮凝沉降，從而提取黃胞膠。這種方法，提取工藝簡單，能耗省，設備少，成本低。
文檔編號C12P19/04GK87106960SQ87106960
公開日1988年4月27日 申請日期1987年10月21日
發(fā)明者程桂蓀, 劉小秧 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院土壤肥料研究所導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan