專利名稱：對(duì)凝血因子viii具有親和性的肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)因子Ⅷ具有結(jié)合親和力的肽，結(jié)合了根據(jù)本發(fā)明的肽的載體材料，包含根據(jù)本發(fā)明的肽的診斷試劑，此肽在標(biāo)記、識(shí)別、或純化因子Ⅷ中的應(yīng)用，以及在液相或固相系統(tǒng)中合成制備根據(jù)本發(fā)明的肽的方法。
在先前工藝中已經(jīng)建立起了用于純化，尤其是，象蛋白質(zhì)這樣的復(fù)雜結(jié)構(gòu)的一種完善的方法，親和層析法(Yannis Chonis；ProcessAffinity Chromatography，inSeparation Processes inBiotechnology，Ed．J．A．Asenjo，pages 401 to 494，Marcel Dekker，new York 1990；S．R．narayanon，Preparative affinitychromatography of proteins，J．Chromatogr．A，658(1994)，237to258)在“Bioorganic &Medicinal Chemistry”，Vol．4，No．5，pp．699 to 708，1996，Huang，Ping Y．et al．中描述了肽在親和純化von Willebrand因子中的應(yīng)用。Yon Willebrand因子是血漿的一種成份，在穩(wěn)定因子Ⅷ中起重要作用。
因子Ⅷ本身也是一種有用的血漿成份，具有治療價(jià)值，尤其是，也就是說(shuō)因子Ⅷ在平復(fù)凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)紊亂中起重要作用。除了從通過(guò)重組方法制備因子Ⅷ外，從血漿制備因子Ⅷ仍然很重要。
已知有多種通過(guò)層析制備因子Ⅷ的方法。這包括使用免疫親和層析法，其中抗因子Ⅷ的抗體被固定化在支持物上，含有因子Ⅷ的樣品與載體材料接觸，從而通過(guò)免疫親和反應(yīng)從相應(yīng)的樣品中分離因子Ⅷ。
然而，在后一種方法中有一個(gè)缺點(diǎn)，特別是，抗體是相對(duì)較大的分子，占據(jù)了載體材料的大部分表面從而限制了容量。而且，抗體結(jié)合到材料的表面并仍然保留和呈現(xiàn)特異結(jié)合位點(diǎn)并非無(wú)關(guān)緊要，因此，在固定化抗體時(shí)由于親和配基的失活，容量進(jìn)一步損失。此外，抗體從分離柱流出可能產(chǎn)生污染。
本發(fā)明的目的是提供一種便于純化因子Ⅷ的物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明此目的是通過(guò)具有權(quán)利要求1的特征的肽達(dá)到的。
根據(jù)本發(fā)明的肽具有這樣的結(jié)構(gòu)
R1-X-R2其中R1是NH2或肽，優(yōu)選地含有不大于20個(gè)氨基酸殘基，R2是COOH或肽，X是一個(gè)能親和結(jié)合因子Ⅷ的肽，至少是三肽，優(yōu)選地是七肽或至十二肽。
這樣，在根據(jù)本發(fā)明的結(jié)構(gòu)元件中R1代表結(jié)構(gòu)元件X所代表的肽的N-末端而R2代表X所定義的肽的C-末端。精通本工藝的人士理解該結(jié)構(gòu)元件包含它們的鹽以及衍生物，如N端修飾衍生物或C端修飾的衍生物。
可用于制備根據(jù)本發(fā)明的肽的氨基酸包括天然氨基酸和非蛋白來(lái)源的氨基酸。通常它們?yōu)棣?氨基酸。氨基酸的結(jié)構(gòu)變體可以是具有側(cè)鏈修飾的氨基酸或環(huán)形肽、分支肽或混合型肽。
結(jié)構(gòu)元件包含至少三個(gè)通過(guò)肽鍵連接的氨基酸；優(yōu)選地結(jié)構(gòu)元件X為七肽八肽或九肽；更優(yōu)選地為八肽或十肽，這些肽的特征為能結(jié)合因子Ⅷ。特別優(yōu)選的八肽的氨基酸序列在序列鑒定號(hào)SEQ ID NO．1至SEQ ID NO．94中明確地列出了。具有SEQ ID NO．1至94中所描述結(jié)構(gòu)的特別優(yōu)選的八肽能特異地結(jié)合因子Ⅷ。
根據(jù)本發(fā)明，這些肽優(yōu)選地含有這樣的結(jié)構(gòu)X=-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-其中R3=V或E，R4=M，W，或Y，R5=I或K，R6=K或S，R7=C，E或W，R8=E或F，R9=Y或E，R10=C或F，而R1和R2具有上文所述的含義。后者能結(jié)合人的或重組的因子Ⅷ。在尤為優(yōu)選的肽中R7=W，R8=E，R9=E或Y，R10=F或C，而R1和R2具有所述的含義。這些包括根據(jù)本發(fā)明的SEQ ID NO 66，72，78，84，89和90的肽。后者對(duì)重組的和從血漿純化的因子Ⅷ都具有顯著的親和性。
序列為SEQ ID NOS 61，66，71，72，76，77，78，81至84，89和90的八肽的特征為通過(guò)結(jié)合pdFⅧ(源自血漿的因子Ⅷ，plasma-derived factor Ⅷ)而分離。序列為SEQ ID NO．61的肽不結(jié)合重組的因子Ⅷ。序列為SEQ ID NOS 56至58，66，68，71，72，76至78，81至84，87至90的肽結(jié)合重組的因子Ⅷ，其中，序列為SEQ ID NOS 66，71，72，76至78，81至84，89和90的肽還與源自血漿的因子Ⅷ結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明序列為SEQ ID NOS 66，72，78，81至84，89和90的肽是尤為優(yōu)選的。
序列為SEQ ID NOS 66和90至94的肽尤其適于rFⅧ(重組因子Ⅷ)的親和層析，而肽66，72和91至94尤其適于pdFⅧ的親和層析。
根據(jù)本發(fā)明，這些肽也可用于制備根據(jù)本發(fā)明的載體材料。這種載體材料的表面結(jié)合了根據(jù)本發(fā)明的肽；這是權(quán)利要求8-9的主題。
根據(jù)本發(fā)明的肽優(yōu)選地通過(guò)化學(xué)鍵結(jié)合到根據(jù)本發(fā)明的載體材料的表面。此處所用的化學(xué)鍵包括共價(jià)鍵和離子鍵，疏水的和／或復(fù)雜的相互作用。
載體材料優(yōu)選地由無(wú)機(jī)或有機(jī)，尤其是多聚體的材料組成。有用的材料包括本身通?？捎糜谏锒嗑垠w層析的多聚體材料。
根據(jù)本發(fā)明的多肽優(yōu)選地通過(guò)間隔臂結(jié)合到載體材料的表面。這樣的間隔臂對(duì)于精通本工藝的人士是已知的。間隔臂優(yōu)選地在層析分離過(guò)程中不影響因子Ⅷ與肽結(jié)合。
間隔臂通常由低分子量的線性碳?xì)滏溄M成，在鏈的兩端設(shè)計(jì)了功能基團(tuán)。對(duì)于此工藝的總結(jié)可參見(jiàn)G．T．Hermanson，A．K．Mallia andP．K．Smith；Immobilized Affinity Ligand Techniques，AcademicPress，IncSan Diego，New York，Boston，London，Sydney，Tokyo，Toronto，1992．一端結(jié)合到固相載體上，另一端結(jié)合到配基肽上。碳?xì)滏溡部蛇M(jìn)行修飾。具體而言有用的間隔臂包括二氨基二丙胺(DADPA)(3，3’-亞氨基雙丙胺)，琥珀酸(酸酐的形式)，6-氨基己酸，1，3-二氨基-2-丙醇，1，6-二氨基己烷(DAH)，和／或乙二胺(EDA)。進(jìn)而氨基酸，肽，糖類和其它多元醇也可用作間隔臂。另外亞氨二乙酸或聯(lián)氨酸亦可用作間隔臂例如賴氨酸以Fmoc-Lys-(Fmoc)-OH或Fmoc-(Lys)-(Boc)-OH形式結(jié)合到載體材料上。由于引入了保護(hù)基團(tuán)賴氨酸通過(guò)羧基結(jié)合到載體材料上。通過(guò)選擇切除保護(hù)基團(tuán)可得到能結(jié)合至少一段肽的自由氨基。賴氨酸的氨基也可用其它保護(hù)基團(tuán)封閉。
作為層析載體材料可使用，尤其是，具有親水表面的多聚物，如所謂的觸手材料(Tentakle material)。將根據(jù)本發(fā)明的多肽固定到具有親水表面的壓縮多孔盤和／或膜上也是有利的。相應(yīng)的設(shè)備在WO-A-96／-06158中有所描述。
根據(jù)根據(jù)本發(fā)明的肽能與因子Ⅷ相互作用這個(gè)事實(shí)，根據(jù)本發(fā)明的肽復(fù)合物適于用作因子Ⅷ的診斷試劑。因此根據(jù)本發(fā)明的診斷試劑含有至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽或者至少結(jié)合了根據(jù)本發(fā)明的一種肽的根據(jù)本發(fā)明的載體材料，以及供選的輔助物質(zhì)。
為了鑒別根據(jù)本發(fā)明的肽與因子Ⅷ之間發(fā)生了相互作用對(duì)根據(jù)本發(fā)明的肽進(jìn)行了標(biāo)記。可以使用的標(biāo)記包括，例如，放射性標(biāo)記或應(yīng)用了熒光配基的標(biāo)記，親和素／鏈霉親和素系統(tǒng)，或產(chǎn)生顏色反應(yīng)的酶，這些在ELISA技術(shù)中是廣為人知的。
根據(jù)本發(fā)明的肽適于標(biāo)記、鑒定或純化因子Ⅷ。
根據(jù)本發(fā)明的肽可根據(jù)肽化學(xué)中以確立的方法制備，尤其是可根據(jù)Merrifield的固相合成或液相合成方法制備。
實(shí)施例例1親和層析分別固定了肽的膜上打孔取出30個(gè)11mm的圓盤．將這些圓盤在HR10柱子(Pharmacia Biotechnology，Uppsala，Sweden)中疊加然后用兩個(gè)活塞固定。
所有的層析實(shí)驗(yàn)用的都是ProSys層析系統(tǒng)(Biosepra IncMarlborough，USA)。平衡和洗滌用的緩沖液為pH7．0的PBS。洗脫用的是pH3．0的0．1M的甘氨酸緩沖液。在所有的實(shí)驗(yàn)中流速都為0．1ml／min。
PDFⅧ源自血漿的凍干因子Ⅷ溶于11ml蒸餾水中使?jié)舛冗_(dá)到90單位／ml。以流速0．1ml／min將4ml上樣到親和柱上然后用PBS緩沖液，pH7．0洗滌，直至UV信號(hào)(280nm)重新回到基線。結(jié)合的物質(zhì)用pH3．0的甘氨酸緩沖液洗脫。收集的級(jí)分用還原條件的SDS-PAGE和Western印跡法分析。這樣檢測(cè)了肽段和βAla-βAla空白結(jié)合源自O(shè)ctavi制備物的因子Ⅷ的親和性。
rFⅧ重組因子Ⅷ的結(jié)合用Kogenate(Bayer，Germany)檢測(cè)。400微升的每種制備物(200單位)用1400微升蒸餾水稀釋然后以0．1ml／min的流速上樣到親和支持介質(zhì)上。洗滌用的也是pH7．0的PBS緩沖液，然后用pH3．0的甘氨酸緩沖液洗脫。收集的級(jí)分用還原條件的SDS-PAGE和Western印跡法分析。
SDS PAGE
收集所有層析的穿透液和洗脫液并用還原條件的SDS PAGE和Western印跡法分析。
分離用的是Novex的4到20％的tris-甘氨酸膠。往樣品中加入SDS上樣緩沖液(每10ml含1．5M Tris-HCl，pH8．45，1．2ml甘油，0．4gSDS，0．1％考馬斯亮藍(lán)，0．1％酚紅)和5％β-巰基乙醇，然后4℃過(guò)夜。分離后凝膠進(jìn)行銀并用掃描記錄。
Western印跡完成電泳分離后，200mA衡流2小時(shí)將膠電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。然后膜用PBS+3％BSA封閉2小時(shí)。用PBS緩沖液洗滌后加入抗FⅧ抗體混合物(Chemicon International IncMABO38，Sera-Lab MAS530，MAS 531，MAS 532)兩小時(shí)。用PBS洗滌后與堿性磷酸酶標(biāo)記的抗鼠IgG(1∶1000，Sigma Chemicals，A4338)溫育一小時(shí)。印跡用0．1MTris，pH9．2，NBT和BCIP顯色。
將SEQ ID NOS 55至90的肽固定在膜上。用pH7．0的PBS平衡后一張膜與因子Ⅷ Octavi(240單位，溶于10ml含1％BSA的PBS，pH7．0)溫育2小時(shí)，另一張膜與Kogenate(250單位，溶于10ml含1％BSA的PBS，pH7．0)溫育2小時(shí)，另一張膜僅與含1％BSA的PBS，pH7．0溫育。用PBS緩沖液，pH7．0小心的洗滌結(jié)合了肽的膜，然后與抗FⅧ抗體(Chemicon International IncMABO38，Sera-Lab MAS530，MAS 531，MAS 532)接觸1小時(shí)。洗滌并與堿性磷酸酶標(biāo)記的抗鼠IgG(1∶1000，Sigma Chemicals，A4338)溫育后膜用溶于pH9．2的0．1Mtris緩沖液的NBT和BCIP顯影。結(jié)合因子Ⅷ的肽表現(xiàn)為色斑。將對(duì)照膜(僅與PBS，pH7．0，無(wú)因子Ⅷ)與其它兩張膜對(duì)比。
例2肽親和層析親和層析如例1中描述的進(jìn)行。
pdFⅧ親和層析使用(βAla)2對(duì)照膜時(shí)僅探測(cè)到一個(gè)很小的洗脫峰(見(jiàn)
圖1)。在還原條件的SDS PAGE銀染時(shí)也只出現(xiàn)顏色相當(dāng)淺的帶。洗脫液的Western印跡略顯陽(yáng)性。
SEQ IDS 66(VMKSWEEF)和72(EWIKWEEF)(圖2)顯現(xiàn)較大的洗脫峰，在還原條件的SDS PAGE銀染時(shí)也出現(xiàn)顏色更強(qiáng)的帶。在兩種情況下Western印跡都為陽(yáng)性。
源自Bayer kogenate的因子Ⅷ的結(jié)合從層析圖(圖4)可見(jiàn)固定了βAla-βAla的對(duì)照膜只輕微地結(jié)合因子Ⅷ，洗脫液的Western印跡為陽(yáng)性。
圖4中肽VMKSWEEF(SEQ ID NO 66)和EYKSWEEF(肽90)的洗脫峰明顯地比βAla-βAla對(duì)照膜的大。在兩種情況下洗脫液的Western印跡均為陽(yáng)性。
序列表(1)普通信息(ⅰ)申請(qǐng)者(A)姓名Octapharma AG(B)街區(qū)Haus im Park／Postfach(C)城市Ziegelbruecke(E)國(guó)家Schweiz(F)郵編8866(ⅱ)發(fā)明名稱與凝血因子Ⅲ親和的肽(ⅲ)序列數(shù)目94(ⅳ)計(jì)算機(jī)可讀信息(A)數(shù)據(jù)載體Floppy disk(B)計(jì)算機(jī)IBM PC compatible(C)操作系統(tǒng)PC-DOS／MS-DOS(D)軟件PatentIn Release #1．0，Version #1．30(EPA)(2)ZU SEQ ID NO1信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO1Gly Cys Val Ser Gly Cys Leu Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO2 信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO2Cys Val Ser Gly Cys Leu Cys Pro1 5(2)ZU SEQ ID NO3信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO3Val Ser Gly Cys Leu Cys Pro Pro1 5(2)ZU SEQ ID NO4信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(xi)序列描述SEQ ID NO4Set Gly Cys Leu Cys Pro Pro Gly1 5(2)ZU SEQ ID NO5信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO5Gly Cys Leu Cys Pro Pro Gly Met1 5(2)ZU SEQ ID NO6信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO6Cys Leu Cys Pro Pro Gly Met Val1 5(2)ZU SEQ ID NO7信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO7Leu Cys Pro Pro Gly Met Val Arg1 5(2)ZU SEQ ID NO8信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO8Cys Pro Pro Gly Met Val Arg His1 5(2)ANGABEN ZU SEQ ID NO9信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO9Pro Pro Gly Met Val Arg His Glu1 5(2)ZU SEQ ID NO10信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO13Val Arg His Glu Asn Arg Cys Val1 5(2)ZU SEQ ID NO14信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO14Arg His Glu Asn Arg Cys Val Ala1 5(2)ZU SEQ ID NO15信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO15His Glu Asn Arg Cys Val Ala Leu1 5(2)ZU SEQ ID NO16信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO16Glu Asn Arg Cys Val Ala Leu Glu1 5(2)ZU SEQ ID NO17信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO17Asn Arg Cys Val Ala Leu Glu Arg1 5(2)ZU SEQ ID NO18 信息(i)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)湮粗?ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO18Arg Cys Val Ala Leu Glu Arg Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO19信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO19Cys Val Ala Leu Glu Arg Cys Pro15(2)ZU sEQ ID NO20信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO20Val Ala Leu Glu Arg Cys Pro Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO2l信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO21Ala Leu Glu Arg Cys Pro Cys Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO22信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO22Leu Glu Arg Cys Pro Cys Phe His1 5(2)ZU SEQ ID NO23信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO23Glu Arg Cys Pro Cys Phe His Gln1 5(2)ZU SEQ ID NO24信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO24Arg Cys Pro Cys Phe His Gln Gly1 5(2)ZU SEQ ID NO25信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO25Cys Pro Cys Phe His Gln Gly Lys1 5(2)ZU SEQ ID NO26信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO26Pro Cys Phe His Gln Gly Lys Glu1 5(2)ZU SEQ ID NO27信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO27Cys Phe His Gln Gly Lys Glu Tyr1 5(2)ZU SEQ ID NO28信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO28Phe His Gln Gly Lys Glu Tyr Ala1 5(2)ZU SEQ ID NO29信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO29His Gln Gly Lys Glu Tyr Ala Pro1 5(2)ZU SEQ ID NO30信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO30Gln Gly Lys Glu Tyr Ala Pro Gly1 5(2)ZU SEQ ID NO31信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO31Gly Lys Glu Tyr Ala Pro Gly Glu1 5(2)ZU SEQ ID NO32信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO32Lys Glu Tyr Ala Pro Gly Glu Thr1 5(2)ZU SEQ ID NO33信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO33Glu Tyr Ala Pro Gly Glu Thr Val1 5(2)ZU SEQ ID NO34信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO34Tyr Ala Pro Gly Glu Thr Val Lys1 5(2)ZU SEQ ID NO35信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO35Ala Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile1 5(2)ZU SEQ ID NO36信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO36Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Gly1 5(2)ZU SEQ ID NO37信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO37Gly Glu Thr Val Lys Ile Gly Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO38信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO38Glu Thr Val Lys Ile Gly Cys Asn1 5(2)ZU SEQ ID NO39信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO39Thr Val Lys Ile Gly Cys Asn Thr1 5(2)ZU SEQ ID NO40信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO40Val Lys Ile Gly Cys Asn Thr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO41信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO41Lys Ile Gly Cys Asn Thr Cys Val1 5(2)ZU SEQ ID NO42信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO42Ile Gly Cys Asn Thr Cys Val Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO43信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO43Gly Cys Asn Thr Cys Val Cys Arg1 5(2)ZU SEQ ID NO44信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO44Cys Asn Thr Cys Val Cys Arg Asp1 5(2)ZU SEQ ID NO45信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO45Asn Thr Cys Val Cys Arg Asp Arg1 5(2)ZU SEQ ID NO46信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO46Thr Cys Val Cys Arg Asp Arg Lys1 5(2)ZU SEQ ID NO47信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO47Cys Val Cys Arg Asp Arg Lys Trp1 5(2)ZU SEQ ID NO48信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO48Val Cys Arg Asp Arg Lys Trp Asn1 5(2)ZU SEQ ID NO49信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO49Cys Arg Asp Arg Lys Trp Asn Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO50信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO50Arg Asp Arg Lys Trp Asn Cys Thr1 5(2)ZU SEQ ID NO51信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO51Asp Arg Lys Trp Asn Cys Thr Asp1 5(2)ZU SEQ ID NO52信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO52Arg Lys Trp Asn Cys Thr Asp His1 5(2)ZU SEQ ID NO53信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO53Lys Trp Asn Cys Thr Asp His Val1 5(2)ZU SEQ ID NO54信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO54Trp Asn Cys Thr Asp His Val Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO55信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO55Val Met Ile Lys Cys Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO56信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO56Val Met Ile Lys Cys Glu Glu phe1 5(2)ZU SEQ ID NO57信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO57Val Met Ile Lys Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO58信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO58Val Met Ile Lys Glu Phe Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO59信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO59Val Het I1e Lys Trp Glu Tyr Cys15(2)ZU SEQ ID NO60信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)湮粗?ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO60Val Met Ile Lys Trp Glu Glu phe15(2)ZU SEQ ID NO61信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(xi)序列描述sEQ ID NO6工Val MeC Lys Ser Cys Glu Tyr Cys15(2)zU SEQ ID NO62 信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO62Val MeC Lys Ser Cys Glu Glu phe1 5(2)ZU SEQ ID NO63信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨墨酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO63Val Met Lys Ser Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO64信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO64Val Met Lys Ser Glu phe Glu Phe1 5(2)ZU SEO ID NO65信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)湮粗?ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO65Val Met Lys Ser Trp Glu Tyr Cys15(2)ZU SEQ ID NO66信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO66Val Met Lys Ser Trp Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO67信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO67Glu Trp Ile Lys Cys Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO68信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO68Glu Trp Ile Lys Cys Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO69信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO69Glu Trp Ile Lys Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO70信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO70Glu Trp Ile Lys Glu Phe Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO71信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO71Glu Trp Ile Lys Trp Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO72信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO72Glu Trp Ile Lys Trp Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO73信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO73Glu Trp Lys Ser Cys Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO74信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO74Glu Trp Lys Ser Cys Glu Glu Phe1 5(2) ZU SEQ ID NO75信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO75Glu Trp Lys Ser Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO76信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO76Glu Trp Lys Ser Glu Phe Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO77信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO77Glu Trp Lys Ser Trp Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO78信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NOGlu Trp Lys Ser Trp Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO79信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO79Glu Tyr Ile Lys Cys Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO80信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO80Glu Tyr Ile Lys Cys Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO81信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO81Glu Tyr Ile Lys Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO82信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO82Glu Tyr Ile Lys Glu Phe Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO83信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO83Glu Tyr Ile Lys Trp Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO84信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO84Glu Tyr Ile Lys Trp Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO85信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO85Glu Tyr Lys Ser Cys Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO86信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO86Glu Tyr Lys Ser Cys Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO87信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO87Glu Tyr Lys Ser Glu Phe Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO88信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO88Glu Tyr Lys Ser Glu Phe Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO89信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO89Glu Tyr Lys Ser Trp Glu Tyr Cys1 5(2)ZU SEQ ID NO90信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度8氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO90Glu Tyr Lys Ser Trp Glu Glu Phe1 5(2)ZU SEQ ID NO91信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度10氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO91Leu Cys Pro Pro Gly Met Val Arg His Glu1 5 10(2)ZU SEQ ID NO92信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度9氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO92Arg Cys Pro Cys Phe His Gln Gly Lys1 5(2)ZU SEQ ID NO93信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度9氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知
(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO93Cys Phe His Gln Gly Lys Glu Tyr Ala1 5(2)Zu SEQ ID N094信息(ⅰ)序列特征(A)長(zhǎng)度12氨基酸(B)種類氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸未知(ⅱ)分子種類肽(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO94Arg Asp Arg Lys Trp Asn cys Thr Asp His Val Cys15 10
權(quán)利要求
1．具有如下結(jié)構(gòu)的肽R1-X-R2其中R1=NH2或肽；R2=COOH或肽；和X=至少為三肽的肽段，優(yōu)選地為七肽至十二肽，它與因子Ⅲ親和結(jié)合。
2．根據(jù)權(quán)利要求1的肽，其特征在于X為八肽或十二肽。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的肽，其中X=-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R3=V或ER4=M，W或YR5=I或KR6=K或SR7=C，E或WR8=E或FR9=Y或ER10=C或F；并且R1和R2具有上文所述的含義。
4．根據(jù)權(quán)利要求2的肽，其特征在于X為選自一組由SEQ ID NOS1至94組成的序列組八肽。
5．根據(jù)權(quán)利要求3的肽，其中R7=W；R8=E；R9=E或Y；R10=F或C；并且R1和R2具有上文所述的含義。
6．根據(jù)權(quán)利要求3的肽，其具有SEQ ID NOS 55至90的序列。
7．根據(jù)權(quán)利要求1和／或2的肽，其具有SEQ ID NOS 91至94的序列。
8．表面結(jié)合有根據(jù)權(quán)利要求1至7中至少一項(xiàng)的肽的載體材料。
9．根據(jù)權(quán)利要求8的載體材料包括無(wú)機(jī)的或有機(jī)的，尤其是多聚物材料。
10．根據(jù)權(quán)利要求8或9的載體材料，其中所述的一種或多種肽通過(guò)間隔臂結(jié)合到載體材料的表面。
11．包括根據(jù)權(quán)利要求1至7中至少一項(xiàng)的肽或根據(jù)權(quán)利要求8至10中至少一項(xiàng)的載體材料和輔助物質(zhì)的診斷試劑，并且供選地至少一種肽為標(biāo)記的。
12．根據(jù)權(quán)利要求1至7中至少一項(xiàng)的肽在標(biāo)記、鑒定和純化因子Ⅷ中的應(yīng)用。
13．通過(guò)液相或固相合成根據(jù)權(quán)利要求1至7中至少一項(xiàng)的肽的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種結(jié)構(gòu)為R
文檔編號(hào)C07K7/06GK1278829SQ98811089
公開(kāi)日2001年1月3日 申請(qǐng)日期1998年9月12日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月13日
發(fā)明者A·容保爾, D·喬斯克, R·納斯納 申請(qǐng)人:奧克塔法馬有限公司