專利名稱：一種與狐精子頂體蛋白fsa－1同源的基因(cbcald05)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新鑒定的多核苷酸，由這些多核苷酸編碼的多肽和上述多核苷酸和多肽的用途及它們的制備。更具體而言，本發(fā)明的多核苷酸和多肽涉及含頂體蛋白的基因家族，在此以后稱為CBCALD05。本發(fā)明還涉及上述多核苷酸和多肽功能的抑制或激活。
背景技術(shù)：
狐FSA-1是一種膜蛋白，位于頂體膜上，在許多哺乳動物中它有幾種配偶體(partner)，并且它可能與精子活性和/或生育作用有關(guān)。該蛋白的新型人候選者與已知的人精子頂體蛋白幾乎無同源性。這表明含頂體蛋白的該基因家族有已確立且證實作為治療靶點的歷史。顯然有必要鑒定含頂體蛋白的該基因家族的進一步成員并描述其特征，這些蛋白可能在預防改善或校正包括但不限于不育癥和生育有關(guān)的疾病或功能失調(diào)中起作用。
發(fā)明小結(jié)在一個方面，本發(fā)明涉及CBCALD05多肽和重組物質(zhì)和制備它們的方法。本發(fā)明的另一方面涉及應用上述CBCALD05多肽和多核苷酸的方法。這些用途包括治療不育癥和生育有關(guān)的其他疾病。仍是另一方面，本發(fā)明涉及使用本發(fā)明提供的物質(zhì)鑒定激動劑和拮抗劑的方法，和用鑒定出的化合物治療與CBCALD05失衡有關(guān)的病情。而本發(fā)明的另一方面涉及檢測和CBCALD05不合適的活性或水平有關(guān)疾病的診斷方法。
發(fā)明描述定義提供下列定義以便于理解在本發(fā)明中經(jīng)常使用的一些術(shù)語。
包括其他情況下，“CBCALD05”一般指具有在SEQ ID NO2中給出的氨基酸序列的多肽或其等位變異體。
“CBCALD05活性或CBCALD05多肽活性”或“CBCALD05或CBCALD05多肽的生物學活性”指所述的CBCALD05的代謝或生理功能，包括相似的活性或改進的活性或具有降低非所需副作用的這些活性。也包括所述的CBCALD05的抗原性活性和免疫原性。
“CBCALD05基因”指一種具有在SEQ ID NO1中給出的核苷酸序列的多核苷酸或其等位變體和/或它們的互補體。
在此所用的“抗體”包括多克隆和單克隆抗體、嵌合、單鏈和人源化抗體，以及Fab片段，包括Fab或其他免疫球蛋白表達文庫的產(chǎn)物。
“分離的”意味著“通過人手工方法”改變來自天然的狀態(tài)。如果“分離”的組合物或物質(zhì)在天然中出現(xiàn)，它已被從其原來的環(huán)境改變或移去，或二者均有之。例如，天然存在于活動物中的一種多核苷酸或多肽，不是“分離的”，但從其天然狀態(tài)共同存在的材料中分開得到的相同多核苷酸或多肽，如在此所用的術(shù)語一樣，為“分離的”。
“多核苷酸”一般指任何的多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸，它可以是未修飾的RNA或DNA或修飾過的RNA或DNA?！岸嗪塑账帷卑ǘ幌抻趩我缓碗p鏈DNA(一種單一和雙鏈區(qū)的混合物的DNA)、單和雙鏈區(qū)的混合物的RNA(包含可以單鏈，或更具體來說，雙鏈或一種單和雙鏈區(qū)混合物的DNA和RNA的雜交分子)。此外，“多核苷酸”指的是包含RNA或DNA或RNA和DNA二者的三鏈區(qū)。術(shù)語多核苷酸也包括含有1個或多個修飾堿基的DNAs和RNAs以及具有為穩(wěn)定性或其它原因而修飾的骨架的DNAs或RNAs?！靶揎棥钡膲A基包括例如三苯甲基化的(tritylated)堿基和稀有堿基如次黃嘌呤核苷。各種修飾方法針對DNA和RNA進行，因此，“多核苷酸”包括如在天然中一般可找到的化學、酶學或代謝修飾形式的多核苷酸，以及病毒和細胞特征性的DNA和RNA的化學形式?！岸嗪塑账帷币舶ㄏ鄬Χ痰亩嗪塑账幔７Q為寡核苷酸。
“多肽”指的是任何包含通過肽鍵或修飾過的肽鍵即肽等配體(isosteres)互相連接而成的2個或更多個氨基酸的肽或蛋白?！岸嚯摹敝付替?一般稱為肽、寡肽或寡聚體)和較長的鏈(一般稱為蛋白)。多肽可含有除了20基因編碼的氨基酸以外的氨基酸?！岸嚯摹卑ㄍㄟ^天然方法如翻譯后加工修飾或本領(lǐng)域眾所周知的化學修飾方法修飾的氨基酸序列。上述修飾方法在基礎(chǔ)課程和更詳細的專題文章以及大量的研究文獻中完整地描述過。修飾可發(fā)生在多肽的任何部位，包括肽骨架，氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端。值得稱道的是相同類型的修飾可以相同或不同程度存在于指定多肽的幾個位點上。另外，一個指定的多肽可含有許多種類型的修飾。多肽可由于遍在蛋白化而分枝，并且它們可以為具有或沒有分枝的環(huán)化。環(huán)形分枝的和分枝環(huán)形的多肽可能是翻譯后天然加工的結(jié)果或通過合成方法得到。修飾包括乙?；?、?；?、ADP-核糖化、酰胺化、黃素的共價附著、血紅素組分的共價附著、核苷酸或核苷酸衍生物的共價附著、脂類或脂類衍生物的共價附著、磷脂酰肌醇的共價附著、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、去甲基化、共價交聯(lián)的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸鹽的形成、甲酰化、伽馬羧基化、糖基化、GPI錨定物形成、羧化、碘化、甲基化、肉豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯化、外消旋化、硒化(selenoylation)、硫酸化、轉(zhuǎn)運RNA介導的向蛋白添加氨基酸如精氨酰化(arginylation)和遍在蛋白化。例如見，蛋白結(jié)構(gòu)和分子特性，第二版，T.E.Creighton，W.H.Freeman and Company，紐約，1993和Wold F.，蛋白翻譯后修飾前景和展望，1-12頁，出自，蛋白的翻譯后修飾，B.C.Johnson主編，學術(shù)出版社，紐約，1983；Seifter等，“蛋白修飾和非蛋白輔助因子的分析”，酶學方法(1990)182626-646和Ratten等，“蛋白合成翻譯后修飾和老化”，紐約科學院年評(1992)66348-62。
在此作為術(shù)語使用的“變體”，是一種分別與參照多核苷酸或多肽不同的多核苷酸或多肽。一種典型的多核苷酸變體與另一種參照多核苷酸的核苷酸序列不同。變體的核苷酸序列變化可能或不能改變由參照多核苷酸編碼的多肽的氨基酸序列。核苷酸變化，正如以下討論的一樣，可導致由參照序列編碼的多肽中的氨基酸替換、添加、缺失、融合和截短。一種典型的多肽變體與另一種參照多肽的氨基酸序列不同。一般來說，差異是有限的，結(jié)果參照多肽和變體的序列在整個序列中非常相似，并且在許多區(qū)域完全一致。變體和參照多肽在氨基酸序列方面的差異可由一個或多個替換、添加、缺失的任何組合引起。一個替換或插入的氨基酸殘基可以或不可以是由該遺傳密碼所編碼的一個氨基酸。一種多核苷酸或多肽的變體可以是天然產(chǎn)生的如等位變體，或者可以是未知的天然產(chǎn)生的變體。多核苷酸和多肽的非天然產(chǎn)生的變體可通過誘變技術(shù)或直接合成方法獲得。
“一致性”是一種測定核苷酸序列或氨基酸序列一致性的方法。總的來說，將序列進行比較結(jié)果得到最高等級的匹配?！耙恢滦浴北旧碛斜绢I(lǐng)域公認的意義，能用發(fā)表的技術(shù)計算。如見(計算分子生物學，Lesk A.M.編著，牛津大學出版社，紐約，1988；生物計算信息學和基因組計劃Smith，D.W.編著，學術(shù)出版社，紐約，1993；計算機分析序列數(shù)據(jù)，第一部分，Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.編著，Humana出版社，New Jersey，1994；分子生物學中的序列分析，von Heinje，G.，學術(shù)出版社，1987；和序列分析引物，Gribskov.M和Devereux，J.編著，M Stockton出版社，紐約，1991)。盡管存在許多方法測定2個多核苷酸或多肽序列之間的一致性，但術(shù)語“一致性”對技術(shù)人員來說眾所周知(Carillo，H和Lipton，D.，SIAM應用數(shù)學雜志(SIAM J AppliedMath)(1988)481073)。常用于測定2個序列之間一致性或相似性的方法，包括但不限于在巨型計算機指南，Martin J.Bishop編著，學術(shù)出版社，圣地亞哥，1994，和Carillo，H，和Lipton，D.，SIAM J AppliedMath(1988)481073中所公開的方法。測定一致性和相似性的方法編碼在計算機程序中，測定2個序列之間一致性和相似性的優(yōu)選計算機程序方法包括但不限于，GCS程序軟件包(Devereux，J.，等，核酸研究(1984)12(1)387)，BLASTP，BLASTN，F(xiàn)ASTA(Atschul，S.F.等，分子生物學雜志(1990)215403)。
作為說明，例如具有與SEQ ID NO1的參照核苷酸序列至少95％“一致性”的核苷酸序列的多核苷酸，可認為該多核苷酸的核苷酸序列與參照序列相比，除了該核苷酸序列可包括SEQ ID NO1的參照核苷酸序列的每100個核苷酸達5個點突變以外是一致的。換句話說，為了獲得具有與參照核苷酸序列至少95％一致核苷酸序列的多核苷酸，在參照序列中多達5％的核苷酸可缺失或用另一個核苷酸取代，或者在參照序列中直至總核苷酸5％的多個核苷酸可插入到參照序列中。參照序列的這些突變可在參照核苷酸序列的5或3末端部位產(chǎn)生或在這些末端部位之間的任何位置產(chǎn)生，可單個分散于參照序列核苷酸之中或以一個或多個毗連序列群分散于參照序列之中。
相似地，例如一個具有與SEQ ID NO2的參照氨基酸序列至少有95％“一致性”氨基酸序列的多肽，可認為該多肽的氨基酸序列與該參照序列相比，除了該多肽序列可能包括SEQ ID NO2的參照氨基酸的每100個氨基酸中達5個改變以外是一致的。換句話說，為獲得一種具有與參照氨基酸序列至少95％一致氨基酸序列的多肽，在參照序列中多達5％的氨基酸殘基可缺失或用別的氨基酸取代，或者在參照序列中直至總氨基酸殘基的5％的多個氨基酸可插入到參照序列中。參照序列的這些改變可以在參照氨基酸序列的氨基或羧基末端部位產(chǎn)生或這些末端部位的任何部位產(chǎn)生，可單個分散于參照序列的殘基之間或以一個或更多個毗連序列群分散于參照序列之中。
本發(fā)明多肽在一方面，本發(fā)明涉及CBCALD05多肽(或CBCALD05蛋白)。CBCALD05多肽包括SEQ ID NO2多肽；和包括SEQ ID NO2的氨基酸序列的多肽以及包括下列氨基酸序列的多肽，這些氨基酸序列就其全長來說與SEQ ID NO2的序列至少有80％一致性，更為優(yōu)選具有至少90％的一致性以及甚至更為優(yōu)選的至少95％一致性。而且，那些至少97-99％(一致性)的序列是高度優(yōu)選的。CBCALD05多肽中還包括具有下列氨基酸序列的多肽，這些多肽就其全長來說與具有SEQ IDNO2的氨基酸序列的多肽至少有80％一致性，更為優(yōu)選的是至少90％一致性以及甚至更為優(yōu)選的是與SEQ ID NO2至少95％一致性。此外，那些至少97-99％(一致性)的多肽是高度優(yōu)選的。優(yōu)選地，CBCALD05多肽表現(xiàn)至少CBCALD05的一種生物學活性。CBCALD05多肽可以是“成熟”蛋白的形式或為較大蛋白例如融合蛋白的一部分。包括含分泌或引導序列的另外氨基酸序列，前序列，有助于純化如多組氨酸殘基的序列或使重組體產(chǎn)生過程中利于穩(wěn)定的序列，這些常是有利的。
CBCALD05多肽的片段也包括在本發(fā)明之中。片段是具有就整體而言與前面提到的CBCALD05多肽的氨基酸序列部分相同，但不是全部相同的氨基酸序列多肽。至于CBCALD05多肽，片段可以是“自由出現(xiàn)”或包括在一個較大的多肽中，在該多肽中所述的片段形成一部分或一個區(qū)域，最優(yōu)選的是作為單個連續(xù)區(qū)域。本發(fā)明多肽片段的代表性實施例包括例如從大約氨基酸數(shù)目1-20、21-40、41-60、61-80、81-100和101至CBCALD05多肽末端的片段。在本文中“大約”包括在任一端或兩端數(shù)個、5、4、3、2或1個更多或更少氨基酸的具體列舉范圍。
優(yōu)選的片段包括例如具有CBCALD05多肽的氨基酸序列的截短多肽，除了缺失包括氨基末端的連續(xù)系列殘基或包括羧基末端的連續(xù)系列殘基或缺失包括氨基末端和包括羧基末端的2個連續(xù)系列殘基的多肽以外。優(yōu)選的還有其特征為如下結(jié)構(gòu)或功能特性的片段，如包含α螺旋和α螺旋形成區(qū)、β折疊和β折疊形成區(qū)、轉(zhuǎn)角和轉(zhuǎn)角形成區(qū)、卷曲和卷曲形成區(qū)、親水區(qū)、疏水區(qū)、α兩親區(qū)、β兩親區(qū)、柔性區(qū)、表面形成區(qū)、底物結(jié)合區(qū)和高抗原指示區(qū)的片段。其他優(yōu)選的片段是生物學活性片段。生物學活性片段是那些介導CBCALD05活性的片段，包括具有相似活性或改進的活性或降低非所需的活性的那些片段。還包括那些在動物尤其在人中有抗原性或免疫原性的片段。
任選地，全部這些多肽片段保留CBCALD05的生物學活性，包括抗原性活性。所定義的序列和片段的變體也形成本發(fā)明的部分。優(yōu)選的變體是那些由保守氨基酸替換與參照體不同的種類，即用一個相似特性的殘基替換的變體。上述典型的替換是在A1a、Val、Leu和Ile之間；Ser和Thr之間；酸性殘基Asp和Glu之間；Asn和Gln之間和堿性殘基Lys和Arg之間；或芳香族殘基Phe和Tyr之間進行。尤其優(yōu)選的是其中數(shù)個、5-10、1-5或1-2個氨基酸以任何組合被替換、缺失或添加的變體。
本發(fā)明的CBCALD05多肽能用任何合適的方法制備。上述多肽包括分離自天然產(chǎn)生的多肽、重組制備的多肽、合成制備的多肽或由這些方法的組合制備的多肽。制備上述多肽的方法在本領(lǐng)域完全了解。
本發(fā)明多核苷酸本發(fā)明的另一方面涉及CBCALD05多核苷酸。CBCALD05的多核苷酸包括分離的編碼CBCALD05多肽和片段的多核苷酸和與其密切相關(guān)的多核苷酸。更具體而言，本發(fā)明的CBCALD05多核苷酸包括在SEQID NO1中含有的編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列的多核苷酸和具有SEQ ID NO1的特定序列的多核苷酸。CBCALD05多核苷酸進一步包括就其全長而言包含與編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列至少有80％一致性的核苷酸序列多核苷酸，和就其全長而言包含與SEQ ID NO1的核苷酸序列至少80％一致的多核苷酸。就此而言，至少90％一致性的多核苷酸是尤為優(yōu)選的、而那些具有至少95％一致性的種類是特別優(yōu)選的。此外，至少97％一致性的那些是高度優(yōu)選的，且至少98-99％一致性的那些是最為高度優(yōu)選的，至少99％的那些是最為優(yōu)選的。在CBCALD05多核苷酸之下還包括與SEQ ID NO1中含有的核苷酸序列足夠一致性的核苷酸序列，該序列在用于擴增或用作探針或標記物的條件下能雜交。本發(fā)明還提供與上述CBCALD05多核苷酸互補的多核苷酸。
如表1(SEQ ID NO1)編碼人CBCALD05的cDNA測序結(jié)果所示，本發(fā)明的CBCALD05結(jié)構(gòu)上與含有頂體蛋白的基因家族的其他蛋白有關(guān)。SEQ ID NO1的cDNA序列含有開放閱讀框架(核苷酸數(shù)目11～879)，其編碼SEQ ID NO2的293個氨基酸的多肽。表2的氨基酸序列(SEQ ID NO2)與狐頂體蛋白FSA-1在236氨基酸中具有約82.2％的一致性(用FASTA)(S Beaton等，Reprod.Fertil Dev.6761-770，1994)。表1的核苷酸序列(SEQ ID NO1)與狐精子頂體蛋白FSA-1在574個核苷酸中具有大約88.5％的一致性(用FASTA)(S Beaton等，Reprod.Fertil.Dev.6761-770，1994)。因此，本發(fā)明的CBCALD05多肽和多核苷酸可期望特別與它們同源的多肽和多核苷酸擁有相似的生物學功能/特性，并且它們的用途對本領(lǐng)域的任何技術(shù)人員是顯而易見的。
表1a
a人CBCALD05的核苷酸序列(SEQ ID NO1)表2b
b人CBCALD05的氨基酸序列(SEQ ID NO2)本發(fā)明編碼CBCALD05的一種多核苷酸可用標準克隆篩選法，利用表達序列標簽(EST)分析來源于人臍帶血的細胞mRNA的cDNA文庫中得到(Adams，M.D.等，科學(1991)2521651-1656；Adams，M.D.等，自然，(1992)355632-634；Adams，M.D.等，自然(1995)377增刊(Supp)3-174)。本發(fā)明的多核苷酸也能從天然來源如基因組DNA文庫中得到或能用眾所周知和商業(yè)可購得的技術(shù)合成。
編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列可以與表1中(SEQ ID NO1核苷酸數(shù)11～879)含有的編碼多肽序列一致，或者作為遺傳密碼的豐度(簡并性)的結(jié)果，也可以是編碼SEQ ID NO2的多肽的序列。
當本發(fā)明的多核苷酸用于重組制備CBCALD05多肽時，多核苷酸可包括成熟多肽或其片段本身的編碼序列，在閱讀框架中具有其他編碼序列的編碼序列，這其它編碼序列如那些編碼引導或分泌序列，前蛋白或原蛋白或前原蛋白序列，或其他融合多肽部分。例如，可編碼便于融合多肽純化的標記序列。在本發(fā)明這方面的一些優(yōu)選實施方案中，標記序列是六組氨酸肽或是HA標簽，六組氨酸肽在pQE載體(QiagenInc.)中提供和在Gentz等，美國自然科學院院報(1989)86821-824中描述。多核苷酸也可含有非編碼5′和3′序列，如轉(zhuǎn)錄不翻譯的序列，剪接和聚腺苷化信號，核糖體結(jié)合位點和穩(wěn)定mRNA的序列。
進一步優(yōu)選的實施方案是編碼包括表2(SEQ ID NO2)的氨基酸序列CBCALD05多肽的CBCALD05變體的多核苷酸，其中數(shù)個、5-10、1-5、1-3、1-2或1個氨基酸殘基以任何組合被置換、缺失或添加。
本發(fā)明進一步涉及與在本文中上面描述過的序列雜交的多核苷酸。在此方面，本發(fā)明特別涉及在嚴緊條件下能與在本文中上面描述過的多核苷酸雜交的多核苷酸。正如在此所用的，術(shù)語“嚴緊條件”意味著僅在序列之間的一致性至少80％和優(yōu)選至少90％，更優(yōu)選至少95％，而甚至更優(yōu)選97-99％的情況下雜交才會發(fā)生。
與SEQ ID NO1中含有的核苷酸序列或其片段一致或充分一致的本發(fā)明多核苷酸，可以用作cDNA和基因組DNA的雜交探針，以分離編碼CBCALD05多肽的全長cDNAs和基因組克隆和分離與CBCALD05基因具有高度序列相似性的其他基因(包括編碼來源于非人類的種的同系物和直向同源物(ortholog)的基因)的cDNA和基因組克隆。上述雜交技術(shù)在本領(lǐng)域的技術(shù)人員中眾所周知。一般地，這些核苷酸序列與參照體的序列具有80％一致性，優(yōu)選90％一致性，更為優(yōu)選95％一致性。一般來說這些探針包括至少15個核苷酸。優(yōu)選地，上述探針有至少30個核苷酸和可以有至少50個核苷酸。特別優(yōu)選的探針在30和50個核苷酸范圍之間。
在一個實施方案中，得到編碼CBCALD05多肽的多核苷酸包括來自非人類的物種的同系物和直向同源物包括了如下步驟，在嚴緊雜交條件下用具有SEQ ID NO1或其片段標記的探針篩選合適的文庫，然后分離到含有所述多核苷酸序列的全長cDNA和基因組克隆。因此在另一方面，本發(fā)明的CBCALD05多核苷酸進一步包括這樣的核苷酸序列，該核苷酸序列包含有在嚴緊條件與具有SEQ ID NO1的核苷酸序列或其片段雜交的核苷酸序列。也包括進CBCALD05多肽的是包含通過上述雜交條件下獲得的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。上述雜交技術(shù)在本領(lǐng)域的技術(shù)人員中眾所周知。雜交嚴緊條件如上定義?；蛘咦鳛檫x擇在含50％甲酰胺，5×SSC(150 mM NaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5×Denhardt’s溶液，10％硫酸葡聚糖和20μg/ml變性剪切過的鮭精DNA的溶液中，42℃溫育過夜，然后在大約65℃用0.1×SSC洗雜交膜的條件。
本發(fā)明的多核苷酸和多肽可用作研究試劑和材料，以發(fā)現(xiàn)對動物和人類疾病治療和診斷的方法。
載體、宿主細胞、表達本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的多核苷酸或多肽的載體和宿主細胞，所述的宿主細胞用本發(fā)明的載體進行遺傳工程操作及通過重組技術(shù)制備本發(fā)明的多肽。也可使用無細胞翻譯系統(tǒng)用來源于本發(fā)明的DNA構(gòu)建體的RNAs制備上述蛋白。
為了重組體的制備，宿主細胞可進行遺傳工程操作以摻入本發(fā)明的多核苷酸表達系統(tǒng)或其一部分。多核苷酸導入到宿主細胞中可通過在許多標準的實驗室手冊中描述的方法進行，如Davis等，分子生物學的基本方法(1986)和Sambrook等，分子克隆實驗室手冊，第二版，冷泉港實驗室出版社，冷泉港，紐約(1989)如用磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導的轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)位(transvection)、顯微注射、陽離子脂介導的轉(zhuǎn)染、電穿孔、轉(zhuǎn)導、劃痕負載(Scrape loading)、轟擊導入或感染。
合適宿主的代表性實例包括細菌細胞，如鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌、鏈霉菌和枯草芽孢桿菌細胞、真菌細胞，如酵母細胞和曲霉細胞；昆蟲細胞如果蠅S2和草地夜蛾Sf9細胞；動物細胞如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK 293和Bowes黑色素瘤細胞和植物細胞。
大量的表達系統(tǒng)可資利用。上述系統(tǒng)包括下述系統(tǒng)及其他系統(tǒng)，染色體、附加體和病毒衍生的系統(tǒng)，如以下來源的載體細菌質(zhì)粒、細菌噬菌體、轉(zhuǎn)座子、酵母附加體、插入元件、酵母染色體元件，病毒如桿狀病毒、乳多空病毒如SV40、牛痘病毒、腺病毒、禽痘病毒、假性狂犬病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒，以及來源于其組合的載體，如來源于質(zhì)粒和嗜菌體遺傳元件的那些種類，如粘粒和嗜菌粒。表達系統(tǒng)可含有調(diào)節(jié)和引起表達的控制區(qū)。一般來說，可使用任一種適于在宿主中維持、增殖或表達多核苷酸以制備多肽的系統(tǒng)或載體。合適的核苷酸序列可通過各種眾所周知和常規(guī)技術(shù)的任一種插入到表達載體中，例如在Sambrook等分子克隆，實驗室手冊(同上)中給出的那些技術(shù)。
為了把翻譯蛋白分泌進內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔、外周質(zhì)間隙或細胞外環(huán)境，合適的分泌信號可插入到需要的多肽中。這些信號可以是對該多肽內(nèi)源性的或它們可以是異源信號。
如果CBCALD05多肽表達用于篩選方法中，一般來說，制備的多肽在細胞表面是優(yōu)選的。在這方面，細胞可在篩選測定使用前收獲。如果CBCALD05多肽被分泌到培養(yǎng)基中，為了重新獲得和純化多肽可回收培養(yǎng)基；如果在細胞內(nèi)制備，回收多肽前，細胞首先必須被裂解。CBCALD05多肽可通過眾所周知的方法從重組細胞培養(yǎng)物中回收和純化，這些技術(shù)包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸抽提、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水作用層析、親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。最為優(yōu)選地，使用高效液相層析純化。當多肽在分離和/或純化過程中被變性時，眾所周知的重新折疊蛋白的技術(shù)可用于再生活性構(gòu)象。
診斷分析法本發(fā)明還涉及用作診斷試劑的CBCALD05多核苷酸。檢測和功能異常有關(guān)的CBCALD05基因突變形式將提供一種診斷工具，該診斷工具能增加或確定疾病的診斷或?qū)膊〉囊赘行?，該疾病由于CBCALD05的表達不足、過度表達或改變表達引起。在CBCALD05基因中攜帶突變的個體可通過各種技術(shù)在DNA水平檢測到。
診斷用的核苷酸可從受試者的細胞中獲得，例如從血液、尿、唾液、組織活檢或尸檢材料中得到?；蚪MDNA可直接用于檢測或分析前用PCR或其他擴增法進行酶促擴增。RNA或cDNA也可以相似的方式使用。通過與正?；蛐捅容^其擴增產(chǎn)物的大小變化能檢測到缺失和插入。點突變能通過擴增的DNA與標記的CBCALD05核苷酸序列雜交鑒別。通過RNase消化或解鏈溫度的差異完全配對序列能與錯配的雙鏈體區(qū)別開來。通過在有或沒有變性劑的凝膠中DNA片段的電泳遷移率的改變或直接DNA測序如見，Myers等，科學(1985)2301242也可檢出DNA序列的差異。特殊位置的序列變化也可通過核酸酶保護分析如RNase和S1保護或化學裂解方法顯示。見Cotton等，美國自然科學院院報(1985)854397-4401。在另一實施方案中，包含CBCALD05核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探針陣列可被構(gòu)建以進行有效篩選如基因突變。陣列技術(shù)方法已眾所周知并且具有普遍的應用性，能用于說明許多分子遺傳學中的問題，包括基因表達、遺傳譜系和遺傳變異性(如見M.Chee等，科學，274卷610-613頁(1996))。
診斷方法提供通過用描述過的方法檢測在CBCALD05基因中的突變而診斷或測定對不育癥的易感性及與生育有關(guān)的疾病的方法。
此外，通過包括測定來自受試者的樣品其CBCALD05多肽或CBCALD05 mRNA的異常降低或增加水平的方法，可診斷不育癥及與生育有關(guān)的疾病?？捎帽绢I(lǐng)域熟知的測定多核苷酸的量的任一種方法在RNA水平測定降低或增加表達的程度，例如用PCR、RT-PCR、RNA酶保護、Northern印跡和其他雜交方法。可用于測定來源于宿主樣品的蛋白(例如CBCALD05多肽)水平的分析技術(shù)在本領(lǐng)域技術(shù)人員中眾所周知。上述分析法包括放射免疫測定、競爭結(jié)合測定、Western印跡分析和ELISA分析法。
因而在另一方面，本發(fā)明涉及對疾病或?qū)膊∫赘行杂绕涫遣挥Y和生育有關(guān)的疾病的診斷試劑盒，它包括(a)CBCALD05多核苷酸，優(yōu)選的是SEQ ID NO1的核苷酸序列或其片段；(b)一種與(a)的序列互補的核苷酸序列；(c)CBCALD05多肽，優(yōu)選的是SEQ ID NO2多肽或其片段；或(d)針對CBCALD05多肽的抗體，優(yōu)選地針對SEQ ID NO2多肽的抗體?？梢岳斫庠谌我环N上述試劑盒中(a)，(b)，(c)或(d)可包括一種基本的組分。
染色體分析本發(fā)明的核苷酸序列也對染色體的鑒別有價值。該序列特異地靶向到在單個人染色體上的一個特定位置中并與之雜交。根據(jù)本發(fā)明對染色體相關(guān)序列的作圖是將那些序列和基因有關(guān)疾病聯(lián)系起來的重要的第一步。一旦一個序列被作圖到精確的染色體位置，在染色體上該序列的物理位置能與遺傳圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。例如，上述數(shù)據(jù)能在V.McKusick，人類孟德爾式遺傳(在線通過Johns Hopkins大學Welch醫(yī)學圖書館得到)中找到。然后通過譜系分析(物理性鄰接基因的共遺傳)能鑒別已被作圖在相同染色體區(qū)的基因和疾病的關(guān)系。
在受影響和不受影響的個體之間cDNA或基因組序列的差異也可測定。如果一種突變在一些或所有受影響的個體中觀察到但不在任何正常個體中觀察到，那么該突變可能是引起該疾病的因素。
抗體本發(fā)明的多肽或其片段或其類似物或表達它們的細胞也能用作免疫原，以制備對CBCALD05多肽免疫特異性的抗體。術(shù)語“免疫特異性的”意為那些抗體擁有對本發(fā)明的多肽的親和性比以前領(lǐng)域的其他相關(guān)多肽的親和性基本上更大。
所制備的抗CBCALD05多肽的抗體能用常規(guī)方法給動物優(yōu)選地非人類施用多肽或帶有表位的片段、類似物或細胞得到。為制備單克隆抗體，可用任何提供由連續(xù)細胞系培養(yǎng)制備抗體的技術(shù)。實例包括雜交瘤技術(shù)(Kohler G.和Milstein，C.自然(1975)256 495-497)、trioma技術(shù)、人B細胞雜交瘤技術(shù)(Kozbor等，當代免疫學(1983)472)和EBV雜交瘤技術(shù)(Cole等，單克隆抗體和癌癥治療，pp.77-96，Alan R.Liss，Inc.，1985)。
制備單鏈抗體的技術(shù)(美國專利號4,946,778)也能適合于制備針對本發(fā)明的多肽的單鏈抗體。另外，轉(zhuǎn)基因小鼠或包括其他哺乳動物的轉(zhuǎn)基因其他生物可用于表達人源化的抗體。
以上所述的抗體可用于分離或鑒定表達此多肽的克隆或通過親和層析純化該多肽。
抗CBCALD05多肽的抗體也可用于治療不育癥和其他與生育有關(guān)的疾病。
疫苗本發(fā)明的另一方面涉及一種在哺乳動物中誘導免疫應答的方法，該方法包括用CBCALD05多肽或其片段接種到哺乳動物中，從而足以產(chǎn)生抗體和/或T細胞免疫應答以保護所述的動物不患不育癥和其他與生育有關(guān)的疾病。而本發(fā)明的另一方面涉及在哺乳動物中誘導免疫應答的以下方法，該方法包括通過指導CBCALD05多核苷酸在體內(nèi)表達的載體運送CBCALD05多肽，以便誘導這樣的免疫應答產(chǎn)生抗體以保護所述的動物不患病。
本發(fā)明的進一步方面涉及一種免疫學/疫苗的制劑(組合物)，當導入到哺乳動物宿主中時，該制劑在該哺乳動物中誘導對CBCALD05多肽的免疫應答，其中組合物包括CBCALD05多肽或CBCALD05基因。疫苗制劑可進一步包括合適的載體。由于CBCALD05多肽可在胃中斷裂，優(yōu)選地是腸胃道外施用(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)等注射)。適合于腸胃道外施用的制劑包括水狀和非水狀的無菌注射溶液，它可含有抗氧化劑、緩沖液、制菌劑和用接受者的血液使該制劑等滲溶質(zhì)和可包括懸浮劑或粘稠劑的水狀和非水狀無菌懸浮液。此制劑可存在于單位單劑量或多劑量的容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可貯存在冷凍干燥的條件中，使用前只需要馬上加無菌的液狀載體。該疫苗制劑也可包括增強制劑免疫原性的佐劑系統(tǒng)，例如本領(lǐng)域已知的水包油系統(tǒng)和其他系統(tǒng)。劑量將依賴于疫苗的比活性并能通過常規(guī)的實驗容易確定。
篩選測定法本發(fā)明的CBCALD05多肽可用在篩選化合物的方法中，這些化合物活化本發(fā)明的CBCALD05多肽(激動劑)或抑制其活化(拮抗劑、或另外稱為抑制劑)。因此，本發(fā)明的多肽也可用于評價和鑒別來源于例如細胞、無細胞的制品、化學文庫和天然產(chǎn)物混合物的激動劑或拮抗劑。這些激動劑或拮抗劑可以是本發(fā)明多肽的天然或修飾的底物、配基、受體、酶等，視具體情況而定；或可以是本發(fā)明多肽的結(jié)構(gòu)或功能模擬物。見Coligan等，免疫學中的現(xiàn)代方法1(2)第5章(1991)。
CBCALD05多肽擔負有許多生物學功能，包括許多病理學的作用。因此，有必要尋找一方面刺激CBCALD05多肽而另一方面能抑制CBCALD05多肽功能的化合物和藥物。一般來說，激動劑用于對諸如不育癥和生育有關(guān)的疾病的病情的治療和預防目的。拮抗劑也可用于對諸如不育癥和生育有關(guān)的疾病的病情的各種治療和預防目的。
一般來說，上述篩選方法可包括應用合適的表達CBCALD05多肽的細胞或?qū)Ρ景l(fā)明的CBCALD05多肽起反應的細胞。上述細胞包括來源于哺乳動物、酵母、果蠅或大腸桿菌的細胞。然后，表達CBCALD05多肽(或含所表達的多肽細胞膜)或?qū)BCALD05多肽起反應的細胞與測試化合物接觸，以觀察結(jié)合或功能性反應的刺激作用或抑制作用。將與候選化合物接觸細胞的能力與沒有CBCALD05活性接觸的相同細胞相比較。
測定可簡單地檢測候選化合物的結(jié)合情況，其中粘附到帶有CBCALD05多肽的細胞通過直接或間接地和候選化合物有關(guān)的標記的方法或涉及用標記過的競爭物的競爭測定中檢出。進一步，這些測定可用對帶有CBCALD05多肽的細胞適合的檢測系統(tǒng)，檢測候選化合物是否導致由CBCALD05多肽活化產(chǎn)生的信號。一般來說在一種已知的激動劑存在下測定活化作用的抑制劑并觀察因存在候選的化合物存在對激動劑活化的影響。
進一步，測定可簡單地包括如下步驟，把含有CBCALD05多肽的溶液與候選化合物混合以形成混合物，在混合物中測定CBCALD05的活性并把混合物的CBCALD05的活性與標準進行比較。
CBCALD05 cDNA、蛋白和針對所述蛋白的抗體也可用于設(shè)計檢測所加的化合物對細胞中產(chǎn)生的CBCALD05 mRNA和蛋白的影響的測定方法。例如，可建立ELISA方法，用單克隆和多克隆抗體通過本領(lǐng)域熟知的標準方法測定分泌的或與細胞有關(guān)的CBCALD05蛋白的水平，并且這種方法可用于發(fā)現(xiàn)抑制或增強從適當操作過的細胞或組織的CBCALD05(分別亦稱為拮抗劑或激動劑)產(chǎn)量的藥劑。
通過本領(lǐng)域熟知的標準受體結(jié)合技術(shù)，CBCALD05蛋白可用于鑒別膜結(jié)合或可溶性的受體及如果存在的任何受體。這些技術(shù)包括但不限于配基結(jié)合和交聯(lián)測定法，在該方法中，CBCALD05用放射性同位素(如125I)、化學修飾(如生物素化)或者與適于檢測或純化的肽序列融合而標記，然后和假定受體的來源(細胞、細胞膜、細胞上清液、組織提取液、體液)溫育。其他方法包括生物物理技術(shù)如表面質(zhì)子共振質(zhì)譜。除了用于純化和克隆受體外，這些結(jié)合測定法可用于鑒定與CBCALD05結(jié)合其受體(如果存在的話任何受體)結(jié)合過程中競爭的CBCALD05的激動劑和拮抗劑。進行篩選測定的標準方法在本領(lǐng)域中已眾所周知。
潛在的CBCALD05多肽拮抗劑的實例包括抗體或在某些情況下的寡核苷酸或蛋白，這些蛋白與CBCALD05多肽的配基、底物、受體、酶等(視具體情況而定)密切相關(guān)，例如配基、底物、受體、酶等的片段，或者結(jié)合到本發(fā)明的多肽上但不能引起反應的小分子，結(jié)果多肽的活性被阻止。
因此在另一方面，本發(fā)明涉及一種試劑盒，該試劑盒用于鑒定針對CBCALD05多肽的激動劑、拮抗劑、配基、受體、底物、酶等；或者降低或增加CBCALD05多肽產(chǎn)量的化合物，該試劑盒包括(a)CBCALD05多肽，優(yōu)選的是SEQ ID NO2的多肽；(b)表達CBCALD05多肽的重組細胞，優(yōu)選表達的是SEQ ID NO2的多肽；(c)表達CBCALD05多肽的細胞膜；優(yōu)選的是SEQ ID NO2的多肽；或(d)針對CBCALD05多肽優(yōu)選是SEQ ID NO2的多肽的抗體。應當理解在任一種上述試劑盒(a)、(b)、(c)或(d)中可組成基本組分。
預防和治療方法本發(fā)明提供治療異常病情的方法，例如與CBCALD05多肽活性過度和不足量有關(guān)的不育癥和生育有關(guān)的疾病。
如果CBCALD05多肽的活性過度，幾種方法可以采用。一種方法包括以有效地抑制CBCALD05多肽的功能的量施用在此上面描述過的抑制劑化合物(拮抗劑)和藥用可接受的載體給患者，例如通過阻斷配基、底物、受體、酶等的結(jié)合或抑制第二信號實現(xiàn)，因而減輕異常病情。在另一方法中，可以施用可溶形式的CBCALD05多肽，該多肽仍能和與內(nèi)源性的CBCALD05多肽競爭的配基、底物、酶、受體等結(jié)合。上述競爭劑的典型實施方案包括CBCALD05多肽的片段。
在另一方法中，編碼內(nèi)源CBCALD05多肽的基因表達能用表達阻斷技術(shù)抑制。已知的這些技術(shù)包括應用內(nèi)部產(chǎn)生或分別施用的反義序列。例如見O’Connor神經(jīng)化學雜志(J Neurochem(1991)56560作為基因表達的反義抑制劑的寡脫氧核糖核苷酸，CRC出版社，Boca RatonFL(1988)?；蛘?，也可提供和基因形成三股螺旋的寡核苷酸。例如見，Lee等，核酸研究(1979)63073Cooney等，科學(1988)241456；Dervan等，科學(1991)2511360。這些寡聚物本來可以施用或者有關(guān)的寡聚物可在體內(nèi)表達。
為了治療與CBCALD05和其活性的表達不足有關(guān)的異常病情，也可采用多種方法。一種方法包括給患者施用治療有效量的活化CBCALD05多肽的化合物，即如上面描述的激動劑，該化合物與藥用可接受的載體組合使用，因而減輕異常病情。作為選擇，亦可采用基因治療，通過患者中相關(guān)的細胞內(nèi)源產(chǎn)生CBCALD05。例如，本發(fā)明的多核苷酸可進行加工以在復制有缺陷的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中表達，如上述討論那樣。然后分離逆轉(zhuǎn)錄病毒表達構(gòu)建體，導入到包裝細胞中，該包裝細胞用含有編碼本發(fā)明多肽的RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)導，從而該包裝細胞現(xiàn)能產(chǎn)生含有目的基因的感染性病毒顆粒。這些產(chǎn)生細胞作為工程化細胞在體內(nèi)施用給患者并在體內(nèi)表達所述的多肽。關(guān)于基因治療的綜述，見20章，基因治療和其他基于分子遺傳學的治療方法(在此引入作為參考)書名人類分子遺傳學，T Strachan和A P Read，BIOSScientific Publishers Ltd(1996)。另一種方法是治療量的CBCALD05多肽與合適的藥用載體組合在一起施用。
制劑和施用肽如CBCALD05多肽的可溶形式和激動劑及拮抗劑多肽或小分子可與合適的藥用載體組合成制劑。上述制劑包括藥用有效量的多肽或化合物和藥用可接受的受體或賦形劑。上述載體包括但不限于鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇和其組合。制劑應適于施用方式，在本領(lǐng)域的技術(shù)人員中完全掌握。本發(fā)明進一步涉及藥用包裝和試劑盒，其包括1或多個充填有1或多種以上提到的本發(fā)明組合物組分的容器。
本發(fā)明的多肽和其他化合物可單獨使用或和其他化合物例如治療化合物結(jié)合使用。
優(yōu)選的藥用組合物的全身施用方式包括注射，一般通過靜脈內(nèi)注射。其他注射途徑如皮下、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)注射也可采用。另外全身施用的其它方法包括透粘膜和透皮施用，使用如膽鹽或梭鏈孢酸或其他去垢劑的滲透劑進行。另外，如果適當?shù)刂瞥梢阅c道或膠囊制劑形式，口腔施用也是可能的。這些化合物的施用也可表面和/或局部以軟膏、糊劑、凝膠等方式使用。
所需的劑量范圍依賴于選擇的肽、施用途徑、制劑的性質(zhì)、患者病情的特點和參加治療醫(yī)生的判斷。然而適當?shù)膭┝繛?.1～100μg/kg患者的范圍。然而鑒于各種可得到的化合物和各種施用途徑不同效率，可期望所需的劑量廣泛的變化。例如，預期口腔施用比通過靜脈內(nèi)注射施用需要更高的劑量。在這些劑量水平的變化可用標準經(jīng)驗性最優(yōu)化途徑調(diào)整，這些方法在本領(lǐng)域完全掌握。
用于治療的多肽在常稱為“基因治療”的以上描述的治療方式中也可在患者中內(nèi)源產(chǎn)生。因此，例如，來自患者的細胞可用多核苷酸如DNA或RNA加工以在體外編碼多肽和例如，使用逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體加工。然后將細胞回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。
在本發(fā)明說明書中引用的所有出版物包括但不局限于專利和專利申請書在此引入僅作參考，盡管完全列出，但似乎每種單獨的出版物具體和單獨地標出以作為參考。
序列表(1)序列信息(i)申請者上海第二醫(yī)科大學(ii)發(fā)明題目一種與狐精子頂體蛋白FSA-1同源的基因(CBCALD05)(iii)序列數(shù)目2(iv)通信地址(A)地址BATNER & PRESTIA(B)街道P.O.BOX 980(C)城市VALLEY FORGE(D)州名PA(E)國家美國(F)郵編19482(v)計算機可讀形式(A)介質(zhì)類型磁盤(B)計算機IBM兼容機(C)操作系統(tǒng)DOS(D)軟件FastSEQ for Windows 2.0版(vi)目前申請資料(A)申請?zhí)柎谟?B)提交日期(C)分類未知(vii)在先申請資料(A)申請?zhí)?B)中請日期(viii)代理人/代理機構(gòu)資料(A)姓名PRESTA，PAUL F(B)登記號23,031(C)參考/存檔號GP-70355(ix)電信信息(A)電話610-407-0700(B)傳真610-407-0701(C)電報846169(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征
(A)長度1027堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型cDNA(xi)序列描述SEQ ID NO1GACTCCCAAG ATGGCGGACC TACTGGGCTC CATCCTGAGC TCCATGGAGA AGCCACCCAG 60CCTCGGTGAC CAGGAGACTC GGCGCAAGGC CCGAGAACAG GCCGCCCGCC TGAAGAAACT 120ACAAGAGCAA GAGAAACAAC AGAAAGTGGA GTTTCGTAAA AGGATGGAGA AGGAGGTGTC 180AGATTTCATT CAAGACAGTG GGCAGATCAA GAAAAAGTTT CAGCCAATGA ACAAGATCGA 240GAGGAGCATA CTACATGATG TGGTGGAAGT GGCTGGCCTG ACATCCTTCT CCTTTGGGGA 300AGATGATGAC TGTCGCTATG TCATGATCTT CAAAAAGGAG TTTGCACCCT CAGATGAAGA 360GCTAGACTCT TACCGTCGTG GAGAGGAATG GGACCCCCAG AAGGCTGAGG AGAAGCGGAA 420GCTGAAGGAG CTGGCCCAGA GGCAAGAGGA GGAGGCAGCC CAGCAGGGGC CTGTGGTGGT 480GAGCCCTGCC AGCGACTACA AGGACAAGTA CAGCCACCTC ATCGGCAAGG GAGCAGCCAA 540AGACGCAGCC CACATGCTAC AGGCCAATAA GACCTACGGC TGTGTGCCCG TGGCCAATAA 600GAGGGACACA CGCTCCATTG AAGAGGCTAT GAATGAGATC AGAGCCAAGA AGCGTCTGCG 660GCAGAGTGGG GAAGAGTTGC CGCCAACCTC TAGGCGCCCC GCCCAGCTCC CTTTGACCCC 720TGGGGCAGGG CAGGGGGCAG GGAGAGACAA GGCTGCTGCT ATTAGAGCCC ATCCTGGAGC 780CCCACCTCTG AACCACCTCC TACCAGCTGT CCCTCAGGCT GGGGGAAAAC AGGTGTTTGA 840TTTGTCACCG TTGGAGCTTG GATATGTGCG TGGCATGTGT GTGTGTGTGT GAGAGTGTGA 900ATGCACAGGT GGGTATTTAA TCTGTATTAT TCCCCGTTCT TGGAATTTTC TTCCCCATGG 960GGCTGGGGTA CTTTACATTC AATAAATACT GTTTAACCCA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1020AAAAAAA 1027(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)長度293氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型蛋白(xi)序列描述SEQ ID NO2Met Ala Asp Leu Leu Gly Ser Ile Leu Ser Ser Met Glu Lys Pro Pro1 5 10 15Ser Leu Gly Asp Gln Glu Thr Arg Arg Lys Ala Arg Glu Gln Ala Ala20 25 30Arg Leu Lys Lys Leu Gln Glu Gln Glu Lys Gln Gln Lys Val Glu Phe35 40 45Arg Lys Arg Met Glu Lys Glu Val Ser Asp Phe Ile Gln Asp Ser Gly50 55 60Gln Ile Lys Lys Lys Phe Gln Pro Met Asn Lys Ile Glu Arg Ser Ile65 70 75 80Leu His Asp Val Val Glu Val Ala Gly Leu Thr Ser Phe Ser Phe Gly85 90 95Glu Asp Asp Asp Cys Arg Tyr Val Met Ile Phe Lys Lys Glu Phe Ala100 105 110Pro Ser Asp Glu Glu Leu Asp Ser Tyr Arg Arg Gly Glu Glu Trp Asp115 120 125Pro Gln Lys Ala Glu Glu Lys Arg Lys Leu Lys Glu Leu Ala Gln Arg130 135 140Gln Glu Glu Glu Ala Ala Gln Gln Gly Pro Val Val Val Ser Pro Ala145 150 155 160Ser Asp Tyr Lys Asp Lys Tyr Ser His Leu Ile Gly Lys Gly Ala Ala165 170 175Lys Asp Ala Ala His Met Leu Gln Ala Asn Lys Thr Tyr Gly Cys Val180 185 190Pro Val Ala Asn Lys Arg Asp Thr Arg Ser Ile Glu Glu Ala Met Asn195 200 205Glu Ile Arg Ala Lys Lys Arg Leu Arg Gln Ser Gly Glu Glu Leu Pro210 215 220Pro Thr Ser Arg Arg Pro Ala Gln Leu Pro Leu Thr Pro Gly Ala Gly225 230 235 240Gln Gly Ala Gly Arg Asp Lys Ala Ala Ala Ile Arg Ala His Pro Gly245 250 255Ala Pro Pro Leu Asn His Leu Leu Pro Ala Val Pro Gln Ala Gly Gly260 265 270Lys Gln Val Phe Asp Leu Ser Pro Leu Glu Leu Gly Tyr Val Arg Gly275 280 285Met Cys Val Cys Val290
權(quán)利要求
1.一種分離的多核苷酸，包括就其全長來說與編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列至少有80％一致的核苷酸序列；或者一種與所述分離的多核苷酸互補的核苷酸序列。
2.權(quán)利要求1的多核苷酸，其中所述的多核苷酸包括SEQ ID NO1的編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列。
3.權(quán)利要求1的多核苷酸，其中所述的多核苷酸包括就其全長來說與SEQ ID NO1的序列至少80％是一致的核苷酸序列。
4.權(quán)利要求3的多核苷酸，它是SEQ ID NO1的多核苷酸。
5.權(quán)利要求1的多核苷酸，為DNA或RNA。
6.一種包括表達系統(tǒng)的DNA或RNA分子，其中當所述的表達系統(tǒng)在相容的宿主細胞中存在時，所述的表達系統(tǒng)能產(chǎn)生一種包括與SEQID NO2的多肽有至少80％一致性氨基酸序列的CBCALD05多肽。
7.一種包括權(quán)利要求6的表達系統(tǒng)的宿主細胞。
8.一種制備CBCALD05多肽的方法，該方法包括把權(quán)利要求7的宿主在足以制備所述的多肽并從培養(yǎng)物中回收多肽的條件下進行培養(yǎng)。
9.一種制備能產(chǎn)生CBCALD05多肽細胞的方法，該方法包括用權(quán)利要求6的表達系統(tǒng)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細胞，結(jié)果該宿主細胞在合適的培養(yǎng)條件下產(chǎn)生CBCALD05多肽。
10.一種包括就其全長來說與SEQ ID NO2的氨基酸序列至少80％一致氨基酸序列的CBCALD05多肽。
11.權(quán)利要求10的多肽，它包括SEQ ID NO2的氨基酸序列。
12.一種對權(quán)利要求10的CBCALD05多肽免疫特異的抗體。
13.一種治療需要增強權(quán)利要求10的多肽的活性或表達的患者的方法，包括(a)給患者施用治療有效量的所述的多肽的激動劑；和/或(b)提供患者一種分離的多核苷酸，該核苷酸包括就其全長來說與編碼SEQ ID NO2的CBCALD05多肽的核苷酸序列至少有80％的一致性核苷酸序列；或者給患者提供一種對所述的核苷酸序列互補的核苷酸序列形式從而完成在體內(nèi)產(chǎn)生所述的多肽活性。
14.一種治療需要抑制權(quán)利要求10的CBCALD05多肽的活性或表達的患者的方法，包括(a)給患者施用治療有效量的所述的多肽的拮抗劑；和/或(b)給患者施用抑制編碼所述的多肽的核苷酸序列表達的核酸分子；和/或(c)給患者施周治療有效量的與所述的多肽的配基、底物或受體競爭的多肽。
15.一種診斷與權(quán)利要求10的CBCALD05多肽的表達或活性有關(guān)患者中的疾病或?qū)υ摷膊〉囊赘行缘姆椒?，包?a)測定在所述的患者基因組中編碼所述的CBCALD05多肽的核苷酸序列中存在突變與否；和/或(b)分析在來源于所述患者的樣品中CBCALD05多肽表達的存在或量。
16.一種鑒別抑制(拮抗)或激動權(quán)利要求10的CBCALD05多肽的化合物的方法，該方法包括(a)將候選化合物與表達CBCALD05多肽(或表達CBCALD05多肽的細胞膜)的細胞或?qū)BCALD05多肽有反應的細胞接觸；然后(b)觀察結(jié)合，或刺激或抑制功能性反應；或者比較與候選化合物接觸的細胞(或細胞膜)與相同的沒有接觸化合物的細胞CBCALD05多肽活性的能力。
17.一種通過權(quán)利要求16的方法鑒定的激動劑。
18.一種通過權(quán)利要求16的方法鑒定的拮抗劑。
19.由權(quán)利要求9的方法制備的表達CBCALD05多肽的重組宿主細胞或其膜。
全文摘要
公開了CBCALD05多肽和多核苷酸以及通過同組技術(shù)制備這些多肽的方法。還公開應用CBCALD05多肽和多核苷酸設(shè)計治療不育癥和生育有關(guān)的其他疾病方法以及對這些病情診斷方法。
文檔編號C07K14/435GK1250478SQ98803409
公開日2000年4月12日 申請日期1998年1月19日 優(yōu)先權(quán)日1998年1月19日
發(fā)明者茅予, 傅剛, 張慶華, 周雋 申請人:上海第二醫(yī)科大學