專利名稱：被取代的N-(吲哚-2-羰基)-β-丙氨酰胺與作為抗糖尿病藥的衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及糖原磷酸化酶抑制劑、含有該抑制劑的藥物組合物以及該抑制劑在哺乳動物體內(nèi)治療糖尿病、高血糖、高膽甾醇血、高血壓、高胰島素血、高脂血癥、粥樣硬化與心肌局部缺血的用途。
盡管胰島素的早期發(fā)現(xiàn)及其隨后在糖尿病治療過程中的廣泛應用，以及盡管后來磺酰脲類例如ChlorpropamideTM(pfizer)、TolbutamideTM(upjohn)、AcetohexamideTM(E.I.Lilly)、TolazamideTM(upjohn)與雙胍如PhenforminTM(Ciba Geigy)、MetforminTM(G.D.Searle)的發(fā)現(xiàn)及其作為口服降糖藥的應用，對糖尿病的治療效果仍然不能令人滿意。在約10％I型糖尿病、即依賴于胰島素糖尿病患者(合成降血糖藥在其體內(nèi)已不產(chǎn)生效力)體內(nèi)有必要每日多次通常通過自我注射的方式使用胰島素。需要經(jīng)過多次估評尿或血液中的糖來確定胰島素的適宜劑量，施用過量的胰島素會導致低血糖癥，伴隨有從輕度血糖不正常至昏迷甚至死亡的后果。對于不依賴胰島素糖尿病(II型糖尿病，NIDDM)的治療過程通常包括指定飲食、鍛煉、口服藥劑如磺酰脲類以及在更嚴格的情況下口服胰島素。然而，臨床使用的降糖藥可以產(chǎn)生其它副作用，這就限制了其應用。在任何情況下，當這些藥劑之一在一個單獨病例中失敗時，另一種便會成功。很顯然，人們不斷地需要一種副作用更少或在其它藥劑失敗的情況下能夠產(chǎn)生功效的降糖藥。
作為一種動脈疾病的粥樣硬化在美國與西歐被認為是主要的死亡病因。導致粥樣硬化與梗阻性心臟病的病理次序是眾所周知的。在這一次序中最初階段是在頸動脈、心臟冠狀動脈和腦動脈以及主動脈中形成“脂肪條紋”。由于主要在平滑肌細胞內(nèi)和動脈與主動脈內(nèi)層的巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)的類脂沉積物的存在，這些損害呈黃色。此外，人們假設于這些脂肪條紋中被發(fā)現(xiàn)的大部分膽固醇反過來促使“纖維斑”形成，這種纖維斑包括充滿了類脂物并且被細胞外類脂物、膠原、彈性硬蛋白和蛋白多糖包圍的積累的內(nèi)平滑肌細胞。細胞與基質(zhì)形成纖維蓋，它覆蓋了由細胞屑形成的更深的沉積層與處于更外部的細胞外類脂物。類脂物主要是游離的并且被酯化的膽固醇。纖維斑緩慢地形成并且很可能及時被鈣化和壞死，進而發(fā)現(xiàn)“并發(fā)性損害”，這種損害是其特征在于晚期粥樣硬化的心肌梗死、在管壁上形成血栓的傾向與動脈肌痙攣的原因。
流行病學研究結果明確指出高脂血是通過粥樣硬化導致心血管疾病(CVD)的主要危險因素。近年來，醫(yī)學界的泰斗們重新強調(diào)應該降低血漿膽固醇水平，尤其是低密度脂蛋白膽固醇，以此作為防治CVD的基本步驟。“正?！钡纳舷蕃F(xiàn)在被認為明顯地低于到目前為止所理解的水準。因此，現(xiàn)在很大一部分西方人被認為處于高度危險之中。這類獨立的危險因素包括葡萄糖不耐性、左心室肥大、高血壓以及雄性性別。心血管疾病尤其常見于糖尿病患者之中，這至少部分地由于這類群體中存在的多重獨立的危險因素。因此，成功地治療一般群體尤其是糖尿病患者的高脂血癥在醫(yī)學上極為重要。
高血壓是一種作為許多其它疾病如腎動脈狹窄、心內(nèi)分泌失調(diào)或嗜鉻細胞瘤的副癥狀產(chǎn)生于人體的病癥。然而，高血壓同樣出現(xiàn)在許多致病原因或失調(diào)未知的患者體內(nèi)。這類“原發(fā)性”高血壓常常與諸如肥胖癥、糖尿病與高甘油三酯血癥之類疾病有關，這些疾病之間的關系尚未闡明。此外，許多患者在完全不存在其它病癥或失調(diào)跡象的情況下表現(xiàn)出高血壓癥狀。
業(yè)已發(fā)現(xiàn)，高血壓可以直接導致心力衰竭、腎衰竭與中風(腦出血)。這些病癥能夠?qū)е禄颊叨虝r間死亡。高血壓還會使動脈粥樣硬化與冠心病加重。這些病癥逐漸使患者身體變?nèi)醪⑶覍е麻L期死亡。
盡管原發(fā)性高血壓的確切病因尚不知曉，不過有多種因素被認為對該病的發(fā)作有影響。其中有緊張、感情失控、無規(guī)律的激素釋放(血管緊張肽原酶、血管緊張肽、醛甾酮系統(tǒng))、由于腎功能失調(diào)造成的過量鹽與水、血管壁增厚與脈管系統(tǒng)肥大導致血管收縮以及遺傳因素。
對原發(fā)性高血壓的治療考慮了上述因素，因此，已經(jīng)開發(fā)出品種多樣的β-阻斷劑、血管收縮藥、血管緊張肽轉化酶抑制劑等并且將其作為抗高血壓藥在市場上出售。采用這些化合物進行的高血壓治療過程被證明在防止短時間死亡如心力衰竭、腎衰竭與腦出血方面是有利的。然而，由于長時間患高血壓導致的粥樣硬化或心臟病的加重仍然是懸而未決。這意味著盡管高血壓正在被緩解，但是治療方法尚未針對原發(fā)性高血壓的根本原因。
高血壓與血液中胰島素含量較高(一種被稱為高胰島素血癥的癥狀)相聯(lián)系。胰島素是一種肽激素，其主要作用是促進葡萄糖的利用、蛋白質(zhì)合成與中性脂的形成與貯存，同時還會促進脈管細胞生長并增加腎的鈉保留。這些后面的功能在不影響葡萄糖含量的條件下實現(xiàn)并且被認為是高血壓的原因。舉例來說，末梢血管的生長會導致末梢毛細血管狹窄；而鈉保留會增加血液體積。因此，降低高胰島素血患者體內(nèi)的胰島素含量可以防止由于高胰島素含量導致的不正常的脈管生長與腎鈉保留從而緩解高血壓。
心臟肥大是造成突然死亡、心肌梗死與充血性心力衰竭的非常危險的因素。這些心臟突發(fā)性病癥是至少部分地由于局部缺血與可能發(fā)生在門診病人體內(nèi)的再灌注以及周圍手術沉積后對心肌損傷的敏感性增大而造成的。防止或最大限度地減小不利的心肌周圍手術結果、尤其是周圍手術心肌梗死是不適宜的醫(yī)學需要。心臟與非心臟外科手術在很大程度上都會帶有心肌梗死或死亡的危險性。大約7百萬經(jīng)歷非心臟外科手術的患者被視為具有危險，周圍手術性(perioperative)死亡與嚴重心臟并發(fā)癥的發(fā)生率高達20～25％。此外，在每年經(jīng)歷冠狀動脈分流外科手術的400,000患者中，周圍手術心肌梗死估計發(fā)病率為5％，死亡率為1～2％。在這一領域尚無藥物療法，用以減少心臟組織受到周圍手術性心肌缺血而造成的損害或增強心臟對局部缺血發(fā)作的抵抗力。這樣一種療法預期用于急救與減少住院治療、提高生活質(zhì)量和降低高?；颊叩目傮w保健支出。
肝臟葡萄糖生產(chǎn)是NIDDM療法的重要目標。肝是吸收后(禁食)狀態(tài)血漿中葡萄糖水平的主要調(diào)節(jié)者。NIDDM患者體內(nèi)肝的葡萄糖生產(chǎn)速度明顯地高于正常人。同樣，在飯后(吃飽)狀態(tài)，肝在血漿葡萄糖供給總量中起著較小的作用，此時NIDDM患者體內(nèi)肝葡萄糖生產(chǎn)處于不正常的高水平。
糖原分解對于肝葡萄糖生產(chǎn)的中止來說是一個重要目標。肝臟通過糖原分解(葡萄糖聚合物糖原的分解)與葡糖異生(由2-和3-碳前體合成葡萄糖)生產(chǎn)葡萄糖。許多事實證明糖原分解對INDDM中肝葡萄糖生產(chǎn)起著重要作用。首先，在正常的吸收后人體內(nèi)，多達75％肝葡萄糖產(chǎn)出被估計源于糖原分解。其次，患有包括Hers病(糖原磷酸化酶缺乏癥)在內(nèi)的肝糖原貯存疾病的病人表現(xiàn)出陣發(fā)性低血糖。這些觀察結果表明糖原分解可以是肝葡萄糖生產(chǎn)的重要過程。
糖原分解通過糖原磷酸化酶的組織一特定異構重整在肝、肌肉與腦中被催化。這種酶斷裂糖原大分子以便釋放出葡糖-1-磷酸和新的短糖原大分子。目前發(fā)現(xiàn)有兩類糖原磷酸化酶抑制劑葡萄糖與葡萄糖類似物〔Martin，I.L.等人，生物化學，1991，30，10101〕與咖啡堿和其它嘌呤類似物〔Kas vinsky，P.J.等人.J.生物化學，1978，253，3343-3351和9102-9106〕。這些化合物與通常意義上的糖原磷酸化酶抑制劑被假設具備潛在的通過減少肝葡糖生成量與降低糖血治療NIDDM的用途?！睟lundell，T.B.等人，Diabetologia 1992，35，Suppl.2,569～579與Martin等人生物化學1991，30，10101〕。
局部缺血與倒灌注后觀察到的心肌損傷機理作尚未被充分了解。M.F.Allard等人(Am.J.Physiol.267.H66-H74，1994)指出局部缺血前糖原的減少與大鼠肥大心臟內(nèi)局部缺血后左心室功能恢復得到改進相聯(lián)系。
因此，盡管有許多種高脂血、高血糖、高膽甾醇血、高血壓、粥樣硬化與心肌局部缺血治療方法，但是仍然需要持續(xù)地在該領域?qū)ふ铱晒┻x擇的替代方法。
本發(fā)明涉及適用于治療糖尿病、高血糖、高膽甾醇血、高血壓、高胰島素血癥、高脂血癥、粥樣硬化與心肌局部缺血的式I所示糖原磷酸化酶抑制劑化合物，其藥物可接受的鹽及其前藥。 式中虛線為視需要存在的鍵；當虛線代表鍵存在時A為-CH＝、-C(C1-4烷基)＝或-C(鹵素)＝，或當虛線不代表鍵時A為亞甲基或-CH(C1 -4烷基)-；R1、R10或R11各自獨立地代表H，鹵素，4-、6-、或7-硝基，氰基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氟甲基，二氟甲基或三氟甲基；R2為H；R3為H或C1-5烷基；R4為H，甲基、乙基、正丙基，羥基C1-3烷基，C1-3烷氧基 C1-3烷基，苯基C1-4烷基，苯基羥基C1-4烷基，苯基C1 -4烷氧基C1-4烷基，噻吩-2-或-3-基C1-4烷基或呋喃-2-或-3-基C1-4烷基，其中所述R4環(huán)上的碳被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基獨立地單取代、二取代或三取代；或者R4為吡啶-2、-3-或-4-基C1-4烷基，噻唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，咪唑-1-、-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡咯-2-或-3-基C1-4烷基，惡唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，異惡唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，異噻唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，噠嗪-3-或-4-基C1-4烷基、嘧啶-2-、-4-、-5-或-6-基C1-4烷基，吡嗪-2-或-3-基C1-4烷基或1，3，5-三嗪-2-基C1-4烷基，其中上述R4雜環(huán)可視需要被鹵素、三氟甲基、C1 -4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基獨立地單取代或雙取代，所述的單取代基或雙取代基與碳連接；R5為H、羥基、氟、C1-5烷基、C1-5烷氧基、C1-6鏈烷?；被鵆1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基或羧基，其中所述的羧基與苯基、噻唑基、咪唑基、1H-吲哚基、呋喃基、吡咯基、惡唑基、吡唑基、異惡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或1，3，5-三嗪基形成碳-碳鍵，其中所述R5環(huán)可視需要被鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、氨基或三氟甲基單取代，所述單取代基被連接在碳上；R7為H、氟或C1-5烷基；或R5與R7可以結合在一起形成氧基，
R6為羧基、C1-8烷氧羰基、C(O)NR8R9或C(O)R12，其中R8為H，C1-3烷基，羥基或C1-3烷氧基；R9為H，C1-8烷基，羥基，C1-8烷氧基，亞甲基-全氟代C1-8烷基，苯基，吡啶基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡咯烷基，惡唑基，噻唑基，咪唑基，吡唑基，吡唑啉基，吡唑烷基，異惡唑基，異噻唑基，吡喃基，哌啶基，嗎啉基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，哌嗪基或1，3，5-三嗪基，其中上述R9環(huán)為碳-氮鍵合環(huán)；或者R9為單-、雙-或三-取代C1-5烷基，其中所述取代基獨立地為H、羥基、氨基、單-N-或二-N，N-C1-5烷基胺基，或者R9為單-或雙-取代C1-5烷基，其中所述取代基獨立地為苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯基、吡咯烷基、惡唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、異惡唑基、異噻唑基、吡喃基、吡啶基、哌啶基、嗎啉基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基或1，3，5-三嗪基，其中非芳族含氮R9環(huán)上的氮可視需要被C1-6烷基、芐基、苯甲酰基或C1-6烷氧羰基單取代，并且其中R9環(huán)上的碳可視需要被鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、氨基或單-N-與雙-N，N-C1-5烷基胺基單取代，條件是不包括季氮并且不存在氮-氧、氮-氮或氮-鹵鍵；R12為哌嗪-1-基、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、4-甲酰哌嗪-1-基、嗎啉代、硫代嗎啉代、1-氧代硫代嗎啉代、1，1-二氧代硫代嗎啉代、噻唑烷-3-基、1-氧代-噻唑烷-3-基、1，1-二氧代-噻唑烷-3-基，2-C1-6烷氧羰基吡咯烷-1-基、惡唑烷-3-基或2(R)-羥甲基吡咯烷-1-基；或R12為3-和/或4-單-或雙-取代氧氮雜環(huán)丁烷-2-基，2-4-和/或5-單-或雙-取代惡唑烷-3-基，2-，4-，和/或5-單-或雙-取代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-單-或雙-取代1-氧代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-單-或雙-取代1，1-二氧代噻唑烷-3-基，3-和/或4-單-或雙-取代吡咯烷-1-基，3-，4-和/或5-單-，雙-或三-取代哌啶-1-基，3-，4-和/或5-單-、雙-或三-取代哌嗪-1-基，3-取代氮雜環(huán)丁烷-1-基，4-和/或5-單-或雙-取代1，2-惡嗪烷(Oxazinan)-2-基，3-和/或4-單-或雙-取代吡唑烷-1-基，4-和/或5-單-或雙-取代異惡唑烷-2-基，4-和/或5-單-和/或雙-取代異噻唑烷-2-基，其中R12取代基獨立地為H、鹵素、C1-5烷基、羥基、氨基、單-N-或雙-N，N-C1-5烷基胺基、甲?；?、氧代、肟基、C1-5烷氧基、羧基、氨基甲?；?、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基甲?；?、C1-4烷氧基亞胺基、C1-4烷氧甲氧基、C1-6烷氧羰基、羧基C1-5烷基或羥基C1-5烷基；條件是若R4為H、甲基、乙基或正丙基，R5為OH；條件是若R5與R7為H，則R4不得為H、甲基、乙基、正丙基、羥基C1-3烷基或C1-3烷氧基C1-3烷基，R6為C(O)NR8R9、C(O)R12或C1-4烷氧羰基。
作為第一組優(yōu)選的式I所示化合物，其中R1為5-H、5-鹵素、5-甲基或5-氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單-、雙-或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單-或雙-取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單-或雙取代，所述單-或雙-取代基被連接在碳上；R5為羥基；R6為C(O)NR8R9或C(O)R12；以及R7為H。
在上述第一組優(yōu)選的式I化合物中的尤為優(yōu)選的化合物中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R6為C(O)NR8R9；R8為C1-3烷基、羥基或C1-3烷氧基；以及R9為H、C1-8烷基、羥基、羥基C1-6烷基、C1-8烷氧基、吡啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基或被吡啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基單取代的C1-4烷基。
在上述第一組尤為優(yōu)選的化合物中，特別優(yōu)選的化合物為5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羥基-二甲胺基甲?；谆?-2-苯乙基〕酰胺，5，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羥基-〔(2-羥乙基)甲胺基甲酰甲基}-2-苯乙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲基吡啶-2-基胺基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}-酰胺或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羥基-〔甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺基甲?！臣谆鶀-2-苯乙基)酰胺。
在上述第一組尤其優(yōu)選的化合物中，a.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；
R9為甲基；b.R1為5-氯；R11為H；R10為6-氯，R4為芐基；R8為甲基，R9為甲氧基；c.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為甲氧基；d.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為2-羥基乙基；e.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為吡啶-2-基；f.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為2-(吡啶-2-基)乙基。
在上述第一組優(yōu)選化合物I中的尤為優(yōu)選的化合物的第二組中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基，噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R6為C(O)R12；以及R12為嗎啉代、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、3-取代氮雜環(huán)丁烷-1-基、3-和/或4-單-或雙-取代吡咯烷-1-基、4-和/或5-單取代或雙取代異惡唑烷-2-基、4-和/或5-單或雙-取代1，2-惡嗪烷-2-基，其中所述取代基分別獨立地為H、鹵素、羥基、氨基、單-N-或雙-N，N-C1-6烷基胺基、氧代、肟基或烷氧基。
在上述第二組尤其優(yōu)選的化合物中，特別優(yōu)選的化合物為5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧丙基〕酰胺鹽酸鹽5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-異惡唑烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-〔1，2〕惡嗪烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-((3S)-羥基吡咯烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3S，4S)-二羥基吡咯烷-1-基)-(2R)-羥基-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3R，4S)-二羥基吡咯烷-1-基)-(2R)-羥基-3-氧丙基〕酰胺，或5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-嗎啉-4-基-3-氧丙基)酰胺。
在上述第二組尤其優(yōu)選的化合物中a.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為4-甲基哌嗪-1-基；
b.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基；c.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為異惡唑烷-2-基；d.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(1，2)-惡嗪烷-2-基；e.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為3(S)-羥基吡咯烷-1-基；f.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(3S，4S)-二羥基吡咯烷-1-基；g.R1為5-氟；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(3R，4S)-二羥基吡咯烷-1-基；h.R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為嗎啉代。
作為第二組優(yōu)選的式I所示化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單-、雙-或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單-或雙-取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單-或雙取代，所述單-或雙-取代基被連接在碳上；R5為羥基；R6為羧基或C1-8烷氧羰基；以及R7為H、氟或C1-6烷基。
在上述第二組優(yōu)選的式I化合物中的尤為優(yōu)選的化合物中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1-2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R10與R11為H；R6為羧基；以及R7為H。
該化合物的優(yōu)選種類中，R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基。
作為第三組優(yōu)選的式I所示化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；
R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單-、雙-或三-取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單-或雙-取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單-或雙取代，所述單-或雙-取代基被連接在碳上；R5為氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基；R6為羧基或C1-8烷氧羰基；和R7為H、氟或C1-6烷基。
作為第四組優(yōu)選的式I所示化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單-、雙-或三-取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單-或雙-取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-、-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單-或雙取代，所述單-或雙-取代基被連接在碳上；R5為氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基；R6為C(O)NR8R9或C(O)R12；和R7為H、氟或C1-6烷基。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有依賴糖原磷酸化酶疾病的哺乳動物施用治療量化合物I來治療這一病癥的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有高血糖的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療高血糖的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有高膽甾醇血的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療高膽甾醇血的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有糖尿病的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療糖尿病的方法。
該糖尿病治療方法包括防止或緩解長期并發(fā)癥如神經(jīng)病、腎病、視網(wǎng)膜病或白內(nèi)障。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有粥樣硬化的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療粥樣硬化的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有高胰島素血的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療高胰島素血的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有高血壓的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療高血壓的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向患有高血脂的哺乳動物施用該病治療量化合物I治療高血脂的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及向處于周圍手術性心肌局部缺血損傷危險狀態(tài)的哺乳動物施用防治數(shù)量的化合物I防止哺乳動物心肌局部缺血損傷的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及通過向處于周圍手術性心肌局部缺血損傷危險狀態(tài)的哺乳動物施用防治數(shù)量的糖原磷酸化酶抑制劑防止哺乳動物心肌局部缺血損傷的方法。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其中含有治療有效量化合物I與藥物可接受的載體。
優(yōu)選的組合物包括用于治療哺乳動物體內(nèi)的糖原磷酸化酶依賴性疾病或病癥的藥物組合物，其中包含糖原磷酸化酶依賴性疾病或癥狀治療量的化合物I與藥物可接受的載體。
本發(fā)明的另一方面涉及用于治療糖尿病的藥物組合物，其中含有治療有效量糖原磷酸化酶抑制劑；一種或多種抗糖尿病藥劑如胰島素與胰島素類似物(例如LysPro(胰島素)；GLP-1(7-37)(胰島素調(diào)理劑)與GLP-1(7-36)-NH2；磺酰脲類與類似物氯磺丙脲、優(yōu)降糖、甲苯磺丁脲、乙酰苯磺酰環(huán)己脲、吡磺環(huán)己脲、妥拉磺尿、格列美脲、repagl I n I de、氯茴苯酸，縮二胍類；甲福明，苯乙福明，丁福明，α乙拮拉藥與咪唑啉、咪格列唑、I sagl I dole、der I gl I dole。咪唑支生、efaroxan、flupa V oxan；其它胰島素促分泌素利諾格列、A-4166；格列酮環(huán)格列酮、kpIo格列酮、en格列酮、tro格列酮、dar格列酮、BRL49653；脂肪酸氧化抑制劑、氯克舍、乙募克舍；α-葡萄糖甙酶抑制劑阿卡波糖、米格列醇、乙格列酯、V ogl I bose、MDL-25637、MOL-73945、Cam I gl I bose；β-刺激劑BRL5135，BRL37344，R016-8714，IC I D7114，CL316243；磷酸二酯酶抑制劑；L-386398；降脂劑苯氟雷司；抗肥胖癥藥芬氟拉明；鋇酸鹽與鋇配合物(例如nagl I V dnR)與過氧化鋇配合物；淀粉不溶素拮抗物；高血素拮抗物；葡糖異生抑制劑；生長激素釋放抑制因子類似物；抗脂解劑煙酸、阿西糖司、WAG994；和視需要存在的藥物可接受的載體。
上一組中優(yōu)選的藥物組合物中，糖原磷酸化酶抑制劑為化合物I。
本發(fā)明的另一方面是用上述結合組合物治療哺乳動物體內(nèi)的糖尿病。
糖原磷酸化酶依賴性疾病或病癥是指通過借助糖原磷酸化酶斷裂糖原大分子從而釋放出葡糖-1-磷酸與新的短糖原分子全部或部分地調(diào)節(jié)、引發(fā)或保持的失調(diào)。這些疾病通過降低糖原磷酸化酶的活性而得到好轉，或者說該病的特征在于糖原磷酸化酶活性上升。實例包括糖尿病、高血糖、高膽甾醇血、高血壓、高胰島素血、高脂血、粥樣硬化與心肌局部缺血。
糖原磷酸化酶抑制劑一詞是指任何能夠降低、阻抑或消除糖原磷酸化酶的酶催化作用的物質(zhì)或試劑或這類物質(zhì)和/或試劑的組合。目前已知的糖原磷酸化酶的酶催化作用是通過對糖原大分子與無機磷酸鹽的可逆反應的催化作用使糖原降解為葡糖-1-磷酸酯與糖原大分子(一種比原來的糖原大分子短的葡糖殘基，趨向糖原分解)。
“治療”一詞包括防止(例如預防性的)與姑息療法。
鹵代表示氯代、溴代、碘代或氟代。
烷基是指直鏈或支鏈飽和烴。這類烷基(假設指定長度包括特定實例)有如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基和異己基。
烷氧基代表直鏈或支鏈通過氧橋鍵合的飽和烷基。這類烷氧基(假設指定長度包括特定實例)有如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、己氧基與異己氧基。
“藥物可接受的陰離子鹽”是指含有諸如，(但不局限于)下列陰離子的非毒性陰離子鹽氯化物，溴化物、碘化物、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽、甲磺酸鹽與4-甲苯磺酸鹽。
“藥物可接受的陰離子鹽”是指非毒性陽離子鹽如(但不限于)鈉、鉀、鈣、鎂、銨或質(zhì)子化芐星(N，N’-二芐基乙二胺)，膽堿、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)、苯乙芐胺(N-芐基苯乙胺)、哌嗪或氨基丁三醇(2-氨基-2-羥基甲基-1，3-丙二醇)。
“前藥”是指作為藥前體的化合物，它們在被施用后通過某種化學或生理方法在體內(nèi)釋放出藥物(例如，某種前藥一旦被置于一定的生理pH條件下就會轉化為所需的藥物形式)?？晒┝信e的前藥一旦斷裂便釋放出相應的游離酸，這種可水解的成脂的本發(fā)明化合物的殘基包括，但不限于羧酸取代基(例如，R6為羥基，或R8、R9或R12含有羧基)，其中游離氫被C1-4烷基、C2-12鏈烷酰氧甲基、含4～9個碳原子的1-(鏈烷酰氧)乙基、含有5-10個碳原子的1-甲基-(1-鏈烷酰氧)乙基、含有3-6個碳原子的烷氧羰基氧甲基、含有4-7個碳原子的1-(烷氧羰基氧)乙基、含5-8個碳原子的1-甲基-1-(烷氧羰基氧)乙基、含有3-9個碳原子的N-(烷氧羰基)氨基甲基、含有4-10個碳原子的1-(N-(烷氧羰基)胺基)乙基、3-苯并〔c〕呋喃酮基、4-丁烯基內(nèi)酯基、γ-丁內(nèi)酯-4-基、二-N，N-C1-2烷基胺基C2-3烷基(如β-二甲胺乙基)、氨基甲?；鵆1-2烷基、N，N-二C1-2烷基胺基甲?；?C1-2烷基與哌啶子基、吡咯烷基或嗎啉代C2-3烷基。
其它示例性前藥釋放出式I所示醇，其中羥基取代基(例如R5為羥基)的游離氫被C1-6鏈烷酰氧甲基、1-(C1-6鏈烷酰氧基)乙基、1-甲基-1-(C1-6鏈烷酰氧基)乙基、C1-6烷氧羰基氧甲基、N-(C1-6烷氧羰基氨基甲基、琥珀?；?、C1-6鏈烷?；?、α-氨基C1-4鏈烷?；?、芳?；cα-氨基酰基或α-氨基?；?α-氨基酰基，其中所述α-氨基?；毩⒌貫槿魏伪话l(fā)現(xiàn)于蛋白質(zhì)中的天然存在的L-氨基酸P(O)(OH)2、-P(O)(OC1-6烷基)2或糖基(由碳水化合物的半縮醛的羥基拆解而成)。
其它示范性前藥包括，但不限于，式I所示衍生物，其中R2為被R-羰基、RO-羰基、NRR’-羰基取代的游離氫，其中R與R’各自獨立地為C1-10烷基、C3-7環(huán)烷基、芐基，或者R-羰基為天然的α-氨基?；蛱烊沪?氨基?；?天然α-氨基?；?，其中Y為H、C1-6烷基或芐基的-C(OH)C(O)OY，其中Y0為C1-4烷基而Y1為C1-6烷基、羧基C1-6烷基、氨基C1-4烷基或單-N-或二-N，N-C1-6烷基氨烷基的-C(OY0)Y1，其中Y2為H或甲基而Y3為單-N-或二-N，N-C1-6烷基氨基、嗎啉代、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基的-C(Y2)Y3。
其它示范性前藥包括、但不限于、在R3上帶有可水解部分的式I的衍生物，它釋放出其中R3為水解游離氫的式I所示化合物。這種R3上的可水解部分為/包括1-羥基C1-6烷基或1-羥基-1-苯甲基。
其它示例性前藥包括環(huán)狀結構如其中R2與R3為普通碳原子、進而形成5員環(huán)的式I化合物。成鍵碳可以獨立地被H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或苯基單或二取代。作為可供替代的選擇方式，R3與R5可以共同形成惡唑烷環(huán)并且惡唑烷環(huán)上的第二個碳可以獨立地被H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基或苯基單或雙取代。作為可供替代的選擇方式，式I化合物的前藥包括其中R5與R8或R9共同形成惡唑烷-4-酮環(huán)并且該環(huán)的第2個碳可以獨立地被H、C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、苯基或氧單-或雙-取代的化合物。
本文此處的“反應惰性溶劑”與“惰性溶劑”是指不與原料、試劑、中間體或產(chǎn)物以對目的產(chǎn)物產(chǎn)率產(chǎn)生不利影響的方式相互作用的溶劑。
普通化學家會認識到本發(fā)明的特定化合物會含有一個或多個呈特殊立體化學或幾何構型的原子，這導致立體異構件與構型異構體的存在。所有這些異構體及其混合物均屬于本發(fā)明范圍。本發(fā)明化合物的水合物同樣被包括在內(nèi)。
普通化學家會認識到本發(fā)明列舉的含雜原子取代基的特定組合局限于在生理條件下穩(wěn)定性較差的化合物(例如含有乙縮醛或氨鍵的化合物)。因此，這類化合物不甚優(yōu)選。
其中x為整數(shù)的“Rx”例如“R9環(huán)”、“R12環(huán)”或“R4環(huán)”在本文中被用于環(huán)上的取代，它是指其中環(huán)為Rx以及環(huán)被包含于Rx中的部分。
本文所用的術語單-N-或二-N，N-C1-x烷基…是指當它為二-N，N-C1-x烷基時…被獨立地視為C1-x烷基…，(x為整數(shù))。
其它特征與優(yōu)點在本發(fā)明說明書與權利要求書中清晰可見。
一般說來，式I化合物可以通過化學領域公知的方法制備，尤其是按照本說明書來制備。下面提出作為本發(fā)明其它特征的化合物I的制備方法，這些方法借助下列反應歷程描述。
反應歷程I
反應歷程II
反應歷程III
反應歷程IV
反應歷程V
反應歷程VI
反應歷程VII
反應歷程VIII
反應歷程IX
反應歷程X
按照反應歷程I，其中R1、R10、R11、R2、A、R3、R4、R5、R6與R7如上定義的化合物I可以通過二種通用方法中的任何一種制備。在第一種方法中，目的化合物I可以通過使適宜的式I吲哚-2-甲酸或二氫吲哚-2-甲酸與適宜的式III胺偶聯(lián)(即?；?被制成。在第二種方法中，目的化合物I可以通過適宜的化合IV(即其中R6為羧基的化合物I)與適宜的醇或式R8R9NH或R12H所示其中R8、R9與R12如上限定的胺或醇偶聯(lián)(即酰化胺或醇)而被制成。
典型地，式II化合物與式III化合物(或化合物IV與適宜的胺如R12H或R8R9NH)或醇在適宜的偶聯(lián)劑存在下結合。適宜的偶聯(lián)劑將羧酸轉化為在與氨或醇反應過程中分別形成酰胺或酯鍵的反應性物質(zhì)。
偶聯(lián)劑是一種在與羧酸和胺或醇混合時會對一鍋法縮合反應產(chǎn)生影響的試劑。若該酸有待與醇縮合，優(yōu)選采用明顯過量的醇作為反應溶劑，可以添加或不添加1.0～1.5當量二甲胺基吡啶。可供列舉的偶聯(lián)劑為1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽-羥基苯并三唑(DEC/HBT)、羰基二咪唑、二環(huán)己基碳化二亞胺/羥基苯并三唑(HBT)、2-乙氧基-1-乙氧羰基-1，2-二氫醌(EEDQ)、羰基二咪唑/HBT與二乙基膦?；?。偶聯(lián)反應在約-20～50℃在惰性溶劑、優(yōu)選非質(zhì)子傳遞溶劑中進行約1～48小時，示范性溶劑包括乙腈、CH2Cl2、二甲基甲酰胺與氯仿。適宜的偶聯(lián)步驟的實例為步驟A(位于實施例之前)。
偶聯(lián)劑還可以是能夠?qū)Ⅳ人徂D化為在第一步被分離和/或形成并且在第二步與胺或醇反應的活化中間體。這類偶聯(lián)劑和活化中間體的實例為用于形成酰氯的亞硫酰氯或草酰氯、用于(與叔胺堿)形成酰氟的氰尿酰氯或用于形成羧酸的混合酐的烷基氯甲酸酯如異丁基或異丙烯基氯甲酸酯。若偶聯(lián)劑為草酰氯，有利的是采用少量作為共溶劑的二甲基甲酰胺與其它溶劑(如CH2Cl2)催化酰氯的生成，這些偶聯(lián)劑的使用與適宜地選用溶劑和溫度對本領域?qū)I(yè)人員是公知內(nèi)容或者可以容易地由文獻中確定。適用于偶聯(lián)羧酸的這些或其它示范性條件被描述于Houben-Weyl，XV卷，II部分，E.Wunsch，εd.，G.Theime Verlag，1974，Stuttqart，與M.bodansky，肽合成原理，Springer-Verlag Barlin 1984以及肽·分析，合成與生物學(ed.E.Gross與J.Meienhofer)，卷1～5(Academic Press NY 1979-1983)。
其中R1、R10、R11、R2、A、R3、R4、R5與R7如上定義的化合物IV可以由相應的酯V(即其中R6為C1-5烷氧羰基或芐氧羰基的化合物I)通過借助含水堿在約-20～100℃、典型地約20℃水解約30分鐘至約24小時來制得。
作為可供選擇的替代方式，通過用偶聯(lián)劑(如上所述)在適宜的溶劑中在堿存在下活化式II吲哚羧酸來制備化合物IV，這些偶聯(lián)劑給出活化中間體(如酰氯、酰氟或混合酐)，該中間體隨后與其中R3、R4、R5和R7如上所述、R6為羧基的化合物III反應。適宜的溶劑包括水或甲醇或其混合物，同時存在有共溶劑如CH2Cl2、四氫呋喃或二惡烷。適宜的堿包括氫氧化鈉、鉀或鋰，碳酸氫鈉或鉀、碳酸鈉或鉀或者與其數(shù)量足以消耗反應中被釋放的酸的溴化四丁銨(1當量)共同存在的碳酸鉀，該數(shù)量一般情況下足以將反應的pH保持在大于8。堿可以遞增量與活化中間體一起加入以便適當?shù)乜刂品磻膒H值。該反應通常在-20～50℃下進行。本領域?qū)I(yè)人員可以設計分離步驟以便脫除雜質(zhì)，但是典型地，分離步驟由通過蒸發(fā)脫除水混溶性共溶劑、用有機溶劑在高pH值下萃取雜質(zhì)、經(jīng)過酸化降低pH(至1～2)以及過濾或用適宜溶劑如乙酸乙酯或CH2Cl2萃取所需產(chǎn)物組成。
可以通過按照與上述(例如步驟A)相似的步驟偶聯(lián)其中R6為烷氧羰基的適宜的化合物III與適宜的化合物II制備化合物V。
作為可供選擇的替代方式，含有呈亞砜或砜氧化態(tài)的硫原子的化合物I可以由具有呈非氧化態(tài)的硫原子的相應的化合物I通過用適宜的氧化劑如處于CH2Cl2中的間氯過苯甲酸于約0～25℃處理約1～48小時來制備，為了轉化成亞砜氧化態(tài)需采用約1～1.3當量，為了轉化成砜氧化態(tài)需采用約2當量以上氧化劑。
作為可供選擇的替代方式，其中R5氨基烷氧基被單或雙烷基化的化合物I可以由其中R5為氨基烷氧基的相應的化合物I通過在R5胺上進行單烷基化或雙烷基化而制成。這種單或雙烷基化反應可以通過用1當量適宜的羰基化合物(用于單烷基化反應)或大于2當量的適宜的羰基化合物(用于雙烷基化反應)與適宜的還原劑在適宜溶劑中處理R5氨基烷氧基化合物來進行。適宜的還原條件包括處于甲醇或乙醇中的氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉，或者處于極性溶劑如水、甲醇或乙醇中的氫/加氫催化劑(如鉑/碳)，還原在0～60℃進行1～48小時。
作為可供選擇的替代方式，其中R5為鏈烷酰氧基(RCOO-)的化合物I通過用適宜的酰氯或其它活化酸衍生物在，必要時，適宜的堿(例如叔胺堿如三烷基胺或吡啶)存在下、優(yōu)選地在非質(zhì)子傳遞溶劑如四氫呋喃或CH2Cl2中于約0～50℃下對適宜的化合物I進行鄰位?；幚砑s0.5～48小時來制備。
作為可供選擇的替代方式，其中R5與R7共同形成氧橋的化合物I可以通過用適宜的氧化劑氧化例如其中R5為羥基而R7為H的相應的化合物I而制成。示例性氧化劑包括處于CH2Cl2中的Dess-Martin試劑、碳化二亞胺和二甲亞砜以及酸催化劑(Pfitzner-Moffatt條件或其改進形式，如使用水溶性碳化二亞胺)或Swern型反應(例如，草酰氯/DMSO/三乙胺)。具有其它對氧化敏感性官能度的化合物I可以將這種官能團保護起來隨后去除保護。
本文所述的某些制備方法可以包括保護遠端官能團(即式I前體中的伯胺、仲胺、羧基)的步驟。對這種保護的需要可以依據(jù)遠端官能團的性質(zhì)和制備方法的條件而變化，對這些保護步驟的需要容易由本領域?qū)I(yè)人員確定。這類保護/去保護方法的使用同樣屬于本領域?qū)I(yè)人員公知的內(nèi)容。關于保護基及其用途的一般描述，參見T.W.Greene，《有機合成中的保護基》，John Wiley & Sons，New York，1991。
例如，在反應歷程1中，特定的化合物I在由R5或R6限定的分子部分含有伯胺、仲胺、羧酸官能團，它們在式III中間體，或R12H或R8R9NH胺未被保護的條件下會干擾反應歷程1中預期的偶聯(lián)反應。因此，伯胺或仲胺官能團可以被保護起來，此時它借助于適宜的保護基在反應歷程I的偶聯(lián)反應期間存在于式III中間體的R5或R6部分或胺(R8R9NH或R12H)中。這種偶聯(lián)反應的產(chǎn)物為含有保護基的化合物I。該保護基在后續(xù)步驟中被除去。胺與羧酸的適宜保護基包括常用于肽合成的保護基如適用于胺的N-叔丁氧羰基、N-芐氧羰和9-芴基亞甲基氧羰基以及適用于羧酸的低級烷基或芐基酯，它們在上述偶聯(lián)條件(以及實施例前面的、步驟A)不具備化學反應性并且可以在不改變化合物I中其它官能團化學性質(zhì)的條件下被除去。
在無法由商業(yè)途徑得到或者可以在先有技術中屬公知內(nèi)容(該技術已被廣泛公開)的被用于反應歷程1的原料吲哚-2-羧酸與二氫吲哚-2-羧酸可以通過傳統(tǒng)合成法制得。舉例來說，按照反應歷程II，式VII吲哚酯可以由化合物VI(其中Q被選用來實現(xiàn)上述所需的A)通過Fischer吲哚合成(見Fisther Indole systhesis，Robinson，B.(Wiley，New York，1982)來制備。隨后通過皂化所得到的式VII吲哚酯產(chǎn)生相應的酸VIII。原料芳基腙可以通過用適宜的羰基衍生物縮合易得的肼或者通過Japp-Klingeman反應來制備(有機反應，phillips，R.R.1959，10，143)。
作為可供選擇的替代方式，式VIII A所示吲哚2-甲酸可以通過式IX所示鄰甲基硝基化合物與草酸酯縮合成吲哚酯(x)、隨后通過還原硝基與水解來制成。
該三步法被稱作Reissent吲哚合成法(Reissert，chemischeBerichte 1897，30，1030)，其操作條件與參考資料在文獻中有所描述(Kermack，等人，J.Chem.Soc.1921，119，1602；Cannon等人，J.Med.Chem.1981，24，238；Julian等人《雜環(huán)化合物》第3卷，Wiley，New York，NY，1962，R.C.Elderfield.ed.)p18)。其具體實施方案見本文實施例10A-10C。
通過5-氯-1H-吲哚-2-羧酸的鹵化反應同樣可以制備3-鹵代-5-氯-1H-吲哚-2-甲酸。
作為(反應歷程II的)可供選擇的替代方式，式XIV所示被取代的二氫吲哚可以通過用還原劑如甲醇中的鎂在約25℃～65℃還原相應的吲哚(XV)來制備，歷時約1～48小時(反應歷程III)。
通過皂化式XVII所示的酯制備相應的二氫吲哚甲酸XVI(反應歷程III)。通過用還原劑如甲醇中的鎂按照上述將化合物XV轉化為化合物XIV的方式還原相應的吲哚酯VII來制備化合物XVII。
下面描述如何制備用于上述反應歷程的各種胺。
按照反應歷程IV，以N-保護(用PT表示)醛XX為原料制備化合物XXVI(R6為C(O)NR8R9或C(O)R12)或化合物XX II(反應歷程I中的胺III，其中R5為OH、R7為H、R6為酯)。醛XX或其硫亞酸氫鈉加合物在約0～50℃經(jīng)過處在含有諸如二惡烷或乙酸乙酯之類共溶劑的水溶液中的氰化鉀或鈉處理形成氰醇XXI。必要時，氰醇XXI在約0～50℃經(jīng)過醇(例如C1-6鏈烷醇如甲醇)與強酸催化劑如HCl的處理，隨后加入水。如果保護基仍然存在的話，通過適宜的去除保護的方法脫除保護基(PT)，得到化合物XX II。舉例來說，若式XX中的N-保護基PT為叔丁氧羰基(t-Boc)，則化合物XX III直接形成于化合物XX I，不必添加水?？梢杂眠m宜的保護基在氮上保護化合物XX II從而形成化合物XX III，繼而用含水堿在約0～50℃于反應惰性溶劑中水解該酯，形成相應的羥基酸XX IV。借助適宜的R8R9NH或HR12胺偶聯(lián)化合物XXIV(按照與反應歷程I所述偶聯(lián)法類似的步驟)得到化合物XX V，去除保護后得到化合物XXVI(即化合物III，其中R5為OH，R7為H，R6為C(O)R12或C(O)NR8R9)。PCT公開WO/9325574中的實施例1a中提供了氰醇XXI轉化為相應的其中t-Boc保護基已被脫除的甲酯XX II的實例。其它有關氰醇被轉化為低級烷基酯XX III的實例參見US4814342與EPO公開0438233。
特定的化合物I通過在標記為a和b的碳原子上的立體化學構型而呈現(xiàn)立體異構。本領域?qū)I(yè)人員可以借助反應歷程IV制備具備所需立體化學特性的中間體XX II與XXVI。舉例來說，醛XX可以通過下面提到的步驟(見反應歷程V)以對映體(在a上呈現(xiàn)立體化學性質(zhì))形式存在。氰醇XX I可以由化合物XX通過用上述氰化鈉或鉀在碳a上保持立體化學構型的同時進行處理來制備，導致碳b立體異構體混合物形成。
本領域?qū)I(yè)人員可以利用結晶方法在此階段分離異構體或提純某一種異構體。
舉例來說，《生物化學》1992，31，8125～8141描述了化合物XX I的制備方法，其中PT為Boc，R3為H，R4為芐基而碳a與b的立體化學分別為(S)與(R)，隨后進行重結晶提純。
作為可供選擇的替代方式，可以在按照本文所述的步驟和/式程序?qū)⒒衔颴X I(異構體混合物)轉化為化合物XX II、XXIII、XX IV、XX V、XX VI、V、IV或I后通過色譜或重結晶技術進行異構體分離。在碳a和b具有特定立體化學構型的中間體XX I通過用醇與強酸催化劑，必要時隨后添加水如上所述在保留其立體化學特性的條件將其轉化為中間體XX II。
作為可供選擇的替代方式，化合物XX I的所需異構體同樣可以通過中間體XX I的衍生及其非對映體衍生物(例如借助三甲基硅烷基氯(TMS)或叔丁基二甲基硅烷基氯(TBDMS)得到O-TMS或O-TBDMS衍生物)的色譜分離得到。舉例來說，實施例24D描述了非對映體衍生物XX I的分離，在碳a和b上具備單一立體異構形式的中間體XX I的硅烷基衍生物借助上述將化合物XX I轉化為化合物XX II(見實施例24C，其中化合物XX I的甲硅烷基衍生物在喪失甲硅烷基后被轉化為式XX II的單一異構體)的方法在保留立體化學的條件下被轉化為中間體XX II(若在此步驟中未除去甲硅烷基，隨后通過適宜的方法如用處于四氫呋喃中的氟化四丁銨處理將其除去)。
按照反應歷程V，醛XX(反應歷程IV的起始材料)由相應的氨基酸XXX制備。借助保護基(PT)(如Boc)在氮上保護氮基酸XXX。被保護的化合物經(jīng)醇酯化并且被轉化為化合物XXXI的酯、優(yōu)選為其甲酯或乙酯。這可以通過用甲基碘或乙基碘在適宜的堿存在下(例如K2CO3)于極性溶劑如二甲基甲酰胺中處理化合物XXX來實現(xiàn)。舉例來說，用處在已烷或甲苯中的氫化二異丁基鋁或其混合物在約-78～-50℃還原化合物XXX I，隨后用-78℃甲醇將其急冷(J.Med.Chem.1985，28，1779-1790)以便形成醛XX?？晒┻x擇的替代方式(反應歷程V未加以描述)是由化合物XXX.N，O-二甲羥基胺與適宜的偶聯(lián)劑(例如1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(DEC)按照步驟A形成對應于化合物XXX I的類似N-甲氧基甲酰胺，其中該酯的醇取代基被NC(OMe)Me取代。舉例來說，用處于反應惰性溶劑如乙醚或四氫呋喃中的氫化鋁鋰在約0～25℃還原所形成的化合物，得到醛XX。該兩步法是將N-保護α-氨基酸轉化為醛XX的通用方法(Fehrentz與Castro，合成1983，676～678)。
作為可供選擇的替代方式，可以通過例如用吡啶-SO3在約-10～40℃于反應惰性溶劑以二甲基亞砜為佳之中氧化保護氨基醇XX III來制備醛XX。若無法從市場上買到，可以通過保護氨基醇XXX II來制備被保護氨基醇XX III。氨基醇XXX II通過氨基酸XXX還原而成。該還原反應通過用氫化鋁鋰按照Dickman等人在“有機合成”，Wiley；New York，1990；Collect.Vol.VII，p530所述步驟或用硫酸/硼氫化鈉通過Abiko與Masamune，Tetrahedron Lett.1992 333，5517-5518或者用硼氫化鈉/碘按照Mukennon和Meyers在J.Org.Chem.1993，58，3568-3571中所述步驟以及其它適用于將氨基酸XXX轉化為氨基醇XXX II的步驟處理化合物XXX來實現(xiàn)。
按照反應歷程VI，用于反應歷程V的化合物XXX的制備過程如下所示。氨基酸XL1通過用適用的堿與烷基化劑處理使保護(PT)氨基酸XL發(fā)生N-烷基化反應來制備。該烷基化步驟被具體地描述于Benoiton，Can.J.Chem.1977，55，906-910，與Hansen，J.Org Chen.1985，50 945-950。舉例來說，當R3為甲基時，采用處于四氫呋喃中的NaH與Mei。去除化合物XL1的保護形成預期化合物XXX。
作為可供選擇的替代方式，氨基酸XL II可以通過包括還原性芐化(如采用苯甲醛、Pd/C催化加氫)以便得到單-N-芐基衍生物與借助適宜的?；衔?例如甲醛與氰基硼氫化鈉以便引入作為甲基的R3)進行以便得到N-芐基、N-R3-取代的氨基酸在內(nèi)的三步程序而被N-烷基化。該N-芐基保護基適宜被除去(例如通過用適宜的催化劑氫化)以便得到化合物XXX。這一三步烷基化步驟的具體條件被描述于Reinhold等人，J.Med.Chem.1968，11，258-260。
上述制備方法還可以被用來將R3部分導入中間體XL IV以便形成中間體XL V(其中R7為OH的中間體III)。該法還可以用于將R3部分導入中間體IIIa(其中R3為H的中間體III)。
如果被用于反應歷程中的氨基酸(例如XL、XL II)無法購得或未在文獻中被報道過，可以借助許多本領域?qū)I(yè)人員公知的方法制備。舉例來說，可以使用strecker合成法或其變通方式。因此，醛(R4CHO)、氰化鈉或鉀與氯化銨反應形成相應的氨基腈。該氨基腈借助無機酸被水解成所需的氨基酸R4C(NH2)COOH(XL II)。作為可供選擇的替代方式，可以采用Bucherer-Berg法，其中通過加熱醛(R4CHO)、碳酸銨與氰化鉀形成乙內(nèi)酰脲，隨后用酸或堿水解(例如用氫氧化鋇，于回流二惡烷中)形成所需的氨基酸R4C(NH2)COOH(XL II)。
α-氨基酸的其它合成方法在文獻中同樣有所報道，這使得本領域?qū)I(yè)人員能夠制備合成化合物I所需的中間體R4C(NH2)COOHXL II。
適宜的合成化合物XL II的方法有如Duthaler(Tetrahedron1994，50，1539-1650)，或Williams(R.M.Williams，旋光氨基酸的合成法，PergamonOxford，U.K.，1989)。
由相應的R4X(X＝Cl、Br或I)中間體合成的以對映體形式存在的中間體XL II的具體方法有如Pinrung與Krishnamurthy(J.Org.Chem.1993，58，957-958)或O’Donnell等人的方法(J.Am.Chem.soc.1989，111，2353～2355)。所需要的R4X中間體易于通過許多本領域化學家們熟知的方法制備。舉例來說，當R4X為ArCH2X時，那些化合物可以通過化合物ArCH3的自由基鹵化或者通過芳烴酰化與醇被轉化為溴化物而被制得。
另一種合成以對映體形式存在的中間體XL II的具體方法是Corey與Link的方法(J.Am.Chem.Soc.1992，114，1906～1908)。因此，中間體R4COCCl3被對映定向地還原為中間體R4CH(OH)CCl3，它經(jīng)過疊氮化物和堿處理后被轉化為中間體R4CH(N3)COOH，后者經(jīng)催化加氫被轉化為所需的化合物XL II。所需的三氯甲基酮R4COCCl3通過醛R4CHO與三氯甲基化物陰離子反應隨后經(jīng)過氧化來獲得(Gallina與Giordano，合成1989，466-468)。
其中R5與R7為H的中間體胺III(被用于反應歷程I)可以按照反應歷程VII制備。氨基酸L(適宜地帶有保護基PT)通過被轉化為酰氯、酰氟或混合酐而被活化(例如借助處于惰性溶劑如四氫呋喃或二惡烷中的氯甲酸叔丁酯與三乙胺在約0～-40℃)，該活化中間體經(jīng)重氮甲烷處理形成重氮甲酮L1。該酮經(jīng)醇(ROH)(例如C1-6鏈烷醇如甲醇)以及適宜催化劑如熱量、氧化銀或苯甲酸銀處理，得到酯L II。該酯去保護形成化合物III A(經(jīng)過Wolff重排)。作為可供選擇的替代方式，如上所述用例如堿水解以及用適宜的R12H或HNR8R9胺偶聯(lián)形成化合物III B。
按照反應歷程VIII，其中R5為氧鍵合的取代基(例如烷氧基)(被用于反應歷程I)的中間體胺III按下述方法制備。通過用適宜的烷基化劑(例如烷基碘、烷基溴、烷基氯或烷基甲苯磺酸酯)和充足的堿處理以便在約0～150℃于適宜極性非質(zhì)子傳遞溶劑(例如二甲基甲酰胺或四氫呋喃)中形成醇鹽(氫化鈉或鉀)，于氧上將化合物LX I烷基化，形成化合物LX II，它經(jīng)過去除保護形成所需的胺中間體。
其中R5為C1-6烷氧羰基烷氧基的被用于反應歷程I的中間體胺III可以按照下述方法制備?；衔風X I被鹵代鏈烷酸酯烷基化成為化合物LX III，該化合物被去保護成為所需胺。通過使用處于適宜溶劑中的含水堿水解該酯得到相應的酸。其中R6含有酯和R5含有羧基的胺III可以由胺LX III制得，其中R5含有通過用無水酸處理而作為叔丁酯被保護的羧酸官能團，從而無須水解R6位上的酯便可以在R5上得到相應的酸。
化合物LX VI(其中R5為被保護氨基烷氧基的中間體胺III)可以由化合物LX I制備。用鹵代-烷-腈烷基化處理化合物LXI以便形成化合物LX IV。通過用氫與適宜催化劑(例如銠/碳)在處于優(yōu)選地極性、質(zhì)子傳遞溶劑如水、甲醇或乙醇中的氨存在下處理將化合物LX IV還原為伯胺LX V。化合物LXV在氮上被處于其它保護基(PT)鄰位上的保護基(PT1)保護起來，隨后經(jīng)過去除PT保護基得到化合物III。被保護的化合物III與適宜的化合物II偶聯(lián)，形成的被保護化合物I被去除保護。
其中n＝2的化合物LX III與LX IV優(yōu)選地通過用過量丙烯酸酯或丙烯腈在適宜的堿如KOH或NaOH存在下于適宜的溶劑、優(yōu)選地為極性質(zhì)子傳遞溶劑中處理化合物LX I來制備。
按照反應歷程1X，化合物LX VII與LX IX(其中R5為F或者R5與R7均為F的化合物III)可以由化合物LX I制備。用適宜的氟化劑如處于反應惰性溶劑如非質(zhì)子傳遞溶劑、優(yōu)選地為CH2Cl2中的三氟化二乙胺基硫處理化合物LX I以便形成化合物LX VII。該化合物易于被去除保護。
化合物LX I在上述用于制備其中R5與R7共同形成氧橋的化合物I的條件下被氧化為化合物LX VIII。在適宜的條件下(例如處于CH2Cl2中的三氟化三乙胺基硫)，化合物LX VIII被二氟化。
根據(jù)反應歷程X，其中R7為烷基的化合物LXX III或LX IV(即其中R7為烷基的化合物III)是由化合物LXX制備的(同樣參見適用于類似胺制備過程的反應歷程V)。用有機金屬試劑R7M處理化合物LXX。按照上一段所述氧化所得到的仲醇，形成化合物LXX I?；衔風XX I利用與將化合物XX I轉化為化合物XX II(反應歷程IV)相同的條件經(jīng)過氰醇LXX II被轉化為化合物LXX III。
作為可供選擇的替代方式，化合物LXX II按照將氰基中間體轉化為酰胺(反應歷程V)的方式被轉化為化合物LX IV。
化合物R8NH2或R9NH2借助分別對應于R8或R9的羰基化合物在適宜的還原性胺化條件下被單烷基化，得到胺R8R9NH。為了避免二烷基化反應發(fā)生，優(yōu)選用適宜的保護基PT保護胺(R8NH2或R9NH2)，例如通過與苯甲醛和還原劑反應來制備R8(PT)NH或R9(PT)NH。在適宜的還原性胺化條件下借助分別對應于R9或R8的羰基化合物單烷基化被保護的胺成為R9R8N(PT)。除去保護基(PT)(例如在PT為芐基時通過完全催經(jīng)加氫)得到化合物R8R9NH。本領域?qū)I(yè)人員可以由文獻得到適宜的還原性胺化條件，其中包括Borch等人(J.AM.Chem.Soc.1971，2897-2904)，(Organic Reactions，WileyNew York，1948(14)，174)，Hutchins等人(Org.prep.Proced.Int.1979(11)，20，)與Lane等人(Synthesis 1975.135)所報道的方法。適合于N-單烷基化進行的還原性胺化條件包括Morales等人(Synthetic Communications1984，1213-1220)與Verardo等人(Synthesis 1992 121-125)的方法。R8NH2或R9NH2胺同樣可以分別被其中X為氯、溴、甲苯磺酸根或甲磺酸根的R8X或R9X單烷基化。作為可供選擇的替代方式，中間體R8(PT)NH或R9(PT)NH可以借助R9X或R8X被烷基化，保護基被脫除后形成化合物R8R9NH。
可以采用其它方法制備其中R8NH或R9-NH為氧-氮鍵合的胺R8R9NH。因此，易于獲得的化合物C1-4烷氧羰基-NHO或NH2CONHOH通過用堿與過量適宜烷基化劑(R-X)處理在氮和氧上被二烷基化，得到相應的C1-4烷氧羰基-N(R)OR，后者水解成為化合物R8R9NH(R8＝R9＝R)。適宜的條件、堿與烷基化劑如Goel與Krolls(Org.Prep.Proced.Int.1987，19，75～78)和Major與Fleck(J.Am.Chem.Sot.1928，50，1479)所述。作為可供選擇的替代方式，NH2CONH(OH)胺可以在適宜的堿存在下分別用烷基化劑R’X與R”X依次處理被連續(xù)地烷基化，首先在氧上，形成NH2CONHC(OR’)，隨后在氮上，形成NH2CON(R”)(OR’)。適宜的堿與烷基化劑包括Kreutzhamp與Messinger(Chem.Ber.100 3463-3465(1967))與Danen等人( J.Am.chem.Soc.1973，95，5716-5724)所述種類。水解這些烷基化羥基脲衍生物產(chǎn)生對應于某些R8R9NH胺的胺R’ONH2與R’ONHR”。本領域化學家能夠使本段落描述的步驟適用于其它烷基化劑R、R’和R”-X以便制備其中R8N或R9N為氧-氮鍵合的其它胺R8R9NH。Uno等人(Synlett 1991，559-560)描述了用BF3催化加成有機金屬試劑R-Li與式R’CH＝N-OR”所示0-烷基肟，形成化合物R’RCH-NH(OR”)。該路徑還可被用于制備其中R8NH或R9NH為氧-氮鍵合的化合物R8R9NH。
其中式I的羧酸中的羧基被酯置換的本發(fā)明的前藥可以通過在堿如K2CO3存在下在惰性溶劑如二甲基甲酰胺中在約0～100℃下使該羧酸與適宜的烷基鹵結合約1～24小時來制備。作為可供選擇的替代方式，該酸與作為溶劑的適宜的醇在催化量酸如濃硫酸存在下在約20～120℃，優(yōu)選回流溫度下結合約1～24小時。另一方法是在催化量酸存在下在惰性溶劑如四氫呋喃中在隨時脫除由機械裝置(如迪安-斯達克分水器)或化學裝置(如分子篩)產(chǎn)生的水的條件下使該酸與化學計量醇反應。
其中醇官能團已被衍生為醚的本發(fā)明的前藥可以通過在堿如K2CO3存在下在惰性溶劑如二甲基甲酰胺中在約0～100℃使醇與適宜的烷基溴或碘反應約1～24小時來制備。鏈烷酰胺基甲醚可以通過在催化量酸存在下在惰性溶劑如四氫呋喃中按照US4997984所述方法使醇與雙-(鏈烷酰胺基)甲烷反應來獲得。作為可供選擇的替代方式，這些化合物可以通過Hoffman等人于J.Drg.Chem.1994，59，3530所述方法制備。
二烷基磷酸酯可以通過醇與氯代磷酸二烷基酯在堿存在下在惰性溶劑如四氫呋喃中反應來制備。二氫磷酸酯可以通過醇與二芳基或二芐基氯代磷酸酯如上所述進行反應，隨后通過在貴金屬催化劑存在下分別進行水解或加氫來制備。
苷通過醇與碳水化合物在惰性溶劑如甲苯中在酸存在下反應來制備。典型情況下，上述反應生成的水應被除去?？晒┻x擇的替代步驟是醇與適度保護的糖基鹵在堿存在下反應，隨后去除保護。
N-(1-羥基烷基)酰胺、N-(1-羥基-1-(烷氧羰基)甲基)酰胺或其中R2已被C(OH)C(O)OY取代的化合物可以通過母體酰胺或吲哚與適宜的醛在中性或堿性條件(例如處于乙醇中的乙醇鈉)在25～70℃反應來制備。N-烷氧甲基吲哚或N-1-(烷氧基)烷基吲哚可以通過N-未取代吲哚與必要的烷基鹵在堿存在下于惰性溶劑中反應來制備。1-(N，N-二烷基胺基甲基)吲哚、1-(1-N，N-二烷基胺基)乙基)吲哚和N，N-二烷基胺基甲基酰胺(例如R3＝CH2N(CH3)2)可以通過母體N-H化合物與適宜的醛和胺在醇溶劑中于25～70℃下反應來制備。
上述環(huán)狀前藥(例如，本發(fā)明的前藥，其中R2與R3為普通碳)可以通過母體化合物(藥)與醛或酮或其二甲基乙縮醛于惰性溶劑中在催化量酸存在下在隨時脫除剛剛形成的水或甲醇的條件下反應來制備。作為可供選擇的替代方式，這些化合物可以通過氨基醇或羥基酰胺與樹膠-二溴鏈烷在堿存在下(例如K2CO3)于惰性溶劑(如二甲基甲酰胺)中反應來制備。
盡管已經(jīng)介紹了大多數(shù)用于上述反應歷程的原料與試劑(例如胺、被取代吲哚羧酸、被取代二氫吲哚羧酸、氨基酸)的制備方法，但是它們同樣易于得到或便利地由本領域?qū)I(yè)人員采用傳統(tǒng)的有機合成法合成。舉例來說，本文用于制備化合物I的許多中間體都關系到或衍生自天然氨基酸，這些氨基酸有著重要的科學與商業(yè)價值，因此，許多這些中間體是可以購得的或者在文獻有所報道或者易于通過文獻報道的方法由其它市售商品制得。舉例來說，這類中間體包括化合物XX、XXX、XXX I、XXX II。
化合物I具有不對稱碳原子，因此為對映體或非對映體。非對映體混合物可以依據(jù)其物理化學性質(zhì)上差別借助已知方法例如通過色譜和/或分級結晶被分離為單獨的非對映體。(例如式III、VIII或IX的)對映體可以通過借助與適宜的旋光化合物(例如醇)反應將對映體混合物轉化為非對映體混合物、分離非對映體與轉化(例如水解)單獨非對映體為相應的純對映體來得到分離。包括非對映體、對映體及其混合物在內(nèi)的所有這類異構體均被視為本發(fā)明一部分。
盡管本發(fā)明的許多化合物都不能被電離，但是仍有一部本發(fā)明化合物在生理條件下是可以被電離的。因此，舉例來說，本發(fā)明的某些化合物呈酸性并且與藥物可接受的陽離子形成鹽。所有這些鹽均屬于本發(fā)明范圍并且可以按照傳統(tǒng)方法制備。舉例來說，它們可以簡單地通過使酸與堿通常以化學計量比值，在水、非水或部分含水介質(zhì)中以適宜方式接觸來制備。通過過濾、通過非溶劑沉淀后進行過濾、通過蒸除溶劑或者通過在水溶液情況下凍干以適宜方式回收鹽。
此外，本發(fā)明的某些化合物呈堿性，它們與藥物可接受的陰離子形成鹽。所有這些鹽均屬于本發(fā)明范圍并且可以由傳統(tǒng)方法制備。舉例來說，可以簡單地通過使酸與堿通常以化學計量比在水、非水或部分含水介質(zhì)中以適宜方式接觸來制備。通過過濾、通過非溶劑沉淀后進行過濾、通過蒸除溶劑或者通過在水溶液情況下凍干以適宜方式回收鹽。此外，當本發(fā)明化合物形成水合物或溶劑化物時，同樣屬于本發(fā)明范圍。
本發(fā)明化合物作為治療哺乳動物(例如人類)體內(nèi)代謝疾病(如本文詳述)的藥劑的應用通過其在常規(guī)試驗與下述體外和體內(nèi)試驗中的活性得到表現(xiàn)。這種試驗同時提供一種將本發(fā)明化合物的活性與其它已知化合物的活性進行對比的途徑。對比結果適用于確定治療包括人類在內(nèi)的哺乳動物體內(nèi)這類疾病的藥物劑量。
通過下列步驟獲得經(jīng)過純化的人體酐臟糖原磷酸化酶a(HLGPa)。
表達與發(fā)酵HLGP互補DNA由質(zhì)粒中KK233-2(Pharmacia BiotechInc.，Piscataway，New Jersey)被表達(于大腸桿菌菌株XL-1blue(Stratageme Cloning systems，LaJolla.CA))中。該菌株被接種在LB介質(zhì)(由10克胰化蛋白胨、5克酵母提取物、5克NaCl和1毫升1NNaOH/升組成)與100毫克/升氨芐青霉素、100毫克/升吡哆醇和600毫克/升MnCl2并且在37℃生長至細胞密度達OD550＝1.0。此時，用1mM異丙基-1-硫代-β-D-半乳苷(IPTG)誘導細胞。誘導3小時后，通過離心分離收獲細胞并將細胞片在-70℃下冷凍直至需要提純時為止。
提純糖原磷酸化酶將上述片狀細胞重新懸浮于25mMβ-甘油磷酸鹽(pH＝7.0)，其中帶有0.2mMDTT，1mM MgCl2與下列蛋白酶抑制劑；0.7微克/毫升胃酶抑制劑A0.5微克/毫升亮抑蛋白酶肽0.2mM 苯甲基磺酰氟(PMSF)0.5mM EDTA通過用200微克/毫升溶菌酶與3微克/毫升DNA酶進行預處理，隨后Branson 450型超聲細胞破碎器(Branson Sonic Power Co.Danbury CT)在冰上于250毫升批量中進行超聲處理5×1.5分鐘將細胞裂解。經(jīng)過35,000×g離心分離1小時，隨后用0.45微米濾器過濾清亮裂解液。通過在下述一系列色譜步驟中監(jiān)測酶活性(如下面的HLGPa活性試驗所述)提純裂解液(估計少于全部蛋白質(zhì)的1％)的可溶部分中的HLGP。
固定化金屬親和層析(IMAC)此步驟基于Luong等人的方法(Luong等人，Journal ofChromatography(1992)584，77-84)。將500毫升細胞裂解液(由約160克原始細胞片制得)的經(jīng)過濾的可溶部分放入130毫升IMAC螯合一瓊脂糖凝膠柱(Pharmacia LKB Bcotechnology，Piscataway，New Jersey)，該柱中裝有50mM CuCl2與25mMβ-甘油磷酸鹽、250mM NaCl和1mM咪唑(在pH＝7平衡緩沖液中)。該柱用平衡緩沖液洗滌直至A280返回至基線為止。隨后用含有100mM咪唑的相同緩沖液由該柱中洗脫樣品以便脫除被結合的HLGP與其它被結合的蛋白質(zhì)。合并含有HLGP活性的餾份(約600毫升)并且加入乙二胺四乙酸(EDTA)、DL-二硫蘇糖醇(DTT)、苯甲基磺酰氟(DMSF)、亮抑蛋白酶肽和胃酶抑制劑A以便分別獲得0.3mM、0.2mM、0.2mM、0.5μg/ml和0.7μg/ml不同濃度。在葡聚糖凝膠G-25柱(Sigma Chemical Co.，St.Louis，Missouri，被25mM三羥甲基氨基甲烷-HCl(pA7.3)平衡)上對合并的HLGP進行脫鹽處理，用3mM DTT緩沖液(緩沖液A)除去咪唑，將其貯存在冰上直至第二次層析步驟開始為止。
5’-腺苷酸瓊脂糖凝膠層析經(jīng)過脫鹽處理的合并的HLGP樣品(約600毫升)與70毫升5’-腺苷酸-瓊脂糖凝膠(Pharmacia LKB Biotechnology，Piscataway，New Iersey，被緩沖液A平衡)混合。在22℃輕輕攪拌1小時，隨后裝填入柱中并且用緩沖液A洗滌直至A280返回至基線為止。HLGP與其它蛋白質(zhì)自具有25mM三羥甲基氨基甲烷-HCl、0.2mM DTT與10mM腺苷-5’-一磷酸(AMP)(pH＝7.3，緩沖液B)的柱中洗脫。確定酶(如下所述)活性并且借助十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)顯示M，約97Kdal HLGP蛋白質(zhì)條帶，隨后進行銀染(2D-銀染II“Daiichi Rit”，Daiichi Pure Chemicals Co.LTD.Tokyo.Japan)，合并含HLGP的餾分。合并的HCGP被滲析進入25mMβ-甘油磷酸鹽，0.2mM DTT、0.3mM EDTA、200mMNaCl、pH7.0緩沖液(緩沖液C)并且被貯存在冰上直至被使用為止。
確定HLGP酶活性
A)活化HLGP將HLGPb轉化為HLGPa在確定HLGP酶活性之前，將酶由以大腸桿菌菌株XL-1Blue(Stragene Cloning systems，La Jolla，California)表達的非活性形式(指定為HLGPb)通過采用磷酸化酶激酶將HLGP磷酸化而轉化為活性形式(指定為HLGPa)HLGPb與固定化磷酸化酶激酶反應磷酸化酶激酶(Sigma，chemical Co.，ST.Louis，MO)根據(jù)生產(chǎn)廠家的指示被固定在親和膠-10(Bio Rad Corp.，Melvile，NY)上。簡言之，磷酸化酶激酶(10毫克)與洗滌過的親和膠顆粒(1毫升)一起于2.5毫升100mMN-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)和80mM CaCl2中在pH＝7.4和4℃下4培養(yǎng)小時。隨后在用50mM HEPES和1M甘氨酸甲酯在pH＝8.0和室溫下進行阻斷1小時之前，用相同的緩沖液洗滌親和膠顆粒一次。撤除阻斷緩沖液，為了貯存用50mM HEPES(pH＝7.4)、1mM β-巰基乙醇和0.2％NaN3替換該緩沖液。在被用于將HLGPb轉化為HLGPa之前，通過在由25mMβ-甘油磷酸鹽、0.3mM DTT和0.3mM EDTA(pH＝7.8)組成的用于激酶反應的緩沖液(激酶試驗緩沖液)中洗滌來平衡親和膠固定化磷酸化酶激酶顆粒。
經(jīng)過部分提純，由上述5’-腺苷酸瓊脂糖凝膠層析得到的非活性HLGPb被激酶試驗緩沖液稀釋1∶10，隨后與被固定在親和膠顆粒上的上述磷酸化酶激酶混合。加入NaATP(腺苷三磷酸鈉)至5mM，加入MgCl2至6mM。在25℃緩慢地混合30～60分鐘，脫除顆粒中的樣品，通過在存在與不存在3.3mMAMP的條件下確定HLGP酶活性估評HLGPb被轉化為HLGPa的活化百分率。按照下式計算總的HLGP酶活性百分率(基于HLGPa酶活性，獨立于AMP) (B)HLGPa活性試驗本發(fā)明化合物的降血糖活性(以及治療/防止其它病癥的活性)可以通過借助兩種方法之一估評本發(fā)明化合物對糖原磷酸化酶(GPa)的活化形式的活性所產(chǎn)生的影響來間接地確定，通過正向監(jiān)測由糖原產(chǎn)生的葡糖-1-磷酸或者通過跟蹤逆反應、由釋放的無機磷酸鹽測定源于葡糖-1-磷酸的糖原合成量來確定糖原磷酸化酶a活性。所有反應均在96孔微量滴定板中進行三次，用與Titertech Microplate Stacker(ICN Biomedical Co.Huntsville，alabama)連接的MCC/340 MKII Elisa Reader(Lab.systems，F(xiàn)indand)在下面特定波長測定由于反應產(chǎn)物形成而在吸收上產(chǎn)生的變化。
為了測定正向HLGPa酶活性，借助Pesce等人的多酶偶聯(lián)通用方法(Pesce，M.A.Bodourian，S.H.，Harris，R.C.與Nicholson，J.F.(1977)臨床化學23，1711-1717)監(jiān)測由糖原生成的葡糖-1-磷酸，該方法被改進如下，1～100微克磷酸化酶a，10單元葡糖磷酸變位酶和15單位葡糖-6-磷酸脫氫酶(Boehringer Mannhein biochemicals.Indianapolis，IN)在緩沖液A中被稀釋至1毫升。緩沖液A的pH＝7.2，其中含有50mMHEPES、100mM KCl、2.5mM乙二醇四乙酸(EGTA)、2.5mM MgCl2、3.5mM KH2PO4和0.5mM二硫蘇糖醇。將其中20微升加至含有0.47毫克/毫升糖原、9.4mM葡萄糖。0.63mM煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的氧化形式(NADP+)的80微升緩沖液A。將待測試的化合物在加入酶之前以5微升處于14％二甲亞砜(DMSO)的溶液形式加入。通過加入5微升14％DMSO測定在不存在抑制劑時HLGPa酶活性的基礎速率，通過添加20微升50mM陽性對照試驗物質(zhì)咖啡因來確定HLGPa酶活性的充分抑制速率。室溫下通過測定被氧化的NADP+在340納米處轉化為被還原NADPH的轉化率來監(jiān)測反應的進行。
為了測定逆反應中HLGPa酶的活性，借助Engers等人所述的通用方法〔Sngters，H.D.Shechosky，S.與Madser，N.B.(1970)Can.J.Biochem.48，764-754〕測量葡糖-1-磷酸轉化為糖原與無機磷酸鹽的轉化率，該方法被改進如下1～100微克HLGPa在緩沖液B中被稀釋至1毫升。緩沖液B的pH＝7.2，其中含50mMHEPES、100mM KCl、2.5mM EGTA、2.5mM Mgcl2和0.5mM二硫蘇糖醇。將其中20微升加至含有1.25毫克/毫升糖原、9.4mM葡萄糖、0.63mM葡糖-1-磷酸的80微升緩沖液B。將待測試的化合物在加入酶之前以5微升處于14％DMSO的溶液形式加入。通過加入5微升14％DMSO測定在不存在抑制劑時HLGPa酶活性的基礎速率，通過添加20微升50mM咖啡因確定HLGPa酶活性的充分抑制速率。在室溫下將該混合物培養(yǎng)1小時，借助Lanzetta等人的通用方法測定由葡糖-1-磷酸釋放的無機磷酸鹽〔Lanzetta，P.A.，Alvarez，L.J.，reinach，P.S.與Candia，O.A.(1979(Anal.biochem，100，95～97〕，該法經(jīng)過如下改進150微升10毫克/毫升鉬酸銨、0.38毫克/毫升處于1NHCl中的孔雀綠被加入100微升酶混合物。于室溫下培養(yǎng)20分鐘后，在620納米處測量吸收。
本發(fā)明化合物適于作為降血糖藥用于臨床?？梢越柚谛坌詏b/ob小鼠體內(nèi)不存在試驗化合物的條件下相對于賦形劑用量可以減少葡糖的試驗化合物的數(shù)量來確定本發(fā)明化合物的降血糖活性。該試驗同樣可以確定用于在該鼠體內(nèi)降低血漿葡糖濃度的這類試驗化合物的近似最小有效劑量(MED)。
由于血液中葡糖濃度與糖尿病的狀況密切相關，所以這些化合物通過其降血糖作用來防止、阻抑糖尿病和/或使病情好轉。
將5只5～8周齡的雄性C57BL/6J-ob/ob小鼠(由Jackson實驗室，Bar Harbor，ME獲得)在標準動物管理操作條件下放在一個籠子內(nèi)。經(jīng)過一周的馴化周期之后，稱量動物并且在進行任何處理之前由眶后竇處采集25微升血樣。立即用含0.025％肝素鈉的鹽水稀釋至1∶5并且將其放在冰上進行代謝物分析。將動物分為處理組以便使每一組都具有類似的平均血漿葡糖濃度。分組后，在4天內(nèi)每日口服給藥賦形劑，其中含有1)0.25％w/v甲基纖維素/水(未進行pH調(diào)節(jié))；或2)處于0.1％鹽水中的0.1％PluronicRP105嵌段共聚物表面活性劑(BASF公司，Parsippany，NJ)(未作pH調(diào)節(jié))。于第5天，再次稱重動物，口服試驗化合物或單獨口服賦形劑。所有藥物均以賦形劑的形式給藥，其中含有1)0.25％w/v處于水中的甲基纖維素(未作pH調(diào)節(jié))；或2)處于0.1％鹽水中的10％DMSO/0.1％ PluronicRP105(BASF公司，Parsippany，NJ)(未調(diào)節(jié)pH)。此后由動物的眶后竇放血3小時以便確定血液代謝物含量。在室溫下離心分離(10,000×g)2分鐘新采集的樣品。舉例來說，借助Abbott VPTM(Abbott實驗室，診斷部，Irving，TX)與Vp Super system自動分析儀(Abbott實驗室，Irving，TX)，采用A-GentTM葡糖-紫外試驗試劑體系(Abbott實驗室，Irving，TX)(Richlerich與Dauvvalder方法的改進，Schvveizerische Medizinische wochenschrift，101，860(1971))(己糖激酶法)采用100毫克/分升標準物分析上清液中的葡糖。按照下式計算血漿葡糖血漿葡糖(mg/dl)＝樣本值×5×1.784＝8.92×樣本值。其中5為稀釋因子，1.784的血漿血細胞比容修改(假設血細胞比容＝44％)。被施用賦形劑的患高血糖癥的動物的葡糖水平基本上保持不變(例如，大于或等于250毫克/分升)，被施用適宜劑量試驗化合物的動物體內(nèi)的葡萄糖水平則明顯下降。通過在第5天統(tǒng)計分析試驗化合物組與賦形劑處理組之間平均血漿葡糖濃度(非成對的t試驗)來確定試驗化合物的降血糖活性。上述試驗以一定范圍的試驗化合物劑量進行以便確定用于降低體內(nèi)血漿葡糖濃度的近似最低有效劑量(MED)值。
本發(fā)明化合物易于作為高胰島素血反轉劑、甘油三酯降低劑與降低膽固醇劑用于臨床。這類活性通過在ob/ob小鼠體內(nèi)不存在試驗化合物的條件下相對于對照賦形劑的能夠降低胰島素、甘油三酯或膽固醇含量的試驗化合物數(shù)量來確定。
由于血液中膽固醇濃度與心血管、腦血管或外周血管疾病密切相關，所以本發(fā)明的化合物借助其降低膽固醇的作用防止、阻抑動脈粥樣硬化和/或使其病情好轉。
由于血液中胰島素濃度能夠促進脈管細胞生長與增加腎鈉保留(此外還有其它作用如促進葡糖的利用)，而這些功能又是公知的造成高血壓發(fā)病的原因，所以，本發(fā)明化合物通過其降胰島素作用來防止、阻抑高血壓和/或使其病情好轉。
由于血液中甘油三酯的濃度對血脂總水平產(chǎn)生影響，所以本發(fā)明化合物通過其降低甘油三酯的活性防止、阻抑高血脂癥和/或使其病情好轉。
在標準動物管理條件下將5只5～8周齡雄性C57BL/6J ob/ob小鼠(來自Jackson實驗室，Bar Harbor，ME)關在一只籠子內(nèi)并且喂給標準嚙齒動物食物(ad libitum)。經(jīng)過一周馴化期后，稱重并且在進行任何處理之前由動物的眶后竇采集25微升血樣，隨后立即將血樣用含0.025％肝素鈉的鹽水稀釋至1∶5。將其置于冰上以便進行血漿葡糖分析。將動物分為處理組以便每組具有相似的平均血漿葡糖濃度。待測試化合物通過口服管飼法以約0.02～2.0％溶液(重量/體積)的形式給藥，該溶液處在1)10％DMSO/0.1％PluronicRP105嵌段共聚物表面活性劑(BASF公司，Parsippany，NJ)，于0.1％鹽水中(未調(diào)節(jié)pH)或2)0.25％w/v甲基縫纖維素水溶液(未調(diào)節(jié)pH)。持續(xù)每日一劑(s.i.d.)或每日二劑(b.i.d.)，共計15天。對照組小鼠僅接受于0.1％鹽水中的10％DMSO/0.1％PluronicRP105(未調(diào)節(jié)pH)或0.25％(w/w)甲基纖維素水溶液(未調(diào)節(jié)pH)。
3小時后，施用最后一劑，切下鼠頭，將鼠體內(nèi)血液收集在含有3.6毫克1∶1(w/w)氟化鈉/草酸鉀混合物的0.5毫升血清分離試管內(nèi)。在室溫和10,000×g離心分離2分鐘。移出血清上清液并且用1TIU/ml抑蛋白酶肽溶液(于0.1％鹽水中，未調(diào)節(jié)pH)稀釋至1∶1 v/v。稀釋后的血清樣品在-80℃下貯存直至分析。分析融化的被稀釋的血清樣品中的胰島素、甘油三酯與膽固醇含量。采用購自Binax，South Portland，ME的EquateRRIA INSULIN kits(雙抗體法)測定血清胰島素含量。試驗之間的變化系數(shù)≤10％。采用Abbott VPTM與VP Super SystemR自動分析儀(Abbott實驗室，Irving，TX)，借助A-GentTM甘油三酯試驗試劑系統(tǒng)(Abbott實驗室，診斷部Irving，TX)(脂肪酶偶聯(lián)酶方法，Sampson等人，臨床化學21，1983(1975)的方法的改進)測量血清甘油三酯。采用Abbott VPTM與VP super-SystemR自動分析儀(Abbott實驗室，Irving，TX)與A-GentTM膽固醇試劑系統(tǒng)(膽固醇酯酶偶聯(lián)的酶方法；Attain等人臨床化學20，470(1974)的方法的改進)借助100和300mg/dl標準物確定血清膽固醇總含量。利用下式計算血清胰島素、甘油三酯與膽固醇總水平，血清胰島素(μU/ml)＝樣本數(shù)×2血清甘油三酯(mg/dl)＝樣本數(shù)×2血清膽固醇總含量(mg/dl)＝樣本數(shù)×2其中2為稀釋因子。
被施用賦形劑的動物基本上保持不變，即高血清胰島素含量(例如225μU/ml)、高血清甘油三酯含量(例如225mg/dl)和高血清總膽固醇水平(例如160mg/dl)，而經(jīng)過本發(fā)明試驗化合物處理的動物一般具有降低的血清胰島素、甘油三酯和總膽固醇水平。試驗化合物的血清胰島素、甘油三酯和總膽固醇降低活性通過統(tǒng)計分析(不成對t-試驗)試驗化合物組與賦形劑處理對照組之間血清胰島素、甘油三酯或總膽固醇平均濃度來確定。
本發(fā)明化合物提供的保護心臟組織免受損傷的活性在體外通過Butwell等人(Am.J.Physiol.264，H 1884-H1889，1993與Allard等人(Am.J.Physiol，1994，267，H66～H74)提供的方法得到說明。采用等容隔離大鼠心臟制劑、尤其是上述文獻提及的制劑進行實驗。正常雄性Sprague-Dawley大鼠、經(jīng)過主動脈banding手術處理后變得心臟肥大的雄性Sprague-dawley大鼠、患有急性糖尿病的雄性BB/W大鼠或周齡相同的非糖尿病BB/W對照鼠經(jīng)過肝素(1000u，i.p.)和戊巴比妥(65毫克/千克，i.p.)預處理。待通過檢測表明無足部反射從而證實已實現(xiàn)深度麻醉后，心臟被迅速切除并被放入冰凍鹽水中。在2分鐘內(nèi)通過主動脈心臟被退行性地灌注。心率與心室壓采用在具有與壓力置換器連接的高壓管的左心室中的膠乳氣球測定。用由NaCl 118、KCl 4.7、CaCl21.2、MgCl21.2、NaHCO325、葡糖11(mM)組成的灌注溶液灌注心臟。用被用于灌注液和水夾套的處于灌注管周圍的熱浴緊密控制灌注設備溫度以便將心臟溫度保持在37℃。借助兒科中空纖維充氧器(Capiax，terumo.Corp.tokyo，Japan)在緊靠心臟處進行灌注液的充氧過程。心臟與灌注溶液±試驗化合物接觸約10分鐘或更多，隨后是20分鐘整體缺血和60分鐘在無試驗化合物存在下的倒灌。在局部缺血后的一段時間內(nèi)對比對照組與試驗化合物處理的心臟的跳動，對比兩組心臟的左心室壓力。實驗結束時，還要灌注與染色心臟以便如下所述確定梗阻面積與有危險的面積的比值(％IA/AAR)。
同樣可以按照Liu等人(Circulation，vol.84，No.1)1991年7月))的方法體內(nèi)確立本發(fā)明化合物對于由局部缺血以外原因造成的心臟組織損傷所產(chǎn)生的防治效果，在體內(nèi)試驗中測試了試驗化合物相對于接受鹽水賦形劑的對照組的心臟保護作用。作為背景資料引人注意的是短暫的心肌局部缺血與其后發(fā)生的冠狀動脈灌注可以保護心臟免受后續(xù)的嚴重心肌局部缺血(Murry等人，Criculation 741124～1136，1986)。以被梗阻心肌層的減少為標志的心臟保護作用可以通過采用向作為心肌局部缺血預處理現(xiàn)場模型而被研究的未經(jīng)處理和被麻醉了兔子靜脈內(nèi)施用腺嘌呤核苷受體刺激物從藥理上被引發(fā)(Liu等人Circulation 84350～356，1991)。體內(nèi)試驗測試當向未經(jīng)處理和被麻醉的兔子非腸道給藥時化合物是否能從藥理上引發(fā)心臟保護作用即減小心肌梗阻尺寸。將本發(fā)明化合物產(chǎn)生的功效與采用業(yè)已表明在現(xiàn)場研究的未經(jīng)處理和被麻醉的兔子體內(nèi)從藥理上引發(fā)心臟保護作用的A1腺嘌呤核苷刺激物，N6-1-(苯基-2R-異丙基)腺嘌呤核苷(PIA)進行的局部缺血預處理相比。具體方法如下所述。手術用戊巴比妥鈉(30毫克/千克，靜脈注射)麻醉新西蘭白色雄兔(3～4千克)。通過腹部中線頸切割進行氣管造口術，采用正壓送氣機用100％氧氣使兔子的血液吸收氧氣。在左頸靜脈中放入導管便于給藥，在左頸動脈中放入導管以便測量血壓。隨后進行胸廓切開術并且在左冠狀動脈的隆凸分支周圍放置一勒除器(00絲)。通過拉緊勒除器與夾緊固定來引發(fā)缺部缺血。放松勒除器以便使受作用部位重新灌注。局部發(fā)紺表明心肌局部缺血；反應性充血證實出現(xiàn)重新灌注。
記錄一旦動脈壓力與心率穩(wěn)定至少30分鐘，便開始進行實驗。通過2次閉塞冠狀動脈5分鐘以及隨后重新灌注10分鐘引發(fā)局部缺血預處理。通過兩次歷時例如5分鐘灌注試驗化合物、兩次間隔10分鐘或者通過灌注腺嘌呤核苷刺激物PIA(0.25毫克/千克)引發(fā)藥理性預處理。于局部缺血預處理、藥理預處理或非處理(未處理，賦形劑對照)之后，閉塞動脈30分鐘，隨后重新灌注2小時以便引發(fā)心肌梗死。將試驗化合物與PIA溶于鹽水或其它適宜的賦形劑并且分別以1～5毫升/千克的劑量施用。
染色(Liu等人Circulation 84350～356，1991)重新灌注2小時后，心臟被迅速摘除，被掛在Langendorff設備上，用被加熱至體溫(38℃)的普通鹽水沖洗1分鐘。被用作勒除器的絲線被束緊以便重新閉塞動脈，用灌注液灌注0.5％熒光顆粒(1～10微米)懸浮液以便染色除了有危險的部位(非熒光心室)以外所有的心肌層。隨后快速冷凍心臟。在-20℃貯存過夜。次日，將心臟切成2毫米的薄片并且用1％氯化三苯基四唑(TTC)染色。由于TTC與活組織反應，這種染色在活(紅染色)組織與死組織(未染色梗死組織)之間存在差異。采用經(jīng)過預校正圖象分析儀對每一片左心室的已經(jīng)梗死面積(非染色)與有危險面積(非熒光顆粒)進行計算。為了正?；捎谛呐K之間在有危險面積上的差異而造成的局部缺血損傷，該數(shù)值被表示為梗死面積與危險面積的比值(％IA/AAR)。所有數(shù)據(jù)均被表示為平均值±SEM并且采用單一因子ANOVA或未成對t-試驗進行統(tǒng)計對比。統(tǒng)計顯著性被認為p＜0.05。
可以采用任何能夠優(yōu)選地將本發(fā)明化合物送往肝和/或心臟組織的方法施用本發(fā)明化合物。這些方法包括口服、非腸道、十二指腸內(nèi)等途徑給藥。一般地，本發(fā)明化合物以單一(例如一日一次)或多重劑給藥。
然而，化合物的用量與施用時間當然取決于被治療的具體疾病/癥狀、被治療的客體、病情嚴重程度、給藥方式與處方醫(yī)生的判斷力。因此，由于患者之間的差異，下列給出的劑量具有指導意義，醫(yī)生可以滴定藥物劑量以便達到對患者適宜的藥性(例如降低葡糖活性)。對于所需的活性程度，醫(yī)生必須平衡各種因素如初始含量、其它危險(心血管)因素、預先存在的疾病、患者年齡與促動因素。
一般情況下，對于本發(fā)明的活性，例如降低血糖、甘油三酯與膽固醇以及高胰島素血反轉活性，本發(fā)明化合物的有效劑量范圍為0.005～50、以0.01～25毫克/千克/日為佳，以0.1～15毫克/千克/日為最佳。
一般地，本發(fā)明化合物口服給藥，不過可以采用非腸道(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或髓內(nèi))給藥，例如，在口服給藥對于即時目標不適宜的情況下或當患者無法攝入藥物時。舉例來說，當患者患有胃腸疾病或者當護理醫(yī)生認為藥物最好被施用于組織或器官表面時，還可以采用局部給藥方式。
本發(fā)明化合物通常以藥物組合物的形式被施用，該組合物含有至少一種與藥物可接受的賦形劑或稀釋劑在一起的本發(fā)明化合物。因此，本發(fā)明化合物可以單獨地或混合地以任何傳統(tǒng)的口服、非腸道或經(jīng)皮膚的劑量形式給藥。
對于口服給藥來說，藥物組合物可以呈溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊、粉劑等形式。含各種賦形劑如檸檬酸鈉、碳酸鈣與磷酸鈣的片劑與各種崩解劑如淀粉并且優(yōu)選為馬鈴薯或木薯淀粉以及特定的配合硅酸鹽、粘合劑如聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、明膠與阿拉伯樹膠一起被使用。此外，潤滑劑如硬脂酸鎂，十二烷基硫酸鈉與滑石對于片劑來說通常是非常適用的。類似的固體組合物還可以被用作軟與硬填充的明膠膠囊的填料；此類的優(yōu)選材料還包括乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇。在希望使用水懸浮液和/或酏劑進行口服給藥時，本發(fā)明化合物可以與各種增香劑、增甜劑、著色劑、乳化劑和/或懸浮劑以及稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各種組合形式相結合。
對于非腸道給藥來說，可以采用處于芝麻油或花生油或含水丙二醇中的溶液以及相應的水溶性鹽的無菌水溶液，必要時，這種水溶液可以被適宜地緩沖，借助充分的鹽水或葡糖使液體稀釋劑首先呈等滲性。這些水溶液特別適用于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下和腹膜內(nèi)注射。另外，所有的無菌水介質(zhì)易于通過本領域?qū)I(yè)人員公知的標準技術得到。
對于經(jīng)過皮膚(例如局部)給藥來說，可以制備稀釋無菌水或部分含水溶液(常見濃度為約0.1～5％)，其它類似于上述非腸道溶液。
用特定量活性組分制備各種藥物組合物屬于公知方法或者在本文指導下對于本領域?qū)I(yè)人員來說是顯而易見的。舉例來說，參見Remington的《藥學》Mack出版公司，Easter，Pa.15版(1975) 。
本發(fā)明藥物組合物含0.1～95％，優(yōu)選1～70％本發(fā)明化合物。無論如何，待施用的組合物或配方將含有其數(shù)量能夠有效地治療待治療客體的疾病/病癥即糖原磷酸化酶依賴性疾病/病癥。
在Varian XL-300(Varian Co.，Palo Alto，加利福尼亞)或Bruker AM-300光譜儀(Bruker Co.，billerica，Massachusetts)上、于約23℃和300M赫記錄質(zhì)子NMR光譜和在75.4mHz記錄碳核的NMR光譜?；瘜W位移以ppm(三甲基硅烷低磁場)表示。被指定為可交換的共振不出現(xiàn)在其中樣品與處于同種溶劑中的數(shù)滴D2O一起振動的實驗中。FAB-MS光譜采用由3∶1二硫蘇糖醇/二硫赤蘚糖醇組成的液體基質(zhì)在VG70-2505光譜儀(V4分析有限公司，Wythanshaw Manchester，U.K.)上獲得。采用氨離子化法在Fisons Trio-1000光譜儀(Fisons Co.Valeneia，加利福尼亞)上獲得熱噴MS(TSPMS)?；瘜W離子化質(zhì)譜在Hewlett-Packard 5989儀器(Hewlett-Packard Co.，Palo Alto，加利福尼亞)(氨離子化，PBMS)上獲得。在含氯或含溴離子的強度被描述的情況下，可以觀察到預期的強度比(對于含35Cl/37Cl離子來說約為3∶1，對于含79Br/81Br離子來說為1∶1)并且只給出低質(zhì)量離子的強度。
HPLC借助214nM檢測在被雙泵/混合器系統(tǒng)洗脫的250×4.6毫米Rainin Microsorb C-18柱(Rainin Co.，Woburn，Massachusetts)上進行，上述系統(tǒng)分別以1.5毫升/分鐘的流速提供乙腈與pH＝2.1(借助H3PO4調(diào)節(jié))的含水0.1MKH2PO4的指定混合物。樣品以乙腈與pH＝7.0磷酸鹽緩沖液(0.025M Na2HPO4和KH2PO4)的1∶1混合物形式被注入。通常在10～15分鐘試驗中，純度百分數(shù)對應于總積分面積百分數(shù)。熔點未被校正并且在Buchi 510熔點設備(Buchi-Laboratorums-Technik Ag.flawil，switzerdland)確定，苯甲酸的熔點為120.5～122℃，對氯苯甲酸(Aldrich 99+％品級)為237.5～240.5℃。
柱色譜在玻璃柱中在低氮氣壓力下借助Amicon硅膠(30mM，60A孔徑)(Amicon D Vision，W.R.Grace & Co.，beverly.Mass.)進行。除非另有具體說明，所用試劑均來自市售途徑。被用作反應溶劑的二甲基甲酰胺、2-丙醇、四氫呋喃與CH2Cl2為由Aldrich化學公司(Milwaukee，wisconsin)提供的無水品級。微量分析由Schwargkopf微量分析實驗室，Woodside NY進行。術語“濃縮”與共蒸發(fā)是指用浴溫低于45℃的旋轉蒸發(fā)器在水吸氣器壓力下脫除溶劑。
步驟A(采用DEC進行多肽偶聯(lián))由伯胺(相對于每當量HCl10當量，或伯胺鹽酸鹽與1.0～1.3當量三乙胺)于CH2Cl2(除非具體說明其它溶劑)中的0.1～0.7M溶液在25℃依次用0.95～1.2當量特定羧酸、1.2～1.8當量羥基苯并三唑水合物(相對于羧酸通常為1.5當量)和0.95～1.2當量(對應于相當于羧酸的摩爾比)1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(DEC)處理。該混合物被攪拌14-20小時。(參見下文注釋1)。用乙酸乙酯稀釋該混合物，用1或2N NaOH洗滌2～3次，用1或2N HCl(注釋2)洗滌2～3次，用MgSO4干燥有機層，濃縮后得到的粗產(chǎn)物根據(jù)所使用的溶劑的特定需要通過在硅膠上色譜法、研制或重結晶而被提純。純化后的產(chǎn)物經(jīng)RR-HPLC分析可知除非另有注釋，純度大于95％。下文在適宜的情況下將單獨注明利用步驟A時的例外情況。在0～25℃下進行的反應在開始時要在一個絕緣冰浴中冷卻容器，該浴被允許在數(shù)小時內(nèi)升至室溫。
注釋1在大規(guī)模進行偶聯(lián)(＞50毫升溶劑)時，該混合物于此時被濃縮，殘余物被溶解于乙酸乙酯。注釋2若產(chǎn)物含有可離子化的胺官能團，酸洗被省略。
實施例1(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸異丙酯1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸化物(DEC，1.03克，5.38毫摩爾)于25℃一次性被加入(3S)-氨基-4-苯基-(2R)-羥基丁酸異丙酯(1.35克，4.93毫摩爾)、5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.06克，5.4毫摩爾)與1-羥基苯并三唑水合物(1.15克，7.5毫摩爾)于CH2Cl2(15毫升)中的溶液。于25℃攪拌18小時，用乙酸乙酯稀釋，用2NNaOH洗滌所得到的溶液2次，用HCl(2N)洗滌2次，用MgSO4干燥，濃縮。在硅膠(112克)上用1∶4乙酸乙酯/己烷(1.5升)，隨后用1∶3乙酸乙酯/己烷洗脫完成殘余物的色譜提純，得到標題物質(zhì)產(chǎn)率91％；HPLC(70/30)5.69分鐘(78％)，21.5分鐘(19％)。TSPMS415/417(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.7(s，1H)，7.57(d，1H，J＝2Hz)，7.38-7.18(m，7-8H)，6.73(d，1H，J＝ca.2Hz)，6.57(d，1H，J＝9.7Hz)，5.04(septet，1H，J＝6.3Hz)，4.83(m，1H)，4.19(dd，1H，J＝2Hz)，3.51(d，1H，J＝3.6Hz)，3.05(m，2H)，1.17(d，3H，J＝6.3Hz)，1.11(d，3H，J＝6.3Hz)其中存在約15％其它物質(zhì)，估計為N，O-雙(5-氯-1H-吲哚-2-羰基衍生物)d(部分)9.80(S，1H)，5.28(dd，1H，吲哚-CO2CH)。
實施例1A 3(S)，2(R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸異丙酯在5～17℃下用無水HCl(374克)處理3(S)，2(R)-N-〔(1，1-二甲基乙氧基)羰基〕-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁腈(Parris等人，生物化學1992，31，8125-8141)(252克，0.912摩爾)于無水2-丙醇(6升)中的溶液并且在25℃攪拌20小時(用含有燥石膏的管使其與大氣隔離)。在低于10℃下另外加入348克無水HCl并在25℃將混合物攪拌72小時。濃縮后，將殘余物溶于0.1N HCl。在25℃放置1小時后，用醚(3×1升)萃取并用6N NaOH(約450毫升)使水層的pH值達到12。用乙酸乙酯(4×1升)萃取所得到的懸浮液，用水(500毫升)、鹽水(500毫升)洗滌萃取液，干燥與濃縮得到177克黃色固體。該固體被溶于沸騰的異丙醚(2升)、熱過濾并且沸騰濃縮至1.4升體積。通過過濾冷卻的混合物來收集因冷卻形成的固體。用冷異丙醚洗滌并干燥(107克)。由母液得到第二次收獲(12.2克)。通過在2-丙醇/CH2Cl2比值為1～4％的硅膠上色譜提純濃母液以及使提純產(chǎn)物自異丙醚中重結晶得到第三次收獲(4.4克，總產(chǎn)率123.6克，57％)mp 106-109℃；1H NMR(CDCl3)d 7.35-7.2(m，5H)，5.11(septet，1H，J＝6.2Hz)，4.01(d，1H，J＝2.2Hz)，3.30(ddd，1H)，2.91(A of AB，1H，J＝6.3，13.3Hz)，2.71(B of AB，1H，J＝8.5，13.3Hz)，1.8(br，2-3H)，1.25(d，6H，J＝6.2Hz)；TSP-MS238(MH+).
實施例2 5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺鹽酸鹽。
按照步驟A偶聯(lián)(3S)-氨基-(2R)-羥基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯基丁-1-酮二鹽酸鹽(0.25毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(0.30毫摩爾)。在硅膠上通過色譜提純的產(chǎn)物用0.5～8％乙醇/CH2Cl2洗脫后得到產(chǎn)率為42％的標題化合物，同時得到13％極性較弱的物質(zhì)，經(jīng)1HNMR表征為相應的N，O-雙(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)衍生物。將極性較強的目的產(chǎn)物(48毫克)溶于甲醇與0.25毫升1NHCl的混合物中，濃縮所得到的溶液，用乙醚研磨所得到的固體，得到標題物質(zhì)(42毫克)HPLC(70/30)80％，2.53分鐘與13％，4.04分鐘，后者在停留時間上對應于上面分離得到的N，O-雙鄰-?；苌?br> 1H NMR(D2O)δ7.70(s，1H)，7.5-7.2(m，7H)，7.05(s，1H)，4.57(m，1H)，4.47(m，1H)，4.04(m，1H)，3.58(m 4H)，3.34(m，4-5H)，2.97(s，1.5H)，2.91(s，1.5H).PBMS 455/457(MH+，100％)實施例2A (3S)-氨基-(2R)-羥基-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-苯基丁-1-酮二鹽酸化物在25℃將〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧代丙基〕氨基甲酸叔丁酯(0.190克，0.5毫摩爾)溶于4M HCl-二惡烷，歷時0.5小時。濃縮該混合物并且用乙醚研磨殘余物，干燥，得到212毫克，HPLC(15/85)2.85分鐘；PBMS278(MH+，100％)。
實施例2B 〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-氧代-丙基〕氨基甲酸叔丁酯按照步驟A偶聯(lián)N-甲基哌嗪(75毫克，0.75毫摩爾)和(2R，3S)-3-叔丁氧羰基胺基-2-羥基-4-苯基丁酸(0.200克，0.68毫摩爾)，得到無須提純便可以使用的無色泡沫，產(chǎn)率225毫克，88％；PBMS378(MH+，100％)。
實施例3 5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-羥基甲胺基甲?；谆?-2-苯基乙基〕酰胺按照步驟A偶聯(lián)甲胺鹽酸鹽(0.38毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.35毫摩爾)，不同的是在DMF中于0～25℃下進行。粗產(chǎn)物在硅膠上于1～8％乙醇中，于含0.5％NH4OH的CH2Cl2中進行色譜提純，得到標題物質(zhì)產(chǎn)率82％；
HPLC(70/30)98％ 3.09min；PBMS 386/388(MH+，100％)；分析計算C20H20ClN3O3+0.25H2OC，61.54；H，5.29；N，10.76.實測值C，61.17；H，5.63；N，10.83.
實施例4 (3S)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯按照步驟A偶聯(lián)(3S)-氨基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(0.8毫摩爾，WO 9325574實施例1A)與5-氟-1H-吲哚-2-羧酸(0.8毫摩爾)，不同的是在0～25℃進行并且用酸隨后用堿萃取，通過用乙醚研磨提純粗產(chǎn)物產(chǎn)率71％；HPLC(60/40)4.51min(98％)；mp219.5-210℃；PBMS 371(MH+，100％)；分析計算C20H19FN2O4+0.25H2OC，64.08；H，5.27；N，7.44.實測值C，64.14；H，5.30；N，7.48.
實施例5 (3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯按照步驟A偶聯(lián)(3S)-氨基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(WO 93/25574，實施例1A)(0.7毫摩爾)和5-溴-1H-吲哚-2-羧酸(0.7毫摩爾)，不同的是在0～25℃下進行。粗產(chǎn)物含25％N，O-雙-?；牧?HPLC)并且無須進一步提純被用于后續(xù)轉化產(chǎn)率97％，HPLC(70/30)4.03分鐘(73％)，11.8分鐘(25％)。為了表述特征與生物試驗用乙醚-己烷研磨樣品HPLC(70/30)4.03分鐘(94％)11.7分鐘(4％)。
FABMS 431/433(MH+，35％)，307(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.31(br，1H)，7.75(d，1H，J＝ca.2Hz)，7.35-7.20(m，7H)，6.73(d，1H，J＝1.6Hz)，6.47(d，1H，J＝9.6Hz)，4.80(m，1H)，4.21(dd，1H，J＝2，5Hz)，3.72(s，3H)，3.33(d，1H，J＝4Hz)，3.06(m，2H).分析計算C20H19BrN2O4C，55.70；H，4.44；N，6.50.實測值C，56.12；H，4.62；N，6.16.
實施例6 5-氟-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-二甲胺基甲?；u基甲基)-2-苯乙基〕酰胺二甲胺鹽酸鹽(0.52毫摩爾)與(3R)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酸(0.43毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，不同的是在25℃下進行。粗產(chǎn)物被溶于CH2Cl2，得到的溶液與約200毫克二甲胺基吡啶-聚苯乙烯樹脂(Aldrich化學公司，Milwaukee，Wl)一起被攪拌1小時，過濾、濃縮，得到無色固體產(chǎn)物產(chǎn)率62％，HPLC(60/40)4.15分鐘(97％)；mp 213-214℃；TSPMS 384(MH+，100％)；分析計算C21H22FN3O3C，65.78；H，5.78；N，10.96.實測值C，65.89；H，6.16；N，11.00.
實施例7 5-溴-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲胺基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.36毫摩爾)與3-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-2-羥基-4-苯基丁酸(0.36毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，在硅膠上通過色譜提純粗產(chǎn)物(用30％與40％乙酸乙酯/己烷洗脫)，隨后用1∶1乙醚/己烷研磨產(chǎn)率65％；HPLC(60/40)5.77 minutes(100％)；PBMS4 60/462(MH+，90％)；分析計算C21H22BrN3O4C，54.79；H，4.82；N，9.13.實測值C，54.88；H，5.22；N，8.83.
實施例8 5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.3毫摩爾)與5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(0.3毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，通過用乙醚研磨提純粗產(chǎn)物產(chǎn)率59％，HPLC(60/40)7.45分鐘(100％)，PBMS430/432(MH+，100/40％)；1H NMR(CDCl3)δ8.98(br，1H)，7.56(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.15(m，7H)，6.35(d，1H，J＝9Hz)，4.95(m，1H)，4.32(d，1H，J＝5.1Hz)，3.81(d，1H，J＝5Hz)，3.36(s，3H)，3.15(s，3H)，3.15(dd，1H)，3.03(dd，1H，J＝13，16Hz)，2.51(s，3H).分析計算C22H24ClN3O4C，61.46；H，5.63；N，9.77.實測值C，61.13；H，5.53；N，9.74.
實施例8A 5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-羧酸將2N NaOH(20毫升)加入5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(7.0克，29.4毫摩爾)于甲醇(50毫升)中的懸浮液并且在25℃攪拌18小時。加入四氫呋喃(100毫升)，回流加熱30分鐘并且濃縮。將殘余物溶于水并且用乙酸乙酯萃取2次。酸化水層并且過濾收集沉淀，用水(5.24克)洗滌。
實施例8B 5-氯-3-甲基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯如Lions與Hughes(J.Prot.Roy.Soc.N.S.Wales 1939，71445)所述通過對氯苯胺與2-乙基乙酰乙酸乙酯進行Japp-Klinglmann反應制備2-氧代丁酸乙酯的對氯苯腙。按照應用于相應的溴苯腙的Lions-hughes方法用HCl-乙醇處理苯腙。將濃縮殘余物懸浮于水后，過濾收集橙色固狀標題化合物。
實施例8C (3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽31055-274-231055-85-1于25℃將{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基-甲基氨基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}-胺基甲酸叔丁酯(791毫克，2.3毫摩爾)溶于4M HCl-二惡烷，歷時45分鐘，濃縮，殘余物與乙醚共蒸發(fā)，被懸浮于乙醚，經(jīng)過濾得到583毫克(91％)標題化合物。
實施例8D {(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲胺基甲?；?甲基〕-2-苯基乙基}胺基甲酸叔丁酯(3S)-叔丁氧羰基胺基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(10.06克，34.1毫摩爾，Schweizerhall公司；S.Plainfield.NJ)與N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.49克，35.7毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，硅膠色譜提純粗產(chǎn)物(10.7克)，洗脫劑25～50％乙酸乙酯/己烷，得到泡沫狀標題化合物(9.5克，83％)MS339(MH+，100％)。
實施例9 (3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(3S)-氨基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(1.2毫摩爾)與5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.2毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應時間為72小時，采用20-40％乙酸乙酯-己烷在硅膠上進行色譜提純；產(chǎn)率52％；198～202℃；TSPMS 421/423(MH+，100％)；分析計算C20H18Cl2N2O4+0.25H2OC，56.42；H，4.38；N，6.58.實測值C，56.25；H，4.17；N，6.58.
實施例9A 5，6-二氯-1H-吲哚-2-羧酸將鋅粉(3.52克，54毫摩爾)緩慢地加入3，4-二氯-5-硝基苯丙酮酸(1.5克，5.4毫摩爾)于乙酸(15毫升)中的溫熱溶液中。劇烈反應(放熱)數(shù)分鐘后，被加熱至80℃，反應完全(TLC)。過濾，用乙酸洗滌過濾的固體并且濃縮濾液。將殘余物溶于2N NaOH，用乙醚(3X)、CH2Cl2(2X)洗滌，用6NHCl酸化至pH＝1，用乙酸乙酯萃取。干燥萃取液，濃縮后得到淺棕色固體(458毫克，34％)HPLC(60/40)5.31(93％)。
實施例9B 3，4-二氯-5-硝基苯基丙酮酸鉀鹽將無水乙醇(25毫升)在3～15％加入鉀金屬(2.67克，68毫摩爾)于乙醚(100毫升)中的被攪拌的混合物中。在3℃用草酸二乙酯(10.0克，62毫摩爾)與2-甲基-3，4-二氯-1-硝基苯(10.0克，62毫摩爾)的溶液處理上述溶液5-10分鐘，在3℃攪拌30分鐘，在25℃攪拌18小時。過濾并用乙醚洗滌生成的固體，干燥(13.7克)。將該材料(12.7克)溶于400毫升熱水，冷卻該溶液并且用乙醚萃取。將水層用濃HCl酸化至pH＝2，醚層經(jīng)分離、干燥與濃縮后，得到7.5克固體，用己烷研磨得到黃色固體狀標題物質(zhì)(7.01克，41％)。
實施例10 5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.3毫摩爾)與5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸(0.3毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應歷時5天。在25℃將粗產(chǎn)物溶于含1.0當量1N NaOH的甲醇，歷時45分鐘。濃縮后將殘余物溶于乙酸乙酯，用2×2NHCl、2×2N NaOH洗滌，干燥，濃縮，在硅膠上(洗脫劑20～50％乙酸乙酯/己烷)色譜提殘余物。用1∶1乙醚-己烷研磨純化產(chǎn)物，得到標題物質(zhì)產(chǎn)率為66％；HPLC(60/40)3.9 minutes(100％)；210-211℃；PBMS 407(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.83(br，1H)，7.97(s，1H)，7.46(m，2H)，7.36(m，4H)，6.88(d，1H，J＝2Hz)，6.56(d，1H，J＝10Hz)，4.95(m，1H)，4.32(d，1H，J＝5.5Hz)，3.83(d，1H，J＝5.4Hz)，3.36(s，3H)，3.13(s，3H)，3.10(m，2H).分析計算C22H22N4O4C，65.01；H，5.46；N，13.78.實測值C，64.92；H，5.60；N，13.78.
實施例10A 5-氰基-1H-吲哚-2-羧酸將5-氰基-1H-吲哚-2-甲酸乙醇(1.71克，8.0毫摩爾)加至乙醇(10毫升)與KOH(2克)的溶液中并且回流加熱1小時。加水以便溶解沉淀。加入6N HCl，使pH＝1。形成沉淀，在冰浴中冷卻混合物。過濾，用冷水洗滌所形成的無色固體并且干燥(1.51克)。將一部分(1.4克)懸浮于熱乙酸(40毫升)中，冷卻后得到的固體經(jīng)過濾、用冷乙酸乙酯洗滌與干燥，得到980毫克，產(chǎn)率70％；HPLC(60/40)3.09分鐘(97％)。
實施例10B 5-氰基-1H-吲哚-2-羧酸乙酯將鋅粉(57.8克，887毫摩爾)以保持回流的速度加至3-氰基-5-硝基苯丙酮酸乙酯(23.2克，88毫摩爾)于乙酸(225毫升)中的熱懸浮液和水(225毫升)中(注意，開始時劇烈放熱)，反應保持回流0.5小時。過濾混合物，用熱乙酸(150毫升)洗滌被濾出的鹽，冷卻濾液過夜，過濾晶體，用冷1∶1乙酸/水和水洗滌，干燥(10.11克，53％)。濃縮濾液，將殘余物溶于乙酸乙酯，用飽和NaHCO3水溶液、鹽水洗滌，干燥與濃縮，得到第二批產(chǎn)物(5.05克)。
主要部分被用于后續(xù)轉化。
實施例10C 3-氰基-5-硝基苯丙酮酸乙酯于0℃將乙醇鈉的乙醇溶液(來自2.2克、400毫摩爾鈉金屬，于400毫升乙醇中)加至被蒸餾的草酸二乙酯(120克，821毫摩爾)與3-甲基-4-硝基芐腈(32克，197毫摩爾)的混合物中。所得到的紅色溶液在40℃被加熱18小時。用水(600毫升)稀釋該被冷卻的混合物并且用濃HCl酸化至pH＝2.1。過濾13℃混合物，收集所形成的沉淀，干燥，硅膠(洗脫劑15、30與50％丙酮/己烷)色譜提純，得到無須提純便可以使用的橙色固體(23.6克，31％)。
實施例11 5-甲基-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.5毫摩爾)與5-甲基-1H-吲哚-2-甲酸(0.5毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，首先用酸、隨后用堿萃取，在硅膠上用色譜(20～50％乙酸乙酯/己烷)提純產(chǎn)率75％；HPLC(60/40)5.06分鐘(99％)；PBMS396(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.14(br，1H)，7.4-7.2(m，6H)，7.07(dd，1H，J＝2，ca.8Hz)，6.76(d，1H，J＝2Hz)，6.45(d，1H，J＝9.7Hz)，4.90(m，1H)，4.29(d，1H，J＝5.5Hz)，3.83(d，1H，J＝5.5Hz)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.09(dd，1H，J＝6，13Hz)，3.00(dd，1H，J＝9，13Hz)，2.42(s，3H).分析計算C22H25N3O4C，66.82；H，6.37；N，10.18.實測值C，66.97；H，6.48；N，10.33.
實施例12 5-氟-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羥基(甲氧甲基胺基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.5毫摩爾)與5-氟-1H-吲哚-2-甲酸(0.5毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，首先用酸隨后用堿洗滌，在硅膠上進行色譜提純(洗脫劑20～50％乙酸乙酯/己烷)產(chǎn)率，69％HPLC(60/40)4.55 minutes(95％)；PBMS 400(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.34(br，1H)，7.4-7 2(m，7H)，7.00(dt，1H，J＝2.5，9.1Hz)，6.80(d，1H，J＝1.6Hz)，6.48(d，1H，J＝9.5Hz)，4.93(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5.3Hz)，3.83(d，1H，J＝5.3Hz)，3.35(s，3H)，3.14(s，3H)，3.08(dd，1H，A，AB)，3.02(dd，1H，J＝5，11Hz，B，AB).分析計算C21H22FN3O4C，63.15；H，5.55；N，10.52實測值C，64.19；H，6.07；N，10.91.
實施例13 1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲基胺基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺
(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.26毫摩爾)與1H-吲哚-2-羧酸(0.28毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，在硅膠上色譜提純(洗脫劑20～50％乙酸乙酯/乙烷)產(chǎn)率，87％；HPLC(60/40)4.26分鐘(96％)；PBMS382(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.24(br，1H)，7.63(d，1H，J＝8.0Hz)，7.4-7.15(m，8H)，7.11(dt，1H，J＝8.0，1.5Hz)，6.85(d，1H，J＝1.5Hz)，6.48(d，1H，J＝9.8Hz)，4.94(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5.5Hz)，3.84(d，1H，J＝5.4Hz)，3.36(s，3H)，3.14(s，3H)，3.09(dd，1H，J＝6，13Hz，A，AB)，3.03(dd，1H，J＝10，13Hz，B，AB).分析計算C21H23N3O4；C，66.13；H6.08；N，11.02實測值C，66.19；H，6.08；N，11.02。
實施例14 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(甲氧甲胺基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-4-苯基丁酸(357毫克，1.0毫摩爾)與N，O-二甲羥基胺鹽酸鹽，98％(98毫克，1.0毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，以二甲基甲酰胺為溶劑。用乙醚研磨所形成的泡沫，將粘稠固體溶于CH2Cl2，濃縮并用己烷研磨；產(chǎn)率215毫克，54％；HPLC(60/40)6.38分鐘(98％)；PBMS400/402(MH+，100％)；分析計算C21H22ClN3O3C.63.08；H，5.55；N，10.51。實測值C，62.91；H，5.79；N，10.21。
實施例14A (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸將2N NaOH(3.0毫升)于25℃加至(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸甲酸(1.28克，3.45毫摩爾)于甲醇(10毫升)中的懸浮液中。18小時后，用四氫呋喃(10毫升)稀釋，回流加熱10分鐘，濃縮。所形成的固體與6NHCl在一起被攪拌15分鐘。過濾懸浮液，用2NHCl洗滌所產(chǎn)生的固體，干燥；產(chǎn)率1.15克，93％；HPLC(60/40)5，18分鐘(100％)。
實施例15 (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯將1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(DEC，71克，370毫摩爾)于25℃加至由(3S)-氨基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(WO93/25574，實施例1A，77.5克，370毫摩爾)、5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(72.45克，370毫摩爾)與1-羥基苯并三唑水合物于CH2Cl2(640毫升)中組成的混合物中。攪拌18小時后，濃縮、殘余物被溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗滌2次，用1NHCl洗滌2次，用鹽水洗滌，干燥，濃縮，得到無須提純便可用于后續(xù)水解過程的黃色泡沫狀標題物質(zhì)(140.7克，98％)(HPLC(70/30)3.61分鐘(82％)，9.57分鐘(13％))。在硅膠上(乙酸乙酯/己烷)色譜提純得到純樣品，mp180～183℃。1H NMR(CDCl3)δ9.52(br，1H)，7.55(d，1H，J＝2Hz)，7.35-7.15(m，7H)，6.70(d，1H，J＝2Hz)，6.50(d，1H，J＝10Hz)，4.82(m，1H)，4.22(s，1H)，3.72(s，3H)，3.4(br，1H)，3.05(m，2H).13CNMR(CDCl3，75.5mHz)δ174.2，164.4，137.1，135.0，131.1，129.8，128.8，128.3，127.0，126.2，125.0，121.0，113.2，102.3，70.4，43.3，43.1，38.1.TSPMS 387/389(MH+，100/30％)分析計算C20H19ClN2O4+0.5H2OC，60.69；H，5.09；N，7.08.實測值C，60.38；H，4.98；N，6.86.
實施例6 3-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕(2RS)-羥基丙酸(RS)-3-氨基-2-羥基丙酸甲酯鹽酸鹽(6.6毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(6.6毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)。不同的是先用酸、后用堿萃取，在第一次用酸洗滌過程中出現(xiàn)沉淀，所以按照步驟A的通常方式過濾混合物。將粗產(chǎn)物920毫克溶于甲醇并且于25℃用1N NaOH(6.6毫升)處理2小時，加入1N NaOH(6.6毫升)，濃縮混合物，將殘余物溶于乙酸乙酯，用2NHCl、鹽水洗滌，干燥，濃縮。在氯仿中攪拌所產(chǎn)生的無色固體，過濾得到標題化合物產(chǎn)率763毫克，40％；HPLC(60/40)2.86分鐘(89％)；mp214-215℃；PBMS 283/285(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.78(s，1H)，8.62(t，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.42(d，1H，J＝8.7Hz)，7.17(dd，1H，J＝2，8.7Hz)，7.14(d，1H，J＝2Hz)，4.18(dd，1H，J＝5.8Hz)，3.58(m，2H).分析計算C12H11ClN2O4+0.1H2O；C，50.66；H，3.97；N，9.85.實測值C，50.80；H，4.06；N，9.48.
實施例16A (RS)-3-氨基-2-羥基丙酸甲酯鹽酸鹽將D，L-異絲氨酸(2.06克，19.6毫摩爾)、甲醇(20毫升)與氯三甲基硅烷(9.5克，88毫摩爾)的混合物回流加熱5小時，冷卻、濃縮得到標題化合物(3.20克)。
實施例17 5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-((R)-甲氧甲胺基甲酰基甲基)-2-苯乙基〕酰胺(3S)-氨基-(2R)-甲氧基-N，N-二甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.84毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.80毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，溶劑為2∶1 CH2Cl2二甲基甲酰胺，在硅膠上(1∶1乙酸乙酯/己烷)進行色譜提純產(chǎn)率，81％；HPLC(60/40)5.44分鐘(100％)；TSPMS 414/416(MH+，100/30％)；1H NMR(CDCl3)δ9.38(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，6H)，7.20(dd，1H，J＝2，9Hz)，7.03(d，1H，J＝8Hz)，6.92(d，1H，J＝2Hz)，4.50(m，1H)，4.00(d，1H，J＝2Hz)，3.40(s，3H)，3.22(dd，A of AB，1H，J＝5，13Hz)，3.00(dd，B ofAB，1H，J＝10，13Hz)，2.86(s，3H)，2.65(s，3H).分析計算C22H24ClN3O3C，63.48；H，5.84；N，10.15.實測值C，63.48；H，5.97；N，9.97實施例17A (3S)-氨基-(2R)-甲氧基-N，N-二甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(1S，2R)-(1-芐基-2-二甲基胺基甲酰基-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯(283毫克，0.84毫摩爾)在25℃被溶于4N HCl-二惡烷(1毫升)，歷時1.5小時，濃縮，殘余物與乙醚共蒸發(fā)，干燥。
實施例17B (1S，2R)-(1-芐基-2-二甲胺基甲酰-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯氫化鈉/油分散液(53毫克，50％)于0℃被加入由(1S，2R)-(1-芐基-2-二甲胺基甲酰-2-羥乙基)胺基甲酸叔丁酯(322毫克，1.0毫摩爾)與四氫呋喃(4毫升)組成的溶液。待泡騰(數(shù)分鐘)停止后，加入甲基碘(155毫克)，15分鐘后，另外加入NaH分散液11毫克和23毫克甲基碘。又過了15分鐘，加入NH4Cl水溶液和乙酸乙酯，分離有機相，用水、2NNaOH洗滌，干燥與濃縮，得到無須進一步提純就可以使用的粘油狀物產(chǎn)率283毫克，84％。
實施例17C (1S，2R)-(1-芐基-2-二甲胺基甲酰-2-羥乙基)胺基甲酸叔丁酯(3S)-叔丁氧羰基胺基-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(Schueizerhall公司，S.Plainfield，NJ.1.02克，3.4毫摩爾)與二甲胺鹽酸鹽(338毫克，4.1毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(0～25℃，溶劑二甲基甲酰胺/CH2Cl2。先用酸、后用堿萃取)，得到的粗產(chǎn)物在硅膠上(1～8％乙醇/CH2Cl2洗脫劑)進行色譜提純泡沫，產(chǎn)率995毫克，91％。
實施例18 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(3-氮雜環(huán)丁烷-1-基-(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代丙基)酰胺氮雜環(huán)丁烷(0.44毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.4毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為1∶1二甲基甲酰胺-CH2Cl2，得到標題物質(zhì)，產(chǎn)率94％；HPLC(60/40)4.55分鐘(＞98％)；PBMS 412/414(MH+，100％)；分析計算C22H22ClN3O3+0.25H2O；C，63.46；H，5.45；N，10.09。
實測值C，63.61；H，5.66；N，10.27。
實施例19 5-氯-1H-吲哚-2-羧酸〔(1S)-芐基-(2R)-甲氧基-2-(甲氧甲胺基甲酰)乙基〕酰胺(3S，2R)-3-氨基-(2R)-N-二甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺(0.31毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.31毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，在硅膠上(20～40％乙酸乙酯/己烷)進行色譜提純，產(chǎn)率81％，HPLC、(60/40)7.39分鐘(98％)；PBMS 430/432(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.44(s，1H)，7.58(d，1H，J＝ca.2Hz)，7.4-7.22(m，6H)，7.19(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，6.89(d，1H，J＝ca.2Hz)，6.80(d，1H，J＝8Hz)，4.72(m，1H)，3.93(s，1H)，3.39(s，3H)，3.24(s，3H)，3.19(dd，1H，J＝5.1，13Hz，A ofAB)，3.06(s，3H)，2.95(dd，1H，J＝10.9，13Hz，B of AB).分析計算C22H24ClN3O4+0.33C6H14C，62.85；H.6.30；N，9.16.實測值C，62.91；H，6.29；N，8.95.
實施例19A (3S，2R)-3-氨基-2R，N-二甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺(1S，2R)-(1-芐基-2-甲氧甲胺基甲酰-2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯(113毫克，0.32毫摩爾)于25℃被溶于4N HCl-二惡烷(4毫升)，歷時1小時。濃縮，用乙醚研磨殘余物，得到標題化合物(93毫克，100％)。
實施例19B (1S，2R)-(1-芐基-2-甲氧甲胺基甲?；?2-甲氧乙基)胺基甲酸叔丁酯NaH分散液(30毫克，50％，于油中)被加至(1S，2R)-(1-芐基-2-甲氧基甲胺基甲?；?2-羥乙基)胺基甲酸叔丁酯于四氫呋喃(2毫升)的0℃溶液中。5分鐘后，加入甲基碘(175毫克)，在250℃靜置18小時。加入乙酸乙酯與飽和NH4Cl水溶液，分離有機層，水洗，干燥，濃縮，用硅膠進行色譜提純，用10～20％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率113毫克，52％；HPLC(60/40)6.45分鐘(＞96％)。
實施例20 〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸芐酯(1R，2S)-〔2-氨基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸芐酯鹽酸鹽(162毫克，0.38毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(71毫克，0.36毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，在硅膠上進行色譜提純，用20～75％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到玻璃狀固體標題物質(zhì)產(chǎn)率61％；TSPMS 564/566(MH+，90/60％)，581/583(MH+NH3，100/50％)。
實施例20A (1R，2S)-〔2-氨基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸芐酯鹽酸鹽于25℃在1.5小時內(nèi)將(1R，2S)-〔2-叔丁氧羰基胺基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基乙酸芐酯(170毫克，0.35毫摩爾)溶于4N HCl-二惡烷，濃縮，殘余物與乙醚共蒸發(fā)，干燥后得到油(163毫克)。MS387(MH+，100％)。
實施例20B (1R，2S)-〔2-叔丁氧羰基胺基-1-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基乙酸芐酯NaH分散液(120毫克，50％于油中，2.8毫摩爾)被加入(1S，2R)-(1-芐基-2-甲氧甲胺基甲酰-2-羥乙基)-胺基甲酸叔丁酯(858毫克，2.5毫摩爾)于四氫呋喃(8毫升)中的0℃溶液。待泡騰現(xiàn)象停止后，加入溴乙酸芐酯(0.56克，2.5毫摩爾)，使其溫度達25℃。2小時后，加入更多的NaH分散體(12毫克)，攪拌1小時，用乙酸乙酯和飽和NH4Cl稀釋，分離有機層，水洗，干燥與濃縮，得到的油狀物在硅膠上進行色譜提純，用20～75％乙酸乙酯/己烷洗脫，合并最純的餾分，得到油狀物(175毫克，15％)；MS 487(MH+)，387(100％)。
實施例21 〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕-乙酸在40psi氫氣壓力和25℃下，將〔(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲基胺基甲酰)-3-苯丙氧基〕乙酸芐酯(120毫克，0.2毫摩爾)與濕含量為50％的Pd(OH)2/碳催化劑于甲醇(50毫升)中的混合物搖動1小時。靜置30分鐘，通過助濾劑過濾，濃縮濾液，得到121毫克固體，于硅膠上進行色譜提純，用25～100％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到84毫克固體，HPLC(60/40)4.81分鐘(37％)與6.24分鐘(63％)。1HNMR與MS分析表明這些分別為5-des-Cl和標題產(chǎn)物的甲酯。這些固體被溶于THF并且在25℃用1NNaOH(170微升)處理30分鐘，濃縮溶液，將殘余物分配在乙酸乙酯與1N HCl之間。分離有機層，水洗、干燥，濃縮得到標題化合物與des-5-Cl類似物的混合物產(chǎn)率85毫克，71％；HPLC(60/40)3.49分鐘(37％)，4.23分鐘(61％)；MS338(MH+，100％)；TSPMS 474/476(MH+，對于標題物質(zhì)而言，40％)，440(MH+，對于des-Cl類似物而言，95％)。
實施例22 (3S)-〔(1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰胺(2R，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰胺(0.59毫摩爾，US 4599198，實施例1D)與吲哚-2-甲酸(0.71毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，先用酸、隨后用堿洗滌)，得到的產(chǎn)物在硅膠上進行色譜提純，用66～100％乙酸乙酯/己烷洗脫，產(chǎn)率89％；HPLC(60/40，Dupont zorbax C-8柱)99％；MS338(MH+，100％)。1H 1HNMR(DMSO-d6)δ11.53(s，1H)，7.95(d，1H，J＝9Hz)，7.63(d，1H，J＝8Hz)，7.5-7.15(m，7-8Hz)，7.12(d，1H，J＝ca.7Hz)，7.09(d，1H，J＝ca.8Hz)，5.95(d，1H，J＝6Hz)，4.55(m，1H)，3.93(m，1H)，2.98(dd，1H，A of AB，J＝6，13Hz)，2.88(dd，1H，B of AB，J＝8，13Hz).
實施例23 (3S-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酰胺將5-氯-1H-吲哚-2-碳酰氟(0.30克，1.29毫摩爾)加入(2S，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.319克，1.61毫摩爾)與三乙胺(145毫克，1.42毫摩爾)于CH2Cl2(2毫升)中的25℃溶液中。18小時后，用乙酸乙酯稀釋，用1NHCl兩次、飽和NaHCO3水溶液2次、鹽水1次洗滌，干燥與濃縮，在硅膠上色譜提純殘余物，用50～100％乙酸乙酯-己烷洗脫，得到的固體(0.31克)自異丙醇中重結晶得到0.020克；FABMS 372/374(MH+，21％)，217(100％)。1HNMR(DMSO-d6.部分)δ8.5(d，1H，J＝9Hz)，7.48(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，9H)，5.95(d，1H，J＝7Hz)，4.56(m，1H)，4.08(m，1H)，2.92(dd，1H，J＝11，13Hz)，2.68(dd，J＝3，13Hz).
實施例23A 5-氯-1H-吲哚-2-碳酰氟將5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(10.0克，51.1毫摩爾)與吡啶(33.1毫摩爾)于乙腈中的溶液加至氰尿酰氟(2.76克，20.4毫摩爾)于乙腈(共計340毫升)中的25℃溶液中。反應完成后在被丁胺急冷的等分試樣上進行TLC，1小時后反應看似完全。將混合物傾入冰中，用乙醚萃取，干燥(Na2SO4)濃縮得到固體無須提純便可使用(10.0克，99％)。急冷的丁胺等分試樣的TLC表明存在某些5-氯吲哚-2-甲酸與極性較弱的N-丁胺。在硅膠上進行色譜提純，用乙酸乙酯/己烷(50～100％)洗脫，以便表述其特征(163 68-130-1)。
實施例23B (2S，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽〔(1S)-((S)-氨基甲酰羥甲基)-2-苯乙基〕胺基甲酸叔丁酯(0.50克，1.7毫摩爾)在25℃被溶于4M HCl-二惡烷，歷時1小時。該混合物被濃縮后，用乙醚研磨殘余物，干燥得到無色固體(430毫克)∶HPLC(60/40)2.68分鐘，100％。
實施例23C 〔(1S)-((S)-氨基甲酰羥甲基)-2-苯乙基〕胺基甲酸叔丁酯將氟化叔丁銨(23毫升，1M于四氫呋喃中)加入{(1S)-〔(1S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)胺基甲酰甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸叔丁酯于四氫呋喃(6毫升)中的0℃溶液中。30分鐘后，用乙酸乙酯和水稀釋，分離有機相，用水、2X 1 NHCl、2X 1N NaHCO3、和鹽水洗滌。通過助濾劑過濾所形成的乳液，干燥濾液，濃縮，得到無色固體(0.5克，20％)。一部分過濾的固體(3.3克)自熱乙酸乙酯中重結晶，熱濾后得到無色固體(1.33克)。
實施例23D {(1S)-〔(S)-(叔丁基二甲硅烷氧)胺基甲酰甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸叔丁酯在15分鐘內(nèi)將30％過氫化氫(7.2毫升，64毫摩爾)加入〔(1S)-芐基-(2S)-(叔丁基二甲硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯(實施例24D，5.0克，12.8毫摩爾)與1NNaOH(22毫升)于乙醇(110毫升)的0℃溶液中。攪拌1.5小時，用10％硫代硫酸鈉水溶液(175毫升)處理后，濃縮，用乙酸乙酯萃取。用Na2SO4干燥萃取液并且濃縮。在硅膠上進行色譜提純，用20～30％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到無色固態(tài)標題化合物(3.17克，61％)。
實施例24 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(S)-羥基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(0.4毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酸(0.38毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)并且在硅膠上進行色譜提純，用20～50％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率72％；HPLC(60/40)5.05分鐘；98％；PBMS 416/418(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.30(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.33(d，1H，J＝8Hz)，7.3-7.15(m，6-7H)，6.75(m，2H)，5.00(m，1H)，4.65(d，1H，J＝4Hz)，3.71(s，3H)，3.06(s，3H)，2.87(m，2H)，1.6(br).分析計算C21H22ClN3O4+0.35H2OC，59.74；H，5.42；N，9.95.實測值C，60.14；H，5.65；N，9.55.
實施例24A (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酸將1N NaOH(2.6毫升)水溶液加至(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(500毫克，1.29毫摩爾)于甲醇中的25℃溶液中。18小時后，濃縮，將殘余物溶于乙酸乙酯與水，將其用6NHCl酸化至pH＝1。分離水層，用乙酸乙酯萃取3次，合并有機層，干燥與濃縮，得到固體417毫克(87％)HPLC(60/40)4.23(＞98％)。
實施例24B ((3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2S)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(3S)-胺基-(2S)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(1.4毫摩爾)和5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(1.37毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，反應時間為40小時，溶劑為1∶1 CH2Cl2/二甲基甲酰胺，標題產(chǎn)物產(chǎn)率為94％；HPLC(60/40)5.38分鐘(97％)；mp214～221℃；PBMS 387/389(MH+，100％)；分析計算C20H19ClN2O4C，62.10；H，4.95；N，7.24。實測值C，62.16；H，5.07；N，7.11。
實施例24C (3S)-氨基-(2S)-羥基-4-苯基丁酸甲酯將〔(1S)-芐基-(2S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯(417毫克)加至無水HCl(3.2克)于甲醇(20毫升)中的溶液中，將該溶液封閉，在25℃保持5天。濃縮后得到308毫克無色固體通過1HNMR(D2O)表明呈均相。將其與采用同樣方式由400毫克同種前體制得的光譜等同物料合并，將其溶于NaHCO3飽和水溶液，用氯仿萃取10次，合并萃取液，干燥與濃縮，得到標題物質(zhì)(328毫克，25％)。
實施例24D 〔(1S)-芐基-(2S)-(叔丁基二甲基硅烷氧)-2-氰基乙基〕胺基甲酸叔丁酯借助US 4599198實施例1B所述步驟將N-叔丁氧羰基-(3S)-氨基-(2RS)羥基-4-苯基丁腈轉化為相應的O-叔丁基二甲基甲硅烷基醚。借助硅膠色譜分離異構體(7～8％乙醚/己烷)。這樣便將標題物質(zhì)與其極性略弱的2R異構件(US4599198實施例1B)相分離。
實施例24E N-叔丁氧羰基-(3S)-胺基-(2RS)-羥基-4-苯基丁腈將亞硫酸氫鈉(4.38克)于水(100毫升)中的5℃溶液加入N-叔丁氧羰基-L-苯基丙氨酸醛(J.Med.Chem 1985，卷28，1779-1790，10.0克，40.1毫摩爾)于二甲氧乙烷(100毫升)中的0～5℃溶液。混合物在0℃被攪拌2小時，隨后在25℃攪拌過夜。濃縮至80毫升，用乙酸乙酯(250毫升)稀釋，用氰化鉀(2.61克，40.1毫摩爾)處理。在25℃下經(jīng)過4小時后，分離有機層，水洗2次，用鹽水洗滌1次。干燥與濃縮后，所形成的油自乙醚/己烷中結晶，形成無色固體(3.53克)mp95～98℃。通過母液(5.0克)自乙醚/己烷中重結晶(無色固體，2.44克)得到第二批產(chǎn)物mp88～92℃。該低熔點物料被用于后續(xù)甲硅烷基化轉化過程。
實施例25 (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸2N NaOH(375毫升)水溶液于10～22℃被加至粗(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)-胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(含13％N，O-雙-5-氯-1H-吲哚-2-羰基雜質(zhì)，140.7克，363毫摩爾)于甲醇(1900毫升)中的溶液，在25℃被攪拌。2小時后，濃縮并將殘余物溶于乙酸乙酯(2升)與2NHCl(500毫升)。分離水相，用2NHCl洗滌2次，合并有機相，用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥，濃縮。殘余物(137.6克)在100毫升熱乙酸乙酯(懸浮液)中固結，加入氯仿(1300毫升)，回流加熱形成的懸浮液，同時機械攪拌5分鐘，熱濾，用接近沸騰的氯仿-乙酸乙酯(3∶1，400毫升)洗滌過濾的固體。所形成的固體被真空干燥至恒定重量(101克，75％)。濃縮濾液并且通過在熱四氫呋喃(70毫升)中溶解被重結晶，加入熱己烷(200毫升)，冷卻過夜，過濾，用THF-己烷(1∶5)洗滌形成的固體，得到7.03克(5％)。后一操作的母液被濃縮，按照相同步驟重結晶，得到11.07克(8％)。所有這三份的HPLC(60/40)均表明4.2分鐘(＞98％)。借助HPLC(C8 Zorbax 15厘米柱，600∶400∶2∶1水-乙腈-三乙胺-乙酸)對5-氯-1H-吲哚-2-甲酸含量進行分析表明在這三份中分別為0.4％、0.7％、和21％。主要份額mp209～212℃；TSPMS 373/375(MH+100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.6(br，1H)，11.7(s，1H)，8.17(d，1H，J＝9.1Hz)，7.71(d，1H，J＝2Hz)，7.39(d，1H，J＝8.7Hz)，7.28(m，4H)，7.17(m，3H)，5.55(br，1H)，4.57(m，1H)，4.05(d，1H，J＝3.6Hz)，2.97(dd，1H，A of AB，J＝6.5，13.5Hz)，2.87(dd，1H，B of AB，J＝8.5，13.5Hz).分析計算C19H17ClN2O4C，61.21；H，4.60；N，7.51.實測值C，61.09；H，4.63；N，7.59.
實施例26(3R)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸在25℃將(3S)-〔(5-氟-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(190毫克，0.5毫摩爾)、1N NaOH(1毫升)與甲醇(5毫升)攪拌18小時。用1NHCl將pH值調(diào)至1～2，濃縮，在25℃水中研磨固體并過濾。用乙醚洗滌所形成的固體并且干燥，得到無色玻璃；(160mg，87％)HPLC(60/40)3.49 minutes(99％)；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ8.15(d，1H，J＝8Hz)，7.42(m，2H)，7.3(m，4H)，7.15(m，2H)，7.03(dt，1H)，4.60(m，1H)，4.03(d，1H)，3.00(dd，1H，J＝8，13Hz)，2.90(dd，1H，J＝8，13Hz.
實施例27 (3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸將1N NaOH(60毫升)水溶液加入(3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(2.45克，5.7毫摩爾)于甲醇(60毫升)中的25℃溶液中。2小時后，濃縮并且將其分配在乙酸乙酯與2NHCl之間。分離水層，用乙酸乙酯萃取，用1NHCl、鹽水洗滌合并的有機層。干燥與濃縮后，在25℃用氯仿研磨所形成的固體產(chǎn)率85％，HPLC(60/40)4.24 minutes(100％)；mp213-216℃；TSPMS417/419(MH+，98％)；1H NMR(部分，DMSO-d6)δ11.72(br，1H)，8.20(d，1H，J＝10Hz)，7.86(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，8H)，4.60(m，1H)，4.04(d，1H，J＝3.5Hz)，3.00(dd，1H，A ofAB，J＝7，13Hz)，2.88(dd，1H，B of AB，J＝8.5，13Hz).分析計算C19H17BrN2O4+0.25H2OC，54.11；H，4.18；N，6.64.實測值C，54.15；H，4.15；N，6.64.
實施例28 (3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸將含水1N NaOH(1.18毫升)加至(3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(249毫克，0.6毫摩爾)于甲醇(5毫升)中的25℃懸浮液中。18小時后，濃縮，將殘余物分配于過量2NHCl與乙酸乙酯之間，分離水層并用乙酸乙酯洗滌，用鹽水洗滌合并的有機層，干燥濃縮后得到黃色固體，產(chǎn)率259毫克，HPLC(60/40)4.96 minutes(100％)；TSPMS 407/409(MH+，100/40％)；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ11.8(br，1H)，8.28(d，1H，J＝9Hz)，7.98(s，1H)，7.58(s，1H)，7.3-7.15(m，6H)，4.60(m，1H)，4.07(d，1H，J＝3-4Hz)，2.98(dd，1H，A of AB，J＝6，13Hz)，2.88(dd，1H，J＝9，13Hz).分析計算C19H16Cl2N2O4+0.5H2OC，54.82；H，4.12；N，6.73.實測值C，54.86；H，4.08；N，6.76.
實施例29 (3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸將1N NaOH(1.69毫升)水溶液加至(3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(326毫克，0.8克摩爾)于甲醇中的25℃懸浮液中。2.5小時后，濃縮(發(fā)現(xiàn)原料)并且重新將其溶解于甲醇與含水1NNaOH(0.5毫升)。1小時后，濃縮，并且將其分配于過量2N HCl與乙酸乙酯之間，分離有機層，干燥與濃縮產(chǎn)率288毫克，92％；HPLC(60/40)3.89分鐘(93％)；mp215～223℃；TSPMS 373/375(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.7(br，1H)，11.65(s，1H)，8.50(d，1H，J＝8.8Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.37(d，1H，J＝8.7Hz)，7.4-7.1(m，7H)，5.7(br，1H)，4.50(m，1H)，4.17(d，1H，J＝4.8Hz)，2.94(dd，1H，A of AB，J＝10，14Hz)，2.78(dd，1H，B ofAB，J＝3，14Hz).分析計算C19H17ClN2O4+0.1H2OC，60.92；H，4.63；N，7.48.實測值C，60.72；H，4.78；N，7.53.
實施例29A (3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(2R，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸甲酯鹽酸鹽(239毫克，1.0毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(200毫克，1.05毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，先用酸后用堿洗滌，得到的粗產(chǎn)物無須提純便可使用產(chǎn)率328毫克，87％。
實施例29B (2R，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸甲酯鹽酸鹽(2R，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸(200毫克，1.0毫摩爾，Sigma化學公司，St.Louis，MO)、氯三甲基硅烷(500毫克，4.6毫摩爾)與甲醇(2毫升)被回流加熱5.5小時，濃縮成泡沫體產(chǎn)率244毫克，100％。
實施例30 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(2RS)-羥基-2-(甲氧甲基胺基甲酰)乙基〕酰胺N，O-二甲羥基胺鹽酸鹽(1.0毫摩爾)與3-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2RS)-羥基丙酸(0.95毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度0～25℃，用酸再用堿洗滌，用乙醚研磨粗產(chǎn)物，得到無色固體，產(chǎn)率69％，HPLC(60/40)3.18分鐘。
(96％)；mp192-192.5℃；FBMS 326/328(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.80(s，1H)，8.62(t，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.41(d，1H，J＝8.8Hz)，7.17(dd，1H，J＝2，8.7Hz)，7.13(s，1H)，5.35(m，1H)，4.65(m，1H)，3.69(s，3H)，3.47(m，2H)，3.34(s，3H).分析計算C14H16ClN3O4C，51.62；H，4.95；N，12.90.實測值C，51.78；H，5.07；N，12.75.
實施例31 (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰胺將明顯過量無水氨導入(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸甲酯(100毫克，0.27毫摩爾)于甲醇(10毫升)中的溶液并且在不銹鋼Parr反應器(＜50psi)中在70℃加熱48小時。冷卻濃縮，用乙醚研磨形成的固體產(chǎn)率約60％；HPLC 3.52 minutes(95％)；PBMS 372/374(MH+，100％)；；1H NMR(partial，DMSO-d6)δ11.75(s，1H)，8.04(d，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.5-7.1(m，9H)，5.90(br，1H)，4.52(br，1H)，3.93(br，1H)，2.95(dd，1H)，2.88(dd，1H).分析計算C19H18ClN3O3+0.5H2OC，59.92；H，5.03；N，11.03.實測值C，59.66；H，5.10；N，11.40.
實施例32 5，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺N，O-二甲羥基胺鹽酸鹽(0.24毫摩爾)與(3S)-〔(5，6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.22毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(反應時間96小時，用酸、隨后用堿洗滌)，在硅膠上(洗脫劑20～40％乙酸乙酯/己烷)色譜提純產(chǎn)率72％；HPLC(60/40)7.2分鐘(99％)；mp 210-211.5℃；PBMS 450/452(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ10.41(br，1H)，7.73(s，1H)，7.68(s，1H)，7.4-7.2(m，6H)，6.78(d，1H，J＝ca.1Hz)，6.58(d，1H，J＝10Hz)，5.03(m，1H)，4.34(d，1H，J＝5Hz)，3.85(d，1H，J＝5Hz)，3.37(s，3H)，3.2-3.0(m，2H)，3.10(s，3H).分析計算C21H21Cl2N3O4C，56.01；H，4.70；N，9.33.實測值C，55.61；H，4.68；N，9.22.
實施例33 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羥基-二甲胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺二甲胺鹽酸鹽(262毫克，3.22毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.0克，2.68毫摩爾)在25℃于DMF(4毫升)中通過采用三乙胺(530毫克，3.22毫摩爾)、1-羥基苯并三唑水合物(612毫克，4毫摩爾)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽而被偶聯(lián)18小時。用氯仿(80毫升)和乙酸乙酯(10毫升)稀釋該混合物并且用2NNaOH、2N HCl洗滌，干燥濃縮得到1.2克無色泡沫。將其溶于乙酸乙酯并且用2N NaOH洗滌2次，干燥與濃縮后得到1.02克無色固體。在10毫升冷乙醚中被研磨與過濾，用5毫升冷乙醚洗滌，干燥后得到無色固體產(chǎn)率715毫克，67％；mp190～192℃；HPLC(60/40)4.53分鐘(100％)；FABMS 400/402(MH+，80％)，178(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.40(s，1H)，7.55(s，1H)，7.4-7.1(m，7H)，6.86(d，1H，J＝2Hz)，6.62(d，1H，J＝9.6Hz)，4.65(m，1H)，4.40(m，2H)，3.10(m，2H)，2.88(s，3H)，2.72(s，3H).分析計算C21H22ClN3O3C，63.08；H，5.55；N，10.51.實測值C，63.03；H，5.68；N，10.25.
實施例34 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(羥甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺N-甲羥基胺鹽酸化物(167毫克，2.0毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(373毫克，1.0毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為DMF，省略堿洗步驟。在硅膠上進行色譜提純(洗脫劑0.5～4％乙醇/CH2Cl2，含0.5％乙酸)，用乙醚/己烷研磨純化產(chǎn)物產(chǎn)率13％，HPLC(60/40)4.26分鐘(97％)；mp182～184.5℃；TSPMS 402/404(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6，partial)δ11.67(br，1H)，9.89(br，1H)，8.08(d，1H，J＝10Hz)，7.71(d，1H，J＝1.9Hz)，7.39(d，1H，J＝8.8Hz)，7.35-7.1(m，7H)，4.73(m，2H)，4.51(m，1H)，3.05(s，3H)，2.93(m，2H).
實施例35 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羥基甲氧胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺N-甲氧基胺鹽酸鹽(0.77毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為DMF，在硅膠上進行色譜提純(洗脫劑1～10％乙醇/CH2Cl2)，隨后用乙醚/己烷研制；產(chǎn)率72％；HPLC(60/40)。3.35分鐘(＞99％)；mp215～216.5℃(分解)；FABMS 402/404(MH+，100％)；分析計算C20H20ClN3O4+0.7H2OC，57.96；H，5.20；N，10.14.實測值C，57.90；H，5.15；N，10.10.
實施例36 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(7.4毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(6.7毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為二甲基甲酰胺，在硅膠上進行色譜提純，洗脫劑先用40％、后用50％乙酸乙酯/己烷，用1∶1乙醚/己烷攪拌過夜，過濾收集固體并且干燥產(chǎn)70％；HPLC(60/40)5.36分鐘(99％)；mp 189-190℃；1H NMR(CDCl3)δ9.52(br，1H)，7.56(d，1H，J＝2.0Hz)，7.4-7.3(m，5H)，7.38(m，1H)，7.18(dd，1H，J＝2.0，8.8Hz)，6.76(d，1H，J＝1.4Hz)，6.53(d，1H，J＝9Hz)，4.94(m，1H)，4.31(d，1H，J＝5.2Hz，collapses to s with D2O)，3.86(d，1H，J＝5.6Hz，與D2O交換)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.13-2.98(m，2H).PBMS593/595(MH+，65％)，200(100％).
自1；3乙酸乙酯/己烷中重結晶后(于150℃收縮，mp189～190℃)，分析C21H22ClN3O4計算值C，60.65；H，5.33；N，10.10。實測值C，60.52；H，5.34；N，10.32。
實施例37 5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(2S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(1R)-(甲氧甲胺基甲酰基)-3-苯基丙酯(3S)-氨基-(2R)-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(4.2毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-羧酸(4.2毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)。在硅膠上進行色譜提純，用33～50％乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標題物質(zhì)(100毫克)與極性更強的主要物質(zhì)5-氯-1H-吲哚-2-羧酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(970毫克)以及這兩種物質(zhì)的混合物(159毫克，絕大部分為極性較強的物質(zhì))。對于標題物質(zhì)而言PBMS593/595(MH+，60％)，400(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.62(br，2H)，7.69(d，1H，J＝2Hz)，7.56(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，10H)，7.04(d，1H，J＝8.8Hz)，6.91(d，1H，J＝1.2Hz)，5.50(d，1H，J＝2Hz)，5.09(m，1H)，3.47(s，3H)，3.26(dd，1H，J＝6，13Hz)，3.14(s，3H)，2.99(dd，1H，J＝10，13Hz).
實施例38 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-吡咯烷-1-基丙基)酰胺吡咯烷(0.5毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.5毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為二甲基甲酰胺，用乙醚研制粗產(chǎn)物產(chǎn)率65％；HPLC(60/40)6.3 minutes(98％)；PBMS 426/428(MH+，100％)；；分析計算C23H24ClN3O3+0.25H2OC，64.18；H，5.74；N，9.76.實測值C，64.02；H，5.71；N，9.61.
實施例39 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(3-羥基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺3-羥基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽(0.56毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)氨基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.5毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，反應溫度為0～25℃，溶劑為1∶1二甲基甲酰胺/CH2Cl2。使用2～10％乙醇/CH2Cl2進行硅膠色譜提純，產(chǎn)率69％；HPLC(60/40)3.38分鐘(96％)；PBMS 428/430(MH+，100％)；分析計算C22H22ClN3O4+0.125H2OC，61.43；H，5.21；N，9.77.實測值C，61.09；H，5.57；N，9.68.
實施例40 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-異惡唑烷-2-基-3-氧代丙基)酰胺異惡唑烷鹽酸鹽(Cupps，T.L.等人，J，Org，Chem 1985，50，3972～3979，0.83毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.79毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，利用硅膠色譜提純，用50％與75％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率75％，HPLC(60/40)4.94分鐘(95％)；TSPMS 428/430(MH+，100％)。1H NMR(DMSO-d6)δ11.70(s，1H)，8.17(d，1H，J＝9.3Hz)，7.71(s，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.7Hz)，7.27(m，4H)，7.15(m，3H)，5.02(d，1H)，4.61(m，1H)，4.42(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.93(m，1H)，3.55(m，1H)，2.95(m，2H)，2.26(m，2H).分析計算C22H22ClN3O4C，61.75；H，5.18；N，9.82.實測值C，61.59；H，5.35；N，9.44.
實施例41 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-二乙胺基甲?；u基甲基)-2-苯乙基〕酰胺二乙胺(0.45毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.4毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用10～25％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率35％HPLC(60/40)7.06分鐘(96％)；mp218～222℃；PBMS 428/430(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.14(s，1H)，7.61(s，1H)，7.4-7.15(m，7H)，6.81(d，1.3H)，6.55(d，1H，J＝10Hz)，4.55(m，1H)，4.37(d，1H，J＝5.2Hz)，4.29(d，1H，J＝5.3Hz)，3.43(m，1H)，3.2-3.0(m，3H)，2.88(q，2H，J＝7Hz)，1.05(t，3H，J＝7.1Hz)，0.98(t，3H，J＝7.1Hz).
實施例42 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羥基-〔(2-羥乙基)甲胺基甲?！臣谆鶀-2-苯乙基)酰胺N-(2-羥乙基)甲胺鹽酸鹽(0.77毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑二甲基甲酰胺，先用酸后用堿萃取)硅膠色譜提純，用0.5～8％乙醇/CH2Cl2洗脫，用乙醚/己烷研制產(chǎn)率65％；HPLC(60/40)3.67 minutes(93％)；mp192.5-195℃；TSPMS 430/432(MH+100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.18(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.25(m，6H)，7.24(dd，1H，J＝2，9Hz)，6.85(d，1H，J＝2Hz)，6.63(d，1H，J＝9Hz)，4.85(m，1H)，4.47(m，1H)，4.06(m，1H)，3.63(m，2H)，3.12(m，2H)，2.95(s，3H)，2.85(m，1H)，2.5(br，_2H).分析計算C22H24ClN3O4C，61.46；H，5.63，N，9.77.實測值C，61.45；H，5.95；N，9.85.
實施例43 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-哌啶-1-基丙基〕酰胺哌啶鹽酸鹽(0.42毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.4毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑為1∶1CH2Cl2/二甲基甲酰胺。硅膠色譜提純，用20～25％乙酸乙酯/己烷洗脫，產(chǎn)率97％；HPLC(60/40)6.92分鐘(100％)，PBMS 440/442(MH+，100％)；分析計算C24H26ClN3O3C，65.52；H，5.96；N，9.55.實測值C，65.27；H，6.12；N，9.29.
實施例44 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-嗎啉-4-基-3-氧代丙基)酰胺嗎啉(0.55毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.5毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑二甲基甲酰胺)，用乙醚研制提純產(chǎn)率50％；HPLC(60/40)5.37 minutes(＞98％)；TSPMS 442/444(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.13(br，1H)，7.59(d，1H，J＝2Hz)，7.35-7.1(m，7H)，6.79(d，1H，J＝2Hz)，6.51(d，1H，J＝9Hz)，4.55(m，1H)，4.30(m，1H)，4.27(m，1H)，3.77(m，1H)，3.62(m，2H)，3.50(m，3H)，3.05(m.3H)，2.94(m，1H).分析計算C23H24ClN3O4C，62.51；H，5.47；N，9.51.實測值C，62.11；H，5.39；N，9.19.
實施例45 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-〔1，2〕惡嗪烷-2-基-3-氧代丙基)酰胺〔1，2〕惡嗪烷鹽酸鹽(0.42毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.4毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑為1∶1CH2Cl2/二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用25％乙酸乙酯/己烷洗脫；產(chǎn)率76％；HPLC(60/40)6.07分鐘(99％)；PBMS 442/444(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.41(br，1H)，7.58(d，1H，J＝2Hz)，7.38-7.18(m，7H)，6.78(d，1H，J＝2Hz)，6.55(d，1H，J＝9Hz)，4.89(m，1H)，4.58(s，1H)，4.00(m，1H)，3.67(m，3H)，3.10(m，2H)，1.9(br)，1.7(m，4H).分析計算C23H24ClN3O4C，62.51；H，5.47；N，9.51.實測值C，62.18；H，5.59；N，9.29.
實施例46 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-((3S)-羥基-吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺(R)-3-羥基-吡咯烷(0.58毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.56毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，硅膠色譜提純2次，用25～100％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率9％HPLC(60/40)3.87分鐘(96％)；PBMS 442/444(MH+，100％)。
實施例47 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-叔丁氧胺基甲?；u甲基)-2-苯乙基〕酰胺鄰叔丁基羥基胺鹽酸鹽(2.0毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.0毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺，省略酸洗)，硅膠色譜提純，用30～50％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率77％，HPLC(60/40)4.96分鐘(98％)；FABMS 444(MH+，90％)，511(100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.38(br，1H)，9.18(br，1H)，7.85(br，1H)，7.53(s，1H)，7.3-7.0(m，7H)，6.87(s，1H)，4.40(d，1H，J＝4Hz)，4.30(m，1H)，3.20(m，2H)，1.12(s，9H).
實施例48 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-噻唑烷-3-基丙基)酰胺噻唑烷(0.70毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.67毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑為1∶1 CH2Cl2/二甲基甲酰胺)，無須提純便可以使用所形成的產(chǎn)物產(chǎn)率93％；HPLC(60/40)5.78分鐘(96％)；PBMS 444/446(MH+，100％)；分析計算C22H22ClN3O3SC，59.52；H，5.00；N，9.47.實測值C，59.29；H，5.22；N，9.22.
實施例49 5-溴-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-二甲胺基甲?；u基甲基)-2-苯乙基〕酰胺二甲胺鹽酸鹽(0.39毫摩爾)與(3S)-〔(5-溴-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.32毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(0～25℃)，在25℃159毫克粗產(chǎn)物與處于CH2Cl2的200毫克聚苯乙烯-DMAP樹脂(AldrichChemical Co.Milwaukee.Wl)一起被攪拌1小時。過濾并濃縮濾液產(chǎn)率68％；HPLC(60/40)5.4分鐘(＞98％)；mp171-176℃；TSPMS 444/446(MH+，85％)；分析計算C21H22N3O3BrC，56.77；H，4.99；N，9.46.實測值C，5642；H，5.33；N，9.08.
實施例50 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基(吡啶-3-基胺基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺3-氨基吡啶(0.7毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用含有0.5％NH4OH的0.5％～8％乙醇/CH2Cl2洗提，隨后用乙醚研制產(chǎn)率45％，HPLC(60/40)3.08分鐘(＞99％)；TSPMS 449/451(MH+，100％)；分析計算C24H23ClN4O3+0.3H2OC，63.45；H，4.79；N，12.33.實測值C，63.35；H，5.03；N，12.37.
實施例51 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(1R)-羥基-(2，2，2-三氟乙胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}-酰胺
2，2，2-三氟乙胺(0.28毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.28毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)，用乙醚研制經(jīng)過提純的產(chǎn)物mp228～229.5℃；產(chǎn)率81％；PBMS 454/456(100％，MH+)；471/473(MH+NH3，80％)；分析計算C21H19ClF3N3O3C，55.58；H，4.22；N，9.26.實測值C，55.29；H，4.25；N，9.04.
實施例52 (S)-5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1-(甲氧甲基胺基羰基)-2-苯乙基〕酰胺1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(DEC，790毫克，4.12毫摩爾)、二氯乙酸(136毫克，1.06毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧甲基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺(287毫克，0.69毫摩爾)依次被加入無水二甲基亞砜(4毫升)與無水甲苯(4毫升)的0℃溶液中。在25℃經(jīng)過18小時后，用乙酸乙酯稀釋反應混合物，用2NHCl和飽和NaHCO3水溶液洗滌。干燥、濃縮有機相，所形成的泡沫體自乙醚中重結晶。產(chǎn)率100毫克，35％；HPLC(60/40)10.72分鐘(87％)，在該試驗中在6.68分鐘洗脫原料，其含量少于0.5％；PBMS 414/416(MH+，70％)，384/386(100％)；1H NMR(CDCl3containing 10-20％DMSO-d6)δ9.90(br，1H)，7.54(d，1H，J＝1.7Hz)，7.3-7.1(m，ca.7H)，7.04(m，1H)，6.77(s，1H)，5.40(m，1H)，3.58(s，3H)，3.2(m，2H)，3.08(s，3H).
實施例53 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-羥基-哌啶-1-基)-3-氧代-丙基〕酰胺4-羥基哌啶鹽酸鹽(0.51毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.48毫摩爾)按照步驟A(0～25℃)偶聯(lián)，用乙醚研制經(jīng)過提純的產(chǎn)物，隨后在沸騰的乙酸乙酯中進行研制，硅膠色譜提純，用50～100％乙酸乙酯/己烷洗脫；產(chǎn)率57％，HPLC(60/40)3.92分鐘(96％)；mp.230～232℃，TSPMS 456/458(MH+，100％)。1H NMR(DMSO.d6)δ11.65(br，0.5H)11.60(br，0.5H)，8.24(m，1H)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，0.5H，J＝9Hz)，7.37(d，0.5H，J＝9Hz)，7.3-7.1(m，7H)，4.3-4.7(m，2H)，4.5(m，2H)，3.8-3.65(m，3H)，3.2(m，1H)，3.1(dd，1H)，3.0(dd，1H)，1.95(m，0.5H)，1.7-1.65(m，2H)，1.4-1.25(m，1.5H).
實施例54 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-((3R，S)-羥基-哌啶-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺3-羥基哌啶(0.56毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.54毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用20～40％乙酸乙酯/己烷洗脫，用1∶1乙醚/己烷研制產(chǎn)率47％；HPLC(60/40)4.44分鐘(92％)；PBMS 456/458(MH+，100％)；分析計算C24H26ClN3O4C，63.22；H，5.75；N，9.22.實測值C，62.93；H，5.90；N，8.92.
實施例55 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-((2R)-羥甲基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺R-2-吡咯烷甲醇(1.1毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.1毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用1～8％乙醇/CH2Cl2洗脫，隨后用50％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率9％；HPLC(60/40)5.17分鐘(84％)；mp236～239℃；TSPMS456/458(MH+，100％)；分析計算C24H26ClN3O4C，63.22；H，5.75；N，9.22.實測值C，63.23；H，6.11；N，8.52.
實施例56 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-〔(2-二甲胺基乙基)甲胺基甲?！沉u甲基}-2-苯乙基)酰胺N-(2-二甲胺乙基)甲胺(0.77毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用含有0.5％NH4OH的1～8％乙醇/CH2Cl2洗脫，用乙醚/己烷研制產(chǎn)率87％HPLC(60/40)2.89分鐘(96％)；TSPMS 457/459(MH+，100％)；分析計算C24H29ClN4O3+0.2H2OC，62.59；H，6.43；N，12.16.實測值C，62.85；H，6.82；N，12.06實施例57 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3R，4R)-二羥基吡咯烷-1-基)-2-羥基-3-氧代丙基〕酰胺(3R，4R)-3，4-二羥基吡咯烷(來自2S，3S-(-)-酒石酸(非天然異構體，通過US4634775所述步驟制備)(1.0毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.0毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用乙酸乙酯洗脫，用乙醚研制產(chǎn)率72％；HPLC(60/40)3.21分鐘(97％)；TSPMS 458/460(MH+，100％)；分析計算C23H24ClN3O5C，60.33；H，5.28；N，9.18.實測值C，60.09；H，5.21；N，9.08.
實施例58 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-(3S，4S)-二羥基-吡咯烷-1-基)-2R-羥基3-氧代-丙基〕酰胺(3S，4S)-二羥基吡咯烷(來自2R，3R-(+)-酒石酸，US 4634775，1.0毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.0毫厚爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用乙酸乙酯洗脫，用乙醚研制產(chǎn)率60％；HPLC(60/40)3.02分鐘(98％)；TSPMS 458/460(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.7(br，1H)，8.18(d，1H，J＝9Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.6Hz)，7.26(m，4H)，7.15(m，3H)，5.18(d，1H，J＝4.0Hz，exchanges)，5.11(d，1H)，5.08(d，1H)，4.47(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝5，9Hz，collapses to d in D2O，3.95(m，1H)，3.89(m，1H)，3.64(dd，1H，J＝4，9Hz)，3.34(m，3H)，2.92(m，2H).分析計算C23H24ClN3O5+0.5H2OC，59.16；H，5.40；N，9.00.
C，59.44；H，5.29；N，8.95.實測值實施例59 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3R，4S)-二羥基吡咯烷-1-基)-(2R)-羥基-3-氧代-丙基〕酰胺(3R，4S)-二羥基吡咯烷鹽酸鹽(順式或內(nèi)消旋異構體，0.86毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.82毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用1～10％乙醇/CH2Cl2洗脫產(chǎn)率39％；HPLC(60/40)2.92分鐘(96％)；PBMS 458/460(MH+，100％)；分析計算C23H24ClN3O6+0.75H2OC，58.60；H，5.45；N，8.91.實測值C，59.22；H，5.52；N，8.59.
實施例59A 順式-3，4-二羥基吡咯烷鹽酸鹽(順式或內(nèi)消旋異構體)
順式-3，4-二羥基吡咯烷-2，5-二氫吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.99克，9.8毫摩爾)于5℃被溶于4M HCl-二惡烷，于25℃將其攪拌1小時。濃縮后用乙醚研制殘余物，得到淺紫色粉末(1.30克，95％)。
實施例59B 順式-3，4-二羥基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯依次用四氧化鋨(2.5％，于叔丁醇中，6毫升)和N-甲基嗎啉-N-氧化物在25℃處理2，5-二氫-吡咯-1-甲酸叔丁酯粗品溶液。48小時后，加入10％硫代硫酸鈉水溶液，攪拌30分鐘，部分濃縮以便脫除四氫呋喃，用乙醚萃取2次。用10％硫代硫酸鈉、0.1M HCl洗滌乙醚萃取液，干燥濃縮后得到的深橙色油經(jīng)過硅膠色譜提純，用1％、2％、4％、8％和10％乙醇-CH2Cl2洗提，得到琥珀色漿(4.09克)。
實施例59C 2，5-二氫-吡咯-1-甲酸叔丁酯將二叔丁基二碳酸酯(83克，380毫摩爾)加入3-吡咯啉(含35％吡咯啉，25克，362毫摩爾)于四氫呋喃(500毫升)中的0℃溶液中，在25℃攪拌1小時，濃縮得到76.2克無須提純就可以使用的黃色油狀物。
實施例60 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-硫代嗎啉-4-基丙基)酰胺硫代嗎啉(0.52毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.49毫摩爾)按照步驟A在0～25℃偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率75％，HPLC(60/40)7.12分鐘(97％)；PBMS458/460(MH+，100％).1H NMR(CDCl3，partial)δ9.15(br，1H)，7.60(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.2(m，7H)，6.80(d，1H，J＝2Hz)，6.52(d，1H，J＝9Hz)，4.55(m，1H)，4.29(s，1H)，4.10(m，1H)，3.48(m，1H)，3.30(m，1H)，3.2-2.85(m，4H)，2.62(m，1H)，2.5(m，1H)，2.4(m，1H).
實施例61 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)〔(R)-羥基-(甲基吡啶-2-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺2-甲胺基吡啶(3.4毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(3.4毫摩爾)按照步驟A進行偶聯(lián)，溶劑二甲基甲酰胺，用1-羥基-7-氮雜苯并三唑代替1-羥基苯并三唑，反應時間為18小時，未經(jīng)酸洗，硅膠色譜提純，用0.5～4％乙醇/CH2Cl2洗脫，用乙醚研制4次，產(chǎn)率5％，HPLC(60/40)5.57分鐘(95％)；TSPMS 463/465(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.73(br，1H)，8.24(m，1H)，8.18(d，1H，J＝9Hz)，7.78 (dt，1H，J＝2，9Hz)，7.72(d，1H，J＝2Hz)，7.43(s，1H)，7.41(s，1H)，7.28(m，1H)，7.25-7.1(m，5H)，7.02(m，2H)，5.05(d，1H，J＝9Hz)，4.60(m，1H)，4.35(m，1H)，3.22(s，3H)，2.70(m，2H).分析計算C25H23ClN4O3+1.3H2OC，61.74；H，5.31；N，11.52.實測值C，61.84；H，5.00；N，11.52.
實施例62 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-(4-甲酰哌嗪-1-基)-(2R)-羥基-3-氧代丙基〕酰胺1-甲?；哙?0.77毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，溶劑二甲基甲酰胺，酸洗后堿洗。硅膠色譜提純，用0.5～8％乙醇-CH2Cl2洗脫后，用乙醚/己烷研制產(chǎn)率78％，HPLC(60/40)3.45分鐘(96％)；PBMS469/471(MH+，100％)；分析計算C24H25ClN4O4+0.3H2OC，60.77；H，5.44；N，11.81.實測值C，60.65；H，5.70；N，11.85.
實施例63 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-羥甲基哌啶-1-基)-3-氧代丙基〕酰胺4-(羥甲基)哌啶(1.5毫摩爾)(J.Med.Chem 1991，34，1073)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.4毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用50～100％乙酸乙酯-己烷洗脫產(chǎn)率76％；HPLC(60/40)4.09分鐘(97％)；TSPMS 470/472(MH+，100％)；分析計算C25H28ClN3O4+0.25H2OC，63.29；H，6.05；N，8.86.實測值C，63.39；H，6.00；N，8.63.
實施例64 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羥基-〔甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺基甲酰〕甲基}-2-苯乙基)酰胺甲基-(2-吡啶-2-基乙基)胺(0.77毫摩爾)與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.70毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑二甲基甲酰胺)，硅膠色譜提純，用0.5～8％乙醇-CH2Cl2洗脫產(chǎn)率82％；HPLC(60/40)3.33分鐘(97％)；TSPMS 491/493(MH+，100)；1H NMR(CDCl3)δ9.84(br，0.7H)，9.35(br，0.3H)，8.49(m，1H)，7.7-7.5(m，2H)，7.4-7.1(m，9H)，6.92(d，0.3H，J＝8Hz)，6.8(m，1.4H)，6.65(d，0.3H，J＝9Hz)，4.62(m，1.5H)4.5(m，0.5H)，4.34(s，0.7H)，4.29(s，0.3H)，3.82(m，1H)，3.48(m，2H)，3.05(m，3H)，2.86(s，1H)，2.70(s，2H).分析計算C27H27ClN4O3+0.2H2OC，65.57；H，5.58；N，11.33.實測值C，65.56；H，5.84；N，11.36.
實施例65 1-{(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁?；鶀-哌啶-4-甲酸乙酯將4-哌啶甲酸乙酯與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.75毫摩爾)按照步驟A進行偶聯(lián)，硅膠色譜提純，用20～40％乙酸乙酯-己烷洗脫，產(chǎn)率95％；HPLC(60/40)7.96分鐘(95％)；PBMS512/514(MH+，100％)。
實施例66 1-{(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰}-吡咯烷-2(S)-甲酸叔丁酯(S)-吡咯烷-2-甲酸叔丁酯與(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(2.1毫摩爾)按照步驟A被偶聯(lián)(反應時間為60小時)，硅膠色譜提純，用25～50％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率74％，HPLC(60/40)8.27分鐘(99％)；TSPMS 526/528(MH+，100％)；分析計算C28H32ClN3O5C，63.93；H，6.13；N，7.99.實測值C，64.05；H，6.32；N，7.79.
實施例67 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1R)-〔(1S)-羥基-(甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺5-氯-1H-吲哚-2-甲酸(0.25毫摩爾)與(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽(0.25毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(0～25℃，酸洗后用堿洗)。將粗產(chǎn)物在25℃溶于含有0.25當量1N NaOH的甲醇中，歷時2小時，另外，用0.25當量1N NaOH處理1小時(以便水解極性較弱的N，O-雙-5-氯-1H-吲哚羰基衍生物)，濃縮溶液，將殘余物溶于乙酸乙酯，用2NHCl、鹽水洗滌，干燥與濃縮。硅膠色譜提純，用30～50％乙酸乙酯-己烷洗脫。將經(jīng)過色譜提純的材料(含極性雜質(zhì))溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗滌2次，干燥與濃縮產(chǎn)率57％；HPLC(60/40)5.36分鐘(98％)；mp165～167℃，PBMS 416/418(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.45(br，1H)，7.58(d，1H，J＝2Hz)，7.4-7.1(m，7H)，6.77(d，1H，J＝2Hz)，6.51(d，1H，J＝10Hz)，4.91(m，1H)，4.30(d，1H，J＝5Hz)，3.83(d，1H，J＝5Hz)，3.35(s，3H)，3.13(s，3H)，3.09(m，2H).分析計算C21H22ClN3O4+1.0H2OC，58.13；H，5.58；N，9.68；實測值C，58.05；H，5.24；N，9.54.
實施例67A (2S，3R)-3-氨基-2-羥基-N-甲氧基-N-甲基-4-苯基丁酰胺鹽酸鹽將{1(R)-〔羥基-((S)-甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸(285毫克，0.8毫摩爾)溶于冷4NHCl-二惡烷并且在0℃攪拌1小時。濃縮后用乙醚研制，干燥得到207毫克(90％)固體。
實施例67B {(1S)-〔羥基-((R)-甲氧甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}胺基甲酸(2S，3R)-3-(叔丁氧羰基胺基)-2-羥基-4-苯基丁酸(300毫克，1.0毫摩爾，Sigma Chemical Co.St.Louis，MO)與N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(104毫克，1.1毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(反應溫度為0～25℃)產(chǎn)率88％，HPLC(60/40)4.90分鐘(95％)。
實施例68 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1R)-〔羥基-((R)-甲氧基甲胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(0.32毫摩爾)與(3R)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(0.3毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(0～25℃，酸洗后用堿洗)，硅膠色譜提純，用20～50％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率73％，HPLC(60/40)4.86分鐘(95％)；PBMS 416/418(MH+，100％)；1H NMR(CDCl3)δ9.47(br，1H)，7.58(d，1H，J＝1.7Hz)，7.31(d.1H，J＝8.7Hz)，7.30-7.10(m，6H)，6.78(d，1H，J＝10Hz)，6.74(s，1H)，5.00(m，1H)，4.63(m，1H)，3.80(br，ca.1H)，3.70(s，3H)，3.04(s，3H)，2.87(m，2H).分析計算C21H22ClN3O4+0.1H2OC，60.39；H，5.36；N，10.06.實測值C，60.76；H，5.74；N，9.78.
實施例69 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-(1-氧代-1-噻唑烷-3-基)丙基〕酰胺間氯過苯甲酸(62毫克，50％，0.18毫摩爾)在25℃被加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-噻唑烷-3-基丙基)酰胺(80毫克，0.18毫摩爾)的CH2Cl2(2毫升)溶液中。1小時后，傾入NaHCO3飽和水溶液(12毫升)、10％硫代硫酸鈉水溶液(12毫升)與乙酸乙酯的混合物中。分離水層并且用乙酸乙酯萃取2次。合并有機層，用飽和NaHCO3水溶液洗滌，干燥與濃縮，得到黃色固體(80毫克，96％)；HPLC(60/40)3.37分鐘(97％)；PBMS460/462(MH+，100％)。
實施例70與71 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-(1-氧代-1-硫代嗎啉-4-基)丙基〕酰胺(實施例20)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-(1，1-二氧代-1-硫代嗎啉-4-基)-(2R)-羥基-3-氧代丙基〕酰胺(實施例71)間氯過苯甲酸(45毫克，50％，0.13毫摩爾)在25℃被加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-芐基-(2R)-羥基-3-氧代-3-硫代嗎啉-4-基丙基)酰胺(60毫克，0.13毫摩爾)的CH2Cl2(1.5毫升)溶液中。1小時后，傾入NaHCO3飽和水溶液(12毫升)、10％硫代硫酸鈉水溶液(12毫升)與乙酸乙酯的混合物中。分離水層并且用乙酸乙酯萃取2次。合并有機層，用飽和NaHCO3水溶液洗滌，干燥與濃縮，得到黃色固態(tài)標題亞砜(實施例70)，硅膠色譜提純，用1％乙醇-CH2Cl2洗脫，產(chǎn)率44毫克，72％；HPLC(60/40)6.14分鐘(98％)。PBMS 474/476(MH+，100％)。同時分離出被證實為標題砜(實施例71)的極性較弱產(chǎn)物(8毫克)HPLC(60/40)6.44分鐘(96％)。PBMS 490/492(MH+，100％)。
實施例72 1-{(3S)-〔(5-氯-1 H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰}-哌啶-4-甲酸將LiOH水溶液(0.2毫升，1N)加入1-(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰}哌啶-4-甲酸乙酯(111毫克，0.22毫摩爾)于四氫呋喃(2毫升)中的25℃溶液。18小時后，濃縮并且用乙醚研制。所得到的固體被分配于水與乙酸乙酯之間，加入6NHCl，使pH＝1。分離有機層、干燥并濃縮，得到109毫克(100％)固體HPLC(60/40)3.79分鐘(99％)；TSPMS 484/486(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.25(br，1H)，11.65(br，1H)，8.17(d，0.5H，J＝9Hz)，8.14(d，0.5H，J＝9Hz)，7.70(d，1H，J＝2Hz)，7.38(d，1H，J＝8.8Hz)，7.35-7.1(m，7H)，4.78(m，1H，exchanges with D2O)，4.5(m，2H)，4.1(m，1H)，3.8(m，0.5H)，3.7(m，0.5H)，3.15(m，0.5H)，3.0(m，2-2.5H)，2.75(m，1H)，1.5(possible m，1H)，1.8(m，2-2.5H)，1.5(m，ca.1.5H).分析計算C25H26ClN3O5+0.55H2OC，60.80；H，5.53；N，8.51.實測值C，61.15；H，5.68；N，8.11.
實施例73 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羥基胺基甲酰甲基)-2-苯乙基〕酰胺三氟乙酸(2毫升)被加至5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-叔丁氧胺基甲酰羥基甲基)-2-苯乙基〕酰胺(256毫克，0.58毫摩爾)于CH2Cl2(2毫升)中的溶液，在25℃攪拌18小時。再次加入三氟乙酸(2毫升)，混合物被靜置72小時，濃縮后，硅膠色譜提純，用2.5％、5％、10％乙醇/CH2Cl2(含1％乙酸)洗脫。用乙醚/己烷研制經(jīng)過純化的產(chǎn)物，干燥后，產(chǎn)率70毫克，31％，HPLC(60/40)3.11分鐘(96％)；分析計算C19H18ClN3O4+1.0H2OC，56.23；H，4.97；N，10.35.實測值C，56.63；H，4.94；N，9.95.
實施例74 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-{〔芐基哌啶-4-基)甲基胺基甲?！?(R)-羥甲基}-2-苯乙基)酰胺(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(310毫克，0.8毫摩爾)與(1-芐基-哌啶-4-基)甲胺鹽酸鹽(EPO公開0457686，實施例1A，200毫克，0.8毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑二甲基甲酰胺)。硅膠色譜提純粗產(chǎn)物，用0.5～4％乙醇/CH2Cl2(含0.5％NH4OH)洗脫，得到無色泡沫產(chǎn)率140毫克，30％；HPLC(60/40)4.15分鐘(95％)；TSPMS 559/562(MH+，100％)；分析計算C32H35ClN4O3+HCL+1.5H2OC，61.73；H，6.31；N，9.00.實測值C，61.61；H，6.29；N，8.71.
實施例75 4({(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰}甲胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酸(1.0，2.6毫摩爾)與4-甲胺基哌啶-1-甲酸叔丁酯(575毫克，2.6毫摩爾)按照步驟A偶聯(lián)(溶劑為二甲基甲酰胺)。硅膠色譜提純粗產(chǎn)物，用20、30、40、50和70％乙酸乙酯/己烷洗脫產(chǎn)率319毫克，21％；HPLC(60/40)10.31分鐘(94％)；569/571(MH+，100％)。
實施例75A 4-甲胺基哌啶-1-甲酸叔丁酯將粉狀分子篩(3A，5.2克)，鹽酸甲胺(16.96克，251毫摩爾)、無水乙酸鈉(41.21克，502毫摩爾)和95％氰基硼氫化鈉(3.99克，60毫摩爾)依次加入4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯的甲醇(400毫升，0℃)溶液中。在數(shù)小時內(nèi)升溫至25℃。18小時后，在25℃用硅藻土過濾，用甲醇與乙酸乙酯洗滌固體。濃縮濾液。將殘余物溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗滌2次，用鹽水洗一次，干燥濃縮后得到油狀物(12.79克，119％)。
實施例76 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基(甲基哌啶-4-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺鹽酸鹽4-({(3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-(2R)-羥基-4-苯基丁酰}甲胺基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(292毫克，0.5毫摩爾)被溶于0℃ 4M HCl-二惡烷，在室溫下攪拌1小時。濃縮混合物，用乙醚研制殘余物，干燥產(chǎn)率249毫克，96％HPLC(60/40)2.59分鐘(96％)，PBMS 467/471(MH+，100％)；1H NMR(DMSO-d6)δ11.7(s，0.3H)，11.6(s，0.7H)，8.75(br，2H，exchanges withD2O)，7.70(d，1H，J＝Hz)，7.4-7.1(m，8H)，4.94(d，0.3H，J＝7.8Hz，exchangeswith D2O)，4.77(d，0.7H，J＝7.7Hz，exchanges with D2O)，4.6(m，1H)，4.47(dd，1H，J＝3，8Hz)，4.4(m，0.7H)，3.9(m，0.3H)，3.4-3.2(m，ca.1.5H)，2.95(m，2H)，2.15-1.8(m，ca.2.5H)，1.75-1.50(m，2H).分析計算C25H29ClN4O3+HCl+0.7H2OC，57.96；H，6.11；N，10.82.實測值C，58.22；H，6.23；N，10.46.
實施例77 5-氯-1H-吲哚-2-甲酸((1S)-{(R)-羥基-〔甲基-(1-甲基哌啶-4-基)胺基甲?！臣谆鶀-2-苯乙基)酰胺鹽酸鹽依次將分子篩(3A粉末，100毫克)、三乙胺(22毫克，0.2毫摩爾)、冰醋酸(64毫克，1.1毫摩爾)、氰基硼氫化鈉(95％，18毫克，0.3毫摩爾)與含水甲醛(37％(重)，于水中，22毫克，0.3毫摩爾)加入5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-((R)-羥基(甲基哌啶-4-基胺基甲酰)甲基〕-2-苯乙基}酰胺鹽酸鹽(100毫克，0.2毫摩爾)于甲醇(2毫升)中的25℃溶液中。18小時后，用硅藻土過濾，用甲醇洗滌固體并濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯，用2N NaOH洗滌2次，用鹽水洗一次。干燥并濃縮。硅膠色譜提純無色固體殘余物，用1～8％乙醇/CH2Cl2洗脫得到無色固體(93毫克，91％)。將其溶于0℃甲醇，用1.01NHCl(0.21毫升)處理形成的溶液并且立即濃縮。用乙醚研制殘余物并且干燥產(chǎn)率87毫克，79％；HPLC(60/40)2.86分鐘(95％)；TSPMS 483/485(MH+，100％)。
實施例78 (3S)-〔(5-氯-1H-吲哚-2-羰基)胺基〕-4-苯基丁酸甲酯(3S)-3-胺基-4-苯基丁酸甲酯鹽酸鹽(1.15克，5毫摩爾)與5-氯-1H-吲哚-2-甲酸按照步驟A偶聯(lián)，用乙醚研制純化產(chǎn)物；產(chǎn)率1.46克(79％)；HPLC(60/40)8.85分鐘(100％)；PBMS 371/373(MH+，100/35％)；分析計算實測值實施例78A (3S)-胺基-4-苯基丁酸甲酯鹽酸鹽(3S)-叔丁氧羰基胺基-4-苯基-丁酸甲酯(參見“雜環(huán)化合物”，P.1835(1989)與J.Med.Chem.1975，P.761，349克，12.1毫摩爾)在0℃被溶于4M HCl-二惡烷并且在225℃攪拌0.5小時，濃縮后，用乙醚研制殘余物并且干燥產(chǎn)率2.56克(92％)。
應該理解的是本發(fā)明并不局限于本文所述的特定實施方案，在不違背下述權利要求限定的新概念的實質(zhì)與范圍條件下可以完成各種變化與改進。
權利要求
1.式I所示化合物其藥物可接受的鹽及其前藥 式中虛線為視需要存在的鍵；當虛線代表有鍵存在時A為-CH＝、-C(C1-4烷基)＝或-C(鹵素)＝，或當虛線不代表鍵時A為亞甲基或-CH(C1 -4烷基)-；R1、R10或R11各自獨立地代表H，鹵素，4-、6-、或7-硝基，氰基，C1-4烷基，C1-4烷氧基，氟甲基，二氟甲基或三氟甲基；R2為H；R3為H或C1-5烷基；R4為H，甲基，乙基，正丙基，羥基C1-3烷基，C1-3烷氧基C1 -3烷基，苯基C1-4烷基，苯基羥基C1-4烷基，苯基C1-4烷氧基C1-4烷基，噻吩-2-或-3-基C1-4烷基或呋喃-2-或-3-基C1-4烷基，其中所述R4環(huán)上的碳被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基獨立地單取代、二取代或三取代；或者R4為吡啶-2-、-3-或-4-基C1-4烷基，噻唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基、咪唑-1-、-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡咯-2-或-3-基C1-4、惡唑-2-、-4-或-5-基C1-4烷基，吡唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，異惡唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，異噻唑-3-、-4-或-5-基C1-4烷基，噠嗪-3-或-4-基C1-4烷基，嘧啶-2-、-4-、-5-或-6-基C1-4烷基，吡嗪-2-或-3-基C1-4烷基或1，3，5-三嗪-2-基C1-4烷基，其中上述R4雜環(huán)可視需要被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基獨立地單取代或雙取代，所述的單取代基或雙取代基與碳連接；R5為H、羥基、氟、C1-5烷基、C1-5烷氧基、C1-6鏈烷?；被鵆1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1 -4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C2-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基或羧基，其中所述的羧基與苯基、噻唑基、咪唑基、1H-吲哚基、呋喃基、吡咯基、惡唑基、吡唑基、異惡唑基、異噻唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或1，3，5-三嗪基形成碳-碳鍵合，其中所述R5環(huán)可視需要被鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、氨基或三氟甲基單取代，所述單取代基被連接在碳上；R7為H、氟或C1-5烷基；或R5與R7可以結合在一起形成氧基，R6為羧基、C1-8烷氧羰基、C(O)NR8R9或C(O)R12，其中R8為H，C1-3烷基，羥基或C1-3烷氧基；R9為H，C1-8烷基，羥基，C1-8烷氧基，亞甲基-全氟代C1 -8烷基，苯基，吡啶基，噻吩基，呋喃基，吡咯基，吡咯烷基，惡唑基，噻唑基，咪唑基，吡唑基，吡唑啉基，吡唑烷基，異惡唑基，異噻唑基，吡喃基，哌啶基，嗎啉基，噠嗪基，嘧啶基，吡嗪基，哌嗪基或1，3，5-三嗪基，其中上述R9環(huán)為碳-氮鍵合環(huán)；或者R9為單、雙或三取代C1-5烷基，其中所述取代基獨立地為H、羥基、氨基、單-N-或二-N，N-C1-5烷基胺基；或者R9為單或雙取代C1-5烷基，其中所述取代基獨立地為苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯基、吡咯烷基、惡唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡唑啉基、吡唑烷基、異惡唑基、異噻唑基、吡喃基、吡啶基、哌啶基、嗎啉基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、哌嗪基或1、3，5-三嗪基，其中非芳族含氮R9環(huán)上的氮可視需要被C1-6烷基、芐基、苯甲酰基或C1-6烷氧羰基單取代，并且其中R9環(huán)上的碳可視需要被鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、氨基或單-N-與雙-N，N-C1-5烷基胺基單取代，條件是不包括季氮并且不存在氮-氧、氮-氮或氮-鹵鍵；R12為哌嗪-1-基、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、4-甲酰哌嗪-1-基、嗎啉代、硫代嗎啉代、1-氧代硫代嗎啉代、1，1-二氧代硫代嗎啉代、噻唑烷-3-基、1-氧代-噻唑烷-3-基、1，1-二氧代-噻唑烷-3-基，2-C1-6烷氧羰基吡咯烷-1-基、惡唑烷-3-基或2(R)-羥甲基吡咯烷-1-基；或R12為3-和/或4-單或雙取代氧氮雜環(huán)丁烷-2-基，2；4；和/或5-單或雙取代惡唑烷-3-基，2-，4-和/或5-單-或雙取代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-單或雙取代1-氧代噻唑烷-3-基，2-，4-和/或5-單一或雙一取代1，1-二氧代噻唑烷-3-基，3-和/或4-單一或雙一取代吡咯烷-1-基，3-，4-和/或5-單一，雙一或三一取代哌啶-1-基，3-，4-和/或5-單一、雙一或三一取代哌嗪-1-基，3-取代氮雜環(huán)丁烷-1-基，4-和/或5-單一或雙一取代1，2-惡嗪烷-2-基，3-和/或4-單一或雙一取代吡唑烷-1-基，4-和/或5-單一或雙一取代異惡唑烷-2-基，4-和/或5-單一和/或雙一取代異噻唑烷-2-基，其中R12取代基獨立地為H、鹵素、C1-5烷基、羥基、氨基、單-N-或雙-N，N-C1-5烷基胺基、甲?；⒀醮?、肟基、C1-5烷氧基、羧基、氨基甲?；?、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基甲酰基、C1-4烷氧基亞胺基、C1-4烷氧甲氧基、C1-6烷氧羰基、羧基C1 -5烷基或羥基C1-5烷基；條件是若R4為H、甲基、乙基或正丙基，R5為OH；條件是若R5與R7為H，則R4不得為H、甲基、乙基、正丙基、羥基C1-3烷基或C1-3烷氧基C1-3烷基，R6為C(O)NR8R9、C(O)R12或C1-4烷氧羰基。
2.按照權利要求1的化合物，其中R1為5-H、5-鹵素、5-甲基、5-三氟甲基或5-氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單、雙或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單一或雙一取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-、-2-、-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑、-3-、-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單一或雙一取代，所述單一或雙一取代基被連接在碳上；R5為羥基；R6為C(O)NR8R9或C(O)R12；以及R7為H。
3.按照權利要求2的化合物，其中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1 -2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R6為C(O)NR8R9；R8為C1-3烷基、羥基或C1-3烷氧基；R9為H、C1-8烷基、羥基、羥基C1-6烷基、C1-8烷氧基、吡啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基或被吡啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡咯烷基、哌啶基、咪唑基或噻唑基單取代的C1-4烷基。
4.按照權利要求3的化合物，其中選自5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-((R)-羥基-二甲氨基甲?；谆?-2-苯乙基〕酰胺，5，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲基氨基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲氧基甲基氨基甲?；?甲基〕-2-苯乙基}酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-((2-羥乙基)甲基氨基甲?；臣谆鶀-2-苯乙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸{(1S)-〔(R)-羥基-(甲基吡啶-2-基氨基甲酰基)甲基〕-2-苯乙基}-酰胺或5-氯-1H-吲哚-2-羧酸((1S)-{(R)-羥基-〔甲基-(2-吡啶-2-基乙基)氨基甲?！臣谆鶀-2-苯乙基)酰胺。
5.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為甲基。
6.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯，R11為H；R10為6-氯，R4為芐基；R8為甲基，R9為甲氧基。
7.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為甲氧基。
8.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為2-羥基乙基。
9.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為吡啶-2-基。
10.按照權利要求3的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R8為甲基；R9為2-(吡啶-2-基)乙基。
11.按照權利要求2的化合物，其中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基，噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1 -2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R6為C(O)R12；以及R12為嗎啉代、4-C1-4烷基哌嗪-1-基、3-取代氮雜環(huán)丁烷-1-基、3-和/或4-單或雙取代吡咯烷-1-基、4-和/或5-單取代或雙取代異惡唑烷-2-基、4-和/或5-單一或雙一取代1，2-惡嗪烷-2-基，其中所述取代基分別獨立地為H、鹵素、羥基、氨基、單-N-或雙-N，N-C1-6烷基胺基、氧代、肟基或烷氧基。
12.按照權利要求1的化合物，其中選自5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-3-氧丙基〕酰胺鹽酸鹽5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-異惡唑烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-〔1，2〕惡嗪烷-2-基-3-氧丙基)酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-((3S)-羥基-吡咯烷-1-基)-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3S，4S)-二羥基吡咯烷-1-基)-(2R)-羥基-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-3-((3S，4S)-二羥基吡咯烷-1-基)-(2R)-羥基-3-氧丙基〕酰胺，5-氯-1H-吲哚-2-甲酸〔(1S)-芐基-(2R)-羥基-3-嗎啉-4-基-3-氧丙基)酰胺。
13.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為4-甲基哌嗪-1-基。
14.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基。
15.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為異惡唑烷-2-基。
16.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(1，2)-惡嗪烷-2-基。
17.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為3(S)-羥基吡咯烷-1-基。
18.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(3S，4S)-二羥基吡咯烷-1-基。
19.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為(3R，4S)-二羥基吡咯烷-1-基。
20.按照權利要求11的化合物，其中R1為5-氯；R10與R11為H；R4為芐基；R12為嗎啉代。
21.按照權利要求1的化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單一、雙一或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單一或雙一取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、氨基或羥基單一或雙一取代，所述單一或雙一取代基被連接在碳上；R5為羥基；R6為羧基或C1-8烷氧羰基；以及R7為H，氟或C1-6烷基。
22.按照權利要求21的化合物，其中碳原子a具有(S)立體化學；碳原子b具有(R)立體化學；R4為苯基C1-2烷基、噻吩-2-基C1-2烷基、噻吩-3-基C1 -2烷基、呋喃-2-基C1-2烷基或呋喃-3-基C1-2烷基，其中所述環(huán)被H或氟獨立地單取代或雙取代；R10與R11為H；R6為羧基；R7為H。
23.按照權利要求22的化合物，其中R1為5-氯，R11與R10為H，R4為芐基。
24.按照權利要求1的化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單一、雙一或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單一或雙一取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1 -4烷氧基、氨基或羥基單一或雙一取代，所述單一或雙一取代基被連接在碳上；R5為氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基；R6為羧基或C1-8烷氧羰基；和R7為H、氟或C1-6烷基。
25.按照權利要求1的化合物，其中R1為H、鹵素、甲基或氰基；R10與R11分別獨立地為H或鹵素；A為-C(H)＝；R2和R3為H；R4為苯基C1-2烷基，其中所述苯基獨立地被H或鹵素單一、雙一或三取代或者獨立地被H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、三氟甲基、羥基、氨基或氰基單或雙取代；或R4為噻吩-2-或-3-基C1-2烷基、吡啶-2-，-3-或-4-基C1-2烷基、噻唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、咪唑-1-，-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、呋喃-2-或-3-基C1-2烷基、吡咯-2-或-3-基C1-2烷基、惡唑-2-，-4-或-5-基C1-2烷基、吡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基、異惡唑-3-，-4-或-5-基C1-2烷基，其中上述R4雜環(huán)視需要獨立地被鹵素、三氟甲基、C1-4烷基、C1 -4烷氧基、氨基或羥基單或雙取代，所述單或雙取代基被連接在碳上；R5為氟、C1-4烷基、C1-5烷氧基、氨基C1-4烷氧基、單-N-或雙-N，N-C1-4烷基胺基C1-4烷氧基、羧基C1-4烷氧基、C1-5烷氧羰基C1-4烷氧基、芐氧羰基C1-4烷氧基；R6為C(O)NR8R9或C(O)R12；R7為H、F或C1-6烷基。
26.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)糖原磷酸化酶依賴性疾病的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用治療量權利要求1的化合物。
27.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)高血糖的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
28.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)糖尿病的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
29.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)高膽甾醇血的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
30.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)粥樣硬化的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
31.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)高胰島素血的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
32.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)高血壓的方法，其中包括向患有該病的哺乳動物施用該病治療量權利要求1的化合物。
33.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)高血脂癥的方法，其中包括將該病治療量權利要求1的化合物施用于患該病的哺乳動物。
34.按照權利要求26的用于治療哺乳動物體內(nèi)心肌局部缺血損傷的方法，其中包括將周圍手術性心肌局部缺血損傷防止量的權利要求1化合物施用于處在周圍手術性心肌局部缺血損傷危險狀態(tài)的哺乳動物。
35.一種防止哺乳動物心肌局部缺血損傷的方法，其中包括將周圍手術性心肌局部缺血損傷防止量的糖原磷酸化酶抑制劑施用于處在周圍手術性心肌局部缺血損傷危險狀態(tài)的哺乳動物。
36.一種藥物組合物，其中含有治療有效量權利要求1的化合物與藥物可接受的載體。
37.按照權利要求36的用于治療哺乳動物體內(nèi)的糖原磷酸化酶依賴性疾病或病癥的藥物組合物，其中包含糖原磷酸化酶依賴性疾病或病狀治療量的權利要求1的化合物與藥物可接受的載體。
38.一種藥物組合物，其中含有治療活性量a)權利要求1的糖原磷酸化酶抑制劑；b)抗糖尿病藥劑，選自胰島素與胰島素類似物；胰島素調(diào)理劑；磺酰脲類與類似物；縮二胍類；α2-拮抗藥與咪唑啉；胰島素促分泌素；格列酮；脂肪酸氧化抑制劑；α-葡苷酶抑制劑；β-刺激劑；磷酸二酯酶抑制劑；降脂劑抗肥胖癥藥；釩酸鹽與釩配合物以及過氧化釩配合物；淀粉不溶素拮抗物；高血糖素拮抗物；葡糖異生抑制劑；生長激素釋放抑制因子類似物；抗脂解劑；以及c)視需要存在的藥物可接受載體。
全文摘要
適用作糖原磷酸化酶抑制劑的吲哚-2-羧基酰胺，利用該化合物以及含該化合物的藥物組合物治療糖原磷酸化酶依賴性疾病的方法。
文檔編號C07D235/24GK1140709SQ9610798
公開日1997年1月22日 申請日期1996年6月5日 優(yōu)先權日1995年6月6日
發(fā)明者B·赫林, J·L·特雷德韋, W·H·馬丁, D·J·胡佛 申請人:輝瑞大藥廠