專利名稱：：鏈陽菌素的純化形式、其制備和含有它的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種鏈陽菌素的純化形式，其中含有與以下通式(II)定義的A組鏈陽菌素的至少一種“小”成分組合的至少一種B組成分。已知的鏈陽菌素中，1955年第一次分離到原始霉素(RP7293)，一種由始旋鏈霉菌產(chǎn)生的天然來源抗菌素。以商品名Pyostacine銷售的原始霉素主要由原始霉素IA和原始霉素IIA組成。鏈陽菌素類的另一抗菌素維及尼霉素是從維及尼鏈霉菌ATCC13161制得的[抗生素與化療，5,632(1955)]。維及尼霉素(Staphylomycine)主要由S成分和M1成分組成。專利US3325359中描述了含有由抗生素899S成分和M1成分組成的抗生素物質(zhì)的藥物組合物。在專利申請F(tuán)R2619008中描述了A組的和B組的成分在治療痤瘡中的用途。天然來源的鏈陽菌素類抗菌素由2類成分的混合物組成B組的成分和A組的成分，每類具有自己的抗菌活性。已證明由這兩類成分形成的組合能在提高制菌和殺菌活性方面和在擴大活性譜方面產(chǎn)生協(xié)同作用。在Georg-August大學(xué)數(shù)學(xué)與自然科學(xué)系博士論文(Gottingen，1979)《作為陽離子經(jīng)膜輸送模型系統(tǒng)的鏈陽菌素》中、在抗生素III，521(1975)和在C.Cocito微生物學(xué)綜述145-98(1979)的《維及尼霉素類抗生素含有協(xié)同成分的抑制劑》一文中，描述了鏈陽菌素的A組和B組成分。J.Preud′Homme、P.Tarridec和A.Belloc在法國化學(xué)協(xié)會雜志2,585(1968)中也描述了天然原始霉素以及組成它的不同成分。純鏈陽菌素組合的所有嘗試一般都涉及A組的主成分[原始霉素IIA(PIIA)]，認(rèn)為它是活性和協(xié)同作用所必需的。研究還得出該成分引起良好協(xié)同作用的重要性EP506561(第2頁)。但這些償試從沒獲得成功，一方面因為工業(yè)制備的困難，特別是因為純的原始霉素IIA是結(jié)晶產(chǎn)品，其生物利用度很低不能設(shè)想用作藥物的活性成分。從這種產(chǎn)品的工業(yè)制備角度來看，用現(xiàn)有技術(shù)還不能在制備階段獲得足夠純的形式，不能以足夠穩(wěn)定和可重現(xiàn)的質(zhì)量進(jìn)行批量生產(chǎn)，以滿足一些國家在注冊方面的法規(guī)要求。例如，天然原始霉素的工業(yè)批量產(chǎn)品經(jīng)純化后還含有可達(dá)20％的雜質(zhì)。迄今所進(jìn)行的純化努力總是以失敗而告終，常常導(dǎo)致各組成分中的一種降解，這是由于許多操作導(dǎo)致不穩(wěn)定產(chǎn)物中環(huán)形結(jié)構(gòu)的打開或A組成分的脫水。由于這一事實，多年來認(rèn)為純度的提高是不可能達(dá)到的。在1988年，純化還被認(rèn)為是一個問題液相色譜雜志，11(11)，2367(1988)。同樣在1988年，N.K.SHARMA和M.J.0.ANTEUNIS也表示維及尼霉素各成分的分離和純化出于分析目的是可能的，但考慮到所遇到的各種困難，對產(chǎn)品的生產(chǎn)來說這種純化是不可想象的比利時化學(xué)協(xié)會雜志，97(3)，193(1988)。這種局面造成的結(jié)果是原始霉素(Pyostacine)的銷售被嚴(yán)格限制在諸如法國和比利時的一些國家中。維及尼霉素(Staphy-lomycine)的情況相同，在人類醫(yī)療方法只在有限的幾個國家中銷售，以及密柑霉素，其銷售(限于日本)現(xiàn)已停止。這導(dǎo)致某些人口區(qū)失去了對革蘭氏陽性球菌嚴(yán)重感染(尤其是耐2，6-二甲氧基苯青霉素的葡萄球菌感染)的一種治療或失去了對性傳染疾病的一種治療。在抗菌素領(lǐng)域中，醫(yī)生熟知某些類別的抗生素在使用后會發(fā)生過敏或抗藥性[新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志，324(9)，601(1991)]。在對病人的醫(yī)護(hù)中，人們特別認(rèn)識到了許多種金黃色葡萄球菌抗性菌株。這就是為什么有大范圍的不同化學(xué)類別的抗生素可供使用對醫(yī)生特別重要的原因，以便使治療適應(yīng)于待治療的具體病例。一定類別的抗生素不能上市的結(jié)果可能是嚴(yán)重的，甚至悲慘的，因為這能造成不能耐受其他類型抗生素的病人無法治療。另外，已進(jìn)行的純化償試總是以消除鏈陽菌素小成分為目標(biāo)，這些小成分被認(rèn)為是不必要的，甚至是雜質(zhì)。在天然鏈陽菌素的A組成分中，原始霉素IIB(PIIB)是一種小成分，其重量比在天然原始霉素中小于10％，通常為8％左右，而在維及尼霉素中為6％左右。作為本發(fā)明的目的，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)由一種或多種通式(I)B組成分和一種或多種通式(II)A組“小”成分構(gòu)成的組合，由于其體內(nèi)活性而特別有意義其中A1是下式基團(tuán)其中R′為氫原子或羥基，Y是氫原子、甲基氨基或二甲氨基，R是乙基或當(dāng)R′代表氫原子時R還可代表甲基，及R1和R2代表氫原子，或者A1為下式基團(tuán)R為異丁基，及R1為羥基及R2為甲基；其中R”為氫原子或甲基或乙基。事實上，本發(fā)明的組合顯示出明顯高于天然產(chǎn)物(例如天然維及尼霉素或天然原始霉素)或高于涉及A組主成分之組合的體內(nèi)生物作用，特別是其具有完全令人滿意的生物利用度。另外這種組合可以大規(guī)模制備。還可能達(dá)到含有6％以下雜質(zhì)的具有良好活性水平的終產(chǎn)物的純化、可生物利用的形式。其中R”為乙基以下稱為原始霉素IIF(PIIF)的通式(II)產(chǎn)物和其中R”為氫原子以下稱為原始霉素IIG(PIIG)的通式(II)產(chǎn)物是新產(chǎn)物，構(gòu)成鏈陽菌素的很小量成分，在天然批量產(chǎn)物中其重量比例小于0.5％。最好以10/90到90/10(重量)的比例，優(yōu)選以20/80到80/20的比例制備本發(fā)明的組合。這些組合呈粉末的物理混合狀態(tài)，但根據(jù)本發(fā)明的另一方面，呈共沉淀狀態(tài)；或根據(jù)本發(fā)明的第三方面，呈如下所定義的共結(jié)晶狀態(tài)。本發(fā)明還涉及通過至少一種通式(I)B組成分與至少一種通式(II)定義的A組成分共結(jié)晶組合所構(gòu)成的純化形式。這種共結(jié)晶是以1摩爾通式(I)成分與2摩爾的通式(II)A組成分的恒定化學(xué)計量進(jìn)行的[當(dāng)成分A為其中A1為(Ia)結(jié)構(gòu)的通式(I)產(chǎn)物時，該化學(xué)計量相當(dāng)于相對重量比例為約43-44/57-56]。本發(fā)明的共結(jié)晶組合可用作純化、穩(wěn)定并具有改善的體內(nèi)活性以及良好生物利用度的抗菌劑，或作為純化相應(yīng)于通式(II)的鏈陽菌素的一種小成分的方法。實際上，以前從不可能通過結(jié)晶純化通式(II)A組的一種成分；鑒于此，迄今已知的制備通式(II)A組純化產(chǎn)品的僅有方法是層析方法，未知其他任何方法能夠大量分離這些產(chǎn)物?，F(xiàn)已證明通過借助于以上定義的共結(jié)晶組合可以獲得純態(tài)的通式(II)A組成分。含有至少30％的通式(II)A組的一種小成分、溶于一種有機溶劑如酮(例如丙酮、甲乙酮、甲基異丁基酮)、酯(例如乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯)、含氯溶劑(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、或腈(例如乙腈)并加有通式(I)定義的一種B組成分的粗混合物，產(chǎn)生一種比例如前所定義的共結(jié)晶化合物。應(yīng)理解，要適當(dāng)?shù)剡x擇所引入的通式(I)化合物的量，以使該物的殘余濃度(共結(jié)晶后)低于其在介質(zhì)中的溶解度。還應(yīng)認(rèn)識到，起始介質(zhì)中通式(II)產(chǎn)物和通式(I)產(chǎn)物的相應(yīng)含量的變化不應(yīng)引起所得共結(jié)晶化合物的改變。將如此獲得的共結(jié)晶組合溶于溶劑如甲基異丁基酮或二氯乙烷中，并處理成酸性介質(zhì)(例如用硫酸、氫氯酸)，用諸如已烷的溶劑處理有機相后可獲得純化的、不含B組成分的A組小成分。這種共結(jié)晶組合另外還有穩(wěn)定性大大提高、純度提高、尤其是易于工業(yè)化的優(yōu)點。應(yīng)清楚認(rèn)識到，該方法還可以適用于制備與鏈陽菌素B組天然化合物的修飾衍生物的共結(jié)晶，這些共結(jié)晶也落在本發(fā)明范圍內(nèi)；同樣從這種共結(jié)晶制備通式(II)小成分的純化形式的方法也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式涉及原始霉素IB[如上所定義，其中A1代表式(Ia)基團(tuán)，其中Y為甲基氨基及R′為氫原子，R為乙基]或維及尼霉素S1[如上所定義，其中A1代表式(Ia)基團(tuán)，其中Y和R′為氫原子，R為乙基]或維及尼霉素S1的和維及尼霉素S4[如上所定義，其中A1如維及尼霉素S1下所定義，R為甲基]的一種混合物與原始霉素IIB[如上通式(II)所定義，其中R”為甲基]的組合，并含有低于6％的雜質(zhì)，優(yōu)選低于3％的雜質(zhì)。本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式還涉及一種由通式(I)所定義的一種鏈陽菌素B組成分和通式(II)一種A組成分的組合構(gòu)成的純化鏈陽菌素，其中B和A組成分的相對比例為恒定摩爾比1/2左右。按照本發(fā)明，至少一種通式(I)鏈陽菌素B組成分和至少一種通式(II)A組成分的新組合，例如可以通過如上所定義的共結(jié)晶化合物的制備來獲得。當(dāng)想要獲得不同比例的組合時，可將如此制備的共結(jié)晶化合物與事先純化的至少一種通式(I)成分或與至少一種通式(II)的A組成分以適當(dāng)?shù)牧拷Y(jié)合，以獲得所希望的比例；或者可以通過共結(jié)晶純化通式(II)的A組成分(或其混合物)，然后以所希望的比例與通式(I)的一種或多種B組成分混合。或者，本發(fā)明的組合可以這樣制備通過從相應(yīng)的天然鏈陽菌素純化分離B組成分和通式(II)A組成分后，以如上定義的所希望的比例混合純化的組分。本發(fā)明的組合還可以按所希望的比例進(jìn)行共沉淀將通式(I)和(II)的成分在甲基異丁基酮、在丙酮或二氯甲烷中的溶液[或共結(jié)晶和通式(I)或(II)的一種成分的溶液]倒入己烷、環(huán)己烷中或水中。按照或通過類似于J.Prend′homme及同事在法國化學(xué)協(xié)會雜志，第2卷，585(1968)中、在抗生素和化療，5,632(1955)或7,606(1957)中、在第二次布魯塞爾色譜學(xué)會議，181(1962)中、在抗生素年鑒，728-784(1954-55)中、在美國專利3299047中或在Georg-August大學(xué)數(shù)學(xué)與自然科學(xué)系博士論文(Gottingen，1979)《作為陽離子經(jīng)膜輸送模型系統(tǒng)的鏈陽菌素》中描述的方法或如以下實施例中所述，通過發(fā)酵并從發(fā)酵液中分離組分來進(jìn)行A和B組成分的制備和分離。尤其對原始霉素而言，通過將粗鏈陽菌素懸浮在如乙酸酯(例如乙酸乙酯)的有機溶劑中，然后過濾或離心A組粗組分，并將B組成分萃取在酸性水介質(zhì)中、再反萃取到二氯甲烷介質(zhì)中，從而分離A和B組成分。也可以通過酸萃取粗鏈陽菌素在甲基異丁基酮中的溶液，然后從水相萃取B組成分，通過沉淀從有機相分離A組成分，從而分離A和B組成分。分離后，鏈陽菌素B組成分的純化可通過在醇如乙醇、甲醇或異丙醇中、在乙酸酯(例如乙酸異丙酯或乙酸丁酯)中、在酮(例如甲基乙基酮)中或在乙腈中結(jié)晶或通過層析來進(jìn)行。通式(II)A組成分的純化可通過層析用乙腈-水混合物洗脫來進(jìn)行?；蛘?，通式(II)和(I)的相應(yīng)A和B組成分的制備可以如法國專利申請2689518中所述來進(jìn)行。按以下步驟分別發(fā)酵-第一步(非強制性)，對非選擇性鏈陽菌素生產(chǎn)菌進(jìn)行誘變，及-第二步，篩選選擇性微生物。非選擇性微生物一般是放線菌和真菌。可用于該方法的起始微生物尤其是選自下面的一種鏈陽菌素的非選擇性生產(chǎn)菌原始霉素、維及尼霉素、密柑霉素、蠣灰菌素、綠灰菌素、春霉素和宜他霉素。例如可使用的非選擇性微生物列于下表中。</tables>更具體地講，是用選自S.alborectus、三鷹鏈霉菌、始旋鏈霉菌、蠣灰鏈霉菌和維及尼鏈霉菌的微生物進(jìn)行這種制備的。該制備方法的第一步是修飾非選擇性微生物，以便提高其生產(chǎn)抗生素的整體能力，和/或為了讓其只合成鏈陽菌素2種成分中的一種。這可以通過遺傳修飾(例如在生物合成途徑中相關(guān)酶的結(jié)構(gòu)基因中突變，或在使得這些結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的序列中突變)或生物化學(xué)修飾(改變翻譯后機制，改變反向抑制機制等)來達(dá)到。使用了不同的誘變工具-物理試劑X線、紫外線；或-化學(xué)試劑烷基化試劑如甲磺酸乙酯(EMS)、N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍(Delic等，突變研究，9(1970)167-182)，或4-硝基喹啉-1-氧化物(NQO)；雙烷基化試劑；嵌合劑；或-DNA的所有突變插入系統(tǒng)，特別是轉(zhuǎn)座子、整合性質(zhì)粒、噬菌體或原噬菌體；或-原生質(zhì)體融合(Cohen，自然268(1977)171-174)。這些工具(單獨或聯(lián)合)可用于孢子態(tài)、出芽孢子態(tài)或正在出芽的非選擇性微生物，或用于菌絲體。該制備方法還可能要求(隨機的或定向的)遺傳操作，通過該操作可從非選擇性微生物獲得能選擇性生產(chǎn)鏈陽菌素一種成分的微生物。該制備方法的第二步涉及選擇性微生物的鑒別和分離。這一步尤其可通過一種對某細(xì)菌的敏感性試驗來實現(xiàn)。存在對鏈陽菌素A或B組成分特異性敏感的不同細(xì)菌例如枯草芽孢桿菌(ATCC6633)、環(huán)狀芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌(Watanabe，抗生素雜志，A系，XIII(1)(1960)62)，或干燥棒桿菌(Watanabe，同前)對B組成分特異性敏感；無乳鏈霉球菌B96(抗微生物劑和化療，10(5)(1976)795)、藤黃微球菌(Prikrylova，同前)或藤黃八疊球菌(ATCC9341)對A組成分特異性敏感。通過在對鏈陽菌素2種成分都敏感的細(xì)菌中插入其中一種成分的抗性基因，也可能人為地制備對鏈陽菌素的一種成分特異性敏感的細(xì)菌。一些這樣的抗性基因已被克隆(LeGoffic等，抗生素雜志XXX(8)，665(1977)；LeGoff-ic等，巴斯德研究所微生物學(xué)年鑒128B.471(1977)；Solh等，微生物病理學(xué)，32(5)，362，(1984)，這些基因通過分子生物學(xué)常規(guī)技術(shù)被引入到不同的細(xì)菌中。還可以通過借助于A或B成分特異抗體的ELISA試驗或通過分析技術(shù)如色譜法(液相色譜，薄層色譜等)來實現(xiàn)篩選步驟。在測定對某細(xì)菌的敏感性的試驗中，另外優(yōu)選通過色譜定量法使篩選更有效。因而，按照本發(fā)明現(xiàn)在可能以工業(yè)生產(chǎn)量獲得一種鏈陽菌素的新純化形式，其雜質(zhì)率、組成的確定性和穩(wěn)定性符合注冊的法規(guī)要求，另外其體內(nèi)活性和生物利用度提高而毒性較小。這樣，這種新組合將能夠緩解許多國家對用此類抗菌素治療的缺乏。一種通式(I)的鏈陽菌素B組成分和一種通式(II)的鏈陽菌素A組成分的這種新組合具有特別有益的活性，尤其是對革蘭氏陽性菌?？诜?0-50mg/kg的劑量，它在小鼠體內(nèi)對金黃色葡萄球菌IP8203顯示活性。作為實例，以下給出了通式(I)和(II)成分多種組合在金黃色葡萄球菌IP8203的小鼠實驗感染中的口服DC50值。下表I中所研究的組合是用通式(I)和(II)成分在甲基異丁基酮或丙酮中的溶液在己烷中共沉淀制得的。表I<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="763">產(chǎn)物(I)/產(chǎn)物II的組合PI(實施例1)/PIIB(實施例18)DC50(mg/kg)口服10/904420/803230/703070/303080/203090/1050</table></tables>下表II中所示組合是如實施例中所述制備的共結(jié)晶產(chǎn)物。表II下表III中所述組合是以粉末的物理混合物形式制備的。表III另外，這種新組合沒有顯示毒性口服150mg/kg(給藥2次)在小鼠中沒有顯示任何毒性跡象。按照本發(fā)明，當(dāng)這種共結(jié)晶組合用作通式(II)成分的純化工具時，通過酸萃取共結(jié)晶化合物在酮(如甲基異丁基酮)中的溶液，然后從有機相沉淀提取分離A組成分。給出以下實施例用于非限制性地說明本發(fā)明。注意下列實施例中含量是以重量百分含量給出。B組成分的分離和純化實施例1將30kg原始霉素粗品[原始霉素IA(PIA)20.7％，原始霉素IB(PIB)3.9％，原始霉素IC(PIC)0.6％，原始霉素ID(PID)0.3％，原始霉素IIB(PIIB)8％，原始霉素IIA(PIIA)45％，原始霉素IIF(PIIF)＜0.5％(未定量)，原始霉素IIG(PIIG)＜0.5％，(未定量)]懸浮在210升乙酸乙酯中，室溫下攪拌15小時。過濾該懸浮液，收集的乙酸乙酯濾液用2×20升1N硫酸萃取，然后用20升蒸餾水萃取。合并水相，用6×15升乙酸乙酯洗滌，然后通過加入30升10％碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至7，并用3×30升二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷層并用10升蒸餾水洗滌。然后蒸去二氯甲烷，用50升乙醇代替。然后用0.8kgL3S碳黑回流處理該混合物30分鐘。過濾并用2×5升乙醇洗滌后，15小時內(nèi)將混合物冷卻至10℃。在10℃保持一小時后，過濾懸浮液并用3×7升乙醇洗滌。固體在40℃減壓干燥后得到5.7kg純化原始霉素I(以下稱為PI)。純度96.8％(PIA81.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)；PIA的得率74％。將1500g純化PI重新溶于9升1，2-二氯乙烷中，然后加入1.5當(dāng)量的琥珀酸酐和0.015當(dāng)量的二甲氨基吡啶。將該溶液于20℃保持一周，然后上樣于含10kg二氧化硅(20-45μm)的柱上(柱高1m；直徑20cm)。通過用1，2-二氯乙烷/甲醇的混合物以18升/小時的流速滲濾6小時進(jìn)行洗脫；在層析過程中甲醇(水中5％的含量)的百分比從0增至4％。收集47份，每份2.4升。合并第5-15份，蒸去1，2-二氯乙烷，用5升乙醇代替。結(jié)晶后獲得99.8％的PIA365g。實施例2合并實施例1中所述層析的36-39流份，蒸去1，2-二氯乙烷；得到210g固體。將40g這種固體重溶于8升加有10N鹽酸8ml的水中。90℃下3小時后用碳酸氫鈉中和溶液至pH6.5。用3×1升乙酸乙酯萃取溶液，濾液用2×0.2升水洗滌。用炭黑處理后蒸去乙酸乙酯，加入600ml乙醇。重結(jié)晶后得到97％的PIB20g。實施例3合并實施例1中所述層析的22-26流份，蒸去1，2-二氯乙烷；得到139g固體。將該固體重溶于少量1，2-二氯乙烷中，上樣于二氧化硅柱。通過用1，2-二氯乙烷/甲醇的混合物以18升/小時的流速滲濾6小時進(jìn)行洗脫，甲醇的百分比在層析過程中從0增至5％。每2.4升一份收集48份。將38-43流份蒸發(fā)，固體重溶于300ml乙醇中。重結(jié)晶后得到含40％PIC的PI22g。用二氯甲烷/甲醇(98/2，體積)洗脫在二氧化硅(20-45μm)上進(jìn)行連續(xù)層析，得5g固體，在甲基異丁基酮中攪拌并在乙醇中重結(jié)晶后得95％的PIC。實施例4將1000g如實施例1中所述獲得的PI溶于最小量氯仿中，在二氧化硅柱(20-45μm)上連續(xù)分級純化。用含2-5％甲醇的氯仿洗脫后，將得到的產(chǎn)物濃縮至干。該產(chǎn)品隨后在Diaion樹脂柱上用乙腈/水(60/40，體積)混合物滲濾連續(xù)通過兩次而純化。用色譜法檢查流份。合并含PID的流份并濃縮至干。這樣得到約3g含60％PID的產(chǎn)品。通過用溶劑混合物甲基異丁基酮/丙酮/甲酸(體積比40/2/40)進(jìn)行逆流層析而進(jìn)一步純化。將含PID的流份濃縮至干，得到1g含95％PID的固體。實施例5將400gStaphylomycine(片劑形式，原始組成維及尼霉素S1(S1)3.4％，維及尼霉素S4(S4)0.9％)置于4升水中。20℃下攪拌15分鐘使藥片崩解。加入1升二氯甲烷，繼續(xù)攪拌1小時。傾出并過濾二氯甲烷相，然后30分鐘內(nèi)倒入5升攪拌下的己烷中。攪拌1小時后過濾該懸液，收集固體并用3×250ml己烷洗滌。干燥后得52g固體，將其懸浮在370ml乙酸乙酯中，20℃下連續(xù)攪拌洗滌2次并持續(xù)18小時。將每次攪拌洗滌相應(yīng)的濾液弄干，然后回流下溶于850ml甲醇中。16小時內(nèi)持續(xù)降溫至-20℃后，過濾收集固體，用少量甲醇洗滌。將固體于35℃減壓干燥后得到9gS成分(維及尼霉素S)。純度96％(S175.4％，S420.6％)S1成分(維及尼霉素S1)的得率50％。實施例6如以上實施例5中所述得到的S成分1g溶于乙腈達(dá)125mg/ml，通過在Nucleosi15C8柱(高25cm，外徑2.54cm)上層析經(jīng)4次操作純化，每次注射2ml的體積，用水/乙腈60/40(體積)的混合物以7.5ml/分鐘的流速洗脫。每次收集120ml含S1成分的流份，共480ml。重復(fù)4次層析以處理所有1gS成分。這樣收集到約500ml含S1成分的流份。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈。水相用3×50ml二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用50ml蒸餾水洗滌，在硫酸鈉上干燥并過濾。減壓下(5mm汞柱)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷。這樣得到純度99.6％的S1成分0.67g。A組粗成分的制備實施例7將500g原始霉素粗品[原始霉素IA(PIA)20.7％，原始霉素IB(PIB)3.9％，原始霉素IC(PIC)0.6％，原始霉素ID(PID)0.3％，原始霉素IIB(PIIB)8％，原始霉素IIA(PIIA)45％]溶于50升甲基異丁基酮中。該溶液用由2.5升水和2.5升1N硫酸組成的水相萃取5次，然后用3×10升水洗脫。然后甲基異丁基酮相用35g/升的碳酸氫鈉水溶液7.5升處理，再用5升水洗滌。每次將水相與有機相混合、傾析并分離。使所得有機相與750g氧化鋁接觸，過濾，濃縮至約4升并重溶于5倍體積的己烷中。過濾并干燥所得沉淀。得300g產(chǎn)品，將其懸浮在1升異丙醇中。55℃下攪拌45分鐘，于4℃過濾。將過濾后的母液濃縮至干，重溶于500ml甲基異丁基酮，并加入5倍體積的己烷。過濾沉淀，用己烷洗滌并在40℃下減壓干燥。得到含36％PIIB、6％PIIA不含PIA的PIIB粗品69g。實施例8如以上實施例7中所得PIIB粗品60g在Nucloosi15C8柱(直徑5cm，高30cm)上層析，用水/乙腈60/40洗脫，經(jīng)多次操作而純化。這樣得到250mg原始霉素IIF(PIIF)。共結(jié)晶產(chǎn)物的制備在下列實施例中表明在相同溶劑中共結(jié)晶產(chǎn)物的X衍射譜不同于單獨B組成分結(jié)晶(當(dāng)存在時)的衍射譜。實施例9將以上實施例7中所得PIIB粗品溶于190ml丙酮中，加入33g純化PI(PIA81.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)。20℃攪拌17小時后得到一懸液，4℃過濾，干燥并濃縮。在丙酮中以100g/l重結(jié)晶后得到10g白色結(jié)晶，其含有55％的PIIB+PIIF+PIIG，43％的PIA+PIB+PIC+PID。實施例10將如以下實施例18中所得的純化PIIB250mg溶于17ml乙酸乙酯中。加入純化PI300mg(PIAS1.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)。20℃下攪拌20小時后，過濾、洗滌并干燥，得到125mg白色結(jié)晶。PIIB+PIIF+PIIG的含量56％，其中PIIB54％PIA+PIB+PIC+PID含量43％。實施例11如以下實施例18中所述制得的純PIIB560mg溶于5ml丙酮，加入480mgPIA(純度99.8％)。于20℃攪拌20小時，過濾懸浮液。用1ml丙酮洗滌后，于40℃減壓(＜1kPa)干燥30小時，得到590mg白色結(jié)晶。PIIB+PIIF+PIIG的含量56％；其中PIIB54％PIA的含量43％?；厥丈鲜鼋Y(jié)晶的母液并加入一批新的PIIB560mg。這樣PIIB/PIA的質(zhì)量關(guān)系大約為4。攪拌20小時后過濾、洗滌并干燥，得到195mg純化結(jié)晶，其組成與第一批產(chǎn)生的結(jié)晶相同。實施例12按以上實施例11所述進(jìn)行操作，但用480mgPIB(純度97％)代替PIA，得到820mg白色結(jié)晶，其中PIIB+PIIF+PIIG含量為56％(其中PIIB54％)，PIB含量為43％。實施例13如實施例11所述進(jìn)行操作，但使用4ml丙酮中的680mgPIIB和580mgPIC(純度95％)，得到315mg白色結(jié)晶，其中含PIIB+PIIF+PIIG57％(其中PIIB55％)，含PI42％(其中PIC37％)。實施例14如實施例11所述進(jìn)行操作，但用480mgPID(純度95％)代替PIA，得到475mg白色結(jié)晶，其中含PIIB+PIIF+PIIG55％(其中PIIB53％)，含PID39％。實施例15如實施例11所述進(jìn)行操作，但使用4ml丙酮中的450mgPIIB和380mgS成分(S175.4％，S420.6％)，得到550mg白色結(jié)晶，其中含有PIIB+PIIF+PIIG58％(其中PIIB56％)，含S成分41％(其中S1為37％)。實施例16如實施例11中所述進(jìn)行操作，但用480mgS1成分代替PIA，得到750mg白色結(jié)晶，其含有PIIB+PIIF+PIIG58％(其中PIIB54％)，含有S1成分41％。實施例17如實施例11中所述進(jìn)行操作，但使用2ml丙酮中的224mgPIIF和192mg的S成分，得到220mg白色結(jié)晶，其中含有PIIF55％，S成分39％(其中S1成分31％，S4成分5％)。實施例9-17產(chǎn)品的X衍射圖下表IV中給出了主要譜線的相對強度。在有鈷對陰極的PhillipsPW1700衍射儀上進(jìn)行X衍射圖的測定。以15.8的譜線作為參照100。根據(jù)譜線的高度估測這些相對值，這些譜線以遞減順序排列。表IVEX.實施例不論是哪種共結(jié)晶產(chǎn)物，其X衍射圖相似(主要譜線的網(wǎng)間距沒有明顯不同)。一種A組成分的純化實施例18將實施例9中所得產(chǎn)品9.3g溶于490ml甲基異丁基酮中。用0.5N硫酸水溶液370ml萃取該溶液2次，然后用2×150ml水洗滌。將有機相濃縮至約80ml，倒入5倍體積的己烷中。過濾所得沉淀，洗滌并干燥。為除去甲基異丁基酮，以100g/l重溶于丙酮中，傾入10倍體積己烷中，洗滌并干燥。得到含純化PIIB而不再含PI的產(chǎn)品3.5g。含PIIB+PIIF+PIIG約95％，其中PIIB92％。本發(fā)明還涉及可用于人類或獸醫(yī)的藥物組合物，其含有作為活性產(chǎn)物的鏈陽菌素純化新組合，該組合含有與通式(II)A組成分組合的至少一種鏈陽菌素B組成分，呈純態(tài)或存在一種或多種相容性且藥物上可接受的稀釋劑或佐劑。這些藥物組合物可通過口服或局部途徑使用。這些組合物可含有本發(fā)明的粉末物理混合物、共沉淀或共結(jié)晶狀態(tài)的組合。作為口服組合物可使用片劑、膠囊劑、丸劑、凍干粉劑或粒劑。在這些組合物中，本發(fā)明的活性成分可與一種或多種隋性稀釋劑或佐劑混合，如蔗糖、乳糖或淀粉。這些組合物還可以包含其他物質(zhì)，如諸如硬脂酸鎂的潤滑劑。局部應(yīng)用的組合物例如可以是乳劑、軟膏、或洗劑。在人或動物的治療中，本發(fā)明組合物在治療細(xì)菌引起的感染中特別有用，尤其是革蘭氏陽性球菌的嚴(yán)重感染葡萄球菌的感染(特別是抗2，6-二甲氧基苯青霉素的葡萄球菌感染)，鏈球菌感染(特別是抗青霉素和抗大環(huán)內(nèi)酯抗生素的肺炎球菌感染)；它們還對治療嗜血桿菌、莫拉氏菌M.catarrhalis、淋病奈瑟菌、砂眼衣原體、人支原體、肺炎支原體、尿素原體U.urealyticum引起的感染特別有用。本發(fā)明的組合物可特別用于上呼吸道和下呼吸道感染的治療(例如肺感染的治療)、皮膚感染的治療、骨或關(guān)節(jié)感染的長期治療、在牙外科和泌尿外科中心內(nèi)膜炎的治療或預(yù)防、傳染性性病的治療，以及對艾滋病人中突發(fā)的細(xì)菌或寄生蟲性條件感染的治療以及免疫缺陷病人中葡萄球菌感染的預(yù)防?？偟恼f來，醫(yī)生將根據(jù)年齡、體重、感染程度和有關(guān)待治療對象的其他因素確定他認(rèn)為最合適的劑量。一般對成人口服給藥的情況，劑量在0.4-3.5g活性產(chǎn)物之間，每天2次或3次。下列實施例用于非限定性地說明本發(fā)明的組合物實施例A按常規(guī)技術(shù)制備含250mg共結(jié)晶PIB/PIIB組合的不透明膠囊。實施例B按常規(guī)技術(shù)制備含250mg共結(jié)晶S成分/PIIB組合的不透明膠囊。實施例C按常規(guī)技術(shù)制備含384mg活性物質(zhì)并具有如下組成的片劑-PIB/PIIB(45％/55％)384mg-羥丙基甲基纖維素25mg-硬脂酸鎂35mg-硅膠14mg-淀粉加足至700mg實施例D按常規(guī)技術(shù)制備含384mg活性物質(zhì)并具有如下組成的片劑-S成分/PIIB(45％/55％)384mg-羥丙基甲基纖維素25mg-硬脂酸鎂35mg-硅膠14mg-淀粉加足至700mg權(quán)利要求1.一種鏈陽菌素的純化形式，其特征在于它由一種或多種通式(I)的鏈陽菌素B組成分和一種或多種通式(II)的鏈陽菌素A組小成分的組合構(gòu)成，呈共結(jié)晶狀態(tài)、共沉淀態(tài)或粉末的物理混合物狀態(tài)其中A1是下式基團(tuán)其中R′為氫原子或羥基，Y是氫原子、甲基氨基或二甲氨基，R是乙基或當(dāng)R′代表氫原子時R還可代表甲基，及R1和R2代表氫原子，或者A1為下式基團(tuán)R為異丁基，及R1為羥基及R2為甲基；其中R”為氫原子或甲基或乙基。2.根據(jù)權(quán)利要求1的鏈陽菌素純化形式，其特征在于它含有少于6％的雜質(zhì)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鏈陽菌素純化形式，它由如權(quán)利要求1中所定義的一種或多種鏈陽菌素B組成分和一種或多種鏈陽菌素A組成分按10/90～90/10(重量)的比例組合而成，它呈共沉淀態(tài)或粉末物理混合物狀態(tài)。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一的鏈陽菌素純化形式，它由如權(quán)利要求1中所定義的一種或多種鏈陽菌素B組成分和一種或多種鏈陽菌素A組成分按20/80～80/20(重量)的比例組合而成，它呈共沉淀態(tài)或粉末物理混合物狀態(tài)。5.根據(jù)權(quán)利要求1或2的鏈陽菌素純化形式，其特征在于它是一種如權(quán)利要求1所定義的一種或多種鏈陽菌素B組成分和一種或多種鏈陽菌素A組成分的約1/2摩爾比的共結(jié)晶化合物。6.權(quán)利要求5的共結(jié)晶化合物在制備權(quán)利要求1-4之一的鏈陽菌素純化形式中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求5的共結(jié)晶化合物在純化一種如權(quán)利要求1中所定義的A組小成分中的應(yīng)用。8.權(quán)利要求1-5之一鏈陽菌素純化形式的制備方法，其特征在于如權(quán)利要求1中所定義的鏈陽菌素A組成分與鏈陽菌素B組成分共結(jié)晶，然后必要時將所得共結(jié)晶化合物與A或B組的適當(dāng)成分結(jié)合，以獲得所需比例的組合。9.權(quán)利要求1中定義的鏈陽菌素A組一種小成分的純化方法，其特征在于先制備該成分與一種或多種鏈陽菌素B組成分的共結(jié)晶化合物，然后通過酸性介質(zhì)處理除去B組成分。10.權(quán)種要求1中所定義的鏈陽菌素A組的一種純化成分，它是借助于權(quán)利要求5的共結(jié)晶化合物獲得的。11.下式的一種鏈陽菌素A組成分其中R”為氫原子或乙基。12.如權(quán)利要求1中所定義的一種或多種鏈陽菌素A組小成分的用途，其用于制備與一種或多種鏈陽菌素B組成分或其衍生物的共結(jié)晶。13.由權(quán)利要求1所定義的一種或多種鏈陽菌素B組成分或其衍生物和一種或多種鏈陽菌素A組小成分構(gòu)成的共結(jié)晶化合物。14.一種藥物組合物，其特征在于它含有純態(tài)的權(quán)利要求1-5之一的鏈陽菌素純化形式，或有相容性和藥物上可接受的所有稀釋劑或佐劑存在。全文摘要由一種或多種通式(I)的鏈陽菌素B組成分和一種或多種通式(Ⅱ)的鏈陽菌素A組小成分的組合構(gòu)成的呈共結(jié)晶狀態(tài)、共沉淀態(tài)或粉末的物理混合物狀態(tài)的鏈陽菌素純化形式。其中A文檔編號C07K7/54GK1159197SQ94195158公開日1997年9月10日申請日期1994年8月12日優(yōu)先權(quán)日1993年2月17日發(fā)明者P·安格,B·伯納瓦德,A·卡萊特,P·萊夫里申請人:羅納-布朗克羅萊爾股份有限公司