血液制品中fiv上清的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了本發(fā)明提供了血液制品中FIV上清的制備方法，它是以血漿為原料，利用低溫乙醇法制備得到FI+II+III上清，取FI+II+III上清，經(jīng)過低溫乙醇法分離FIV，壓濾，取上清即得；與現(xiàn)有技術(shù)不同的是，本發(fā)明分離FIV后的壓濾過程中，采用硅藻土和珍珠巖為助濾劑與待濾液混勻，硅藻土的用量為3.0～3.5gFI+II+III上清蛋白總量/1g硅藻土；所述硅藻土中，SiO2含量為96.0～98.7％，Al2O3含量為0.6～1.2％、Fe2O3含量為0.3～0.4％，酸溶物質(zhì)含量為0.05～0.12％，水溶物質(zhì)含量為0.15～0.20％。本發(fā)明研究表明，采用本發(fā)明方法制備FV上清過程中，所得產(chǎn)品中白蛋白含量范圍更為穩(wěn)定，均能保持在80％左右，工藝重現(xiàn)性更好；并且，過濾過程中流量、壓力以及濾液濁度均優(yōu)于使用C503型硅藻土助濾的現(xiàn)有制備方法。
【專利說明】血液制品中FIV上清的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及血液制品中FIV上清的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 人血白蛋白是目前產(chǎn)量最大、用量最大的蛋白質(zhì)藥物。其具有維持人體內(nèi)血液滲 透壓和攜帶血液中多種配基（包括脂肪酸、氨基酸、類固醇、金屬離子及藥物）與組織交換 等生理功能，臨床用于手術(shù)輸血、危重病人補(bǔ)液、創(chuàng)傷休克、低蛋白血癥、紅細(xì)胞過多癥、發(fā) 燒和水腫等，并且可增強(qiáng)人體抵抗力，是重要的臨床藥物。目前，國內(nèi)人血白蛋白的規(guī)?；?生產(chǎn)主要使用低溫乙醇法從健康人血漿中分離純化白蛋白，例如《醫(yī)學(xué)生物制品學(xué)》（第 二版，人民衛(wèi)生出版社）、《血液制品學(xué)》（第二版，人民衛(wèi)生出版社）、CN201110030778. 3、 CN201110223760· 5、CN201210013227. 0、CN201110030776. 4 等。通常使用的分離流程見圖 1，其中，組分I (又稱FI)主要含有纖維蛋白原，組分I+III (又稱FI+III)主要含有丙球、 凝血酶原和纖溶酶原，組分II (又稱FII)主要含有球蛋白，組分V (又稱FV)主要含有白蛋 白。低溫乙醇法過程相對簡單，產(chǎn)量較高，可以進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)，在世界范圍內(nèi)得到了廣 泛的應(yīng)用。
[0003] 使用壓濾技術(shù)進(jìn)行固液相分離是目前多數(shù)國內(nèi)外血液制品廠家用于低溫乙醇分 離工藝組分分離的方法。壓濾通常會使用助濾劑，其粒間隙也構(gòu)成復(fù)雜的迷宮結(jié)構(gòu)，當(dāng)制品 溶液沖擊濾板時，主要通過靜電吸附和機(jī)械阻擋的方式來捕捉固體成分，由助濾劑形成的 濾餅層和深層濾板成為捕捉固體沉淀顆粒的重要場所。濾板應(yīng)有適當(dāng)?shù)目讖?，以便能在?留助濾劑顆粒以形成結(jié)實(shí)的濾餅層的同時給制品溶液的流動帶來最小的阻力。
[0004] 壓濾工藝的主要控制參數(shù)包括濾板（過濾介質(zhì)）類型、助濾劑類型和用量的選擇 等條件。
[0005] 其中，助濾劑種類繁多，其主要功能是吸附沉淀顆粒、幫助過濾，還可提升最終產(chǎn) 品的安全性和質(zhì)量。助濾劑的選擇通?？梢钥紤]濾過液的濁度要求、生產(chǎn)能力、產(chǎn)品的回收 率、產(chǎn)品的穩(wěn)定性和純度等方面的要求，以及去除產(chǎn)品溶液中特別成份的需要。目前血液制 品生產(chǎn)常用的助濾劑有硅藻土和珍珠巖等。硅藻土是古代單細(xì)胞硅藻遺骸沉積物，具有質(zhì) 輕、多孔、高強(qiáng)、耐磨、絕緣、絕熱、吸附及填充等一列優(yōu)良性能，具有良好的化學(xué)穩(wěn)定性。硅 藻土助濾劑的主要優(yōu)點(diǎn)是：具有良好的微孔結(jié)構(gòu)、吸附性能和抗壓縮性能，不僅能使被濾液 體獲得較好的流速比，并且能濾除微細(xì)的懸浮物，保證了澄清度。
[0006] 血液制品中添加助濾劑的主要目的是提高過濾性能、提高濾液澄清度、降低濾液 濁度、吸附熱原質(zhì)、脂類、蛋白酶和變性蛋白，從而保證制品質(zhì)量。助濾劑通過以下方式達(dá)到 助濾和吸附的作用：
[0007] 1)機(jī)械截留作用：助濾劑形成的濾餅產(chǎn)生眾多的孔隙以及形成孔隙與孔隙之間 的間隔層，液體流經(jīng)濾餅時能夠截留其中的懸浮粒子，包括：
[0008] A.表面過濾作用：固液相分離發(fā)生在過濾介質(zhì)的表面，當(dāng)液體中懸浮固體顆粒的 粒徑大于硅藻土/珍珠巖的孔徑時被截留在助濾劑表面。
[0009] B.深層過濾效應(yīng)：固液相分離發(fā)生在過濾介質(zhì)的內(nèi)部：當(dāng)液體中懸浮固體顆粒的 粒徑小于硅藻土 /珍珠巖的孔徑時，比較小的固體顆粒穿過濾餅表面進(jìn)入介質(zhì)內(nèi)部，介質(zhì) 內(nèi)部曲折的微孔溝道和更細(xì)小的孔隙能夠截留這些顆粒。
[0010] 2)吸附作用：產(chǎn)生吸附作用的主要原因包括范德華力、Zeta電位和離子交換作 用，包括：
[0011] A.液體中的懸浮粒子形成的鏈團(tuán)粘附于硅藻土 /珍珠巖而被截留；
[0012] B.比硅藻土 /珍珠巖內(nèi)部孔徑小的懸浮粒子進(jìn)入到硅藻土 /珍珠巖內(nèi)部表面因相 反電荷吸附而被截留。
[0013] 雖然硅藻土是血液制品中常用的助濾劑之一，然而，硅藻土品種繁多，由于不同硅 藻土的原料、加工方式等差異，使得不同硅藻土產(chǎn)品在成分含量和性能上產(chǎn)生了較大區(qū)別。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的目的在于提供一種血液制品中FIV上清的制備方法。
[0015] 具體地，本發(fā)明提供了血液制品中FIV上清的制備方法，它是以血漿為原料，利用 低溫乙醇法制備得到FI+II+III上清，取FI+II+III上清，經(jīng)過低溫乙醇法分離FIV，壓濾， 取上清即得；與現(xiàn)有技術(shù)不同的是，本發(fā)明分離FIV后的壓濾過程中，使用PALL50P濾板， 所述濾板的用量為10?13m 2/1000L血漿；采用硅藻土和珍珠巖為助濾劑與待濾液混勻， 硅藻土的用量為3. 0?3. 5g FI+II+III上清液蛋白/lg硅藻土；所述硅藻土中，Si02含量 為96. 0?98. 7 %，A1203含量為0. 6?1. 2 %、Fe203含量為0. 3?0. 4 %，酸溶物質(zhì)含量為 0. 05?0. 12%，水溶物質(zhì)含量為0. 15?0. 20%。
[0016] 所述待濾液為待壓濾的樣品，即FI+II+III上清分離FIV后的待壓濾樣品。
[0017] FIV上清中白蛋白含量較高，是制備白蛋白產(chǎn)品的重要中間體。
[0018] 進(jìn)一步地，所述硅藻土中，Si02含量為96. 0?96. 2%，A1203含量為1.0?1.2%、 Fe203含量為0. 3?0. 4 %，酸溶物質(zhì)含量為0. 05?0. 12 %，水溶物質(zhì)含量為0. 15? 0· 20%。
[0019] 進(jìn)一步地，所述硅藻土的比表面積為2. 2?2. 3m2/g，優(yōu)選為2. 228m2/g。
[0020] 進(jìn)一步地，所述娃藻土的離心濕密度為0· 23?0· 24g/cm2,優(yōu)選為0· 237g/cm2。
[0021] 優(yōu)選地，所述硅藻土型號為CELPURE1000。
[0022] 進(jìn)一步地，所述珍珠巖為900珍珠巖。本發(fā)明中珍珠巖的用量和種類同現(xiàn)有技術(shù)。 例如，珍珠巖的用量為2. 0?3. OgFI+11+III上清蛋白/lg珍珠巖。
[0023] 為了進(jìn)一步提高終產(chǎn)品質(zhì)量，F(xiàn)I+II+III上清優(yōu)選采用如下方法制備：
[0024] 以血漿為原料，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+II+III，壓濾，取上清即得；所述壓 濾過程中，采用PALL50P濾板，娃藻土為助濾劑與待濾液混勻，濾板用量為10?13m 2/1000L 血楽，娃藻土用量為4. 5?5. 5g血楽蛋白/lg娃藻土；所述娃藻土如上所述。
[0025] 其中，本發(fā)明制備方法中，各個步驟中的壓濾流速和濾板壓力為：
[0026]

【權(quán)利要求】
1. 血液制品中FIV上清的制備方法，它是以血漿為原料，利用低溫乙醇法制備得到 FI+II+III上清，取FI+II+III上清經(jīng)過低溫乙醇法分離FIV，壓濾，取上清即得，其特征在 于：分離FIV后的壓濾過程中，使用PALL50P濾板，濾板的用量為10?13m 2/1000L血楽，采 用硅藻土和珍珠巖為助濾劑與待濾液混勻，硅藻土的用量為3. 0?3. 5gFI+II+III上清蛋 白/lg硅藻土；所述硅藻土中，Si02含量為96. 0?98. 7%，A1203含量為0. 6?1. 2%、Fe203 含量為0. 3?0. 4 %，酸溶物質(zhì)含量為0. 05?0. 12 %，水溶物質(zhì)含量為0. 15?0. 20 %。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述硅藻土中，Si02含量為96. 0? 96.2%，A1203含量為1.0?1.2 %、Fe203含量為0.3?0.4%，酸溶物質(zhì)含量為0.05? 0· 12%，水溶物質(zhì)含量為0· 15?0· 20%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述硅藻土的比表面積為2. 2? 2. 3m2/g，優(yōu)選為 2. 228m2/g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述硅藻土的離心濕密度為 0· 23 ?0· 24g/cm2,優(yōu)選為 0· 237g/cm2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1?4任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于：所述娃藻土型號為 CELPURE1000。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1?5任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于：所述珍珠巖的用量為 2. 0?3. OgFI+11+III上清蛋白/lg珍珠巖；優(yōu)選地，珍珠巖為900珍珠巖。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1?6任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于：所述FI+II+III上清 采用如下方法制備： 以血漿為原料，經(jīng)過低溫乙醇法分離提取FI+II+III，壓濾，取上清即得；所述壓濾過 程中，采用PALL50P濾板，娃藻土為助濾劑與待濾液混勻，濾板用量為10?13m2/1000L血 楽，娃藻土用量為4. 5?5. 5g血楽蛋白/lg娃藻土；所述娃藻土中，Si02含量為96. 0? 98. 7 %，A1203含量為0· 6?1. 2 %、Fe203含量為0· 3?0· 4 %，酸溶物質(zhì)含量為0· 05? 0· 12%，水溶物質(zhì)含量為0· 15?0· 20%。
8. 權(quán)利要求1?7任意一項(xiàng)所述方法制備的FIV上清。
【文檔編號】C07K1/34GK104086644SQ201410315551
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月3日
【發(fā)明者】楊宇, 楊匯川, 余鼎, 呂家成, 蘭學(xué)淵 申請人:成都蓉生藥業(yè)有限責(zé)任公司