白介素-33抑制劑多肽及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制白介素-33，能治療胰腺癌的多肽。其序列為WKNTAASKALCFKLG是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是該多肽可體外抑制人胰腺癌細(xì)胞ASPC-1，MiapacaⅡ，JF305，MiapacaⅠ的增殖，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【專利說明】白介素-33抑制劑多肽及其應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于抑制IL-33表達(dá)，治療胰腺癌的白介素-33抑制劑多肽。
[0002]【背景技術(shù)】:
胰腺癌是一種惡性程度很高的消化道腫瘤，預(yù)后很差。胰腺癌的病理類型很多，其中來自導(dǎo)管立方上皮細(xì)胞的導(dǎo)管腺癌最多見，約占99%，它致密而堅(jiān)硬，浸潤(rùn)性強(qiáng)，而且沒有明顯界限，常伴有纖維化增生及炎癥反應(yīng)，與慢性炎癥腫塊難以區(qū)別，易造成誤診。盡管胰腺癌的病因尚不明確，受遺傳和環(huán)境的多因素影響。但越來越多的證據(jù)表明，胰腺癌和慢性炎癥之間必然存在關(guān)聯(lián)。胰腺纖維化是由于過多的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在胰腺內(nèi)沉積所致，這是慢性胰腺炎和胰腺癌共有的病理學(xué)特性，胰腺組織中存在一種在形態(tài)和生物學(xué)特性上與肝星狀細(xì)胞(HSCs)相似的肌成纖維樣細(xì)胞，稱作胰腺星狀細(xì)胞(PSCs)，該細(xì)胞可表達(dá)A-平滑肌肌動(dòng)蛋白(A-SMA)，合成過多的膠原和ECM，在胰腺纖維化過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，胰腺的肌纖維母細(xì)胞、胰腺腺泡和導(dǎo)管上皮細(xì)胞中觀察到IL-33的高表達(dá)。已證實(shí)IL-33參與了胰腺纖維化和慢性胰腺炎的病理生理，并可以刺激胰腺肌纖維母細(xì)胞的增殖和遷移，進(jìn)而參與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。
[0003]IL-33在胰腺炎還是胰腺癌病理過程中，與很多細(xì)胞因子相互作用。(I)慢性纖維化過程中IL-33不斷地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，進(jìn)而促進(jìn)血管發(fā)生，降低細(xì)胞間粘連蛋白相互作用提高血管滲透性，為腫瘤的發(fā)生提供條件；(2) IL-33又能和IL-1協(xié)同上調(diào)IL-6的分泌。IL-6是重要的親炎癥介質(zhì)，在多種人類腫瘤中起到促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和抑制細(xì)胞凋亡的作用。主要通過JAK/STAT途徑調(diào)節(jié)NF- κ B, NF- κ B又調(diào)節(jié)腫瘤血管生成和侵襲，并有可能導(dǎo)致對(duì)化療耐藥的特殊腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生，其中包括胰腺癌細(xì)胞；(3) IL-33還可以單獨(dú)刺激IL-8的釋放。在腫瘤細(xì)胞及其微環(huán)境中，IL-8和其受體的表達(dá)增加，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的增殖和存活，并增強(qiáng)細(xì)胞在腫瘤部位的遷移。IL-33功能升高是胰腺癌發(fā)生的一個(gè)重要因素。因此，抑制IL-33表達(dá)，抑制胰腺癌發(fā)展，是治療胰腺癌的新靶點(diǎn)。但是，尚未有開發(fā)成熟的IL-33抑制劑多肽的治療胰腺癌的藥物。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明提供全新的序列，該序列IL-33抑制劑多肽，對(duì)胰腺癌具有很好的療效。
[0005]技術(shù)方案
白介素-33抑制劑多肽，其特征在于其序列為WKNTAASKALCFKLG。
[0006]一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
[0007]所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
[0008]所述的白介素-33抑制劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
[0009]所述的白介素-33抑制劑多肽，在治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用。
[0010] 有益結(jié)果:
本發(fā)明中的白介素-33抑制劑多肽I序列WKNTAASKALCFKLG，可以靶向抑制白介素-33表達(dá)，抑制IL-33的效應(yīng)，達(dá)到治療胰腺癌的效果。
[0011]發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)獲知白介素-33抑制劑多肽I具有全新的序列，該多肽可體外抑制人胰腺癌細(xì)胞ASPC-1，Miapaca II，JF305，Miapaca I的增殖，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0012]本發(fā)明涉及多肽(WKNTAASKALCFKLG)由吉爾生化(上海)合成。
[0013]實(shí)施例1
白介素-33抑制劑多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞ASPC-1增殖的作用。
[0014]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的ASPC-1細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物白介素-33抑制劑多肽和陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為0.43 μ M0當(dāng)濃度為0.43 μ M時(shí)，對(duì)ASPC-1增殖抑制率為75.32%。
[0015]實(shí)施例2
白介素-33抑制劑多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Miapaca II增殖的作用。
[0016]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的Miapaca II細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物白介素-33抑制劑多肽和陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO,孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100 %。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為6.54 μ M0當(dāng)濃度為6.54 μ M時(shí)，對(duì)Miapaca II增殖抑制率為71.37%。
[0017]實(shí)施例3
白介素-33抑制劑多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞JF305增殖的作用。
[0018]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的JF305細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物白介素-33抑制劑多肽和陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為13.43 μ M0當(dāng)濃度為13.43 μ M時(shí)，對(duì)JF305增殖抑制率為66.02%。
[0019]實(shí)施例4
白介素-33抑制劑多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Miapaca I增殖的作用。
[0020]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的Miapaca I細(xì)胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物白介素-33抑制劑多肽和陽性對(duì)照藥物長(zhǎng)春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO,孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定吸光度A值，按公式腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100 %。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為7.47 μ M0當(dāng)濃度為7.47 μ M時(shí)，對(duì)Miapaca I增殖抑制率為89.32%。[0021]實(shí)施例5
白介素-33抑制劑多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Miapaca I裸鼠異種移植腫瘤生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胰腺癌細(xì)胞Miapaca I細(xì)胞株，在無菌條件下制備成5 X 107/ml細(xì)胞懸液，以0.1ml接種于裸鼠右側(cè)腋窩皮下。用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長(zhǎng)至100-200mm3后將動(dòng)物隨機(jī)分組。使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直徑的測(cè)量次數(shù)為每2天測(cè)I次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對(duì)照組注射等量生理鹽水，每天I次；紫杉醇組10mg/kg,每周給藥I次；恩度組2.5mg/kg,每天給藥I次；多肽高中低組分別以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天給藥I次。試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠處死,手術(shù)剝?nèi)×鰤K稱重。
[0022]表1多肽對(duì)人胰腺癌細(xì)胞Miapaca I裸鼠異種移植腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用
【權(quán)利要求】
1.白介素-33抑制劑多肽，其特征在于其序列為WKNTAASKALCFKLG。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權(quán)利要求1所述多肽與一種以上藥學(xué)上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權(quán)利要求1所述的白介素-33抑制劑多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.如權(quán)利 要求1所述的白介素-33抑制劑多肽，在治療胰腺癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07K7/08GK104004061SQ201410281930
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月23日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請(qǐng)人:蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司