抗cd20抗原的抗體l5h7及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗CD20抗原的抗體L5H7及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的抗CD20抗原，命名為L5H7抗體，是一種IgG，其輕鏈由輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)組成，其重鏈由重鏈可變區(qū)、鉸鏈區(qū)和重鏈恒定區(qū)組成；所述輕鏈可變區(qū)中的CDR1、CDR2和CDR3依次為序列表的序列1自N末端第61-74位氨基酸殘基、第89-102位氨基酸殘基和第112-123位氨基酸殘基；所述重鏈可變區(qū)中的CDR1、CDR2和CDR3依次為序列表的序列3自N末端第50-67位氨基酸殘基、第81-96位氨基酸殘基和第102-119位氨基酸殘基。本發(fā)明還保護(hù)所述L5H7抗體在制備用于B細(xì)胞淋巴瘤治療藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明對于B細(xì)胞淋巴瘤的治療具有重大應(yīng)用價值。
【專利說明】抗CD20抗原的抗體L5H7及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種抗⑶20抗原的抗體L5H7及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]2008年世界衛(wèi)生組織造血和淋巴組織腫瘤分類確定了超過25種具有廣泛生物學(xué)和臨床特征的B細(xì)胞淋巴瘤組織學(xué)亞型。美國癌癥學(xué)會估計，2012年美國共有70130例B細(xì)胞淋巴瘤新病例被診斷，并且18940例患者將死于該病。在美國成人中，B細(xì)胞淋巴瘤占所有癌癥的4%和癌癥相關(guān)死亡的3%。在歐洲和北美，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)的最常見類型(占大約30%的病例)，被視為一種需要立即治療的侵襲性癌癥。濾泡性淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤的第二最常見組織學(xué)類型(占大約25%-30%的病例)。
[0003]傳統(tǒng)上，淋巴分化過程都是通過組織學(xué)分析辨別出在淋巴細(xì)胞發(fā)生特定階段表達(dá)的細(xì)胞表面標(biāo)志物來鑒定。CD20抗原是一種B細(xì)胞特異性分化抗原，在成熟B細(xì)胞和超過95%B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤表達(dá)，但不在早期B細(xì)胞祖細(xì)胞或晚期成熟漿細(xì)胞表達(dá)。CD20抗原由297個氨基酸殘基組成，分子量為33kD，在膜上比較暴露，容易接近，與單克隆抗體結(jié)合后無顯著內(nèi)化及脫落，也不會因為與抗體的結(jié)合而發(fā)生抗原調(diào)變，故成為治療B細(xì)胞淋巴瘤的理想靶點。
[0004]利妥昔單抗(Rituximab)是一種可識別人類⑶20抗原的嵌合性單克隆抗體(整合了人類免疫球蛋白Gl重鏈和鼠免疫球蛋白可變區(qū))。1997年11月利妥昔單抗獲得美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)用于 治療淋巴瘤的抗體。1998年，歐盟也批準(zhǔn)利妥昔單抗上市，商品名為MabThera。利妥昔單抗在復(fù)發(fā)性、惰性非霍奇金淋巴瘤病例中有顯著治療效果，開創(chuàng)了單克隆抗體治療癌癥的時代。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種抗⑶20抗原的抗體L5H7及其應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明提供的抗⑶20抗原，命名為L5H7抗體，是一種IgG，其輕鏈由輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)組成，其重鏈由重鏈可變區(qū)、鉸鏈區(qū)和重鏈恒定區(qū)組成；所述輕鏈可變區(qū)中的⑶R1、⑶R2和⑶R3依次為序列表的序列I自N末端第61-74位氨基酸殘基、第89-102位氨基酸殘基和第112-123位氨基酸殘基；所述重鏈可變區(qū)中的⑶R1XDR2和⑶R3依次為序列表的序列3自N末端第50-67位氨基酸殘基、第81-96位氨基酸殘基和第102-119位氨基酸殘基。
[0007]所述輕鏈具體可為如下(a)或(b): (a)序列表的序列I自N末端第21_234位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；(b)序列表的序列I所不的蛋白質(zhì)；
[0008]所述重鏈具體可為如下(C)或(d): (C)序列表的序列3自N末端第20-470位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；(d)序列表的序列3所不的蛋白質(zhì)。
[0009]本發(fā)明還保護(hù)編碼所述L5H7抗體的基因，其特征在于:
[0010]編碼所述輕鏈的基因為如下(I)或(2)或(3):[0011](I)序列表的序列2自5’末端第74-715位核苷酸所示的DNA分子；
[0012](2)序列表的序列2自5’末端第14-718位核苷酸所示的DNA分子；
[0013](3)序列表的序列2所示的DNA分子；
[0014]編碼所述重鏈的基因為如下(4)或(5)或(6):
[0015](4)序列表的序列5自5’末端第58-1410位核苷酸所不的DNA分子；
[0016](5)序列表的序列5所示的DNA分子；
[0017](6)序列表的序列4所示的DNA分子。
[0018]本發(fā)明還保護(hù)所述L5H7抗體在制備用于殺傷B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為表達(dá)CD20抗原的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞具體可為Daudi細(xì)胞。[0019]本發(fā)明還保護(hù)一種用于殺傷B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的藥物，其活性成分為所述L5H7抗體。所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為表達(dá)CD20抗原的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞具體可為Daudi細(xì)胞。
[0020]本發(fā)明還保護(hù)所述L5H7抗體在制備用于B細(xì)胞淋巴瘤治療藥物中的應(yīng)用。
[0021]本發(fā)明對于B細(xì)胞淋巴瘤的治療具有重大應(yīng)用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為實施例2中的洗脫曲線。
[0023]圖2為實施例2中的10%SDS_PAGE圖譜。
[0024]圖3為實施例4中的ADCC的結(jié)果。
[0025]圖4為實施例4中的⑶C的結(jié)果。
【具體實施方式】
[0026]以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
[0027]pcDNA-3.3 載體(線性質(zhì)粒):1nvitrogen 公司，目錄號 K8300-01。pOptiVEC 載體(線性質(zhì)粒)Jnvitrogen 公司，目錄號 12744-017)。CH0-DG44 細(xì)胞 Jnvitrogen 公司，目錄號 A13737-01。OptiPRO? SFM 培養(yǎng)液:Invitrogen 公司，目錄號 12309-050。月旨質(zhì)體(FreeStyle? MAX Reagent):1nvitrogen 公司，目錄號 16447-100。CD DG44Medium:Invitrogen 公司，目錄號 12610-010。CD OptiCH0?Medium:Invitrogen 公司，目錄號12681-011。利妥昔單抗(溶液形式；100mg/10ml,無色透明液體；IgG,其輕鏈如序列表的序列6所示,其重鏈如序列表的序列7所示):德國Roche Diagnostics GmbH,產(chǎn)品批號H0119,查詢序列號:10000661731142)。
[0028]利妥昔單抗具有30%左右的鼠源蛋白，長期使用會引起鼠抗人抗體反應(yīng)而無法使用。因此，尋求更為有效的抗CD20抗原的抗體用于B淋巴瘤的治療顯得尤為迫切。發(fā)明人基于大量摸索、分析、驗證，進(jìn)行計算機(jī)建模和人源化改造，設(shè)計了一種抗CD20抗原的抗體(命名為L5H7抗體)。L5H7抗體為IgG，其輕鏈(命名為輕鏈L5)如序列表的序列I所示，其重鏈(命名為重鏈H7)如序列表的序列3所示。
[0029]序列表的序列I中，自N末端第1-20位氨基酸殘基組成前導(dǎo)肽，第21-131位氨基酸殘基組成輕鏈可變區(qū)VL (其中，第61-74位氨基酸殘基組成⑶R1、第89-102位氨基酸殘基組成⑶R1、第112-123位氨基酸殘基組成⑶R3)，第132-234位氨基酸殘基組成輕鏈恒定區(qū)CL。
[0030]序列表的序列3中，自N末端第1-19位氨基酸殘基組成前導(dǎo)肽，第20-140位氨基酸殘基組成重鏈可變區(qū)VH (其中，第50-67位氨基酸殘基組成⑶R1、第81-96位氨基酸殘基組成⑶R2、第102-119位氨基酸殘基組成⑶R3)，第141-238位氨基酸殘基組成重鏈恒定區(qū)CHl，第239-253位氨基酸殘基組成鉸鏈區(qū)Hinge，第254-364位氨基酸殘基組成重鏈恒定區(qū)CH2，第365-470位氨基酸殘基組成重鏈恒定區(qū)CH3。
[0031]實施例1、構(gòu)建重組質(zhì)粒
[0032]1、將序列表的序列2所示的DNA分子插入pcDNA-3.3載體，得到重組質(zhì)粒pcDNA_3.3_L50
[0033]序列表的序列2所示的DNA分子自5’末端第14_73位核苷酸編碼前導(dǎo)肽，第74-406位核苷酸編碼VL，第407-715位核苷酸編碼CL，第716-718位核苷酸為終止密碼子。
[0034]2、將序列表的序列4所示的DNA分子插入pOptiVEC載體，得到重組質(zhì)粒p0ptiVEC-H7o
[0035]序列表的序 列4所示的DNA分子自5’末端第14_70位核苷酸編碼前導(dǎo)肽，第71-433位核苷酸編碼VH，第434-727位核苷酸編碼CHl區(qū)域編碼CH1，第728-1115位核苷酸為內(nèi)含子，第1116-1160位核苷酸編碼Hinge，第1161-1278位核苷酸為內(nèi)含子，第1279-1611位核苷酸編碼CH2，第1612-1708位核苷酸為內(nèi)含子，第1709-2026位核苷酸編碼CH3，第2027-2029位核苷酸為終止密碼子。即去除內(nèi)含子后，序列表的序列4中的編碼區(qū)如序列表的序列5所示。
[0036]實施例2、制備L5H7抗體
[0037]1、取 10 μ g 重組質(zhì)粒 pcDNA-3.3-L5 和 10 μ g 重組質(zhì)粒 p0ptiVEC_H7，用 OptiPRO?SFM培養(yǎng)液定容至500 μ 1，室溫放置5min。
[0038]2、取20 μ I的脂質(zhì)體，用OptiPRO? SFM培養(yǎng)液定容至500 μ 1，室溫放置5min。
[0039]3、將步驟I的溶液和步驟2的溶液混勻，室溫放置20分鐘。
[0040]4、在帶通氣濾膜的125ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶(瓶中裝有20ml培養(yǎng)基)中接種CH0-DG44細(xì)胞(約I X IO6個細(xì)胞/瓶)，培養(yǎng)至細(xì)胞密度為80-90%時，800rpm離心4min，吸棄培養(yǎng)上清，每瓶加入4ml新鮮⑶DG44Medium重懸。
[0041 ] 5、將步驟3得到的溶液逐滴加入完成步驟4的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，混勻，在含8%C02的搖床中37°C、150rpm振蕩培養(yǎng)5天(先培養(yǎng)6_8小時，然后800rpm離心4min，吸棄上清，重新加入30ml新鮮的CD OptiCHO? Medium后繼續(xù)培養(yǎng))，12000rpm離心15min，收集上清液，調(diào)pH至6.0-7.0，然后用0.45 μ m濾膜過濾，收集濾液。
[0042]6、取步驟5得到的濾液,采用rProtein A Sepharose4B親和層析柱進(jìn)行純化。
[0043]rProtein A Sepharose4B親和層析柱(法瑪西亞公司，XK16柱子):柱體積為40毫升，內(nèi)徑為16暈米。
[0044]結(jié)合緩沖液(pH7.0):含0.15M NaCl的20mM磷酸鹽緩沖液。[0045]洗脫緩沖液(pH3.0):0.1M檸檬酸緩沖液。
[0046]流速:l_3ml/min。
[0047]過程:(I)用400ml結(jié)合緩沖液平衡柱子；(2)上樣；(3)用400ml結(jié)合緩沖液洗滌柱子；(4)用100mL洗脫緩沖液洗脫目的蛋白，洗脫曲線見圖1，收集保留體積為22-54ml的過柱后溶液。
[0048]7、取步驟6得到的過柱后溶液，用Tris水溶液(pH9.0)調(diào)pH至7.0，然后使用截留分子量為30kd的超濾管(Millipore公司)進(jìn)行濃縮，得到的溶液即為含L5H7抗體的溶液，命名為L5H7溶液。L5H7溶液的10%SDS_PAGE圖譜見圖2。
[0049]8、用pcDNA-3.3載體代替重組質(zhì)粒pcDNA-3.3-L5，用pOptiVEC載體代替重組質(zhì)粒p0ptiVEC-H7，依次進(jìn)行步驟I至6，洗脫過程中不顯示任何洗脫峰。
[0050]實施例3、親和力檢測
[0051]委托北京科諾信誠科技有限公司完成，簡要流程如下:利用Fortebio儀器，將生物素化的CD20抗原表位(CD20抗原表位的氨基酸序列為:CEPANPSEKNSPSTQYCYSIQ)固相化到Skptavidin芯片上，分別流過5個不同濃度的待測抗體溶液(用pH7.2,0.01M的PBS緩沖液稀釋實施例1制備的L5H7溶液或利妥昔單抗，得到不同濃度的待測抗體溶液，各個待測抗體溶液中的蛋白質(zhì)濃度分別為0、25、50、75或lOOnmol/L)，檢測結(jié)合(Kon)和解離(Koff)數(shù)值,從而計算親和力(Kd)。
[0052]利妥昔單抗的親 和力(Kd)為6.48X ΙΟΙ，L5H7抗體的親和力(Kd)為
1.91X10_9M。
[0053]實施例4、細(xì)胞實驗
[0054]ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用)和⑶C (complement dependent cytotoxicity,補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用)是抗體藥物發(fā)揮靶向性消滅靶細(xì)胞的重要作用方式。這兩種作用機(jī)制在抗體藥物研發(fā)過程可應(yīng)用于在體外研究、評價、篩選高性能的抗體藥物，具有非常重要的意義。ADCC是指表達(dá)IgG Fe受體的效應(yīng)細(xì)胞(NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等)通過與已結(jié)合在腫瘤細(xì)胞表面的IgG抗體的Fe段結(jié)合，而殺傷這些靶細(xì)胞的作用。CDC是通過特異性抗體與細(xì)胞膜表面相應(yīng)抗原結(jié)合，形成復(fù)合物而激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，所形成的攻膜復(fù)合物對靶細(xì)胞發(fā)揮裂解效應(yīng)。Daudi細(xì)胞(人淋巴瘤細(xì)胞系):ATCC目錄號CCL-213，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(用于檢測CD20抗原的標(biāo)記抗體為購自BD公司產(chǎn)品目錄號為556632的FITC Mouse Ant1-Human⑶20)，⑶20抗原表達(dá)率為92%。DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針:北京中生瑞泰科技公司，目錄號60011。PI 染液:Sigma 公司，目錄號 P4170-250MG。
[0055]一、確定利妥昔單抗的最佳用量
[0056]將利妥昔單抗與Daudi細(xì)胞37°C作用30分鐘(反應(yīng)體系為高糖DMEM培養(yǎng)基；利妥昔單抗在反應(yīng)體系中的濃度分別為10 μ g/ml、20 μ g/ml、30 μ g/ml、40 μ g/ml或50 μ g/ml,以蛋白濃度計；Daudi細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度為I X 106/ml)，然后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測Daudi細(xì)胞上的CD20抗原表達(dá)，以其接近零表達(dá)時的利妥昔單抗?jié)舛葹樽詈线m的作用濃度。
[0057]利妥昔單抗最合適的體外作用濃度為30 μ g/ml。
[0058]二、ADCC[0059]1、采用Ficoll-Hapaque分離外周血淋巴細(xì)胞(PBL)。
[0060]2、用DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針標(biāo)記Daudi細(xì)胞(按DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針的說明書操作)，得到DIO標(biāo)記的細(xì)胞。
[0061]3、取步驟2得到的DIO標(biāo)記的細(xì)胞，與待測抗體在37°C培養(yǎng)箱中孵育30min (反應(yīng)體系為高糖DMEM培養(yǎng)基；待測抗體為實施例1制備的L5H7溶液或利妥昔單抗，待測抗體在反應(yīng)體系中的濃度為30 μ g/ml，以蛋白濃度計；細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度為I X 106/ml)，然后收集細(xì)胞，用PH7.2,0.01M的PBS緩沖液洗滌2遍。
[0062]4、取步驟3得到的細(xì)胞(靶細(xì)胞)，與步驟I得到的PBL (效應(yīng)細(xì)胞)在37°C培養(yǎng)箱中孵育4小時(反應(yīng)體系為高糖DMEM培養(yǎng)基；靶細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度為lX104/ml ;效應(yīng)細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度分別為IX 106/ml、5X 105/ml或2.5X 105/ml，即靶效比分別為1:100、1:50或1:25)，然后加入PI染液并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測。
[0063]每個處理設(shè)置三個重復(fù)樣本，結(jié)果取平均值。
[0064]DIO標(biāo)記的完整細(xì)胞顯示綠色。在效應(yīng)細(xì)胞的作用下，靶細(xì)胞破碎，PI進(jìn)入細(xì)胞核并染色，顯示紅色。靶細(xì)胞裂解率=紅色細(xì)胞數(shù)量+ (紅色細(xì)胞數(shù)量+綠色細(xì)胞數(shù)量)X 100%O
[0065]結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，在靶效比相等的情況下，加入L5H7抗體的靶細(xì)胞裂解率高于加入利妥昔單抗的靶細(xì)胞裂解率，即L5H7抗體的作用效果優(yōu)于利妥昔單抗，可以更加顯著的促進(jìn)靶細(xì)胞裂 解。
[0066]三、CDC
[0067]1、用DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針標(biāo)記Daudi細(xì)胞(按DIO細(xì)胞膜綠色熒光探針的說明書操作)，得到DIO標(biāo)記的細(xì)胞。
[0068]2、取健康人血清，滅活，得到滅活血清。
[0069]3、取步驟I得到的DIO標(biāo)記的細(xì)胞、與待測抗體(實施例1制備的L5H7溶液或利妥昔單抗)和步驟2得到的滅活血清在37°C培養(yǎng)箱中孵育4小時(反應(yīng)體系為高糖DMEM培養(yǎng)基；祀細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度為lX106/ml ;待測抗體在反應(yīng)體系中的濃度為30 μ g/ml,以蛋白濃度計；滅活血清在反應(yīng)體系中的體積百分濃度分別為20%、10% ;設(shè)置不加入滅活血清的對照組，用0%血清濃度表示)，然后收集細(xì)胞，用pH7.2、0.01M的PBS緩沖液洗滌2遍。
[0070]4、取步驟I得到的DIO標(biāo)記的細(xì)胞、與待測抗體(實施例1制備的L5H7溶液或利妥昔單抗)和健康人血清在37°C培養(yǎng)箱中孵育4小時(反應(yīng)體系為高糖DMEM培養(yǎng)基；靶細(xì)胞在反應(yīng)體系中的濃度為IXlOfVml ;待測抗體在反應(yīng)體系中的濃度為30 μ g/ml，以蛋白濃度計；健康人血清在反應(yīng)體系中的體積百分濃度分別為20%、10% ;設(shè)置不加入健康人血清的對照組，用0%血清濃度表示)，然后收集細(xì)胞，用pH7.2,0.01M的PBS緩沖液洗滌2遍。
[0071]5、取步驟3或步驟4得到的細(xì)胞，用pH7.2,0.01M的PBS緩沖液重懸，得到細(xì)胞濃度為lX105/ml的細(xì)胞懸液，然后加入PI染液并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測。
[0072]每個處理設(shè)置三個重復(fù)樣本，結(jié)果取平均值。
[0073]DIO標(biāo)記的完整細(xì)胞顯示綠色。在效應(yīng)細(xì)胞的作用下，靶細(xì)胞破碎，PI進(jìn)入細(xì)胞核并染色，顯示紅色。靶細(xì)胞裂解率=紅色細(xì)胞數(shù)量+ (紅色細(xì)胞數(shù)量+綠色細(xì)胞數(shù)量)X 100%O[0074]結(jié)果見圖4。結(jié)果表明，在加入健康人血清的情況下，加入L5H7抗體的靶細(xì)胞裂解率高于加入利妥昔單抗的靶細(xì)胞裂解率，即L5H7抗體的作用效果優(yōu)于利妥昔單抗，可以更加顯著的促進(jìn)靶細(xì)胞裂解。[0075]綜上所述，L5H7抗體具有良好的抗Daudi細(xì)胞(表達(dá)⑶20抗原的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)生長作用，有望成為一種用于臨床治療的抗體藥物。
【權(quán)利要求】
1.一種IgG，其輕鏈由輕鏈可變區(qū)和輕鏈恒定區(qū)組成，其重鏈由重鏈可變區(qū)、鉸鏈區(qū)和重鏈恒定區(qū)組成；所述輕鏈可變區(qū)中的⑶R1、⑶R2和⑶R3依次為序列表的序列I自N末端第61-74位氨基酸殘基、第89-102位氨基酸殘基和第112-123位氨基酸殘基；所述重鏈可變區(qū)中的⑶R1XDR2和⑶R3依次為序列表的序列3自N末端第50-67位氨基酸殘基、第81-96位氨基酸殘基和第102-119位氨基酸殘基。
2.如權(quán)利要求1所述的IgG，其特征在于: 所述輕鏈為如下(a)或(b): (a)序列表的序列I自N末端第21-234位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；(b)序列表的序列I所不的蛋白質(zhì)； 所述重鏈為如下(c)或(d):(c)序列表的序列3自N末端第20-470位氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)；(d)序列表的序列3所不的蛋白質(zhì)。
3.編碼權(quán)利要求2所述IgG的基因，其特征在于: 編碼所述輕鏈的基因為如下(I)或(2)或(3): (1)序列表的序列2自5’末端第74-715位核苷酸所不的DNA分子； (2)序列表的序列2自5’末端第14-718位核苷酸所示的DNA分子； (3)序列表的序列2所不的DNA分子； 編碼所述重鏈的基因為如下(4)或(5)或(6): (4)序列表的序列5自5’末端第58-1410位核苷酸所不的DNA分子； (5)序列表的序列5所示的DNA分子； (6)序列表的序列4所示的DNA分子。
4.權(quán)利要求1或2所述IgG在制備用于殺傷B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為表達(dá)CD20抗原的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為Daudi細(xì)胞。
7.一種用于殺傷B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞的藥物，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述IgG。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于:所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為表達(dá)CD20抗原的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。
9.如權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于:所述B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞為Daudi細(xì)胞。
10.權(quán)利要求1或2所述IgG在制備用于B細(xì)胞淋巴瘤治療藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07K16/28GK103897059SQ201410119797
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年3月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月27日
【發(fā)明者】靳彥文, 曹誠, 戴維·威孚, 米歇爾·瑞奇韋茲 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所