一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，將恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)過熱處理后，過濾，離心，收集濕菌絲體；向濕菌絲體加入甲醇溶液后，調(diào)PH，破碎，收集清液；清液用氫氧化鈉調(diào)PH，加助濾劑，抽濾，淋洗濾渣，收集清液與濾液混合；混合后的溶液經(jīng)納濾濃縮分離后，所得濃縮液稀釋，調(diào)PH，過濾，濾液脫色；脫色液過大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，用甲醇或乙醇先洗滌后洗脫，收集同種物質(zhì)洗提液，分離純化，濃縮結(jié)晶，得到恩拉霉素。本發(fā)明采用以上方法，利用勻漿機(jī)對(duì)菌絲體溶液破碎，且納濾濃縮后收集的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用，既減少甲醇的消耗，生產(chǎn)成本降低，又減少了工業(yè)污水的產(chǎn)生，制得高純度恩拉霉素，適合大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種提取純化恩拉霉素的方法，尤其涉及一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]恩拉霉素是由包括13個(gè)不同種類的17個(gè)氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的有機(jī)堿。其中，氨基酸分子構(gòu)成環(huán)狀多肽結(jié)構(gòu)，脂肪酸位于多肽結(jié)構(gòu)末端。據(jù)其末端脂肪酸種類不同，分為恩拉霉素A和恩拉霉素B，恩拉霉素則是由這兩種成分組成的混合物。恩拉霉素的鹽酸鹽為白色結(jié)晶性粉末，分子量約為2500，熔點(diǎn)為238~245°C，易溶于二甲亞砜，可溶于甲醇、含水乙醇，難溶于丙酮，不溶于苯、氯仿。
[0003]恩拉霉素在飼料中具有很高的穩(wěn)定性，在室溫條件下可長(zhǎng)期儲(chǔ)藏，在制成顆粒料過程中也非常穩(wěn)定，與飼料混合后在室溫下長(zhǎng)期儲(chǔ)藏效價(jià)下降甚微。在腸道內(nèi)不被降解，能夠保持原有的抗菌活性。
[0004]恩拉霉素在飼料中的微量添加，就可起到良好的促進(jìn)生長(zhǎng)和顯著提高飼料報(bào)酬的效果。無論在有氧和厭氧條件，恩拉霉素都能對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌顯示良好的抗菌作用。但是，傳統(tǒng)技術(shù)中，采用浸泡萃取以及甲醇溶液充當(dāng)溶媒的方式提取恩拉霉素，其產(chǎn)品收率在85.0%~87.0%之間 ，產(chǎn)品純度在97.2%~98.5%之間。由此可見，恩拉霉素產(chǎn)品的收率和純度比較低，生產(chǎn)中需要使用大量的甲醇溶液，生產(chǎn)成本較高，對(duì)環(huán)境也有一定的影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種恩拉霉素收率高、減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟:
[0007]I)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用2~4倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；
[0008]2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入I~3倍濕菌絲體體積的去離子水和4~7倍濕菌絲體體積的甲醇或乙醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2.0~4.5后，在壓力60~lOOMPa，溫度30~40°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用I~3倍濕菌絲體體積的濃度30%~70%甲醇水或乙醇水分2~3次洗滌濾渣，離心，收集清液；
[0009]3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至5.9~6.1,按中和液體積的I~2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度30%~70%甲醇水或乙醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；
[0010]4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用；
[0011]5)往濃縮液中加入2~4倍濕菌絲體體積的濃度40%~70%甲醇水或乙醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為2~IOmol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.9~7.1，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；
[0012]6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.5%、濃度為50%的甲醇或乙醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用I~3倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為40%~70%的甲醇水或乙醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為0.006mol濃度為40%~70%的甲醇水或乙醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀贗OOug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液；
[0013]7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液；
[0014]8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的*~^倍，然后用物質(zhì)的量為2~IOmol的
濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在0~10°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物；
[0015]9)固形物用水洗凈后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、35~45°C的條件下干燥4~8小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素。
[0016]所述步驟3)中 加入的助濾劑為硅藻土、珍珠巖、纖維素或石棉。
[0017]所述步驟4)中采用的納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在25°C~45°C。
[0018]采用以上步驟，將恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)過熱處理后，過濾，離心，收集濕菌絲體；向濕菌絲體加入甲醇溶液后，調(diào)PH，破碎，收集清液；清液用氫氧化鈉調(diào)PH，加助濾劑，抽濾，淋洗濾渣，收集清液與濾液混合；混合后的溶液經(jīng)納濾濃縮分離后，所得濃縮液稀釋，調(diào)PH，過濾，濾液脫色；脫色液過大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附，用甲醇或乙醇先洗滌后洗脫，收集同種物質(zhì)洗提液，分離純化，濃縮結(jié)晶，就能得到恩拉霉素。
[0019]本發(fā)明的有益效果是:利用勻漿機(jī)對(duì)菌絲體溶液進(jìn)行破碎，且納濾濃縮后收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用，既減少甲醇的消耗，生產(chǎn)成本降低，又減少了工業(yè)污水的產(chǎn)生，還能制得高純度的恩拉霉素，符合大規(guī)模生產(chǎn)的要求。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明:
[0021]本發(fā)明提供的一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟:
[0022]I)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用2~4倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；
[0023]2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入I~3倍濕菌絲體體積的去離子水和4~7倍濕菌絲體體積的甲醇或乙醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2.0~4.5后，在壓力60~lOOMPa，溫度30~40°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用I~3倍濕菌絲體體積的濃度30%~70%甲醇水或乙醇水分2~3次洗滌濾渣，離心，收集清液；
[0024]3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至5.9~6.1,按中和液體積的I~2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度30%~70%甲醇水或乙醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；
[0025]4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用；
[0026]5)往濃縮液中加入2~4倍濕菌絲體體積的濃度40%~70%甲醇水或乙醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為2~IOmol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.9~7.1，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；
[0027]6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.5%、濃度為50%的甲醇或乙醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用I~3倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為40%~70%的甲醇水或乙醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為0.006mol濃度為40%~70%的甲醇水或乙醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀贗OOug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液；
[0028]7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液；
[0029]8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的*~^倍，然后用物質(zhì)的量為2~IOmol的
濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在0~10°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物；
[0030]9 )固形物用水洗凈后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、35~45 V的條件下干燥4~8小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素。
[0031]所述步驟3)中加入的助濾劑為硅藻土、珍珠巖、纖維素或石棉。
[0032]所述步驟4)中采用的納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在25°C~45°C。
[0033]實(shí)施例1
[0034]一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟:
[0035]I)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用2倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次， 每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；
[0036]2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入3倍濕菌絲體體積的去離子水和6倍濕菌絲體體積的甲醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2.5后，在壓力80MPa，溫度38°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用2倍濕菌絲體體積的濃度60%甲醇水洗滌濾渣，離心，收集清液；
[0037]3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至5.9，按中和液體積的2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度60%甲醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；
[0038]4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在35°C以下，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用；
[0039]5)往濃縮液中加入2倍濕菌絲體體積的濃度60%甲醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為8mol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至7.0，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；
[0040]6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.5%、濃度為50%的甲醇或乙醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用3倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為50%的甲醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為
0.006mol濃度為50%的甲醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀?00ug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液；
[0041]7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液；
[0042]8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的*倍，然后用物質(zhì)的量為Smol的濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在5°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物；
[0043]9)固形物用水洗凈`后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、45°C的條件下干燥8小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素，其純度達(dá)99.8%，收率達(dá)87.5%。
[0044]實(shí)施例2
[0045]一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟:
[0046]I)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用3倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；
[0047]2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入2倍濕菌絲體體積的去離子水和5倍濕菌絲體體積的甲醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至3.0后，在壓力90MPa，溫度40°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用3倍濕菌絲體體積的濃度70%甲醇水洗滌濾渣，離心，收集清液；
[0048]3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至5.9，按中和液體積的1%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度70%甲醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；
[0049]4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在30°C，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用；
[0050]5)往濃縮液中加入3倍濕菌絲體體積的濃度70%甲醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為9mol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.9，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；
[0051]6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%、濃度為50%的甲醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇溶液洗滌，接著用2倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為50%的甲醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為0.006mol濃度為50%的甲醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀趌OOug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液；
[0052]7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液；
[0053]8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的*倍，然后用物質(zhì)的量為IOmol的濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在0~10°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物；
[0054]9)固形物用水洗凈后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、40°C的條件下干燥8小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素，其純度達(dá)99.6%，收率達(dá)87.4%。
[0055]實(shí)施例3
[0056]一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，所述方法包括以下步驟:
[0057]I)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用4倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體；
[0058]2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入3倍濕菌絲體體積的去離子水和7倍濕菌絲體體積的甲醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2.0后，在壓力75MPa，溫度40°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用3倍濕菌絲體體積的濃度70%甲醇水洗滌濾渣，離心，收集清液；
[0059]3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.1,按中和液體積的2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾渣用濃度70%甲醇水溶液淋洗，收集清液，將清液與濾液混合形成混合液；
[0060]4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在40°C以下，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用；
[0061]5)往濃縮液中加入4倍濕菌絲體體積的濃度50%甲醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為IOmol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至7.1，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液；
[0062]6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.5%、濃度為50%的甲醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用2倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為50%的甲醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為0.006mol濃度為50%的甲醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀趌OOug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液；[0063]7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液；
[0064]8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的*倍，然后用物質(zhì)的量為IOmol的濃鹽酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在6°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物；
[0065]9)固形物用水洗凈后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、45°C的條件下干燥7小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素，其純度達(dá)99.7%，收率達(dá)87.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟: 1)恩拉霉素發(fā)酵液經(jīng)熱處理后真空抽濾，待恩拉霉素發(fā)酵液完全過濾后，得到的濾餅用2~4倍恩拉霉素發(fā)酵液體積的去離子水洗滌兩次，每次都減壓抽至無水滴流出，收集濕菌絲體； 2)將收集好的濕菌絲體稱重后放入大燒杯中，加入I~3倍濕菌絲體體積的去離子水和4~7倍濕菌絲體體積的甲醇或乙醇攪拌均勻，用鹽酸溶液調(diào)節(jié)PH至2.0~4.5后，在壓力60~lOOMPa，溫度30~40°C下，用勻漿機(jī)對(duì)調(diào)節(jié)好PH的菌絲體溶液進(jìn)行破碎，得到的破碎液用離心機(jī)離心，收集上清液，再用I~3倍濕菌絲體體積的濃度30%~70%甲醇水或乙醇水分2~3次洗滌濾渣，離心，收集清液； 3)混勻上述清液后用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至5.9~6.1,按中和液體積的I~2%加入助濾劑，攪拌均勻，抽濾，收集濾液；濾洛用濃度30%~70%甲醇水或乙醇水溶液淋洗,收集清液，將清液與濾液混合形成混合液； 4)混合液采用納濾膜進(jìn)行納濾濃縮分離，濃縮至原體積的1/5，分別收集濃縮液和滲透液，收集到的滲透液可以代替去離子水和甲醇循環(huán)使用； 5)往濃縮液中加入2~4倍濕菌絲體體積的濃度40%~70%甲醇水或乙醇水稀釋后，加入0.5%的氯化鈉，用物質(zhì)的量為2~IOmol的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至6.9~7.1，靜置30分鐘后，過濾，收集的濾液以每小時(shí)通過2倍量樹脂柱體積的流速通過已預(yù)處理的陽(yáng)離子交換樹脂柱脫色，收集脫色液； 6)將脫色液按照每小時(shí)通過0.5倍量樹脂柱體積的流速分別通過裝有弱酸性大孔吸附樹脂和弱堿性大孔吸附樹脂的串聯(lián)樹脂柱進(jìn)行吸附后，用含氯化鈉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%、濃度為50%的甲醇或乙醇溶液洗滌，再用4L濃度為50%甲醇或乙醇溶液洗滌，接著用I~3倍量吸附樹脂體積、PH為4.0、濃度為40%~70%的甲醇水或乙醇水洗脫兩次，最后用物質(zhì)的量為0.006mol濃度為40%~70%的甲醇水`或乙醇水洗脫至流出液?jiǎn)挝坏陀?00ug/ml，分別收集同種物質(zhì)洗提液； 7)將收集到的同種物質(zhì)洗提液通過高壓制備梯度系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，得到恩拉霉素純度達(dá)99.5%以上的溶液； 8)上述的溶液經(jīng)減壓濃縮至原體積的I~:^倍，然后用物質(zhì)的量為2~IOmol的濃鹽5 10酸調(diào)節(jié)PH至0.85，在0~10°C下靜止一天后，離心分離，得到固形物； 9)固形物用水洗凈后，在壓強(qiáng)小于-0.08MPa、35~45°C的條件下干燥4~8小時(shí)，最后得到白色晶體狀的恩拉霉素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，其特征在于:所述步驟3)中加入的助濾劑為硅藻土、珍珠巖、纖維素或石棉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種減少溶媒使用的提取高純度恩拉霉素的方法，其特征在于:所述步驟4)中采用的納濾膜截留分子量為200~500，滲透液流速控制在200~350L/h，濃縮壓力控制在1.0~2.4MPa范圍，濃縮液溫度控制在25°C~45°C。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK103709235SQ201310730536
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月26日
【發(fā)明者】趙松, 王黎明 申請(qǐng)人:福建省?？顾帢I(yè)股份有限公司