一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，其操作步驟如下：（1）粉碎：干葉，粉碎至10～20目；（2）浸洗：放入水中，料液質(zhì)量體積比為1:100（g/mL），常溫浸泡6小時(shí)；（3）提?。褐匦录铀?，以1:25（g/mL）料液質(zhì)量體積比，95℃提取60分鐘，并趁熱分離提取液；（4）結(jié)晶：室溫或制冷冷卻提取液，于4-10℃促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得粗品；（5）重結(jié)晶：加沸水至粗品全部溶解，重結(jié)晶，濾母液，獲得產(chǎn)品。所述的操作步驟（1），原材料若為鮮葉，則須剪碎至1-2mm，操作步驟（2）的浸洗料液為1:80（g/mL）。本發(fā)明一次浸洗、一次提取、一次重結(jié)晶即能滿足較高純度二氫楊梅素產(chǎn)品的快速制備要求。
【專利說明】一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥成份提取方法，具體的是一種從顯齒蛇葡萄中高效提取二氫楊梅素的方法。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]顯齒蛇葡萄(Hand.-Mazz.) ff.T.Wang)系葡萄科蛇葡萄屬，主要分布在海拔200~1000米的華南山地地區(qū)，閩、贛、湘、粵、桂、鄂、黔等省均有廣泛分布。莖略呈圓柱形，直徑0.5~3mm，表面黃綠色至黃棕色，具縱棱，質(zhì)脆，斷面略顯纖維性；葉片呈長橢圓形、狹菱形、菱狀卵形或披針形，長2~5cm，寬I~2cm，邊緣有鋸齒，基部楔形。民間飲用實(shí)踐和科學(xué)研究結(jié)果表明，顯齒蛇葡萄具有清熱解毒、抗菌消炎、祛風(fēng)除濕、減脂降壓、解酒護(hù)肝等功效。
[0004]顯齒蛇葡萄葉富含黃酮化合物，其中二氫楊梅素((2R，3R)_3，5，7-三羥基-2-(3, 4, 5-三羥基苯基)苯并二氫吡喃-4-酮,Dihydromyricetin)占總黃酮含量的的80%左右，既已證明為核心藥效成分，具有很高的開發(fā)價(jià)值。涉及二氫楊梅素的提取、純化、結(jié)構(gòu)修飾及藥理等方面的中外文獻(xiàn)達(dá)546篇，發(fā)明專利有38個(gè)，其中涉及提取技術(shù)的發(fā)明專利有14個(gè)(一種二氫楊梅素的純化方法CN201010167579.2，一種從枳犋子中提取二氫楊梅素的方法200710026288.X，二氫楊梅素的制備方法及其用途99119123.4，微波法提取二氫楊梅素及其組合物200410027782.4，從蛇葡萄屬植物中同時(shí)分離二氫楊梅素和楊梅素的方法201110458347.7，用顯齒蛇葡萄植物生產(chǎn)二氫楊梅樹皮素的方法CN01114564.1，一種從藤茶中提取二氫楊梅素的方法CN200510032918.5，一種從藤茶中提取二氫楊梅素的方法CN200510102129.4，二氫楊梅素新制備方法、藥物制劑及用途CN200910066518.4，從藤茶中提取二氫楊梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法CN201010284838.X，藤茶中二氫楊梅素的制備方法CN201110093346.7，一種從藤茶中提取二氫楊梅素的方法CN201210229991.1，一種從藤茶中提取二氫楊梅素和藤茶多糖的方法CN201010149014.1，一種從顯齒蛇葡萄中提取高含量二氫楊梅素的工藝方法CN201210401620.7)。文獻(xiàn)及專利文件多采用水熱提取、醇水提取方法，配合結(jié)晶、柱層析等除雜工藝，先提取后純化，步驟相對(duì)較多，而且二氫楊梅素粗提物的可溶性雜質(zhì)(多糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等)較多，需通過層析工藝去除，耗費(fèi)較多的有機(jī)溶劑，成本偏高。
[0005]糖類、氨基酸及其他多種酚性化合物是主要的雜質(zhì)成分。顯齒蛇葡萄中分離到的多糖AGP-3等具有較高的水溶解度(羅祖友，程超，李偉，吳謀成.藤茶水溶性多糖的分離純化及性質(zhì)的研究[J].食品 科學(xué).2007，28(01): 151-154)，氨基酸和茶多酚類化合物在水中比二氫楊梅素具有更大的溶解度。二氫楊梅素在冷水中的溶解度很低，250C溶解度為 0.20mg/mL (L1-Ping Ruan, Bo-Yang Yu, Guang-Miao Fu, Dan-ni Zhu.1mprovingthe solubility of ampelopsin by solid dispersions and inclusion complexes[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2005, 38(3): 457 - 464.),而沸水溶解度達(dá)15.90mg/mL(林淑英.顯齒蛇葡萄中二氫楊梅素的提取純化及抗氧化活性研究[D].博士論文，2004，P51)，因而便于結(jié)晶純化。本發(fā)明基于以上文獻(xiàn)和相關(guān)發(fā)明專利，介紹一種從顯齒蛇葡萄葉中快速提取較高純度二氫楊梅素的工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便、生產(chǎn)成本低的從顯齒蛇葡萄葉中快速提取高純度二氫楊梅素的方法。[0007]本發(fā)明的目的及解決其主要技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，操作步驟中包含有:
(1)粉碎:干葉，粉碎至10~20目；
(2)浸洗:放入水中，料液質(zhì)量體積比為1:100(g/mL)，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)提取:重新加水，以1:25(g/mL)料液質(zhì)量體積比，95°C提取60分鐘，并趁熱分離提取液；
(4)結(jié)晶:室溫或制冷冷卻提取液，于4-10°C促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得粗品；
(5)重結(jié)晶:加沸水至粗品全部溶解，重結(jié)晶，濾母液，獲得產(chǎn)品。
[0008]所述的操作步驟(1)，原材料若為鮮葉，采摘時(shí)間不超過2天且未損失大量水分，則須剪碎至l_2mm，操作步驟(2)的浸洗料液質(zhì)量體積比為1:100 (g/mL)。
[0009]所述的操作步驟(2)的浸洗液可以重復(fù)利用4-5次。
[0010]所述的操作步驟(5)獲得的母液可以重復(fù)用于熱溶解粗品，連續(xù)使用五次。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有明顯的優(yōu)點(diǎn)和有益效果。由以上技術(shù)方案可知， 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:采用粉碎一浸洗一提取一結(jié)晶一重結(jié)晶，先浸洗除雜后熱水提取
的方法，而不是提取后除雜，使提取物雜質(zhì)含量降低，可以不經(jīng)濃縮步驟進(jìn)行結(jié)晶；工藝簡單，操作方便，能耗低，減小了二氫楊梅素?zé)崴崛∫褐械目扇苄噪s質(zhì)，便于進(jìn)一步純化。其中:
1、操作步驟(2)，干葉浸洗料液質(zhì)量體積比為1:100 (g/mL)，或鮮葉浸洗料液質(zhì)量體積比為1:80 (g/mL)，能夠較大量的浸提糖類、氨基酸等雜質(zhì)，而不會(huì)損失大量的二氫楊梅素。
[0012]2、操作步驟(4)有促進(jìn)結(jié)晶，于室溫慢慢冷卻可以提高晶體均勻度，形成相對(duì)大量的晶核，處理量大則需要制冷冷卻，4-10°C有利于晶體生長，提高得率。
[0013]3、操作步驟(5)獲得的母液可以重復(fù)用于熱溶解粗品，連續(xù)使用五次對(duì)產(chǎn)品的純度影響不大。
[0014]
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提出的一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法【具體實(shí)施方式】、特征及其功效，詳細(xì)說明如后。
[0016]實(shí)施例1:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄干燥葉片，粉碎至10~20目；
(2)取制備的碎葉1.0g，用濾紙包好，放入IOOmL水中，常溫浸泡6小時(shí)；(3)取出料包，浙干，加水以1:25(g/mL)料液質(zhì)量體積比，95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液，促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得254mg粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得144mg產(chǎn)品。
[0017]上述的濾紙為中速分析濾紙，上述的干燥葉片經(jīng)HPLC檢測(cè)，二氫楊梅素含量為
35.27%。
[0018]上述過程獲得粗品的純度為69.83%，產(chǎn)品的純度為89.01%,上述工藝的得率為
36.34%ο
[0019]實(shí)施例2:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄鮮葉，剪至1-2_碎葉；
(2)取制備的碎葉100g放入8L水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加2.5L水于95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液,促進(jìn)結(jié)晶,過濾獲得9.14g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得4.71g產(chǎn)品。
[0020]上述的鮮葉為采摘期不超過兩天且未損失太多水分的營養(yǎng)期葉片或嫩葉；所述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，所述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶。
[0021]上述的鮮葉5.0g于60°C烘干稱重為1.212g，HPLC測(cè)得干葉二氫楊梅素含量為31.72%，折合鮮葉中二氫楊梅素含量為13.08%。
[0022]上述過程獲得粗品的純度為71.53%，產(chǎn)品的純度為94.17%，上述工藝的得率為
33.91%。
[0023]實(shí)施例3:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄干燥葉片，粉碎至10~20目；
(2)取碎葉100g放入IOL水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加2.5L溶劑于95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液,促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得26.155g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得13.097g產(chǎn)品。
[0024]上述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，所述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶；上述的干燥葉片經(jīng)HPLC檢測(cè)，二氫楊梅素含量為35.27%。
[0025]上述過程獲得粗品的純度為74.51%，產(chǎn)品的純度為94.77% ;上述工藝的得率為35.19%。
[0026]實(shí)施例4:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄鮮葉，剪至1-2_碎葉；
(2)取制備的碎葉1000g放入80L水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加25L水以95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液，促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得97.58g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得49.90g產(chǎn)品。[0027]上述的鮮葉為采摘期不超過兩天且未損失太多水分的營養(yǎng)期葉片或嫩葉。所述的溶劑為水，所述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，所述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶。
[0028]上述的鮮葉5.0g于60°C烘干稱重為1.212g，HPLC測(cè)得干葉二氫楊梅素含量為31.72%，折合鮮葉中二氫楊梅素含量為13.08%。
[0029]上述過程獲得粗品的純度為68.22%，產(chǎn)品的純度為91.84% ;上述工藝的得率為35.04%ο
[0030]實(shí)施例5:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄干燥葉片，粉碎至10~20目；
(2)取制備的碎葉1000g放入100L水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加25L水以95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液，促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得269.8g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得130.1g產(chǎn)品。
[0031]上述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，上述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶。所述的干燥葉片經(jīng)HPLC檢測(cè)，二氫楊梅素含量為35.27%。
`[0032]上述過程獲得粗品的純度為70.07%，產(chǎn)品的純度為93.08% ;上述工藝的得率為34.33%。
[0033]實(shí)施例6:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄鮮葉，剪至1-2_碎葉；
(2)取IOKg制備的碎葉放入800L水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加250L水于95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液，促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得901.5g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得475.4g產(chǎn)品。
[0034]上述的鮮葉為采摘期不超過兩天且未損失太多水分的營養(yǎng)期葉片或嫩葉；上述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，上述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶。
[0035]上述的鮮葉5.0g于60°C烘干稱重為1.212g，HPLC測(cè)得干葉二氫楊梅素含量為31.72%，折合鮮葉中二氫楊梅素含量為13.08%。
[0036]上述過程獲得粗品的純度為77.09%，產(chǎn)品的純度為94.18% ;上述工藝的得率為34.23%。
[0037]實(shí)施例7:
一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，它包括以下步驟:
(1)取顯齒蛇葡萄干燥葉片，粉碎至10-20目；
(2)取IOKg制備的碎葉放入1000L水中，常溫浸泡6小時(shí)；
(3)濾除浸洗液，加250L水于95°C提取60分鐘，趁熱分離提取液；
(4)冷卻提取液，促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得247.2g粗品；
(5)加沸水至粗品全部溶解，冷卻結(jié)晶，濾除母液，獲得132.0g產(chǎn)品。
[0038]上述的浸洗液也可用于步驟(2)的浸洗，上述的母液也可用于步驟(5)的重結(jié)晶。上述的干燥葉片經(jīng)HPLC檢測(cè)，二氫楊梅素含量為35.27%。
[0039]上述過程獲得粗品的純度為71.54%，產(chǎn)品的純度為92.26% ;上述工藝的得率為
34.53%。
[0040]以上實(shí)施例說明，本發(fā)明最大限度地減少了提取物中的可溶性雜質(zhì)，使熱水粗提物干品中二氫楊梅素純度達(dá)68.22%-74.51%，遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)值40% (張友勝.類茶植物顯齒蛇葡萄化學(xué)成分的分離鑒定與DMY提制技術(shù)研究[D].博士論文，2001，P67)，經(jīng)過一次重結(jié)晶即獲得純度為89.01% - 94.77%的二氫楊梅素，得率為33.91%_36.34%。本發(fā)明一次浸洗、一次提取、一次重結(jié)晶即能滿足較高純度二氫楊梅素產(chǎn)品的快速制備要求。
[0041]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍 屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，其特征在于:操作步驟中包含有: (1)粉碎:干葉，粉碎至10~20目； (2)浸洗:放入水中，料液質(zhì)量體積比為1:100(g/mL)，常溫浸泡6小時(shí)； (3)提取:重新加水，以1:25(g/mL)料液質(zhì)量體積比，95°C提取60分鐘，并趁熱分離提取液； (4)結(jié)晶:室溫或制冷冷卻提取液，于4-10°C促進(jìn)結(jié)晶，過濾獲得粗品； (5)重結(jié)晶:加沸水至粗品全部溶解，重結(jié)晶，濾母液，獲得產(chǎn)品。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，其特征在于:所述的操作步驟(I )，原材料若為鮮葉，采摘時(shí)間不超過2天且未損失大量水分，則須剪碎至l_2mm，操作步驟(2)的浸洗料液質(zhì)量體積比為1:80 (g/mL)。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，其特征在于:操作步驟(2)的浸洗液可以重復(fù)利用4-5次。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種快速提取顯齒蛇葡萄葉中高純度二氫楊梅素的方法，其特征在于:操作步驟(5)獲得的母液可以重復(fù)用于熱溶解粗品，連續(xù)使用五次。
【文檔編號(hào)】C07D311/32GK103554076SQ201310536277
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】余正文, 王家勝, 張妮, 何磊磊, 玉秋萍, 孔琪 申請(qǐng)人:貴州師范大學(xué)