一種從棗皮中高效提取cAMP的方法
【專利摘要】本發(fā)明一種從棗皮中高效提取cAMP的方法屬于農(nóng)產(chǎn)品深加工【技術(shù)領(lǐng)域】；本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題為提供一種有效利用棗皮中cAMP，工藝簡單成本低廉的高效提取cAMP的方法；所采用的技術(shù)方案為：將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；本發(fā)明廣泛應(yīng)用于棗品加工【技術(shù)領(lǐng)域】。
【專利說明】—種從棗皮中高效提取cAMP的方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明一種從棗皮中高效提取cAMP的方法屬于農(nóng)產(chǎn)品深加工【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]紅棗是中國人民的傳統(tǒng)果品，是我國特有的果品資源。我國擁有世界98%以上的紅棗種植面積和產(chǎn)量，以及100%的棗產(chǎn)品國際貿(mào)易。我國紅棗品種豐富，有700余個品種，其中在全國各地形成百萬畝以上種植面積的主栽品種有10余個，如金絲小棗、呂梁木棗、贊皇大棗、交城駿棗、太谷壺瓶棗、河南灰棗等。目前全國紅棗種植面積2000余萬畝，產(chǎn)量430余萬噸，是我國第一大干果和第七大果品，極具產(chǎn)業(yè)化開發(fā)價值。
[0003]紅棗皮薄肉厚，香甜脆郁、營養(yǎng)豐富，素有“木本糧食、滋補佳品”之稱；紅棗富含多糖、維生素、礦物質(zhì)、皂苷、生物堿和黃酮類物質(zhì)等，具有極高的營養(yǎng)價值、藥用價值及多種保健功效，是集藥、食、補3大功能為一體的優(yōu)質(zhì)滋補保健果品。鮮棗中含維生素38(T600mg/100g，比蘋果、桃高80~90倍，比柑桔高7~10倍，甚至比以維生素C含量高而著稱的獼猴桃還高，為目前栽培果實維生素C含量之冠。紅棗中還含有豐富的蘆丁，能夠降低毛細管脆性，降低血管膽固醇、血脂、血糖含量，防止心腦血管疾病，可以治療高血壓和動脈硬化等疾病。紅棗所含的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，具有抗過敏作用和抑制癌癥細胞生長并促進癌細胞轉(zhuǎn)化成正常細胞的功能，同時對防治冠心病也有一定的療效。紅棗多糖具有清除自由基、抗腫瘤、抗衰老、提高機體特異及非特異性免疫功能的作用。藥理研究亦表明，紅棗有降低血清中的膽固醇，增加血清總蛋白質(zhì)及白蛋白，保護肝臟，抗變態(tài)反應(yīng)，增強肌力，抑制癌細胞增殖等作用。
[0004]隨著人們保健意識的增強，工業(yè)化生產(chǎn)保健食品大勢所趨，是人們對保健食品所具有的特殊療效迫切需求的必然結(jié)果。因此，隨著人們對紅棗營養(yǎng)價值認識的不斷加深，大力開發(fā)研究紅棗保健食品有著廣闊的市場前景和較高的經(jīng)濟效益及社會效益。雖然，除傳統(tǒng)的免洗干棗、蜜棗、熏棗、酒棗外，紅棗的各種固體飲料、液體飲料、紅棗濃漿以及紅棗保健食品等新產(chǎn)品也不斷涌現(xiàn)。但總體而言:紅棗加工業(yè)技術(shù)含量較低，產(chǎn)品檔次不高，技術(shù)設(shè)備落后，加工的精度、深度不夠，而且隨著紅棗產(chǎn)業(yè)不斷擴大、加工研發(fā)不斷深入，由此而產(chǎn)生的副產(chǎn)物(棗渣、棗皮、棗核等)也逐漸增多，所以紅棗資源的綜合利用程度下降，并且未能形成規(guī)?；a(chǎn)?，F(xiàn)在，市場紅棗產(chǎn)品較為單一，缺乏突出棗果營養(yǎng)和獨特食療價值的高附加值產(chǎn)品，所以很難滿足廣大消費者的需求。這就大大影響了紅棗資源優(yōu)勢向商品優(yōu)勢的轉(zhuǎn)化和棗區(qū)經(jīng)濟的發(fā)展，以及產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整。
[0005]現(xiàn)對紅棗副產(chǎn)物的研究報道中大都是關(guān)于工業(yè)生產(chǎn)中分離出的棗渣，而對專門針對棗皮的研究鮮有報道，有研究表明，不同品種的棗果內(nèi)cAMP含量差別很大，相同品種的棗果其不同的組織部位cAMP含量也存在較大差異，其中以棗皮中cAMP的含量為最高。
[0006]現(xiàn)有紅棗營養(yǎng)濃縮液生產(chǎn)工藝中，最終濃縮液中cAMP含量達到6(Tl25mg/kg，相當(dāng)于干棗中cAMP的提取率為30~60 mg/kg，遠低于有關(guān)報道中紅棗cAMP的提取率。這說明紅棗中的大部分cAMP并未進入濃縮液，而極有可能殘留在棗渣和棗皮中。但在現(xiàn)有紅棗濃縮液生產(chǎn)工藝流程中，紅棗原料經(jīng)過打漿、超聲波浸提、酶解、離心等一系列步驟的處理分離得到棗渣，故在棗渣中cAMP的殘留量相對較少；而棗皮和棗核是紅棗原料經(jīng)揀選、清洗、破碎、復(fù)水、打漿后就將其分離出去的，這個過程都是在低溫(低于60°C )、快速的處理下進行，棗皮并沒有經(jīng)之后的超聲波提取、酶解等步驟處理，所以其在整個生產(chǎn)過程中沒有被充分利用，尤其是棗皮中的cAMP未被有效提取出來，對濃縮液中cAMP提取率的貢獻率幾乎為零。這可能是造成紅棗營養(yǎng)濃縮液生產(chǎn)過程中cAMP提取率較低的直接原因。
[0007]最近幾年，隨著人們對大棗進行深入地研究，開發(fā)出許多棗產(chǎn)品，如棗酒、棗汁等。但隨著大棗工業(yè)加工的發(fā)展，也不可避免的帶來了許多工業(yè)生產(chǎn)廢料，如棗渣、棗皮、棗核等。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在大棗的工業(yè)廢料中含有多糖、三帖酸、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)及紅棗色素等有效成分。針對紅棗工業(yè)生產(chǎn)中所產(chǎn)生的副產(chǎn)物的開發(fā)現(xiàn)狀和藥用前景，本試驗將研究目標(biāo)定位于從棗皮中提取分離其富含的cAMP，尋找到可行、成本低、環(huán)境友好的提取工藝，以期為給工業(yè)化生產(chǎn)提供較為詳盡的技術(shù)方案和試驗數(shù)據(jù)，為開發(fā)新的保健品及醫(yī)藥制劑提供原材料。這樣既可以提高資源的有效利用率，又能降低生產(chǎn)廢料的排放量，節(jié)約資源，保護環(huán)境，同時可以帶來良好的經(jīng)濟效益及社會效益。
[0008]環(huán)磷酸腺苷是核苷酸的衍生物，為蛋白激酶致活劑，是有機體中廣泛存在的一種具有生理活性的重要物質(zhì)，為細胞內(nèi)傳遞激素和遞質(zhì)作用充當(dāng)中介因子，是當(dāng)前分子生物學(xué)研究的重要內(nèi)容之一。醫(yī)學(xué)研究已證明，環(huán)核苷酸對40多種疾病(包括癌癥、高血壓、心肌梗塞、冠心病、心肌梗塞和心源性休克等重大疾病)有顯著療效?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，cAMP可使培養(yǎng)條件下瘋狂分裂的癌細胞停止分裂，甚至恢復(fù)正常。臨床研究也證明，cAMP或其雙丁酞衍生物對冠心病、心肌梗塞和心源性休克等重大疾病有明顯療效。環(huán)磷酸腺苷(cAMP)作為核苷酸的衍生物，具有廣闊的市場開發(fā)前景。
[0009]紅棗中不僅含有大量的具有生理活性的氨基酸及多糖類物質(zhì)，同時還含有較為豐富的維生素C、微量元素、cAMP等多種生物活性物質(zhì)，其中紅棗多糖、cAMP和三萜酸是棗果中最具特色和優(yōu)勢的三大類功能性成分，而cAMP是棗果中最為突出的重要生物活性物質(zhì)，在鮮棗中其含量可高達100~600 nmol/g，是己測動植物材料中最高的，為一般動植物材料cAMP含量的數(shù)千至數(shù)萬倍。不同的物種或同一物種不同品種間cAMP含量存在較大的差異，即使是同一植物品種，其不同組織部位cAMP的相對含量也有所不同。有研究表明:不同品種的棗果內(nèi)cAMP含量差別較大，且相同品種的棗果肉中cAMP含量與采摘期及棗的品質(zhì)也有一定的關(guān)系:成熟度較好、果肉較豐滿的棗果，cAMP含量較高；棗果的不同組織部位其cAMP含量也大為不同，其中以棗皮中cAMP的含量為最高。
[0010]紅棗擁有其他動植物材料無法比擬的高cAMP含量，但在紅棗營養(yǎng)濃縮液制備過程中，cAMP進入濃縮液的比例并不高，這就意味著更多的cAMP殘留在其副產(chǎn)物中。研究發(fā)現(xiàn):要使紅棗細胞內(nèi)cAMP最大程度地溶出，關(guān)鍵在于降低cAMP與其他物質(zhì)之間的結(jié)合力以及破壞阻礙cAMP溶出的細胞壁。傳統(tǒng)方法采用高溫長時間的浸提可提高提取液中cAMP的含量，但高溫長時間作用會造成營養(yǎng)濃縮液風(fēng)味劣化及熱敏性營養(yǎng)成分損失，使得濃縮汁感官品質(zhì)和營養(yǎng)價值下降?，F(xiàn)探求一種既能保證產(chǎn)品品質(zhì)又能提高cAMP提取率的制備方法具有十分重要的意義，因此綜合利用復(fù)合酶解破壁、超聲波輔助提取等較為溫和的技術(shù)在功能成分提取領(lǐng)域的優(yōu)勢對棗皮中cAMP進行提取，以期進一步提高cAMP的提取率，既可以合理利用生產(chǎn)過程中的廢棄料，避免資源浪費和環(huán)境污染；還可以為綜合利用紅棗資源 、突出棗果營養(yǎng)保健價值以及生產(chǎn)高附加值產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種有效利用棗皮中cAMP，工藝簡單成本低廉的高效提取cAMP的方法。
[0012]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種從棗皮中高效提取cAMP的方法:將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1:10-15，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為45飛(TC，酶解pH值為3.5^5.5，酶解廣3小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為2(T80kHz，溫度為50 °C~65 °C的條件下，處理2(T60min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0013]所述復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.3^0.8:100o [0014]所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為10~40:2~15:1~8:5~20。
[0015]所述棗皮高效提取cAMP整個步驟中處理溫度不高于65 °C。
[0016]所述棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0017]所述棗果選用呂梁木棗。
[0018]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下有益效果。
[0019]1、品種的選擇。本試驗選擇富含cAMP的棗品種——呂梁木棗，為晉陜峽谷帶黃河灘流域、海拔800米以下區(qū)域的主栽品種。并且該區(qū)域光照充足、晝夜溫差較大，有利于紅棗營養(yǎng)物質(zhì)的積累，經(jīng)檢測呂梁木棗是已測棗果品種中cAMP含量最高的品種之一。
[0020]2、原料的選擇。關(guān)于棗皮中cAMP的提取鮮有報道，選擇棗皮作為試驗原料:一方面，棗皮是棗果中cAMP含量最多的部位；另一方面，棗皮是紅棗濃縮液生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物，既可以通過高效提取棗皮中cAMP來提高紅棗利用價值，又可以避免資源浪費。
[0021]3、適時采收。在成熟期大棗中cAMP的含量達到最大值。呂梁木棗在山西當(dāng)?shù)匾话?月下旬進入脆熟期，棗果表面著色轉(zhuǎn)紅，10月上中旬進入完熟期，棗肉含糖量得到充分積累，其他營養(yǎng)物質(zhì)含量包括cAMP的含量都達到峰值。由此，通常在完熟期采收。
[0022]4、溫和提取條件。本試驗選用復(fù)合酶酶法提取和超聲波輔助提取，并且在整個實驗過程中，溫度均控制在65°C以下，其目的都是為活性物質(zhì)的提取提供一個較為溫和的條件，有效避免了高溫引起的營養(yǎng)物質(zhì)的損失、高溫下美拉德反應(yīng)導(dǎo)致的褐變、及高溫下引起的焦糊味等不良變化，有效地保持了產(chǎn)品良好的感官品質(zhì)。本發(fā)明在提取前的預(yù)處理過程中也應(yīng)控制處理溫度低于65°C，以免提前失活。
[0023]5、復(fù)合酶劑的確定。在紅棗細胞中，蛋白質(zhì)、粘性果膠質(zhì)、淀粉、多糖之間緊密結(jié)合，阻擋細胞內(nèi)物質(zhì)的外逸，導(dǎo)致紅棗中有效物質(zhì)提取工藝周期過長。引入復(fù)合酶目的就是借助不同酶自身的一些特性，在提高紅棗有效物質(zhì)得率和縮短提取時間的前提下，直接克服具有活性的紅棗有效物質(zhì)在提取過程的難題。
[0024]6、復(fù)合酶各酶制劑添加量確定。本試驗在單因素試驗的基礎(chǔ)上進行了正交試驗，以棗皮中cAMP提取率為指標(biāo)，對各影響因素進行優(yōu)化試驗，得到最優(yōu)的酶制劑加入量參數(shù):纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶、蛋白酶的添加量分別為0.1-θ.4%、0.02-0.15%、0.01-0.08%,0.05^0.2%。
[0025]7、復(fù)合酶酶解和超聲波輔助提取工藝參數(shù)確定。以棗皮中cAMP提取率為指標(biāo)，在單因素試驗的基礎(chǔ)上進行了正交優(yōu)化試驗，分別得到復(fù)合酶酶解和超聲波輔助提取的最優(yōu)工藝參數(shù)。復(fù)合酶酶解最優(yōu)工藝參數(shù)為料液比為1:10-15，酶解溫度為45飛(TC，酶解pH值為3.5^5.5，酶解時間為f 3h。超聲波輔助提取最優(yōu)工藝參數(shù)為超聲頻率2(T80kHz，處理時間2(T60min，處理溫度50~65°C。
[0026]8、提取效率高。利用高效液相色譜儀外標(biāo)法對棗皮濃縮液中cAMP含量進行檢測，與現(xiàn)有紅棗cAMP濃縮液提取技術(shù)相比，采用本試驗方法，濃縮液中cAMP含量可達到紅棗果肉濃縮液中cAMP含量的5~7倍，可作為一種食品配料或者營養(yǎng)強化劑加以應(yīng)用。
[0027]本發(fā)明選用呂梁木棗棗皮為發(fā)明材料，采用該發(fā)明方法可使?jié)饪s液中cAMP含量達到50(T650mg/kg，與以紅棗果肉為主要原料的紅棗濃縮汁生產(chǎn)過程相比，專門針對棗皮中cMAP進行高效提取所得的濃縮液中cAMP含量是紅棗果肉濃縮液cAMP含量的5~7倍。同時也大大提高了紅棗中cAMP的提取率，得到高濃度cAMP的濃縮液，充分有效利用了紅棗資源。
[0028]復(fù)合酶酶解法主要是利用復(fù)合酶中各酶制劑之間的協(xié)同作用對阻礙待提取物質(zhì)溶出的基體進行降解，從而達到提高提取率和縮短提取周期的目的。其中，纖維素酶主要用于對植物細胞壁中纖維質(zhì)的水解，并可將淀粉和纖維質(zhì)轉(zhuǎn)化為糖類；果膠酶可以對細胞壁的中間層和不溶性高分子原果膠進行分解；木聚糖酶可破壞植物組織纖維，降解木聚糖和β -葡聚糖，與纖維素酶協(xié)同破壞細胞壁結(jié)構(gòu)，從而增加細胞內(nèi)物質(zhì)的溶出。蛋白酶對植物細胞中的游離蛋白質(zhì)具有水解作用，其可使植物結(jié)構(gòu)變得松散；同時還會使糖蛋白和聚糖中游離蛋白質(zhì)水解，降低了它們與糖鏈或者目標(biāo)物質(zhì)的結(jié)合力，有利于細胞結(jié)構(gòu)的破壞和目標(biāo)物質(zhì)的浸出。
[0029]本發(fā)明復(fù)合酶的選擇
在紅棗細胞中，蛋白質(zhì)、粘性果膠質(zhì)、淀粉、多糖之間緊密結(jié)合，阻擋細胞內(nèi)物質(zhì)的外逸，導(dǎo)致紅棗中有效物質(zhì)提取工藝周期過長。引入復(fù)合酶目的就是借助酶自身的一些特性，在提高紅棗有效物質(zhì)得率和縮短提取時間的前提下，直接地克服具有活性的紅棗有效物質(zhì)提取過程的難題。酶制劑的品種很多，但功效不一，結(jié)合紅棗棗皮的結(jié)構(gòu)及cAMP在細胞中的位置及其存在形式有針對性地選擇合適的酶制劑。
[0030]本發(fā)明中酶解破壁所選用的復(fù)合酶為纖維素酶-果膠酶-木聚糖酶-蛋白酶。纖維素酶、蛋白酶、果膠酶和木聚糖酶的協(xié)同作用，催化紅棗細胞中不同部位的各物質(zhì)發(fā)生水解，促使細胞壁降解其結(jié)構(gòu)和功能破壞，細胞內(nèi)的膜系統(tǒng)就會因內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變化而發(fā)生紊舌L、變形或破裂，從而使膜的通透性增加，促進細胞內(nèi)物質(zhì)的溶出。
[0031]本發(fā)明在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用4因素3水平正交表L9(34)進行正交試驗，以棗皮提取液中cAMP含量為指標(biāo)，綜合考察復(fù)合酶制劑中各酶添加量對棗皮提取液中cAMP含量的影響。探索出纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶、蛋白酶的最適添加量分別為0.1%-0.4%、
0.02~0.15%,0.01%-Ο.08%,0.05~0.2%。
[0032]同時本發(fā)明對酶解工藝進行研究:以料液比、酶解溫度、pH、酶解時間為影響因素，以棗皮提取液中cAMP含量為檢測指標(biāo)，進行單因素試驗，以確定各因素對cAMP提取影響的最佳參數(shù)。在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用4因素3水平正交表L9(34)進行正交試驗，以棗皮中cAMP提取率為指標(biāo)，綜合考察料液比、酶解溫度、時間和pH對棗棗皮提取液中cAMP含量的影響。最終確定最佳的酶處理工藝參數(shù)為:料液比為1:10-15，酶解溫度為45飛(TC，酶解pH為3.5~5.5，酶解時間為I~3h。
[0033]超聲波提取法主要是通過超聲波產(chǎn)生獨特的機械振動效應(yīng)和空化效應(yīng)作用于媒質(zhì)質(zhì)點。當(dāng)超聲波振動時能產(chǎn)生并傳遞強大的能量，引起媒質(zhì)質(zhì)點以較大速度和加速度進入振動狀態(tài)，使媒質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，促使有效成分快速進入溶劑中；同時超聲波強大的能量作用于媒質(zhì)，在振動處于稀疏狀態(tài)時，聲波在樣品基體里比電磁波穿透更深，停留時間也更長，使溶劑被擊成很多小的空穴，這些小空穴一瞬間就閉合，閉合時產(chǎn)生高達3000 MPa的瞬間壓力，即產(chǎn)生空化效應(yīng)，也就是在相當(dāng)大的破壞應(yīng)力的作用下，液體內(nèi)形成空化泡的現(xiàn)象?？栈菰谒查g迅速漲大并破裂，破裂時把吸收的聲場能量在極短的時間和極小的空間內(nèi)釋放出來，形成高溫和高壓的環(huán)境，同時伴隨有強大的沖擊波和微聲流，從而破壞細胞壁結(jié)構(gòu)，使其在瞬間破裂，植物細胞內(nèi)的有效成分得以釋放、直接進入溶劑并充分混合，從而提高提出率。另外，超聲波的許多次級效應(yīng)如熱效應(yīng)、乳化、擴散、擊碎、化學(xué)效應(yīng)、生物效應(yīng)、凝聚效應(yīng)等，也能加速植物有效成分在溶劑中的擴散釋放，促進植物有效成分與溶劑充分接觸，有利于使植物中有效成分向提取溶劑轉(zhuǎn)移、擴散，提高提取效率。本發(fā)明以超聲波頻率、超聲時間、超聲溫度為影響因素，以棗皮提取液中cAMP含量為檢測指標(biāo)，進行單因素試驗，以確定超聲各因素對cAMP提取影響的最佳參數(shù)。在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用3因素3水平正交表L9 (33)進行正交試驗，以棗皮提取液中cAMP含量為指標(biāo)，綜合考察超聲波功率、超聲時間及溫度對棗皮提取液中cAMP含量的影響。最終確定最佳的超聲輔助提取工藝參數(shù)為:超聲頻率20-80kHz，處理時間20-60min，處理溫度50-65°C。
[0034]本發(fā)明經(jīng)過一次復(fù)合酶酶解和超聲波助提后的產(chǎn)物即可達到應(yīng)用的目的，在本【技術(shù)領(lǐng)域】中可知，如果進行多次復(fù)合酶酶解和超聲波助提，會提高棗皮cAMP的提取率，但隨著提取次數(shù)的增加，成本也會隨之增加，因此棗皮cAMP提取率和提取次數(shù)會有一個平衡的最佳值，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員通過多次試驗?zāi)軌虻玫降摹?br> [0035]本發(fā)明測定cAMP的方法 色譜條件確定
色譜柱為 InertSustain C18 柱(5 Mm、4.6 mm X 150 mm);流動相:20mmol/L KH2P04:CH30H(體積比 85:15);柱溫:30°C ;柱壓:19.11 MPa ;流速:1.0 mL/min ;波長:254 nm ；進樣量:?ο μ?。
[0036]標(biāo)準曲線繪制及cAMP含量的測定
以0.02mol/L的磷酸二氫鉀為溶劑，準確配制0.lmg/mL的cAMP標(biāo)準液，再分別配置
1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0Pg/mL 的使用液，過 0.45 Mm 針式濾頭，濾液待用。
[0037]準確吸取提取液2.0 mL，加人10 mL容量瓶，用0.02mol/L磷酸二氫鉀定容，過
0.45 Mm針式濾頭，濾液待用。[0038]分別準確吸取ΙΟμ?標(biāo)準使用液和樣品溶液，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進行分析，分別測定檢測液的峰面積，并以標(biāo)準使用液色譜圖的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度(Pg/mL)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準曲線。
【具體實施方式】
[0039]以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0040]實施例1
一種從棗皮中高效提取cAMP的方法將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1: 15，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為60°C，酶解pH值為5.5，酶解I小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為80kHz，溫度為65°C的條件下，處理20min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0041]復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.8:100。
[0042]復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為:40:2:l:5o
[0043]所述棗皮提取cAMP步驟中物料處理溫度不高于65 °C。
[0044]棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0045]實施例2
一種從棗皮中高效提取cAMP的方法將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1: 15，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為40°C，酶解pH值為3.5，酶解4小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為20kHz，溫度為45°C°C的條件下，處理60min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0046]復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.3:100。
[0047]復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為:40: 15: 8: 20。
[0048]所述棗皮提取cAMP步驟中物料處理溫度不高于65 °C。
[0049]棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0050]實施例3
一種從棗皮中高效提取cAMP的方法將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份為1:12，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為50°C，酶解pH值為3.5，酶解3小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為60kHz，溫度為60°C的條件下，處理45min，再進行過濾即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0051]復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.5:100。
[0052]復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為:22:12:3:10。
[0053]烘干工藝中溫度不高于60°C。
[0054]實施例4 一種從棗皮中高效提取cAMP的方法:將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1:11，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為58°C，酶解pH值為4.2，酶解1.5小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為65kHz，溫度為56°C的條件下，處理25min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0055]所述復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.75:100。
[0056]所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為32:11:4:17。
[0057]所述棗皮高效提取cAMP整個步驟中處理溫度不高于65 °C。
[0058]所述棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0059]所述棗果選用呂梁木棗。
[0060]實施例5
一種從棗皮中高效提取cAMP的方法:將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1:13，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為57°C，酶解pH值為4.7，酶解2.2小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為45kHz，溫度為54°C的條件下，處理55min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0061]所述復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.5:100。
[0062]所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為25:3:2:15。
[0063]所述棗皮高效提取cAMP整個步驟中處理溫度不高于65 °C。
[0064]所述棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0065]所述棗果選用呂梁木棗。
[0066]實施例6
一種從棗皮中高效提取cAMP的方法:將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液；
具體工藝步驟為:
a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1:14，進行復(fù)水得到棗皮混合液；
b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為48°C，酶解pH值為5.3，酶解2.5小時完成酶解，得到棗皮酶解液；
C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為35kHz，溫度為64°C的條件下，處理45min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
[0067]所述復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.4:100。
[0068]所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為33:5:7:14。
[0069]所述棗皮高效提取cAMP整個步驟中處理溫度不高于65 °C。
[0070]所述棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度cAMP濃縮液。
[0071 ] 所述棗果選用呂梁木棗 。
[0072] 本發(fā)明可用其他的不違背本發(fā)明的精神或主要特征的具體形式來概述。因此，無論從那一點來看，本發(fā)明的上述實施方案都只能認為是對本發(fā)明的說明而不能限制發(fā)明，權(quán)利要求書指出了本發(fā)明的范圍，而上述的說明并未指出本發(fā)明的范圍，因此，在與本發(fā)明的權(quán)利要求書相當(dāng)?shù)暮x和范圍內(nèi)的任何變化，都應(yīng)認為是包括在權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種從棗皮中高效提取CAMP的方法，其特征在于:將從棗果制汁分離出來的皮渣依次進行烘干、風(fēng)選、破碎、復(fù)水、復(fù)合酶酶解、超聲波助提、過濾和離心，得到的上清液即為棗皮cAMP提取液； 具體工藝步驟為: a、將從棗果制汁分離出來的皮渣進行烘干、風(fēng)選、破碎后，按照粉碎后的棗皮粉末與水的重量份比為1:10-15，進行復(fù)水得到棗皮混合液； b、向所述棗皮混合液中添加復(fù)合酶酶解，酶解條件為:控制酶解溫度為45飛(TC，酶解pH值為3.5^5.5，酶解廣3小時完成酶解，得到棗皮酶解液； C、將所述棗皮酶解液在超聲頻率為2(T80kHz，溫度為50 °C~65 °C的條件下，處理2(T60min，再進行過濾和離心即得到所述棗皮cAMP提取液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從棗皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述復(fù)合酶與棗皮粉末的重量份比為0.3、.8:100。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種從棗皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述復(fù)合酶由纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶組成；所述纖維素酶、果膠酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比為10~40:2~15:1~8:5~20。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從棗皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述棗皮高效提取cAMP整個步驟中處理溫度不高于65 °C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從棗皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述棗皮cAMP提取液在轉(zhuǎn)速4000r/min下離心15min后，取上清液在65°C減壓濃縮，得到高濃度c AMP濃縮液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從棗皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述棗果選用呂梁木棗。
【文檔編號】C07H1/08GK103467553SQ201310434569
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】鞏晉龍, 張佩舜, 李奠礎(chǔ), 楊天英, 王以強, 馮俊敏, 王曉艷, 康振奎 申請人:山西天驕生物集團有限公司