專利名稱：一種板藍根提取液與納米銀抑菌組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥領域，尤其涉及一種中藥抑菌組合物。
背景技術：
板藍根又稱靛青根、藍靛根和大青根，為十字花科植物菘籃和草大青的根或爵床科植物馬藍的根莖及根，具有清熱解毒、涼血利咽之功效?，F(xiàn)代醫(yī)學研究表明板藍根具有抗菌作用，其中對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、流感桿菌、枯草桿菌和傷寒桿菌等都有抑制作用，靛玉紅等生物堿類化合物為其主要的抑菌成分。除此之外，還具有抗病毒、抗內(nèi)毒素、抗炎、抗癌、活血和提高免疫功能的作用。板藍根因其具有較高的藥用和保健價值，廣泛引起了人們關注。
中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌組合物、涂覆劑等一次用劑量大，且長期使用影響人體健康。

發(fā)明內(nèi)容
針對板藍根抑菌劑一次性使用量大和長期使用影響人體健康問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實驗，發(fā)現(xiàn)納米銀能有效增強板藍根提取液抑菌性能，減少板藍根抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全。本發(fā)明的目的在于提供一種板藍根納米銀抑菌齊U，減少板藍根抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性。本發(fā)明提供如下技術方案
一種抑菌組合物，含有板藍根提取液、水溶性納米銀；
板藍根提取液的制備包括如下步驟加水量為板藍根重量的9倍，在95 °C下提取4 h,再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液。所得的提取液經(jīng)過O. 22 μ m濾膜過濾。最后提取液經(jīng)高壓液相色譜法對提取液中的靛玉紅進行標準定量。水溶性納米銀顆粒粒徑為3 10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。水溶性納米銀粒徑為3 10 nm,外表為羧基，依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與板藍根提取液具有良好的協(xié)同抗菌作用。抑制大腸桿菌0157:H7時板藍根提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100: I。抑制藤黃微球菌時板藍根提取液、水溶性納米銀的體積比為12. 5 20: I。在算體積比時所用的板藍根提取液中靛玉紅含量為I. 28 μ g/g，所用的水溶性納米銀濃度為10 mg/mL。本發(fā)明還涉及上述的抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應用。本發(fā)明還涉及上述的抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應用。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明水溶性納米銀的應用能有效增強板藍根抑菌性能，降低板藍根抑菌劑的用量，更令人意向不到的是兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協(xié)同作用，同時本抑菌組合物采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)，相對于使用高劑量的板藍根或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。


圖I板藍根提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157 :H7協(xié)同抑菌作用
圖Ia 200 μ L板藍根提取液對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖Ib 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157: Η7的抑制作用，圖Ic 100 μ L板藍根提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的協(xié)同抑菌作用。圖2板藍根提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157 :Η7協(xié)同抑菌作用 圖2a 150 μ L板藍根提取液對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖2c 75 μ L板藍根提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的協(xié)同抑菌作用。圖3板藍根提取液與納米銀之比為20:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖3a 320 μ L板藍根提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖3c 160 μ L板藍根提取液和8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協(xié)同抑菌作用。圖4板藍根提取液與納米銀之比為12. 5:1對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖4a 200 μ L板藍根提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖4c 100 μ L板藍根提取液和8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協(xié)同抑菌作用。
具體實施例方式實施例中所用試劑均為常規(guī)試劑，依照常規(guī)方式配制即可。實施例I
I、板藍根提取液的制備過程
稱取板藍根50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4 h，經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀后，用
O.22 μπι濾膜除去提取液中的雜質(zhì)和細菌，最后用高效液相色譜法測得提取液中靛玉紅含量為 I. 28 μ g/g O2、水溶性銀納米顆粒制備
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。3、板藍根提取液與水溶性納米銀協(xié)同抑菌作用。a、細菌的培養(yǎng)挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水連續(xù)稀釋三個梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/
Π Τ, ηb、水溶性納米銀與板藍根提取液在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于I. 5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加入200 μ L板藍根提取液(靛玉紅含量為I. 28 4 8/^，下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10 mg/mL水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L板藍根提取液和I μ L水溶性納米銀，4號離心管作為空白對照，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用O. 1%的蛋白胨水補齊，置于37°C搖床培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h。每組實驗平行三次。
c、平板計數(shù)
將實驗組待測液用PBS連續(xù)稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布
在
LB固體平板上；空白組連續(xù)稀釋四個梯度，從10_2、10_3、10_4三個梯度分別均涂布在LB固體平板上。平板吹干后，37°C倒置培養(yǎng)12 h，長出菌落后計數(shù)，以30-300個菌落形成單位(CFU)為有效的計數(shù)范圍。每毫升原菌液活菌數(shù)=平板計數(shù)*稀釋倍數(shù)*5實驗結(jié)果如下
權利要求
1.一種板藍根提取液與納米銀抑菌組合物，其特征在于含有板藍根提取液、水溶性納米銀；所述的板藍根提取液的制備包括如下步驟加水量為板藍根重量的9倍，經(jīng)95 °C水浴提取4 h，再減壓濃縮濃縮儀得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
2.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制大腸桿菌0157:H7時板藍根提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100:1。
3.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于抑制藤黃微球菌時板藍根提取液、水溶性納米銀的體積比為12. 5 20: I。
4.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得的提取液經(jīng)過O.22 ym濾膜過濾。
5.如權利要求I所述的抑菌組合物，其特征在于所得的提取液經(jīng)高壓液相色譜法對提取液中的靛玉紅進行標準定量。
6.如權利I 5任一所述的抑菌組合物在抑制大腸桿菌0157:H7中的應用。
7.如權利I 5任一所述的抑菌組合物在抑制藤黃微球菌中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種板藍根提取液與納米銀抑菌組合物，屬于中藥領域。抑菌組合物中板藍根提取液與水溶性納米銀以比例混合，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌O157:H7、藤黃微球菌起到協(xié)同的作用。本發(fā)明的一種板藍根提取物與納米銀抑菌組合物與現(xiàn)有的技術相比，解決了常規(guī)抑菌方法中板藍根抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)減少了微生物耐藥的發(fā)生機率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
文檔編號A61K36/315GK102895282SQ20121036764
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權日2012年9月28日
發(fā)明者許恒毅, 王力均, 賴衛(wèi)華, 萬翠香, 郭亮, 徐鋒, 熊勇華, 魏華 申請人:南昌大學