水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g33090基因CDS序列的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g33090基因CDS序列的應(yīng)用，其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻轉(zhuǎn)錄因子Os03g33090融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中，從而改良水稻籽粒性狀，例如增加水稻籽粒寬度。對于詳細闡明調(diào)控種子發(fā)育機理具有重要的理論價值，并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的粒型，因此在生產(chǎn)實踐中也具有重要意義。
【專利說明】水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因CDS序列的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地說，涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因⑶S序 列的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻（OryzasativaL.)是我國和全世界最重要的三大糧食作物之一，是世界一 半以上人口的主食，也是一個重要的功能基因研究的模式植物。與其相關(guān)的遺傳學和分子 生物學研究一直倍受研究者的重視，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是基因表達調(diào)控的重要方式。當前水 稻增產(chǎn)的研究較依賴于有限的水稻種質(zhì)資源，傳統(tǒng)的雜交育種優(yōu)勢正在逐漸減弱，而水稻 轉(zhuǎn)基因技術(shù)有可能發(fā)掘水稻進一步增產(chǎn)的潛力。
[0003] 在植物界中，能形成種子的植物約占植物總數(shù)的三分之二以上，作為重要的繁殖 器官，種子同時也為人們提供食物來源，水稻就是其中的重要代表，種子來源于受精后的胚 珠。從分子生物學的角度來說，種子的發(fā)育和萌發(fā)是一個有次序的、選擇性的基因表達過 程。而轉(zhuǎn)錄因子在基因表達的精確調(diào)控中起到了關(guān)鍵性的作用。
[0004] 近些年，有關(guān)籽粒大小性狀的分子遺傳調(diào)控機制研究，已取得了一定進展，例如 研究人員利用QTL定位了一些籽粒大小相關(guān)基因，其中GS3編碼一個膜蛋白，是籽粒大小 和器官大小的負調(diào)控因子；張啟發(fā)等（YiboLi,ChuchuanFan,QIfaZhang,etal. (2011) NaturalvariationinGS5playsanimportantroleinregulatinggrainsizeand yieldinrice.NatureGennetics)研究發(fā)現(xiàn)GS5編碼一個調(diào)節(jié)籽粒大小的絲氨酸羧肽酶， 是控制籽粒大小的正調(diào)節(jié)因子，過表達GS5可使水稻籽粒明顯變大；轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒 大小方面起著非常重要的作用，0sWRKY78可以調(diào)節(jié)水稻莖的伸長和種子的發(fā)育，0sWRKY78 突變體可使莖桿變矮化影響籽粒發(fā)育；螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)類轉(zhuǎn)錄因子能通過調(diào)控 外稃和內(nèi)稃細胞的長度影響谷粒的大小；PGLl堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)異源二聚 體作為結(jié)合DNA的bHLH的抑制子過表達后可增加籽粒長度和重量。
[0005] 對水稻測序結(jié)果進行分析表明，水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090是LOB家族中的L0B23 成員，LOB(LateralOrganBoundaries)家族轉(zhuǎn)錄因子在側(cè)生組織發(fā)育中具有重要的調(diào)控 功能。LOB基因在從幼苗頂端分裂組織中形成的所有側(cè)生組織的近軸基部表達，并在側(cè)根的 基部表達。擬南芥中發(fā)現(xiàn)有43個LOBdomian基因，被分為2個類別和三個亞類。擬南芥 中的LBD基因AS2(ASYMMETRICLEAVES2)被發(fā)現(xiàn)在葉脈絡(luò)系統(tǒng)的建立中起作用，包括中主 葉脈，對稱葉片的發(fā)育。LBD基因家族有著大約100個氨基酸的保守區(qū)域，4個保守的半胱 氨酸大多數(shù)擬，南芥LBD基因蛋白質(zhì)序列包含一個盤繞圈結(jié)構(gòu)，其中有4個亮氨酸LXLXLXL 序列。
[0006] LOB基因編碼的蛋白是植物特有的，包括一個保守區(qū)域（LOBdomain)，該保守區(qū)域 存在于其他42個擬南芥蛋白質(zhì)中，同時也存在于其他植物物種之中。LOB基因在特定的環(huán) 境下是擬南芥生長需要的，但是缺失LOB基因的擬南芥突變體在標準條件下沒有明顯的表 型，可能存在功能冗余現(xiàn)象。有研究報道LOB基因的異位表達導(dǎo)致葉片和花的大小、形狀發(fā) 生變化，可以導(dǎo)致雄性和雌性不育。
[0007] 水稻中LOB基因分為兩個亞種，其中水稻LBD基因家族中成員ARLl對不定根原基 的形成是必要的，它在不定根的形成過程中起著至關(guān)重要的作用，盡管ARLl的表達不僅局 限于不定根。這些研究結(jié)果為進一步探討水稻LOB基因家族的功能提供借鑒。目前有關(guān)于 LOB家族對葉的發(fā)育方面的初步研究，但是對種子大小形狀調(diào)控機制的研究及認識很少。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因⑶S序列的應(yīng)用。
[0009] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，即融合蛋白 (VP16)4-Linker-0s03g33090。
[0010] 其中，VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白，將4個VP16功能域基序融合在一 起可構(gòu)成一類增強子，增強轉(zhuǎn)錄因子的功能，從而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)更明顯的表型變化。 上述融合蛋白中涉及的（VP16)4，即VP64是由4個VP16蛋白的氨基酸序列以Gly-Ser為間 隔形成的融合蛋白，其氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQIDNo. 10和4所示。
[0011] 上述融合蛋白中涉及的Linker由39個柔性氨基酸串聯(lián)而成，其氨基酸序列如SEQ IDNo. 9所示，編碼該Linker的核苷酸序列如SEQIDNo. 3所示。
[0012] 上述融合蛋白中涉及的0s03g33090為水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090,其氨基酸序列 如SEQIDNo. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能 的氨基酸序列，其⑶S序列如SeqIDNo. 1所示。
[0013] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因。
[0014] 本發(fā)明還提供含有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因的載體、工程菌及細胞 系。
[0015] 所述載體的構(gòu)建方法如下：
[0016] (1)在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫（http://rice,plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s03g33090基因，根據(jù)其CDS序列設(shè)計PCR擴增引物對，其為 正向引物F5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGCTGCAACGGT-3' 和反向引物R5'-CAAGAAAGCTGGGTCT CAGACAAAAAGGTTG-3,。
[0017] (2)以野生日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板，利用上述引物F和R進行PCR， 獲得0s03g33090基因完整的CDS序列。
[0018] (3)將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上，經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完全 相同的序列。
[0019] (4)以植物雙元表達載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架 序列，通過體外重組，將ubipromoter-VP64-Gateway表達單兀、35Spromoter-asRED表達 單元和35Spromoter-hyg表達單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64-hyg-asRED的全序列如 SEQIDNo. 5 所示。
[0020] (5)通過LR反應(yīng)將0s03g33090基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連有 VP64編碼基因的植物表達載體nVP64-hyg-asRED上，獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄 因子VP64-Linker-0s03g33090 基因的表達載體ubi:VP64-0s03g33090,其全序列如SEQID No. 6所示。
[0021] 上述表達載體可通過使用Ti質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電穿 孔等常規(guī)生物技術(shù)方法導(dǎo)入植物細胞中（Weissbach，1998,MethodforPlantMolecular BiologyVIII，AcademyPress，NewYork，第 411-463 頁；Geiserson和Corey，1998，Plant MolecularBiology，第二版）。
[0022] 本發(fā)明還提供一種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，具體為：采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法， 將上述表達載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化 后的材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
[0023] 本發(fā)明還提供編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因在改良水稻籽粒性狀(例如增 加水稻粒寬）中的應(yīng)用。
[0024] 本發(fā)明還提供了用于擴增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因⑶S序列的引物對，包括 正向引物F5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGCTGCAACGGT-3' 和反向引物R5'-CAAGAAAGCTGGGTCT CAGACAAAAAGGTTG-3,。
[0025] 本發(fā)明進一步提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因⑶S序列在調(diào)控水稻籽粒性狀 中的應(yīng)用。利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64(SEQIDNo. 10)與水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090融合 構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中， 從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。
[0026] 前述的應(yīng)用，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的⑶S序列去掉終止密碼子之 后，構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因（SEQIDNo. 4)的下游，轉(zhuǎn)化水稻，從而改良轉(zhuǎn) 基因水稻籽粒的性狀。優(yōu)選將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的CDS序列去掉終止密碼子 之后，通過Gateway系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的下游。
[0027] 本發(fā)明首次利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64 (即4個轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄因子的基 因轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中，從而改良水稻籽粒性狀，例如水稻籽粒寬度增加。對于詳細闡明 調(diào)控種子發(fā)育機理具有重要的理論價值，并且可以通過轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的粒型，因此 在生產(chǎn)實踐中也具有重要意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0028] 圖1為本發(fā)明實施例1中nVP64-hyg_asRED載體圖譜。
[0029] 圖2為本發(fā)明實施例1中ubi:VP64-0s03g33090載體圖譜。
[0030] 圖3為本發(fā)明實施例3中PCR檢測VP64-0s03g33090轉(zhuǎn)基因水稻陽性株系的 結(jié)果；其中，M為DNAMarker，WT為野生型水稻 'kitaake'，V2598H-47 和V2598H-50 為 VP64-0s03g33090轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0031] 圖4為本發(fā)明實施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的表型寬度的比較；其中，WT為野 生型水稻'kitaake'，V2598H-47和V2598H-50為轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0032] 圖5為本發(fā)明實施例4中轉(zhuǎn)基因水稻籽粒性狀的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析結(jié)果；其中，WT為 野生型水稻'kitaake'，V2598H-47和V2598H-50為轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0033] 圖6為本發(fā)明實施例1中植物雙元表達載體pCambial301_UbiN的圖譜。

【具體實施方式】
[0034] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明， 實施例均按照常規(guī)實驗條件，如Sambrook等分子克隆實驗手冊（SambrookJ&Russell DW，Molecularcloning:alaboratorymanual, 2001)，或按照制造廠商說明書建議的條件。
[0035] 實施例10s03g33090基因⑶S序列的獲得及植物表達載體的構(gòu)建
[0036] 10s03g33090基因CDS序列的獲得
[0037] 在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫（http://rice.plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s03g33090基因，根據(jù)其⑶S序列設(shè)計PCR擴增引物，正向引 物F5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGCTGCAACGGT-3' 和反向引物R5'-CAAGAAAGCTGGGTCTCAGACA AAAAGGTTG-3'）。以野生型日本晴'kitaake'水稻總cDNA為模板，利用引物F和R進行PCR， 獲得0s03g33090基因完整的CDS序列（SeqIDNo.l)。
[0038] 2植物表達載體的構(gòu)建
[0039] 將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的CDS序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個轉(zhuǎn)錄 因子激活基序VP16編碼基因（SEQIDNo.4)的下游。
[0040] 2. 1將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上
[0041] 按照PrimeSTAR聚合酶擴增體系和反應(yīng)程序進行PCR。此過程中包含兩輪PCR，第 一輪PCR的引物用加部分adaptorattB接頭的基因引物（F和R)，而第二輪的模板用第一 輪的PCR產(chǎn)物，并且引物用完整的adaptorattB引物（attB5'adaptor:5'-GTGGGGACAAGTT TGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3'，attB3'adaptor: 5' -GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'） 。將PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體(購自Invitrogen)上，經(jīng)測序鑒定得到與目的基因完 全相同的序列。
[0042] 2. 2植物表達載體的構(gòu)建
[0043] 以植物雙元表達載體pCambial301_UbiN(圖6)左右邊界包含的序列為骨架序列， 通過體外重組，將ubipromoter-VP64-Gateway表達單兀、35Spromoter-asRED表達單兀和 35Spromoter-hyg表達單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64_hyg_asRED的全序列如SEQID No. 5所示，載體圖譜見圖1。
[0044] 表達載體nVP64-hyg_asRED含有Gateway重組系統(tǒng)，pDONR帶有目的基因的質(zhì)粒 作為入門載體（Enteryvector),通過LR反應(yīng)可完成目的基因表達載體的構(gòu)建。
[0045] 通過LR反應(yīng)將0s03g33090基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連有VP64 編碼基因的植物表達載體nVP64-hyg-asRED上，獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因 子VP64-Linker-0s03g33090 基因的表達載體ubi:VP64-0s03g33090,其全序列如SEQID No. 6所示，載體圖譜見圖2。
[0046] LR反應(yīng)體系如下：
[0047] 表達載體 Ιμ? (30-50ng) 入門載體（pDONR-gene ) I μ I ( 3 0-5 Ong ) LR Clonase Enzyme Mix I μ I ddH20 2μ1 總體積 5μ1
[0048]于25°C反應(yīng)過夜。用反應(yīng)體系轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，篩選陽性克隆。
[0049] 實施例2轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得
[0050] 取水稻'kitaake'成熟種子，人工或機械脫殼，挑選飽滿光潔無菌斑的種子經(jīng)消毒 之后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)培養(yǎng)。選擇外觀良好，生長力好的水稻愈傷組織為受體 材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ubi :VP64-0s03g33090轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含有100 μ M的 乙酰丁香酮和OD值為0. 7的農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化，將轉(zhuǎn)化液浸泡過的愈傷組織置 于共培養(yǎng)基上進行共培養(yǎng)，25°C暗培養(yǎng)3d后置于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)約30d，每IOd繼代一 次。然后將篩出的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化約20d，每IOd繼代一次。將分化出綠 色小苗的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上生根，待約7d長出發(fā)達根系后煉苗，并計算轉(zhuǎn)化所 獲轉(zhuǎn)基因苗數(shù)，共獲得50個轉(zhuǎn)基因植株。煉苗7d后轉(zhuǎn)移至大田生長。
[0051] 本實施例中涉及的培養(yǎng)基配方如下：
[0052] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0053] 共培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+2. 5mg/L2, 4D+0. 5g/L谷氨酰胺 +0. 6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 2后加入植物凝膠 4g/L。滅菌后，50°C左右加入AS(乙酰丁香酮）100?200μg/mL。
[0054] 篩選培養(yǎng)基：N6大量+B5微量+NB有機+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/L2, 4D+0. 6g/L 酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 8? 5. 9后加入植物凝膠4g/L。滅菌后加入35mg/L潮霉素(購自上海紐津生物技術(shù)有限公司）。
[0055] 分化培養(yǎng)基：MS無機+MS-B5微量+MS有機+鐵鹽+MS-銅鈷母液+0. 05mg/L NAA+2.Omg/LKinetin(激動素）+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L鹿糖，以水配制， 調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0056] 實施例3轉(zhuǎn)基因陽性株系的鑒定
[0057] 為檢測實施例2中獲得的VP64_0s03g33090轉(zhuǎn)基因水稻株系的T2代水稻株系 (V2598H-47和V2598H-50)中基因的過表達情況，根據(jù)載體ubi :VP64-0s03g33090設(shè)計如 下引物：
[0058] 正向引物F5' -GTGGGGACAAGITTGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3'
[0059] 反向引物R5' -GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'
[0060]進行PCR檢測，對擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖3所示，出現(xiàn)明顯 的特異性條帶。其中，WT表示野生型水稻'kitaake'，V2598H-47和V2598H-50表示 VP64-0s03g33090轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0061] 實施例4轉(zhuǎn)基因水稻表型分析和考種分析
[0062] 將實施例2中獲得的轉(zhuǎn)基因水稻株系（V2598H-47和V2598H-50 )與野生型 'kitaake'水稻種子進行比較，從表型上可以明顯的看出，轉(zhuǎn)基因水稻的籽粒明顯變寬（圖 4)?？挤N數(shù)據(jù)分析表明（圖5)，轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的寬度顯著大于野生型水稻籽粒。
[0063] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，其為融合蛋白（VP16)4-Linker-0s03g33090 ； 其中，VP16為來自單純皰疹病毒的VP16蛋白，（VP16)4是由4個VP16蛋白的氨基酸 序列以Gly-Ser為間隔形成的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示；Linker由39 個柔性氨基酸串聯(lián)而成，其氨基酸序列如SEQ ID No. 9所示；0s03g33090為水稻轉(zhuǎn)錄因子 0s03g33090,其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個 氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
2. 編碼權(quán)利要求1所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因。
3. 含有權(quán)利要求2所述基因的載體。
4. 含有權(quán)利要求2所述基因的工程菌。
5. -種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，其特征在于，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將權(quán)利要求 3所述的載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的 材料經(jīng)過共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
6. 權(quán)利要求2所述的基因在改良水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
7. 用于擴增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因⑶S序列的引物對，其特征在于，包括正向 引物 F5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGAGCTGCAACGGT-3' 和反向引物 R5' -CAAGAAAGCTGGGTCTCAGA CAAAAAGGTTG-3，； 其中，水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的CDS序列如Seq ID No. 1所示。
8. 水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因CDS序列在調(diào)控水稻籽粒性狀中的應(yīng)用，所述水稻轉(zhuǎn) 錄因子0s03g33090基因的CDS序列如Seq ID No. 1所示。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的 CDS序列去掉終止密碼子之后，構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的下游，轉(zhuǎn)化水稻， 從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀； 其中，所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID No. 4所示。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s03g33090基因的 ⑶S序列去掉終止密碼子之后，通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因 的下游。
【文檔編號】C07K19/00GK104341523SQ201310334970
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年8月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月2日
【發(fā)明者】趙濤, 劉斌, 李宏宇, 劉軍, 林辰濤 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所