專利名稱：山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取純化方法，具體涉及一種山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法。
背景技術(shù)：
黃酮是一類多酚化合物，廣泛存在于多種植物中，具有較強(qiáng)的生理活性，近年來(lái)作為一種保健品而受到關(guān)注。山楂(Hawthorn)是“藥食同源”植物,黃酮類物質(zhì)(Flavonoids)含量較高，主要包括牡荊素、槲皮素以及金絲桃苷。從山楂中提取黃酮類化合物可以提高山楂的附加值。目前，常見(jiàn)的黃酮提取方法的總體缺陷為所得的總黃酮雜質(zhì)多、色價(jià)低，溶劑提取法中以熱水提取法最為普遍，但是其選擇性差，目標(biāo)產(chǎn)物濃度偏低。堿液提取法可以增加提取溶劑的選擇性，從而提高目標(biāo)產(chǎn)物濃度，但選擇合適的提取液成為提取工藝的核心問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種有效提高提取物中黃酮濃度的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于:
由以下步驟實(shí)現(xiàn):
步驟一:提取:
(1)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至70-90°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到40%-50%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
(3)將混合液在4°C溫度下冷藏12h，去除沉淀；
(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙
醇；
(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出；
步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
(2)向混合液中加入20-70mg/mL的金屬鹽溶液，調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；
(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(1)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。
步驟一的(I)中，稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%-0.6%的NaOH溶液。步驟一的(2)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。步驟二的(I)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。步驟二的(2)中，金屬鹽溶液選自硫酸銅溶液、硫酸鋅溶液、氯化鋁溶液、氯化鐵溶液。步驟二的(3)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明采用金屬離子絡(luò)合法提取山楂中的黃酮類物質(zhì)并進(jìn)行純化，提取物中黃酮濃度可提高9.34%，工藝簡(jiǎn)單且純化效果顯著。較之現(xiàn)存的純化方法，在成本、操作及效果上都有較大改善。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。本發(fā)明所涉及的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，由以下步驟實(shí)現(xiàn):
步驟一:提取:
(I)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至70-90°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%-0.6%的NaOH溶液。(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到40%_50%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。(3)將混合液在40C溫度下冷藏12h，去除沉淀。(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇。(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出。步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。(2)向混合液中加入20-70 mg/mL的金屬鹽溶液,調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀； 金屬鹽溶液選自硫酸銅溶液、硫酸鋅溶液、氯化鋁溶液、氯化鐵溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(I)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。

實(shí)施例1:
步驟一:提取:
(O將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至70°c保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%的NaOH溶液。(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到40%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。(3 )將混合液在40C溫度下冷藏12h，去除沉淀。(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇。(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出。步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。(2)向混合液中加入20mg/mL的金屬鹽溶液,調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；
金屬鹽溶液選取硫酸銅溶液。
`
(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(I)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。實(shí)施例2:
步驟一:提取:
(I)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至80°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的NaOH溶液。(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到45%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。(3 )將混合液在40C溫度下冷藏12h，去除沉淀。(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇。(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出。步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。(2)向混合液中加入45 mg/mL的金屬鹽溶液,調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；
金屬鹽溶液選取硫酸鋅溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(I)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。實(shí)施例3:
步驟一:提取:
(I)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至90°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%的NaOH溶液。(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到50%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。 (3)將混合液在40C溫度下冷藏12h，去除沉淀。(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇。(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出。步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。(2)向混合液中加入70 mg/mL的金屬鹽溶液,調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；
金屬鹽溶液選取氯化鋁溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(I)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。實(shí)施例4:
步驟一:提取:
(I)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至90°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次Ih,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液；
稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.6%的NaOH溶液。(2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到50%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。(3 )將混合液在40C溫度下冷藏12h，去除沉淀。(4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇。(5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出。
步驟二:純化:
(O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。(2)向混合液中加入70 mg/mL的金屬鹽溶液,調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；
金屬鹽溶液選取氯化鐵溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(I)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。本發(fā)明的內(nèi)容不限于實(shí)施例所列舉，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過(guò)閱讀本發(fā)明說(shuō)明書而對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案采取的任 何等效的變換，均為本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
權(quán)利要求
1.山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 由以下步驟實(shí)現(xiàn): 步驟一:提取: (1)將干山楂粉末浸泡在稀堿溶液中，加熱至70-90°C保溫，使黃酮類物質(zhì)充分溶解到水中，如此提取三次，前兩次1h,第三次30min,過(guò)濾后合并濾液； (2)濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，使濾液濃度達(dá)到40%-50%，向濃縮液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度達(dá)到70% ； (3)將混合液在4°C溫度下冷藏12h，去除沉淀； (4)將去除沉淀的混合液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至恒重，同時(shí)回收溶液中的乙醇； (5)將步驟四得到的濃縮液置于干燥箱中進(jìn)行干燥，待其形成黃酮浸膏狀后取出； 步驟二:純化: (O將黃酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黃酮浸膏的質(zhì)量體積濃度達(dá)到IOmg/mL ； (2)向混合液中加入20-70mg/mL的金屬鹽溶液，調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀； (3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超聲波振蕩反應(yīng)使其完全溶解，EDTA的添加量為步驟(1)中黃酮浸膏量的40%，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，至溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液再旋轉(zhuǎn)蒸干，并回收甲醇； 再用甲醇溶解，過(guò)濾，將濾液濃縮并干燥即得純化后產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 步驟一的(1)中，稀堿溶液選取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4%-0.6%的NaOH溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 步驟一的(2)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 步驟二的(1)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%。
5.根據(jù)權(quán)利要求4中所述的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 步驟二的(2)中，金屬鹽溶液選自硫酸銅溶液、硫酸鋅溶液、氯化鋁溶液、氯化鐵溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法，其特征在于: 步驟二的(3)中，乙醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種山楂中黃酮類物質(zhì)的提取純化方法。常見(jiàn)黃酮提取方法的總體缺陷為所得的總黃酮雜質(zhì)多、色價(jià)低、選擇性差、目標(biāo)產(chǎn)物濃度偏低。本發(fā)明將干山楂粉末浸泡在過(guò)量的稀堿溶液中，加熱保溫，提取過(guò)濾；濾液減壓濃縮，加入乙醇；4℃溫度下冷藏，去除沉淀；減壓濃縮至恒重后干燥，形成黃酮浸膏；將浸膏溶乙醇中，加入金屬鹽溶液，調(diào)節(jié)pH值至出現(xiàn)絮狀沉淀；沉淀溶于乙醇中加EDTA使金屬離子解絡(luò)合，再將溶液旋轉(zhuǎn)蒸干，然后用甲醇溶解，過(guò)濾，將其減壓濃縮至恒重并干燥，完成提純。本發(fā)明采用金屬離子絡(luò)合法提取山楂中的黃酮類物質(zhì)并進(jìn)行純化，提取物中黃酮濃度可提高9.34%，工藝簡(jiǎn)單且純化效果顯著。較之現(xiàn)存的純化方法，在成本、操作及效果上都有較大改善。
文檔編號(hào)C07D311/30GK103242279SQ201310181448
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月16日
發(fā)明者常大偉 申請(qǐng)人:陜西科技大學(xué)