抗-ErbB3抗體及其用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供結(jié)合至ErbB3之抗體以及使用該等抗體的方法。依據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，該等抗體為結(jié)合至人類(lèi)ErbB3的完全人類(lèi)抗體。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體阻斷ErbB3與諸如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1(neuregulin1)的ErbB3配體的相互作用。本發(fā)明抗體可用于治療多種癌癥。
【專(zhuān)利說(shuō)明】抗-ErbB3抗體及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及對(duì)人類(lèi)ErbB3具有特異性的抗體及其抗原結(jié)合片段。
【背景技術(shù)】
[0002]ErbB3 (亦已知為HER3)是受體酪氨酸激酶(RTK)的ErbB/HER家族的一個(gè)成員。這個(gè)家族的其他成員包括EGFR(亦已知為ErbBl或HER1)、ErbB2(亦已知為HER2或Neu)，以及HER4。ErbB受體藉由活化會(huì)導(dǎo)致基因表達(dá)改變的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián)來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、存活以及分化。
[0003]ErbB受體是藉由同型二聚體或異型二聚體形成而被活化。例如，當(dāng)ErbB3與ErbB2共表達(dá)時(shí)，形成一種活化同型二聚體信號(hào)傳遞復(fù)合物。配體結(jié)合促進(jìn)ErbB3 二聚體形成。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I(NRGl)為促進(jìn)受體同型二聚化或異型二聚化之ErbB3的主要配體。
[0004]已發(fā)現(xiàn)ErbB3在多種種癌癥類(lèi)型中過(guò)表達(dá)，包括乳癌、胃腸癌以及胰臟瘤?？?ErbB3抗體已顯示在小鼠異種移植模型中會(huì)抑制數(shù)種人類(lèi)腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)。在例如 US5, 480，968 ；US5, 968，511 ；US2004/0197332 ；US7, 332，580 ；US7, 705，130 ；及US7, 846，440中提及抗_ErbB3抗體。但是，在本領(lǐng)域中對(duì)于用以治療癌癥與其他相關(guān)病癥的新穎ErbB3拮抗劑(諸如抗-ErbB3抗體)存在需要。
[0005]發(fā)明概述
[0006]本發(fā)明提供結(jié)合人類(lèi)ErbB3的抗體。本發(fā)明抗體尤其可用于抑制ErbB3_介導(dǎo)的信號(hào)傳遞并且用于治療由ErbB3活性及/或信號(hào)傳遞所引起或相關(guān)的疾病與病癥。
[0007]依據(jù)某些實(shí)施方案，本發(fā)明抗體阻斷ErbB3與ErbB3配體(例如NRGl及/或NRG2)之間的相互作用。該等抗體亦可具有一或多種其他生物特性，諸如，例如誘導(dǎo)細(xì)胞表面ErbB3內(nèi)化、抑制NRGl-刺激的體外腫瘤生長(zhǎng)，及/或抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)。
[0008]本發(fā)明抗體可為完整長(zhǎng)度(例如，IgGl或IgG4抗體)或可僅只包含抗原結(jié)合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，且可經(jīng)修飾以影響功能，例如消除殘余效應(yīng)子功能(Reddy et al., 2000, J.1mmunol.164:1925-1933)。
[0009]本發(fā)明提供一種抗體或抗體之抗原結(jié)合片段，其包含一具有選自由下列SEQ IDNO組成的組之氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR):2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370、386、402、418、434、450、466及482，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似的序列。
[0010]本發(fā)明亦提供一種抗體或抗體之抗原結(jié)合片段，其具有一包括選自由下列SEQ IDNO組成的組之氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR):10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458，474及490，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列。
[0011]本發(fā)明亦提供一種抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之 HCVR 與 LCVR(HCVR/LCVR)序列對(duì):2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410,418/426,434/442,450/458,466/474 及 482/490。
[0012]本發(fā)明亦提供一種抗體或抗體之抗原結(jié)合片段，其包含具有選自由下列SEQ IDNO 組成的組之氨基酸序列的重鏈 CDR3(HCDR3)域:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、312、328、344、360、376、392、408、424、440、456、472及488，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列；以及具有選自由下列SEQ ID勵(lì)組成的組之氨基酸序列的輕鏈^1?3仏^1?3)域:16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256、272、288、304、320、336、352、368、384、400、416、432、448、464，480 及 496，或其具有至少 90%、至少 95%、至少 98% 或至少 99%序列同一性之基本相似序列。
[0013]在某些實(shí)施方案中，該抗體或抗體之抗原結(jié)合部分包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之 HCDR3/LCDR3 氨基酸序列對(duì):8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、264/272、280/288、296/304、312/320、328/336、344/352、360/368、376/384、392/400、408/416,424/432,440/448,456/464,472/480 及 488/496。
[0014]本發(fā)明亦提供一種抗體或其片段，其進(jìn)一步包含具有選自由下列SEQ ID NO組成的組之氨基酸序列的重鏈 CDRl (HCDRl)域:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、
180、196、212、228、244、260、276、292、308、324、340、356、372、388、404、420、436、452，468 及484，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列；具有選自由下列SEQ ID NO組成的組之氨基酸序列的重鏈CDR2(HCDR2)域:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、278、294、310、326、342、358、374、390、406、422、438、454，470及486，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列；具有選自由下列SEQ ID NO組成的組之氨基酸序列的輕鏈CDRl (LCDRl)域:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252、268、284、300、316、332、348、364、380、396、412、428、444、460，476及492，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列；以及具有選自由下列SEQ ID NO組成的組之氨基酸序列的輕鏈 CDR2(LCDR2)域:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254、270、286、302、318、334、350、366、382、398、414、430、446、462，478 及 494，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列同一性之基本相似序列。
[0015]本發(fā)明的某些非限制性、示例性抗體及抗原結(jié)合片段包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3域，各自具有選自由下列SEQ ID NO組成的組的氨基酸序列:4-6-8-12-14-16(例如 H4H2084P) ；20-22-24-28-30-32(例如 H4H2092P)；36-38-40-44-46-48(例如 H4H2094P) ；52-54-56-60-62-64 (例如 H4H2098P)；68-70-72-76-78-80(例如 H4H2102P) ；84-86-88-92-94-96 (例如 H4H2108P)；100-102-104-108-110-112 (例如 H4H21 IIP) ; 116-118-120-124-126-128 (例如 H4H2114P)；132-134-136-140-142-144 (例如 H4H2132P) ； 148-150-152-156-158-160 (例如 H4H2138P)；164-166-168-172-174-176 (例如 H4H2140P) ； 180-182-184-188-190-192 (例如 H4H2143P)；196-198-200-204-206-208 (例如 H4H2146P) ；212-214-216-220-222-224 (例如 H4H2147P)；228-230-232-236-238-240 (例如 H4H214SP) ；244-246-248-252-254-256 (例如 MH2I5IP)；260-262-264-268-270-272 (例如 MH2I53P) ；276-278-280-284-286-288 (例如 Η4Η21δ4Ρ)；292-294-296-300-302-304 (例如 Η4Η2290Ρ) ；308-310-312-316-318-320 (例如 Η1Μ1819Ν)；324-326-328-332-334-336 (例如 Η2Μ1821Ν) ；340-342-344-348-350-352 (例如 Η2Μ1824Ν)；356-358-360-364-366-368 (例如 Η2Μ1827Ν) ；372-374-376-380-382-384 (例如 Η1Μ1828Ν)；388-390-392-396-398-400 (例如 Η2Μ1829Ν) ；404-406-408-412-414-416 (例如 Η2Μ1930Ν)；420-422-424-428-430-432 (例如 Η2Μ1943Ν) ；436-438-440-444-446-448 (例如 Η2Μ1936Ν)；
452-454-456-460-462-464 (例如 Η2Μ1937Ν) ；468-470-472-476-478-480 (例如 Η2Μ1938Ν)；及 484-486-488-492-494-496 (例如 Η1Μ1940Ν)。
[0016]在一個(gè)相關(guān)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括特異結(jié)合ErbB3的抗體或抗體之抗原結(jié)合片段，其中該抗體或片段包含選自下列SEQ ID NO所組成的組之重鏈與輕鏈序列中所含重鏈與輕鏈 CDR 域:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442、450/458，466/474及482/490。用于鑒定HCVR與LCVR氨基酸序列中的CDR的方法及技術(shù)為本領(lǐng)域中已知的，且可用于鑒定本文揭示之特定HCVR及/或LCVR氨基酸序列中的⑶R?？捎糜阼b定⑶R邊界的示例性習(xí)知技術(shù)包括，例如Kabat界定法、Chothia界定法以及AbM界定法。在通常術(shù)語(yǔ)中,Kabat界定法是以序列變異性為基礎(chǔ),Chothia界定法是以結(jié)構(gòu)環(huán)區(qū)的位置為基礎(chǔ)，而AbM界定法是一種介于Kabat與Chothia法之間的折衷法。參見(jiàn)，例如 Kabat,，’Sequences of Proteins of Immunological Interest, ’^National Institutesof Health, Bethesda, Md.(1991) ;Al_Lazikani et al., J.Mo1.Biol.273:927-948(1997)；以及Martin et al.，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA86:9268-9272 (1989)。公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)亦可用來(lái)鑒定抗體內(nèi)的⑶R序列。
[0017]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供編碼抗_ErbB3抗體或其片段之核酸分子。帶有本發(fā)明核酸之重組型表達(dá)載體與該等載體引入的宿主細(xì)胞，與藉由在容許生產(chǎn)抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞而生產(chǎn)抗體和回收所產(chǎn)生的抗體的方法亦被本發(fā)明所包括。
[0018]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抗體或其片段，其包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之核酸序列所編碼的110^:1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、193、209、225、241、257、273、289、305、321、337、353、369、385、401、417、433、449、465 及 481，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列。
[0019]本發(fā)明亦提供抗體或其片段，其包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之核酸序列所編碼的 LCVR:9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、329、345、361、377、393、409、425、441、457、473 及 489，或其具有至少 90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列。
[0020]本發(fā)明亦提供抗體或抗體之抗原結(jié)合片段，其包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之核苷酸序列所編碼的 HCDR3 域:7、23、39、55、71、87、103、119、135、151、167、183、199、 215、231、247、263、279、295、311、327、343、359、375、391、407、423、439、455、471 及 478，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列；以及選自由下列SEQ ID NO組成的組之核苷酸序列所編碼的LCDR3域:15、31、47、63、79、95、111、127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303、319、335、351、367、383、399、415、431、447、463、479及495，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列。
[0021]本發(fā)明亦提供抗體或其片段，其進(jìn)一步包含選自由下列SEQ ID NO組成的組之核苷酸序列所編碼的 HCDRl 域:3、19、35、51、67、83、99、115、131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291、307、323、339、355、371、387、403、419、435、451、467 及 483，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列；選自由下列SEQ IDNO組成的組之核苷酸序列所編碼的HCDR2域:5、21、37、53、69、85、101、117、133、149、165、
181、197、213、229、245、261、277、293、309、325、341、357、373、389、405、421、437、453、469 及485，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列；選自由下列SEQ ID NO組成的組之核苷酸序列所編碼的LCDRl域:11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、171、187、203、219、235、251、267、283、299、315、331、347、363、379、395、411、427、443、459、475及491，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列；以及選自由下列SEQ ID NO組成的組之核苷酸序列所編碼的LCDR2域:13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、173、189、205、221、237、253、269、285、301、317、333、349、365、381、397、413、429、445、461、477及493，或其具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性之基本相同序列。
[0022]依據(jù)某些實(shí)施方案，該抗體或其片段包含由下列SEQ ID NO的核酸序列所編碼的重鏈與輕鏈 CDR 序列:SEQ ID N0:1 與 9(例如 H4H2084P)、17 與 25(例如 H4H2092P)、33與 41 (例如 H4H2094P)、49 與 57 (例如 H4H2098P)、65 與 73 (例如 H4H2102P)、81 與 89 (例如 H4H2108P) ,97 與 105 (例如 H4H2111P)、113 與 121 (例如 H4H2114P)、129 與 137 (例如 H4H2132P)、145 與 153 (例如 H4H2138P)、161 與 169 (例如 H4H2140P)、177 與 185 (例如 H4H2143P)、193 與 201 (例如 H4H2146P)、209 與 217 (例如 H4H2147P)、225 與 233 (例如 H4H2148P)、241 與 249 (例如 H4H2151P)、257 與 265 (例如 H4H2153P)、273 與 281 (例如 H4H2154P)、289 與 297 (例如 H4H2290P)、305 與 313 (例如 H1M1819N)、321 與 329 (例如 H2M1821N)、337 與 345 (例如 H2M1824N)、353 與 361 (例如 H2M1827N)、369 與 377 (例如 H1M1828N)、385 與 393 (例如 H2M1829N)、401 與 409 (例如 H2M1930N)、417 與 425 (例如 H2M1934N)、433 與 441 (例如 H2M1936N)、449 與 457 (例如 H2M1937N)、465 與 473 (例如H2M1938N)，或 481 與 489 (例如 H1M1940N)。
[0023]本發(fā)明包括抗-ErbB3抗體，其具有經(jīng)修飾的糖基化型態(tài)。在一些應(yīng)用中，移除非所欲糖基化位點(diǎn)的修飾可能是有用的，或缺乏存在于寡糖鏈上的巖藻糖部分的抗體會(huì)增加例如抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(ADCC)(參見(jiàn)Shield et al.(2002) JBC277:26733)。在其他應(yīng)用中，半乳糖基化修飾可能是為了修飾補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(CDC)而做出。
[0024]在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含特異結(jié)合ErbB3之重組型人類(lèi)抗體或其片段，以及藥學(xué)上可接受載體。在一個(gè)相關(guān)的方面，本發(fā)明特征為一種組合物，其為ErbB3抑制劑與第二治療劑的組合。在一些實(shí)施方案中，該ErbB3抑制劑為抗體或其片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，該第二治療劑為任一種有利與ErbB3抑制劑組合的藥劑?？捎欣cErbB3抑制劑組合的示例性藥劑包括，但不限于其他抑制ErbB3活性的藥劑(包括其他抗體或其抗原結(jié)合片段、肽抑制劑、小分子拮抗劑等)及/或干擾ErbB3上游或下游信號(hào)傳遞的藥劑。[0025]在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供使用本發(fā)明抗_ErbB3抗體或抗體之抗原結(jié)合部分來(lái)抑制ErbB3活性的方法，其中該治療方法包含施用治療有效量之含有本發(fā)明抗體或抗體之抗原結(jié)合片段的藥物組合物。所治療的病癥是任一種藉由移除、抑制或降低ErbB3活性而被增進(jìn)、改善、抑制或預(yù)防的疾病或病況。本發(fā)明抗_ErbB3抗體或抗體片段可具有阻斷ErbB3與ErbB3結(jié)合配偶體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1)之間相互作用的功能，或以其他方式抑制ErbB3信號(hào)傳遞活性。
[0026]本發(fā)明亦包括本發(fā)明抗_ErbB3抗體或抗體之抗原結(jié)合部分供制造用以在患者體內(nèi)治療與ErbB3活性相關(guān)或由ErbB3活性所致的疾病或病癥之藥物的用途。
[0027]其他實(shí)施方案將因?yàn)闄z閱下面詳細(xì)說(shuō)明而變得清楚。
[0028]詳述
[0029]在說(shuō)明本發(fā)明之前，要理解本發(fā)明不限于所述特定方法以及實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@些方法以及條件可能會(huì)改變。亦要理解本文中所用術(shù)語(yǔ)僅供說(shuō)明特定實(shí)施方案之用，而不是限制性的，因?yàn)楸景l(fā)明的范疇將僅會(huì)受到隨附權(quán)利要求所限制。
[0030]除非另有定義，否則所有本文使用的技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域中具有通常技藝者普遍理解的相同意思。如本文所用，術(shù)語(yǔ)”約”，當(dāng)使用在有關(guān)特定引用的數(shù)值時(shí)，表示該數(shù)值可自所引用的數(shù)值起改變達(dá)不超過(guò)1%。舉例而言，如本文所用，詞句”約100”包括99與101以及其間的所有數(shù)值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
[0031]盡管任何類(lèi)似或等同于本文所述的方法以及材料可應(yīng)用于實(shí)施或測(cè)試本發(fā)明，現(xiàn)將說(shuō)明優(yōu)選的方法以及材料。
[0032]定義
[0033]詞句”ErbB3”與”ErbB3片段”，如本文所用意指人類(lèi)ErbB3蛋白或片段，除非指明來(lái)自非人類(lèi)物種(例如，”小鼠ErbB3 ”、小鼠” ErbB3片段”、”猴ErbB3 ”、”猴ErbB3片段”等)。人類(lèi)ErbB3的細(xì)胞外域具有顯示于，例如SEQ ID NO: 497-499的氨基酸1-613所示氨
基酸序列。
[0034]術(shù)語(yǔ)”ErbB3配體”,如本文所用，表示能夠結(jié)合至人類(lèi)ErbB3蛋白的細(xì)胞外域以在體內(nèi)傳輸生物信號(hào)的蛋白質(zhì)。術(shù)語(yǔ)”ErbB3配體”包括神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-1 (NRGl)與神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-2(NRG2)。
[0035]術(shù)語(yǔ)”抗體”，如本文所用，欲意指免疫球蛋白分子，其含有4個(gè)多肽鏈，藉由雙硫鍵交互連結(jié)連接的2個(gè)重(H)鏈以及2個(gè)輕(L)鏈，以及其集合體多聚體(例如IgM)。各個(gè)重鏈含有I個(gè)重鏈可變區(qū)(此處縮寫(xiě)為HCVR或Vh)以及I個(gè)重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)含有3個(gè)結(jié)構(gòu)域，ChU Ch2以及Ch3。各個(gè)輕鏈含有I個(gè)輕鏈可變區(qū)(此處縮寫(xiě)為L(zhǎng)CVR或以及I個(gè)輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)含有I個(gè)結(jié)構(gòu)域(Ql)。Vh與' 區(qū)可進(jìn)一步分成具有超變異性的區(qū)(命名為互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity determining regions, CDRs)),散布有較為守恒保守的區(qū)(命名為骨架區(qū)構(gòu)架區(qū)(FR))。各個(gè)％與'由3個(gè)CDR以及4個(gè)FR所構(gòu)成，按下列順序從胺基端氨基端往羧基端排列:FRl、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、FR4。在本發(fā)明的不同實(shí)施方案中，抗_ErbB3抗體(或其抗原結(jié)合部分)的FR可能與人類(lèi)種系序列相同，或可以經(jīng)天然或人工修飾。氨基酸一致序列共有序列可以依據(jù)并行分析兩個(gè)或多個(gè)⑶R來(lái)定義。
[0036]術(shù)語(yǔ)”抗體”，如本文所用，亦包括完整抗體分子的抗原-結(jié)合片段。如本文所用，術(shù)語(yǔ)抗體的”抗原結(jié)合部分”、抗體的”抗原結(jié)合片段”等包括任何天然存在的、酶促可得到的、合成的或經(jīng)遺傳工程的多肽或糖蛋白，其特異地結(jié)合抗原而形成復(fù)合物。抗體的抗原-結(jié)合片段可以使用任何適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)技術(shù)(諸如蛋白水解消化或涉及操作并表達(dá)編碼抗體可變與任選恒定域之DNA的重組型遺傳工程技術(shù))而衍生自例如完整抗體分子。這樣的DNA是已知的及/或易于從例如商業(yè)來(lái)源、
[0037]DNA文庫(kù)(包括，例如噬菌體抗體文庫(kù))獲得或可合成。DNA可以被測(cè)序且以化學(xué)的方式或使用分子生物技術(shù)來(lái)操作，例如將一或多個(gè)可變及/或恒定域排成適當(dāng)構(gòu)型中，或引入會(huì)產(chǎn)生半胱氨酸殘基的密碼子、修飾、添加或缺失氨基酸等。
[0038]抗原-結(jié)合片段的非限制性實(shí)施例包括:(i)Fab片段；(ii)F(ab’ )2片段;(iii)Fd片段；(iv) Fv片段；(V)單鏈Fv(scFv)分子；(vi) dAb片段；與(vii)由模擬抗體的超變異區(qū)之氨基酸殘基所構(gòu)成的最小辨識(shí)單元(例如單離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，諸如CDR3肽)，或限制FR3-CDR3-FR4肽。其他經(jīng)工程化的分子(諸如域特異性抗體、單域抗體、域缺失抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體、納米抗體(例如單價(jià)納米抗體、雙價(jià)納米抗體等)、小調(diào)節(jié)分子免疫藥物(SMIP)及鯊魚(yú)可變IgNAR域)亦包括在如本文所用詞句”抗原-結(jié)合片段”中。
[0039]抗體的抗原-結(jié)合片段典型含有至少I(mǎi)個(gè)可變域?？勺冇蚩梢允侨魏未笮∨c氨基酸組成，且通常含有至少I(mǎi)個(gè)鄰近I或多個(gè)骨架序列或在I或多個(gè)骨架序列中的CDR。在帶有與\域締合之Vh域的抗原-結(jié)合片段中，Vh以及\域可相對(duì)另一者位在適當(dāng)排列處。舉例而言，可變區(qū)是二聚體且含有vH-vH、vH-'或二聚體。另?yè)竦兀贵w的抗原-結(jié)合片段可含有單體Vh或'域。
[0040]在某些實(shí)施方案中，抗體的抗原-結(jié)合片段可含有至少I(mǎi)個(gè)共價(jià)連接至少I(mǎi)個(gè)恒定域的可變域?？梢栽诒景l(fā)明之抗體的抗原-結(jié)合片段中發(fā)現(xiàn)到的可變與恒定域的非限制示例性構(gòu)型包括:⑴ VChI ; (ii)VH-CH2 ； (iii)VH-CH3 ； (iv) VH-CH1-CH2 ； (v) VH-CH1-CH2-CH3 ；(vi)VH-CH2-CH3 ； (vii) Vh-Cl ； (viii) Vl-ChI ; (ix)VL-CH2 ； (x)VL-CH3 ； (xi) VL-CH1-CH2 ； (xii)VL-CH1-CH2-CH3 ；(xiii)VL-CH2-CH3 ;以及(xiv)VfQ。在可變與恒定域的任一種構(gòu)形構(gòu)型中(包括上面列示的任一種示例性構(gòu)型)，可變與恒定域可以是彼此直接連接或藉由完整或部分樞紐鉸鏈或連接符接頭區(qū)域而鏈接。樞紐鉸鏈區(qū)是由至少2個(gè)(例如5、10、15、20、40、60或更多個(gè))氨基酸所構(gòu)成，它在單一多肽分子中的相鄰可變及/或恒定域間產(chǎn)生彈性柔性或半彈性柔性鍵聯(lián)連接。此外，本發(fā)明之抗體的抗原-結(jié)合片段可包含上列可變與恒定域構(gòu)型的任一者彼此及/或與一或多個(gè)單體Vh或\域以非共價(jià)締合(例如藉由雙二硫鍵(等))所形成的同型二聚體或異型二聚體(或其他多聚體)。
[0041]就完整抗體分子而言，抗原-結(jié)合片段可以是單特異性或多特異性(例如雙特異性)?？贵w的多特異性抗原-結(jié)合片段典型包含有至少2個(gè)不同可變域，其中各個(gè)可變域能夠特異地結(jié)合至個(gè)別抗原或相同抗原上的不同表位。任一種多特異性抗體形式，包括此處所揭示的示例性雙特異性抗體形式，可使用本領(lǐng)域中可取得之慣用技術(shù)而改造成使用于本發(fā)明之抗體的抗原-結(jié)合片段中。
[0042] 本發(fā)明抗體可透過(guò)補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性(CDC)或抗體依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性(ADCC)而作用?！毖a(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒性” (CDC)意指藉由本發(fā)明抗體在補(bǔ)體存在下溶解抗原表達(dá)細(xì)胞?！笨贵w依賴(lài)性細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性”(ADCC)意指細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，其中表達(dá)Fe受體(FcR)的非 特異性細(xì)胞毒殺細(xì)胞(例如自然殺傷(NK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞與巨噬細(xì)胞)會(huì)辨識(shí)結(jié)合在靶細(xì)胞上的抗體并因此造成標(biāo)的細(xì)胞靶細(xì)胞溶解。⑶C與ADCC可以使用本領(lǐng)域中熟知且可取得的分析來(lái)測(cè)定(參見(jiàn)，例如US5, 500，362與5，821，337，以及Clynes etal.(1998)Proc.Natl.Acad.Sc1.(USA) 95:652-656)?？贵w的恒定區(qū)對(duì)于抗體固定補(bǔ)體以及介導(dǎo)細(xì)胞依賴(lài)性細(xì)胞毒性來(lái)說(shuō)是重要的。因此，可依據(jù)抗體介導(dǎo)細(xì)胞毒性是否為所要來(lái)選定抗體的同種型。
[0043]術(shù)語(yǔ)”人類(lèi)抗體”，如本文所用，欲包括具有衍生自人類(lèi)種系免疫球蛋白序列之可變區(qū)及恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明之人類(lèi)抗體可包括不被人類(lèi)種系免疫球蛋白序列所編碼的氨基酸殘基(例如藉由體外隨機(jī)或定位突變或藉由體內(nèi)體突變所引入的突變)，例如在CDR以及尤其在CDR3中。但是，術(shù)語(yǔ)”人類(lèi)抗體”，如本文所用，不意欲要包括已被移植至人類(lèi)構(gòu)架序列上之衍生自另一哺乳動(dòng)物物種(諸如小鼠)之種系的⑶R序列的抗體。
[0044]術(shù)語(yǔ)”重組型人類(lèi)抗體”，如本文所用，欲包括所有藉由重組方法所制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的人類(lèi)抗體，諸如使用被轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞中之重組型表達(dá)載體而被表達(dá)的抗體(進(jìn)一步說(shuō)明如下)、分離自重組的組合人類(lèi)抗體文庫(kù)的抗體(進(jìn)一步說(shuō)明如下)、分離自經(jīng)人類(lèi)免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物(例如小鼠)的抗體(參見(jiàn)，例如Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)，或藉由任何其他涉及將人類(lèi)免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之方法所制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體。此等重組型人類(lèi)抗體具有衍生自人類(lèi)種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)及恒定區(qū)。但是，在某些實(shí)施方案中，此等重組型人類(lèi)抗體經(jīng)體外誘變(或，當(dāng)使用經(jīng)人類(lèi)Ig序列基因轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物時(shí)為體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，而因此該等重組型抗體之Vh區(qū)與\區(qū)的氨基酸序列為可能在體內(nèi)人類(lèi)抗體種系本中非天然存在的序列，盡管它們是衍生自人類(lèi)種系Vh與\序列或與其相關(guān)。
[0045]人類(lèi)抗體以?xún)煞N與鉸鏈異質(zhì)性相關(guān)的形式存在。在一種形式中，免疫球蛋白分子包含約150-160kDa的穩(wěn)定四鏈構(gòu)建體，其中二聚體藉由鏈間重鏈二硫鍵而被約束在一起。在第二種形式中，二聚體不是經(jīng)由鏈間二硫鍵連接，且形成一個(gè)由共價(jià)偶聯(lián)輕鏈及重鏈組成的約75-80kDa分子(半抗體)。此等形式即使是在親和純化之后也相當(dāng)難以分離。
[0046]第二種形式在多種完整IgG同種型中的出現(xiàn)頻率是因?yàn)?但不限于)與抗體之鉸鏈區(qū)同種型有關(guān)的結(jié)構(gòu)差異。在人類(lèi)IgG4鉸鏈的鉸鏈區(qū)中，單個(gè)氨基酸置換可能將第二種形式的出現(xiàn)明顯降低至一般使用人類(lèi)IgGl鉸鏈所觀察到的水平(Angal et al.(1993)Molecular Immunology30:105)。本發(fā)明包括具有一或多個(gè)在鉸鏈CH2或CH3區(qū)中的突變的抗體，其可能是所要的，例如在制造時(shí)，以增進(jìn)所欲抗體形式的產(chǎn)率。
[0047]”分離的抗體”，如本文所用，表示一種已被鑒定且分離及/或由其天然環(huán)境的至少一組分中被回收而來(lái)的抗體。例如，已被分離或由生物的至少一組分中，或由其中天然存在或天然生產(chǎn)之抗體的組織或細(xì)胞移除而來(lái)的抗體就本發(fā)明之目的來(lái)說(shuō)是一種”分離的抗體”。分離的抗體亦包括在重組型細(xì)胞內(nèi)的原位抗體。分離抗體是已進(jìn)行至少一種純化或分離步驟的抗體。依據(jù)某些實(shí)施方案，分離的抗體基本上不含其他細(xì)胞物質(zhì)及/或化學(xué)品。
[0048]術(shù)語(yǔ)”特異結(jié)合”或類(lèi)似用語(yǔ)表示與抗原在生理?xiàng)l件下形成相對(duì)穩(wěn)定復(fù)合物的抗體或其抗原結(jié)合片段。用于測(cè)定抗體是否特異結(jié)合至抗原的方法為本領(lǐng)域中已知，且包括例如平衡透析、表面等離振子共振及類(lèi)似方法。例如，”特異結(jié)合”人類(lèi)ErbB3的抗體，如本發(fā)明上下文中所用，包括以低于約1000nΜ、低于約500nM、低于約300nM、低于約200nM、低于約ΙΟΟηΜ、低于約90nM、低于約80nM、低于約70nM、低于約60nM、低于約50nM、低于約40nM、低于約30nM、低于約20nM、低于約ΙΟηΜ、低于約5nM、低于約4nM、低于約3nM、低于約2nM、低于約InM或低于約0.5nM的Kd結(jié)合人類(lèi)ErbB3或其部分的抗體,如同在表面等離振子共振分析中所測(cè)得(參見(jiàn)，例如本文的實(shí)施例3)。但是，特異結(jié)合人類(lèi)ErbB3的分離抗體可能對(duì)其他抗原(諸如其他(非人類(lèi))物種的ErbB3分子)表現(xiàn)出交叉反應(yīng)性。
[0049]“中和”或”阻斷”抗體，如本文所用，欲意指一種結(jié)合至ErbB3而有下列事件的抗體:(i)干擾ErbB3或ErbB3片段與ErbB3配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I)相互作用，及/或
(ii)造成ErbB3的至少一種生物功能被抑制。ErbB3中和或阻斷抗體所致的抑制不必然是完全的，只要其可使用適當(dāng)分析被測(cè)得即可。檢測(cè)ErbB3抑制的示例性分析于本文中說(shuō)明。
[0050]相較于抗體所衍生而來(lái)之對(duì)應(yīng)種系序列，本文揭示的抗_ErbB3抗體可在重鏈及輕鏈可變域之構(gòu)架及/或CDR區(qū)中含有一或多個(gè)氨基酸置換、插入及/或缺失。此等突變可通過(guò)將本文所揭示之氨基酸序列與可得自例如公用抗體序列數(shù)據(jù)庫(kù)的種系序列相比對(duì)而容易確認(rèn)。本發(fā)明包括抗體及其抗原結(jié)合片段，其等是衍生自本文所揭示的任一氨基酸序列，其中一或多個(gè)構(gòu)架及/或CDR區(qū)中的一或多個(gè)氨基酸突變成對(duì)應(yīng)該抗體所源自的種系序列之對(duì)應(yīng)殘基，或另一人類(lèi)種系序列的對(duì)應(yīng)殘基，或?qū)?yīng)種系殘基的保守氨基酸置換(此類(lèi)序列改變?cè)诒疚闹腥庵笧椤狈N系突變”)。本領(lǐng)域技術(shù)人員從本文揭示的重鏈與輕鏈可變區(qū)序列開(kāi)始，可輕易制造出許多含有一或多個(gè)個(gè)別種系突變或其組合的抗體及抗原結(jié)合片段。在某些實(shí)施方案中，Vh及/或' 域中的所有構(gòu)架及/或CDR殘基突變回復(fù)成在抗體衍生而來(lái)之原有種系序列中所發(fā)現(xiàn)的殘基。在其他實(shí)施方案中，僅有某些殘基突變回復(fù)成原有種系序列，例如僅有在FRl的前8個(gè)氨基酸中或FR4的后8個(gè)氨基酸中所發(fā)現(xiàn)的突變殘基，或僅有CDRl、CDR2或CDR3中所發(fā)現(xiàn)的突變殘基。在其他實(shí)施方案中，構(gòu)架及/或CDR殘基的一或多者突變成不同種系序列的對(duì)應(yīng)殘基(亦即，不同于抗體原有衍生而來(lái)之種系序列的種系序列)。此外，本發(fā)明抗體可含有兩個(gè)或更多個(gè)構(gòu)架及/或CDR區(qū)中之種系突變的組合，例如某些個(gè)別殘基突變成特定種系序列的對(duì)應(yīng)殘基，而不同于原有種系序列的某些其他殘基維持原狀或突變成不同種系序列的對(duì)應(yīng)殘基。在得到后，含有一或多個(gè)種系突變的抗體及抗原結(jié)合片段可針對(duì)一或多種所要特性(諸如結(jié)合特異性增進(jìn)、結(jié)合親和力增加、拮抗或激動(dòng)生物特性增進(jìn)或提高(視情況而定)、免疫原性降低等)來(lái)進(jìn)行簡(jiǎn)易測(cè)試。使用以此一般方式所得到的抗體及抗原結(jié)合片段包含在本發(fā)明中。
[0051]本發(fā)明亦包括抗_ErbB3抗體，該抗體含有本文揭示之具有一或多個(gè)保守性置換的HCVR、LCVR、及/或⑶R氨基酸序列任一者的變體。例如，本發(fā)明包括具有HCVR、LCVR、及/或⑶R氨基酸序列的抗_ErbB3抗體，該抗體相對(duì)于本文揭示之任一 HCVR、LCVR、及/或CDR氨基酸序列具有例如10個(gè)或更少、8個(gè)或更少、6個(gè)或更少、4個(gè)或更少等的保守性氨基酸置換。
[0052]術(shù)語(yǔ)“表面等離振子共振”，如本文所用，意指容許藉由檢測(cè)生物傳感器基質(zhì)中的蛋白質(zhì)濃度變化來(lái)分析實(shí)時(shí)相互作用的光學(xué)現(xiàn)象，例如使用BIAcore?系統(tǒng)(Biacore LifeScience division of GE Healthcare, Piscataway, N.J.)。
[0053]術(shù)語(yǔ)“KD”，如本文所用，欲意指特定抗體-抗原相互作用的平衡解離常數(shù)。
[0054]術(shù)語(yǔ)“表位(epitope)” 意指一個(gè)與已知為互補(bǔ)位(paratope)之抗體分子的可變區(qū)中的特定抗原結(jié)合位點(diǎn)相互作用的抗原決定簇。單獨(dú)一個(gè)抗原可能有超過(guò)一個(gè)表位。因此，不同抗體可結(jié)合至抗原的不同區(qū)域且可能具有不同的生物效力。表位可以是構(gòu)象的或線性的。構(gòu)象表位可透過(guò)在空間上并列的氨基酸由不同線性多肽鏈的區(qū)段所產(chǎn)生。線性表位是由多肽鏈中的相鄰氨基酸殘基所產(chǎn)生。在某些情況下，表位可包括抗原上的糖類(lèi)、磷酰基或磺?；牟糠?。
[0055]當(dāng)意指核酸或其片段時(shí)，“實(shí)質(zhì)同一性”或”實(shí)質(zhì)同一”表示若藉由任何序列同一性的已知算法(諸如FASTA、BLAST或Gap，如上所述)來(lái)測(cè)定時(shí)，當(dāng)在有適當(dāng)核苷酸插入或缺失的情況下與另一核酸(或其互補(bǔ)鏈)最佳比對(duì)時(shí)，在至少約95%，及更佳至少約96%、97%、98%或99%核苷酸堿基中有核苷酸序列同一性。在某些情況下，與參考核酸分子具有實(shí)質(zhì)同一性的核酸分子可編碼具有與參考核酸分子所編碼之多肽相同或基本相似氨基酸序列的多肽。
[0056]當(dāng)應(yīng)用于多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)”實(shí)質(zhì)相似性”或”實(shí)質(zhì)相似”表示當(dāng)兩個(gè)肽序列最佳地比對(duì)時(shí)(諸如按照程序GAP或BESTFIT使用默認(rèn)空位權(quán)重)，共有至少95%，甚至更佳至少98%或99%序列同一性。較佳地，不相同的殘基位置因?yàn)楸Ｊ匦园被嶂脫Q而有所差異?！北Ｊ匦园被嶂脫Q”是一種氨基酸殘基置換成另一種帶有類(lèi)似化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)之側(cè)鏈(R基團(tuán))的氨基酸殘基。一般來(lái)說(shuō)，保守性氨基酸置換大體上不會(huì)改變蛋白質(zhì)的官能性質(zhì)。在2或多個(gè)氨基酸序列彼此因?yàn)楸Ｊ匦灾脫Q而有所不同的情況下，序列同一性百分比或相似性程度可以向上調(diào)整而校正置換的保守性質(zhì)。用來(lái)做這個(gè)調(diào)整的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是熟知的。參見(jiàn)，例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331。帶有具類(lèi)似化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈之氨基酸的基團(tuán)實(shí)例包括(I)脂肪族側(cè)鏈:甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸與異亮氨酸；(2)脂肪族-羥基側(cè)鏈:絲氨酸與蘇氨酸；(3)含酰胺的側(cè)鏈:天冬酰胺與谷氨酰胺；(4)芳族側(cè)鏈:苯丙氨酸、酪氨酸與色氨酸；(5)堿性側(cè)鏈:賴(lài)氨酸、精氨酸與組氨酸；(6)酸性側(cè)鏈:天冬氨酸與谷氨酸；以及(7)含硫側(cè)鏈為半胱氨酸與甲硫氨酸。優(yōu)選的保守性氨基酸置換基團(tuán)為:纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴(lài)氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、天冬氨酸-谷氨酸，以及天冬酰胺-谷氨酰胺?；蛘撸Ｊ匦灾脫Q可以是任何在Gonnet et al.(1992) Science256:1443-45中揭示的PAM250對(duì)數(shù)-相似矩陣中具有正值的改變?！边m度保守”置換是任何在PAM250對(duì)數(shù)-相似矩陣中具有非負(fù)值的改變。
[0057]有關(guān)多肽的序列相似性，其亦可意指為序列同一性，典型是使用序列分析軟件來(lái)測(cè)量。蛋白質(zhì)分析軟件使用分派給多種置換、缺失以及其他修飾(包括保守性氨基酸置換)的相似性的測(cè)量法來(lái)配對(duì)相似序列。例如，GCG軟件含有諸如Gap與Bestfit的程序，它們可以與默認(rèn)參數(shù)一起用來(lái)決定關(guān)系相近之多肽(諸如來(lái)自于不同物種之生物的同源性多肽)或野生型蛋白質(zhì)與其突變蛋白質(zhì)之間的序列同源性或序列同一性。參見(jiàn)，例如GCG第6.1版。多肽序列也可以使用默認(rèn)或建議參數(shù)的FASTA( —種在GCG第6.1版中的程序)來(lái)比對(duì)。FASTA(例如FASTA2與FASTA3)提供查詢(xún)以及研究序列之間最佳重復(fù)區(qū)域的比對(duì)以及百分比序列同一性(Pearson(2000)上文)。當(dāng)要將本發(fā)明的序列與含有大量來(lái)自不同生物之序列的數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)時(shí)，另一個(gè)優(yōu)選的算法是計(jì)算機(jī)程序BLAST，特別是BLASTP或TBLASTN，使用默認(rèn)參數(shù)。參見(jiàn)，例如 Altschul et al.(1990) J.Mol.Biol.215:403-410 以及 Altschul et al.(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-402。
[0058]抗體的生物特性[0059]本發(fā)明抗體阻斷ErbB3與其配體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白_1 (NRGl)之相互作用。如本文所用，詞句”阻斷ErbB3與NRGl之間的相互作用”表示在可檢測(cè)及/或定量的ErbB3與NRGl之間的物理性相互作用的分析中，添加本發(fā)明抗體會(huì)降低ErbB3與NRGl之間的相互作用達(dá)至少50%。一個(gè)可用于測(cè)定一個(gè)抗體是否會(huì)阻斷人類(lèi)ErbB3與NRGl之間相互作用的非限制示例性分析說(shuō)明于本文實(shí)施例4中。在此實(shí)施例中,抗體與ErbB3蛋白混合,接著抗體/ErbB3混合物被施加至涂覆有NRGl蛋白的表面上。在洗去未結(jié)合的分子之后，測(cè)量結(jié)合至涂覆NRGl之表面的ErbB3的量。透過(guò)在此分析形式中使用不同數(shù)量的抗體，可計(jì)算出阻斷50%的ErbB3結(jié)合至NRGl所需的抗體數(shù)量并表示為IC5tl數(shù)值。本發(fā)明包括當(dāng)于如上所述ErbB3/NRGl結(jié)合分析或?qū)嵸|(zhì)相似的分析中測(cè)試時(shí)表現(xiàn)IC5tl少于約600pM的抗_ErbB3抗體。例如，本發(fā)明包括當(dāng)于如上所述ErbB3/NRGl結(jié)合分析或?qū)嵸|(zhì)相似的分析中測(cè)試時(shí)表現(xiàn) IC50 少于約 600、500、400、300、290、280、270、260、250、240、230、220、210、200、190、180、170、160、150、140、130、120、110、100、90、80、70、60、50、40、30、20、10、18、16、14、12、10、9、
8、7、6、5、4、3、2 或 IpM 的抗-ErbB3 抗體。
[0060]或者，可藉由使用以細(xì)胞為基礎(chǔ)之檢測(cè)NRGl-誘導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)傳遞的改變的分析形式來(lái)決定一抗體是否會(huì)阻斷ErbB3與NRGl之間相互作用。此類(lèi)示例性分析形式說(shuō)明于本文的實(shí)施例6與8中。在這些實(shí)施例中，于使用NRGl處理之后，在不同數(shù)量抗_ErbB3抗體存在下測(cè)定激酶Akt及/或ErbB3在細(xì)胞中的磷酸化程度。在這些分析形式中，因?yàn)榭筥ErbB3抗體存在所引起的Akt及/或ErbB3磷酸化的百分比抑制作為抗體阻斷ErbB3與NRGl之間相互作用的程度指標(biāo)。本發(fā)明包括當(dāng)于如上所述Akt或ErbB3磷酸化分析或?qū)嵸|(zhì)相似分析中測(cè)試時(shí)，抑制Akt或ErbB3磷酸化達(dá)至少60%的抗體。例如，本發(fā)明包括當(dāng)于如上所述Akt或ErbB3磷酸化分析或?qū)嵸|(zhì)相似分析中測(cè)試時(shí),抑制Akt或ErbB3磷酸化達(dá)至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100% 的抗體。
[0061]本發(fā)明抗-ErbB3抗體亦表現(xiàn)一或多種下列特性:(I)能夠引起細(xì)胞表面表達(dá)之ErbB3內(nèi)化(參見(jiàn)，例如本文實(shí)施例5) ；(2)能夠在體外抑制NRGl-刺激的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，不論是單獨(dú)或與EGFR抑制組合(參見(jiàn)，例如本文的實(shí)施例7);以及(3)能夠在動(dòng)物中抑制腫瘤生長(zhǎng)(參見(jiàn)，例如本文的實(shí)施例9)。
[0062]表位作圖以及相關(guān)技術(shù)
[0063]ErbB3蛋白，像是所有ErbB/HER家族成員，含有4個(gè)細(xì)胞外域，稱(chēng)為”域I ”、”域II”、”域III”及”域IV”。域I是由SEQ ID NO: 498之氨基酸I至190所表示的氨基酸序列；域II是由SEQ ID NO:498之氨基酸191至308所表示的氨基酸序列；域III是由SEQID NO: 498之氨基酸309至499所表示的氨基酸序列；以及域IV是由SEQ ID NO: 498之氨基酸500至624所表示的氨基酸序列。
[0064]本發(fā)明包括與ErbB3之細(xì)胞外域的域III中所發(fā)現(xiàn)的一或多個(gè)表位相互作用的抗-ErbB3抗體。表位可由ErbB3之域III中具有3個(gè)或更多個(gè)(例如3、4、5、6、7、8、9、10、
11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個(gè)或更多)氨基酸的一或多個(gè)連續(xù)序列所構(gòu)成?；蛘撸砦豢捎蒃rbB3之域III中的數(shù)個(gè)非連續(xù)氨基酸(或氨基酸序列)所構(gòu)成。依據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，提供與選自由下列所構(gòu)成之組中之一或多個(gè)域III氨基酸區(qū)段中的一或多個(gè)氨基酸相互作用的抗_ErbB3抗體:SEQ ID NO:498的氨基酸345-367 ;SEQ ID N0:498的氨基酸423-439 ;以及SEQ ID NO: 498的氨基酸451-463。例如，本發(fā)明包括與前述域III氨基酸區(qū)段各者(亦即SEQ ID N0:498的氨基酸345-367、423-439及451-463)中的至少一個(gè)氨基酸相互作用的抗_ErbB3抗體。
[0065]可使用本領(lǐng)域中具有通常技術(shù)者所熟知的多種技術(shù)來(lái)決定一個(gè)抗體是否會(huì)與多肽或蛋白質(zhì)中的”一或多個(gè)氨基酸相互作用”。示例性技術(shù)包括，例如Har I ow和Lane 的” Antibodies”(Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)所述的慣用交叉-阻斷分析、丙氨酸掃描突變分析、肽印跡分析(Reineke (2004)Methods MolBiol248:443-63)及肽切割分析。此外，可以采用諸如表位切除、表位抽出以及化學(xué)修飾抗原的方法(Tomer, 2000，Protein Science9:487-496)。另一種可用于鑒別與抗體相互作用之多肽中的氨基酸的方法為透過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)氫/氘交換(參見(jiàn)，例如本文的實(shí)施例11)。在通常術(shù)語(yǔ)中，氫/氘交換法涉及將感興趣的蛋白質(zhì)標(biāo)記氘，然后透過(guò)將抗體結(jié)合至經(jīng)氘標(biāo)記的蛋白質(zhì)。接下來(lái)，蛋白質(zhì)/抗體復(fù)合物被轉(zhuǎn)移至水中以容許氫-氘交換在受抗體保護(hù)之殘基(其維持經(jīng)氘標(biāo)記)以外的所有殘基發(fā)生。在抗體解離后，目標(biāo)蛋白質(zhì)被進(jìn)行蛋白酶切割與質(zhì)譜分析，從而揭開(kāi)經(jīng)氘標(biāo)記的殘基，其對(duì)應(yīng)于抗體相互作用的特定氨基酸。參見(jiàn)，例如 Ehring(1999)Analytical Biochemistry267(2):252-259;Engen and Smith(2001)Anal.Chem.73:256A-265A。
[0066]本發(fā)明進(jìn)一步包括結(jié)合至與本文所述特定示例性抗體任一者(例如，H1M1819N、H2M1821N、H2M1824N、H2M1827N、H1M1828N、H2M1829N、H2M1930N、H2M1934N、H2M1938N、H1M1940N等)之相同表位的抗_ErbB3抗體。同樣地，本發(fā)明亦包括與本文所述特定示例性抗體任一者(例如，H1M1819N、H2M1821N、H2M1824N、H2M1827N、H1M1828N、H2M1829N、H2M1930N、H2M1934N、H2M1938N、H1M1940N 等)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至 ErbB3 或 ErbB3 片段的抗 _ErbB3抗體。
[0067]可容易地藉由使用本領(lǐng)域中已知的慣常方法決定一個(gè)抗體是否會(huì)與參考抗-ErbB3抗體結(jié)合至相同的表位，或與參考抗_ErbB3抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至相同表位。例如，為決定一測(cè)試抗體是否會(huì)結(jié)合至與本發(fā)明參考抗_ErbB33抗體相同的表位，容許該參考抗體在飽合條件下結(jié)合至ErbB3蛋白或肽。接著，評(píng)估測(cè)試抗體結(jié)合至ErbB3分子的能力。若測(cè)試抗體能夠在參考抗_ErbB3抗體飽合結(jié)合之后結(jié)合至ErbB3,則可推論該測(cè)試抗體結(jié)合至與參考抗_ErbB3抗體不同的表位。另一方面，若測(cè)試抗體無(wú)法在參考抗_ErbB3抗體飽合結(jié)合后結(jié)合至ErbB3分子，則該測(cè)試抗體可能結(jié)合至與本發(fā)明參考抗-ErbB3抗體所結(jié)合之表位相同的表位。接而可進(jìn)行其他慣常實(shí)驗(yàn)(例如肽突變與結(jié)合分析)以確認(rèn)觀察測(cè)試抗體沒(méi)有結(jié)合是因?yàn)榻Y(jié)合至與參考抗體相同的表位，或若沒(méi)有觀察到結(jié)合是因?yàn)槠淇臻g阻礙(或另一現(xiàn)象)。這類(lèi)實(shí)驗(yàn)可使用ELISA、RIA、Biacore、流式細(xì)胞術(shù)或本領(lǐng)域中可供使用的其他任何定量或定性抗體結(jié)合分析來(lái)進(jìn)行。依據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，若例如在一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析中測(cè)量一個(gè)過(guò)量1-、5-、10-、20_或100-倍的抗體抑制另一個(gè)抗體的結(jié)合達(dá)至少50%，但優(yōu)選75%、90%或甚至99%，則兩個(gè)抗體結(jié)合至相同(或重迭)表位(參見(jiàn)，例如Junghans et al.，Cancer Res.1990:50:1495-1502)。或者，若基本上所有在抗原中會(huì)減少或消除一個(gè)抗體結(jié)合的氨基酸突變也會(huì)減少或消除另一個(gè)抗體的結(jié)合，則兩個(gè)抗體被視為是結(jié)合至相同表位。若減少或消除一抗體結(jié)合之僅有一部分氨基酸突變也會(huì)減少或消除另一個(gè)抗體的結(jié)合，則兩個(gè)抗體被視為具有”重迭的表位”。
[0068] 為測(cè)定一個(gè)抗體是否與參考抗_ErbB3抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，以?xún)蓚€(gè)方向來(lái)進(jìn)行上述結(jié)合方法學(xué):在第一個(gè)方向，容許參考抗體在飽和條件下結(jié)合至ErbB3分子，繼而評(píng)估測(cè)試抗體對(duì)ErbB3分子的結(jié)合。在第二個(gè)方向，容許測(cè)試抗體在飽和條件下結(jié)合至ErbB3分子,繼而評(píng)估參考抗體對(duì)ErbB3分子的結(jié)合。若在兩個(gè)方向中，僅有第一(飽和)抗體能夠結(jié)合至ErbB3分子，則推斷測(cè)試抗體與參考抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至ErbB3。如本領(lǐng)域中具有通常技術(shù)者所了解，與參考抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合之抗體不必然會(huì)結(jié)合至與參考抗體相同的表位，但可能會(huì)在空間上藉由結(jié)合重迭或相鄰表位來(lái)阻斷參考抗體的結(jié)合。
[0069]制備人類(lèi)抗體
[0070]用于制造單克隆抗體(包括人類(lèi)單克隆抗體)的方法為本領(lǐng)域中已知的。任何此等已知方法可用于本發(fā)明的上下文中以制造特異結(jié)合至人類(lèi)ErbB3的人類(lèi)抗體。
[0071]使用VEL0CIMMUNE?技術(shù)或任何其他用于生成單克隆抗體的已知方法，首先分離出帶有人類(lèi)可變區(qū)以及小鼠恒定區(qū)之對(duì)ErbB3具高親和力的嵌合抗體。如同在下面實(shí)驗(yàn)節(jié)中，鑒定抗體的特征并且篩選所欲的特性，包括親和力、選擇性、表位等。小鼠恒定區(qū)取代成所欲的人類(lèi)恒定區(qū)以生成本發(fā)明的完整人類(lèi)抗體，例如野生型或經(jīng)修飾的IgGl或IgG4。盡管篩選出的恒定區(qū)可能會(huì)依據(jù)特定用途、可變區(qū)中的高親和力抗原-結(jié)合以及靶標(biāo)特異性特性而改變。
[0072]生物等同物
[0073]本發(fā)明的抗-ErbB3抗體以及抗體片段包括帶有由那些所述抗體變化而來(lái)，但仍保有結(jié)合人類(lèi)ErbB3能力之氨基酸序列的蛋白質(zhì)。當(dāng)與親代序列相較之下，此等變異抗體以及抗體片段包含有一或多個(gè)氨基酸加入、缺失或置換，但仍展現(xiàn)出基本上與所述抗體等同的生物活性。同樣地，當(dāng)與所揭示的序列相較之下，本發(fā)明之抗_ErbB3抗體編碼DNA序列包括具有一或多個(gè)核苷酸加入、缺失或置換，但仍編碼基本上與本發(fā)明之抗_ErbB3抗體或抗體片段基本上生物等同的抗_ErbB3抗體或抗體片段的序列。上面詳述此等變異氨基酸以及DNA序列的實(shí)例。
[0074]舉例而言，若2個(gè)抗原-結(jié)合蛋白或抗體是藥學(xué)等同物或藥學(xué)代用品，當(dāng)它們以相同摩爾劑量在類(lèi)似實(shí)驗(yàn)條件下施用的吸收速率與程度未顯示出明顯差異(不論是單一劑量或多劑量)，它們被視為生物等同的。若一些抗體在它們的吸收程度上相等但在它們的吸收速率上不同，它們將會(huì)被視為等同物或藥學(xué)代用品但不被視為生物等同，因?yàn)榇说仍谖账俾噬系牟町愂怯心康牟⑶以跉w類(lèi)時(shí)被反映，對(duì)于在例如長(zhǎng)期使用上獲得有效生體藥物濃度來(lái)說(shuō)不是必要的，并且就所研究的特定藥物產(chǎn)品來(lái)說(shuō)被視為在醫(yī)學(xué)上不重要。
[0075]在一個(gè)實(shí)施方案中，若2個(gè)抗原-結(jié)合蛋白在臨床上就其安全性、純度以及效力而言并無(wú)有意義的差異，它們是生物等同的。
[0076]在一個(gè)實(shí)施方案中，若患者在參考產(chǎn)品與生物產(chǎn)品之間可以改變一或多次而沒(méi)有預(yù)期增高不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)(包括與持續(xù)治療而沒(méi)有這樣切換的情況下相比，在免疫原性上的臨床顯著變化，或減低有效性)時(shí)，兩種抗原結(jié)合蛋白是生物等同的。
[0077]在一個(gè)實(shí)施方案中，若2個(gè)抗原-結(jié)合蛋白就條件或使用條件來(lái)說(shuō)均是藉由共同的機(jī)制或作用機(jī)制而作 用達(dá)致此等機(jī)制已知的程度，它們是生物等同的。
[0078]生物等同性可以藉由體內(nèi)和體外方法證實(shí)。生物等同性測(cè)量法包括，例如(a)在人類(lèi)或其他哺乳動(dòng)物體內(nèi)的體內(nèi)測(cè)試，其中隨著時(shí)間測(cè)量抗體或其代謝物在血液、血漿、血清或其他生物液中的濃度；(b)已使用人類(lèi)體內(nèi)生物可利用性數(shù)據(jù)校正并且可合理預(yù)測(cè)的體外測(cè)試；(C)在人類(lèi)或其他哺乳動(dòng)物體內(nèi)的體內(nèi)測(cè)試，其中隨著時(shí)間測(cè)量抗體(或其靶標(biāo))之適當(dāng)急性藥理學(xué)效用；以及(d)在已證實(shí)抗體的安全性、效力或生物可利用性或生物等同性的充分控制臨床試驗(yàn)中。
[0079]本發(fā)明之抗_ErbB3抗體的生物等同變體可以藉由例如，制造多種殘基或序列置換，或缺失不是生物活性所必需的末端或內(nèi)部殘基或序列而構(gòu)架。舉例而言，對(duì)于生物活性來(lái)說(shuō)不是必要的半胱氨酸殘基可以被缺失或取代為其他會(huì)在復(fù)性之后防止形成不必要或不正確分子內(nèi)雙硫橋的氨基酸。在其他上下文中，生物等同性抗體可包括抗_ErbB3抗體變體，其含有會(huì)修飾抗體之糖基化特性的氨基酸改變(例如消除或移除糖基化的突變)。
[0080]物種選擇性以及物種交叉反應(yīng)性
[0081]依據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案,抗_ErbB3抗體結(jié)合至人類(lèi)ErbB3而不會(huì)結(jié)合至其他物種的ErbB3。本發(fā)明亦包括結(jié)合至人類(lèi)ErbB3以及一或多個(gè)非人類(lèi)物種的ErbB3的抗-ErbB3抗體。舉例而言，本發(fā)明的抗_ErbB3抗體可以結(jié)合至人類(lèi)ErbB3并且視情況可能結(jié)合或不結(jié)合至小鼠、大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、沙鼠、豬、貓、狗、兔、山羊、綿羊、奶牛、馬、駱駝、獼猴、狨猿、恒河猴或黑猩猩ErbB3的一或多者。
[0082]免疫綴合物(immunoconjugates)
[0083]本發(fā)明包括綴合至一治療部分(”免疫綴合物(諸如細(xì)胞毒素、化學(xué)治療藥物、免疫抑制劑或放射性同位素)的抗_ErbB3單克隆抗體。細(xì)胞毒性劑包括任何對(duì)細(xì)胞有害的藥劑。用于形成免疫綴合物的適當(dāng)細(xì)胞毒性劑以及化學(xué)治療劑的實(shí)例在本領(lǐng)域中是已知的(參見(jiàn)例如W005/103081)。
[0084]多特異性抗體
[0085]本發(fā)明的抗體可以是單特異性、雙特異性或多特異性。多特異性抗體可以是對(duì)一個(gè)標(biāo)的多肽的不同表位具有特異性或者可能含有對(duì)超過(guò)一個(gè)標(biāo)的多肽具有特異性的抗原-結(jié)合域。參見(jiàn)例如 Tutt et al., 1999, J.1mmunol.147:60-69 ；Kufer etal., 2004, Trends Biotechnol.22:238-244。本發(fā)明的抗-ErbB3 抗體可以鏈接至另一個(gè)功能性分子(例如另一個(gè)肽或蛋白質(zhì))或與該另一個(gè)功能性分子共表達(dá)。舉例而言，抗體或其片段在功能上可以鏈接(例如，藉由化學(xué)偶聯(lián)、遺傳融合、非共價(jià)締合或其他方式)至一或多個(gè)其他分子實(shí)體，諸如另一個(gè)抗體或抗體片段，以產(chǎn)生帶有第二種結(jié)合特異性的雙特異性或多特異性抗體。舉例而言，本發(fā)明包括雙特異性抗體，其中免疫球蛋白的一臂對(duì)于人類(lèi)ErbB3或其片段具有特異性，而免疫球蛋白的另一臂對(duì)第二治療標(biāo)的(例如EGFR、EGFRvII1、ErbB2/HER2、ErbB4、VEGF或Ang2)具有特異性或綴合至一個(gè)治療部分。
[0086]可以使用于本發(fā)明上下文的示例性雙特異性抗體形式涉及使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3域以及第二 Ig CH3域，其中第一與第二 Ig CH3域因?yàn)橹辽買(mǎi)個(gè)氨基酸而彼此不同，以及其中與缺乏該氨基酸差異的雙特異性抗體相較之下，至少I(mǎi)個(gè)氨基酸差異會(huì)減低該雙特異性抗體結(jié)合至蛋白質(zhì)A。在一個(gè)實(shí)施方案中，該第一 Ig CH3域結(jié)合蛋白質(zhì)A而該第二Ig Ch3域含有1個(gè)會(huì)減低或消除蛋白質(zhì)A結(jié)合的突變，諸如H95R修飾(按照MGT外顯子編號(hào)；按照EU編號(hào)為H435R)。該第二 Ch3可進(jìn)一步包含有Y96F修飾(按照MGT ;按照EU為Y436F)?？梢栽诘诙?Ch3中發(fā)現(xiàn)到的更多修飾包括:在IgGl抗體的情況下，D16E、L18M、N44S、K52N、V57M 以及 V82I (按照 IMGT ;按照 EU 為 D356E、L358M、N384S、K392N、V397M 以及 V422I);在 IgG2 抗體的情況下，N44S、K52N 以及 V82I (IMGT ;按照 EU 為 N384S.K392V 以及 V422I)；以及在 IgG4 抗體的情況下，Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q 以及 V82I (按照 MGT ;按照 EU 為 Q355R、N384S、K392V、V397M、R409K、E419Q 以及 V422I)。上述雙特異性抗體形式方面的變異在本發(fā)明范圍中是可預(yù)想的。
[0087]治療制劑以及施用
[0088]本發(fā)明提供包含有本發(fā)明之抗_ErbB3抗體或其抗原-結(jié)合片段的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可與適當(dāng)載體、賦形劑以及其他提供改善輸送、遞送、耐受性等的藥劑一起配制?？梢栽趯?duì)于藥學(xué)化學(xué)家來(lái)說(shuō)為熟悉的處方書(shū)中找到大量適當(dāng)?shù)闹苿?Remington, s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA。這些制劑包括，例如粉劑、糊劑、軟膏、凝膠劑、蠟、油、脂質(zhì)、含有囊泡的脂質(zhì)(陽(yáng)離子或陰離子的)(諸如LIPOFECTIN?)、DNA綴合物、無(wú)水吸收糊劑、水包油與油包水乳劑、乳化碳蠟(具有多種分子量的聚乙二醇)、半固體凝膠以及含有碳蠟的半固體混合物。亦參見(jiàn)Powell etal.，’Compendium of excipients for parenteral formulations，，PDA (1998) J Pharm SciTechnoI52:238-31I。
[0089]施用給患者的抗體劑量可以視患者的年齡與身材、標(biāo)的疾病、病況、施用途徑等來(lái)改變。較佳劑量通常是依據(jù)體重或體表面積來(lái)計(jì)算。當(dāng)本發(fā)明的抗體用于在成人患者體內(nèi)治療與ErbB3活性有關(guān)的病況或疾病時(shí)，通常以約0.01至約20mg/kg體重、更佳約0.02至約7、約0.03至約5、或約0.05至3mg/kg體重的單一劑量靜脈內(nèi)施用本發(fā)明抗體是有益的?？梢砸暡r的嚴(yán)重性調(diào)整治療頻率以及持續(xù)時(shí)間。用于施用抗_ErbB3抗體的有效劑量與時(shí)間表可按經(jīng)驗(yàn)來(lái)決定；例如，可透過(guò)定期評(píng)估來(lái)監(jiān)測(cè)患者進(jìn)展，并據(jù)此調(diào)整劑量。此外,劑量的物種間標(biāo)度可使用本領(lǐng)域中已知的方法來(lái)進(jìn)行(例如Mordenti etal., 1991, Pharmaceut.Res.5:1351)。
[0090]已知有多種不同的遞送系統(tǒng)并且可用于施用本發(fā)明的藥物組合物，例如封裝在脂質(zhì)體內(nèi)、微粒、微膠囊、能夠表達(dá)突變病毒的重組型細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞作用(參見(jiàn)，例如Wu et al.，1987，J.Biol.Chem.262:4429-4432)。引入的方法包括，但不限于皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜上以及口服途徑。組合物可以藉由任何習(xí)知途徑來(lái)施用，例如藉由輸注或推注、藉由透過(guò)上皮或黏膜內(nèi)襯(例如口腔黏膜、直腸以及小腸黏膜等)吸收，并且可以與其他具有生物活性的藥劑一起施用。施用可為全身性或局部的。
[0091]本發(fā)明的藥物組合物可以使用標(biāo)準(zhǔn)注射針與注射器來(lái)皮下或靜脈內(nèi)遞送。此外，關(guān)于皮下遞送，筆型遞送裝置很容易應(yīng)用于遞送本發(fā)明的藥物組合物。這樣的一種筆型遞送裝置可以是重復(fù)使用或一次性的?？芍貜?fù)使用的筆型遞送裝置通常使用含有藥物組合物的可換式卡匣。一旦卡匣內(nèi)的所有藥物組合物被施用且卡匣空了，空的卡匣可易于丟棄并且更換成含有藥物組合物的新卡匣。那么就可以重復(fù)使用筆型遞送裝置。就一次性筆型遞送裝置來(lái)說(shuō)，沒(méi)有可換式卡匣。更確切地來(lái)說(shuō)，一次性筆型遞送裝置在裝置的貯器內(nèi)預(yù)先填充藥物組合物。一旦貯器沒(méi)有藥物組合物，整個(gè)裝置就被丟棄。
[0092]許多可重復(fù)使用的筆型以及自動(dòng)注射遞送裝置在皮下遞送本發(fā)明之藥物組合物方面有應(yīng)用。實(shí)例包括，但不限定于AUT0PEN?(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK)、DISETR0NIC?pen (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland) > HUMAL0GMIX75/25?pen、HUMAL0G?pen、HUMALIN70/30?pen(Eli Lilly and C0.，Indianapois, IN)、NOVOPENtm1、II 與 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、N0V0PEN JUNIOR?(NovoNordisk,Copenhagen, Denmark)、BD? 筆(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)、OPTIPEN?、OPTIPEN PRO?、OPTIPEN STARLET? 以及 OPTICLIK?(sanof1-aventis，F(xiàn)rankfurt, Germany)，僅舉幾個(gè)為例。在皮下遞送本發(fā)明之藥物組合物方面可應(yīng)用的一次性筆型遞送裝置的實(shí)例包括，但不限于 S0L0STAR? 筆(sanof1-aventis)、FLEXPEN?(Novo Nordisk)以及 KWIKPEN?(Eli Lilly)、SURECLICK? Auto injector (Amgen, Thousand Oaks, CA)、PENLET? (HaseImeier, Stuttgart, Germany)、EPIPEN (Dey, L.P.)以及 HUMIRA? Pen (AbbottLabs, Abbott Park IL),僅舉幾個(gè)為例。
[0093] 在某些情況下，藥物組合物在控制釋放系統(tǒng)中被遞送。在一個(gè)實(shí)施方案中，可使用泵(參見(jiàn) Langer,上文；Seftonl987, CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一實(shí)施方案中，可使用聚合材料；參見(jiàn)Medical Applications of ControlledRelease, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，控制釋放系統(tǒng)被置放在組合物的靶標(biāo)鄰近處，因此僅需要全身性劑量的一部分(參見(jiàn)，例如 Goodson, 1984, Medical Applications of Controlled Release,上文，vol.2，pp.115-138)。其他控制釋放系統(tǒng)在 Langer, 1990，Science249:1527-1533 的綜述中被討論。
[0094]可注射制品可包括用于靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)及肌肉內(nèi)注射、點(diǎn)滴輸注等的劑型。此等可注射制品可依照公知方法制備。例如，可注射制品可例如，藉由將上述抗體或其鹽溶解、懸浮或乳化于習(xí)知用于注射的無(wú)菌水性介質(zhì)或油性介質(zhì)中來(lái)制備。有關(guān)用于注射的水性介質(zhì)，例如有生理鹽水、含有葡萄糖與其他助劑的等滲溶液等，其可與適當(dāng)助溶劑(諸如醇(乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非離子性表面活性劑[例如聚山梨醇酯80、HC0-50(氫化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等組合使用。有關(guān)油性介質(zhì)，采用例如芝麻油、大豆油等，其可與助溶劑(諸如苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等)組合使用。由此制備的注射劑較佳地被填充于適當(dāng)安瓿中。
[0095]有利地，上述供經(jīng)口或非經(jīng)口使用的藥物組合物被制備為呈適于活性成分施用之單位劑量的劑型。此等呈單位劑量之劑型包括，例如片劑、丸劑、膠囊劑、注射劑(安瓿)、栓劑等。在I個(gè)單位劑量中，所含前述抗體的數(shù)量通常為單位劑量中每劑型約5至約500mg ；尤其是呈注射形式；前述抗體就其他劑型而言?xún)?yōu)選含有約5至約IOOmg以及約10至約250mgo
[0096]抗體的治療用途
[0097]本發(fā)明的抗體尤其可應(yīng)用于治療、預(yù)防及/或改善任何與ErbB3活性相關(guān)或由ErbB3活性介導(dǎo)，或可藉由阻斷ErbB3與ErbB3配體(例如NRG1)之間相互作用而治療的疾病或病癥。本發(fā)明抗體及抗原結(jié)合片段可用于治療，例如發(fā)生在腦部與腦膜、口咽、肺部與支氣管數(shù)、胃腸道、男性和女性生殖道、肌肉、骨、皮膚與附件、結(jié)締組織、胰臟、免疫系統(tǒng)、造血細(xì)胞與骨髓、肝臟和泌尿道，及特化感覺(jué)器官(諸如眼)的原發(fā)性及/或轉(zhuǎn)移性腫瘤。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體及抗原結(jié)合片段用于治療下列癌癥中的一或多者:腎細(xì)胞癌、胰臟瘤、乳癌、頭頸癌、前列腺癌、惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、骨肉瘤、結(jié)腸直腸癌、胃癌(例如帶有MET擴(kuò)增的胃癌)、惡性間皮瘤、多發(fā)性骨髓瘤、卵巢癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(例如EGFR-依賴(lài)性非小細(xì)胞肺癌)、滑膜肉瘤、甲狀腺癌或黑色素瘤。
[0098]本發(fā)明還提供了治療抗或變得抗抗-EGFR或抗一 HER2療法的腫瘤的方法。例如，本發(fā)明包括這樣的方法，所述方法包括(a)鑒定具有腫瘤的患者,所述腫瘤抗或者變得抗一種或多種抗-EGFR抗體(例如，西妥昔單抗)、EGFR的小分子抑制劑(例如，埃羅替尼)、抗-HER2抗體(例如，司徒曼布)、和/或HER2的小分子抑制劑；和(b)將本發(fā)明的抗_ErbB3抗體單獨(dú)或者與抗-EGFR抗體(例如，西妥昔單抗)、EGFR的小分子抑制劑(例如，埃羅替尼)、抗-HER2抗體(例如，司徒曼布)、和/或HER2的小分子抑制劑組合施用于所述患者。組合療法在下文詳細(xì)討論。
[0099]組合療法
[0100]本發(fā)明包括治療施用方案，其包含將本發(fā)明抗_ErbB3抗體與至少一種其他治療有效成分組合施用。該等其他治療有效成分的非限制性實(shí)例包括其他ErbB3拮抗劑(例如第二抗_ErbB3抗體或ErbB3的小分子抑制劑)、ErbB2/HER2的拮抗劑(例如抗-HER2抗體[例如曲妥珠單抗]或HER2活性的小分子抑制劑)、ErbB4的拮抗劑(例如抗_ErbB4抗體或ErbB4活性的小分子抑制劑)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的拮抗劑(例如抗-EGFR抗體[例如西妥昔單抗或帕尼單抗]或EGFR活性的小分子抑制劑[例如埃羅替尼或吉非替尼])、EGFRvI 11的拮抗劑(例如特異結(jié)合EGFRvIII的抗體)、VEGF拮抗劑(例如VEGF-Trap，參見(jiàn)例如US7, 087，411 (在本文中也意指為”VEGF-抑制融合蛋白”))、抗-VEGF抗體(例如貝伐單抗)、VEGF受體的小分子激酶抑制劑(例如舒尼替尼、索拉非尼或帕唑帕尼)，或抗-DLL4抗體(例如US2009/0142354中揭示的抗-DLL4抗體，諸如REGN421)等。其他可與本發(fā)明抗-ErbB3抗體組合而被有利施用的藥劑包括細(xì)胞激素抑制劑，包括小分子細(xì)胞因子抑制劑與抗體，其結(jié)合至諸如 IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-1U IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的細(xì)胞因子或其各自受體。本發(fā)明亦包括治療組合，其包含本文所述的任一抗_ErbB3抗體以及VEGF、DLL4、EGFR之一或多者，或任何前述細(xì)胞因子的抑制劑，其中該抑制劑為適體、反義分子、核酶、siRNA、肽體、納米抗體或抗體片段(例如Fab片段；F(ab’)2片段；Fd片段；Fv片段；SCFv ;dAb片段；或其他經(jīng)工程化的分子，諸如雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體與最小辨識(shí)單元)。本發(fā)明抗_ErbB3抗體亦可與抗病毒劑、抗生素、止痛劑、皮質(zhì)類(lèi)固醇及/或NSAID組合施用。本發(fā)明抗_ErbB3抗體亦可作為治療方案的一部分而被施用，該治療方案亦包括輻射治療及/或習(xí)知化療。其他治療活性成分可在本發(fā)明抗-ErbB3抗體施用之前、同時(shí)或之后被施用；(為本揭示內(nèi)容之用，此等施用方案被視為本發(fā)明”組合”治療有效成分施用抗_ErbB3抗體)。
[0101]施用方案
[0102]根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，可以在確定的時(shí)期內(nèi)向受試者施用多劑量的抗ErbB3抗體。本發(fā)明該方面的方法包括向受試者連續(xù)施用多劑量的抗ErbB3抗體。如本文所用，“連續(xù)施用”表示在不同的時(shí)間點(diǎn)上，例如預(yù)定間隔(例如，小時(shí)、天、周或月)分隔開(kāi)的不同的日期上向受試者施用每一劑量的抗ErbB3抗體。本發(fā)明包括這樣的方法，其包括向患者連續(xù)施用單次初始劑量的抗ErbB3抗體,隨后是一次或多次二次劑量的抗ErbB3抗體，并任選地隨后是一次或多次三次劑量的抗ErbB3抗體。
[0103]術(shù)語(yǔ)“初始劑量”、“二次劑量”和“三次劑量”指施用抗ErbB3抗體的時(shí)間順序。因此，“初始劑量”是在治療方案開(kāi)始時(shí)施用的劑量(也稱(chēng)為“基線劑量”);“二次劑量”是初始劑量之后施用的劑量；并且“三次劑量”是二次劑量之后施用的劑量。所述初始、二次和三次劑量可以含有相同量的抗ErbB3抗體，但一般可以在施用頻率方面彼此不同。然而在某些實(shí)施方案中，初始、二次和/或三次劑量中含有的抗ErbB3抗體的量在治療過(guò)程中彼此不同(例如適當(dāng)時(shí)上調(diào)或下調(diào))。在某些實(shí)施方案中，在治療方案開(kāi)始時(shí)施用兩次或多次(例如，2、3、4或5次)劑量作為“負(fù)荷劑量”，隨后是在更不頻繁基礎(chǔ)上施用的后續(xù)劑量(例如，“維持劑量”)。
[0104]在本發(fā)明的一個(gè)示例性實(shí)施方案中，在緊接其前的劑量之后施用每個(gè)二次和/或三次劑量 1-26 (例如，1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2或更多)周。如本文所用，短語(yǔ)“緊接其前的劑量”表示在多次施用的順序中，以沒(méi)有干預(yù)劑量的順序在緊接著施用下次劑量之前向患者施用的抗ErbB3抗體的劑量。
[0105]本發(fā)明該方面的方法可以包括向患者施用任意數(shù)量的二次和/或三次劑量的抗ErbB3抗體。例如，在某些實(shí)施方案中，僅向患者施用單次二次劑量。在其他實(shí)施方案中，向患者施用兩次或多次(例如，2、3、4、5、6、7、8或多次)二次劑量。同樣，在某些實(shí)施方案中，僅向患者施用單次三次劑量。在其他實(shí)施方案中，向患者施用兩次或多次(例如，2、3、4、5、
6、7、8或多次)三次劑量。
[0106]在涉及多次二次劑量的實(shí)施方案中，以與其他二次劑量相同的頻率施用每一次二次劑量。例如，可以在緊接其前的劑量之后向患者施用每一次二次劑量1-2周。類(lèi)似地，在涉及多次三次劑量的實(shí)施方案中，以與其他三次劑量相同的頻率施用每一次三次劑量。例如，可以在緊接其前的劑量之后向患者施用每一次三次劑量2-4周?；蛘?，向患者施用二次和/或三次劑量的頻率在治療方案期間可以變化。還可以由醫(yī)生在臨床檢查后根據(jù)個(gè)體患者的需要在治療期間調(diào)整施用頻率。
[0107]本文公開(kāi)的任意示例性抗ErbB3抗體可以用于前述施用方案的背景中。
[0108]抗體的診斷用途
[0109]本發(fā)明的抗-ErbB3抗體也可以用來(lái)檢測(cè)及/或測(cè)量樣本中的ErbB3，例如供診斷之用。舉例而言，抗_ErbB3抗體或其片段可以用來(lái)診斷特征在于ErbB3異常表達(dá)(例如過(guò)表達(dá)、不足表達(dá)、缺乏表達(dá)等)的病況或疾病。有關(guān)ErbB3的示例性診斷分析可包含，例如令得自于一患者的樣本與本發(fā)明之抗_ErbB3抗體接觸，其中抗-ErbB3抗體標(biāo)記有可檢測(cè)到的標(biāo)記或報(bào)導(dǎo)分子?；蛘?，未標(biāo)記的抗_ErbB3抗體可以組合本身可被檢測(cè)到標(biāo)記之二級(jí)抗體一起使用于診斷應(yīng)用?？蓹z測(cè)到的標(biāo)記或報(bào)導(dǎo)分子可以是放射性同位素，諸如3H、14C、32P、35S或125I ;熒光或化學(xué)發(fā)光部分，諸如異硫氰酸熒光素或羅丹明；或諸如堿性磷酸酶、β_半乳糖苷酶、辣根過(guò)氧化物酶，或螢光素酶的酶。可用來(lái)檢測(cè)或測(cè)量樣本中的ErbB3的特定示例性分析包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)、放射免疫測(cè)定法(RIA)以及熒光-活化細(xì)胞分選(FACS)。
[0110]依據(jù)本發(fā)明，可用于ErbB3診斷分析中的樣本包括任何可得自于患者的在正?；虿±頎顟B(tài)下的組織或體液樣本，其含有可檢測(cè)數(shù)量的ErbB3蛋白或其片段。一般來(lái)說(shuō)，測(cè)量在自健康患者(例如未罹患與異常ErbB3水平或活性有關(guān)之疾病或病況的患者)所得到之特定樣本中的ErbB3水平以在開(kāi)始時(shí)建立基線，或標(biāo)準(zhǔn)ErbB3水平。ErbB3的這個(gè)基線水平接著可以與得自于被懷疑帶有與ErbB3相關(guān)疾病或病況之個(gè)體的樣本中所測(cè)得的ErbB3水平來(lái)比對(duì)。實(shí)施例
[0111]提出下列實(shí)施例俾以將如何制造與使用本發(fā)明方法和組合物之完整揭示內(nèi)容以及說(shuō)明提供給本領(lǐng)域技術(shù)人員，且不欲限制發(fā)明人就其發(fā)明所視為的范疇。已盡力確保所用數(shù)字(例如數(shù)量、溫度等)的正確性，但可能產(chǎn)生某些實(shí)驗(yàn)誤差與偏差。除非另有指明，否則份為重量份，分子量為平均分子量，溫度為攝氏度，而壓力為大氣壓或近乎大氣壓。
[0112]實(shí)施例1.制造抗人類(lèi)ErbB3的人類(lèi)抗體
[0113]直接對(duì)VIiLOCIMMUNE18小鼠(含有編碼人類(lèi)免疫球蛋白重鏈與κ輕鏈
可變區(qū)的DNA)施用包含人類(lèi)ErbB3外域的免疫原與佐劑以刺激免疫反應(yīng)。藉由ErbB3_特異性免疫分析監(jiān)控抗體免疫反應(yīng)。當(dāng)達(dá)到所欲的免疫反應(yīng)時(shí)，收取脾臟細(xì)胞并且與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合以保留其活力并形成融合瘤細(xì)胞系。篩選并挑選雜交瘤細(xì)胞系而鑒定出會(huì)生產(chǎn)ErbB3-特異性抗體的細(xì)胞系。使用此技術(shù)獲得數(shù)種抗_ErbB3嵌合抗體(例如具有人類(lèi)可變域及小鼠恒定域的抗體)；以此方式所制造的示例性抗體命名如下:H1M1819N、H2M1821N、H2M1824N、H2M1827N、H1M1828N、H2M1829N、H2M1930N、H2M1934N、H2M1936N、H2M1937N、H2M1938N 及 H1M1940N。
[0114]如US2007/0280945A1中所述，亦在不融合至骨髓瘤細(xì)胞的情況下直接由抗原-陽(yáng)性B細(xì)胞分離抗-ErbB3抗體。使用此方法，獲得數(shù)種完整人類(lèi)抗_ErbB3抗體(亦即具有人類(lèi)可變域與人類(lèi)恒定域的抗體)；以此方式所制造的示例性抗體命名如下:H4H2084P、H4H2092P、H4H2094P、H4H2098P、H4H2102P、H4H2108P、H4H2111P、H4H2114P、H4H2132P、H4H2138P、H4H2140P、H4H2143P、H4H2146P、H4H2147P、H4H2148P、H4H2151P、H4H2153P、H4H2154P 及 H4H2290P。
[0115]依據(jù)本實(shí)施例方法所制造的示例性抗_ErbB3抗體的某些生物特性詳細(xì)描述于下面的實(shí)施例中。
[0116]實(shí)施例2.重鏈與輕鏈可變區(qū)氨基酸序列
[0117]表1顯示所選抗-ErbB3抗體的重鏈與輕鏈可變區(qū)氨基酸序列及其對(duì)應(yīng)抗體標(biāo)識(shí)符號(hào)。
[0118]表1 [0119]
【權(quán)利要求】
1.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其在25°c下ELISA中以低于30pM的IC5tl特異結(jié)合ErbB3并阻斷NRGl結(jié)合至ErbB3。
2.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異結(jié)合ErbB3，且在體外腫瘤細(xì)胞中抑制至少65%的NRG-1誘導(dǎo)的Akt磷酸化。
3.一種分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異結(jié)合ErbB3，且當(dāng)與EGFR或ErbB2的抑制劑組合時(shí)在體外減少NRG-1誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)至少60%。
4.權(quán)利要求1一 3任一項(xiàng)的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段結(jié)合ErbB3細(xì)胞外域的域III (SEQ ID NO:498的氨基酸309至499)中的表位。
5.權(quán)利要求4的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段與位于選自由SEQID NO:498 的氨基酸 345-367 ;SEQ ID NO:498 的氨基酸423-439 ;以及 SEQ ID N0:498 的氨基酸451-463組成的組中之一或多個(gè)氨基酸區(qū)段中的一或多個(gè)氨基酸相互作用。
6.權(quán)利要求5的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段與SEQID NO:498的氨基酸345-367、SEQ ID NO:498的氨基酸423-439 ;以及SEQ ID NO:498的氨基酸451-463相互作用，如由氫/氘交換所測(cè)定。
7.一種特異結(jié)合ErbB3的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段與包含具有SEQ ID NO: 306/314或322/330之HCVR/LCVR序列對(duì)的參考抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合至ErbB30
8.一種特異結(jié)合ErbB3的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段與包含具有SEQ ID NO: 306/314或322/330之HCVR/LCVR序列對(duì)的參考抗體結(jié)合至ErbB3上的相同表位。
9.一種特異結(jié)合ErbB3的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含:(a)具有選自由 SEQ ID N0s:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370、386、402、418、434、450、466 及 482 組成的組之氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR);以及(b)具有選自由SEQID N0s:10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458，474 及 490 組成的組之氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的 CDR。
10.權(quán)利要求9的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含選自由 SEQ ID N0s:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442,450/458,466/474及482/490組成的組之HCVR/LCVR氨基酸序列對(duì)的重鏈與輕鏈CDR。
11.權(quán)利要求10的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 域，各自選自由 SEQ ID NOs: 4-6-8-12-14-16; 20-22-24-28-30-32;36-38-40-44-46-48;52-54-56-60-62-64;68-70-72-76-78-80;84-86-88-92-94-96;100-102-104-108-110-112;116-118-120-124-126-128;132-134-136-140-142-144;148-150-152-156-158-160;164-166-168-172-174-176;180-182-184-188-190-192;196-198-200-204-206-208;212-214-216-220-222-224;228-230-232-236-238-240;244-246-248-252-254-256;260-262-264-268-270-272;276-278-280-284-286-288;292-294-296-300-302-304;308-310-312-316-318-320;324-326-328-332-334-336;340-342-344-348-350-352;356-358-360-364-366-368;372-374-376-380-382-384;388-390-392-396-398-40O;404-406-408-412-414-416;420-422-424-428-430-432;436-438-440-444-446-448;452-454-456-460-462-464; 468-470-472-476-478-480;和 484-486-488-492-494-496 組成的組。
12.—種特異結(jié)合ErbB3的分離的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含:(a)具有選自由 SEQ ID N0s:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、306、322、338、354、370、386、402、418、434、450、466 和 482 組成的組的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR);以及(b)具有選自由SEQ ID NOs: 10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、314、330、346、362、378、394、410、426、442、458、474和490組成的組的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)(LCVR)。
13.權(quán)利要求12的分離的抗體或抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段包含選自由 SEQ ID N0s:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442,450/458,466/474 和 482/490 組成的組的 HCVR/LCVR 氨基酸序列對(duì)。
14.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1 一 3或7 — 13中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，以及藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
15.—種抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，該方法包含將權(quán)利要求14的藥物組合物施用給患有腫瘤的受試者。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述腫瘤選自由腎瘤、胰臟瘤、乳瘤、前列腺瘤、結(jié)腸瘤、胃瘤及卵巢瘤、肺瘤與皮膚瘤組成的組。
17.—種抑制或減弱受試者中腫瘤生長(zhǎng)的方法，該方法包含對(duì)該受試者施用特異結(jié)合ErbB3的抗體或其抗原結(jié)合片段，以及第二治療劑，其中該第二治療劑為特異結(jié)合EGFR或HER2的抗體或其抗原結(jié)合片段。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述特異結(jié)合ErbB3的抗體為包含選自由SEQIDNOs:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442、450/458,466/474和482/490組成的組的HCVR/LCVR氨基酸序列對(duì)的重鏈與輕鏈⑶R的抗體或抗原結(jié)合片段。
19.權(quán)利要求17的方法，其中所述第二治療劑為特異結(jié)合EGFR的抗體或其抗原結(jié)合片段。
20.權(quán)利要求17的方法， 其中所述第二治療劑為特異結(jié)合HER2的抗體或其抗原結(jié)合片段。
21.權(quán)利要求17的方法，其中所述特異結(jié)合ErbB3的抗體包含具有SEQID NO: 306/314或 322/330 的 HCVR/LCVR 序列對(duì)。
22.權(quán)利要求14的藥物組合物，其用于抑制患有腫瘤的受試者中的腫瘤生長(zhǎng)。
23.權(quán)利要求22的藥物組合物，其中所述受試者患有選自腎瘤、胰臟瘤、乳瘤、前列腺瘤、結(jié)腸瘤、胃瘤、卵巢瘤、肺瘤與皮膚瘤的腫瘤。
24.特異結(jié)合ErbB3的抗體或其抗原結(jié)合片段，用于抑制或減弱受試者中的腫瘤生長(zhǎng)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段與第二治療劑組合施用，其中該第二治療劑為特異結(jié)合EGFR或HER2的抗體或其抗原結(jié)合片段。
25.權(quán)利要求24的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段包含選自由SEQ ID NOs:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、306/314、322/330、338/346、354/362、370/378、386/394、402/410、418/426、434/442、450/458,466/474和482/490組成的組的HCVR/LCVR氨基酸序列對(duì)的重鏈和輕鏈CDR。
26.權(quán)利要求24的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述第二治療劑為特異結(jié)合EGFR的抗體或其抗原結(jié)合片段。
27.權(quán)利要求24的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述第二治療劑為特異結(jié)合HER2的抗體或其抗原結(jié)合片段。
28.權(quán)利要求24的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段包含具有SEQID NO: 306/314 或 322/330 的 HCVR/LCVR 序列對(duì)。
【文檔編號(hào)】C07K16/32GK103917562SQ201280045274
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2012年9月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月30日
【發(fā)明者】C·戴利, D·麥克唐納, X·段 申請(qǐng)人:瑞澤恩制藥公司