使用egfr家族受體的抑制劑來治療激素難治性乳腺癌的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供通過使腫瘤細(xì)胞與ErbB3抑制劑，優(yōu)選地抗ErbB3抗體接觸來遏制激素難治性乳腺腫瘤的生長(zhǎng)的方法。本發(fā)明還提供通過向患者施用調(diào)蛋白與ErbB3或與ErbB2／ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抑制劑來治療患者的激素難治性乳腺癌的方法，所述抑制劑是抗ErbB3抗體或抗ErbB2抗體。所述治療方法可進(jìn)一步包括選擇患有激素難治性乳腺癌的患者，然后向所述患者施用所述抑制劑。所述治療方法還可包括向所述患者施用雌激素受體拮抗劑或芳香酶抑制劑，并且可進(jìn)一步包括向所述患者施用不為ErbB3抑制劑、雌激素受體拮抗劑或芳香酶抑制劑的至少一種其它抗癌劑與ErbB3抑制劑的組合。
【專利說明】使用EGFR家族受體的抑制劑來治療激素難治性乳腺癌
[0001]背景 [0002]在女性中，乳腺癌是最常見癌癥之一并且是第五大最常見的癌癥死因。由于乳腺癌的異質(zhì)性，10年無進(jìn)展存活率可根據(jù)階段和類型而有很大的不同，在98%至10%之間。不同形式的乳腺癌可具有顯著不同的生物學(xué)特性和臨床行為。因此，患者乳腺癌的歸類已經(jīng)成為確定治療方案的關(guān)鍵部分。舉例來說，除了組織學(xué)類型和等級(jí)的歸類以外，現(xiàn)在對(duì)于乳腺癌的常規(guī)評(píng)估還涉及激素受體(雌激素受體(ER)和孕酮受體(PR))的表達(dá)以及HER2 (ErbB2)的表達(dá)，因?yàn)楫?dāng)前有許多靶向激素受體或HER2的治療方式可資利用。其它癌癥例如子宮或卵巢癌可以類似的方式來表征。ER和PR均為核受體(即，其主要位于細(xì)胞核，而非細(xì)胞表面)，并且已經(jīng)開發(fā)直接或間接地靶向ER和/或PR的小分子抑制劑。HER2或2型人表皮生長(zhǎng)因子受體是通常位于細(xì)胞表面上的受體，并且已經(jīng)開發(fā)靶向HER2的抗體作為治療劑。HER2 是 EGFR 家族(還包括 HERl (EGFR)、HER3 (ErbB3)和 HER4 (ErbB4))中唯一的不能夠單獨(dú)結(jié)合活化配體的成員。因此，HER2只有在與另一個(gè)EGFR家族成員如HER3一起合并成異源二聚體受體復(fù)合物時(shí)才能充當(dāng)受體。歸類為表達(dá)雌激素受體的癌癥(雌激素受體陽性，“ER+”)可用ER拮抗劑如他莫西芬(tamoxifen)來治療。類似地，歸類為表達(dá)高水平HER2的癌癥可用抗HER2抗體如曲妥珠單抗(trastuzumab)，或用HER2活性受體酪氨酸激酶抑制劑如拉帕替尼(Iapatinib)(其還抑制EGFR酪氨酸激酶)或AG879來治療。
[0003]他莫西芬?guī)资陙硪恢庇米骺褂鵈R+乳腺癌的療法，并且現(xiàn)在代表ER+乳腺癌的一線療法的標(biāo)準(zhǔn)組成部分。他莫西芬是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(例如，雷洛昔芬(raloxifene)、托瑞米芬(toremifene)和氟維司群(fulvestrant))的類別的成員，其中他莫西芬、托瑞米芬和氟維司群是雌激素受體拮抗劑，并且雷洛昔芬在骨骼中具有促效活性，并且在乳腺癌和子宮癌中具有拮抗活性。這些拮抗藥物特異性地阻斷對(duì)于雌激素受體的激素活化并且是用于治療尚未變得激素難治的ER+乳腺癌的有效治療劑。舉例來說，他莫西芬在初始治療后在超過一半的ER+乳腺癌患者中引起好轉(zhuǎn)。長(zhǎng)期使用激素受體阻斷受到以下現(xiàn)象的限制:在長(zhǎng)期治療之后，出現(xiàn)激素難治性腫瘤特性。大多數(shù)經(jīng)過治療的腫瘤最終變得激素難治是因?yàn)槠渥兊镁哂兴鞣铱剐浴?br> [0004]因此，用阻斷雌激素合成的激素拮抗劑和其它激素調(diào)節(jié)藥物如芳香酶抑制劑(例如，依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(Ietrozole)、阿那曲唑(anastrozole)、伏氯唑(vorozole)、福美司坦(formestane)和法倔唑(fadrozole))來進(jìn)行激素阻斷可延遲ER+腫瘤的發(fā)展，但是由于經(jīng)常出現(xiàn)對(duì)于此類激素調(diào)節(jié)藥物的抗性，因此產(chǎn)生了對(duì)于有效抗御激素難治性ER+癌癥的抗癌治療劑的長(zhǎng)期需求。本公開滿足此需求并且提供其它益處。
[0005]概述
[0006]本文提供治療激素難治性乳腺癌(例如，腫瘤)，包括雌激素受體陽性和雌激素受體陰性激素難治性乳腺癌的方法，以及可用于此類方法的藥物組合物。所述方法和組合物至少部分地基于以下發(fā)現(xiàn):ErbB3抑制可遏制激素難治性乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。具體地說，施用抗ErbB3抗體被認(rèn)為可遏制激素難治性乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)調(diào)蛋白(heregulin)對(duì)ErbB2 / ErbB3異源二聚體的活化可進(jìn)而活化(通過引起雌激素受體的磷酸化)雌激素受體，這種現(xiàn)象被認(rèn)為在ER+腫瘤中出現(xiàn)對(duì)于激素調(diào)節(jié)藥物的抗性中起作用。因此，本文還提供通過抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合來抑制雌激素受體活化的方法和組合物。此類方法可結(jié)合如本文描述的一種或多種雌激素受體調(diào)節(jié)藥物的共同施用來有利地實(shí)施。
[0007]因此，提供ErbB3抑制劑用于治療激素難治性乳腺癌的用途(例如，其用于制造藥物的用途)。在另一方面，公開遏制激素難治性乳腺癌腫瘤(任選地為雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌腫瘤)生長(zhǎng)的方法，所述方法包括使腫瘤與有效量的ErbB3抑制劑接觸。在另一方面，提供遏制患者的激素難治性乳腺癌腫瘤(任選地為雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌腫瘤)生長(zhǎng)的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制劑。在另一方面，提供治療激素難治性乳腺癌腫瘤(任選地為雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌腫瘤)的患者的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制劑。在另一方面，提供治療患者的乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括:選擇患有激素難治性乳腺癌腫瘤(任選地為雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌腫瘤)的患者；以及向患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
[0008]在示例性實(shí)施方案中，ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。示例性抗ErbB3抗體為Ab#6，其包含含有分別在SEQ ID NO:1和2中闡明的氨基酸序列的V1^P/或Vl區(qū)。另一個(gè)示例性抗ErbB3抗體為如下抗體，其任選地以氨基末端至羧基末端的順序包含分別如在SEQ ID勵(lì):3-5中展示的￥11⑶Rl、2和3序列，并且任選地以氨基末端至羧基末端的順序包含分別如在SEQ ID NO:6-8中展示的' CDR1、2和3序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體具有重鏈和輕鏈，其包含分別在SEQ ID N042和43中闡明的氨基酸序列。在其它實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體為Ab#3(其包含分別如在SEQ ID NO:9和10中展示的'序列)、Ab#14(其包含分別如在SEQ ID NO: 17和18中展示的Vh和Vl序列)、Ab#17 (其包含分別如在SEQ ID NO:25和26中展示的Vh和\序列)或Ab#19 (其包含分別如在SEQ IDNO:33和34中展示的Vh和'序列)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，施用抗ErbB3抗體可抑制腫瘤的生長(zhǎng)或侵襲性或轉(zhuǎn)移。
[0009]在另一方面，本文提 供的治療方法進(jìn)一步包括向患者共同施用不為ErbB3抑制劑的至少一種其它抗癌劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括至少一種化療藥物，如選自由以下組成的組的藥物:鉬基化療藥物、紫杉烷類、酪氨酸激酶抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抑制劑、抗EGFR抗體、抗ErbB2抗體、雙特異性抗ErbB2 / ErbB3抗體和其組合。
[0010]在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括EGFR抑制劑，如抗EGFR抗體或EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制劑。優(yōu)選抗EGFR抗體包括西妥昔單抗(cetuximab)。抗EGFR抗體的其它實(shí)例包括MM_151、Sym004、馬妥珠單抗(matuzumab)、帕木單抗(panitumumab)、尼莫珠單抗(nimotuzumab)和mAb806。EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的示例性小分子抑制劑包括吉非替尼(gefitinib)。EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的適用小分子抑制劑的其它實(shí)例包括但不限于阿法替尼(afatinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、厄洛替尼(erlotinib)HCL、培利替尼(pelitinib)、PK1-166、PD-158780 和 AG1478。
[0011]在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)抑制劑。示例性VEGF抑制劑包括抗VEGF抗體,如貝伐單抗(bevacizumab)抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。雌激素受體拮抗劑的實(shí)例包括雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(afimoxifene ;4_羥基他莫西芬)、阿佐昔芬(arzoxifene)、拉索昔芬(Iasofoxone)、托瑞米芬和氟維司群。芳香酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在一個(gè)實(shí)施方案中，芳香酶抑制劑為來曲唑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抑制劑，如哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制劑、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制劑，或有絲分裂原活化激酶激酶(MEK)抑制劑。mTOR抑制劑的實(shí)例包括但不限于坦羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、西羅莫司(sirolimus),或地憐莫司(ridaforolimus)。ΡΙ3Κ^φ制劑的實(shí)例包括但不限于CALlOl和ΡΧ-866，它們當(dāng)前都在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行測(cè)試。MEK抑制劑的實(shí)例包括但不限于 XL518、C1-1040、PD035901、司美替尼(selumetinib)和 GSK1120212。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括mTOR抑制劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種抗癌劑包括依維莫司和依西美坦。在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括IGFlR抑制劑。IGFlR抑制劑的實(shí)例包括達(dá)羅珠單抗(dalotuzumab)、AMG-479、R1507、菲替木單抗(f igitumumab)、IMC-Al2, XL228、BMS-754807 和 MM-141。
[0012]在一個(gè)實(shí)施方案中，激素難治性乳腺癌為ER+。
[0013]在另一個(gè)方面，本文提供抑制腫瘤細(xì)胞中的由調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化的方法，所述方法包括I)選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者，所述患者患有惡性腫瘤，在患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)HER2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，以及2)向以這種方式選擇的患者施用可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗體，其中所述抗體以可在患者血液中產(chǎn)生一定濃度抗體的劑量來施用，所述濃度是足以在體外使MCF7細(xì)胞中的調(diào)蛋白誘導(dǎo)的雌激素受體磷酸化抑制至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%的濃度，其中所述劑量下的所述施用可有效治`療腫瘤。
[0014]所述細(xì)胞可在腫瘤中，通過活檢，所述腫瘤為ER+和HER2++或HER2+++，或每微克蛋白質(zhì)中含有至少0.02pg HRG(例如，通過ELISA)，或?yàn)镠ER2FISH陽性。抑制通過向胞外液中引入可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗體來完成。在一個(gè)實(shí)施方案中,腫瘤為惡性腫瘤。
[0015]所要治療的腫瘤的類型的非限制實(shí)例包括乳腺、卵巢、肺或皮膚(例如，黑素瘤)
的癌癥。
[0016]腫瘤可在患者體內(nèi)并且將抗體引入血流中，方法是向患者施用一定量的抗體，從而在血流中有效產(chǎn)生足夠濃度的抗體。施用可通過靜脈內(nèi)注射或輸注。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體可為抗HER3 (抗ErbB3)抗體，例如具有包含分別在SEQ ID NO:1和2中闡明的氨基酸序列的％和/或'區(qū)的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體可為包含含有分別在SEQ ID NO:42和43中闡明的氨基酸序列的Vh和/或 '區(qū)的抗ErbB3抗體。抗體可為抗HER2 (抗ErbB2)抗體，例如C6.5、C6.5雙功能抗體,或培妥珠單抗(pertuzumab)?？贵w還可為抗ErbB2 /抗ErbB3雙特異性抗體。作為scFv人血清白蛋白(HSA)偶聯(lián)物的許多雙特異性抗ErbB2 /抗ErbB3抗體描述于美國專利公布20110059076和PCT公布號(hào)W02009 / 126920中，所述公布各自公開B2B3-1和其它雙特異性抗ErbB2 /抗ErbB3抗體，其為scFv HSA偶聯(lián)物并且適用于本文提供的方法和組合物中，包括ALM、A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA_B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2 和 H3-HSA-B1D2。在一個(gè)實(shí)施方案中，雙特異性抗體包括SEQ ID NO:440其它合適雙特異性抗ErbB2 /抗ErbB3抗體在美國專利號(hào)7，332，580和7，332，585中公開并且要求保護(hù)。優(yōu)選地，施用抗體可抑制腫瘤的生長(zhǎng)或侵襲性或轉(zhuǎn)移。
[0017]因此，提供ErbB3抑制劑(例如，抗ErbB3抗體)或抗ErbB2抗體或雙特異性抗ErbB2 / ErbB3抗體(例如，其用于制造藥物的用途)，其用于抑制調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化，并且另外或替代地用于治療激素難治性乳腺癌(或另一種激素難治性癌癥如卵巢癌、子宮癌或?qū)m頸癌)或芳香酶抗性雌激素受體陽性癌癥如乳腺癌、卵巢癌、子宮癌或?qū)m頸癌得到公開。在另一個(gè)實(shí)施方案中，提供ErbB3抑制劑，例如，抗ErbB3抗體或抗ErbB2抗體或雙特異性抗ErbB2 / ErbB3抗體(例如，其用于制造藥物的用途)，其用于在與芳香酶抑制劑的組合療法中治療雌激素受體陽性癌癥(例如，乳腺癌、卵巢癌、子宮癌或?qū)m頸癌)。此類組合在用此類組合治療的癌癥中阻止或預(yù)防激素抗性的出現(xiàn)。在其它實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括共同施用雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。在其它方面，本文提供用于抑制調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化的組合物，所述抑制在選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者之后進(jìn)行，所述患者患有惡性腫瘤，在患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)ErbB2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，所述組合物包含:抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB3抗體；結(jié)合ErbB2并且抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2抗體(例如，培妥珠單抗)；或包含抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2 /抗ErbB3雙特異性抗體(例如，包含SEQ ID N0:44的抗體(在美國專利公布號(hào)20110059076中也稱為SEQ ID N0:16)。在一些實(shí)施方案中，癌癥為激素難治性雌激素受體陽性癌癥。
[0018]在一個(gè)實(shí)施方案中，這些組合物各自任選地包含雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或多種。雌激素受體拮抗劑的實(shí)例包括雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羥基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟維司群。芳香酶抑制劑的實(shí)例包括依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在示例性實(shí)施方案中，芳香酶抑制劑為來曲唑。
[0019]在另一個(gè)實(shí)施方案中，這些組合物各自任選地包含mTOR抑制劑和芳香酶抑制劑中的一種或多種。mTOR抑制劑的實(shí)例包括坦羅莫司、依維莫司、西羅莫司或地磷莫司。在示例性實(shí)施方案中，mTOR抑制劑為依維莫司。芳香酶抑制劑的實(shí)例包括依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。在示例性實(shí)施方案中，芳香酶抑制劑為依西美坦。
[0020]在另一個(gè)實(shí)施方案中，這些組合`物各自任選地包含MEK抑制劑、PI3K抑制劑和IGF-1R抑制劑中的一種或多種。
[0021]附圖簡(jiǎn)述
[0022]圖1包括溶胞物的凝膠的蛋白質(zhì)印跡的圖像，所述溶胞物是來自未處理的對(duì)照細(xì)胞(“C”)、用(“麗121”)預(yù)處理或未用MM-121預(yù)處理的細(xì)胞，所述細(xì)胞以調(diào)蛋白β 1( “HRG”)、乙胞素(betacellulin) ( “BTC”)或雌激素(“E2”)刺激。上圖展示來自用對(duì)于磷酸化ErbB3(pErbB3)具有特異性的抗體探測(cè)的印跡的結(jié)果，中圖展示用對(duì)于磷酸化(serl67和serllS)雌激素受體a (pER)具有特異性的抗體探測(cè)的印跡，并且下圖展示作為加載對(duì)照的用對(duì)于甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)具有特異性的抗體探測(cè)的印跡。
[0023]圖2為來自圖1中的對(duì)照(“Con.”)、調(diào)蛋白(“HRG”)、乙胞素(“BTC”)、調(diào)蛋白加MM-121( “HRG+MM121”)和乙胞素加MM_121( “BTC+MM121”)泳道各自中的相關(guān)(pER)條帶的密度測(cè)量結(jié)果的圖。條帶密度相對(duì)于GAPDH密度進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，并且對(duì)于如X軸所指示的對(duì)照和經(jīng)過刺激的細(xì)胞(在加以和未加以MM-121預(yù)處理的兩種情況下)來展示標(biāo)準(zhǔn)化的密度(Y軸)。HRG與BTC泳道之 間的箭頭指示HRG泳道中的pER條帶。
[0024]圖3為顯示在來曲唑抗性小鼠異種移植物模型中隨著時(shí)間的推移(以周為單位，X軸)的腫瘤體積(y軸)的圖。展示用以下物質(zhì)處理的小鼠的數(shù)據(jù):作為對(duì)照的PBS(正方形)、單獨(dú)MM-121 (“MM”，三角形)、單獨(dú)來曲唑(“Let”，倒三角形)，和MM-121與來曲唑的組合(MM+Let，菱形)。在14周標(biāo)記處，來曲唑小鼠被劃分成三組:單獨(dú)來曲唑(“Let”，倒三角形)、單獨(dú)MM_121(“Let —MM”，圓圈)和MM-121與來曲唑的組合(“Let — MM+Let”，星形)。
[0025]詳細(xì)說明
[0026]本文提供治療激素難治性乳腺癌和其它ER+癌癥，尤其過度表達(dá)HER2的那些癌癥的方法。還提供用于此治療的藥物組合物，和其用于此治療的用途。如實(shí)施例中進(jìn)一步描述，認(rèn)為ErbB3抑制劑，例如抗ErbB3抗體，或可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的其它抗體能夠遏制激素難治性乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)、侵襲性和轉(zhuǎn)移中的一種或多種過程。因此，提供遏制激素難治性乳腺癌(例如，雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌)的生長(zhǎng)侵襲性或轉(zhuǎn)移的方法和組合物以及所述方法和組合物用于進(jìn)行上述遏制的用途，以及例如以ErbB3抑制劑來治療患者的此類乳腺癌的方法和組合物。
[0027]ER+癌癥例示用于包括抗雌激素劑的治療方案的候選者。此類癌癥可包括但不限于某些乳腺、卵巢、子宮、子宮內(nèi)膜、肺、骨骼、腦、膀胱、肝臟和泌尿生殖系統(tǒng)癌癥。
[0028]癌癥可為ErbB2基因擴(kuò)增性癌癥和/或表達(dá)(HER2+)或過度表達(dá)(HER2++，HER2+++)ErbB2的癌癥。ErbB2，也稱為HER2或Neu，是經(jīng)由其細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶活性來產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)信號(hào)(例如，在配體活化時(shí))的細(xì)胞表面跨膜受體蛋白。在過量狀態(tài)下，此類信號(hào)可例如通過觸發(fā)細(xì)胞分裂來促進(jìn)腫瘤發(fā)生。ErbB2基因在許多類型的人惡性疾病中擴(kuò)增和/或過度表達(dá)，所述惡性疾病包括但不限于乳腺、卵巢、子宮內(nèi)膜、胰臟、結(jié)直腸、前列腺、唾液腺、皮膚、腎臟和肺。取決于ErbB2過度表達(dá)的水平，過度表達(dá)ErbB2的癌癥被標(biāo)示為HER2+++或HER2++，其中HER2+++指示最高水平的HER2表達(dá)。HER2+++和HER2++狀態(tài)通
常通過免疫測(cè)定如免疫組織化學(xué)(IHC)，例如，Herceptest?來確定。根據(jù)美國病理學(xué)家學(xué)會(huì)(College of American Pathologists ；CAP)和美國臨床腫瘤學(xué)會(huì)(American Societyof Clinical Oncology ；ASC0)提供的準(zhǔn)則，標(biāo)示為HER2陰性的腫瘤是IHC測(cè)試展示無染色或在〈30%的腫瘤細(xì)胞中具有膜染色的腫瘤；如果IHC測(cè)試導(dǎo)致在>30%的腫瘤細(xì)胞中有淡淡的膜染色，那么腫瘤就標(biāo)示為“HER2”+，其中僅僅一部分膜被染色；如果IHC檢測(cè)導(dǎo)致在>30%的腫瘤細(xì)胞中有微弱或中度(完全)膜染色，那么腫瘤就標(biāo)示為“HER2++”;并且如果IHC測(cè)試導(dǎo)致在>30%的腫瘤細(xì)胞中有均一、強(qiáng)烈的染色，那么腫瘤就標(biāo)示為“HER2+++”。ErbB2基因擴(kuò)增可通過例如FISH(熒光原位雜交法)來確定，其中HER2擴(kuò)增型癌細(xì)胞是超過兩個(gè)HER2基因拷貝為HER2擴(kuò)增型的那些癌細(xì)胞，并且包含HER2擴(kuò)增型癌細(xì)胞的細(xì)胞和/或腫瘤被稱為“FISH陽性”。
[0029]定義:
[0030]如本文所使用，術(shù)語“激素難治性乳腺癌”是指對(duì)于抗激素療法的作用具有抗性的乳腺癌。激素難治性乳腺癌是從一開始就對(duì)內(nèi)分泌療法具有抗性或在治療時(shí)獲得抗性的雌激素受體陽性乳腺癌。約25-50%的激素受體陽性乳腺癌從一開始就對(duì)內(nèi)分泌療法具有抗性，并且基本上所有轉(zhuǎn)移性乳腺癌發(fā)展出獲得性抗性。
[0031]如本文所使用，術(shù)語“雌激素受體陽性”(ER+)是指腫瘤細(xì)胞關(guān)于雌激素受體(ER)的得分為陽性(即，使用常規(guī)組織病理學(xué)方法)的腫瘤(例如，癌瘤)，通常為乳腺腫瘤。根據(jù)CAP和AS⑶提供的建議，如果至少1%的所測(cè)試腫瘤細(xì)胞(例如，通過免疫組織化學(xué)所測(cè)試)的得分為ER陽性，那么腫瘤為ER+。
[0032]如在本文中可互換使用的術(shù)語“ErbB3”和“HER3”是指人ErbB3蛋白質(zhì)，如美國專利號(hào)5，480, 968中所描述。
[0033]如在本文中可互換使用的術(shù)語“ErbB2”、“HER2”和“HER2受體”是指人neu致癌基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物，所述致癌基因也被稱為ErbB2致癌基因或HER2致癌基因。
[0034]如本文所使用，術(shù)語“ErbB3抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)ErbB3活性的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑，和生物劑如抗體、干擾RNA (shRNA,siRNA)、可溶性受體等。示例性ErbB3抑制劑為抗ErbB3抗體。
[0035]如本文所使用的“抗體”是由一個(gè)或多個(gè)多肽組成的蛋白質(zhì)，所述多肽包含大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段編碼的結(jié)合結(jié)構(gòu)域，其中所述蛋白質(zhì)免疫特異性地結(jié)合抗原。公認(rèn)的免疫球蛋白基因包括K、λ、α、Υ、δ、ε和μ恒定區(qū)基因，以及無數(shù)免疫球蛋白可變區(qū)基因。輕鏈分類為K或λ。重鏈分類為Y、μ、α、δ或ε ,其進(jìn)而分別定義免疫球蛋白類別IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。典型免疫球蛋白結(jié)構(gòu)單元包括四聚體，其主要由兩對(duì)相同的多肽鏈構(gòu)成，每一對(duì)具有一個(gè)“輕”鏈(約25kD)和一個(gè)“重”鏈(約50-70kD)。和“VH”分別指這些輕鏈和重鏈的可變區(qū)。
[0036]抗體包括完整免疫球蛋白以及其抗原結(jié)合片段，所述片段可通過用各種肽酶消化來產(chǎn)生，或以化學(xué)方法從頭合成或使用重組DNA表達(dá)技術(shù)合成。此類片段包括例如F (ab) 2二聚體和Fab單體。有用的抗體包括單鏈抗體(以單一多肽鏈形式存在的抗體)，例如，單鏈Fv抗體(scFv),其中Vh和\鏈接合在一起(直接或經(jīng)由肽連接子)以形成連續(xù)多肽。
[0037]“免疫特異性(immunospecific) ”或“免疫特異性地(immunospecifically) ”涉及經(jīng)由大致上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段編碼的結(jié)構(gòu)域來結(jié)合相關(guān)蛋白質(zhì)的一個(gè)或多個(gè)表位的抗體，但是其大致上不識(shí)別和結(jié)合含有抗原分子的混合群體的樣品中的其它分子。典型地，抗體以不大于50nM的Kd值免疫特異性地結(jié)合同源抗原，如通過表面等離子體共振測(cè)定或細(xì)胞結(jié)合測(cè)定所測(cè)量。此類測(cè)定的使用在本領(lǐng)域中是熟知的，并且描述于以下實(shí)施例3中。
[0038]“抗ErbB3抗體”是免疫特異性地結(jié)合ErbB3胞外結(jié)構(gòu)域的抗體，并且“抗ErbB2抗體”是免疫特異性地結(jié)合ErbB2胞外結(jié)構(gòu)域的抗體?？贵w可為分離的抗體。與ErbB3或ErB2的此結(jié)合展現(xiàn)不大于50nM的Kd值，如通過表面等離子體共振測(cè)定或細(xì)胞結(jié)合測(cè)定所測(cè)量。示例性抗ErbB3抗體抑制EGF樣配體介導(dǎo)的ErbB3磷酸化，例如抗ErbB2抗體抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合。EGF樣配體包括EGF、TGF α、乙胞素、肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子、biregulin、epigen、外調(diào)蛋白(epiregulin)和雙調(diào)蛋白(amphiregulin),其通常結(jié)合ErbBl并且誘導(dǎo)ErbBl與ErbB3的異源二聚化。
[0039] 如本文所使用的術(shù)語“雙特異性抗體”是指包含兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的蛋白質(zhì)，第一結(jié)合位點(diǎn)展現(xiàn)與第一抗原或表位的免疫特異性結(jié)合并且第二結(jié)合位點(diǎn)展現(xiàn)與不同于第一抗原或表位的第二抗原或表位的免疫特異性結(jié)合。抗ErbB3 /抗ErbB2雙特異性抗體是包含兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的抗體，一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)免疫特異性地結(jié)合ErbB3胞外結(jié)構(gòu)域并且另一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)免疫特異性地結(jié)合ErbB2胞外結(jié)構(gòu)域。
[0040]如本文所使用，術(shù)語“EGFR抑制劑”或“EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑(例如小分子酪氨酸激酶抑制劑)，和生物劑如抗體、干擾RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受體等。
[0041]如本文所使用，術(shù)語“VEGF抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)VEGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑(例如小分子酪氨酸激酶抑制劑)，和生物劑如抗體、干擾RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受體等。
[0042]如本文所使用，術(shù)語“mTOR抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑(例如小分子絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)，和生物劑如抗體、干擾RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受體等。
[0043]如本文所使用，術(shù)語“MEK抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)有絲分裂原活化蛋白質(zhì)激酶激酶(MEK)的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑(例如小分子絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)，和生物劑如抗體、干擾RNA (shRNA，siRNA)、可溶性受體
坐寸ο
[0044]如本文所使用，術(shù)語“PI3K抑制劑”意圖包括抑制、向下調(diào)節(jié)、遏制或下調(diào)磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的治療劑。此術(shù)語意圖包括化合物如小分子抑制劑(例如小分子絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)，和生物劑如抗體、干擾RNA(shRNA，siRNA)、可溶性受體等。
[0045]如在本文中可互換使用的術(shù)語“遏制”和“抑制”是指生物活性(例如，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng))的任何統(tǒng)計(jì)上顯著的降低，包括活性的完全阻斷。舉例來說，“抑制”可指生物活性降低約 10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%^； 100%。
[0046]術(shù)語“患者”包括接受預(yù)防性或治療性治療的人或其它哺乳動(dòng)物。
[0047]如本文所使用的術(shù)語“治療”是指本文描述的治療性或預(yù)防性措施?！爸委煛狈椒ú捎孟蚧颊呃缁加屑に仉y治性乳腺癌腫瘤的患者施用ErbB3抑制劑如本文描述的那些ErbB3抑制劑，以便治愈、延遲疾病或病癥或復(fù)發(fā)性疾病或病癥、降低其嚴(yán)重程度，或改善其一個(gè)或多個(gè)癥狀，或延長(zhǎng)患者的存活期超過在沒有此治療的情況下的預(yù)期存活期。
[0048]如本文所使用的術(shù)語“有效量”是指藥劑的在施用至患者時(shí)足以實(shí)現(xiàn)激素難治性乳腺癌的治療、預(yù)后或診斷的量，所述藥劑如ErbB3抑制劑，例如抗ErbB3抗體。治療有效量取決于所治療的患者和疾病狀況、患者的體重和年齡、疾病狀況的嚴(yán)重程度、施用方式等而變化，其可容易地由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來確定。施用劑量的范圍可為例如約Ing至約 10，OOOmg、約 5ng 至約 9，500mg、約 IOng 至約 9，OOOmg、約 20ng 至約 8，500mg、約 30ng 至約 7, 500mg、約 40ng 至約 7, OOOmg、約 50ng 至約 6, 500mg、約 IOOng 至約 6, OOOmg、約 200ng至約 5, 500mg、約 300ng 至約 5, OOOmg、約 400ng 至約 4, 500mg、約 500ng 至約 4, OOOmg、約Iyg 至約 3, 500mg、約 5 μ g 至約 3, OOOmg、約 10 μ g 至約 2, 600mg、約 20 μ g 至約 2, 575mg、約 30 μ g 至約 2，550mg> 約 40 μ g 至約 2，500mg> 約 50 μ g 至約 2，475mg、約 100 μ g 至約
2,450mg、約 200 μ g 至約 2, 425mg、約 300 μ g 至約 2, 000、約 400 μ g 至約 I, 175mg、約 500 μ g至約 1，150mg、約 0.5mg 至約 1，125mg、約 Img 至約 1，IOOmg> 約 1.25mg 至約 1，075mg、約
1.5mg 至約 I, 050mg、約 2.0mg 至約 I, 025mg、約 2.5mg 至約 I, OOOmg、約 3.0mg 至約 975mg、約
3.5mg 至約 950mg、約 4.0mg 至約 925mg、約 4.5mg 至約 900mg、約 5mg 至約 875mg、約 IOmg 至約 850mg、約 20mg 至約 825mg、約 30mg 至約 800mg、約 40mg 至約 775mg、約 50mg 至約 750mg、約 IOOmg 至約 725mg、約 200mg 至約 700mg、約 300mg 至約 675mg、約 400mg 至約 650mg、約500mg或約525mg至約625mg的如本文所提供的抗體或其抗原結(jié)合部分。給藥可為例如每周一次、每10天一次、每2周一次、每18天一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次或每6周一次。劑量方案可進(jìn)行調(diào)整以便提供最佳治療反應(yīng)。有效量也是使ErbB3抑制劑的任何毒性或有害影響(副作用)變得最小和/或被有利作用超過的量。對(duì)于MM-121，施用可在恰好或約6mg / kg或12mg / kg每周一次,或12mg / kg或24mg / kg兩周一次下靜脈內(nèi)施用。對(duì)于MM-111，給藥可在恰好或約每X天一次下靜脈內(nèi)給藥，其中初始負(fù)荷劑量為恰好或約y mg / kg并且后續(xù)維持劑量為恰好或約z mg / kg,其中x、y和z為:7、25和20,或10,40和30，或14,60和44，或18,90和75，或21、120和105。其它優(yōu)選給藥方案于下文描述。
[0049]術(shù)語“抗癌劑”和“抗腫瘤劑”是指用于治療惡性疾病，如癌性生長(zhǎng)的藥物。藥物療法可單獨(dú)使用，或結(jié)合其它治療如手術(shù)或輻射療法來使用。
[0050]“治療協(xié)同作用”是指如下現(xiàn)象，其中用治療劑的組合來治療患者，與以其最佳劑量使用的組合的每一種個(gè)別組`成部分所實(shí)現(xiàn)的結(jié)果相比，表現(xiàn)出治療上更好的結(jié)果(T.H.Corbett 等，1982, Cancer Treatment Reports (癌癥治療報(bào)告)，66,1187)。在這種情況下，治療上更好的結(jié)果是如下結(jié)果，其中患者a)展現(xiàn)更少的不良事件發(fā)生率，同時(shí)所收到的治療效益等于或大于在組合的個(gè)別成分各自作為單一療法以與組合中的劑量相同的劑量來施用時(shí)的治療效益，或b)不展現(xiàn)劑量限制性毒性，同時(shí)所收到的治療效益大于當(dāng)每一種成分以與在組合中作為個(gè)別組分施用時(shí)的劑量相同的劑量施用時(shí)以組合的每一種個(gè)別成分來治療的治療效益。在異種移植物模型中，在以其最大耐受劑量使用的組合的施用所獲得的腫瘤生長(zhǎng)減少大于在單獨(dú)施用成分時(shí)最佳成分的腫瘤生長(zhǎng)的減少值時(shí)，所述組合表現(xiàn)出治療協(xié)同作用，其中每一種成分以總體上不超過其個(gè)別最大耐受劑量的劑量存在。
[0051]因此，與使用抗ErbB3抗體的單一療法或在沒有抗體療法時(shí)使用化療劑的治療相t匕，在組合中，此類組合的組分對(duì)于遏制胰臟腫瘤生長(zhǎng)具有相加或超相加效應(yīng)?！跋嗉印笔侵附Y(jié)果在程度(例如，腫瘤有絲分裂指數(shù)或腫瘤生長(zhǎng)減少程度或腫瘤收縮程度或無癥狀或癥狀減少期的頻率和/或持續(xù)時(shí)間)上大于使用每一種個(gè)別組分的單一療法所獲得的最佳單獨(dú)結(jié)果，而“超相加”用于指示結(jié)果在程度上超過此類單獨(dú)結(jié)果的總和。在一個(gè)實(shí)施方案中，相加效應(yīng)測(cè)量為減緩或終止胰臟腫瘤生長(zhǎng)。相加效應(yīng)還可通過以下指標(biāo)來測(cè)量，例如胰臟腫瘤尺寸的降低、腫瘤有絲分裂指數(shù)的減少、轉(zhuǎn)移性病灶的數(shù)量隨著時(shí)間的減少、總反應(yīng)率的增加，或中值或總體存活期的增加。[0052]治療性治療的有效性可借以量化的指標(biāo)的一個(gè)非限制性實(shí)例是計(jì)算1glO細(xì)胞殺滅，其根據(jù)以下方程來確定:
[0053]1glO 細(xì)胞殺滅=T C (天)/ 3.32 X Td
[0054]其中T C代表細(xì)胞生長(zhǎng)的延遲，其為治療組⑴的腫瘤和對(duì)照組(C)的腫瘤達(dá)到預(yù)定值(例如lg，或IOmL)的以天為單位的平均時(shí)間，并且Td代表對(duì)照動(dòng)物中的腫瘤體積加倍所需要的以天為單位的時(shí)間。當(dāng)采用此指標(biāo)時(shí)，如果1glO細(xì)胞殺滅大于或等于0.7，那么產(chǎn)品被認(rèn)為具有活性，并且如果1glO細(xì)胞殺滅大于2.8，那么產(chǎn)品被認(rèn)為非常具有活性。使用此指標(biāo)，以其自己的最大耐受劑量使用的組合在1glO細(xì)胞殺滅大于單獨(dú)施用的最佳成分的1glO細(xì)胞殺滅值時(shí)展現(xiàn)治療協(xié)同作用，在所述組合中每一種成分以總體上小于或等于其最大耐受劑量的劑量存在。在示例性情況下，組合的1glO細(xì)胞殺滅超過組合的最佳成分的1glO細(xì)胞殺滅值至少0.1細(xì)胞殺滅對(duì)數(shù)、至少0.5細(xì)胞殺滅對(duì)數(shù),或至少
1.0細(xì)胞殺滅對(duì)數(shù)。各種方面和實(shí)施方案在以下小節(jié)中進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0055]1.ErbB3 抑制劑
[0056]如本文進(jìn)一步詳細(xì)描述，本文提供的方法和組合物涉及使用一種或多種ErbB3抑制劑。
[0057]在一個(gè)實(shí)施方案中，ErbB3抑制劑為抗ErbB3抗體，例如單克隆抗體。適用抗ErbB3抗體(或從其中得到的VH / VL結(jié)構(gòu)域)可使用本領(lǐng)域中熟知的方法來制得。或者，可使用業(yè)內(nèi)公認(rèn)的抗ErbB3抗體。舉例來說，可使用U.S.7，846，440中描述的Ab#3、Ab#14、Ab#17、Ab#19。也可使用與這些抗體中的任何一個(gè)來競(jìng)爭(zhēng)與ErbB3的結(jié)合的抗體?？墒褂玫钠渌臉I(yè)內(nèi)公認(rèn)的抗ErbB3抗體包括在US7, 285，649、US20200310557、US20100255010中公開的那些抗體，以及抗體IB4C3和2DlD12(U3Pharma Ag)，這兩種抗體都描述于例如US20040197332中并且由雜交瘤細(xì)胞系DSM ACC2527或DSM ACC2517 (保藏于DSMZ)產(chǎn)生；被稱為AMG888的抗ErbB3抗體(U3-1287_U3Pharma Ag和Amgen)，其描述于美國專利號(hào)7，705，130中；以及單克隆抗`體8B8( ATCC? HB-12070?)，其描述于US5，968，511中，以及被稱為AV-203的抗ErbB3抗體(Aveo Pharmaceuticals),其描述于美國專利公布號(hào)20110256154中。其它適用抗ErbB3抗體在雙特異性抗體的情況下公開于本領(lǐng)域中(參見例如 WO / 2009126920 中的 B2B3-1 或 B2B3-2 和描述于 US7, 846，440、US20090291085、US20100056761和US20100266584中的那些抗體。示例性抗ErbB3單克隆抗體包括MM-121，其為當(dāng)前正進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)的完全人抗ErbB3抗體。MM-121進(jìn)一步描述于PCT公布號(hào)W02008 / 100624和美國專利號(hào)7，846，440中，并且包含分別如在SEQ ID NO:1和2中展示的Vh和八序列。MM-121在US7，846，440中被稱為“Ab#6”?；蛘?，抗ErbB3單克隆抗體是與MM-121競(jìng)爭(zhēng)與ErbB3的結(jié)合的抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體是包含MM-121的Vi^PVlCDR序列的抗體，所述序列分別展示于SEQ ID NO:3-5 (VH CDR1、2、3)和6_8 (Vl CDR1、
2、3)中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體具有包含分別在SEQID N042和43中闡明的氨基酸序列的重鏈和輕鏈。抗ErbB3抗體的其它實(shí)例包括Ab#3、Ab#14、Ab#17和Ab#19，其還進(jìn)一步描述于W02008 / 100624并且具有如分別在SEQ ID NO:9和10、17和18、25和26以及33和34中展示的Vh和'序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體是包含Ab#3的Vh和\⑶R序列(分別展示于SEQ ID NO:11-13和14-18中)的抗體或包含Ab#14的Vh和Vl CDR序列(分別展示于SEQ ID NO:19-21和22-24中)的抗體或包含Ab#17的Vh和\ CDR序列(分別展示于SEQ ID NO:27-29和30-32中)的抗體或包含Ab#19的Vh和Vl CDR序列(分別展示于SEQ ID NO:35-37和38-40中)的抗體。
[0058]或者，抗ErbB3抗體是結(jié)合包含SEQ ID NO:41的殘基92-104的人ErbB3的表位并且特征在于抑制表達(dá)ErbB3的癌細(xì)胞的增殖的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。癌細(xì)胞可為MALME-3M細(xì)胞、AdrR細(xì)胞或ACHN細(xì)胞并且增殖可相對(duì)于對(duì)照減少至少10%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，此分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分結(jié)合包含SEQ ID NO:41的殘基92-104和129的表位。
[0059]在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗ErbB3抗體可包含兩種或更多種抗ErbB3抗體的混合物或混配物，其中每一種抗體各自結(jié)合ErbB3上的不同表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，混合物或混配物包含三種抗ErbB3抗體，其中每一種抗體各自結(jié)合ErbB3上的不同表位。
[0060]在另一個(gè)實(shí)施方案中，ErbB3抑制劑包含抑制ErbB3的表達(dá)或活性的核酸分子，如RNA分子。ErbB3的RNA拮抗劑已在本領(lǐng)域中描述(參見例如美國專利申請(qǐng)公布號(hào)20080318894)。此外，對(duì)于ErbB3具有特異性的干擾RNA，如特異性地抑制ErbB3的表達(dá)和/或活性的shRNA或siRNA已在本領(lǐng)域中描述。
[0061]在另一個(gè)實(shí)施方案中，ErbB3抑制劑包含可溶性形式的ErbB3，其抑制經(jīng)由ErbB3途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此類可溶性ErbB3分子已在本領(lǐng)域中描述(參見例如分別授予Maihle等的美國專利號(hào)7, 390，632、美國專利號(hào)7，638，303和美國專利號(hào)7，638，302，和Zhou的美國專利號(hào)7,919,098)。
[0062]11.杭 ErbB2 杭體
[0063]本文提供的方法和組合物可涉及使用一種或多種抗ErbB2抗體，其可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的 結(jié)合。合適抗ErbB2抗體包括描述于美國專利號(hào)5，977，322中的C6.5(和其許多衍生物)，以及如描述于美國專利號(hào)6，054，297中的曲妥珠單抗，或如描述于美國專利號(hào)6，949，245中的培妥珠單抗。
[0064]II1.雙特異性抗體
[0065]本文提供的方法和組合物可涉及使用一種或多種雙特異性抗體，優(yōu)選為可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的雙特異性抗體。此類雙特異性抗體包括如描述于美國專利7，332，580中的ALM，以及如描述于美國專利申請(qǐng)公布號(hào)20110059076和PCT公布號(hào) W02009 / 126920 中的 A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA-B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2和H3-HSA-B1D2，如其中所描述，每一種雙特異性抗體各自具有變體形式，如包含mHSA的那些變體形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，雙特異性抗體包括SEQID NO:44o
[0066]IV.方法
[0067]在一方面，提供ErbB3抑制劑用于制造供治療激素難治性乳腺癌的藥物的用途，在某些實(shí)施方案中乳腺癌是雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌。
[0068]在另一方面，提供遏制激素難治性乳腺癌細(xì)胞(任選地為ER+激素難治性乳腺癌細(xì)胞)生長(zhǎng)的方法，所述方法包括使細(xì)胞與有效量的ErbB3抑制劑接觸。
[0069]在另一方面，提供遏制患者的激素難治性乳腺癌腫瘤(任選地為ER+激素難治性乳腺癌腫瘤)生長(zhǎng)的方法，所述方法包括向患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
[0070]在另一個(gè)方面，提供治療患者的乳腺癌腫瘤(任選地為雌激素受體陽性激素難治性乳腺癌腫瘤)的方法，所述方法包括:
[0071]選擇患有激素難治性乳腺癌腫瘤的患者；以及
[0072]向患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
[0073]在另一方面，患有激素難治性乳腺癌腫瘤的患者是進(jìn)一步使用申請(qǐng)中的國際申請(qǐng)PCT / US2009 / 054051中公開的選擇方法選擇出的患者。
[0074]將要用ErbB3抑制劑治療的激素難治性乳腺癌可共表達(dá)ErbBl (EGFR)、ErbB3和調(diào)蛋白(HRG)。EGFR和HRG的表達(dá)可通過RT-PCR或使用抗EGFR抗體、抗ErbB3抗體或抗HRG抗體通過標(biāo)準(zhǔn)免疫測(cè)定技術(shù)如ELISA測(cè)定、對(duì)經(jīng)過福爾馬林固定、以石蠟包埋的組織(例如常規(guī)處理用于組織學(xué)評(píng)估的乳腺癌組織)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色來識(shí)別。根據(jù)本文中的公開用于治療的優(yōu)選腫瘤的其它特性闡明于申請(qǐng)中的美國專利公布號(hào)20110027291中，所述公布要求PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT / US2009 / 054051的優(yōu)先權(quán)。
[0075]在一個(gè)實(shí)施方案中，施用至患者的ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。示例性抗ErbB3抗體是MM-121，其包含分別如在SEQ ID NO:1和2中展示的Vh和'序列，或包含分別如在SEQ ID NO:3-5中展示的Vh CDR1、2和3序列和分別如在SEQ ID NO:6_8中展示的\CDR1、2和3序列(即，MM-121的Vh和\⑶R)的抗體。其它非限制性示例性抗ErbB3抗體和其它形式的ErbB3抑制劑詳細(xì)描述于以上小節(jié)I中。
[0076]ErbB3抑制劑可通過適合于將抑制劑有效遞送至患者的任何途徑來施用至患者。舉例來說，許多小分子抑制劑適合于口服施用。抗體和其它生物試劑通常腸胃外施用，例如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)施用。適用于本文提供的方法中的各種施用途徑、劑量和藥物制劑在下文進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0077]在其它方面，本文所`述的方法包括抑制(例如，至少部分阻斷)調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化磷酸化的方法。這些方法涉及使用一種或多種可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合從而抑制此磷酸化的抗體。在某些實(shí)施方案中，此類方法進(jìn)一步包括任選地共同施用激素調(diào)節(jié)藥物，包括雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑。
[0078]V.藥物纟目合物
[0079]在另一方面，提供可用于本文公開的方法中的藥物組合物，即，用于治療激素難治性乳腺癌腫瘤的藥物組合物。
[0080]在一個(gè)實(shí)施方案中，用于治療激素難治性乳腺癌的藥物組合物包含ErbB3抑制劑和藥物載劑。ErbB3抑制劑可與藥物載劑一起配制成藥物組合物。另外，藥物組合物可包括例如使用組合物來治療患者的激素難治性乳腺癌腫瘤的說明書。
[0081]在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物中的ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體，例如，MM-121或如下抗體，所述抗體包含的MM-121的乂11和' CDR以與其存在于MM-121中的順序相同的相對(duì)順序定位于抗體中以便提供ErbB3的免疫特異性結(jié)合。其它非限制性示例性抗ErbB3抗體和其它形式的ErbB3抑制劑詳細(xì)描述于以上小節(jié)I中。
[0082]如本文所使用，“藥學(xué)上可接受的載劑”包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲和吸收延遲劑、緩沖劑，和生理上相容的其它賦形劑。優(yōu)選地，載劑適合于腸胃外、口服或局部體表施用。取決于施用途徑，活性化合物例如小分子或生物試劑可以保護(hù)化合物免受酸和可使化合物失效的其它自然條件的作用的材料包覆。
[0083]藥學(xué)上可接受的載劑包括無菌水性溶液或分散液和用于臨時(shí)制備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末，以及用于制備片劑、丸劑、膠囊等的常規(guī)賦形劑。使用這些介質(zhì)和試劑用于配制藥學(xué)活性物質(zhì)在本領(lǐng)域中是已知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容，否則涵蓋其在本文提供的藥物組合物中的使用。輔助活性化合物也可并入組合物中。
[0084]藥學(xué)上可接受的載劑可包括藥學(xué)上可接受的抗氧化劑。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括:(I)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸鹽、丁羥茴醚(BHA)、丁羥甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α -生育酚等；和⑶金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
[0085]可用于本文提供的藥物組合物中的合適水性和非水性載劑的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，和其合適混合物，和可注射有機(jī)酯，如油酸乙酯。在需要時(shí)，適當(dāng)流動(dòng)性可例如通過使用包衣材料如卵磷脂、在分散液的情況下通過維持所需粒度，以及通過使用表面活性劑來維持。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲劑，所述等滲劑例如糖、多元醇如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉?？勺⑸浣M合物的延長(zhǎng)吸收可通過在組合物中納入延遲吸收的試劑來達(dá)成，所述試劑例如單硬脂酸鹽和明膠。
[0086]這些組合物還可含有功能性賦形劑如防腐劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑和分散劑。
[0087]治療組合物通常在制造和存儲(chǔ)條件下必須為無菌、無熱原質(zhì)和穩(wěn)定的。組合物可配制為溶液、微乳液、脂質(zhì)體，或適合于高藥物濃度的其它有序結(jié)構(gòu)。
[0088]可制備無菌可注射溶液，方法是將所需量的活性化合物與以上列舉的成分中的一種或成分的組合一起并入合適溶劑中，需要時(shí)隨后例如通過微細(xì)過濾來滅菌?？傮w上，分散液通過將活性化合物并入無菌媒劑中來制備，所述媒劑含有基本分散介質(zhì)和來自以上列舉的那些成分的所需其它成分。在用于制備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，優(yōu)選制備方法是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，從而產(chǎn)生活性成分加上來自其先前無菌過濾溶液的任何其它所需成分的粉末?；钚詣┛稍跓o菌條件下與其它藥學(xué)上可接受的載劑，以及與可能需要的任何防腐劑、緩沖劑或推進(jìn)劑`一起混合。
[0089]可通過以下兩種方法來確保不存在微生物:上述滅菌程序，以及納入各種抗細(xì)菌和抗真菌劑，例如對(duì)羥苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚山梨酸等。也可能需要在組合物中納入等滲劑，如糖、氯化鈉等。另外，可注射藥物形式的延長(zhǎng)吸收可通過納入延遲吸收的試劑如單硬脂酸鋁和明膠來達(dá)成。
[0090]包含ErbB3抑制劑的藥物組合物可單獨(dú)施用或以組合療法施用。舉例來說，組合療法可包括本文提供的包含ErbB3抑制劑和至少一種或多種其它治療劑的組合物，所述一種或多種其它治療劑如在本領(lǐng)域中已知的一種或多種化療劑，其在以下小節(jié)IV中進(jìn)一步詳細(xì)討論。藥物組合物還可結(jié)合輻射療法和/或手術(shù)來施用。
[0091]對(duì)劑量方案進(jìn)行調(diào)整以便提供最佳所需反應(yīng)(例如，治療反應(yīng))。舉例來說，可施用單次快速注射，可隨著時(shí)間的推移施用若干分次劑量，或如治療情況的緊急性所指示，可按比例減少或增加劑量。
[0092]抗體施用的示例性劑量范圍包括:IO-1OOOmg (抗體)/ kg (患者體重)、10_800mg / kg、10_600mg / kg、10_400mg / kg、10_200mg / kg、30_1000mg / kg、30-800mg / kg、30_600mg / kg、30_400mg / kg、30_200mg / kg、50_1000mg / kg、50_800mg / kg、50_600mg / kg、50_400mg / kg、50_200mg / kg、IOO-1OOOmg / kg、100_900mg / kg、100_800mg / kg、100_700mg / kg、100_600mg / kg、100_500mg / kg、100-400mg / kg、100-300mg / kg和100_200mg / kg。示例性劑量時(shí)程包括每三天一次、每五天一次、每七天一次(即每周一次)、每10天一次、每14天一次(即每?jī)芍芤淮?、每21天一次(即每三周一次)、每28天一次(即每四周一次)和每月一次。
[0093]為了便于施用和劑量均一性，宜將腸胃外組合物配制成單位劑型。如本文所使用的單位劑型是指適合作為單一劑量用于所要治療的患者的物理離散單元；每個(gè)單元含有經(jīng)過計(jì)算結(jié)合任何所需藥物載劑可產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性劑。單元?jiǎng)┬偷囊?guī)格由以下因素決定并且直接取決于這些因素:(a)活性化合物的獨(dú)特特性和所要達(dá)成的特定治療效果，和(b)在混配此種活性化合物用于治療個(gè)體敏感性的領(lǐng)域中固有的限制。
[0094]本文公開的藥物組合物中的活性成分的實(shí)際劑量水平可改變以便獲得對(duì)于特定患者、組合物以及施用模式可有效達(dá)成所需治療反應(yīng)，而對(duì)患者無毒的活性成分的量。如本文在施用的情況下所使用的“腸胃外”是指除腸內(nèi)和局部體表施用以外的施用模式，通常通過注射,并且包括而不限于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心臟內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、包膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜上和胸骨內(nèi)注射和輸注。
[0095]如本文所使用的短語“腸胃外施用”是指除腸內(nèi)(即，經(jīng)由消化道)和局部體表施用以外的施用模式，通常通過注射或輸注，并且包括而不限于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心臟內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、包膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜上和胸骨內(nèi)注射和輸注。靜脈內(nèi)注射和輸注經(jīng)常(但是并非獨(dú)占地)用于抗體施用。
[0096]當(dāng)本文提供的試劑作為藥物施用至人或動(dòng)物時(shí)，其可單獨(dú)給予或以藥物組合物形式給予，所述藥物組合物含有例如0.001至90% (更優(yōu)選地0.005至70%，如0.01至30%)的活性成分與藥學(xué)上可接受的載劑的組合。
[0097]V1.組合療法
[0098]在某些實(shí)施方案中，本文提供的用于遏制激素難治性乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)或治療患有激素難治性乳腺腫瘤的患者的方法和用途或者可包括施用ErbB3抑制劑和不為ErbB3抑制劑的至少一種其它抗癌劑。
[0099]在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括至少一種化療藥物。此類化療藥物的非限制實(shí)例包括鉬基化療藥物(例如，順鉬、卡波鉬)、紫杉烷類(例如，紫杉醇(Taxol?)、多西紫杉醇(Taxotere?)、EndoTAG-l?(囊封于帶正電荷的基于脂質(zhì)的復(fù)合物中的紫杉醇制劑；MediGene?)、Abraxane? (結(jié)合至白蛋白的紫杉醇的制劑)、酪氨酸激酶抑制劑(例如，伊馬替尼(imatinib) / Gleevec?、舒尼替尼(sunitinib) / Sutent?、達(dá)沙替尼(dasatinib) / Sprycel? )，和其組合。
[0100]在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括EGFR抑制劑，如抗EGFR抗體或EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制劑。示例性抗EGFR抗體是西妥昔單抗(Erbitux?，ImClone Systems)?？笶GFR抗體的其它實(shí)例包括MM-151 (進(jìn)一步描述于2011年7月5日提交的Bukhalid等的共申請(qǐng)中的共同讓與的美國專利申請(qǐng)序列號(hào)61 / 504，633中)、Sym004(Symphogen, Pederson 等，Cancer Research(癌癥研究)2010 年 I 月 15 日 70 ;588，還參見美國專利序列號(hào)7，887，805)、馬妥珠單抗(EMD72000)、帕木單抗(Vectibix? ；Amgen)、尼莫珠單抗(TheraCM?)和mAb806。EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的示例性小分子抑制劑是吉非替尼(Iressa?),其可從AstraZeneca和Teva商購獲得。EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制
劑的其它實(shí)例包括厄洛替尼HCL(OSl-774 ；Tarceva?; OSI Pharma)，拉帕替尼(Tykerb?,Glaxo SmithKl ine),卡奈替尼(卡奈替尼鹽酸鹽，Pfizer),培利替尼(Pfizer)；PK1-166 (Novartis) ；PD158780 ;阿法替尼(Tomtovok?, Boehringer Ingleheim)；和AG1478(4-(3-氯苯氨基)_6，7- 二甲氧基喹唑啉)。
[0101]在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括VEGF抑制劑。示例性VEGF抑制劑包括抗VEGF抗體,如貝伐單抗(Avastatin?., Genentech)。
[0102]在另一個(gè)實(shí)施方案中，至少一種其它抗癌劑包括IGFlR抑制劑，如抗EGFR抗體或EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制劑?？笽GFlR抑制劑的實(shí)例包括達(dá)羅珠單抗(Merck，也稱為 MK-0646)、AMG-479 (Amgen)、R1507 (Roche)、菲替木單抗(Pfizer)、IMC-A12 (Imclone /Lilly)和MM-141，其為一種雙特異性ErbB3 / IGFlR抑制劑(進(jìn)一步描述于2011年11月10日提交的Lugovskoy等的共申請(qǐng)中的共同讓與的美國專利申請(qǐng)序列號(hào)61 / 558,192中)ο小分子IGFlR抑制劑的實(shí)例包括XL228 (Exelixis)和BMS-754807 (BMS)。
實(shí)施例
[0103]實(shí)施例1:用MM-121治療ER+激素難治性乳腺腫瘤
[0104]使用MCF7人乳腺癌細(xì)胞的他莫西芬抗性變體的異種移植物對(duì)用MM-121治療帶有ER+激素難治性乳腺腫瘤的小鼠的抗腫瘤功效和耐受性進(jìn)行分析。他莫西芬抗性人乳腺癌細(xì)胞系TAMR-1、TAMR-7和TAMR-8細(xì)胞是從A.E.Lykkesfeldt的實(shí)驗(yàn)室(丹麥癌癥協(xié)會(huì)癌癥生物學(xué)部腫瘤內(nèi)分泌學(xué)部(Department of Tumor Endocrinology, Division for CancerBiology, Danish Cancer Society.Strandboulevarden49, DK_2100Copenhagen0,丹麥)獲得。這些細(xì)胞作為異種移植物生長(zhǎng)于從Charles River Laboratories International獲得的雌性無胸腺nu+ / nu+裸小鼠體內(nèi)。從亞利桑那州的圖森市(Tucson, AZ)的亞利桑那癌癥中心(Arizona Cancer Center)繁殖群獲得的 SCID 小鼠(C.B.-17 / IcrACCscid)也為
合適的。將小鼠在設(shè)置于有空調(diào)的房間中的Tecniplast?個(gè)別通風(fēng)聚碳酸酯(Makrolon?)
籠(IVC)中豢養(yǎng)并且可自由獲取食物和酸化水。小鼠在全身麻醉狀態(tài)下被皮下注射~(約)IO7個(gè)TAMR-1、TAMR-7或TAMR-8細(xì)胞至側(cè)腹或注射至乳腺脂肪墊中。
[0105]為了研究單一療法的抗腫瘤功效，對(duì)帶有腫瘤的小鼠(即，在注射細(xì)胞之后，腫瘤生長(zhǎng)14天之后)每三天通過IP注射給予每只小鼠600 μ g(MM_121呈PBS中的6mg / mL溶液形式)的MM-121或媒劑對(duì)照(100 μ L)。對(duì)照小鼠僅接收PBS媒劑。功效通過將抗體治療小鼠與媒劑對(duì)照小鼠之間的腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)行比較來確定并且表達(dá)為中值相對(duì)腫瘤體積的實(shí)驗(yàn)與對(duì)照比(Τ / C值)。低于50%的最小T / C值是將治療評(píng)定為有效的先決條件。對(duì)照和實(shí)驗(yàn)組各自含有10只分別帶有一個(gè)腫瘤的小鼠。為了獲得30只帶有類似尺寸的腫瘤的小鼠以供隨機(jī)化，每種腫瘤單側(cè)植入40只小鼠。
[0106]將小鼠隨機(jī)化并且當(dāng)足夠數(shù)量的個(gè)別腫瘤已生長(zhǎng)至約200mm3的體積時(shí)開始治療。通過數(shù)字卡尺測(cè)量來測(cè)量腫瘤(L X W)并且使用公式π / 6 (W2x L)來計(jì)算腫瘤體積。第一次劑量在第O天(隨機(jī)化之日)或一天后施用。
[0107]施用最終劑量之后約24小時(shí)，將所有小鼠放血以制備血清；另外，從同一小鼠收集腫瘤進(jìn)行快速冷凍和石蠟包埋(FFPE)(各自I / 2腫瘤)。
[0108]根據(jù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)規(guī)則，如果腫瘤體積超過1800mm3 (每只小鼠一個(gè)腫瘤)，就將小鼠處死。對(duì)小鼠進(jìn)行監(jiān)測(cè)和給藥直到其腫瘤已生長(zhǎng)至此尺寸為止但是不超過60天。其后，將其處死以便收集樣品。 [0109]在研究結(jié)束時(shí)，施用最終劑量之后約24小時(shí)，將研究的所有小鼠進(jìn)行舌下放血以獲得最大量的血液用于制備血清。將血清分裝于2個(gè)試管中，每個(gè)試管中約250 μ L。
[0110]另外，不延遲立即切除所有小鼠的腫瘤用于在液氮中快速冷凍(I / 2腫瘤，提供用于存儲(chǔ)樣品的C0VARIS袋)和固定于10%緩沖福爾馬林中〈24小時(shí)，隨后脫水并且進(jìn)行石蠟包埋(I / 2腫瘤)。
[0111]每周兩次測(cè)量動(dòng)物體重和腫瘤直徑(W和L)并且使用公式π / 6 (W2XL)計(jì)算腫瘤體積。將腫瘤生長(zhǎng)曲線作圖。計(jì)算持續(xù)2個(gè)和4個(gè)倍增時(shí)間的腫瘤抑制和絕對(duì)生長(zhǎng)延遲。
[0112]大致上如所描述執(zhí)行的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明ΜΜ-121治療抑制或停止腫瘤生長(zhǎng)，并且在一些情況下減小腫瘤尺寸。
[0113]實(shí)施例2:ΜΜ~121在體外抑制HRG誘導(dǎo)的ER磷酸化
[0114]將MCF7細(xì)胞不進(jìn)行處理或以ΜΜ-121 (250ηΜ)預(yù)處理I小時(shí)。然后，將細(xì)胞以調(diào)蛋白 β I (EGF 結(jié)構(gòu)域，IOnM R&D systems)、乙胞素(20nM, R&D systems)或雌激素(β 雌二醇-lOOnM，Sigma)刺激30分鐘，或保持未刺激。利用探測(cè)pER和pErbB3的蛋白質(zhì)印跡對(duì)細(xì)胞的溶胞物進(jìn)行分析。
[0115]為了證明MM-121減少調(diào)蛋白誘導(dǎo)的雌激素受體活化的能力，在ER+、PR+、ErbB2+癌細(xì)胞系MCF7中使用如上所述的方法或其平常變化形式來對(duì)處理進(jìn)行測(cè)試。將細(xì)胞不進(jìn)行處理或以MM-121預(yù)處理。未處理和預(yù)處理的細(xì)胞以調(diào)蛋白、乙胞素或雌激素刺激。通過蛋白質(zhì)印跡來分析細(xì)胞溶胞物中ErbB3和雌激素受體的磷酸化形式。
[0116]如圖1 (蛋白質(zhì)印跡)和圖2(圖1中的數(shù)據(jù)的密度測(cè)量)中所示，未處理的經(jīng)過調(diào)蛋白刺激的細(xì)胞，并且在較小程度上(約2 / 3更小)未處理的經(jīng)過乙胞素刺激的細(xì)胞顯示雌激素受體和ErbB3兩者都被磷酸化。相比之下，以MM-121預(yù)處理的經(jīng)過調(diào)蛋白刺激的細(xì)胞顯示pErbB3和pER的量實(shí)質(zhì)性(約2 / 3)減少。結(jié)果證明調(diào)蛋白誘導(dǎo)的雌激素受體活化由ErbB3介導(dǎo)并且MM-121可抑制此雌激素受體活化模式。意外地，與雌激素相比，調(diào)蛋白刺激誘導(dǎo)顯著(至少四倍)更高水平的ER磷酸化。
[0117]實(shí)施例3:通過與MM-121共同施用來恢復(fù)敏感性和/或預(yù)防對(duì)芳香酶抑制劑的抗性
[0118]患者可良好耐受芳香酶抑制劑(Al)治療，并且治療在相對(duì)較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)為有效的。然而，最初對(duì)Al治療有反應(yīng)的患者可變得對(duì)于藥物具有抗性。為了研究Al抗性的機(jī)制，開發(fā)對(duì)應(yīng)于ER+停經(jīng)后乳腺癌的異種移植物模型。用于此瘤內(nèi)芳香酶異種移植物模型的腫瘤是從如下MCF7人乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)而來，即所述細(xì)胞已經(jīng)用人胎盤芳香酶基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染以便在卵巢切除的無胸腺小鼠中提供雌激素產(chǎn)生的非卵巢來源(MCF-7CA，參見例如Brodie等，Clinical Cancer Research(臨床癌癥研究)884s 第 11 卷，884s_888s, 2005 年 I 月 15日(增刊))。MCF7-CA細(xì)胞產(chǎn)生足夠雌激素(通過使所注射的雄烯二酮發(fā)生芳香化)以便刺激其增殖和腫瘤形成。這是患有表達(dá)芳香酶并且不含促性腺激素反饋調(diào)節(jié)的腫瘤的停經(jīng)后乳腺癌患者的模型。
[0119]MCF-7CA腫瘤:將MCF-7CA細(xì)胞在含有5 %胎牛血清和新霉素的伊格爾氏最低基本必需培養(yǎng)基(Eagle’s minimum essential medium)中培養(yǎng)。培養(yǎng)基每周更換兩次。將亞匯合的MCF-7CA細(xì)胞刮到漢克氏溶液(HanV s solution)中并且在4°C下以1，OOOrpm離心2分鐘。然后將細(xì)胞重新懸浮于MatrigelTM(10mg / ml)中以制備2_5xl07個(gè)細(xì)胞/毫升的細(xì)胞懸浮液。將4-6周齡的卵巢切除的雌性BALB / c無胸腺小鼠(20-22g體重)在受控光照和濕度條件下豢養(yǎng)于無病原體環(huán)境中并且自由取用食物和水。每只小鼠皮下(s.c.)接種0.1ml細(xì)胞懸浮液。然后，對(duì)動(dòng)物每日s.c.注射每只小鼠0.1mg雄烯二酮。通過每周用卡尺測(cè)量腫瘤來確定生長(zhǎng)速率。根據(jù)球體公式(4 / 3rl2.r2)計(jì)算腫瘤體積。當(dāng)腫瘤達(dá)到可測(cè)量尺寸時(shí)，將小鼠分組，每組中10只具有相等腫瘤體積(300mm3)的動(dòng)物。將小鼠用
0.3%羥丙基纖維素(HPC)中的0.1ml化合物治療6周。
[0120]來曲啤杭件樽型中的來曲啤與來曲啤+MMl 21
[0121]為了證明MM-121與來曲唑的組合在來曲唑抗性異種移植物模型中的功效，如上所述制備帶有腫瘤的小鼠并且隨機(jī)化至各自具有10只小鼠的3個(gè)組和具有30只小鼠的一個(gè)組，每個(gè)組包含的小鼠具有類似的腫瘤尺寸分布。對(duì)于預(yù)期出現(xiàn)抗性的時(shí)期期間的最初治療，一個(gè)組用PBS進(jìn)行Q3D、1.p.治療作為對(duì)照；一個(gè)組用單獨(dú)MM-121進(jìn)行治療(每3天每只小鼠1.P.施用.2ml PBS中的600yg麗121) ;30只小鼠組用單獨(dú)來曲唑進(jìn)行治療(10微克/小鼠/天)；并且最后一個(gè)組用來曲唑和MM-121兩者進(jìn)行治療。每周測(cè)量腫瘤并且計(jì)算腫瘤體積。如果腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)至大于約1400-1700mm3的體積，那么就將小鼠處死。當(dāng)用單獨(dú)來曲唑治療的小鼠組中的腫瘤變得具有抗性并且體積超過約600_3時(shí)，將所述組細(xì)分成各自具有十只小鼠的3個(gè)組。為了研究MM-121組合療法對(duì)于這些抗性腫瘤的作用，這三個(gè)組的治療如下繼續(xù)進(jìn)行:一個(gè)組繼續(xù)接受單獨(dú)來曲唑(10微克/小鼠/天)，一個(gè)組停止接受每日來曲唑并且以單獨(dú)ΜΜ_121(600μ g Q3D，1.p.)治療，并且一個(gè)組以來曲唑(10微克/小鼠/天)與MM-121 (600 μ g Q3D，1.p.)的組合進(jìn)行治療。
[0122]結(jié)果展示于圖3中。如其中指示，MM-121治療(三角形)和僅PBS對(duì)照(正方形)小鼠體內(nèi)的腫瘤在5周過程中快速生長(zhǎng)，其為這些組的最后測(cè)量。在接受單獨(dú)來曲唑治療的三個(gè)組(顛倒箭頭)和接受MM-121與來曲唑的組合治療的組(菱形)中，腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)展較慢。
[0123]接受來曲唑治療的小鼠組中的來曲唑抗性定義為其中腫瘤體積增加至600_3的點(diǎn)。在接受單獨(dú)來曲唑的組中在約14周每日來曲唑治療之后，達(dá)到這一腫瘤體積。雖然接受單獨(dú)來曲唑或單獨(dú)MM-121的小鼠中的腫瘤的體積隨著時(shí)間的推移而繼續(xù)增加，但是接受MM-121與來曲唑的組合的小鼠的腫瘤降低至完全低于600_3抗性閾值并且在研究的整個(gè)其余部分(19周)中保持減少的體積，因而證明組合治療克服所獲得的來曲唑抗性。
[0124]與接受單獨(dú)來曲唑的小鼠相比，從治療一開始就接受來曲唑和MM-121兩者的組(菱形)未發(fā)展來曲唑抗性腫瘤(即腫瘤從未達(dá)到600_3的體積)，由此證明用組合來治療可防止出現(xiàn)來曲唑抗性。
[0125]實(shí)施例4:與mTOR抑制劑和芳香酶抑制劑一起共同施用MM-121
[0126]為了證明是否在治療ER+乳腺癌方面，MM-121+依西美坦+依維莫司的三重組合比單獨(dú)依西美坦或依維莫司與依西美坦的組合更有效，向患者給予單獨(dú)MM-121、單獨(dú)依西美坦、單獨(dú)依維莫司、依維莫司與依西美坦的組合，以及MM-121、依維莫司與依西美坦的組合。MM-121例如在第I周以40mg / kg的負(fù)荷劑量來給予，隨后每周一次以靜脈內(nèi)輸注形式在60分鐘內(nèi)施用20mg / kg的每周維持劑量；依西美坦以每天一次口服施用25mg來給予；依維莫司以每天一次口服施用IOmg來給予。治療患者直到記錄到其疾病的輻射學(xué)或臨床進(jìn)展為止。結(jié)果證明在治療ER+乳腺癌患者方面，MM-121+依西美坦+依維莫司的三重組合比單獨(dú)依西美坦或依維莫司與依西美坦的組合更有效。
[0127]等同物
[0128]本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到或僅僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)即能夠確定本文所述的具體實(shí)施方案的許多等同物。此類等同物意圖由以下權(quán)利要求書來涵蓋。附屬權(quán)利要求中公開的實(shí)施方案的任何組合涵蓋于本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0129]通過引用并入
[0130]本文提到的每一和每個(gè)授權(quán)專利、專利申請(qǐng)和公布由此全部以引用的方式并入本文。
[0131]序列表概沭
[0132]
【權(quán)利要求】
1.一種ErbB3抑制劑，其用于治療雌激素受體陽性或陰性激素難治性乳腺癌。
2.—種遏制雌激素受體陽性或陰性激素難治性乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與有效量的ErbB3抑制劑接觸。
3.—種遏制患者的雌激素受體陽性或陰性激素難治性乳腺癌腫瘤的生長(zhǎng)的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
4.一種治療雌激素受體陽性或陰性激素難治性乳腺癌腫瘤的患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
5.一種治療患者的乳腺癌腫瘤的方法，所述方法包括 選擇患有雌激素受體陽性或陰性激素難治性乳腺癌腫瘤的患者；以及 向所述患者施用有效量的ErbB3抑制劑。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述ErbB3抑制劑是抗ErbB3抗體。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含含有分別在SEQID N0:1和2中闡明的氨基酸序列的Vh和/或 '區(qū)。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含含有分別在SEQID N0:42和43中闡明的氨基酸序列的Vh和/或' 區(qū)。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體以氨基末端至羧基末端的順序包含分別如在SEQ ID NO:3-5中展示的VfDRl、2和3序列，并且以氨基末端至羧基末端的順序包含分別如在SEQ ID NO:6-8中展示的VlCDRU 2和3序列。
10.如權(quán)利要求3至5中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述患者共同施用有效量的不為ErbB3抑制劑的至少一種其它抗癌劑。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包括至少一種化療藥物。
12.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑選自由以下組成的組:鉬基化療藥物、紫杉烷類、酪氨酸激酶抑制劑、絲氨酸/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶抑制劑、抗EGFR抗體、抗ErbB2抗體和其組合。
13.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包括EGFR抑制劑。
14.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述EGFR抑制劑包括抗EGFR抗體。
15.如權(quán)利要求14所述的方法,其中所述抗EGFR抗體包括西妥昔單抗(cetuximab)。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述EGFR抑制劑是EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制劑。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述EGFR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子抑制劑選自由以下組成的組:阿法替尼(afatinib)、吉非替尼(gef itinib)、拉帕替尼(Iapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、培利替尼(pelitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、PK1-166、PD158780 和AG1478。
18.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述至少一種其它抗癌劑包括VEGF抑制劑。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述VEGF抑制劑包括抗VEGF抗體。
20.如權(quán)利要求19所述的方法,其中所述抗VEGF抗體是貝伐單抗(bevacizumab)。
21.如權(quán)利要求1至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述激素難治性乳腺癌呈雌激素受體陽性(ER+)。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其進(jìn)一步包括共同施用雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述雌激素受體拮抗劑選自雷洛昔芬(raloxifene)、他莫西芬(tamoxifen)、阿非昔芬(afimoxifene ;4_羥基他莫西芬)、阿佐昔芬(arzoxifene)、拉索昔芬(Iasofoxone)、托瑞米芬(toremifene)和氟維司群(fulvestrant);并且所述芳香酶抑制劑選自依西美坦(exemestane)、阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(Ietrozole)、氨魯米特(aminoglutethimide)、睪內(nèi)酯(testolactone)、伏氯唑(vorozole)、福美司坦(formestane)和法倔唑(fadrozole)。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述芳香酶抑制劑是來曲唑。
25.如權(quán)利要求21所述的方法，其進(jìn)一步包括共同施用mTOR抑制劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。
26.如權(quán)利要求所述的方法25,其中所述mTOR抑制劑選自坦羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、西羅莫司(sirolimus)和地憐莫司(ridaforolimus);并且所述芳香酶抑制劑選自依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述芳香酶抑制劑是依西美坦。
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其中所述mTOR抑制劑是依維莫司。
29.—種抑制腫瘤細(xì)胞中的由調(diào)蛋白(heregulin)介導(dǎo)的雌激素受體活化的方法，所述方法包括I)選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者，所述患者患有惡性腫瘤，在所述患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從所述患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫`瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)HER2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，以及2)向以這種方式選擇的患者施用可抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗體,其中所述抗體以可在所述患者血流中產(chǎn)生一定濃度的所述抗體的劑量來施用，所述濃度是足以在體外使MCF7細(xì)胞中的調(diào)蛋白誘導(dǎo)的雌激素受體磷酸化抑制至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%或至少70%的濃度，其中所述劑量下的所述施用可有效治療所述腫瘤。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述惡性腫瘤是乳腺、卵巢、肺或皮膚的腫瘤。
31.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述HER2的過度表達(dá)由所述腫瘤活檢測(cè)試為HER2++ 或 HER2+++ 或 HER2FISH 陽性來指示。
32.如權(quán)利要求29至31中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗雌激素療法是用雌激素受體阻斷劑來治療和用芳香酶抑制劑來治療中的一種或兩種。
33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述施用是通過靜脈內(nèi)注射或輸注。
34.如權(quán)利要求31至33中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是抗ErbB2抗體。
35.如權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是抗ErbB3抗體。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述抗體包含含有分別在SEQID NO:1和2中闡明的氨基酸序列的Vh和/或 '區(qū)。
37.如權(quán)利要求35所述的方法，其中所述抗ErbB3抗體包含含有分別在SEQID NO:42和43中闡明的氨基酸序列的Vh和/或 '區(qū)。
38.如權(quán)利要求29至33中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體是抗ErbB2/抗ErbB3雙特異性抗體。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述雙特異性抗體選自由以下組成的組:ALM、A5-HSA-ML3.9、A5-HSA-B1D2、B12-HSA-B1D2、A5-HSA-F5B6H2、H3-HSA-F5B6H2、F4-HSA-F5B6H2 和 H3-HSA-B1D2。
40.如權(quán)利要求29至39中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗體的施用抑制所述腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲性和轉(zhuǎn)移中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。
41.如權(quán)利要求29至40中任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括共同施用雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述雌激素受體拮抗劑選自雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羥基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟維司群；并且所述芳香酶抑制劑選自依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述芳香酶抑制劑是來曲唑。
44.一種用于抑制調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化的組合物，所述抑制在選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者之后進(jìn)行，所述患者患有惡性腫瘤，在所述患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從所述患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)ErbB2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，所述組合物包含:抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB3抗體。
45.一種用于抑制調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化的組合物，所述抑制在選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者之后進(jìn)行，所述患者患有惡性腫瘤，在所述患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從所述患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)ErbB2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，所述組合物包含:結(jié)合ErbB2并且抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2抗體。`
46.如權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述抗ErbB2抗體是培妥珠單抗(pertuzumab)。
47.一種用于抑制調(diào)蛋白介導(dǎo)的雌激素受體活化的組合物，所述抑制在選擇已經(jīng)用抗雌激素療法治療惡性疾病并且已經(jīng)變得對(duì)于此療法具有抗性的人患者之后進(jìn)行，所述患者患有惡性腫瘤，在所述患者已經(jīng)變得具有抗性之后對(duì)從所述患者獲取的腫瘤活檢進(jìn)行的分析表明，所述腫瘤為雌激素受體陽性的并且過度表達(dá)ErbB2，并且所述活化包括雌激素受體的磷酸化，所述組合物包含:抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2 /抗ErbB3雙特異性抗體。
48.一種用于治療激素難治性雌激素受體陽性癌癥的組合物，所述組合物包含抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB3抗體。
49.一種用于治療激素難治性雌激素受體陽性癌癥的組合物，所述組合物包含結(jié)合ErbB2并且抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2抗體。
50.如權(quán)利要求44至49中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于與雌激素受體拮抗劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種共同施用。
51.如權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述抗ErbB2抗體是培妥珠單抗。
52.一種用于治療激素難治性雌激素受體陽性癌癥的組合物，所述組合物包含抑制調(diào)蛋白與ErbB2 / ErbB3異源二聚體的結(jié)合的抗ErbB2 /抗ErbB3雙特異性抗體。
53.如權(quán)利要求50所述的組合物，其中所述雌激素受體拮抗劑選自雷洛昔芬、他莫西芬、阿非昔芬(4-羥基他莫西芬)、阿佐昔芬、拉索昔芬、托瑞米芬和氟維司群；并且所述芳香酶抑制劑選自依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
54.如權(quán)利要求53所述的組合物，其中所述芳香酶抑制劑是來曲唑。
55.如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述雙特異性抗體是包含SEQID NO:44的抗體。
56.如權(quán)利要求47或52所述的組合物，其中所述雙特異性抗體是包含SEQID NO:44的抗體。
57.如權(quán)利要求44至59中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于與mTOR抑制劑和芳香酶抑制劑中的一種或兩種共同施用。
58.如權(quán)利要求57所述的組合物，其中所述mTOR抑制劑選自坦羅莫司、依維莫司、西羅莫司和地磷莫司；并且所述芳香酶抑制劑選自依西美坦、阿那曲唑、來曲唑、氨魯米特、睪內(nèi)酯、伏氯唑、福美司坦和法倔唑。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述芳香酶抑制劑是依西美坦。
60.如權(quán)利要求58所 述的方法，其中所述mTOR抑制劑是依維莫司。
【文檔編號(hào)】C07K16/32GK103562226SQ201280012969
【公開日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年3月11日
【發(fā)明者】G·加西亞, W·庫巴塞科, V·莫尤, G·麥克貝思 申請(qǐng)人:梅里麥克制藥股份有限公司