專利名稱：一種文昌魚類凝集素及其表達基因與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種文昌魚類凝集素及其表達基因與應用，特別是一種海洋模式生物文昌魚類凝集素Amphi ITLN239631及其表達基因與應用，屬于基因工程技術領域。
背景技術：
凝集素是一類能專一識別細菌表面多糖的蛋白，能通過凝集、包埋、調(diào)理吞噬等方式參與宿主中由病原菌引起的免疫防御反應。類凝集素(Intelectin)是一類新發(fā)現(xiàn)的凝集素，與傳統(tǒng)的凝集素相比，類凝集素在結構上雖然并不具有傳統(tǒng)的carbohydrate recognition domain (CRD)結構域，但在 N 末端具備 fibrinogen β chain and y chain (FReD)的結構域,在C端有Intelectin結構域。最早被發(fā)現(xiàn)的成員是非洲爪蟾的XL35。單糖特異結合實驗表明XL35在Ca2+存在的情況下特異性地結合D-呋喃半乳糖。小鼠有兩個同源基因(intelectin 1/2), Northern blotting分析顯不小鼠的intelectinl特異地表達在整個腸道，原位雜交結果顯示其mRNA定位于小腸的潘氏細胞(paneth cell)。因此推測小鼠的intelectinl可能參與腸道的黏膜屏障，起著抵御微生物入侵或調(diào)節(jié)粘液物質(zhì)等作用。而小鼠intelectin 2是誘導性表達，在正常情況下表達在回腸部位，但是感染后會擴展到空腸、回腸、盲腸、結腸。
迄今為止，在人中發(fā)現(xiàn)了兩個intelectin的同源基因，HL-I和HL-2 (Lee et al.，2001)。HL-I主要表達于心臟、小腸、胸腺，同時在卵巢、精巢、脾臟中也有少量表達，而HL-2則特異表達于小腸。HL-I能特異地識別一些重要的病原菌如分支桿菌 (Mycobacterium)和諾卡氏菌(Nocardia)表面的呋喃半乳糖，因此推測HL-I可能參與機體對含呋喃半乳糖細菌的免疫反應。鯰魚中也發(fā)現(xiàn)了兩個intelectin同源基因，二者的表達模式差異很大dntelectin I表達于鰓、腸道、頭腎、肝臟、表皮、脾臟、胃和肌肉中， 而intelectin 2主要表達于肝臟，在腸道和腎中表達量較低。兩個基因在大腸桿菌的刺激下表達量都會上調(diào)，這也暗示了 intelectins參與It魚的免疫防御。此外，草魚中也發(fā)現(xiàn)了 intelectin同源基因，其中intelectin2分布于除肝臟之外的所有組織。另外， 在海鞘(Halocynthia roretzi),虹蹲(Oncorhynchus mykiss)和七觸獲(Lethenteron japonicum)中也都發(fā)現(xiàn)了 XL35的同源基因。研究證明intelectin基因家族在很多物種中廣泛存在，而其序列上的保守性又暗示了它們在動物體內(nèi)行使著某些很重要的功能。
我國擁有漫長的海岸線，海水養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展對于國民經(jīng)濟的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。然而，多年來病害嚴重地妨礙著海水養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展。由于文昌魚既具有脊椎動物的基本特征，又具有許多無脊椎動物的特征。研究文昌魚的免疫防御機制和對病原感染應答的規(guī)律，能夠為闡明海水養(yǎng)殖動物免疫防御機制提供資料，為開發(fā)海水養(yǎng)殖控制病害提供新方法、新思路，也為養(yǎng)殖水產(chǎn)動物病害的免疫防治技術提供理論依據(jù)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種海洋模式生物文昌魚類凝集素AmphiITLN239631及其表達基因與應用。
術語說明
I. PCR技術鏈式聚合酶反應，利用DNA聚合酶，模板，引物以及dNTPs進行體外擴增特定DNA片段的技術。
2.⑶D分析軟件NCBI網(wǎng)站上提供的一種用來推測和分析特定氨基酸序列形成的結構域信息的軟件。
本發(fā)明技術方案如下
一種海洋模式生物文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因，核苷酸序列如 SEQID NO. I 所示。
一種海洋模式生物文昌魚類凝集素AmphiITLN239631，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2 所示。
一種重組載體，插入了 SEQ ID NO. I所示核苷酸序列。該重組載體由pET_29b載體插入SEQ ID NO. I所示核苷酸序列獲得。pET-29b載體購自德國Novagen公司。
一種重組細胞，轉(zhuǎn)入了上述SEQ ID NO. I所示核苷酸序列或上述重組載體。
上述在文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因在凝集細菌中的應用。
本發(fā)明的文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因，取材于青島沙子口的成年文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtauense),提取總 RNA 后，用 TIANGEN 的第一鏈反轉(zhuǎn)試劑盒反轉(zhuǎn)出第一鏈cDNA當做模板，以佛羅里達文昌魚同源序列設計引物，利用 PCR技術從青島文昌魚轉(zhuǎn)錄組中克隆得到的。對該基因的核苷酸序列進行了測定，測序結果表明所獲DNA片段含有1334個核苷酸的開放閱讀框架，該開放閱讀框架即是編碼類凝集素的表達基因，共編碼396個氨基酸，命名為AmphiITLN239631。其在N末端具備一個 colIagenhefibrinogen β chain and y chain (FReD)的結構域,在 C 端具有類凝集素結構域，是文昌魚類凝集素基因家族尚未報道的一條基因序列。
有益效果
I、本發(fā)明獲得的海洋模式生物文昌魚類凝集素的表達基因可以表達類凝集素 AmphiITLN239631，有助于從理論上提高對免疫系統(tǒng)構成和免疫應答機制的認識，為在基因水平生產(chǎn)開發(fā)新的細菌防治藥物奠定基礎。
2、本發(fā)明所述的類凝集素AmphiITLN239631可以凝集細菌，可以為海水養(yǎng)殖的病害控制提供新的方法和思路，尤其是在防治細菌類方面的浸染提供理論依據(jù)。
3、本發(fā)明所述的類凝集素AmphiITLN239631可以結合多糖，制備細菌-多糖-凝集素識別的芯片，為快速鑒別和防治由細菌感染引起的海水養(yǎng)殖疾病提供理論依據(jù)。


圖I、青島文昌魚Branchiostoma belcheri tsingtauense成體總 RNA提取的電泳其中1、DNA分子量標記(marker), 2、3、4、5青島文昌魚成體總RNA
圖2、通過PCR擴增克隆的編碼的AmphiITLN239631基因片段的電泳其中1、擴增的DNA片段；2、DNA分子量標記(marker)
圖3、在大腸桿菌中進行異源表達和純化的AmphiITLN239631電泳其中M、蛋白質(zhì)分子量標記(marker) ;1、含表達質(zhì)粒的大腸桿菌BL21經(jīng)IPTG誘導前的總裂解液；2、IPTG誘導后的細菌總裂解液；3、鎳柱親和層析純化后的蛋白圖。
圖4、熒光顯微鏡觀察FITC標記的AmphiITLN239631的細菌凝集效應；
圖5、Western blotting 驗證 AmphiITLN239631 結合細菌的結果圖6、AmphiITLN239631和細菌表面多糖結合的曲線圖；具體實施方式
下面結合說明書附圖和實施例對本發(fā)明的技術方案做進一步說明，但本發(fā)明所保護范圍不限于此。
實施例I
青島文昌魚類凝集素AmphiITLN239631編碼基因的克隆
I. I青島文昌魚總RNA的的提取以及第一鏈cDNA的合成，提取合成步驟參照 Takara和TIANGEN公司的相關試劑盒說明書。
I)將IOOmg新鮮組織(文昌魚成體)盡量剪碎放入預I. 5mlep管中。
2)加入ImlTrizol (Invitrogen),用研磨件快速研磨組織至無大的組織塊,室溫靜置5min，使組織充分裂解。此時樣品可放入-80°C長期保存。
3)每ImlTrizol加入O. 2ml的三氯甲烷(氯仿)，加蓋封嚴，劇烈震蕩15s，室溫靜置15分鐘。
4) 4°C, IOOOg,離心15min。此時樣品分為三層下層的紅色有機相，中間層及上層水相，RNA即留在上層水相中。
5)將上層水相轉(zhuǎn)移入一干凈的離心管中。
6)在水相中按O. 5ml異丙醇/ImlTrinzol加入異丙醇，混勻，室溫放置 5min_10mino
7)4°C,12000g,離心IOmin,棄上清。RNA沉淀在管底呈凝膠狀。
8)按lml75%乙醇(DEPC水配制)/ImlTrizol試劑加入75%乙醇，溫和振蕩，懸浮沉淀。
9) 4°C, 8000g,離心 5min,棄上清。
10)室溫晾干或真空干燥5-10min。
11)用50 μ L DEPC水或TE緩沖液溶解RNA，進行下一步實驗或在-70°C冰箱。
cDNA第一鏈反轉(zhuǎn)
以文昌魚組織中提取的RNA為模板反轉(zhuǎn)cDNA第一鏈，按以下順序及量加入 200μ1ΕΡ 管中25mM MgCl2, 4 μ I ； 10 X buffer, 2 μ I ；dNTP,2y I ；RNase inhibitor, 0· 5μ I ;AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 0· 6μ I ;01igoT primer，I μ I ;模板，8 μ I ;ddH20 2 μ I 20μ I, 42°C，50min。
I. 2引物設計與合成
根據(jù)數(shù)據(jù)庫中已有的Branchiostoma fIoridae的AmphiITLN239631基因序列設計兩條特異性引物
AmphiITLN239631-F:5' GAAGGAATTGGTGTACTGGAGAGAG 3’
Amphi239631ITLN-R:5’ ACGGTAAAAGAAGAGAACTGCTGAC 3’，
上述引物由上海博尚生物技術公司合成；
I. 3利用PCR進行基因序列擴增
I)以 AmphiITLN239631-F 和 AmphiITLN239631-R 為引物，第一鏈 cDNA 為模板，做 PCR擴增。
PCR反應條件為95°C，5分鐘；95°C，I分鐘；55°C，I分鐘；72°C，2分鐘，35個循環(huán)后；72°C，延伸10分鐘。
2 )對PCR擴增產(chǎn)物進行I %瓊脂糖凝膠電泳，結果表明獲得一條約1400bp的DNA 片段。然后用TIANGEN公司的DNA回收試劑盒按照其說明回收擴增的DNA片段。
實施例2
基因序列測定
2. I. DNA片段與克隆載體連接
將回收DNA片段連接到Transgene公司的pEASY_T3載體上。連接反應體系連接載體酶混合物1μ 1，外源DNA片段4μ 1，手指輕彈離心管，混勻樣品，在離心機上轉(zhuǎn)2秒，把樣品集中在管底，37°C連接5分鐘。
2. 2.按《分子克隆實驗指南》上制備大腸桿菌感受態(tài)的方法制備大腸桿菌DH5 α 感受態(tài)。
2. 3.按《分子克隆實驗指南》上的熱激轉(zhuǎn)化方法將連接好的重組載體PEASY-T3轉(zhuǎn)至大腸桿菌DH5a感受態(tài)。
2.4.轉(zhuǎn)化的大腸桿菌DH5a涂于含100yg/L氨芐青霉素的麥康凱培養(yǎng)基，37°C 過夜培養(yǎng)，挑選白色轉(zhuǎn)化子作為模板，用T7和SP6作為引物，通過菌落PCR驗證白色轉(zhuǎn)化子中質(zhì)粒是否含有PCR擴增的DNA片段；T7和SP6的引物序列如下
Τ7 TAATACGACTCACTATAGGG
SP6:ATTTAGGTGACACTATAG
2.5.將含有PCR擴增的DNA片段的轉(zhuǎn)化子送上海博尚生物技術公司測序。因此， 獲得文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的序列1334bp。序列如SEQ ID NO. I所示。通過 NCBI網(wǎng)站的blastX軟件分析發(fā)現(xiàn)其中含有一個1188bp的編碼類凝集素AmphiITLN239631 的開放閱讀框架，共編碼396個氨基酸。
實施例3
類凝集素AmphiITLN239631異源表達與純化
3. I 表達載體 pET29b-AmphiITLN239631 的構建
I)利用小劑量質(zhì)粒提取試劑盒，按照說明書的步驟，從含有重組質(zhì)粒PEASY-T3的轉(zhuǎn)化子中提取重組質(zhì)粒pEASY-T3-AmphiITLN239631.
2)根據(jù)測序結果設計兩條特異性引物
pET29b-Amphi239631-F 5'GAATTCCATATGACGCCCGAGG 3’ 和
pET29b-Amphi239631-R :5，CCGCTCGAGACGGTAAAAGAAG,
上述引物由上海博尚生物技術公司合成。
3)利用PCR進行基因序列擴增，以pET29bAmphiITLN239631-F和 pET29b-AmphiITLN239631-R 為引物，以重組質(zhì)粒 pEASY-T3_AmphiITLN239631 為模板，做 PCR擴增。PCR反應條件為95°C，5分鐘；95°C，I分鐘；55°C，I分鐘；72°C，2分鐘，35個循環(huán)后，72 °C，延伸10分鐘。
4)對PCR擴增產(chǎn)物進行I %瓊脂糖凝膠電泳，結果表明獲得一條約1400bp的DNA 片段。
5)用限制性內(nèi)切酶NdeI和XhoI對回收片段和質(zhì)粒pET29b進行雙酶切。酶切反應體系如下酶切緩沖液2μ I ;內(nèi)切酶BamHI 1μ I;內(nèi)切酶XhoI I μ I ;回收DNA片段10 μ I ; 補加(1(1!120至2(^ I。酶切緩沖液2 μ I內(nèi)切酶BamHI I μ I內(nèi)切酶XhoI I μ I ；pET29b 6μ I ； 補加ddH20至20 μ I。放在37°C水浴中反應2個小時。對酶切產(chǎn)物進行I %瓊脂糖凝膠電泳，然后用TIANGEN公司的DNA回收試劑盒按照其說明回收擴增DNA片段。
6)將經(jīng)過雙酶切的AmphiITLN239631基因片段連接到pET29b載體上。連接反應體系連接酶 Buffer 4 μ ;載體 pET29b 5 μ I ；AmphiITLN239631 基因片段 10 μ 1，Τ4 連接酶I μ I,補加ddH20至20 μ I。蓋緊蓋子,手指輕彈離心管,混勻樣品，在離心機上轉(zhuǎn)2秒， 把樣品集中在管底，16°C搖床中連接過夜。
7)按《分子克隆實驗指南》上制備大腸桿菌感受態(tài)的方法制備大腸桿菌DH5 α感受態(tài)；
8)按《分子克隆實驗指南》上的熱激轉(zhuǎn)化方法將連接好的重組載體pET29b轉(zhuǎn)至大腸桿菌DH5 α感受態(tài)；
9)將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌DH5a涂于含100 μ g/mL卡納青霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C 過夜培養(yǎng)。
10)在平板上挑取單菌落，接于5mL含100 μ g/mL卡納青霉素的LB液體培養(yǎng)基中， 37 °C過夜培養(yǎng)；
11)收集3mL菌液,12000g離心2min,得到菌體，用試劑盒提取重組質(zhì)粒 pET29b-AmphiITLN239631。置于 _20°C保存。
3. 2 表達載體 pET29b-AmphiITLN239631 轉(zhuǎn)化到大腸桿菌 BL21 (DE3)中
I)按《分子克隆實驗指南》中制備大腸桿菌感受態(tài)的方法制備大腸桿菌BL21感受態(tài)；
2)按《分子克隆實驗指南》中的熱激轉(zhuǎn)化方法將連接好的重組載體 pET29b-AmphiITLN239631轉(zhuǎn)至大腸桿菌BL21感受態(tài)；
3)將轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21涂于含100 μ g/mL卡納青霉素的LB培養(yǎng)基中，37°C過夜培養(yǎng)。
3. 3AmphiITLN239631基因在大腸桿菌中誘導表達與純化
I)在平板上挑取單菌落，接于20mL含100 μ g/mL卡納青霉素的LB液體培養(yǎng)基中， 37 °C過夜培養(yǎng)；
2) 1%接種量轉(zhuǎn)接到含100 μ g/mL氨芐青霉素的新鮮LB培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)至菌濃度0D0. 8，加入IPTG至終濃度為O. 5mmol/L，繼續(xù)在15°C搖床培養(yǎng)20h ；
3)收集經(jīng)過IPTG誘導表達的500mL LB培養(yǎng)液，12000g離心lOmin，收集菌體；
4)用50ml重懸緩沖液重懸菌體，在冰浴中超聲破碎(超聲3s，間歇6s，共51次，電壓為560V)。
5)破碎好的液體經(jīng)14000rpm，4°C，離心50分鐘，收集到的上清即為蛋白粗提液。
6)包涵體復性
Buffer A50mM Tris · HCl(pH8. O)，5mM EDTA
Buffer B50mM Tris · HCl(pH8. 0)，5mM EDTA,2M 脲
變性液0.IM Tris · HCl (pH8. 0)，IOmM DTT，8M 脲
復性液0.IM Tris · HCl (pH8. 0)，5mM EDTA, 5mM Cysteine
( i )包涵體使用20mL buffer A懸起，IOOOOrpm 20min 4oC離心去上清，重復一次。
( ii )包涵體使用2OmL buffer B懸起，IOOOOrpm 2Omin 4oC離心去上清，重復一次。
( iii )添加 20mL 變性液溶解，37°C快搖 lhr，IOOOOrpm 20min 4oC 取上清。
( iv )上清液在50倍體積的透析液中4°C透析16hr以上，重復一次。
( V )復性液410000rpm離心IOmin去除沉淀，復性液與沉淀使用SDS-PAGE檢測。
7)將上清液按照說明書的要求進行鎳柱親和層析；
8)層析后收集的樣品用SDS-PAGE檢測純度，證明已經(jīng)獲得的 AmphiITLN23963U 圖 3)。
用20mmol/L的Tris-HCl (ρΗ7· 5)緩沖液透析3_4次。最后置于_20°C保存，備用。
實施例4
文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的性質(zhì)測定
4. I細菌凝集作用
I)取過夜培養(yǎng)的細菌(Escherichia coli,大腸桿菌和 Staphylococcus aureus 金黃色葡萄球菌)約5ml，lOOOOg，離心I分鐘；
2)棄上清，用重懸液懸起細菌，每毫升細菌加入5011懷11'(溶液(101^/1111，01^0);
3)混勻后在37°C避光孵育I小時，每隔15分鐘上下顛倒混勻一次；
4) IOOOg,離心 I 分鐘；
5)棄上清，用TBS溶液清洗，重復四次，直至上清液無色即可；
6)按照所需濃度稀釋細菌，加入適量蛋白，37°C孵育過夜；
7)觀察統(tǒng)計分析結果。
4. 2細菌結合作用
DlXlO7各種不同的細菌與以目的蛋白在含有ΙΟπιΜβ-ΜΕ的超聲緩沖液4°C振蕩孵育I h ;
2)用孵育所用的緩沖液洗滌3 5次，6000rpm離心2分鐘；
3)盡量除去上清液，加入20 μ L的緩沖液和適量的SDS蛋白上樣緩沖液，煮沸 IOmin,離心,上清點樣進行后用HIS標簽抗體進行Western blot分析。
4. 3多糖結合
I)包被用PBS溶液(pH7. 4)溶解兩種不同的細胞壁多糖組分(肽聚糖，來源于枯草芽孢桿菌；脂多糖，來源于大腸桿菌)。然后在每一個聚苯乙烯微量滴定板的反應孔中加入100 μ I溶有終含量為20 μ g各組分的PBS溶液(PH7. 4)，4°C過夜。同時用不加入糖組分的PBS溶液做陰性對照；
2)洗滌次日，棄去孔內(nèi)溶液,剛開始用100 μ I洗滌緩沖液洗I次,然后用200 μ I 洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘；
3)封閉加入200pl 5% BSA(牛血清白蛋白)4°C封閉過夜。次日洗滌；
4)加樣在反應孔中加入不同濃度的純化的融合蛋，4°C孵育過夜或者置于濕盒中于37°C孵育lh。然后洗滌(同時做空白孔)；
5)加酶標一抗于各反應孔中，加入100新鮮的用5%的BSA稀釋的小鼠His單克隆抗體(I :50，000)，置于濕盒中于371下孵育lh，洗滌；
6)加酶標二抗于各反應孔中，加入100 μ I新鮮的用5%的BSA稀釋的羊抗小鼠 HRP (活化辣根過氧化物酶)標記的二抗(I :20000)，置于濕盒中于37°C孵育lh，洗滌；
7)加底物液顯色于各反應孔中，加入50 μ ITMB顯色液，從加入第一個孔開始記時。全部加完后避光37°C孵育10分鐘；
8)終止反應從第一孔開始計時后10分鐘，每孔按照加入底物緩沖液的順序加入 50 μ I終止液；
9)結果判定在酶標儀上于450nm處，以空白對照孔調(diào)“O”后測各孔的OD值。
5.結果分析
利用Trizol 法提取青島文昌魚 Branchiostoma belcheri tsingtauense 成體總 RNA提取(圖I)。通過PCR擴增類凝集素AmphiITLN239631的表達基因片段(圖2)。經(jīng)過測序獲得編碼類凝集素AmphiITLN239631基因的核酸序列。類凝集素AmphiITLN239631的表達基因含有一個1188bp的開放閱讀框架，共編碼396個氨基酸。利用生物信息學軟件分析， 在 N 末端具備一個 collagenhe fibrinogen β chain and y chain (FReD)的結構域,在 C 端具有Intelectin結構域。將類凝集素AmphiITLN239631的表達基因在大腸桿菌中進行異源表達和純化，獲得成熟有活性的類凝集素AmphiITLN239631(圖3)。研究發(fā)現(xiàn)重組蛋白只有在鈣離子存在的情況下，可以凝集金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，且二者凝集程度類似，這些揭示了類凝集素AmphiITLN239631可以作為一種鈣離子依賴的凝集素發(fā)揮細菌凝集效應(圖4)。為了深入探討細菌凝集的機制，我們設置了重組蛋白和細菌的結合實驗。發(fā)現(xiàn)在鈣離子存在或者缺失的條件下，類凝集素AmphiITLN239631都可以結合金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，且二者并無明顯差異(圖5)。對類凝集素AmphiITLN239631和細菌細胞壁表面多糖成分(肽聚糖和脂多糖)結合進行了非線性分析，結果表明類凝集素AmphiITLN239631 對PGN的親和度和反應速率和LPS并無明顯差異(圖6 )。這和以上結果相對應，暗示了文昌魚類凝集素可能通過識別細菌細胞壁表面的多糖分子，從而引發(fā)細菌的凝集，并參與文昌魚的免疫防御。因此類凝集素AmphiITLN239631是文昌魚Intelectin基因家族尚未報道的一條類凝集素基因序列。9
權利要求
1.一種海洋模式生物文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因，核苷酸序列如SEQ ID NO. I 所示。
2.—種海洋模式生物文昌魚類凝集素AmphiITLN239631，氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
3.一種重組載體，插入了 SEQ ID NO. I所示核苷酸序列。
4.如權利要求3所述的重組載體，其特征在于，該重組載體由pET-29b載體插入SEQIDNO. I所示核苷酸序列獲得。
5.一種重組細胞,轉(zhuǎn)入了上述SEQ ID NO. I所示核苷酸序列或上述重組載體。
6.權利要求I所述文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因在凝集細菌中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種文昌魚類凝集素及其表達基因與應用，文昌魚類凝集素AmphiITLN239631的表達基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；文昌魚類凝集素AmphiITLN239631氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明所述的類凝集素AmphiITLN239631可以結合多糖，制備細菌-多糖-凝集素識別的芯片，為快速鑒別和防治由細菌感染引起的海水養(yǎng)殖疾病提供理論依據(jù)。
文檔編號C07K14/435GK102925448SQ20121044128
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月7日 優(yōu)先權日2012年11月7日
發(fā)明者馮力駿, 閆杰, 王建峰, 劉歡歡, 荊韌威, 李開霖, 劉凱興, 張妍, 董璇, 張長青, 孔雨 申請人:山東大學