一種甘草次酸的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種高純度甘草次酸的制備方法，采用甘草酸粗品為原料，經(jīng)硫酸水解后，用氨水調(diào)pH至堿性，加入有機溶劑萃取，濃縮回收有機溶劑后得到甘草次酸粗品，再通過半制備型高效液相色譜儀進一步純化得到高純度甘草次酸。本發(fā)明的優(yōu)點是，甘草酸粗品經(jīng)酸解和有機溶劑萃取，直接使用半制備型高效液相色譜儀制備獲取高純度甘草次酸，采用甲醇和水做流動相，即可達到較好的分離提純效果，成本低，周期短，操作簡單，實驗步驟少，純度可達99.5%以上。
【專利說明】一種甘草次酸的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種高純度甘草次酸的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]豆科植物甘草是中藥中常用的重要藥材，1964年荷蘭Revers發(fā)現(xiàn)甘草提取物對醫(yī)治胃潰瘍有較好療效；此后又發(fā)現(xiàn)甘草有利尿、抗炎、抗?jié)儭⒖拱?、防治病毒性肝炎、高脂血癥、艾滋病和增強細胞免疫能力的功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，甘草具有醫(yī)療保健功能的主要有效成分是甘草酸，而實際起治療效果的是甘草次酸。使用甘草次酸治療相應(yīng)的疾病，可以更好地實現(xiàn)藥物劑量和實際治療的對應(yīng)關(guān)系，以控制甘草酸類藥物所帶來的副作用。甘草次酸在工業(yè)中也有廣泛的應(yīng)用，主要用于合成天然防腐劑、天然增色劑、天然增稠劑和防曬養(yǎng)護品等。甘草次酸不僅具有重要的醫(yī)學(xué)保健功能，而且在化工行業(yè)上也逐步得到了廣泛的應(yīng)用。因而，對其提取方法的研究正方興未艾。通常可以采用酸堿催化的方法從甘草酸中提取甘草酸得到甘草次酸粗品，接著加入氯仿溶提，再經(jīng)氧化鋁層析或乙醇溶解，最后經(jīng)活性炭脫色后加水析出結(jié)晶制備得到甘草次酸產(chǎn)品，工藝技術(shù)復(fù)雜，生產(chǎn)量也受到限制。后來發(fā)展了酶水解法，即甘草酸經(jīng)酶水解得到純的甘草次酸。雖然酶水解法可以得到純甘草次酸，但制備條件和工藝技術(shù)不易實現(xiàn)工業(yè)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于針對目前在制備甘草次酸過程中所存在的工藝復(fù)雜以及純度不高的問題，提供一種制備高純度甘草次酸的新方法。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:
一種甘草次酸的制備方法，采用甘草酸粗品為原料，采用半制備型高效液相色譜法制備高純度甘草次酸，它包括以下步驟:
(1)甘草酸粗品和5~15%的稀硫酸混合后放入密封微波消解罐中，微波消解15~35分鐘后，得到消解產(chǎn)物；
(2)將消解產(chǎn)物用氨水調(diào)pH至8-9，加入等體積的有機溶劑進行相分配，等分層清晰后，取下層有機溶劑相，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉有機溶劑，得到甘草次酸粗品；
(3)用甲醇溶解甘草次酸粗品，采用C18反相硅膠色譜柱，甲醇和水作為流動相，等度/梯度洗脫，經(jīng)過半制備型液相色譜儀進行最后一步的分離純化后，收集到的甘草次酸的純度聞于99.5%。
[0005]本發(fā)明的有益效果是可選用不同純度的甘草酸粗品來制備甘草次酸，過程簡單、易控制，工藝技術(shù)簡化，生產(chǎn)成本低，適用于大規(guī)模制備。高效液相色譜測定中，總雜質(zhì)峰小于0.5%，單一雜質(zhì)峰不超過0.3%。此產(chǎn)品完全符合歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0006]圖1是甘草次酸粗品液相色譜法測定圖譜，圖2是高純度甘草次酸液相色譜法測定圖譜。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
1.取2g甘草粗提物與15%硫酸混合，液固比(ml/g)為20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分鐘內(nèi)，升溫至160°C，保持15分鐘；
2.將消解產(chǎn)物用氨水調(diào)pH至8后，加入等體積的乙酸乙酯萃取三次，后合并乙酸乙酯層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉乙酸乙酯后，得甘草次酸粗品；
3.將甘草次酸粗品用Iml色譜純甲醇溶解，采用半制備型液相色譜儀進行最后一步的分離純化，色譜柱規(guī)格為Φ10Χ250mm，反相C18硅膠填料為江蘇漢邦科技有限公司產(chǎn)品，粒徑為10um，上樣量10mg，流動相為70%甲醇-水溶液，等度洗脫，流速4ml/min，柱溫20°C，收集保留時間在5(T55.5min的餾分。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為230nm，經(jīng)HPLC分析純度≥99.7%。
[0008]實施例2
1.取Ig甘草酸單鉀鹽與5%稀硫酸混合，液固比(ml/g)為20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分鐘內(nèi)，升溫至160°C，保持10分鐘；
2.將消解產(chǎn)物用氨水調(diào)pH至9后，加入等體積的丙酮萃取三次，后合并丙酮層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉丙酮后，得甘草次酸粗品；
3.將甘草次酸粗品用Iml色譜純甲醇溶解，采用半制備型液相色譜儀進行最后一步的分離純化，色譜柱規(guī)格為Φ10Χ250mm，反相硅膠C18填料為江蘇漢邦科技有限公司產(chǎn)品，粒徑為5um，上樣量15mg，流動相為80%甲醇-水溶液，等度洗脫，流速4ml/min，柱溫25°C，收集保留時間在33~41.5min的餾分。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為230nm，經(jīng)HPLC分析純度≥99.5%。
[0009]實施例3
1.取Ig甘草酸單銨鹽與5%稀硫酸混合，液固比(ml/g)為20:1，置于密封微波消解罐中，微波消解，20分鐘內(nèi)，升溫至160°C，保持10分鐘；
2.將消解產(chǎn)物用氨水調(diào)pH至8后，加入等體積的氯仿萃取三次，后合并氯仿層，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)掉氯仿后，得甘草次酸粗品；
3.將甘草次酸粗品用Iml色譜純甲醇溶解，采用半制備型液相色譜儀進行最后一步的分離純化，色譜柱規(guī)格為Φ10Χ250mm，反相硅膠C18填料為江蘇漢邦科技有限公司產(chǎn)品，粒徑為10um，上樣量10mg，流動相為甲醇-水溶液，梯度度洗脫條件為，0-25min，甲醇65%~80% ;25~50min，甲醇80%~80%，流速4ml/min，柱溫30°C，收集保留時間在25~30min的餾分。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為230nm，經(jīng)HPLC分析純度> 99.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種甘草次酸的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將甘草酸粗品和5~15%的硫酸混合后放入密封微波消解罐中，微波消解得到消解產(chǎn)物； (2)將消解產(chǎn)物用氨水調(diào)pH至8-9，經(jīng)有機溶劑提取后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，得到甘早次Ife粗品； (3)采用甲醇和水做流動相，使用半制備型高效液相色譜儀制備得到高純度甘草次酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(1)中甘草酸粗品主要為甘草粗提物、甘草酸單銨鹽和甘草酸單鉀鹽三種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(2)中所述的有機溶劑優(yōu)選乙酸乙酯、丙酮或氯仿。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述步驟(3)中半制備型高效液相色譜儀采用固定相為C18的反相硅膠填料，色譜柱規(guī)格為:內(nèi)徑l(T30mm、長度15(T300mm，填料粒徑為5~10 μ m，流動相以等度洗脫或梯度洗脫的方式洗脫甘草次酸粗品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的等度洗脫方式，其特征是:流動相甲醇與水的體積比(V/V)范圍為7:3~9:1，柱溫20~35°C，流速4~30ml/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的梯度洗脫方式，其特征是:流動相為甲醇-水體系，體積比為65:35~80:20，柱溫 20~35°·C，流速 4~30ml/min。
【文檔編號】C07J63/00GK103588849SQ201210286477
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月14日
【發(fā)明者】居延娟, 李枝玲, 王冰冰, 劉根水, 張大兵 申請人:江蘇漢邦科技有限公司