專利名稱：從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領域，具體涉及ー種從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松革苷的方法。
背景技術：
天葵子系毛莨科植物天葵Semiaquilegia adoxoides (DC. ) Makino的干燥塊根,始載于清代趙學敏《本草綱目拾遺》，俗稱千年老鼠屎，亦稱紫背天葵根。天葵子資源豐富，分布很廣，可見于河南、江蘇、安徽、浙江、江西、福建、湖北等省區(qū)，主產(chǎn)于湖南邵陽、長沙、湖北恩施、宣恩，江蘇震澤等地。收載于《中國藥典》2010年版一部，具有清熱解毒，消腫散結之功效，用于治療癰腫疔瘡，乳癰，瘰疬，蛇蟲咬傷?，F(xiàn)代藥理實驗表明，天葵子對金黃色葡萄球菌等有抑制作用；臨床上用天葵子或其復方治療急性軟組織損傷及骨關節(jié)結核、急性乳腺炎、子宮肌瘤、原發(fā)性肝癌、胃癌等。天葵子主要含生物堿、內(nèi)酷、香豆素、酚酸及酚苷類化合物。其中格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷在一般植物中比較少見，但在天葵子中的量較高。格列風內(nèi)酯(Griffonilide)，分子式C8H8O4,分子量168. 04，為無色針晶(甲醇)，易溶于甲醇，微溶于水、丙酮，難溶于氯仿，藥理研究表明，格列風內(nèi)酯具有顯著的抗炎活性，其對炎癥的抑制率高達64%。東方唐松草苷(thalictricoside)，為硝基酚苷類成分，分子式=C19H27NO12,分子量461. 42，為無色針晶(甲醇)。
u。、^人格列風內(nèi)酯東方唐松草苷牛鋒采用5倍95 %こ醇加熱回流提取3次，毎次3h，提取液濃縮得浸膏，懸浮于水中，分別用醋酸こ酯和正丁醇萃取，醋酸こ酯萃取部分蒸干溶劑，上硅膠柱氯仿-甲醇洗脫，氯仿-甲醇(100 8)部分濃縮析晶，甲醇重結晶得到格列風內(nèi)酷；正丁醇萃取部位水浴蒸干正丁醇，適量水溶解，上AB-8大孔吸附樹脂柱分離，收集30 %こ醇洗脫部位，濃縮，反復上S^hadex LH-20甲醇-水(I I)柱洗脫，除去色素，濃縮流分，在甲醇中析出無色結晶，甲醇重結晶得到東方唐松草苷。中國專利200910312563. 3公開的“一種天葵提取物及其制備方法和應用”，采用鮮品或干品，用提取溶媒進行提取，所得提取液除去溶劑后得到天葵提取物，再對提取物進行溶劑萃取或柱層析純化，所制備的天葵提取物用于制備預防和治療白內(nèi)障藥物。前者采用大量有機溶劑和多次柱層析，エ藝復雜，有效成分損失較大、得率低，且生產(chǎn)周期長；后者得到的是粗提取物，不能得到有效單體成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法。從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是方法步驟為用70-100 %的甲醇溶液提取，過濾，得提取液，加入硅藻上攪拌脫色，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液用水分散，加入大孔吸附樹脂柱層析吸附1-3次，吸附結束后，用含水こ醇梯度洗脫，分別收集富集格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的流分，再分別減壓濃縮得到粗浸膏；將格列風內(nèi)酯粗浸膏與聚酰胺拌樣進行柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集洗脫液，濃縮析晶，粗晶用甲醇-丙酮重結晶得到格列風內(nèi)酯純品；將東方唐松草苷粗浸膏與聚酰胺拌樣烘干上柱，用醇-水洗脫，將東方唐松草苷流分減壓濃縮，靜置結晶，粗晶再用氯仿-甲醇重結晶得到東方唐松草苷純品。所述提取方法為索氏提取、加熱回流、超聲或者微波輔助提取。所述娃藻土加入量為提取液總量的3-5%。 所述大孔吸附樹脂類型可選DA201、HPD450、XSD-1、HPD100中的任意ー種。所述大孔樹脂洗脫為先用去離子水常規(guī)洗脫雜質，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分。本發(fā)明的優(yōu)點是天葵子在我國分布廣泛，因此價廉易得；本發(fā)明方法操作簡單易行，采用甲醇為提取溶媒，提取率高；通過生物膜過濾濃縮，除去糖類成分；利用聚酰胺能與硝基化合物和內(nèi)酯類成分形成氫鍵，具有較好的分離效果。
具體實施例方式實施例I :取天葵子500g粉碎成粗粉或切薄片，加8倍量75%甲醇索氏提取2次，毎次I小時,過濾,合并濾液,加入150g硅藻土攪拌，過濾，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液加適量去離子水分散，加入DA201大孔吸附樹脂柱中吸附2次，流速為0. 5BV/h，先以去離子水洗脫雜質，再依次用20 %こ醇、50 %こ醇、95 %こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分；將格列風內(nèi)酯流分減壓濃縮得到粗浸膏，再將粗浸膏與適量聚酰胺拌樣上柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脫液，濃縮析晶，濾除粗晶，將粗晶用甲醇-丙酮重結晶，低溫干燥即得144mg格列風內(nèi)酯純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為97. 2%;將東方唐松草苷流分減壓濃縮后于聚酰胺拌樣烘干上柱，用40%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，濃縮靜置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重結晶即得189mg東方唐松草苷純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為96. 6%。實施例2:取天葵子IOOOg粉碎成粗粉或切薄片，加10倍量100%甲醇加熱回流提取2次，每次I. 5小時，過濾，合并濾液，加入750g硅藻土攪拌，過濾，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液加適量去離子水分散，加入HPD450大孔吸附樹脂柱中吸附，流速為lBV/h，先以去離子水洗脫雜質，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分；將格列風內(nèi)酯流分減壓濃縮得到粗浸膏，再將粗浸膏與適量聚酰胺拌樣上柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脫液，濃縮析晶，濾除粗晶，將粗晶用甲醇-丙酮重結晶，低溫干燥即得306mg格列風內(nèi)酯純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為96. 2% ;將東方唐松草苷流分減壓濃縮后于聚酰胺拌樣烘干上柱，用40%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，濃縮靜置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重結晶即得483mg東方唐松草苷純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為95. 9%。實施例3:取天葵子2kg粉碎成粗粉或切薄片，加15倍量80%甲醇超聲提取I次，提取2小時,過濾,加入680g硅藻土攪拌，過濾，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液加適量去離子水分散，加入XSD-I大孔吸附樹脂柱中吸附2 次，流速為0. 6BV/h，先以去離子水洗脫雜質，再依次用20 %こ醇、50 %こ醇、95 %こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分；將格列風內(nèi)酯流分減壓濃縮得到粗浸膏，再將粗浸膏與適量聚酰胺拌樣上柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脫液，濃縮析晶，濾除粗晶，將粗晶用甲醇-丙酮重結晶，低溫干燥即得584mg格列風內(nèi)酯純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為95.7% ;將東方唐松草苷流分減壓濃縮后于聚酰胺拌樣烘干上柱，用40%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，濃縮靜置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重結晶即得743mg東方唐松草苷純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為96.3%。實施例4:取天葵子5kg粉碎成粗粉或切薄片，加6倍量70 %甲醇微波輔助提取3次，每次0. 5小時，過濾，合并濾液，加入2. 3kg硅藻土攪拌，過濾，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液加適量去離子水分散，加入HPD100大孔吸附樹脂柱中吸附次3，流速為0. 8BV/h，先以去離子水洗脫雜質，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分；將格列風內(nèi)酯流分減壓濃縮得到粗浸膏，再將粗浸膏與適量聚酰胺拌樣上柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集氯仿-甲醇(10 I)洗脫液，濃縮析晶，濾除粗晶，將粗晶用甲醇-丙酮重結晶，低溫干燥即得I. 29g格列風內(nèi)酯純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為96. 8% ;將東方唐松草苷流分減壓濃縮后于聚酰胺拌樣烘干上柱，用40%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，濃縮靜置析晶，粗晶用氯仿-甲醇重結晶即得1.86g東方唐松草苷純品，經(jīng)HPLC法測定其含量為95. 4%。
權利要求
1.從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是方法步驟為用70-100 %的甲醇溶液提取，過濾，得提取液，加入硅藻土攪拌脫色，脫色液加入截留分子量6000-10000的中空復合膜超濾，透過液減壓濃縮，濃縮液用水分散，加入大孔吸附樹脂柱層析吸附1-3次，吸附結束后，用含水こ醇梯度洗脫，分別收集富集格列風內(nèi)酯和東方唐松革苷的流分，再分別減壓濃縮得到粗浸膏；將格列風內(nèi)酯粗浸膏與聚酰胺拌樣進行柱層析，先用氯仿洗脫，再用氯仿-甲醇(10 I)洗脫，收集洗脫液，濃縮析晶，粗晶用甲醇-丙酮重結晶得到格列風內(nèi)酯純品；將東方唐松草苷粗浸膏與聚酰胺拌樣烘干上柱，用醇-水洗脫，將東方唐松草苷流分減壓濃縮，靜置結晶，粗晶再用氯仿-甲醇重結晶得到東方唐松草苷純品。
2.根據(jù)權利要求I所述的提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是所述提取方法為索氏提取、加熱回流、超聲或者微波輔助提取。
3.根據(jù)權利要求I所述的提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是所述硅藻土加入量為提取液總量的3-5%。
4.根據(jù)權利要求I所述的提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是所述大孔吸附樹脂類型可選DA201、HPD450、XSD-I、HPD100中的任意ー種。
5.根據(jù)權利要求I所述的提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，其特征是所述大孔樹脂洗脫為先用去離子水常規(guī)洗脫雜質，再依次用20%こ醇、50%こ醇、95%こ醇洗脫，分別收集富含格列風內(nèi)酯的流分和富含東方唐松草苷的流分。
全文摘要
本發(fā)明涉及從天葵子中提取格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的方法，該方法主要采用溶劑提取、硅藻土脫色、膜分離、柱層析以及重結晶等步驟，同時獲得格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷，本發(fā)明的技術效果是1、利用格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷均易溶于甲醇的性質，采用甲醇提取，得到總提取液；2、將提取液通過生物膜分離濃縮，濾除多糖成分，減輕后續(xù)操作的壓力；3、利用格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷的極性差異，通過大孔樹脂吸附洗脫，將格列風內(nèi)酯和東方唐松草苷有效分離。該方法操作簡單、成本低，獲得的單體純度高，為這兩種有效成分的藥理研究、天葵子及含有天葵子的制劑的質量控制奠定了物質基礎。
文檔編號C07D307/77GK102649782SQ20111004536
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權日2011年2月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司