專利名稱：一種三葉豆紫檀苷的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其是涉及ー種采用高效液相制備色譜法從苦參藥材中制備三葉豆紫檀苷的方法。
背景技術(shù)：
苦參是豆科槐屬多年生落葉亞灌木植物苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，性味苦寒，歸心、肝、脾、腎、大腸、小腸諸經(jīng)。具有清熱燥濕、殺蟲利尿的功效，可作苦味健胃剤、利尿剤、消炎藥、止瀉藥和驅(qū)蟲藥?？鄥⒌闹饕δ苄猿煞譃辄S酮類和生物堿類成分，近年來對苦參黃酮類成分研究 較多，并取得了相關(guān)的成果?，F(xiàn)代臨床研究表明苦參總黃酮具有抗菌消炎、減慢心率、抗心率失常功能。三葉豆紫檀苷為苦參中ー個主要的黃酮類成分，經(jīng)Yagi A等研究已確定其具有很強(qiáng)的抗真菌作用。三葉豆紫檀苷，無色針狀或棒狀結(jié)晶；分子式C22H22Oltl,分子量446. 41,熔點142 144°C。難溶于苯，易溶于熱甲醇。目前三葉豆紫檀苷主要是通過反復(fù)柱層析的方法制備。如溫敏等發(fā)表的文獻(xiàn)“白刺花的花中化學(xué)成分研究”，該文獻(xiàn)公開的方法是75%こ醇回流提取，濃縮后用こ酸こ酯萃取，萃取液上硅膠柱層析，用石油醚-丙酮混合溶劑系統(tǒng)洗脫，洗脫液再上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇混合溶劑系統(tǒng)洗脫，洗脫液最后經(jīng)凝膠柱層析得到純度較高的三葉豆紫檀苷，該方法步驟繁多，洗脫劑用量大，制備量小，周期長；再如朱麗君發(fā)表的碩士論文“苦參有效部位化學(xué)研究”，該論文采用的方法是こ醇回流提取，提取液濃縮后加水分散，離心除去上清液，殘渣采用硅膠柱分離，氯仿-甲醇梯度洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，回收溶劑，最后用氯仿重結(jié)晶得到三葉豆紫檀苷，該方法步驟較簡單但制得產(chǎn)品純度不高?，F(xiàn)有提取三葉豆紫檀苷的方法普遍存在著毒性有機(jī)溶劑用量大，エ藝步驟多，制備量少，產(chǎn)品純度低等問題，因此提供一種高純度三葉豆紫檀苷的制備方法是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種三葉豆紫檀苷的制備方法，該方法操作簡單，制得產(chǎn)品含量高。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于包含以下步驟I)提取取苦參藥材粉碎，加40 70%甲醇提取2 3次，藥材與溶劑比例為I (5 10)，合并提取液，濃縮成浸膏；2)酸水除雜向上述浸膏中加入5 12倍量的pHl 5的酸水，超聲分散，棄去酸水層，固形物重復(fù)以上操作2 4次，得苦參總黃酮；3)制備高效液相進(jìn)ー步分離純化將上述苦參總黃酮用こ醇溶解，濾膜過濾，用高效液相制備色譜對其進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶；4)重結(jié)晶將上述結(jié)晶用甲醇熱回流結(jié)晶2 3次得三葉豆紫檀苷產(chǎn)品。
所述步驟I)中的提取方法可選用加熱回流法或超聲提取法，提取溫度控制在60 100。。。
所述步驟2)中的酸水可以是鹽酸或硫酸水溶液。所述步驟3)中的濾膜孔徑為O. 2 O. 45 μ m。所述步驟3)中的高效液相制備色譜是以反相鍵合硅膠為固定相，以甲醇水或こ腈水為流動相，紫外檢測器監(jiān)測收集目標(biāo)流分。所述的反相鍵合硅膠是C-8或C-18鍵合硅膠，甲醇水或こ腈水是含量58 65%的甲醇或こ腈的水溶液。所述的紫外檢測器的波長設(shè)定為310nm。本發(fā)明的積極效果是采用酸水除雜洗去苦參生物堿類雜質(zhì)；制備高效液相進(jìn)一歩分離純化所用的反相高效液相制備色譜，具有分離度高、重現(xiàn)性好、分離時間短、制備量大等優(yōu)點，分離的到產(chǎn)品純度可達(dá)98%以上。本發(fā)明使用的溶劑系統(tǒng)較為簡單，還具有低成本，回收率高的優(yōu)點。下面將結(jié)合具體實施方式
進(jìn)ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例I :取苦參藥材lKg，粉碎，加10L40%甲醇加熱回流提取2次，合并提取液，濃縮得浸膏62g，向浸膏中加入310mlpHl的鹽酸水溶液超聲分散，離心除去酸水層，固形物重復(fù)酸水洗滌2次，將所得固形物用少量こ醇溶解，經(jīng)O. 2 μ m濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-8鍵合硅膠為固定相，58%甲醇水溶液為流動相，流速設(shè)定為20ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶2次，濾出晶體，干燥得到三葉豆紫檀苷2. 4g，含量98. 7%。實施例2 取苦參藥材lKg，粉碎，加5L70%こ醇超聲提取3次，合并提取液，濃縮得浸膏71g，向浸膏中加入800mlpH5的硫酸水溶液超聲分散，離心除去酸水層，固形物重復(fù)酸水洗滌3次，將所得固形物用少量こ醇溶解，經(jīng)O. 45 μ m濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-18鍵合硅膠為固定相，60%こ腈水溶液為流動相，流速設(shè)定為30ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶3次，濾出晶體，得到三葉豆紫檀苷2. Ig,含量98. 3 %。實施例3 取苦參藥材5Kg，粉碎，加40L50 %こ醇超聲提取2次，合并提取液，濃縮得浸膏286g，向浸膏中加入2. 4LpH3的鹽酸水溶液超聲分散，離心除去酸水層，固形物重復(fù)酸水洗滌3次，將所得固形物用少量こ醇溶解經(jīng)O. 3μπι濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-18鍵合硅膠為固定相，62%甲醇水溶液為流動相，流速設(shè)定為60ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶2次，濾出晶體，得到三葉豆紫檀苷11. 4g，含量98. 5%。
實施例4 取苦參藥材5Kg，粉碎，加35L55%こ醇加熱回流提取3次，合并提取液，濃縮得浸膏308g，向浸膏中加入3LpH4的硫酸水溶液超聲分散，過濾除去酸水層，固形物重復(fù)酸水洗滌4次，將所得固形物用少量こ醇溶解，經(jīng)O. 45 μ m濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-8鍵合硅膠為固定相，65%こ腈水溶液為流動相，流速設(shè)定為40ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶3次，濾出晶體，得到三葉豆紫檀苷12. 9g，含量98. 2%。實施例5 取苦參藥材10Kg，粉碎，加60L65 %こ醇超聲提取2次，合并提取液，濃縮得浸膏546g,向浸膏中加入5LpH3的鹽酸水溶液超聲分散，過濾除去酸水層，固形物重復(fù)酸水洗滌3次，將所得固形物用少量こ醇溶解，經(jīng)O. 2 μ m濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-18鍵合硅膠為固定相，58%こ腈水溶液為流動相，流速設(shè)定為45ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶2次，濾出晶體，得到三葉豆紫檀苷20. 5g，含量98. 6%。實施例6:取苦參藥材10Kg，粉碎，加70L40%甲醇加熱回流提取2次，合并提取液，濃縮得浸膏708g，向浸膏中加入12LpH2的硫酸水溶液超聲分散，過濾除去酸水層，固形物重復(fù)酸水 洗滌2次，將所得固形物用少量こ醇溶解，經(jīng)O. 45 μ m濾膜濾過，再采用反相制備高效液相進(jìn)ー步分離純化，以C-8鍵合硅膠為固定相，62%甲醇水溶液為流動相，流速設(shè)定為60ml/min，設(shè)定紫外檢測器波長310nm，指導(dǎo)收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用甲醇加熱回流溶解，放冷析晶3次，濾出晶體，得到三葉豆紫檀苷22. 8g，含量98. 8%。
權(quán)利要求
1.一種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于包含以下步驟 1)提取取苦參藥材粉碎，加40 70%甲醇提取2 3次，藥材與溶劑比例為I: (5 10)，合并提取液，濃縮成浸膏； 2)酸水除雜向上述浸膏中加入5 12倍量的pHl 5的酸水，超聲分散，棄去酸水層，固形物重復(fù)以上操作2 4次，得苦參總黃酮； 3)制備高效液相進(jìn)ー步分離純化將上述苦參總黃酮用こ醇溶解，濾膜過濾，用高效液相制備色譜對其進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，放置結(jié)晶； 4)重結(jié)晶將上述結(jié)晶用甲醇熱回流結(jié)晶2 3次得三葉豆紫檀苷產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求I所述的ー種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于所述步驟I)中的提取方法可選用加熱回流法或超聲提取法，提取溫度控制在60 100°C。
3.如權(quán)利要求I所述的ー種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的酸水可以是鹽酸或硫酸水溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的ー種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的濾膜孔徑為O. 2 O. 45 μ m。
5.如權(quán)利要求I所述的ー種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的高效液相制備色譜是以反相鍵合硅膠為固定相，以甲醇水或こ腈水為流動相，紫外檢測器監(jiān)測收集目標(biāo)流分。
6.如權(quán)利要求5所述的ー種三葉豆紫檀苷的制備方法，其特征在于所述的反相鍵合硅膠是C-8或C-18鍵合硅膠。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，提供了一種三葉豆紫檀苷的制備方法。制備方法包括甲醇提取，酸水除雜得總黃酮，再經(jīng)高效液相制備色譜純化，最后用甲醇熱回流結(jié)晶得高純度的三葉豆紫檀苷。本發(fā)明制得產(chǎn)品純度高，質(zhì)量好。
文檔編號C07H17/065GK102649802SQ20111004514
公開日2012年8月29日 申請日期2011年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司