專(zhuān)利名稱：一種富集純化狼毒中狼毒素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種狼毒素的純化方法，特別是涉及一種利 用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法。
背景技術(shù)：
狼毒又叫續(xù)毒、綿大戟、山蘿卜、悶花頭、熱加巴、一掃光、搜山虎、一把香、 藥羅卜，有毒性，為瑞香科植物瑞香狼毒或大戟科植物狼毒大戟、月腺大戟的根。根 含二萜、黃酮、木脂素、香豆精類(lèi)成分，包括狼毒素(chamaejasmin)A、B、C，狼毒素、異 狼毒素(isochamae jasmin)，7_ 甲氧基狼毒素(7-methoxychamae jasmin)，新狼毒素 (neochamaejasmin)A、B，狼毒色酮(chamaechromone)及二氧山奈酷(dihydrokaempferol) 等。植物狼毒的根入藥具有瀉水逐飲、破積殺蟲(chóng)之功效；現(xiàn)代研究表明，中藥狼毒亦具有抗 癌的作用。狼毒素臨床上用于治療皮膚病，結(jié)核病，腫瘤以及慢性氣管炎等。近年來(lái)，人們發(fā) 現(xiàn)天然植物狼毒中含有大量的狼毒素，由于其原料狼毒可大片繁殖，易于栽種，來(lái)源較廣， 從中提取狼毒素已取得了可喜進(jìn)展。名稱為“一種瑞香狼毒提取物制劑及其新用途”的專(zhuān) 利申請(qǐng)中便公開(kāi)了將狼毒經(jīng)有機(jī)試劑直接浸提狼毒提取物工藝流程。上述專(zhuān)利文獻(xiàn)中的 狼毒素提取工藝主要是經(jīng)過(guò)用有機(jī)試劑浸提等步驟提取而成，其分離效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如間歇蒸 餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法處理后在進(jìn)行硅膠柱層析分離的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對(duì)較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種 利用間歇蒸餾大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法，其步驟 如下(1)將干狼毒粉碎后用甲醇加熱回流提取；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的狼毒提取液抽濾，將提取液減壓回收甲醇得初提物；(3)將所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 0 2. 5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減 壓濃縮得狼毒素粗提物；(4)將所得狼毒素粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度的乙醇對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼 毒素各階段洗脫液；(6)將狼毒素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得狼毒素半成品，其含量為35%以上；(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并以丙酮，甲醇以不同體積比例進(jìn)行洗 脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒素各階段洗脫液；(8)將所收集的狼毒素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得狼毒素，其含量在95%以上。所述的步驟(1)中，狼毒粉碎后過(guò)40 80目篩在進(jìn)行有機(jī)溶劑提取。所述的步驟(1)中，甲醇濃度為75%，提取時(shí)間為3 4小時(shí)，可提取2 3次。所述的步驟(1)中，提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取 法中的一種或一種以上。所述的步驟(1)中，加入甲醇的體積為狼毒粉碎體積的5 10倍。所述的步驟(3)中，調(diào)節(jié)PH值所用的酸為磷酸。所述的步驟中所用的大孔吸附樹(shù)脂為天津南開(kāi)大學(xué)所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹(shù)脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng) 態(tài)吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫為用30 90%的乙醇進(jìn)行洗脫。所述的在步驟( 和(7)中，所采取的檢測(cè)方法均為薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。所述的步驟(7)中所采取的丙酮與甲醇的體積為1 7 1。本發(fā)明應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附技術(shù)耦合分離純化狼毒素，對(duì)狼毒素的吸附選擇 性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分 離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35%以上的狼毒素半成品和含量95%以上的狼毒 素終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力 強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽 類(lèi)及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附狼毒素， 吸附快、解析也快，吸附容量較大。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 一種利用間歇蒸餾大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方 法，其步驟如下(1)將干狼毒粉碎后過(guò)60目篩，用狼毒粉體積5倍的甲醇加熱回流提取2次，每次 2小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的狼毒提取液抽濾，將提取液減壓回收甲醇得初提物；(3)將所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得狼毒素；(4)將所得狼毒素提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天 津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-II型樹(shù)脂；(5)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層柱中依
次進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒素各階段洗脫液；(6)將狼毒素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量為35%狼毒素半成品；(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒 素各階段洗脫液；(8)將所收集的狼毒素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量95% 狼毒素。
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實(shí)施案例2 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的 方法，其步驟如下(1)將干狼毒粉碎后過(guò)80目篩，用狼毒粉體積8倍的甲醇加熱回流提取3次，每次 2小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的狼毒提取液抽濾，將提取液減壓回收甲醇得初提物；(3)將所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 3，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得狼毒素粗提 物；(4)將所得狼毒素粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂為天津南開(kāi) 大學(xué)所生產(chǎn)的D4006型樹(shù)脂；(5)用30^^50^^70^^90%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟 蹤檢測(cè)，收集狼毒素各階段洗脫液；(6)將狼毒素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量36. 4%狼毒素半成品；(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒 素各階段洗脫液；(8)將所收集的狼毒素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量 96. 8%狼毒素。實(shí)施案例3 —種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的 方法，其步驟如下(1)將干狼毒粉碎后過(guò)40目篩，用狼毒粉體積10倍的甲醇加熱回流提取3次，每 次3小時(shí)；(2)將經(jīng)步驟(1)處理的狼毒提取液抽濾，將提取液減壓回收甲醇得初提物；(3)將所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2. 5，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得狼毒素粗提 物；(4)將所得狼毒素粗提物用大孔吸附樹(shù)脂層析柱子、上進(jìn)行吸附，所用的大孔樹(shù)脂 為天津南開(kāi)大學(xué)所生產(chǎn)的NKA-9型樹(shù)脂；(5)用40^^60^^80%的乙醇在大孔吸附樹(shù)脂層析柱子中依次進(jìn)行梯度洗脫，用 薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒素各階段洗脫液；(6)將狼毒素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量37%狼毒素半成品；(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的體積比進(jìn)行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測(cè)，收集狼毒 素各階段洗脫液；(8)將所收集的狼毒素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到含量97% 狼毒素。
權(quán)利要求
1.一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法，其特征在 于，其步驟如下(1)將干狼毒粉碎后用甲醇加熱回流提?。?2)將經(jīng)(1)處理的狼毒素提取液過(guò)濾，回收甲醇得初提物；(3)將所收獲初提物調(diào)PH值至2-2.5，分離、收集沉淀物，并用水洗滌至中性，得到狼毒 素的粗提物。(4)將所得狼毒素粗提物用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對(duì)大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行洗脫，收集狼毒素各階段洗脫液；(6)將狼毒素洗脫液濃縮回收洗脫劑，得狼毒素半成品；(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并以甲醇，丙酮以不同體積比進(jìn)行洗脫，收集 狼毒素各階段洗脫液；(8)將所收集到的狼毒素洗脫液進(jìn)行精制的狼毒素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法其特質(zhì)是所述的步驟(1)中，狼毒粉后過(guò)40 80目篩再進(jìn)行甲醇加熱回流提取。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在所屬的步驟(1)中，甲醇的醇度為75%，提取時(shí)間為3 4小時(shí)，可提 取2 3次。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是所述的步驟(1)中，提取的方法為浸漬法、回流提取法，滲漉法、煎煮法、 連續(xù)提取法中的一種或一種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是；所屬的步驟(1)中，加入甲醇的體積為狼毒粉體積的5 10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在所述的步驟(3)中，調(diào)節(jié)PH值所用的酸為磷酸
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是步驟中所述吸附為靜態(tài)吸附或動(dòng)態(tài)吸附步驟(5)中所述的洗脫為 用30 90%的乙醇水溶液進(jìn)行洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在步驟( 和(7)中，洗脫過(guò)程中采用薄層色譜法跟蹤檢測(cè)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是步驟(7)中所采用丙酮與甲醇得體積比為1 7 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒 素的方法，其特征是在步驟(8)中，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法進(jìn)行精制。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹(shù)脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法。其特點(diǎn)是應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附耦合技術(shù)分離純化狼毒素，對(duì)狼毒素的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來(lái)源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的狼毒素半成品和含量95％以上的狼毒素終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對(duì)較低、提取純度低的缺點(diǎn)。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹(shù)脂，可以通過(guò)物理吸附從溶液中有選擇地吸附狼毒素，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
文檔編號(hào)C07D311/40GK102093327SQ20101062313
公開(kāi)日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者劉德文, 姚德利, 姚德坤, 姚航, 鄭君, 閆峰, 黃運(yùn)生 申請(qǐng)人:大興安嶺林格貝有機(jī)食品有限責(zé)任公司