專利名稱：雜交瘤細(xì)胞株d6d的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分泌赭曲霉毒素A (Ochratoxin Α，0ΤΑ)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株 D6D，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及抗體工程技術(shù)。
背景技術(shù)：
赭曲霉毒素(Ochratoxins)是一類主要由曲霉屬真菌(例如，赭曲霉 AspergillusOchraceusjt色曲霄Aspergillus Fresenii等)禾口青霄屬真菌產(chǎn)生的真菌毒 素。OTA是赭曲霉素的主要組分，也是導(dǎo)致赭曲霉素中毒的主要原因，其促癌性和致癌性已 在大鼠中得到證實(shí)。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，OTA對谷物制品的污染可能與人類巴爾干地區(qū)腎 病有一定相關(guān)性。國際癌癥研究中心(IARC)已把OTA劃分為2B類致癌物。OTA的結(jié)構(gòu)為苯甲酸異香豆素。它是一種穩(wěn)定的無色結(jié)晶化合物，呈弱酸性，溶于 極性溶劑和碳酸氫鈉溶液，微溶于水，其甲醇溶液在冰箱中保存一年不會分解。OTA分子式 C20H18ClNO6,分子量為404，是一種半抗原物質(zhì)。 OTA的化學(xué)結(jié)構(gòu)式OTA廣泛存在于小麥、大麥、燕麥、玉米等谷物和咖啡豆、葡萄等農(nóng)產(chǎn)品及制品 中，對人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展構(gòu)成潛在威脅。食品添加劑和污染物法典委員會(The CodexCommittee on Food Additives and Contaminants，CCFAC)等國際組織認(rèn)為，OTA 是 一種關(guān)系重大公共衛(wèi)生安全的真菌毒素。第56次FA0/WH0食品添加劑聯(lián)合專家委員會 (JECFA)會議制定OTA的限量標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為小麥、大麥和黑麥等谷物及其制品中OTA限量為 5 μ gkg-1 ο鑒于OTA的危害，通過制備其單克隆抗體，可為赭曲霉毒素抗原性研究和OTA免疫 學(xué)檢測方法的建立提供必要組分和技術(shù)手段，對探索OTA各結(jié)構(gòu)區(qū)域的生物學(xué)功能和建立 OTA的特異、靈敏的檢測方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供分泌OTA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。本發(fā)明的單克隆抗體
是將牛血清白蛋白(BSA)作為載體蛋白與OTA偶聯(lián)制備完全抗原，免疫BALB/c小鼠，利用雜交瘤技術(shù)獲得能特異識別OTA的單克隆抗體D6D。技術(shù)方案一種OTA單克隆抗體，其特征在于該單克隆抗體是雜交瘤細(xì)胞株D6D產(chǎn)生的，雜 交瘤細(xì)胞株D6D于2010年5月27日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO :C201052o制備方法包括1)免疫抗原OTA-BSA的制備配制OTA的二甲基亞砜(DMSO)溶液，加入N-羥基琥珀酰胺(NHS)和1_(3_ 二甲 氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)進(jìn)行OTA的活化。將上述溶液緩慢滴加于牛血清白蛋 白(BSA)溶液進(jìn)行OTA與BSA的偶聯(lián)，反應(yīng)產(chǎn)物用磷酸鹽緩沖液(PBS)透析，得到OTA與載 體蛋白的偶聯(lián)物。2)小鼠免疫本實(shí)驗(yàn)采用小劑量長周期的免疫方案。使用偶聯(lián)蛋白OTA-BSA作為免疫抗原，對7 周齡的雌性BALB/c小鼠(購自揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心)進(jìn)行免疫。按200yg/只的免疫 劑量對BALB/c小鼠進(jìn)行8次免疫，最后一次免疫三天后摘取小鼠脾臟，做細(xì)胞融合。3)細(xì)胞融合取Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞(江蘇省農(nóng)科院惠贈)與免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞按比例均 勻混合，在50%聚乙二醇4000 (PEG 4000)作用下進(jìn)行細(xì)胞融合，用含20% FCS (購于上海 慧人生物科技工程研究所)和HAT (購于Invitrogen公司)的1640培養(yǎng)基(購自Gibico 公司)在5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)14d后，逐步用20% FCS和HT (購于Invitrogen公 司)的1640培養(yǎng)基和20% FCS的1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，當(dāng)融合的細(xì)胞生長至96孔板孔底面積 的1/5時，取上清進(jìn)行抗OTA單克隆抗體檢測。4)雜交瘤篩選用OTA-血藍(lán)蛋白(KLH)的碳酸鹽緩沖液做包被原，以1 %明膠做封閉液， 1 10000的辣根過氧化物酶標(biāo)的羊抗鼠IgG作為二抗(購自博士德生物技術(shù)公司)， TMB-H2O2為底物，2mol L—1硫酸溶液為終止液，PBST做洗液，1 800稀釋的陽性參考血清 和1 800稀釋的陰性參考血清做對照的間接酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，對雜交瘤細(xì)胞上清 中的抗OTA抗體分泌情況進(jìn)行檢測，篩選分泌抗OTA抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)酶標(biāo)儀測 定OD45tlnm值以空白對照調(diào)零，當(dāng)陽性參考血清的OD45tlnm值與陰性參考血清的OD45tlnm值的比 值> 2. 1，檢測孔判為陽性，當(dāng)陽性參考血清的OD45tlnm值與陰性參考血清的OD45tlnm值的比值 < 1. 5的檢測孔判為陰性，比值介于中間判為可疑。5)有限稀釋法對雜交瘤細(xì)胞亞克隆首先將陽性孔活細(xì)胞用臺盼蘭進(jìn)行染色和計(jì)數(shù)，用1640完全培養(yǎng)基稀釋成100個 細(xì)胞/15mL培養(yǎng)基，將稀釋的細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，達(dá)到每孔1個細(xì)胞，在37°C、 5%0)2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)8 9d時取細(xì)胞上清，及時進(jìn)行ELISA檢測。選擇陽性的單 克隆細(xì)胞再進(jìn)行同樣的亞克隆3次以上，直至該細(xì)胞所有孔的上清液檢測均為陽性且各孔 檢測OD值較接近，將多次亞克隆培養(yǎng)后的陽性細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)和凍存。6)抗OTA單克隆抗體的制備將PBS稀釋的5X IO6 IX IO7個陽性雜交瘤細(xì)胞注入成年BALB/c小鼠腹腔，5 IOd后采集腹部明顯鼓起小鼠的腹水，離心，收集上清。
7)抗OTA單克隆抗體純度的鑒定_變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)抗OTA的單克隆抗體腹水溶液與5 X上樣緩沖液混合，水浴煮沸變性，經(jīng)變性聚丙 烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，考馬斯亮藍(lán)R250染色，根據(jù)電泳的抗體蛋白條帶質(zhì)量大小， 驗(yàn)證抗體的存在。(六)抗體亞型的鑒定用 Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit(Rache Iso strip, cat. NO. 14932027)對抗OTA單克隆抗體進(jìn)行亞型測試。有益效果本發(fā)明的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)如下1、本發(fā)明提供的抗原制備方法簡便可行。2、本發(fā)明提供的OTA單克隆抗體特異性強(qiáng)，制備方法簡單。3、本發(fā)明提供的特異性單克隆抗體可用于OTA的研究和OTA免疫學(xué)檢測方法的建 立。4、獲得穩(wěn)定分泌OTA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株D6D，測得D6D腹水ELISA效價(jià)為 1 3200。經(jīng)鑒定該單克隆抗體為IgG2b類抗體，抗體輕鏈為κ亞型。


圖1偶聯(lián)抗原紫外連續(xù)波譜掃描檢測圖2純化后單抗的電泳圖 生物保藏
雜交瘤細(xì)胞株D6D，于2010年5月27日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址武漢 武漢大學(xué)郵編430072，保藏編號為CCTCC C201052。
具體實(shí)施例方式(一 )免疫抗原OTA-BSA的制備與檢測OTA的活化取Img OTA溶解于0. 25mL DMSO溶液中，分別量取NHS和EDC加入上 述溶液中(0ΤΑ NSH EDC摩爾比為1 2 4)，室溫下避光劇烈搖動2h，之后4°C反應(yīng) 過夜。OTA的偶聯(lián)將上述溶液緩慢滴加于BSA溶液(2mg蛋白溶于ImL 0. Imol L—1碳酸 氫鈉溶液中)，加入磁力轉(zhuǎn)子，置于磁力振蕩器上，室溫下避光振蕩2h ；反應(yīng)產(chǎn)物于0. 05mol L1PBS緩沖液中4°C下避光透析72h，每5h更換透析液一次，得到OTA與載體蛋白的偶聯(lián)物。偶聯(lián)好的完全抗原通過紫外連續(xù)掃描法進(jìn)行驗(yàn)證。配置OTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，BSA標(biāo)準(zhǔn)溶 液和偶聯(lián)完全抗原稀釋液。BSA標(biāo)準(zhǔn)溶液在280nm出現(xiàn)最大吸收峰，OTA標(biāo)準(zhǔn)溶液在379nm 出現(xiàn)最大吸收峰。在200 400nm波長內(nèi)，間隔5nb進(jìn)行連續(xù)波長掃描。結(jié)果如圖1。( 二)雜交瘤細(xì)胞株的建立1)小鼠免疫本實(shí)驗(yàn)采用小劑量長周期的免疫方案。使用偶聯(lián)蛋白OTA-BSA作為免疫抗原，對 7周齡的雌性BALB/c小鼠進(jìn)行免疫。按200 μ g/只的免疫劑量，與弗氏完全佐劑1 1 (V/ V)混合，乳化30min，達(dá)到油包水狀，在水中不溶解或4°C過夜不分層視為有效乳化。將乳化 的完全抗原，頸背部多點(diǎn)皮下注射免疫BALB/c小鼠(200yg/只)；2周后，以相同抗原和等 體積的弗氏不完全佐劑乳化，200μ g/只進(jìn)行加強(qiáng)免疫；7次免疫后，不加佐劑以200μ g/只
5進(jìn)行腹腔注射加強(qiáng)免疫。從第三次開始，每次免疫一周后尾靜脈或眼球采血，37°C靜置lh， 4°C過夜析出血清，3000r miiT1離心lOmin，分離血清測試血清滴度。最后一次免疫三天后 摘取小鼠脾臟，做細(xì)胞融合。2)細(xì)胞融合取Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞與免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞按1 5 1 10的比例混 合于50mL離心管中，充分混勻，IOOOrpm離心lOmin，棄上清，用手掌輕擊管底，使細(xì)胞松散 均勻，置40°C水浴預(yù)熱，用ImL吸管在45s內(nèi)加完預(yù)熱至40°C的ImL 50% PEG 4000，邊加 邊輕輕振蕩，然后在90s內(nèi)加入30mL預(yù)熱至37°C的1640不完全培養(yǎng)基，室溫靜置10 min, IOOOrpm離心lOmin，棄上清，加入20mL含20% FCS和HAT的1640培養(yǎng)基重懸。分裝到已 有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板上，于5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，7d后，觀察細(xì)胞的生長狀況，用含有20% FCS和HT的1640培養(yǎng)基換出1/2培養(yǎng)基；14d后，改用20% FCS和HT 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)， 當(dāng)融合的細(xì)胞生長至96孔板孔底面積的1/5時，取上清進(jìn)行抗體檢測。3)抗OTA雜交瘤細(xì)胞的篩選用包被液為0. 05mol L—1 pH 9. 6碳酸鹽緩沖液，將偶聯(lián)好的包被抗原(0TA-KLH)， 做倍比稀釋包被ELISA板，100 μ L/孔，置4°C包被過夜；PBST洗滌3次，每次5min，最后一次 拍干；以1 %明膠封閉每孔，300 μ L/孔，37°C放置2h ；PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍 干；將細(xì)胞上清、1 800稀釋的陽性參考血清和1 800稀釋的陰性參考血清，加入相應(yīng)孔 內(nèi)，10(^17孔，371作用601^11; 8511洗滌3次，每次51^11，最后一次拍干；加入1 10000 稀釋的酶標(biāo)羊抗鼠IgG，100 μ L/孔，37°C放置60min ；PBST洗滌5次，每次5min，最后一次 拍干；加入底物TMB-H2O2，100 μ L/孔，室溫避光顯色15min ；每孔加入100 μ L 2mol L-1硫酸 溶液終止反應(yīng)。經(jīng)酶標(biāo)儀測定OD45tlnm值以空白對照調(diào)零，當(dāng)陽性參考血清的OD45tlnm值與陰 性參考血清的OD45tlnm值的比值彡2. 1，檢測孔判為陽性，當(dāng)陽性參考血清的OD45tlnm值與陰性 參考血清的OD45tlnm值的比值< 1. 5的檢測孔判為陰性，比值介于中間判為可疑。4)有限稀釋法對陽性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行亞克隆對于篩選所得的分泌特異性單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞，及時采用有限稀釋法 進(jìn)行亞克隆。首先將陽性孔活細(xì)胞用臺盼蘭進(jìn)行染色和計(jì)數(shù)，用1640完全培養(yǎng)基稀釋成 100個細(xì)胞/15mL培養(yǎng)基，將稀釋的細(xì)胞懸液加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，0. 15mL/孔，在37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4 5d后，顯微鏡下可觀察克隆細(xì)胞的形成，記錄只有單個克隆生 長孔，8 9d時取細(xì)胞上清，及時進(jìn)行ELISA檢測。選擇陽性的單克隆細(xì)胞再進(jìn)行同樣的亞 克隆3次以上，直至所有細(xì)胞孔上清液檢測均為陽性、且各孔檢測OD值較接近；將多次亞克 隆培養(yǎng)后的陽性細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)和凍存，獲得穩(wěn)定分泌OTA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株命名 為 D6D。(三)生產(chǎn)抗OTA單克隆抗體的腹水將石蠟油注射成年BALB/c小鼠，0. 5mL/只，致敏7天后，將陽性雜交瘤細(xì)胞用 0. Olmol L-1PBS稀釋后注入小鼠腹腔，每只小鼠注射5 X IO6 1 X IO7,0. 2mL, 5 IOd后采 取腹部明顯鼓起小鼠的腹水，IOOOOrpm,離心5min，收集上清，小量分裝，_70°C保存。(四)抗OTA單克隆抗體的腹水效價(jià)測定用PBS緩沖液1 100稀釋單克隆抗體腹水，然后進(jìn)行倍比稀釋，加入KLH-OTA 包被的酶標(biāo)板，100 μ L/孔，370C，孵育60min ；PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；加入1 10000稀釋的HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG，100yL/孔，37°C，孵育60min ;PBST洗滌5次， 每次5min，最后一次拍干；加入底物TMB-H2O2，100 μ L/孔，室溫避光顯色15min ；每孔加入 100 μ L 2mol Γ1硫酸終止反應(yīng)；用酶標(biāo)儀測定OD45tlnm值。以陰性O(shè)D45tlnm值小于0. 2，檢測孔 與陰性O(shè)D45tlnm值的比值大于2. 1判為陽性，以陽性孔的最大稀釋度作為單克隆抗體的腹水 效價(jià)。結(jié)果顯示，D6D細(xì)胞株腹水間接ELISA效價(jià)為1 3200。(五)抗OTA單克隆抗體純度的鑒定一變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)配制IOmL 12%分離膠溶液。迅速在兩玻璃板之間灌注分離膠，上面用水密封。約 30min后，待分離膠完全聚合，倒出覆蓋膠上層的水，用濾紙吸干。配制5%濃縮膠，灌注在 分離膠上，之后立即插入梳子，小心氣泡。待濃縮膠凝固后，小心拔出梳子，用電泳緩沖液清 洗孔洞。樣品與5 X上樣緩沖液按比例混合，水中加熱煮沸l(wèi)Omin，離心，每孔上樣約20 μ L。 加滿電泳緩沖液，80V電泳，當(dāng)樣品在濃縮膠內(nèi)壓成一條直線后，調(diào)節(jié)電壓至120V，直到溴 酚藍(lán)到達(dá)分離膠底部，關(guān)閉電源。卸下玻璃板，用刮勺敲開玻璃板，在一邊做記號后，刮下凝 膠?？捡R斯亮藍(lán)R250染液染色2h。脫色過夜至條帶清晰可見，拍照，如圖2。(六)抗體亞型的鑒定用Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit 進(jìn)行測試。首先用 PBS 將腹水進(jìn) 行稀釋，至抗體濃度為0. 1 1118111廠1，取15(^1^加入測試管。15 25°C，30s，然后搖動 渦旋管子，使管內(nèi)藍(lán)色膠質(zhì)充分懸浮，黑頭朝下插入試紙條，5 IOmin后，參照陽性對照， 出現(xiàn)藍(lán)色條帶處即為該抗體亞型類別。該單克隆抗體的亞型為IgG2b，輕鏈為κ鏈。
權(quán)利要求
一種OTA單克隆抗體，其特征在于該單克隆抗體是雜交瘤細(xì)胞株D6D產(chǎn)生的，雜交瘤細(xì)胞株D6D于2010年5月27日寶藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NOC201052。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種OTA單克隆抗體，其特征在于，是由以下方法制備而獲得的1)免疫抗原OTA-BSA的制備取Img OTA溶解于0. 25mLDMS0溶液中，加入NHS和EDC，室溫下避光劇烈搖動2h，再 40C反應(yīng)過夜，將上述溶液緩慢滴加于BSA溶液，室溫下避光振蕩2h，反應(yīng)產(chǎn)物于0. 05mol Γ1 PBS緩沖液中避光透析72h，得到OTA與載體蛋白的偶聯(lián)物；2)小鼠免疫本實(shí)驗(yàn)采用小劑量長周期的免疫方案，使用偶聯(lián)蛋白OTA-BSA作為免疫抗原，對7周齡 的雌性BALB/c小鼠進(jìn)行免疫，按200 μ g/只的免疫劑量，與弗氏完全佐劑按體積比1 1 混合，乳化達(dá)到油包水狀，將乳化的完全抗原，頸背部多點(diǎn)皮下注射免疫BALB/c小鼠， 200 μ g/只，2周后，以相同抗原和等體積的弗氏不完全佐劑乳化，200 μ g/只進(jìn)行加強(qiáng)免 疫，7次免疫后，不加佐劑以200μ g/只進(jìn)行腹腔注射加強(qiáng)免疫，最后一次免疫三天后摘取 小鼠脾臟，做細(xì)胞融合；3)細(xì)胞融合取Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞與免疫的BALB/c小鼠脾細(xì)胞按1 5 1 10的比例混合均勻， IOOOrpm離心lOmin，棄上清，用手掌輕擊管底，使細(xì)胞松散均勻，置40°C水浴預(yù)熱，用ImL 吸管在45s內(nèi)加完預(yù)熱至40°C的ImL 50% PEG 4000，邊加邊輕輕振蕩，然后在90s內(nèi)加入 30mL預(yù)熱至37°C的1640不完全培養(yǎng)基，室溫靜置lOmin，IOOOrpm離心lOmin，棄上清，加入 20mL含20% FCS和HAT的1640培養(yǎng)基重懸，分裝到已有飼養(yǎng)細(xì)胞的96孔板上，于5% C02 培養(yǎng)箱培養(yǎng)，7d后，觀察細(xì)胞的生長狀況，用含有20% FCS和HT的1640培養(yǎng)基換出1/2培 養(yǎng)基，14d后，改用20% FCS和HT 1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，當(dāng)融合的細(xì)胞生長至96孔板孔底面積 的1/5時，取上清進(jìn)行抗體檢測；4)篩選分泌抗OTA抗體的雜交瘤細(xì)胞用包被液為0.05mol Γ1 pH 9. 6碳酸鹽緩沖液，將偶聯(lián)好的包被抗原0TA-KLH，做倍比 稀釋包被ELISA板，100 μ L/孔，置4°C包被過夜，PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干， 以1 %明膠封閉每孔，300 μ L/孔，37°C放置2h，PBST洗滌3次，每次5min,最后一次拍干， 將細(xì)胞上清、1 800稀釋的陽性參考血清和1 800稀釋的陰性參考血清，加入相應(yīng)孔內(nèi)， 10(^17孔，371作用601^11，？8511洗滌3次，每次51^11，最后一次拍干，加入1 10000稀 釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG，100 μ L/孔，37°C放置60min，PBST洗滌5次，每次 5min，最后一次拍干，加入底物TMB-H2O2，100 μ L/孔，室溫避光顯色15min，每孔加入100 μ L 2mol Γ1硫酸溶液終止反應(yīng)，經(jīng)酶標(biāo)儀測定OD45tlnm值，判定陽性雜交瘤細(xì)胞，對陽性雜交瘤 細(xì)胞經(jīng)有限稀釋法進(jìn)行亞克隆獲得穩(wěn)定分泌抗赭曲霉毒素A單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株 命名為D6D;5)抗OTA單克隆抗體的亞型用Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit進(jìn)行測試，該抗OTA單克隆抗體亞型 為IgG2b，輕鏈為κ鏈。
全文摘要
本發(fā)明涉及雜交瘤細(xì)胞株D6D的研制，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。用BSA與OTA偶聯(lián)后的OTA-BSA免疫BALB/c小鼠，取其脾細(xì)胞與Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用HAT培養(yǎng)基進(jìn)行選擇性培養(yǎng)。用KLH與OTA偶聯(lián)后的完全抗原OTA-KLH作為ELISA的包被抗原，用間接ELISA方法，對雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中的抗體含量進(jìn)行檢測，篩選獲得穩(wěn)定分泌抗OTA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株D6D，測得D6D腹水ELISA效價(jià)為1∶3200，經(jīng)鑒定該單克隆抗體可與OTA特異性結(jié)合，純化的單克隆抗體的SDS-PAGE電泳圖呈現(xiàn)兩條蛋白條帶分別約是50KD、25KD，與抗體蛋白變性成兩條輕鏈重鏈的分子量大小吻合，再次表明獲得抗OTA特異性抗體的事實(shí)，該單克隆抗體的亞型為IgG2b，輕鏈為κ鏈。本發(fā)明提供的特異性單克隆抗體可用于OTA的研究和OTA免疫學(xué)檢測方法的建立。
文檔編號C07K16/14GK101906159SQ20101020441
公開日2010年12月8日 申請日期2010年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月21日
發(fā)明者何成華, 張海彬, 張愛華, 王希春, 王瑩 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)