抗cd56蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產生的抗cd56單克隆抗體和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及生物技術領域，特別設及一種抗CD56蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及 其產生的抗CD56單克隆抗體和應用。
【背景技術】 陽00引CD56又稱為神經細胞粘附分子（N-CAM)，屬于I型跨膜糖蛋白。廣泛存在于大部分 的神經外胚層來源的細胞、組織和腫瘤中，包括視網膜母細胞瘤、髓母細胞瘤、星形細胞瘤、 神經母細胞瘤、小細胞癌，也表達于一些中胚層衍生的腫瘤、自然殺傷細胞和NK淋己瘤。
[0003] CD56的表達量可反映腫瘤細胞的遷移能力，目前臨床上通常通過免疫組織化學 (IHC)病理實驗檢測腫瘤細胞中CD56蛋白的表達狀況。IHC實驗的核屯、為特異性結合CD56 蛋白的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個檢測的靈敏度和特異性。因此，研制出一 種結合特異性較高的針對CD56蛋白的單克隆抗體具有重要的意義。

【發(fā)明內容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明提供一種抗CD56蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產生的抗 CD56單克隆抗體和應用。本發(fā)明所述單克隆抗體可與CD56蛋白特異性結合，而與細胞內其 他蛋白無交叉反應，顯著提高了CD56蛋白免疫檢測的特異性、準確性和可靠性，真實反映 腫瘤細胞內CD56蛋白表達水平，可應用于視網膜母細胞瘤、髓母細胞瘤、星形細胞瘤、神經 母細胞瘤、小細胞癌、NK淋己瘤和自然殺傷細胞的輔助診斷與分型。
[0005]為了實現上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供W下技術方案：
[0006] 本發(fā)明提供了一種單克隆抗體，其與CD56蛋白特異性結合。
[0007] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，單克隆抗體由保藏編號為CGMCC No.11081的雜 交瘤細胞株產生。
[0008] 本發(fā)明還提供了所述單克隆抗體在制備用于檢測CD56蛋白的免疫檢測工具中的 應用。
[0009] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述免疫檢測工具為試劑、試劑盒、忍片或試 紙。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種免疫組化檢測試劑盒，包括所述單克隆抗體。
[0011] 本發(fā)明還提供了所述單克隆抗體在制備用于標記組織細胞的試劑或試劑盒中的 應用。
[0012] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述免疫組化檢測試劑盒中所述組織細胞為自 然殺傷（NK)細胞、NK樣T細胞、神經、神經內分泌組織或相關腫瘤。所述相關腫瘤為與上 述細胞、組織類型相同的腫瘤。
[0013] 本發(fā)明還提供了一種標記組織細胞的試劑盒，包括所述單克隆抗體。
[0014] 在本發(fā)明的一些具體實施方案中，所述標記組織細胞的試劑盒中所述組織細胞為 自然殺傷（NK)細胞、NK樣Τ細胞、神經、神經內分泌組織或相關腫瘤。所述相關腫瘤為與 上述細胞、組織類型相同的腫瘤。
[0015] 本發(fā)明還提供了一種雜交瘤細胞株，其保藏編號為CGMCCNo. 11081。
[0016] 與現有技術相比，本發(fā)明提供了一種雜交瘤細胞株（保藏編號為CGMCC No. 11081)，W及由此雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體Umab83。本發(fā)明還提供了單克隆抗體 Umab83在制備用于檢測CD56蛋白的免疫檢測工具中的應用，含單克隆抗體Umab83的免疫 組化試劑盒，W及單克隆抗體Um油83在制備用于標記腫瘤的試劑盒中的應用。本發(fā)明所述 單克隆抗體可與CD56蛋白特異性結合，而與細胞內其他蛋白無交叉反應，顯著提高了CD56 蛋白免疫檢測的特異性、準確性和可靠性，真實反映腫瘤細胞內CD56蛋白表達水平，可應 用于視網膜母細胞瘤、髓母細胞瘤、星形細胞瘤、神經母細胞瘤、小細胞癌、NK淋己瘤和自然 殺傷細胞的輔助診斷與分型。
[0017] 生物保藏說明
[0018] 用于保藏的雜交瘤細胞株UMAB83的分類命名為：神經細胞黏附分子1 (CD56)單克 隆抗體雜交瘤細胞株；
[0019] 保藏單位全稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、；
[0020] 保藏單位簡稱：CGMCC;
[0021] 保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所； 陽02引保藏日期：2015年07月03日；
[0023]保藏編號：CGMCCNo. 11081。
【附圖說明】
[0024] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[00對圖1示實施例1克隆位點設計如圖，其中底紋部分為0RF區(qū)；
[00%] 圖2示實施例2重組CD56蛋白Westernblot檢測結果圖，Wanti-孤K檢測重組CD56蛋白在肥K293T細胞中的表達，其中左側泳道為轉染空載體的肥K293T細胞裂解液為 抗原的檢測結果、右側泳道為轉染pCMV6-rCD56質粒的肥K293T細胞裂解液抗原的檢測結 果；
[0027] 圖3示實施例2重組CD56蛋白SDS-PAGE結果圖，用抗孤K親和層析柱純化重組 CD56蛋白，純化后的蛋白通過SDS-PAGE膠電脈、考馬斯亮藍染色； 陽02引 圖4示實施例3W單克隆抗體Um油83識別完整的CD56(Fulllength CD56，CD56-FL)蛋白的Westernblot檢測結果圖。泳道1為轉染pCMV6-Ent巧的細胞裂解 液；泳道2為轉染PCMV6-CD56-化的細胞裂解液；
[0029] 圖5示實施例4福爾馬林固定、石蠟包埋的成年人大腦組織免疫組化結果圖（一 抗為CD56單克隆抗體Um油83);
[0030] 圖6示實施例4福爾馬林固定、石蠟包埋的人胚胎小腦組織免疫組化結果圖（一 抗為CD56單克隆抗體Um油83);
[0031] 圖7示實施例5化iGene蛋白忍片鑒定結果圖（一抗為CD56單抗Um油83,1:100; 二抗為DyLi邑ht649-conju邑曰ted AffiniPure Fragment Go曰t-曰nti_Mouse I邑G，1:400)。
【具體實施方式】
[0032] 本發(fā)明公開了一種抗CD56蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞及其產生的抗CD56單克隆 抗體和應用，本領域技術人員可W借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的 是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本 發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本

【發(fā)明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和 應用本發(fā)明技術。
[0033] 本發(fā)明提供了一種雜交瘤細胞株，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微 生物中屯、（簡稱為CGMCC)，保藏日期為2015年07月03日，保藏編號為CGMCCNo. 11081。
[0034] 本發(fā)明還提供了一種特異性結合CD56蛋白的單克隆抗體Umab83,由上述雜交瘤 細胞株產生。
[0035] 本發(fā)明所述單克隆抗體的制備方法如下：
[0036] (1)重組表達載體的構建：根據CD560RF核巧酸序列（CD560RF核巧酸序列如SEQ IDNO. 1所示，2574bp;CD56氨基酸序列如沈QIDNO. 2所示）
[0037] 設計引物PCR擴增CD560RF第58bp位到第2154bp位序列，基因兩側分別引入限 制性內切酶位點Sgfl和Mlul，插入表達載體pCMV6-Entry，構建CD56氨基酸序列第20位 到第718位的重組表達質粒pCMV6-rCD56 ;上游擴增引物序列，SEQIDNO. 3:CACGCGATCGCA TGCTGCAGGTGGATATTGTTC下游擴增引物序列沈QIDNO. 4:ACCGACGCGTCACCAGGAGCAGGACGAA GAT
[0038] (2)CD56重組蛋白的表達與純化：將CD56重組表