專利名稱：誘導(dǎo)淀粉樣前體蛋白裂解以形成新片段的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)淀粉樣前體蛋白(APP)的加工，且特別地涉及誘導(dǎo)APP裂解以形成新蛋白片段。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默氏癥(AD)是神經(jīng)組織退化性疾病，對(duì)其僅存在對(duì)癥治療且具有有限的功效。某些APP的β -淀粉樣(Α β )片段，尤其是A β H0和A β H2涉及AD的病理學(xué)。已進(jìn)行A β的減小作為修改AD過(guò)程的方法(Barten, D.和C. Albright，Mol. Neurobiol. 37 171-186 (1998))。然而，迄今為止，該方法沒(méi)有產(chǎn)生經(jīng)批準(zhǔn)的療法。已嘗試使用對(duì)Αβ的主被動(dòng)免疫法來(lái)治療AD。一種這樣的免疫方法已經(jīng)在人試驗(yàn)中失敗(Holmes,C.等人，Lancet (柳葉刀)372 :216-23 (2008))。Αβ免疫療法的局限性可能是其僅靶向已經(jīng)形成的Αβ。其不減緩或停止產(chǎn)生新的Αβ，且實(shí)際上，甚至可能刺激增加產(chǎn)生新的Aβ。治療AD的其它嘗試涉及在能夠產(chǎn)生有害的A β片段之前，抑制APP加工中已知的酶。這些酶靶標(biāo)為Y-分泌酶和β-分泌酶。由于許多這樣的抑制劑影響其它Y-分泌酶底物的裂解且因此為有毒的，從而未證明Y-分泌酶抑制劑為有用的(Czirr，Ε.和 S. ffeggen, Neurodegenerative Dis.(神經(jīng)組織退化性疾病)3 :298-302 Q006) ；Tomita, T. ， Nauyn-Schmiedegerg ‘ s Arch. Pharmacol. 377 :295-300(2008)) ；Milano, J.等人， Toxicological Sciences (毒物科學(xué))82 :341-358 (2004))。還未證明Y-分泌酶調(diào)節(jié)劑為有用的。Y-分泌酶調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括非留族消炎藥(NSAIDs)，其為Y-分泌酶的別構(gòu)調(diào)節(jié)劑。這樣的化合物沒(méi)有毒性，但已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的化合物僅具有高的微摩爾體外效力，從而其太弱而不具有足夠的臨床效果(Czirr，Ε.和 S. ffeggen,Neurodegenerative Dis. 3 =298-304(2006)) 最近，原型 Y-分泌酶調(diào)節(jié)劑氟比洛芬未通過(guò)第III階段臨床試驗(yàn)。此外，未證實(shí)使用β -分泌酶抑制劑治療AD的在先嘗試為有用的，因?yàn)榕c其膜位置結(jié)合的分泌酶的大結(jié)合口袋對(duì)設(shè)計(jì)抑制劑產(chǎn)生了挑戰(zhàn)，所述抑制劑以足夠的有效濃度通過(guò)血-腦屏障(Barten, D.和 C. Albright，Mol. Neurobiol 37:171-186(1998)； John, V.，Curr. Top. Med. Chem.(藥物化學(xué))6 :569-78(2006) ；Venugopal, C.等人，CNS & Neurological Disorders-Drug Targets (中樞神經(jīng)系統(tǒng)&神經(jīng)系統(tǒng)疾病-藥物靴點(diǎn))7 278-294(2008))ο因此，本領(lǐng)域仍存在有效治療AD的需要。發(fā)明概述本發(fā)明提供了在誘導(dǎo)APP裂解從而制備約17千道爾頓(kDa)的APP羧基端片段中使用的通式(I)的雜環(huán)化合物或其藥物可接受的鹽、水合物或前藥
權(quán)利要求
1.在誘導(dǎo)APP裂解以制備約17千道爾頓(kDa)的APP羧基端片段中使用的通式⑴ 的雜環(huán)化合物或其藥物可接受的鹽、水合物或前藥其中所述約17kDA的片段包含APP的羧基端氨基酸序列以及β -淀粉樣氨基酸序列，以及其中各個(gè)Rx、R1 > R2> R3> R4如本文所定義。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述雜環(huán)化合物為螺(咪唑并(l，2-a)吡啶-2(3H)-酮 _3，2’ -茚滿)。
3.如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述雜環(huán)化合物的所述用途導(dǎo)致淀粉樣前體蛋白的 Aβ ^42,Aβ ^>099片段中的一種或多種或淀粉樣前體蛋白的C83片段的產(chǎn)量減少。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其中給予所述化合物的個(gè)體患有阿爾茨海默癥。
5.如權(quán)利要求4所述的用途，其中所述個(gè)體已診斷為患有阿爾茨海默氏癥。
6.分離的約17千道爾頓的淀粉樣前體蛋白片段，其包含淀粉樣前體蛋白的羧基端氨基酸序列以及β-淀粉樣氨基酸序列。
7.組合物，其包含權(quán)利要求6所述的片段。
8.用于篩選裂解淀粉樣前體蛋白以生成約17千道爾頓的淀粉樣前體蛋白片段的化合物的方法，所述方法包括(a)將產(chǎn)生淀粉樣前體蛋白或其片段的細(xì)胞暴露于試驗(yàn)化合物，以及(b)測(cè)定約17千道爾頓片段的量，其中所述約17千道爾頓的片段包含淀粉樣前體蛋白羧基端氨基酸序列以及β -淀粉樣氨基酸序列，以及其中相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞中的約17千道爾頓片段的量，暴露于所述化合物的細(xì)胞中的約17千道爾頓片段的量增加表明所述化合物誘導(dǎo)淀粉樣前體蛋白裂解以生成所述約17千道爾頓的片段。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其還包括(c)相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞中的淀粉樣前體蛋白的Αβ i_42、Ai3 HPC99片段或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量，測(cè)定暴露于所述化合物的細(xì)胞中的淀粉樣前體蛋白的A β i_42、Αβ i,、C99片段中的一種或多種或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量是否減少。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中體外進(jìn)行所述篩選方法。
11.如權(quán)利要求8所述的方法，其還包括(C)相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中淀粉樣前體蛋白的Αβ i_42、Αβ ^、C99片段或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量，測(cè)定暴露于所述化合物的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)裂解液中淀粉樣前體蛋白的Αβ i_42、Aβ ^40, C99片段中的一種或多種或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量是否減少。
12.如權(quán)利要求8所述的方法，其中以高流通量的方式進(jìn)行所述篩選方法。
13.用于篩選裂解淀粉樣前體蛋白以生成約17千道爾頓的APP片段的化合物的方法，所述方法包括(a)將產(chǎn)生淀粉樣前體蛋白或其片段的細(xì)胞暴露于試驗(yàn)化合物，以及(b)測(cè)定所述約17千道爾頓的片段，其中所述約17千道爾頓的片段包含所述淀粉樣前體蛋白羧基端氨基酸序列以及 β-淀粉樣氨基酸序列，以及其中相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞中約17千道爾頓片段的缺少，暴露于所述化合物的細(xì)胞中約17千道爾頓片段的存在表明所述化合物誘導(dǎo)淀粉樣前體蛋白裂解以生成所述約17千道爾頓的片段。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其還包括(c)相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞中淀粉樣前體蛋白的A β η2、Α β ^40Χ99片段或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量，測(cè)定暴露于所述化合物的細(xì)胞中淀粉樣前體蛋白的Αβ i_42、Αβ i,、C99片段中的一種或多種或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量是否減少。
15.如權(quán)利要求13所述的方法，其中體外進(jìn)行所述篩選方法。
16.如權(quán)利要求13所述的方法，其還包括(c)相對(duì)于未暴露于所述化合物的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中淀粉樣前體蛋白的Αβ H^Aii1,、C99片段或所述淀粉樣前體蛋白的C83 片段的量，測(cè)定暴露于所述化合物的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)裂解液中淀粉樣前體蛋白的Ai^_42、 A β ^099片段中的一種或多種或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的量是否減少。
17.如權(quán)利要求13所述的方法，其中以高流通量的方式進(jìn)行所述篩選方法。
18.在誘導(dǎo)APP裂解以制備約17千道爾頓(kDa)的APP羧基端片段中使用的非通式 (I)雜環(huán)化合物的化合物、或其藥物可接受的鹽、水合物或前藥
19.如權(quán)利要求18所述的用途，其中所述化合物導(dǎo)致淀粉樣前體蛋白的Ah_42、 A β ^099片段中的一種或多種或所述淀粉樣前體蛋白的C83片段的產(chǎn)量減少。
20.如權(quán)利要求1所述的用途，其中給予所述化合物的個(gè)體患有阿爾茨海默氏癥。
21.如權(quán)利要求20所述的用途，其中所述個(gè)體已診斷為患有阿爾茨海默氏癥。
全文摘要
本發(fā)明提供了在個(gè)體中誘導(dǎo)淀粉樣前體蛋白裂解以制備約17千道爾頓的淀粉樣前體蛋白羧基端片段的方法，所述方法包括向有需要的個(gè)體給予雜環(huán)化合物或其藥物可接受的鹽、水合物或前藥，其中所述約17千道爾頓的片段包含淀粉樣前體蛋白羧基端氨基酸序列以及β-淀粉樣氨基酸序列。本發(fā)明還提供了用于識(shí)別誘導(dǎo)淀粉樣前體蛋白裂解以制備約17千道爾頓的淀粉樣前體蛋白羧基端片段的化合物的篩選方法。
文檔編號(hào)C07D513/04GK102438992SQ200980156538
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2009年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月15日
發(fā)明者?？ǖ隆ろf伯, 蒂爾曼·奧爾特爾斯朵夫, 金·尼古拉斯·格林 申請(qǐng)人:全藥工業(yè)株式會(huì)社, 加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)