專利名稱：一種抑制實(shí)體腫瘤及白血病癌細(xì)胞生長的短肽及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)醫(yī)藥領(lǐng)域，本發(fā)明更具體涉及了一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
在癌癥發(fā)生與治療的過程中，化學(xué)治療一直屬于主體部分?，F(xiàn)有的臨床使用的化 療藥物，如環(huán)磷酰胺、順鉬、阿糖胞苷、阿霉素和長春新堿等，它們主要是用來破壞細(xì)胞的周 期的，RNA、DNA和蛋白質(zhì)都是此類藥物的靶向目標(biāo)。近年來，As2O3在對(duì)于白血病的治療上 取得了很大的進(jìn)展，但是，該藥物和其他化療藥物，其本身都有自己的毒性，不管是一種化 療藥物單獨(dú)使用還是幾種化療藥物結(jié)合運(yùn)用在臨床治療上，其在對(duì)癌癥有明顯療效，殺傷 殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)損害病人的正常細(xì)胞?；熕幬锏母弊饔米钇毡榈木褪菍?duì)病人的 骨髓產(chǎn)生極度抑制，造成病人的極大痛苦，甚至引起死亡。到目前，除了早發(fā)現(xiàn)癌癥病情并 實(shí)行手術(shù)切除腫瘤包塊外，對(duì)于已經(jīng)擴(kuò)散的腫瘤和白血病仍沒有特效藥物去治療[Cancer Biology癌生物學(xué)，R. J. B金著，劉以訓(xùn)主譯，科學(xué)出版社，2002]，現(xiàn)有臨床上用于癌癥治療 的藥物大都是化合物，而短肽在癌癥方面的應(yīng)用尚無文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是針對(duì)上述問題，提供一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽及其應(yīng)用。本發(fā)明的一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽，其特征在于組成短肽的氨基酸主序列 <1>和編碼短肽的核苷酸主序列<2>如下<l>J-Gly-B-Tyr-Thr-0 其中，J 代表氨基酸 Pro，Leu 或 Ile ；B 代表氨基酸 Ser 或 Val ；0代表氨基酸Lys或Arg<2>HQA GGT (或 GGC 或 GGA 或 GGG) MQC TAT (或 TAC) ACT (或 ACC 或 ACA 或 ACG) ANA 其中，H代表核苷酸T，A或C ;Q代表核苷酸T或C ;M代表核苷酸A，G或T ;N代表核苷酸G 或A ；，本發(fā)明的抑制癌細(xì)胞生長的短肽片段，其氨基酸主序列具有與該短肽氨基酸主序列 ^ 70%的相同性，^ 90%的相似性，片段為把所述的6個(gè)氨基酸的序列從任意位置截取成 3個(gè)或4個(gè)或5個(gè)氨基酸組成的與所述短肽具有同樣生物活性的短肽。本發(fā)明的抑制癌細(xì)胞生長的短肽類似物具有與所述短肽相同的生物活性，所述類 似物是指在用所述短肽和另一種化合物融合或者用所述短肽的氨基酸序列融合另外的多 肽或者蛋白質(zhì)而形成具有生物活性的多肽序列或蛋白質(zhì)。本發(fā)明的抑制癌細(xì)胞生長的短肽衍生物，其氨基酸序列具有與短肽氨基酸主序列 ^ 70%的相同性，> 90%的相似性，該衍生物是指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一個(gè) 或者幾個(gè)氨基酸的某個(gè)基團(tuán)用另外的基團(tuán)取代后與所述短肽具有同樣生物活性的短肽。本發(fā)明的抑制癌細(xì)胞生長的短肽變體，其氨基酸序列具有與短肽氨基酸主序列 ^ 70%的相同性，^ 90%的相似性，該變體是指一種具有一個(gè)或幾個(gè)氨基酸或核苷酸改變 的氨基酸序列或編碼它的核苷酸序列，所述改變包括在氨基酸序列或核苷酸序列中，在序列中間的任一位置缺失、插入或替換氨基酸或核苷酸，或在序列兩端添加氨基酸或核苷酸。本發(fā)明的短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備 具有治療非實(shí)體腫瘤人髓系各類病變細(xì)胞增生引起的白血病、治療人實(shí)體腫瘤癌細(xì)胞增殖 的各類癌癥如肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細(xì)胞無限增殖引發(fā)的一切癌 癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的短肽或核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進(jìn)劑或者親和試 劑的藥物或者檢測試劑的應(yīng)用。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明的短肽來自于運(yùn)用生物信息學(xué)的方法把國際蛋白質(zhì) 數(shù)據(jù)庫的蛋白進(jìn)行序列比對(duì)，篩選出來的一種新型的具有活性功能的生物活性肽，運(yùn)用本 發(fā)明的短肽抑制或殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞無顯著傷害作用，解決了現(xiàn)有癌癥藥物在 抑制或殺死癌細(xì)胞的同時(shí)對(duì)人體正常細(xì)胞也有嚴(yán)重傷害的缺陷。


圖1是本發(fā)明的短肽對(duì)人肝癌細(xì)胞的抑制作用的效果試驗(yàn)。圖中所示，本發(fā)明涉 及的短肽明顯抑制人肝癌細(xì)胞系HepG2生長與As2O3效果相近，圖中PK6指代專利涉及的短 肽中的一種，PK6-1代表給藥濃度為0. lmg/mL, PK6-2代表給藥濃度為0. 01mg/mL。圖2是本發(fā)明的短肽對(duì)人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的抑制作用的效果試驗(yàn)。圖中所 示，本發(fā)明涉及的短肽明顯抑制人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系HL-60生長，圖中PK6指代專利 涉及的短肽中的一種，PK6-1代表給藥濃度為0. lmg/mL,PK6-2代表給藥濃度為0. Olmg/mL。圖3是本發(fā)明的短肽對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的抑制作用的效果試驗(yàn)。圖中所示，本發(fā)明 涉及的短肽明顯抑制人乳腺癌細(xì)胞系M-231生長，圖中PK-6指代專利涉及的短肽中的一 種，PK-6給藥濃度為0. lmg/mL。
具體實(shí)施例方式短肽的制備方法采用化學(xué)合成的方法，即本領(lǐng)域熟知的已經(jīng)非常成熟的固相肽合 成方法，既可以采用Boc方法也可以采用Fmoc方法。具體做法就是將被保護(hù)的氨基酸逐個(gè) 偶聯(lián)到惰性固相載體上去，然后利用強(qiáng)酸將肽鏈從載體上裂解下來，同時(shí)去除側(cè)鏈保護(hù)。短肽的氨基酸主序列為氨基酸位置固定的主序列，其間隔的位置選擇排列相對(duì)應(yīng) 的氨基酸，例如，在J位置的氨基酸有3種Pro，Leu或lie;，此3種氨基酸都可以單一地 安放在<1>中J的位置上，不管選擇其中任何一種，該短肽仍具有其原有的生物活性，即抑 制惡性腫瘤細(xì)胞增長，同樣地B和0所代表的位置的氨基酸也有如此特性。核苷酸采用人工合成方法制備；編碼短肽的核苷酸包含下組中的一種(a)編碼具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、類似物、衍生物或其變體的核苷 酸；(b)與(a)所述核苷酸互補(bǔ)的核苷酸；(c)與(a)或(b)中所述核苷酸有彡75%相同性的核苷酸；該核苷酸基本由編碼具有<1>氨基酸序列短肽的核苷酸組成，本發(fā)明的核苷酸序 列包括<2>中的核苷酸序列，其形式為DNA形式包括cDNA或人工合成的DNA。DNA可以是 單鏈的也可以是雙鏈的。編碼短肽的編碼區(qū)序列可以和<2>中的核苷酸相同，也可以不同，稱為變異體，其中變異體是指具有編碼<1>中的氨基酸序列的編碼，但可以和<2>中的核苷 酸不同。變異體可以是一個(gè)或幾個(gè)核苷酸取代、插入、缺失的核苷酸序列，但不會(huì)改變編碼 <1>中氨基酸序列的短肽的活性功能。該短肽或核苷酸的“變體”是指一種具有一個(gè)或幾個(gè)氨基酸或核苷酸改變的氨基 酸序列或編碼它的核苷酸序列。改變可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的 缺失、插入、添加或替換。變體可具有“保守性”改變，其中替換的氨基酸具有與原氨基酸相 類似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)，也可以有“非保守性”改變，其中替換的氨基酸不具有與原氨基酸 相類似的結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一個(gè)或幾個(gè)氨基酸 或核苷酸的缺失；“插入”是指在氨基酸序列或核苷酸序列的中間任意位置插入一個(gè)或幾個(gè) 氨基酸；“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列的N端或C端添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸；“替 換”是指用不同的氨基酸或核苷酸替換一個(gè)或幾個(gè)氨基酸或核苷酸。該短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有抑 制與治療包括但不限于下述疾病的藥物的用途
1.非實(shí)體腫瘤髓系白血病急性非淋巴細(xì)胞白血病(Ml 未分化的原粒細(xì)胞白血 ??；M2 部分分化的原粒細(xì)胞白血?。籑3 急性早幼粒細(xì)胞白血??；M4 急性粒、單核細(xì)胞白 血病；M5 急性單核細(xì)胞白血??；M6 急性紅血病或紅白血病；M7 急性巨核細(xì)胞白血病)， 急性淋巴細(xì)胞白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，慢性粒-單細(xì)胞白血病，慢性單核細(xì)胞白血病以 及其他特殊類型的細(xì)胞惡性增殖類型的白血病。2.實(shí)體腫瘤癌癥肝癌、肺癌、宮頸癌、乳腺癌、胃癌、腸癌癥、胰腺癌以及其他的 惡性細(xì)胞增殖類型的癌癥疾病。在計(jì)算短肽片段、短肽衍生物和短肽變體的氨基酸主序列具有與短肽氨基酸主序 列的相同性和相似性時(shí)，“相同性百分率”是指兩種或多種氨基酸或核酸序列比較中序列相 同的百分率。根據(jù) Cluster 法(Higging D. G. &Sharp P.M.，Gene 1988,73 :234_237)通過 檢查所有配對(duì)之間的距離將各組序列排列成簇，然后將各簇以成對(duì)或成組分配。兩個(gè)氨基 酸序列如序列A和序列B之間的相同性百分率通過下式計(jì)算
序列A與序列B之間匹配的殘基個(gè)數(shù)X 100%_
序列A的殘基個(gè)數(shù)_序列A中間隔的殘基個(gè)數(shù)-序列B中間隔的殘基個(gè)數(shù)“相似性”是指在確定兩條氨基酸序列比對(duì)中相同氨基酸序列位置確定后，在相 同氨基酸之間排列的對(duì)應(yīng)的氨基酸的保守性取代程度。根據(jù)生物信息技術(shù)領(lǐng)域周知的氨 ^MUyA- PAM 250 scoring matrix (Dayhoff, Μ. Schwartz, R. Μ. and Orcutt, B. C. Atlas of Protein Structure 1978,345-352 ；DeLisi, C.and Kanehisa, M.Mathematical Biosciences 1984. 69 77-85 ；Schwartz, R. Μ. and Dayhoff, M. 0. Atlas of Protein Structure, 1979. 353-358)，當(dāng)相對(duì)應(yīng)的不同氨基酸比較得分> 0時(shí)，該兩個(gè)氨基酸相似； 當(dāng)不同氨基酸得分< 0時(shí)，兩個(gè)氨基酸不相似。兩個(gè)氨基酸序列如序列C和序列D之間的 相似性百分率通過下式計(jì)算
(序列C與序列D之間匹配的殘基個(gè)數(shù)+序列C與序列D之間相似的殘基個(gè)數(shù))χ 100% 序列C的殘基個(gè)數(shù)_序列C中間隔的殘基個(gè)數(shù)-序列D中間隔的殘基個(gè)數(shù)
其中，序列C中間隔的殘基個(gè)數(shù)和序列D中間隔的殘基個(gè)數(shù)都不包括相似氨基酸的個(gè)數(shù)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施舉例僅用于說明本發(fā)明而不用于 限制本發(fā)明的范圍。下列所有列舉實(shí)施例所涉及的所有合成短肽都具有本發(fā)明涉及的藥物功能而不 限于所列舉功能。實(shí)施例1 抑制肝癌細(xì)胞的試驗(yàn)(合成本發(fā)明涉及的短肽=Pro-Gly-Val-Tyr-Thr-Lys)人肝癌細(xì)胞系H印G2細(xì)胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來 培養(yǎng)，以IO4/孔的細(xì)胞密度種植入96孔細(xì)胞板，24小時(shí)后，把本實(shí)驗(yàn)涉及的短肽按照不同 的濃度加入到細(xì)胞培養(yǎng)板中，以等體積的PBS為對(duì)照組，24、48和72小時(shí)后分別用MTT法 在570nm條件下于酶標(biāo)儀中檢測吸光值。給藥組和對(duì)照組比較，獲得肝癌細(xì)胞的抑制率，高 濃度PK-6抑制率分別為5. 01%,29. 62%和46. 96%，低濃度PK-6抑制率分別為16. 53%, 30. 40%和28. 97%。如圖1所示。實(shí)施例2 抑制急性粒細(xì)胞白血病(合成本發(fā)明涉及的短肽Leu-Gly-Val-Tyr-Thr-Lys)人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞的培養(yǎng)是用含有10%新生牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基來培養(yǎng)，以5X IO4/孔的細(xì)胞密度種植入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，立刻把本發(fā)明涉 及的短肽按照不同的濃度加入到細(xì)胞培養(yǎng)板中，以等體積的PBS為對(duì)照組，24、48、72和96 小時(shí)后，分別用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，給藥組和對(duì)照組比較白血病細(xì)胞的抑制率，高濃度PK-6 抑制率分別為12. 05%,20. 40%,25. 78%,30. 21%,低濃度PK-6抑制率分別為11. 12%、 30. 25%,35. 41%,50. 20%o 如圖 2 所示。實(shí)施例3 抑制乳腺癌細(xì)胞的試驗(yàn)(合成本發(fā)明設(shè)計(jì)的短肽為Ile-Gly-Val-Tyr-Thr-Lys)人乳腺癌細(xì)胞系M-231細(xì)胞的培養(yǎng)是用含10%胎牛血清的L_15培養(yǎng)基來培養(yǎng)， 以IO4/孔的細(xì)胞密度種植入96孔板，24小時(shí)后把本發(fā)明涉及的短肽按照一定的濃度加入 到細(xì)胞培養(yǎng)板中，以等體積的PBS為對(duì)照組，24,48和72小時(shí)后分別用MTT法在595nm條件 下于酶標(biāo)儀中檢測吸光值。給藥組和對(duì)照組比較，獲得乳腺癌細(xì)胞的抑制率分別為-0. 3%、 7. 9%和2. 8%。如圖3所示。序列表<110> 李昊<120> 一種抑制實(shí)體腫瘤及白血病癌細(xì)胞生長的肽類藥物<160>33<210>1<211 >6<212>PRT<213>人工序列
<220><223>J代表氨基酸Pro，Leu或lie ;B代表氨基酸Ser或Val ；0代表氨基酸Lys 或 Arg ；<400>1J-Gly-B-Tyr-Ala-O<210>2<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>2hqa ggt mqc tat act ana<210>3<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>3hqa ggc mqc tat act ana<210>4<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>4hqa gga mqc tat act ana<210>5<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。
<400>5hqa ggg mqc tat act ana<210>6<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>6hqa ggt mqc tat acc ana<210>7<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>7hqa ggc mqc tat acc ana<210>8<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>8hqa gga mqc tat acc ana<210>9<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表核苷酸G或A。<400>9hqa ggg mqc tat acc ana<210>10
<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>10hqa ggt mqc tat aca ana<210>11<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>11hqa ggc mqc tat aca ana<210>12<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>12hqa gga mqc tat aca ana<210>13<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>13hqa ggg mqc tat aca ana<210>14<211>18<212>DNA<213>人工序列
<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表核苷酸G或A。<400>14hqa ggt mqc tat acg ana<210>15<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>15hqa ggc mqc tat acg ana<210>16<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>16hqa gga mqc tat acg ana<210>17<211>18<212>DNA<213〉人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>17hqa ggg mqc tat acg ana<210>18<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。
<400>18hqa ggt mqc tac act ana<210>19<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>19hqa ggc mqc tac act ana<210>20<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>20hqa gga mqc tac act ana<210>21<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>21hqa ggg mqc tac act ana<210>22<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>22hqa ggt mqc tac acc ana<210>23
<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸 A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>23hqa ggc mqc tac acc ana<210>24<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>24hqa gga mqc tac acc ana<210>25<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>25hqa ggg mqc tac acc ana<210>26<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>26hqa ggt mqc tac aca ana<210>27<211>18<212>DNA<213>人工序列
<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表核苷酸G或A。<400>27hqa ggc mqc tac aca ana<210>28<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>28hqa gga mqc tac aca ana<210>29<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>29hqa ggg mqc tac aca ana<210>30<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>30hqa ggt mqc tac acg ana<210>31<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。
<400>31hqa ggc mqc tac acg ana<210>32<211>18<212>DNA
<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>32hqa gga mqc tac acg ana<210>33<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>h代表核苷酸T，A或C ;q代表核苷酸T或C ;m代表核苷酸A，G或T ;n代表 核苷酸G或A。<400>33hqa ggg mqc tac acg ana
權(quán)利要求
一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽，其特征在于組成短肽的氨基酸主序列<1>和編碼短肽的核苷酸主序列<2>如下<1>J-Gly-B-Tyr-Thr-O其中，J代表氨基酸Pro，Leu或Ile；B代表氨基酸Ser或Val；O代表氨基酸Lys或Arg<2>HQA GGT(或GGC或GGA或GGG)MQC TAT(或TAC)ACT(或ACC或ACA或ACG)ANA其中，H代表核苷酸T，A或C；Q代表核苷酸T或C；M代表核苷酸A，G或T；N代表核苷酸G或A；所述短肽的氨基酸主序列為氨基酸位置固定的主序列，其間隔的位置選擇排列相對(duì)應(yīng)的氨基酸。
2.一種如權(quán)利要求1所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽片段，其特征在于短肽片段的氨 基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列> 70%的相同性，^ 90%的相似性，所述片段為 把所述的6個(gè)氨基酸的序列從任意位置截取成3個(gè)或4個(gè)或5個(gè)氨基酸組成的與所述短肽 具有同樣生物活性的短肽。
3.—種如權(quán)利要求1所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽類似物，其特征在于所述短肽類 似物具有與所述短肽相同的生物活性，所述類似物是指在用所述短肽和另一種化合物融合 或者用所述短肽的氨基酸序列融合另外的多肽或者蛋白質(zhì)而形成具有生物活性的多肽序 列或蛋白質(zhì)。
4.一種如權(quán)利要求1所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽衍生物，其特征在于所述短肽衍 生物的氨基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列> 70%的相同性，^ 90%的相似性，所 述衍生物是指把所述氨基酸的序列中的氨基酸的一個(gè)或者幾個(gè)氨基酸的某個(gè)基團(tuán)用另外 的基團(tuán)取代后與所述短肽具有同樣生物活性的短肽。
5.一種如權(quán)利要求1所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽變體，其特征在于所述短肽變體 的氨基酸主序列具有與所述短肽氨基酸主序列> 70%的相同性，^ 90%的相似性，所述變 體是指一種具有一個(gè)或幾個(gè)氨基酸或核苷酸改變的氨基酸序列或編碼它的核苷酸序列，所 述改變包括在氨基酸序列或核苷酸序列中，在序列中間的任一位置缺失、插入或替換氨基 酸或核苷酸，或在序列兩端添加氨基酸或核苷酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽，其特征在于所述 編碼短肽的核苷酸包含下組中的一種(a)編碼具有所述氨基酸序列的短肽或其片段、類似物、衍生物或其變體的核苷酸；(b)與(a)所述核苷酸互補(bǔ)的核苷酸；(c)與(a)或(b)中所述核苷酸有》75%相同性的核苷酸；所述核苷酸采用人工合成方法制備。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽，其特征在于所述的短肽采用化學(xué) 合成方法制備；所述核苷酸采用人工合成方法制備。
8.—種如權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽的應(yīng)用，其特征在于 所述短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有治療非實(shí) 體腫瘤人髓系各類病變細(xì)胞增生引起的白血病、治療人實(shí)體腫瘤癌細(xì)胞增殖的各類癌癥如 肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細(xì)胞無限增殖引發(fā)的一切癌癥、診斷與檢 測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應(yīng)用。
9.一種如權(quán)利要求6所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽的應(yīng)用，其特征在于所述核苷酸 用于制備具有治療非實(shí)體腫瘤人髓系各類病變細(xì)胞增生引起的白血病、治療人實(shí)體腫瘤癌 細(xì)胞增殖的各類癌癥如肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、腸癌、宮頸癌等由于癌細(xì)胞無限增殖引發(fā) 的一切癌癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應(yīng)用。
10.一種如權(quán)利要求7所述的抑制癌細(xì)胞生長的短肽的應(yīng)用，其特征在于所述短肽或 核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進(jìn)劑或者親和試劑的藥物或者檢測試劑的 應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抑制癌細(xì)胞生長的短肽。該短肽的短肽片段、類似物、衍生物、變體的氨基酸主序列具有與該短肽氨基酸主序列≥70％的相同性，≥90％的相似性；短肽、核苷酸、短肽片段、短肽類似物、短肽衍生物和短肽變體用于制備具有治療非實(shí)體腫瘤人髓系各類病變細(xì)胞增生引起的白血病、治療人實(shí)體腫瘤癌細(xì)胞增殖的各類癌癥、診斷與檢測癌癥的發(fā)生以及癌癥發(fā)生的惡性程度藥物的應(yīng)用，短肽或核苷酸用于制備具有作為蛋白酶抑制劑或者促進(jìn)劑或者親和試劑的藥物或者檢測試劑的應(yīng)用。該技術(shù)能夠解決現(xiàn)有癌癥藥物在抑制或殺死癌細(xì)胞的同時(shí)對(duì)人體正常細(xì)胞也有嚴(yán)重傷害的缺陷。
文檔編號(hào)C07K7/06GK101824072SQ20091011115
公開日2010年9月8日 申請日期2009年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月5日
發(fā)明者李 昊 申請人:福州藍(lán)昊生物醫(yī)藥有限公司