專利名稱：一種異黃酮苷類化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的化合物，其來自于東方擬無枝酸菌ATCC 43491的發(fā)酵液，為發(fā)酵液 中一種含量較低的組分，通過分離純化，經(jīng)質(zhì)譜(MS)、核磁共振氫譜(1H NMR)、核磁共振碳 譜(13C NMR)檢測，進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析，確定該組分為一種新的化合物。


因此，本發(fā)明的首要目的在于，提供一種新的化合物t 本發(fā)明提供的化合物，如結(jié)構(gòu)式(I)所示
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于，提供如結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物的制備方法。 本發(fā)明提供的化合物通過發(fā)酵培養(yǎng)東方擬無枝酸菌獲得。 根據(jù)本發(fā)明，使用的東方擬無枝酸菌為東方擬無枝酸菌ATCC 43491。 根據(jù)本發(fā)明，該化合物的制備方法還包括以下步驟
A)東方擬無枝酸菌發(fā)酵液離心，收集離心上清；
B)對(duì)步驟A獲得的離心上清，使用HPD100樹脂進(jìn)行初純，收集洗脫液；
C)對(duì)步驟B中獲得的洗脫液使用中壓液相色譜精純，收集洗脫液。
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根據(jù)本發(fā)明，HPD100樹脂初純包括以下步驟將離心上清液上樣到HPD100樹脂柱 上，用乙醇-水溶液梯度洗脫，收集乙醇體積百分比在25%到35%區(qū)段的洗脫液。根據(jù)本發(fā)明，中壓液相色譜精純包括以下步驟將步驟B中獲得的洗脫液上樣到 反相C-18柱；使用體積比為35 65的甲醇-水溶液1洗滌；使用體積比為44 56的甲 醇_水溶液2洗脫，收集洗脫液，獲得本發(fā)明提供的化合物溶液，其中，在上樣至C-18柱步 驟前，對(duì)步驟B中獲得的洗脫液進(jìn)行濃縮，甲醇-水溶液2的pH為3. 8。本發(fā)明提供了結(jié)構(gòu)式(I)所示的新的化合物，該化合物對(duì)白色念珠菌具有很好的 抑制作用，可用于開發(fā)抗菌藥物。


圖1是東方擬無枝酸菌發(fā)酵離心上清的HPLC檢測圖譜，其中，峰1為化合物 LYV091x01 的峰。圖2是中壓液相色譜精純后獲得的洗脫后溶液的HPLC檢測圖譜。圖3是化合物L(fēng)YV091x01的質(zhì)譜檢測結(jié)果。圖4是化合物L(fēng)YV091x01的核磁共振氫譜的檢測結(jié)果。圖5是化合物L(fēng)YV091x01的核磁共振碳譜的檢測結(jié)果。圖6是化合物L(fēng)YV091x01的結(jié)構(gòu)式。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本 發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，使用的培養(yǎng)基組成如下斜面培養(yǎng)基高氏1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基。種子培養(yǎng)基可溶性淀粉40g/L，去脂黃豆粉20g/L，甘油20g/L，葡萄糖15g/L， KN036g/L, KH2PO4O. 2g/L, MgCl2 · 6H20 0. 4g/L。發(fā)酵培養(yǎng)基乳糖20g/L，黃豆粉15g/L，氯化鈉3g/L，硫酸鎂lg/L，磷酸氫二鉀 lg/L。在本發(fā)明的下述實(shí)施例中，HPD100樹脂初純條件如下取發(fā)酵液離心上清液上HPD100樹脂柱，以乙醇-水溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集乙醇 體積百分比在25% -35%區(qū)段的洗脫液，濃縮得LYV091x01粗品溶液。中壓液相色譜純化條件如下色譜柱為反相C-18柱。樣品上柱后先用甲醇水=35 65 (體積比)溶液洗滌 除雜，然后用甲醇水(體積比)=44 56的溶液(磷酸調(diào)pH至3.8)洗脫，收集洗脫液， 以HPLC檢測洗脫液中產(chǎn)物。HPLC條件如下流動(dòng)相配制用0. 2%的三乙胺溶液，磷酸調(diào)pH至3. 2作為緩沖液。緩沖液與乙 睛和四氫呋喃按92 7 1的比例混合，搖勻，作為A液；緩沖溶液與乙睛和四氫呋喃按 70 29 1的比例混合，搖勻，作為B液。超聲波脫氣20min，備用。色譜柱=Diamonsi1 C18，0DS，ID 4. 6*200mm
4 實(shí)施例1、東方擬無枝酸菌ATCC 43491發(fā)酵取東方擬無枝酸菌ATCC 43491斜面培養(yǎng)物，接種到種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于28°C、 220r/min轉(zhuǎn)速的搖床上培養(yǎng)40小時(shí)，獲得種子培養(yǎng)液。將種子培養(yǎng)液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28°C、220r/min轉(zhuǎn)速的搖床上培養(yǎng)120小 時(shí)，獲得發(fā)酵液。用4mol/L鹽酸酸化發(fā)酵液，調(diào)pH至3_4，離心收集上清液。實(shí)施例2、發(fā)酵液純化將實(shí)施例1中獲得的離心上清液進(jìn)行HPLC檢測，結(jié)果如圖1所示，然后將離心上 清液分別經(jīng)HPD100樹脂初純和中壓液相色譜精純，獲得純度達(dá)到98%的化合物，具體過程 如下A) HPD100 樹脂初純將離心上清液上樣到HPD100樹脂柱上，用乙醇-水溶液梯度洗脫，收集乙醇體積 百分比在25%到35%區(qū)段的洗脫液，然后將洗脫液濃縮，獲得粗品濃縮液。B)采用中壓液相色譜技術(shù)對(duì)步驟A中獲得的濃縮液進(jìn)行精純，具體過程如下將上述粗品濃縮液上樣到在反相C-18柱上，先使用甲醇水=35 65(體積比) 溶液洗脫除雜，然后使用甲醇水=44 56(體積比)溶液(磷酸調(diào)？!1至3.8)洗脫，收 集洗脫液，以HPLC檢測洗脫液中產(chǎn)物，結(jié)果如圖2所示。根據(jù)圖2的結(jié)果，洗脫后溶液的純 度達(dá)到98%。將獲得的洗脫后溶液干燥，獲得白色粉末，得LYV091x01精制品。實(shí)施例3、LYV091x01 鑒定LYV091x01的理化性質(zhì)如下化合物L(fēng)YV091x01為白色粉末，略帶微黃色，易溶于水，可溶于甲醇，不溶于丙酮、 丁醇、乙酸乙酯；以質(zhì)譜(MS)、核磁共振氫譜(1H NMR)、核磁共振碳譜(13C NMR)對(duì)化合物 LYV091x01進(jìn)行測定，結(jié)果如下化合物L(fēng)YV091x01的質(zhì)譜檢測結(jié)果如圖3所示，根據(jù)圖3的結(jié)果，[M+H]+ = 563，
5[2M+H]+ = 1125，推斷出化合物L(fēng)YV091x01的分子量為562。化合物L(fēng)YV091x01的核磁共振碳譜如圖4所示，其核磁共振氫譜的檢測結(jié)果如圖 5所示，對(duì)核磁共振碳譜和核磁共振氫譜的解譜結(jié)果如表2所示，其中，標(biāo)識(shí)為a的數(shù)據(jù)于 500MHz檢測，標(biāo)識(shí)為b的數(shù)據(jù)于400MHz檢測。表2、LYV091x01核磁共振的碳譜和氫譜測定結(jié)果 根據(jù)上述結(jié)果，本發(fā)明獲得的化合物L(fēng)YV091x01的分子式為C27H3tlO13的結(jié)構(gòu)式如 圖6所示，該結(jié)構(gòu)在現(xiàn)有技術(shù)中未見有報(bào)道，是一種新的化合物，由于其結(jié)構(gòu)式與已知的異 黃酮苷化合物類似，因此可以歸類為一種新的異黃酮苷化合物。實(shí)施例4、抑菌活性測定取直徑為90mm、高16_17mm的平皿，注入加熱融化的YPD培養(yǎng)基，待凝固后作為底 層培養(yǎng)基。取白色念珠菌ATCC10231菌種新鮮斜面，制成菌懸液，加到40°C左右的YPD培養(yǎng) 基中，傾倒在鋪有底層培養(yǎng)基的平板上，冷卻凝固。在制好的檢測培養(yǎng)平板上，放置加有LYV091x01濃度為10 μ g/ml的待測樣品液 20 μ 1的紙敏片(直徑6mm)，將平板于28°C培養(yǎng)2天，測得抑菌圈直徑為19mm。由此顯示化合物L(fēng)YV091x01對(duì)白色念珠菌有顯著的抑制作用。綜上所述，本發(fā)明提供了一種新的化合物，該化合物對(duì)白色念珠菌具有很好的抑 制作用，可用于制備抑菌藥物，特別是用于抑制白色念珠菌的藥物。
權(quán)利要求
一種化合物，其特征在于，所述化合物的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示F2009100528505C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，所述化合物通過發(fā)酵培養(yǎng)東 方擬無枝酸菌獲得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述東方擬無枝酸菌為東方擬無枝 酸菌 ATCC 43491。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述方法還包括以下步驟A)東方擬無枝酸菌發(fā)酵液離心，收集離心上清；B)對(duì)步驟A獲得的離心上清，使用HPDlOO樹脂進(jìn)行初純，收集洗脫液；C)對(duì)步驟B中獲得的洗脫液使用中壓液相色譜精純，收集洗脫液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述HPDlOO樹脂初純包括以下步驟 將離心上清液上樣到HPDlOO樹脂柱上，用乙醇-水溶液梯度洗脫，收集乙醇體積百分比在 25%到35%區(qū)段的洗脫液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述中壓液相色譜精純包括以下步 驟將步驟B中獲得的洗脫液上樣到反相C-18柱；使用體積比為35 65的甲醇-水溶液 1洗滌；使用體積比為44 56的甲醇-水溶液2洗脫，收集洗脫液，獲得所述化合物溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，在上樣至所述C-18柱步驟前，對(duì)步驟 B中獲得的所述洗脫液進(jìn)行濃縮。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述甲醇-水溶液2的pH為3.8。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種異黃酮苷類化合物以及該化合物的制備方法。本發(fā)明提供的化合物，其結(jié)構(gòu)如結(jié)構(gòu)式(I)所示，該化合物通過發(fā)酵培養(yǎng)東方擬無枝酸菌獲得。本發(fā)明提供的化合物對(duì)白色念珠菌具有很好的抑制作用。
文檔編號(hào)C07H17/07GK101921300SQ200910052850
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2009年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月10日
發(fā)明者劉效穩(wěn), 夏興, 戈梅, 李秋爽, 楊天, 楊志鈞, 殷瑜, 羅敏玉, 金文翔, 阮麗軍, 陳代杰, 魏維 申請(qǐng)人:上海來益生物藥物研究開發(fā)中心有限責(zé)任公司;浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠