專利名稱：3-(咪唑基)-吡唑并[3,4-b]吡啶的制作方法
相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
本申請(qǐng)要求序列號(hào)為60/932,948的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)的權(quán)益，其內(nèi)容通過引用整體并入本文。
關(guān)于在聯(lián)邦贊助的研究和開發(fā)下所作出的發(fā)明的權(quán)利的聲明
不適用
背景技術(shù)：
本發(fā)明提供化合物、包含該化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽中的一種或多種的藥物組合物，其有效抑制各種趨化因子(例如，MIP-1α、白細(xì)胞誘素(leukotactin)、MPIF-1及RANTES)與CCR1受體的結(jié)合。作為CCR1受體的拮抗劑或調(diào)節(jié)劑，該化合物及組合物可用于治療炎性及免疫病狀及疾病。
人類健康取決于身體檢測(cè)并破壞可消耗來(lái)自個(gè)體的寶貴資源和/或誘發(fā)疾病的外來(lái)病原體的能力。免疫系統(tǒng)是身體的防御系統(tǒng)，其包括白細(xì)胞(leukocyte，white blood cell(WBC)T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突細(xì)胞及免疫源性細(xì)胞(例如，破骨細(xì)胞)、淋巴組織及淋巴管。為對(duì)抗感染，白細(xì)胞在整個(gè)身體中循環(huán)以檢測(cè)病原體。一旦檢測(cè)到病原體，先天免疫細(xì)胞且尤其細(xì)胞毒性T細(xì)胞募集至感染位點(diǎn)以破壞該病原體。趨化因子作為分子信標(biāo)用于免疫細(xì)胞(例如，淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及粒細(xì)胞)的募集及活化、存在病原體的位點(diǎn)的鑒別。
盡管免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)病原體，但可產(chǎn)生某些不適當(dāng)?shù)内吇蜃有盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)且其歸因于炎性病癥(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥及其它病癥)的觸發(fā)或持續(xù)。舉例而言，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，聚集于骨關(guān)節(jié)中的失調(diào)趨化因子吸引且活化浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞及T-細(xì)胞。這些細(xì)胞的活性誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞增殖，這至少部分地導(dǎo)致炎癥且最終骨及軟骨損失(參見DeVries，M.E.等人，Semin Immunol 11(2)95-104(1999))。一些脫髓鞘病(例如，多發(fā)性硬化癥)的特點(diǎn)是趨化因子介導(dǎo)的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞及T細(xì)胞至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的募集(參見Kennedy等人，J.Clin.Immunol.19(5)273-279(1999))。趨化因子將破壞性WBC募集至移植物已經(jīng)暗示其隨后的排斥。參見DeVries，M.E.等人，ibid。由于趨化因子在炎癥及淋巴細(xì)胞發(fā)育中起關(guān)鍵作用，故特定操控其活性的能力對(duì)改善及延緩目前還沒有滿意治療方法的疾病有巨大影響。此外，可將移植排斥降至最少而無(wú)昂貴的免疫抑制藥物的普遍及復(fù)雜影響。
趨化因子(40個(gè)以上的小肽(7-10kD)的群)連接主要表達(dá)于WBC或免疫源性細(xì)胞上的受體，并藉助G-蛋白-偶聯(lián)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)發(fā)信號(hào)來(lái)介導(dǎo)其化學(xué)引誘物及化學(xué)刺激物功能。受體可結(jié)合一個(gè)以上的配體；例如，受體CCR1連接RANTES(調(diào)節(jié)活化正常T細(xì)胞表達(dá))、MIP-1α(巨噬細(xì)胞炎性蛋白)、MPIF-1/CKβ8及白細(xì)胞誘素趨化因子(尤其具有較小親和力者)。迄今為止，已得知24個(gè)趨化因子受體。免疫細(xì)胞上趨化因子的絕對(duì)數(shù)量、多配體結(jié)合受體、及不同受體譜允許緊密控制和特異性免疫應(yīng)答。參見Rossi等人，Ann.Rev.Immunol.18(1)217-242(2000)。趨化因子活性可藉助調(diào)節(jié)其相應(yīng)受體來(lái)控制，這治療相關(guān)炎性及免疫疾病且使得能夠進(jìn)行器官及組織移植。
受體CCR1及其趨化因子配體(包括例如MIP-1α、MPIF-1/CKβ8、白細(xì)胞誘素及RANTES)代表重要治療靶(參見Saeki等人，CurrentPharmaceutical Design 91201-1208(2003))，因?yàn)槠渖婕邦愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、移植排斥(參見DeVries，M.E.等人，ibid.)、及多發(fā)性硬化癥(參見Fischer等人，J Neuroimmunol.110(1-2)195-208(2000)；Izikson等人，J.Exp.Med.192(7)1075-1080(2000)；和Rottman等人，Eur.J.Immunol.30(8)2372-2377(2000))。實(shí)際上，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，一些功能阻斷抗體、經(jīng)修飾的趨化因子受體配體及小有機(jī)化合物已成功證實(shí)預(yù)防或治療一些趨化因子介導(dǎo)的疾病(在Rossi等人，ibid.中綜述)。值得注意地，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?dāng)施用信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷性的經(jīng)修飾的RANTES配體時(shí)疾病發(fā)展減緩(參見Plater-Zyberk等人，Immunol Lett.57(1-3)117-120(1997))。盡管功能阻斷性抗體及小肽治療劑具有前途，但其具有降解、施用后半衰期極短、及開發(fā)和制造的昂貴費(fèi)用的風(fēng)險(xiǎn)，這是大多數(shù)蛋白質(zhì)的特性。小有機(jī)化合物由于其通常在體內(nèi)具有較長(zhǎng)半衰期、需要較少劑量見效、通?？山?jīng)口施用且因此較便宜而是優(yōu)選的。先前已經(jīng)闡述CCR1的一些有機(jī)拮抗劑(參見Hesselgesser等人，J.Biol.chem.273(25)15687-15692(1998)；Ng等人，J.Med.Chem.42(22)4680-4694(1999)；Liang等人，J.Biol.chem.275(25)19000-19008(2000)；及Liang等人，Eur.J.Pharmacol.389(1)41-49(2000))。鑒于在動(dòng)物模型中對(duì)于疾病的治療展示效力(參見Liang等人，J.Biol.chem.275(25)19000-19008(2000))，故繼續(xù)該研究以鑒別可用于治療由CCR1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)所介導(dǎo)的疾病的另外的化合物。
發(fā)明概述 本發(fā)明涉及具有下式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或N-氧化物
在式I中，R1為C1-4烷基或C1-4鹵代烷基，且下標(biāo)m是0至1的整數(shù)。R2a、R2c、R2d各自是獨(dú)立選自由氫、鹵素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、-O-C1-4鹵代烷基及C1-4鹵代烷基組成的組的成員，且R3是選自由氫和C1-4烷基組成的組的成員。
除本文所提供的化合物以外，本發(fā)明進(jìn)一步提供包含所述化合物中的一種或多種的藥物組合物、以及主要使用這些化合物治療與CCR1、CCR2和/或CCR3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性相關(guān)的疾病的方法。
附圖
簡(jiǎn)述 無(wú) 發(fā)明詳述 I.縮寫及定義 除非另有說明，否則術(shù)語(yǔ)″烷基″其自身或作為另一取代基的一部分是指具有指定碳原子數(shù)的直鏈或支鏈烴基團(tuán)(即，C1-4是指1-4個(gè)碳)。烷基的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基和仲丁基。
術(shù)語(yǔ)″烷氧基″是使用其常規(guī)含義，且是指經(jīng)由氧原子連接至分子其余部分的烷基。烷氧基的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、異丙氧基、及諸如此類。
除非另有說明，否則術(shù)語(yǔ)″鹵基″或″鹵素″其自身或作為另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子。此外，諸如″鹵代烷基″等術(shù)語(yǔ)意欲包括單鹵代烷基及多鹵代烷基。舉例而言，術(shù)語(yǔ)″C1-4鹵代烷基″意欲包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、及諸如此類。
″保護(hù)基團(tuán)″是指除烷基以外當(dāng)連接至分子中的反應(yīng)性基團(tuán)時(shí)掩蔽、減少或阻礙其反應(yīng)性的部分。保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例可在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán))，第3版，John Wiley & Sons，New York，1999、及Harrison和Harrison等人，Compendium of Synthetic Organic Methods，第1-8卷(John Wiley和Sons，1971-1996)中找到，其整體內(nèi)容皆以引用的方式并入本文中。代表性羥基保護(hù)基團(tuán)包括?；⑵S基及三苯甲基醚、四氫吡喃基醚、三烷基甲硅烷基醚及烯丙基醚。代表性胺基保護(hù)基團(tuán)包括甲?；?、乙酰基、三氟乙?；⑵S基、芐氧羰基(CBZ)、叔丁氧羰基(BOC)、三甲基甲硅烷基(TMS)、2-三甲基甲硅烷基-乙烷磺?；?SES)、三苯甲基及經(jīng)取代的三苯甲基、烯丙基氧基羰基、9-芴基甲基氧基羰基(FMOC)、硝基-藜蘆基氧基羰基(NVOC)、及諸如此類。
″氨基酸偶合試劑″是指諸如HBTU(六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓)等試劑，其將與氨基酸的羧酸基團(tuán)反應(yīng)以形成可用于與各種親核試劑(例如胺、醇和硫醇)縮合以產(chǎn)生其它酯、硫酯或酰胺基團(tuán)的活化的中間體。
術(shù)語(yǔ)″藥學(xué)上可接受的鹽″意欲包括利用相對(duì)無(wú)毒酸或堿制得的活性化合物的鹽，這取決于在本文所述化合物上所發(fā)現(xiàn)的特定取代基。當(dāng)本發(fā)明化合物包含相對(duì)酸性的官能團(tuán)時(shí)，可藉由使該化合物的中性形式與足夠量的純凈或于適宜惰性溶劑中的期望堿接觸來(lái)獲得堿加成鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿的鹽的實(shí)例包括鋁鹽、銨鹽、鈣鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞錳鹽、鉀鹽、鈉鹽、鋅鹽及諸如此類。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)堿的鹽包括伯胺、仲胺及叔胺(包括經(jīng)取代的胺、環(huán)狀胺、天然存在的胺及諸如此類)的鹽，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基胺基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、哈胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇及諸如此類的鹽。當(dāng)本發(fā)明化合物包含相對(duì)堿性的官能團(tuán)時(shí)，可藉由使該化合物的中性形式與足夠量的純凈或于適宜惰性溶劑中的期望酸接觸來(lái)獲得酸加成鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽的實(shí)例包括衍生自以下無(wú)機(jī)酸的那些鹽如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、一氫碳酸(monohydrogencarbonicacid)、磷酸、一氫磷酸、二氫磷酸、硫酸、一氫硫酸、氫碘酸、或亞磷酸及諸如此類；以及衍生自以下相對(duì)無(wú)毒的有機(jī)酸的鹽如乙酸、丙酸、異丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富馬酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸、甲烷磺酸、及諸如此類。亦包括氨基酸的鹽，例如精氨酸鹽及諸如此類，及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric acid)及諸如此類等有機(jī)酸的鹽(參見，例如Berge，S.M.等人，″Pharmaceutical Salts″，Journal of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。本發(fā)明的某些具體化合物包含允許將化合物轉(zhuǎn)化成堿或酸加成鹽的堿性和酸性官能團(tuán)。
該化合物的中性形式可藉由使鹽與堿或酸接觸并以常規(guī)方式分離出母體化合物來(lái)重新產(chǎn)生。化合物的母體形式在某些物理性質(zhì)(例如在極性溶劑中的溶解度)方面不同于各種鹽形式，然而所述鹽出于本發(fā)明目的在其它方面卻與化合物的母體形式等效。
除鹽形式以外，本發(fā)明提供呈前藥形式的化合物。本文所述化合物的前藥是在生理?xiàng)l件下易于經(jīng)歷化學(xué)變化以提供本發(fā)明化合物的那些化合物。此外，前藥可藉由化學(xué)或生物化學(xué)方法在離體環(huán)境中轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。舉例而言，當(dāng)將前藥與適宜的酶或化學(xué)試劑一起放置于經(jīng)皮貼片貯器(reservoir)中時(shí)，前藥可緩慢轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
本發(fā)明的某些化合物可以非溶劑化形式及溶劑化形式(包括水合形式)存在。通常，溶劑化形式與非溶劑化形式等效且意欲被涵蓋于本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物可以多晶型或非晶形形式存在。通常，所有物理形式對(duì)于本發(fā)明所期望的用途而言是等效的且意欲在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明的某些化合物具有不對(duì)稱碳原子(光學(xué)中心)或雙鍵；外消旋體、非對(duì)映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體(regioisomer)及單種異構(gòu)體(例如，分開的對(duì)映異構(gòu)體)均意欲涵蓋于本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物亦可在構(gòu)成該化合物的一個(gè)或多個(gè)原子處包含異常比例的原子同位素。舉例而言，化合物可利用放射性同位素(諸如，例如氚(3H)、碘-125(125I)或碳-14(14C))進(jìn)行放射性標(biāo)記。本發(fā)明化合物的所有同位素變化形式(無(wú)論是否具有放射性)均意欲涵蓋于本發(fā)明范圍內(nèi)。
II.概述 本發(fā)明是源于式I化合物作為CCR1受體的有效拮抗劑的發(fā)現(xiàn)。該化合物具有體內(nèi)抗炎活性且具有優(yōu)良的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。因此，本文提供的化合物用于藥物組合物、治療CCR1介導(dǎo)的疾病的方法中、且作為對(duì)照用于鑒別競(jìng)爭(zhēng)性CCR1拮抗劑的測(cè)定中。
III.化合物 在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或N-氧化物
在式I中，R1是C1-4烷基或C1-4鹵代烷基，且下標(biāo)m是0至1的整數(shù)。在式I中，R2a、R2c、R2d各自是獨(dú)立選自由氫、鹵素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、-O-C1-4鹵代烷基和C1-4鹵代烷基組成的組的成員；R3是選自由氫和C1-4烷基組成的組的成員；且R4是C1-4烷基，且下標(biāo)n是0-2的整數(shù)。在一個(gè)實(shí)施方案中，R3是氫。在另一實(shí)施方案中，R3為氫且下標(biāo)n為0。在另一實(shí)施方案中，式I中的R1為甲基、三氟甲基或乙基且下標(biāo)m為1。在另一實(shí)施方案中，下標(biāo)m為0。在又一實(shí)施方案中，R2a、R2c和R2d各自獨(dú)立選自由氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基組成的組。在又一實(shí)施方案中，R2a為氫且R2c和R2d各自獨(dú)立選自由氟、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基組成的組。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物具有下式Ia或Ib。

在一個(gè)實(shí)施方案中，式Ia或Ib中的R2a和R2c各自獨(dú)立選自由氟、氯、溴和碘組成的組；且R2d是選自由甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基組成的組。
在具體實(shí)施方案中，式Ia或Ib的化合物是選自由以下組成的組
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物具有下式Ic或Id
在式Ic和Id中，在某些實(shí)施方案中，R2c是選自由氟、氯、溴和碘組成的組；且R2d是選自由甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、甲基、乙基、三氟甲基和2-氟乙氧基組成的組。
在具體實(shí)施方案中，式Ic或Id的化合物是選自由以下組成的組

在本發(fā)明再一實(shí)施方案中，式Id化合物具有以下結(jié)構(gòu)
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明式I化合物是選自由表1中所述化合物組成的組。
表1 1.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 2.1-[4-(4-氯-3-乙氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 3.1-{4-[4-氯-3-(2-氟-乙氧基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 4.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 5.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 6.1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 7.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 8.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 9.1-{4-[4-氯-3-(2-氟-乙氧基)-苯基]-2-甲基-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 10.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 11.1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 12.1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 13.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 14.1-[4-(4-氯-3-乙氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 15.1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟-乙氧基)-苯基]-哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 16.1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-3-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 17.1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 18.1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-2-甲基-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮 化合物的制備 下文的圖解提供某些合成途徑，可根據(jù)其獲得本發(fā)明某些化合物。其它途徑或下文所示途徑的修改對(duì)熟練的技術(shù)人員而言將是很顯然的且在本發(fā)明范圍內(nèi)。
圖解1示出經(jīng)3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表無(wú)干擾取代基，例如，諸如保護(hù)基團(tuán)或羧基酯。如圖解1中所示，NH2OH與3-氰基吡唑并[3，4-b]吡啶i的反應(yīng)將提供羥基脒化合物ii。使用氫氣和催化劑(例如，Pd/C或Pd(OH)2)還原ii將產(chǎn)生脒產(chǎn)物iii。藉由用氯乙醛處理使iii環(huán)化將產(chǎn)生咪唑產(chǎn)物iv。
圖解1
圖解2示出經(jīng)3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表無(wú)干擾取代基，例如，諸如保護(hù)基團(tuán)或羧基酯。在圖解2中，3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶與乙二胺反應(yīng)產(chǎn)生環(huán)化咪唑啉產(chǎn)物v，將其氧化將產(chǎn)生咪唑vi。
圖解2
圖解3示出經(jīng)3-咪唑基取代的吡唑并[3，4-b]吡啶的合成。R′代表無(wú)干擾取代基(例如，諸如保護(hù)基團(tuán)或羧基酯)，或式I化合物的其余部分(亦參見實(shí)施例18)。如圖解3中所示，使用金屬轉(zhuǎn)移方法可將3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶vii轉(zhuǎn)化成3-甲?；?吡唑并[3，4-b]吡啶viii，將其用乙二醛處理來(lái)環(huán)化以形成3-咪唑基-吡唑并[3，4]吡啶ix。
圖解3
可用于形成本發(fā)明化合物的氨基酸偶合程序示于圖解4中。在圖解4中，R、R″代表無(wú)干擾取代基。例如，本發(fā)明化合物可藉由3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶的羧酸衍生物x與哌嗪衍生物xi使用任何氨基酸偶合試劑(例如，HBTU、HATU、pyBOP等)來(lái)偶合以形成本發(fā)明的3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶(xii)而制備。
圖解4
III.藥物組合物 除以上所提供的化合物以外，用于調(diào)節(jié)人類和動(dòng)物中的CCR1、CCR2和CCR3活性的組合物通常將包含藥物載體或稀釋劑。
本文所用術(shù)語(yǔ)″組合物″意欲涵蓋包含特定量的特定成份的產(chǎn)品以及任何直接或間接地由特定量的特定成份組合而成的產(chǎn)品?！逅帉W(xué)上可接受的″意指載體、稀釋劑或賦形劑必須與調(diào)配物的其它成份相容且對(duì)其接受者無(wú)害。
用于施用本發(fā)明化合物的藥物組合物可方便地以單位劑型提供且可藉由藥學(xué)及藥物遞送領(lǐng)域中熟知的任何方法制備。所有方法均包括使活性成份與構(gòu)成一種或多種輔助成份的載體結(jié)合的步驟。一般而言，藥物組合物是藉由使活性成份與液體載體或微細(xì)固體載體或兩者均勻且緊密結(jié)合且隨后(若需要)使產(chǎn)物成形為所需調(diào)配物來(lái)制備。在藥物組合物中，活性目標(biāo)化合物是以足以對(duì)疾病的過程或狀況產(chǎn)生期望效果的量納入。
包含活性成份的藥物組合物可呈適宜口服應(yīng)用的形式，例如片劑、糖錠(troche)、錠劑(lozenge)、水性或油性懸浮液、可分散粉劑或顆粒、乳液及自乳化(如美國(guó)專利第6,451,339號(hào)中所述)、硬或軟膠囊、糖漿、酏劑、溶液、口腔貼片、口服凝膠、口香糖、可咀嚼片劑、泡騰粉劑和泡騰片劑。欲口服使用的組合物可根據(jù)本領(lǐng)域任何已知用于制造藥物組合物的方法制備，且此類組合物可包含一種或多種選自由甜味劑、矯味劑、著色劑、抗氧化劑和防腐劑組成的組的試劑以提供藥學(xué)上美觀且適口的制劑。片劑包含活性成份與適于制造片劑的無(wú)毒、藥學(xué)上可接受的賦形劑的混合物。這些賦形劑可為，例如惰性稀釋劑，例如纖維素、二氧化硅、氧化鋁、碳酸鈣、碳酸鈉、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；造粒及崩解劑，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如，PVP、纖維素、PEG、淀粉、凝膠或阿拉伯樹膠；和潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。該片劑可無(wú)包衣，或其可以腸溶方式或者藉由已知技術(shù)包衣以延遲在胃腸道中的崩解和吸收，且藉此可長(zhǎng)時(shí)間提供持續(xù)作用。舉例而言，可采用諸如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯等延時(shí)材料。其亦可藉由美國(guó)專利第4,256,108號(hào)；第4,166,452號(hào)；及第4,265,874號(hào)中所闡述的技術(shù)包衣，以形成控制釋放的滲透性治療片劑。
用于口服應(yīng)用的調(diào)配物亦可為硬明膠膠囊形式，其中活性成份與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或其可為軟明膠膠囊形式，其中活性成份與水或油介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。此外，乳液可利用非水混溶成份(例如，油)制備并利用表面活性劑(例如，單-二甘油酯、PEG酯及諸如此類)穩(wěn)定。
水性懸浮液包含活性材料與適于制造水性懸浮液的賦形劑的混合物。所述賦形劑是諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯樹膠等懸浮劑；分散劑或潤(rùn)濕劑可為諸如卵磷脂等天然存在的磷脂、或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯硬脂酸酯)、或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪族醇的縮合產(chǎn)物(例如，十七乙烯氧基鯨蠟醇)、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸與己糖醇的部分酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸與己糖醇酐的部分酯的縮合產(chǎn)物(例如，聚乙烯山梨醇酐單油酸酯)。水性懸浮液亦可包含一種或多種防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯)、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑，及一種或多種甜味劑(例如蔗糖或糖精)。
油性懸浮液可藉由將活性成份懸浮于諸如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油等植物油中或懸浮于諸如液體石蠟等礦物油中來(lái)調(diào)配。油性懸浮液可包含諸如蜂蠟、硬石蠟或十六烷醇等增稠劑?？杉尤胩鹞秳?如以上所述的那些)及矯味劑以提供適口的口服制劑。所述組合物可藉由加入抗氧化劑(例如抗壞血酸)保存。
適于藉由加入水制備水性懸浮液的可分散粉劑及顆粒提供了活性成份與分散劑或潤(rùn)濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑的混合物。適宜分散劑或潤(rùn)濕劑以及懸浮劑是由上述已提及的那些來(lái)舉例說明。亦可存在諸如甜味劑、矯味劑以及著色劑等額外賦形劑。
本發(fā)明藥物組合物亦可呈水包油乳液形式。油相可是植物油(例如橄欖油或花生油)或礦物油(例如液體石蠟)或這些的混合物。適合乳化劑可是天然存在的樹膠(例如阿拉伯樹膠或黃蓍膠)、天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)、及衍生自脂肪酸與己糖醇酐的酯或部分酯(例如山梨醇酐單油酸酯)及所述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)。乳液亦可包含甜味劑和矯味劑。
糖漿及酏劑可使用甜味劑(例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖)調(diào)配。此類調(diào)配物亦可包含緩和劑、防腐劑以及矯味劑和著色劑?？诜芤嚎山Y(jié)合例如環(huán)糊精、PEG和表面活性劑來(lái)制備。
藥物組合物可為無(wú)菌可注射水性或油性懸浮液形式。此懸浮液可根據(jù)已知技術(shù)使用上文已提及的那些適宜分散劑或潤(rùn)濕劑和懸浮劑來(lái)調(diào)配。無(wú)菌可注射制劑亦可為于無(wú)毒非經(jīng)腸可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或懸浮液，例如作為于1，3-丁二醇中的溶液?？刹捎玫目山邮苊浇槲锛叭軇┯绕錇樗?、林格氏溶液(Ringer′s solution)以及等滲氯化鈉溶液。此外，通常使用無(wú)菌不揮發(fā)性油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。任何溫和的不揮發(fā)性油(包括合成單甘油酯或二甘油酯)均可用于此目的。此外，諸如油酸等脂肪酸可用于可注射劑的制備中。
本發(fā)明化合物亦可以栓劑形式施用以經(jīng)直腸施用藥物。這些組合物可藉由將藥物與適宜無(wú)刺激賦形劑混合來(lái)制備，所述賦形劑在常溫下為固體但在直腸溫度下為液體且因而將在直腸中融化以釋放藥物。此類材料包括可可油及聚乙二醇。此外，化合物可借助溶液或軟膏經(jīng)由眼睛遞送來(lái)施用。另外，目標(biāo)化合物的經(jīng)皮遞送可借助離子導(dǎo)入貼片及諸如此類來(lái)實(shí)現(xiàn)。對(duì)于局部使用而言，使用含本發(fā)明化合物的乳霜、軟膏、凝膠、溶液或懸浮液等。本文所用局部應(yīng)用亦意欲包括使用漱口水及漱口藥。
本發(fā)明化合物可經(jīng)調(diào)配以沉積于醫(yī)學(xué)裝置上，該裝置可包括任何各種常用移植物、支架，包括支架移植物、導(dǎo)管、球囊、籃或其它可部署或永久植入身體管腔中的裝置。作為特定實(shí)例，將期望具有可將本發(fā)明化合物遞送至身體藉由介入技術(shù)治療的區(qū)域的裝置和方法。
在示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明的抑制劑可沉積于醫(yī)學(xué)裝置(例如支架)內(nèi)并遞送至治療位點(diǎn)用于身體一部分的治療。
支架已經(jīng)作為治療劑(即，藥物)的遞送媒介物。血管內(nèi)支架通常永久性地植入冠狀或外周血管中。支架設(shè)計(jì)包括美國(guó)專利第4,733,655號(hào)(Palmaz)、第4,800,882號(hào)(Gianturco)、或第4,886,062號(hào)(Wiktor)中的那些。此類設(shè)計(jì)包括金屬和聚合物支架二者、以及自擴(kuò)張及球囊擴(kuò)張式支架。支架亦可用于將藥物遞送至與脈管系統(tǒng)接觸的位點(diǎn)處，例如美國(guó)專利第5,102,417號(hào)(Palmaz)及國(guó)際專利申請(qǐng)案第WO 91/12779號(hào)(Medtronic公司)及WO 90/13332(Cedars-Sanai Medical Center)、美國(guó)專利第5,419,760號(hào)(Narciso，Jr.)及美國(guó)專利第5,429,634號(hào)(Narciso，Jr.)中所揭示。支架亦已用于將病毒遞送至管腔壁用于基因遞送，如美國(guó)專利申請(qǐng)案序列第5,833,651號(hào)(Donovan等人)中所揭示。
術(shù)語(yǔ)″經(jīng)沉積″是指藉由本領(lǐng)域已知方法使抑制劑涂布、吸附、放置、或者納入所述裝置。舉例而言，可將抑制劑埋入涂布或覆蓋醫(yī)學(xué)裝置的聚合物材料中并自其中釋放(″基質(zhì)型″)或由其環(huán)繞并穿過其釋放(″貯器型″)。在后一實(shí)例中，抑制劑可使用一種或多種本領(lǐng)域中已知用于產(chǎn)生此類材料的技術(shù)截留于聚合物材料內(nèi)或偶合至聚合物材料。在另一調(diào)配物中，抑制劑可借助可移除鍵連接至不需涂層的醫(yī)學(xué)裝置的表面并隨時(shí)間流逝釋放，可藉由有效機(jī)械或化學(xué)過程去除，或呈在植入位置處提供抑制劑的永久固定形式。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抑制劑可在形成醫(yī)學(xué)裝置(例如支架)的生物相容涂層期間納入聚合物組合物中。由這些組份產(chǎn)生的涂層通常均勻且用于涂布許多設(shè)計(jì)用于植入的裝置。
聚合物可為生物穩(wěn)定或生物可吸收聚合物，其取決于期望釋放速率或期望聚合物穩(wěn)定程度，但生物可吸收聚合物由于其不像生物穩(wěn)定聚合物一樣其植入后將不會(huì)長(zhǎng)期存在而造成任何不利、慢性局部反應(yīng)，故其用于此實(shí)施方案是優(yōu)選的。可使用的生物可吸收聚合物包括但不限于聚(L-乳酸)、聚己內(nèi)酯、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLLA/PGA)、聚(羥基丁酸酯)、聚(羥基丁酸酯-共-戊酸酯)、聚二氧雜環(huán)己酮、聚原酸酯、聚酸酐、聚(乙醇酸)、聚(D-乳酸)、聚(L-乳酸)、聚(D，L-乳酸)、聚(D，L-丙交酯)(PLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(乙醇酸-共-三亞甲基碳酸酯)(PGA/PTMC)、聚環(huán)氧乙烷(PEO)、聚二氧雜環(huán)己酮(PDS)、聚磷酯、聚磷酯氨基甲酸酯、聚(氨基酸)、氰基丙烯酸酯、聚(三亞甲基碳酸酯)、聚(亞氨基碳酸酯)、共聚(醚-酯)(例如，PEO/PLA)、聚草酸亞烷基酯(polyalkyleneoxalate)、聚磷腈及生物分子(例如，纖維蛋白、纖維蛋白原、纖維素、淀粉、膠原和透明質(zhì)酸)、聚ε己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝膠的交聯(lián)或兩親性嵌段共聚物、及本領(lǐng)域中已知的其它適宜生物可吸收聚合物。而且，可使用具有相對(duì)低慢性組織反應(yīng)的生物穩(wěn)定聚合物(例如，聚氨基甲酸酯、聚硅氧烷、及聚酯)，且其它聚合物若可溶解及在醫(yī)學(xué)裝置上固化或聚合，則亦可使用，例如，聚烯烴、聚異丁烯及乙烯-α烯烴共聚物；丙烯酸聚合物及共聚物、乙烯基鹵化物聚合物及共聚物，例如聚氯乙烯；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯基醚，例如聚乙烯基甲基醚；聚亞乙烯鹵化物，例如聚亞乙烯氟化物及聚亞乙烯氯化物；聚丙烯腈、聚乙烯基酮；聚乙烯基芳族化合物(例如聚苯乙烯)、聚乙烯基酯(例如聚乙酸乙烯酯)；乙烯基單體與彼此及烯烴的共聚物，例如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS樹脂、及乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；吡喃共聚物；聚羥基-丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚；聚羥乙基-天冬酰胺-苯酚；聚環(huán)氧乙烷-聚經(jīng)棕櫚?；鶜埢〈馁嚢彼幔痪埘０?，例如Nylon 66及聚己內(nèi)酰胺；醇酸樹脂、聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亞胺；聚醚；環(huán)氧樹脂、聚氨基甲酸酯；人造絲；人造絲-三乙酸酯；纖維素、乙酸纖維素、丁酸纖維素；乙酸丁酸纖維素；玻璃紙；硝酸纖維素；丙酸纖維素；纖維素醚；及羧甲基纖維素。
聚合物及半滲透聚合物基質(zhì)可形成成型物品，例如瓣膜、支架、輸液管、人工器官及諸如此類。
在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抑制劑偶合至形成為支架或支架-移植物裝置的聚合物或半滲透聚合物基質(zhì)。
通常，藉由旋涂、浸漬或噴射將聚合物施加于可植入裝置的表面。亦可使用本領(lǐng)域中已知的額外方法用于此目的。噴射方法包括傳統(tǒng)方法以及利用噴墨型分配器的微沉積技術(shù)。此外，可使用光圖案化將聚合物沉積于可植入裝置上以使該聚合物僅在該裝置的特定部分上。裝置的此涂布提供圍繞裝置的均勻?qū)樱湓试S藉助裝置涂層獲得各種分析物的改良的擴(kuò)散。
在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中，抑制劑被調(diào)配為自聚合物涂層釋放至醫(yī)學(xué)裝置所放置的環(huán)境中。優(yōu)選地，抑制劑是以控制方式在延長(zhǎng)時(shí)間期(例如歷時(shí)數(shù)月)內(nèi)釋放，其使用許多涉及聚合物載體或?qū)右钥刂屏鞒龅墓夹g(shù)中的至少一種來(lái)達(dá)成。這些技術(shù)中的一些先前已經(jīng)闡述于美國(guó)專利申請(qǐng)案第20040243225A1號(hào)中。
而且，如美國(guó)專利第6,770,729號(hào)中所述，可控制聚合物組合物的反應(yīng)物及反應(yīng)條件，以便控制抑制劑自聚合物涂層的釋放。舉例而言，可調(diào)節(jié)一個(gè)或多個(gè)聚合物涂層的擴(kuò)散系數(shù)以控制抑制劑自聚合物涂層的釋放。在針對(duì)此主題的變化中，可控制一個(gè)或多個(gè)聚合物涂層的擴(kuò)散系數(shù)，以調(diào)節(jié)醫(yī)學(xué)裝置所放置的環(huán)境中所存在分析物(例如，促進(jìn)一部分聚合物分解或水解的分析物)接近聚合物組合物中一種或多種組份的能力(且例如，藉此調(diào)節(jié)抑制劑自聚合物涂層的釋放)。本發(fā)明的又一實(shí)施方案包括具有多個(gè)聚合物涂層的裝置，各裝置具有多個(gè)擴(kuò)散系數(shù)。在本發(fā)明的此類實(shí)施方案中，可藉由多個(gè)聚合物涂層調(diào)節(jié)抑制劑自聚合物涂層的釋放。
在本發(fā)明再一實(shí)施方案中，抑制劑自聚合物涂層的釋放是藉由調(diào)節(jié)聚合物組合物的一種或多種性質(zhì)來(lái)控制，例如一種或多種內(nèi)源或外源化合物的存在、或者聚合物組合物的pH。舉例而言，某些聚合物組合物可經(jīng)設(shè)計(jì)以隨聚合物組合物pH的降低而釋放抑制劑。或者，某些聚合物組合物可經(jīng)設(shè)計(jì)以隨過氧化氫的存在而釋放抑制劑。
IV.治療由CCR1、CCR2和/或CCR3調(diào)節(jié)的疾病的方法 在又一方面中，本發(fā)明提供治療CCR1-、CCR2-和/或CCR3介導(dǎo)的病狀或疾病的方法，該方法是藉由向患有此疾病或病狀的受治療者施用治療有效量的以上式I化合物。在本文中″受治療者″定義為包括動(dòng)物，例如，哺乳動(dòng)物，其包括但不限于靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如，人類)、牛、羊、山羊、馬、狗、貓、兔子、大鼠、小鼠及諸如此類。
CCR1提供用于干擾或促進(jìn)免疫細(xì)胞功能的特定方面、或更一般而言與表達(dá)于哺乳動(dòng)物(例如人類)中寬范圍細(xì)胞類型上的CCR1相關(guān)的功能的靶。抑制CCR1的化合物用于治療目的尤其用于調(diào)節(jié)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突細(xì)胞、及某些免疫源性細(xì)胞(例如，破骨細(xì)胞)功能。因此，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療各種炎性及免疫調(diào)節(jié)病癥及疾病的化合物(參見Saeki等人，Current PharmaceuticalDesign 91201-1208(2003))。
舉例而言，可施用抑制CCR1的一種或多種功能的本發(fā)明化合物以抑制(即，減少或防止)炎癥或與免疫病癥相關(guān)的細(xì)胞浸潤(rùn)。由此，可抑制一種或多種炎性過程，例如白細(xì)胞遷移或浸潤(rùn)、趨化性、胞吐作用(例如，酶、組胺)、或炎性介體釋放。舉例而言，根據(jù)本發(fā)明方法可抑制單核細(xì)胞浸潤(rùn)至炎性位點(diǎn)(例如，在關(guān)節(jié)炎中受傷關(guān)節(jié)、或在MS中的CNS中)。
同樣地，施用促進(jìn)CCR1一種或多種功能的本發(fā)明化合物以刺激(誘導(dǎo)或增強(qiáng))炎性反應(yīng)，例如白細(xì)胞遷移、趨化性、胞吐作用(例如，酶、組胺)或炎性介體釋放，其產(chǎn)生炎性過程的有益刺激。舉例而言，可募集單核細(xì)胞以對(duì)抗細(xì)菌感染。
可使用本發(fā)明方法治療與炎癥有關(guān)的疾病及病狀、免疫病癥及感染。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該疾病或病狀是一種其中抑制或促進(jìn)免疫細(xì)胞(例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、NK細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突細(xì)胞、或某些免疫源性細(xì)胞(例如，破骨細(xì)胞))的作用以調(diào)節(jié)炎性或自體免疫反應(yīng)的疾病或病狀。
在一組實(shí)施方案中，人類或其它物種的疾病或病狀(包括慢性疾病)可利用CCR1、CCR2或CCR3功能的調(diào)節(jié)劑來(lái)治療。這些疾病或病狀包括(1)過敏性疾病，例如，全身性過敏或過敏反應(yīng)、藥物過敏、昆蟲叮咬過敏及食物過敏；(2)炎性腸病，例如克隆氏病(Crohn′s disease)、潰瘍性結(jié)腸炎、回腸炎及小腸炎；(3)陰道炎；(4)牛皮癬及炎性皮膚，例如，皮炎、濕疹、異位性皮炎、過敏性接觸皮炎、蕁麻疹及搔癢；(5)脈管炎；(6)脊椎關(guān)節(jié)病；(7)硬皮?。?8)哮喘及呼吸系統(tǒng)過敏性疾病，例如，哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎、過敏性肺病及諸如此類；(9)自體免疫疾病，例如纖維肌肉疼痛、硬皮病、強(qiáng)直性脊椎炎、幼年型RA、斯蒂爾病(Still′s disease)、多關(guān)節(jié)幼年型RA、少關(guān)節(jié)幼年型RA、風(fēng)濕性多肌痛、高安氏(Takuyasu)關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、全身性紅斑狼瘡、I型糖尿病、II型糖尿病、I型糖尿病(新近發(fā)生的)、視神經(jīng)炎、腎小球腎炎、及諸如此類；(10)移植物排斥，包括同種異體移植物排斥及急性和慢性移植物對(duì)抗宿主疾病；(11)纖維化(例如，肺纖維化(即，特發(fā)性肺纖維化、間質(zhì)性肺纖維化)、與終末期腎病相關(guān)的纖維化、由輻射造成的纖維化、腎小管間質(zhì)性纖維化、表皮下纖維化、硬皮病(進(jìn)行性全身硬化癥)、肝纖維化(包括由酒精性或病毒性肝炎所造成的)、原發(fā)性及繼發(fā)性肝硬化)；(12)急性及慢性肺炎癥(慢性阻塞性肺病、慢性支氣管炎、成人呼吸窘迫綜合征、新生兒呼吸窘迫綜合征、免疫復(fù)合肺泡炎)及(13)其中欲抑制不期望的炎性反應(yīng)或免疫病癥的其它疾病，例如心血管疾病，其包括動(dòng)脈粥樣硬化、由組織移植引起或在再狹窄期間的血管炎癥(其包括但不限于血管成形術(shù)和/或支架置入后再狹窄)、其它急性及慢性炎性病狀，例如，肌炎、神經(jīng)退化性疾病(例如，阿爾茲海默氏病(Alzheimer′s disease))、腦炎、腦膜炎、肝炎、腎炎、敗血癥、類肉瘤病、過敏性結(jié)膜炎、耳炎、鼻竇炎、由關(guān)節(jié)鏡術(shù)造成的滑膜炎癥、高尿酸血癥、創(chuàng)傷、缺血性再灌注損傷、鼻息肉(nasal polyosis)、先兆子癇、口腔扁平苔蘚、格-巴氏綜合征(Guillina-Barre syndrome)、肉芽腫病、與瘦素產(chǎn)生相關(guān)的病狀、貝切特氏綜合征(Behcet′s syndrome)及痛風(fēng)癥，且在傷口愈合應(yīng)用中(14)免疫介導(dǎo)的食物過敏，例如，乳糜瀉。
在另一組實(shí)施方案中，可利用CCR1功能調(diào)節(jié)劑治療疾病或病狀。欲用CCR1功能的調(diào)節(jié)劑治療的疾病的實(shí)例包括癌癥(原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性)(例如，多發(fā)性骨髓瘤；Hata，H.，Leukemia & Lymphoma，2005，46(7)；967-972)、心血管病、其中血管生成或新血管形成起作用的疾病(腫瘤性疾病、視網(wǎng)膜病及黃斑變性)、傳染病(病毒感染，例如，HIV感染、及細(xì)菌感染)及免疫抑制疾病(例如，器官移植病狀及皮膚移植病狀)。術(shù)語(yǔ)″器官移植病狀″意欲包括骨髓移植病狀及實(shí)體器官(例如，腎、肝、肺、心臟、胰臟或其組合)移植病狀。
本發(fā)明的藥物組合物亦可直接或間接抑制炎性位點(diǎn)處金屬蛋白酶及細(xì)胞因子的產(chǎn)生(由于減少細(xì)胞浸潤(rùn))，藉此為與這些細(xì)胞因子有關(guān)的疾病或病狀提供益處。
因此，本發(fā)明化合物用于預(yù)防和治療各種炎性和免疫調(diào)節(jié)病癥及疾病。
取決于欲治療的疾病及受治療者狀況，本發(fā)明化合物可藉由口、非經(jīng)腸(例如，肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、ICV、腦池內(nèi)注射或輸注、皮下注射或植入)、吸入噴霧、鼻、陰道、直腸、舌下或局部施用途徑來(lái)施用，且可單獨(dú)或共同調(diào)配成含有適合每一施用途徑的常規(guī)無(wú)毒藥學(xué)上可接受的載體、佐劑及媒介物的劑量單位調(diào)配物。
在需要趨化因子受體調(diào)節(jié)的病狀的治療或預(yù)防中，適宜劑量水平通常將為約0.001-100毫克/公斤患者體重/天，其可以單一劑量或多劑量施用。優(yōu)選地，該劑量水平將為約0.01-約25毫克/公斤/天；更優(yōu)選地約0.05-約10毫克/公斤/天。適宜劑量水平可為約0.01-25毫克/公斤/天、約0.05-10毫克/公斤/天、或約0.1-5毫克/公斤/天。在此范圍內(nèi)，劑量可為0.005-0.05、0.05-0.5或0.5-5.0毫克/公斤/天。就口服施用而言，所述組合物優(yōu)選以含有1.0-1000毫克活性成份、尤其1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0、及1000.0毫克活性成份的片劑形式提供以根據(jù)癥狀調(diào)節(jié)施用于待治療患者的劑量。所述化合物可以每天1-4次的服法施用，優(yōu)選每天一次或兩次。
然而，應(yīng)了解，對(duì)于任何具體患者，特定劑量水平及給藥頻率可能會(huì)不同且應(yīng)根據(jù)各種因素而定，所述因素包括所用特定化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性及作用時(shí)間長(zhǎng)度、受治療者的年齡、體重、遺傳特性、整體健康狀況、性別及飲食、以及施用模式及時(shí)間、排泄速率、藥物組合、正接受治療的受治療者具體病狀的嚴(yán)重程度。
可利用本發(fā)明化合物、組合物及方法治療或預(yù)防與炎癥相關(guān)的疾病及病狀、免疫病癥、感染及癌癥。
本發(fā)明化合物及組合物可結(jié)合具有相關(guān)效用的其它化合物及組合物用于預(yù)防及治療所關(guān)注的病狀或疾病，例如炎性或自體免疫病癥、病狀及疾病，其包括炎性腸病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、過敏性疾病、牛皮癬、異位性皮炎及哮喘、及以上所提及的那些病理。
舉例而言，在治療或預(yù)防炎癥或自體免疫或例如關(guān)節(jié)炎相關(guān)的骨損失中，本發(fā)明化合物及組合物可結(jié)合抗炎劑或止痛劑使用，例如，鴉片激動(dòng)劑、脂氧合酶抑制劑(例如5-脂氧合酶抑制劑)、環(huán)氧合酶抑制劑(例如環(huán)氧合酶-2抑制劑)、白介素抑制劑(例如白介素-1抑制劑)、NMDA拮抗劑、一氧化氮的抑制劑或一氧化氮的合成抑制劑、非類固醇抗炎劑、或細(xì)胞因子抑制抗炎劑(例如化合物，例如，對(duì)乙酰氨基酚、阿司匹林、可待因(codeine)、芬太尼(fentanyl)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮咯酸(ketorolac)、嗎啡、萘普生(naproxen)、非納西汀(phenacetin)、吡羅昔康(piroxicam)、類固醇止痛劑、舒芬太尼(sufentanyl)、蘇林酸(Sunlindac)、替尼達(dá)普(tenidap)、及諸如此類。同樣地，本發(fā)明化合物及組合物可與以下一起施用以上所列的止痛劑；增效劑，例如，咖啡因、H2拮抗劑(例如，雷尼替丁(ranitidine))、simethicone、氫氧化鋁或氫氧化鎂；減充血?jiǎng)?，例如，去氧腎上腺素、苯丙醇胺(phenylpropanolamine)、偽麻黃堿(pseudoephedrine)、羥甲唑啉(oxymetazoline)、腎上腺素(ephinephrine)、萘甲唑啉(naphazoline)、賽洛唑啉(xylometazoline)、丙己君(propylhexedrine)、或左旋脫氧麻黃堿；鎮(zhèn)咳藥，例如，可待因、氫可酮(hydrocodone)、卡拉美芬(caramiphen)、噴托維林(carbetapentane)、或右美沙芬(dextromethorphan)；利尿藥；及鎮(zhèn)靜或非鎮(zhèn)靜抗組胺藥。
同樣，本發(fā)明的化合物及組合物可結(jié)合其它用于治療、預(yù)防、抑制或緩解本發(fā)明化合物及組合物有用的疾病或病狀的藥物使用。此類其它藥物可藉由其常用途徑及用量與本發(fā)明化合物或組合物同時(shí)或依序施用。當(dāng)本發(fā)明化合物或組合物與一種或多種其它藥物同時(shí)使用時(shí)，優(yōu)選除包含本發(fā)明化合物或組合物外亦包含此類其它藥物的藥物組合物。因此，本發(fā)明的藥物組合物包括除含有本發(fā)明化合物或組合物外亦包含一種或多種其它活性成份或治療劑的那些組合物?？山Y(jié)合本發(fā)明的化合物或組合物分別或在相同藥物組合物中施用的其它治療劑實(shí)例包括，但不限于(a)VLA-4拮抗劑；(b)皮質(zhì)類固醇，例如倍氯米松(beclomethasone)、甲潑尼龍(methylprednisolone)、倍他米松(betamethasone)、潑尼松(prednisone)、潑尼松龍(prednisolone)、地塞米松(dexamethasone)、氟替卡松(fluticasone)、氫化可的松(hydrocortisone)、布地奈德(budesonide)、曲安西龍(triamcinolone)、沙美特羅(salmeterol)、沙美特羅、沙丁胺醇(salbutamol)、福美雷司(formeterol)；(c)免疫抑制劑，例如，環(huán)孢霉素(cyclosporine)(環(huán)孢霉素A、

)、他克莫司(tacrolirnus)(FK-506、

)、雷帕霉素(rapamycin)(西羅莫司(sirolimus)、

)及其它FK-506型免疫抑制劑、及麥考酚酯(mycophenolate)，例如，麥考酚酸嗎乙酯

(d)抗組胺藥(H1-組胺拮抗劑)，例如，溴苯那敏(brompheniramine)、氯苯那敏(chlorpheniramine)、右氯苯那敏(dexchloipheniramine)、曲普利啶(triprolidine)、氯馬斯汀(clemastine)、苯海拉明(diphenhydramine)、二苯拉林(diphenylpyraline)、曲吡那敏(tripelennamine)、羥嗪(hydroxyzine)、甲地嗪(methdilazine)、異丙嗪(promethazine)、三甲潑拉嗪(trimeprazine)、阿扎他定(azatadine)、賽庚啶(cyproheptadine)、安他唑啉(antazoline)、非尼拉敏(pheniramine)、美吡拉敏(pyrilamine)、阿司咪唑(astemizole)、特非那定(terfenadine)、氯雷他定(loratadine)、西替利嗪(cetirizine)、非索非那定(fexofenadine)、脫羧乙氧氯雷他定(descarboethoxyloratadine)、及諸如此類；(e)非類固醇抗哮喘藥(例如，特布他林(terbutaline)、奧西那林(metaproterenol)、非諾特羅(fenoterol)、異他林(isoetharine)、沙丁胺醇(albuterol)、比托特羅(bitolterol)及吡布特羅(pirbuterol))、茶堿(theophylline)、色甘酸鈉(cromolyn sodium)、阿托品(atropine)、異丙托溴銨(ipratropiumbromide)、白三烯(leukotriene)拮抗劑(例如，扎氟普汀(zafmlukast))、孟魯司特(montelukast)、普侖司特(pranlukast)、伊拉司特(iralukast)、泊比司特(pobilukast)及SKB-106,203)、白三烯生物合成抑制劑(齊留通(zileuton)、BAY-1005)；(f)非類固醇抗炎劑(NSAID)，例如，丙酸衍生物(例如，阿明洛芬(alminoprofen))、苯惡洛芬(benoxaprofen)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非諾洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、布洛芬、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生、奧沙普秦(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)及硫惡洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(例如，吲哚美辛、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、環(huán)氯茚酸(clidanac)、雙氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(fentiazac)、呋羅芬酸(furofenac)、異丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、oxpinac、舒林酸(sulindac)、硫平酸(tiopinac)、托美丁(tolmetin)、齊多美辛(zidometacin)及佐美酸(zomepirac))、芬那酸(fenamic acid)衍生物(例如，氟芬那酸(flufenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、尼氟酸(niflumic acid)及托芬那酸(tolfenamic acid))、聯(lián)苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳(diflunisal)及氟苯柳(flufenisal))、昔康類(oxicam)(例如，伊索昔康(isoxicam)、吡羅昔康、舒多昔康(sudoxicam)及替諾昔康(tenoxicam))、水楊酸酯(例如，乙酰水楊酸及柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine))及吡唑啉酮(例如，阿扎丙宗(apazone)、bezpiperylon、非普拉宗(feprazone)、莫非布宗(mofebutazone)、羥布宗(oxyphenbutazone)及保泰松(phenylbutazone))；(g)環(huán)氧合酶-2(COX-2)抑制劑，例如，塞來(lái)考昔(celecoxib)

及羅非考昔(rofecoxib)

(h)IV型磷酸二酯酶(PDE IV)的抑制劑；(i)金化合物，例如，金諾芬(auranofin)及金硫葡糖(aurothioglucose)；(j)依那西普(etanercept)

(k)抗體治療劑，例如，奧素克隆(orthoclone)(OKT3))、達(dá)珠單抗(daclizumab)

)、巴利昔單抗(basiliximab)

)及英夫利昔單抗(infliximab)

)、(l)趨化因子受體、尤其CCR5、CXCR2、CXCR3、CCR2、CCR3、CCR4、CCR7、CX3CR1及CXCR6的其它拮抗劑；(m)潤(rùn)滑劑或緩和劑，例如，礦脂及羊毛脂；(n)角質(zhì)軟化劑(例如，他扎羅汀(tazarotene)；(o)維生素D3衍生物，例如，卡泊三烯(calcipotriene)或卡泊三醇(calcipotriol)

(p)PUVA；(q)地蒽酚(anthralin)

；(r)阿維a酯(etretinate)

及異維a酸(isotretinoin)；及(s)多發(fā)性硬化癥治療劑，例如，干擾素β-1β

、干擾素(β-1α

、硫唑嘌呤

乙酸格拉默(glatiramer acetate)

、糖皮質(zhì)激素(例如，潑尼松龍)及環(huán)磷酰胺；(t)DMARDS，例如，甲氨蝶呤；(u)其它化合物，例如，5-氨基水楊酸及其前藥；羥氯喹啉；D-青霉胺；抗代謝物，例如，硫唑嘌呤、6-巰嘌呤及甲氨蝶呤；DNA合成抑制劑(例如，羥基脲)及微管破壞劑(例如，秋水仙堿(colchicine))?？筛淖儽景l(fā)明化合物與第二活性成份的重量比且將根據(jù)每一成份的有效劑量而定。一般而言，將使用每一成份的有效劑量。因此，舉例而言，當(dāng)本發(fā)明化合物與NSAID組合時(shí)，本發(fā)明化合物與NSAID的重量比將通常自約1000∶1至約1∶1000，優(yōu)選約200∶1至約1∶200范圍。通常，本發(fā)明化合物與其它活性成份的組合亦將處于上述范圍內(nèi)，但在每一情況下，應(yīng)使用每一活性成份的有效劑量。
V.實(shí)施例 提供以下實(shí)施例用以闡述而非限制所要求保護(hù)的發(fā)明。
以下所用試劑及溶劑可自商業(yè)來(lái)源獲得，例如，Aldrich Chemical公司(Milwaukee，Wisconsin，USA)。1H-NMR是在Varian Mercury 400MHz NMR光譜計(jì)上記錄。有效峰是相對(duì)于TMS提供且以以下順序制表多重性(s，單峰；d，雙峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰)及質(zhì)子數(shù)量。質(zhì)譜結(jié)果是以質(zhì)量比電荷的比例、隨后各離子的相對(duì)豐度(在括號(hào)中)來(lái)報(bào)告。在表中，對(duì)于含最普通原子同位素的M+H(或標(biāo)記為M-H)離子報(bào)告單一m/e值。在所有情況中同位素分布(isotope pattern)對(duì)應(yīng)于預(yù)計(jì)式。電噴射離子(ESI)質(zhì)譜分析是在Hewlett-Packard MSD電噴射質(zhì)譜儀上使用配備有Agilent Zorbax SB-C18，2.1X50mm，5μ柱用于樣品遞送的HP1100 HPLC實(shí)施。通常，將分析物以0.1毫克/毫升溶于甲醇并利用遞送溶劑將1微升注入質(zhì)譜儀中，質(zhì)譜儀自100至1500道爾頓掃描。所有化合物皆可以正ESI模式使用含有1％甲酸的乙腈/水作為遞送溶劑來(lái)分析。下文所提供的化合物亦可以負(fù)ESI模式使用2mM于乙腈/水中的NH4OAc作為遞送系統(tǒng)來(lái)分析。
本發(fā)明實(shí)施例及整個(gè)說明書中使用以下縮寫 HPLC，高壓液相色譜；DMF，二甲基甲酰胺；TFA，三氟乙酸；THF，四氫呋喃；EtOAc，乙酸乙酯；BOC2O，二碳酸二叔丁基酯或BOC酸酐；HPLC，高壓液相色譜；DIPEA，二異丙基乙胺；HBTU，六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓；dppf，1，1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵；Pd2(dba)3，三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)；DIPEA，二異丙基乙胺；DMP，鄰苯二甲酸二甲酯；Me，甲基；Et，乙基；DCM，二氯甲烷。
在本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物可如下所述使用各種熟練的技術(shù)人員已知的反應(yīng)來(lái)合成。本領(lǐng)域技術(shù)人員亦應(yīng)認(rèn)識(shí)到，可使用替代方法來(lái)合成本發(fā)明的目標(biāo)化合物，且此文獻(xiàn)主體內(nèi)所闡述的途徑并非窮舉，而是提供感興趣化合物的寬可適用及實(shí)用途徑。
本專利中所主張的某些分子可以不同對(duì)應(yīng)異構(gòu)體及非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體形式存在且主張這些化合物的所有此類變體。
根據(jù)詳細(xì)闡述的用于合成本文關(guān)鍵化合物的實(shí)驗(yàn)程序，可獲得藉由鑒別所述化合物的物理數(shù)據(jù)以及藉由與所述化合物相關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)闡述所描述的分子。
本領(lǐng)域中的那些技術(shù)人員亦應(yīng)認(rèn)識(shí)到，在有機(jī)化學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)處理程序期間，經(jīng)常使用酸和堿。母體化合物若具有需要的固有酸度或堿度，則有時(shí)在本專利內(nèi)所闡述的實(shí)驗(yàn)程序期間制備其鹽。
實(shí)施例1 1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

步驟1將3-碘-7-氮雜吲唑(25.50克)及K2CO3(41.4克)于DMF(200毫升)中的混合物加熱至85℃并緩慢添加氯乙酸叔丁基酯(14.3毫升)。將混合物于此溫度下攪拌1小時(shí)(h)，冷卻至室溫，隨后添加水(300毫升)。將反應(yīng)混合物過濾，獲得(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯。
步驟2向250毫升燒瓶中裝填(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯(15.0克)、PdCl2(dppf)(3.0克)、Zn(CN)2(4.96克)、DMF(200毫升)及H2O(14毫升)。使包含所得懸浮液的燒瓶脫氣并用氮?dú)庵貜?fù)回填持續(xù)5分鐘，隨后向反應(yīng)混合物中添加Pd2(dba)3(3.85克)。將反應(yīng)混合物在N2下在90℃下加熱16小時(shí)，冷卻至室溫，用H2O(800毫升)稀釋并過濾。將所收集固體用甲苯(10毫升)洗滌，獲得黃色固體(3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯。
步驟3將(3-氰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯、鹽酸羥胺(8.28克)及Et3N(22.6毫升)于EtOH(120毫升)中的混合物在N2下在65℃下加熱過夜。將所得混合物冷卻至室溫，過濾并將所收集固體用H2O(100毫升)及Et2O(50毫升x2)洗滌，獲得[3-(N-羥基甲脒基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸叔丁基酯。
步驟4將[3-(N-羥基甲脒基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸叔丁基酯(6.17克)與AcOH(45毫升)及Ac2O(4.3毫升)一起裝填于100毫升小瓶中。將所得混合物于室溫下攪拌1小時(shí)，此時(shí)初始懸浮液變成澄清溶液。向此溶液中添加Pd/C(10％，900毫克)并于1個(gè)大氣壓H2氣球下攪拌，并將所得混合物于室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物藉助硅藻土墊過濾，用DCM/MeOH洗滌。蒸發(fā)掉溶劑，獲得(3-脒基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。
步驟5將以上獲得的(3-脒基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酸叔丁基酯與氯乙醛(5.72毫升)、二噁烷(50毫升)及K2CO3(12.42克)一起裝填于100毫升小瓶中。將所得混合物于80℃下攪拌4小時(shí)并添加更多氯乙醛(5.72毫升)及K2CO3(12.42克)。將混合物再于80℃下攪拌1小時(shí)并于120℃下再攪拌1小時(shí)，冷卻至室溫，用二氯甲烷(DCM)稀釋，用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中蒸發(fā)。藉由快速色譜法純化，獲得褐色油狀物2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸叔丁基酯。
步驟6將2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸叔丁基酯(977毫克)溶于三氟乙酸(TFA)(10毫升)中并于室溫下攪拌1小時(shí)。將混合物在真空中蒸發(fā)，獲得褐色油狀物2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸，其未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。
步驟7(方案A-HBTU偶合程序)將[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸(0.30M，0.40毫升，0.12毫摩爾)溶液轉(zhuǎn)移至小瓶中。將1-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪二鹽酸鹽(48毫克，0.14毫摩爾)、六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓(HBTU)(55毫克，0.14毫摩爾)及i-Pr2NEt(0.30毫升)添加于小瓶中并將混合物于周圍溫度下攪拌。30分鐘后，LC/MS分析顯示形成期望產(chǎn)物且羧酸起始材料完全消耗掉。將混合物用EtOAc稀釋，用水(1x)及鹽水(1x)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并蒸發(fā)。將殘余物藉由硅膠色譜(1％至8％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，0.6H，J＝8.4，1.6Hz)，8.66(dd，0.4H，J＝8.0，1.6Hz)，8.57-8.55(m，1H)，7.29-7.26(m，1H)，7.22-7.16(m，1H)，7.09-7.05(m，2H)，6.50-6.45(m，2H)，5.45(s，0.6H)，5.43(s，1.4H)，4.07-4.01(m，2H)，3.81-3.69(m，4H)，3.17-3.13(m，1.6H)，3.08-3.02(m，2.4H)，1.50-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+484.4。
實(shí)施例2 1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)-苯基]哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用1-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)苯基]-哌嗪二鹽酸鹽及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(2％至3.5％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-{4-[4-氯-2-氟-5-(2-氟乙氧基)苯基]哌嗪-1-基}-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，0.6H，J＝8.0，1.8Hz)，8.67(d，0.4H，J＝6.4Hz)，8.57-8.55(m，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.11-7.06(m，2H)，6.63(d，0.6H，J＝7.6Hz)，6.57(d，0.4H，J＝7.6Hz)，6.54(d，1H，J＝7.6Hz)，5.45(s，0.7H)，5.43(s，1.3H)，4.83-4.80(m，1H)，4.71-4.68(m，1H)，4.31-4.18(m，2H)，3.82-3.76(m，3H)，3.50(t，1H，J＝5.2Hz)，3.23-3.04(m，4H)；LC/MS m/z(M+H)+502.4。
實(shí)施例3 1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用1-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪二鹽酸鹽及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(4％至15％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[4-(4-氯-3-乙氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(25毫克)1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.49-6.40(m，2H)，5.45(s，0.7H)，5.43(s，1.3H)，4.10-4.04(m，2H)，3.81-3.69(m，4H)，3.23-3.16(m，4H)，1.50-1.45(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+466.4。
實(shí)施例4 1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪二鹽酸鹽及[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(1％至10％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(27毫克)1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.67(dd，0.4H)，8.57-8.55(m，1H)，7.31-7.20(m，2H)，7.12-7.06(m，2H)，6.49-6.45(m，1H)，5.45(s，0.6H)，5.43(s，1.4H)，3.86(s，0.9H)，3.85(s，2.1H)，3.81-3.75(m，4H)，3.15-3.08(m，4H)；LC/MS m/z(M+H)+470.4。
實(shí)施例5 1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用(S)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪二鹽酸鹽及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(1％至8％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.55(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.44-6.39(m，2H)，5.42(br.s，2H)，4.83(br.s，0.3H)，4.49(br.s，0.3H)，4.30(br.s，0.3H)，3.89(s，1.2H)，3.88(s，1.8H)，3.83(br.s，0.3H)，3.72-3.69(m，1H)，3.54-3.52(m，1H)，3.38(b r.s，1H)，3.19-3.15(m，1H)，3.00(br.s，1H)，2.80(br.s，1H)，1.50-1.43(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+466.4。
實(shí)施例6 1-[(S)-4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用(S)-1-(4-氯-2-氟-5-甲氧基-苯基)-3-甲基哌嗪二鹽酸鹽及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(2％至3％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[(S)-4-(4-氯-2-氟-5-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(29毫克)1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.79(dd，1H)，8.55(dd，1H)，7.27-7.21(m，3H)，7.07(d，1H)，6.43(br.d，1H)，5.46-5.37(m，2H)，4.83(br.s，0.3H)，4.51-4.48(m，0.6H)，4.28-4.21(m，0.6H)，3.86(s，0.9H)，3.85(s，2.1H)，3.79(br.s，0.3H)，3.67(br.s，0.3H)，3.33-3.21(m，2.5H)，2.95-2.93(m，0.9H)，2.83-2.76(m，1.6H)，1.48-1.40(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+484.4。
實(shí)施例7 1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用(R)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(1％至7.5％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.76(d，0.6H)，8.66(dd，0.3H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.19(m，4H)，6.48-6.40(m，2H)，5.53-5.40(m，2H)，4.26(br.d，0.6H)，4.00(br.d，0.6H)，3.88(s，1.3H)，3.86(s，1.7H)，3.80-3.49(m，3.2H)，3.33(br.s，0.6H)，3.17-3.14(m，2H)，1.51-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+466.4。
實(shí)施例8 1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用(S)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(1％至7％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[(S)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.77(d，0.6H)，8.66(d，0.3H)，8.57-8.54(m，1H)，7.30-7.19(m，4H)，6.48-6.40(m，2H)，5.54-5.36(m，2H)，4.25(b r.d，0.6H)，4.00(br.d，0.6H)，3.88(s，1.3H)，3.86(s，1.7H)，3.82-3.48(m，3.2H)，3.36-3.29(m，0.6H)，3.17-3.13(m，2H)，1.51-1.43(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+466.4。
實(shí)施例9 1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。使用(R)-1-(4-氯-3-甲氧基苯基)-3-甲基哌嗪及[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酸作為偶合組份。粗產(chǎn)物藉由硅膠色譜(1％至7.5％于CH2Cl2中的MeOH)純化，獲得棕褐色固體1-[(R)-4-(4-氯-3-甲氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.75(d，0.6H)，8.66(dd，0.4H)，8.57-8.54(m，1H)，7.29-7.18(m，4H)，6.44-6.39(m，2H)，5.42(br.s，2H)，4.82(br.s，0.3H)，4.45(br.s，0.3H)，4.33(br.s，0.3H)，3.88(s，1.2H)，3.87(s，1.8H)，3.83(br.s，0.3H)，3.73-3.67(m，1H)，3.54-3.52(m，1H)，3.38(br.s，1H)，3.17-3.13(m，1H)，2.99(br.s，1H)，2.80(br.s，1H)，1.50-1.42(m，3H)；LC/MS m/z(M+H)+466.4。
實(shí)施例10 2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-((S)-4-(4-氯-3-乙氧基苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是根據(jù)方案A制備。向含有(S)-1-(4-氯-3-乙氧基苯基)-3-甲基哌嗪二鹽酸鹽(70毫克，0.21毫摩爾)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩爾)、HBTU(81毫克，0.21毫摩爾)、DMF(0.7毫升)及DIPEA(0.15毫升，0.87毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于30℃下維持24小時(shí)。將溶液用EtOAc(30毫升)稀釋并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl飽和水溶液(2×10毫升)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥并于真空中濃縮。所得殘余物是藉由制備型HPLC(MeCN-H2O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)純化并將純凈部分凍干，獲得所示化合物(11毫克，11％產(chǎn)率)MS(ES)[M+H]+預(yù)計(jì)值480.2，試驗(yàn)值480.5；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.94(br s，1H)，8.79(dd，J＝1.6，8.0，1H)，8.55(dd，J＝1.6，4.4，1H)，7.19-7.26(m，4H)，6.37-6.43(m，2H)，5.40(br s，2H)，2.78-4.81(m，10H)，4.07(q，J＝6.8，2H)，1.46(t，J＝6.8，3H)。
實(shí)施例11 2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)哌嗪-1-基)乙酮的合成。

向含有1-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)哌嗪二鹽酸鹽(70毫克，0.21毫摩爾)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩爾)、HBTU(83毫克，0.22毫摩爾)、DMF(0.7毫升)、及DIPEA(0.20毫升，1.2毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于20℃下維持24小時(shí)。將溶液用EtOAc(30毫升)稀釋并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl飽和水溶液(2×10毫升)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥并于真空中濃縮。所得殘余物藉由制備型HPLC(MeCN-H2O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)純化并將純凈部分凍干，獲得所示化合物(20毫克，20％產(chǎn)率)MS(ES)[M+H]+預(yù)計(jì)值484.2，試驗(yàn)值484.4；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.94(br s，1H)，8.78(dd，J＝1.2，8，1H)，8.55(dd，J＝1.2，4.6，1H)，7.16-7.26(m，4H)，6.45-6.53(m，2H)，5.44(s，2H)，4.77(dt，J＝4.0，46.8，2H)，4.26(dt，J＝4.0，26.8，2H)，3.69-3.78(m，4H)，3.10-3.21(m，4H)。
實(shí)施例12 2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-((S)-4-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)乙酮的合成。

向含有(S)-1-(3-(2-氟乙氧基)-4-氯苯基)-3-甲基哌嗪二鹽酸鹽(80毫克，0.23毫摩爾)的小瓶中添加2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(51毫克，0.21毫摩爾)、HBTU(81毫克，0.21毫摩爾)、DMF(0.7毫升)、及DIPEA(0.2毫升，1.2毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于30℃下維持24小時(shí)。將溶液用EtOAc(30毫升)稀釋并用1N HCl(2×10毫升)及NaCl飽和水溶液(2×10毫升)洗滌。有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥并于真空中濃縮。所得殘余物藉由制備型HPLC(MeCN-H2O的20→95％梯度，含有0.1％TFA)純化并將純凈部分凍干，獲得所示化合物(14毫克，13％產(chǎn)率)MS(ES)[M+H]+預(yù)計(jì)值498.2，試驗(yàn)值498.4；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.95(br s，1H)，8.79(dd，J＝1.6，8.2，1H)，8.55(dd，J＝1.6，4.4，1H)，7.19-7.26(m，4H)，6.44-6.50(m，2H)，5.40(br s，2H)，4.77(dt，J＝4.2，47.2，2H)，4.26(dt，J＝4.2，27.2，2H)，2.78-4.42(m，10H)。
實(shí)施例13 1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中裝填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩爾)、HBTU(125毫克，0.33毫摩爾)、1-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪二鹽酸鹽(142毫克，0.50毫摩爾)、無(wú)水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.5毫升)。給小瓶蓋上蓋子，加熱至45℃并攪拌過夜。次日，在真空中去除揮發(fā)物并藉由制備型hplc(反相，乙腈-水梯度)分離，獲得1-[4-(4-氯-3-甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮MS(ES)[M+H]+試驗(yàn)值436.4。
實(shí)施例14 1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中裝填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩爾)、HBTU(125毫克，0.33毫摩爾)、1-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪二鹽酸鹽(170毫克，0.50毫摩爾)、無(wú)水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.5毫升)。給小瓶蓋上蓋子，加熱至45℃并攪拌過夜。次日，在真空中去除揮發(fā)物并藉由制備型hplc(反相，乙腈-水梯度)分離，獲得1-[4-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮MS(ES)[M+H]+試驗(yàn)值490.4。
實(shí)施例15 1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向小瓶中裝填2-(3-(1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酸(55毫克，0.226毫摩爾)、HBTU(125毫克，0.33毫摩爾)、1-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪二鹽酸鹽(177毫克，0.50毫摩爾)、無(wú)水DMF(2.0毫升)、及DIPEA(0.4毫升)。將小瓶蓋上，加熱至45℃并攪拌過夜。次日，在真空中去除揮發(fā)物并藉由制備型hplc(反相，乙腈-水梯度)分離，獲得1-[4-(4-氯-3-三氟甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮。MS(ES)[M+H]+試驗(yàn)值506.4。
實(shí)施例16 1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

該標(biāo)題化合物是自1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮(參見美國(guó)申請(qǐng)案第11/474,132號(hào)，其作為美國(guó)專利第20070010524號(hào)公開，以引用方式并入)根據(jù)類似于在實(shí)施例1的合成中步驟2至步驟5所闡述的程序來(lái)制備1H NMR(CDCl3，400MHz)δ10.22(br，1H)，8.82(dd，1H)，8.56(dd，1H)，7.20-7.30(m，3H)，7.11(s，1H)，6.47(d，1H)，6.42(dd，1H)，5.44(s，2H)，3.88(s，3H)，3.80(m，4H)，3.19(m，4H)；MS(ES)M+H預(yù)計(jì)值452.2。
實(shí)施例17 1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮的合成。

向1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮(50毫克，0.11毫摩爾，1eq)于THF中的溶液中添加60％氫化鈉(5.7毫克，0.14毫摩爾，1.3eq)并攪拌1小時(shí)，隨后添加碘甲烷(25.8毫克，0.16毫摩爾，1.5eq)。2小時(shí)后，LCMS顯示主峰是期望產(chǎn)物。藉由制備型hplc(反相，乙腈-水梯度)，獲得1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-[3-(1-甲基-1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]-乙酮。MS(ES)[M+H]+試驗(yàn)值465.2。
實(shí)施例18
步驟14-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯
向配備有機(jī)械攪拌器、氣體接頭、加熱套及溫度計(jì)的3頸5升Morton燒瓶中添加外消旋-BINAP(rac-BINAP)(4.24克，0.005當(dāng)量)及Pd2(dba)3(3.20克，0.0025當(dāng)量)。將燒瓶抽真空，并用氮?dú)饣靥睢＝?jīng)由套管添加甲苯(100毫升)。將混合物于室溫下攪拌15分鐘，獲得紫色溶液。然后添加甲苯(2.0升)。一次性添加2-氯-5-溴苯甲醚(300.3克，1.356摩爾，1當(dāng)量)。一次性添加Boc-哌嗪(252.4克，1當(dāng)量)。一次性添加叔丁醇鈉(183.0克，1.4當(dāng)量)。將燒瓶抽真空并用氮?dú)饣靥?。然后將混合物加熱至?nèi)部溫度為60℃。獲得非均相淺橙色漿液。1小時(shí)后，該混合物變成均相褐色溶液。再過15小時(shí)后，將混合物冷卻至室溫。將EtOAc(2.0升)添加于攪拌混合物中。將固體過濾。濾液用EtOAc(100毫升)洗滌。將合并的濾液用10％K2CO3水溶液(1×1升)、水(1×1升)洗滌，并經(jīng)MgSO4干燥。在真空中去除溶劑，獲得橙色固體狀產(chǎn)物(410.3克，93％產(chǎn)率)。
步驟21-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪二鹽酸鹽
向配備有機(jī)械攪拌器的4升燒杯中裝填4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁基酯(500克，1.53摩爾，1當(dāng)量)及MeOH(1.50升)。于室溫下攪拌的同時(shí)，在5分鐘內(nèi)添加37％濃HCl(500毫升，4當(dāng)量)。使內(nèi)部溫度升至40℃，且溶液變稠，同時(shí)有沉淀。15分鐘后，在熱板上將混合物加熱至內(nèi)部溫度為60℃。(當(dāng)混合物加熱時(shí)在約50℃時(shí)開始出現(xiàn)起泡。)于60℃下2小時(shí)后，將溶液冷卻至室溫，且隨后于冰箱中冷卻至5℃。藉由過濾分兩批收集產(chǎn)物。將各批紅-褐色濾液用EtOAc(2×500毫升)洗滌，獲得淺黃色固體。將兩個(gè)批料合并獲得產(chǎn)物(391.3克)。將濾液在真空中濃縮至體積為300毫升并利用熱(50℃)MeOH(500毫升)處理。將混合物在冰箱中冷卻至5℃維持24小時(shí)。藉由過濾收集所得沉淀物并用EtOAc(2×200毫升)洗滌，獲得額外44.3克產(chǎn)物(總共435.6克，95％產(chǎn)率)。
步驟32-氯-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
向配備有機(jī)械攪拌器的3升燒瓶中添加1-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪二鹽酸鹽(220克，0.73摩爾，1當(dāng)量)、CH2Cl2(1000毫升)、及水(1000毫升)。利用冰-水浴將兩相混合物冷卻至5℃。將K2CO3(506克，5當(dāng)量)逐份添加于劇烈攪拌的溶液中以使起泡減至最少。自添加漏斗逐滴添加氯乙酰氯(124.4克，1.5當(dāng)量)于CH2Cl2(100毫升)中的溶液，同時(shí)維持內(nèi)部溫度低于8℃。1小時(shí)后，離開冷卻浴，并使反應(yīng)升溫至室溫。再過1小時(shí)后，將該層分離。水相用CH2Cl2(2×300毫升)萃取，且合并的有機(jī)層經(jīng)3∶1Na2SO4/K2CO3干燥(添加K2CO3有助于使溶液相變得透明)。過濾后，將濾液在真空中濃縮，并將殘余物于真空下干燥16小時(shí)，獲得灰白色固體狀產(chǎn)物(410克，92％產(chǎn)率)。
步驟67-氮雜吲唑-3-甲醛
向配備有數(shù)字式溫度計(jì)、1升添加漏斗及機(jī)械攪拌器的5升3頸燒瓶(所有玻璃器具在使用之前皆在烘箱中干燥并在空氣中冷卻30分鐘)中裝填3-碘-7-氮雜吲唑(196.0克，0.80摩爾)及1升無(wú)水THF(于自Aldrich購(gòu)得的SureSeal瓶中且直接使用)。將固體于室溫下完全溶于THF中以形成深褐色溶液。然后將燒瓶利用冰/NaCl浴冷卻至-5℃并適度攪拌，逐滴添加鄰-甲苯基氯化鎂(1M于THF中的溶液，880毫升，1.1當(dāng)量)以使內(nèi)部溫度保持在-5℃至-3℃之間(添加約820毫升鄰-甲苯基氯化鎂溶液之后，溫度不再上升)。整個(gè)添加過程耗時(shí)2小時(shí)25分。添加結(jié)束后，混合物為均相深褐色溶液。
再過1小時(shí)后，逐滴添加異丙基氯化鎂溶液(2M于THF中，480毫升，1.2當(dāng)量)以保持內(nèi)部溫度＜4℃。25分鐘且添加約200毫升異丙基氯化鎂溶液后，開始形成褐色沉淀物。總共添加380毫升異丙基氯化鎂溶液后，混合物再次變成均相。整個(gè)添加過程實(shí)施45分鐘。再1小時(shí)25分鐘之后，取出少量樣品并用D2O中止反應(yīng)。此樣品的LCMS分析顯示完成碘-Mg交換。
然后逐滴添加1-甲酰基哌啶(120毫升，1.3當(dāng)量)以保持內(nèi)部溫度在＜2℃之間。添加約30毫升1-甲?；哙ず?，內(nèi)部溫度不再上升并相對(duì)快的添加剩余1-甲酰基哌啶。整個(gè)添加過程耗時(shí)20分鐘。添加結(jié)束時(shí)，混合物仍為深色均相溶液并使其緩慢升溫至室溫并適度攪拌18小時(shí)。
將混合物利用冰/NaCl浴重新冷卻至0℃并藉由緩慢添加NH4Cl飽和溶液(750毫升)/濃HCl溶液(250毫升)的混合物中止反應(yīng)以保持內(nèi)部溫度在＜35℃。添加完成后，允許持續(xù)攪拌1小時(shí)且出現(xiàn)黃色沉淀物。將混合物過濾且固體用THF(100毫升)洗滌。將所收集濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中并利用添加NaHCO3(約5克)將水層的pH調(diào)節(jié)至5與6之間。分離THF層并用NaCl飽和溶液(2×100毫升)洗滌。將合并的水層(包括NaCl洗滌層及中止反應(yīng)的水層)用EtOAc(3×250毫升)萃取。將合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)、過濾并在真空中蒸發(fā)(浴溫度＜30℃)，獲得淺褐色固體。將此固體用Et2O(600毫升)研磨并過濾。將所收集固體用Et2O(2×100毫升)洗滌，獲得淺黃色固體7-氮雜吲唑-3-甲醛(86.6克，73％)。
步驟41-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲?；?吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮
將7-氮雜吲唑-3-甲醛(86.6克，0.59摩爾，1當(dāng)量)，NaI(8.8克，0.1當(dāng)量)與K2CO3(162.5克，2當(dāng)量)于DMF(0.5升)中的混合物在5升燒瓶中加熱至85℃(加熱過程耗時(shí)約1.5小時(shí))。將2-氯-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮(175克，1當(dāng)量)以小份添加于反應(yīng)混合物中。整個(gè)添加過程耗時(shí)約30分鐘。然后將混合物于85℃下攪拌30分鐘且LCMS證實(shí)反應(yīng)完成。冷卻至室溫后，將混合物轉(zhuǎn)移至4升具有2升冰的燒瓶中。將反應(yīng)燒瓶用少量丙酮(30毫升)洗滌且也轉(zhuǎn)移至4升燒瓶中的DMF/冰混合物中。有大量淺褐色固體沉淀出。冰完全融化后，將混合物過濾。將所收集固體用水(1升)洗滌，摻合，且然后用水(1升)洗滌，以除去一些殘余DMF。所收集固體含有大量水，故將其溶于CH2Cl2(4升)中并將混合物轉(zhuǎn)移至5升分液漏斗中。分離出底部CH2Cl2層并將頂部水層用CH2Cl2(2×100毫升)洗滌。將合并的CH2Cl2層干燥(Na2SO4)，過濾并在真空中蒸發(fā)，獲得淺褐色固體1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲酰基-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(236.4克，97％)，其未經(jīng)純化即使用。
步驟51-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮
于裝配有磁力攪拌棒及氮?dú)馊肟诘?升圓底燒瓶中將1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-甲?；?吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(300克，723毫摩爾，1當(dāng)量)、三聚乙二醛二水合物(60.6克，0.4當(dāng)量)、及乙酸銨(222.9克，4當(dāng)量)懸浮于THF(720毫升)與MeOH(720毫升)的混合物中。添加乙酸(84毫升，2當(dāng)量)并將混合物于45℃油浴中加熱(加熱時(shí)固體溶解)。12小時(shí)后，LC/MS分析顯示醛起始材料完全消耗掉且形成期望產(chǎn)物(LC/MSm/z(M+H)+452.1)。藉由旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除MeOH/THF。將殘余物溶于10％于CH2Cl2中的MeOH(約1.5升)中并將混合物與碳酸鉀水溶液(約210克碳酸鉀于約1.5升水中，水溶液pH＝8-9)一起劇烈晃動(dòng)。將各層分離，且水層用10％于CH2Cl2中的MeOH(2x100毫升)萃取。將合并的有機(jī)層濃縮，獲得褐色油狀固體。將粗產(chǎn)物懸浮于10％于EtOAc中的MeOH(約1升)中。添加無(wú)水Na2SO4(約60克)及硅膠(約100克)并利用加熱槍溫和地加熱漿液以溶解粗產(chǎn)物。將漿液轉(zhuǎn)移至2升含硅膠(約100克，用10％于EtOAc中的MeOH預(yù)平衡)的多孔玻璃過濾漏斗，并將產(chǎn)物藉助硅膠塞利用10％于EtOAc中的MeOH(約6升)、1％Et3N、10％于EtOAc中的MeOH(約10升)洗脫。(注意在硅膠的存在下產(chǎn)物的不完全溶解和/或產(chǎn)物的沉淀使過濾變得復(fù)雜)。藉由旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑。將殘余物用MeCN(1×300毫升)研磨并干燥(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，隨后在高真空中)，獲得灰白色固體1-[4-(4-氯-5-乙氧基-2-氟苯基)哌嗪-1-基]-2-[3-(1H-咪唑-2-基)-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基]乙酮(190克，58％，LC/MS純度＞98％)。
步驟72-(3-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮鹽酸鹽
向帶有磁力攪拌器的2升燒瓶中裝填起始材料(5.1克，11.28毫摩爾)及EtOAc(900毫升)。將所得懸浮液加熱以形成澄清溶液并在適度攪拌下冷卻至室溫。于室溫下在5分鐘內(nèi)將于Et2O中的HCl(2M，6.2毫升，12.42毫摩爾)逐滴添加于所得溶液中。添加之后，將所得懸浮液于室溫下再攪拌1小時(shí)。藉由過濾收集固體并用Et2O(150毫升×2)洗滌并在真空中干燥，獲得5.4克灰白色粉末。向帶有磁力攪拌器的250毫升燒瓶中裝填以上所獲得粉末(5.4克)、丙酮(100毫升)及去離子水(16毫升)。將所得懸浮液加熱以形成澄清溶液并攪拌至冷卻。當(dāng)溶液變得渾濁(出現(xiàn)晶種)時(shí)，在20分鐘內(nèi)將丙酮(540毫升)緩慢添加于懸浮液中。將所得懸浮液加熱至50℃并攪拌2小時(shí)。趁熱過濾，用熱丙酮(50毫升×2)洗滌并在真空中干燥，獲得3.3克(60％)灰白色固體產(chǎn)物m.p.164-165℃。在偏光顯微鏡下晶體呈現(xiàn)為棱晶。
實(shí)施例19
步驟11-{2-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-氧代-乙基}-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲腈的合成
向2000毫升燒瓶中裝填1-[4-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-2-(3-碘-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-乙酮(參見美國(guó)申請(qǐng)案序列第11/474,132號(hào)，作為US 20070010524號(hào)公布，40克，78.1毫摩爾)、dppf(3.86克，6.96毫摩爾)、Zn(CN)2(9.6克，81.6毫摩爾)、DMF(360毫升)和H2O(20毫升)。將所得懸浮液使用N2脫氣5分鐘，隨后添加Pd2(dba)3(4.24克，4.64毫摩爾)。將反應(yīng)混合物于N2下于90℃下加熱2小時(shí)(藉由TLC及LC-MS監(jiān)測(cè))。冷卻至室溫后，用EtOAc(1500毫升)稀釋，過濾以去除沉淀物并用H2O(1000×2毫升)、飽和EDTA.4Na(800毫升×2)、鹽水洗滌并經(jīng)Na2SO4干燥。蒸發(fā)掉溶劑后，添加醚(150毫升)并攪拌2小時(shí)。將所得固體過濾，獲得淺黃色粉末狀期望產(chǎn)物30克(93％)。自回流CH3CN(160毫升)中重結(jié)晶，獲得26克(80％)淺黃色晶體mp 183-185℃；Rt＝2.38分鐘；MS(ES)M+H預(yù)計(jì)值411.1，試驗(yàn)值411.1。
步驟21-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-(3-(4，5-二氫-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)乙酮的合成
向250毫升燒瓶中裝填1-(2-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1H-吡唑[3，4-b]吡啶-3-甲腈(15.3克，37.2毫摩爾)、EtOH(40毫升，約1M)。在冰浴及攪拌下，添加AcOH(6.75毫升，112毫摩爾)，隨后添加乙二胺(25毫升，372毫摩爾)。將所得混合物于120℃下(浴槽)在N2下加熱(觀察到混合物開始回流)1.5小時(shí)。TLC及LC-MS顯示起始材料消失且形成咪唑啉。冷卻至室溫后，將混合物用DCM(700毫升)稀釋并用H2O(350毫升)洗滌。將H2O層利用DCM(150毫升)反萃取，且合并的有機(jī)層用鹽水(350毫升)洗滌并經(jīng)MgSO4干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑后，將殘余物懸浮于熱EtOAc(80毫升)中。冷卻至室溫后，藉由過濾收集固體并用EtOAc(30毫升)洗滌，獲得白色粉末狀標(biāo)題化合物(16克，95％)，其直接用于下一步驟mp 133-135℃；Rt＝1.369分鐘。MS(ES)M+H預(yù)計(jì)值454.2，試驗(yàn)值454.4。
步驟32-(3-1H-咪唑-2-基)-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-1-基)-1-(4-(4-氯-3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)乙酮
將以上咪唑啉(12.3克，27.1毫摩爾)與無(wú)水DMSO(108毫升，約0.25M)一起裝填于500毫升燒瓶中。在攪拌下逐份添加DMP(17.2克，40.6毫摩爾)。將所得混合物于45℃下在N2下攪拌2小時(shí)(藉由TLC及LC-MS監(jiān)測(cè))。冷卻至室溫后，反應(yīng)用飽和Na2S2O3(100毫升)(冰浴)、隨后3N NaOH(100毫升)(pH12至13)及H2O(300毫升)中止并用DCM(600毫升+300毫升)萃取。將合并的有機(jī)層用飽和NaHCO3(300毫升)、鹽水(300毫升)洗滌并干燥(MgSO4，120克)。蒸發(fā)掉有機(jī)溶劑后，將殘余黃色固體(約11克)溶于熱CH3CN(20毫升)中。冷卻至室溫后，藉由過濾收集所得固體，獲得6.7克(55％)淺褐色晶體狀標(biāo)題化合物mp 149-152℃；Rt＝1.309分鐘。MS(ES)M+H預(yù)計(jì)值452.2，試驗(yàn)值452.4。將母液濃縮并獲得額外0.6克(總分離產(chǎn)率為60％)。
實(shí)施例20 以下實(shí)施例闡釋本發(fā)明化合物與先前闡述的類似化合物(美國(guó)公布案第2007/0010524A1號(hào))相比具有意想不到地優(yōu)良藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。
出于比較目的，表2A中呈現(xiàn)本發(fā)明化合物(即，化合物B，亦參見表2B中的1.016)及兩種美國(guó)公布案第2007/0010524A1號(hào)中所述化合物(即，化合物A和C)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征。如本文所示，化合物B具有優(yōu)良的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。更具體而言，本發(fā)明化合物B由于其在口服吸收(如藉由％口服生物利用度所測(cè)量)；Cmax、及AUC值方面與結(jié)構(gòu)類似的化合物A和C相比展示實(shí)質(zhì)增加而更有利。
大鼠PK方案 在藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中，將各化合物給四只未曾用于試驗(yàn)的雄性斯普拉-道來(lái)氏(Sprague-Dawley)大鼠服用。兩只動(dòng)物以1毫克/公斤靜脈內(nèi)(i.v.)接受單次劑量的化合物(調(diào)配于31.6％丙二醇/31.6％N，N-二甲基乙酰胺/36.8％EtOH中)，兩只動(dòng)物以50毫克/公斤接受該化合物(調(diào)配于1％于水中的HPMC中)的口服給藥(p.o.)。各自給藥后在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(最多24小時(shí))收集血樣并使用LC-MS/MS方法分析化合物的相應(yīng)血漿濃度。構(gòu)造血漿濃度-時(shí)間曲線并使用非房室分析推導(dǎo)出相應(yīng)藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。表中所展示的Cmax(最大血漿濃度)及AUC(曲線下面積)值是基于口服給藥后的血漿濃度-時(shí)間曲線來(lái)計(jì)算。F(口服生物利用度)值是口服給藥后的曲線下面積(標(biāo)準(zhǔn)化成1毫克/公斤)與iv給藥后的曲線下面積的比率。
表2A＊
*在SD大鼠中經(jīng)口以50毫克/公斤服用化合物。
實(shí)施例21 此實(shí)施例闡釋與本發(fā)明感興趣的化合物相關(guān)的生物活性的評(píng)價(jià)。
材料及方法 A.細(xì)胞 1.表達(dá)CCR1的細(xì)胞 a)THP-1細(xì)胞 THP-1細(xì)胞是自ATCC獲得(TIB-202)并作為于RPMI-1640培養(yǎng)基中的懸浮液培養(yǎng)，該培養(yǎng)基補(bǔ)充有2mM L-谷氨酰胺、1.5克/升碳酸氫鈉、4.5克/升葡萄糖、10mM HEPES、1mM丙酮酸鈉、0.05％2-巰基乙醇及10％FBS。使細(xì)胞在5％CO2/95％空氣、100％濕度于37℃下生長(zhǎng)并每周以1∶5繼代培養(yǎng)兩次(細(xì)胞以2x105至2x106個(gè)細(xì)胞/毫升的密度范圍培養(yǎng))并以1x106個(gè)細(xì)胞/毫升收獲。THP-1細(xì)胞表達(dá)CCR1且可用于CCR1結(jié)合及功能測(cè)定中。
2.趨化性測(cè)定 趨化性測(cè)定是使用5微米孔聚碳酸酯、聚乙烯基吡咯烷酮涂布的過濾器在96孔趨化性室(馬里蘭州蓋瑟斯堡的神經(jīng)探針公司(Neuroprobe；Gaithersburg，MD))中使用趨化性緩沖液(Hank的平衡鹽溶液(HBSS)及1％FBS)來(lái)進(jìn)行。使用CCR1趨化因子配體(即，MIP-1α，CCL15/白細(xì)胞誘素；明尼蘇達(dá)州明尼阿波利斯的RD系統(tǒng)公司(R&D Systems；Minneapolis，MN))來(lái)評(píng)價(jià)化合物調(diào)節(jié)的對(duì)CCR1介導(dǎo)的遷移的抑制。其它趨化因子(即，SDF-1α；明尼蘇達(dá)州明尼阿波利斯的RD系統(tǒng)公司)用作特異性對(duì)照。下部室裝載有29微升趨化因子(即，0.1nM CCL15/白細(xì)胞誘素)及不同量的化合物；頂部室含有20微升100,000個(gè)THP-1或單核細(xì)胞。將所述室于37℃下培育1-2小時(shí)，且在下部室中細(xì)胞數(shù)量是藉由在5個(gè)高倍視野中直接對(duì)每孔進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)或藉由CyQuant測(cè)定(分子探針公司(Molecular Probes))(一種測(cè)量核酸含量的熒光染料方法)及顯微鏡觀察來(lái)確定數(shù)量。
B.CCR1抑制劑的鑒定 趨化因子的一種主要功能是其介導(dǎo)表達(dá)趨化因子受體的細(xì)胞(例如，白細(xì)胞)遷移的能力。為證實(shí)感興趣化合物不僅抑制CCR1特異性結(jié)合及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)(至少如藉由鈣動(dòng)員測(cè)定所確定)，而且抑制CCR1介導(dǎo)的遷移，采用趨化性測(cè)定。使用類似于單核細(xì)胞的THP-1骨髓單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞、以及新分離的單核細(xì)胞作為受CCR1趨化因子配體(即，MIP-1α、CCL15/白細(xì)胞誘素)化學(xué)引誘的靶。將細(xì)胞放置于微孔遷移室的頂部隔室中，同時(shí)MIP-1α(或其它有效CCR1趨化因子配體)及濃度漸增的感興趣化合物裝載于下部室中。在缺乏抑制劑的情況下，細(xì)胞將響應(yīng)趨化因子激動(dòng)劑遷移至下部室中；若化合物抑制CCR1功能，則大部分細(xì)胞將留在上部室中。為確定感興趣化合物對(duì)CCR1的親和力以及證實(shí)其抑制CCR1介導(dǎo)的細(xì)胞遷移的能力，在此趨化性測(cè)定中在1x10-10至1x10-4M的化合物濃度范圍內(nèi)滴定抑制活性。在此測(cè)定中，改變化合物的量；同時(shí)細(xì)胞數(shù)量及趨化因子激動(dòng)劑濃度保持恒定。將趨化性室于37℃下培育1-2小時(shí)后，藉由利用CyQuant測(cè)定(分子探針公司)(一種測(cè)量核酸含量的熒光染料方法)標(biāo)記且藉由利用Spectrafluor Plus(替康公司(Tecan))測(cè)量來(lái)確定下部室中響應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量。使用加利福尼亞州圣迭戈的GP公司(GraphPad，Inc，San Diego，Ca)的計(jì)算機(jī)程序Prism計(jì)算IC50值。IC50值是使響應(yīng)CCR1激動(dòng)劑的細(xì)胞數(shù)量受到50％抑制所需的化合物濃度。
1.體內(nèi)效能 a)破壞性關(guān)節(jié)炎癥的兔模型 兔LPS研究是基本上如Podolin等人在J.Immunol.169(11)6435-6444(2002)中所述進(jìn)行。利用LPS(10納克)對(duì)雌性新西蘭兔(約2公斤)的兩個(gè)膝進(jìn)行關(guān)節(jié)內(nèi)處理。以5ml/kg的劑量體積口服給予兩次(關(guān)節(jié)內(nèi)注射LPS前2小時(shí)和關(guān)節(jié)內(nèi)注射LPS后4小時(shí))感興趣的化合物，例如1.016(配制成1％的甲基纖維素溶液)或運(yùn)載體(1％的甲基纖維素溶液)。LPS注射16個(gè)小時(shí)之后，灌洗膝并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。藉由募集到膝關(guān)節(jié)發(fā)炎的滑液的炎性細(xì)胞數(shù)目減少來(lái)確定治療的有益作用。用感興趣的化合物治療導(dǎo)致募集的炎性細(xì)胞明顯減少。
b)感興趣化合物在膠原誘發(fā)關(guān)節(jié)炎的大鼠模型中的評(píng)價(jià) 對(duì)發(fā)展17天的II型膠原關(guān)節(jié)炎進(jìn)行研究以評(píng)價(jià)感興趣化合物對(duì)關(guān)節(jié)炎誘發(fā)臨床踝腫脹的作用。大鼠膠原型關(guān)節(jié)炎是已廣泛用于許多抗關(guān)節(jié)炎劑的臨床前測(cè)試的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎的試驗(yàn)?zāi)Ｐ?參見Trentham等人，J.Exp.Med.146(3)857-868(1977)、Bendele等人，Toxicologic Pathol.27134-142(1999)、Bendele等人，Arthritis Rheum.42498-506(1999))。此模型的特點(diǎn)是可靠發(fā)作及強(qiáng)健發(fā)展、容易地可測(cè)量多關(guān)節(jié)炎癥、與血管翳形成及輕微至中等骨再吸收相關(guān)的顯著軟骨破壞及骨膜骨增殖。
在此17天研究的第0天及第6天使用異氟烷麻醉雌性Lewis大鼠(約0.2公斤)并在尾根部及背部?jī)蓚€(gè)位點(diǎn)處注射含2毫克/毫升牛II型膠原的弗氏不完全佐劑(Freund′s Incomplete Adjuvant)。感興趣化合物是以皮下方式自第0天直至第17天以有效劑量每天服用。獲取踝關(guān)節(jié)直徑的卡尺測(cè)量值，并將減少的關(guān)節(jié)腫脹作為效能的量度。
在表2B(以下)中，提供本文所述代表性化合物的結(jié)構(gòu)及活性。上述趨化性測(cè)定的活性如下提供+，IC50＞100nM；++，IC50≤100nM。
表2B


權(quán)利要求
1.一種具有下式的化合物
2.一種具有下式的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物或N-氧化物
3.如權(quán)利要求2所述的化合物，其為水合物的形式。
4.如權(quán)利要求2所述的化合物，其為藥學(xué)上可接受的鹽的形式。
5.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1所述的化合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
6.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求2所述的化合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。
7.一種制備如權(quán)利要求1所述的化合物的方法，所述方法包括
(a)使具有下式的化合物與咪唑形成試劑在足以形成如權(quán)利要求1所述的化合物的條件下接觸
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述咪唑形成試劑選自由乙二醛或乙二醛等效物組成的組。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述咪唑形成試劑是乙二醛且所述接觸是在乙酸銨的存在下進(jìn)行。
10.一種制備如權(quán)利要求1所述的化合物的方法，所述方法包括
(a)使具有下式的化合物與乙二胺接觸以形成咪唑啉產(chǎn)物
及
(b)氧化所述咪唑啉產(chǎn)物以形成如權(quán)利要求1所述的化合物。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中所述氧化是利用選自由KMnO4、MnO2、PhI(OAc)2、Swern試劑及戴斯-馬丁過碘烷組成的組的試劑進(jìn)行。
12.一種治療CCR1介導(dǎo)的疾病或病狀的方法，其包括向有需要的受治療者施用治療有效量的如權(quán)利要求2所述的化合物。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述CCR1介導(dǎo)的疾病或病狀是炎性病狀。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述CCR1介導(dǎo)的疾病或病狀是免疫調(diào)節(jié)病癥。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述CCR1介導(dǎo)的疾病或病狀選自由以下組成的組類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、移植排斥、再狹窄、皮炎、濕疹、蕁麻疹、脈管炎、炎性腸病、食物過敏、哮喘、阿爾茲海默病、帕金森病、牛皮癬、紅斑狼瘡、骨關(guān)節(jié)炎、中風(fēng)、再狹窄和腦脊髓炎。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述施用是經(jīng)口、非經(jīng)腸、直腸、經(jīng)皮、舌下、鼻或局部進(jìn)行。
17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化合物是與抗炎劑、止痛劑、抗增殖劑、代謝抑制劑、白細(xì)胞遷移抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑組合施用。
18.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化合物是
全文摘要
提供了作為CCR1受體的有效拮抗劑、且具有體內(nèi)抗炎活性的化合物。該化合物是3-咪唑基-吡唑并[3，4-b]吡啶衍生物且用于藥物組合物、治療CCR1介導(dǎo)的疾病的方法中、且在鑒別競(jìng)爭(zhēng)性CCR1拮抗劑的測(cè)定中作為對(duì)照使用。
文檔編號(hào)C07D401/00GK101743238SQ200880024760
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2008年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年5月22日
發(fā)明者李連發(fā), A·M·K·朋內(nèi)爾, 張朋烈 申請(qǐng)人:凱莫森特里克斯股份有限公司