專(zhuān)利名稱(chēng)：：用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種化合物，特別是涉及一種用于防治植物真菌病害的補(bǔ)骨脂酚。技術(shù)背景植物病害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵，據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)統(tǒng)計(jì)，每年因植物遭受病害造成的減產(chǎn)平均損失為總產(chǎn)量的10%15%。目前防治植物病害的主要手段為化學(xué)殺菌劑。但由于化學(xué)農(nóng)藥潛在的對(duì)人類(lèi)健康的危害、對(duì)環(huán)境的污染、對(duì)非靶標(biāo)生物的影響、植物病原菌抗性的發(fā)展及人類(lèi)健康、環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，使得化學(xué)農(nóng)藥的發(fā)展受到了來(lái)自各方面的限制。研制開(kāi)發(fā)與推廣應(yīng)用安全、高效的生物農(nóng)藥己成為現(xiàn)代農(nóng)藥的主流，由于植物殺菌劑來(lái)源于自然，具有對(duì)人、畜安全，不污染環(huán)境，不易引起抗藥性，在自然環(huán)境中易于降解等優(yōu)點(diǎn)，因此研究與開(kāi)發(fā)安全性高的植物源農(nóng)藥，具有廣闊的社會(huì)應(yīng)用前景。天然有效成分補(bǔ)骨脂酚(Bakuchiol)以及化學(xué)合成的類(lèi)似物，對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多種常見(jiàn)植物病害具有很好的抑菌活性。補(bǔ)骨脂酚新功能的發(fā)現(xiàn)，可以為具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的植物源生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。同時(shí)，補(bǔ)骨脂酚作為先導(dǎo)化合物創(chuàng)制新藥可以把植物農(nóng)藥和化學(xué)農(nóng)藥的優(yōu)點(diǎn)集于一身，是國(guó)內(nèi)外農(nóng)藥創(chuàng)制的熱點(diǎn)之一。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種用于防治植物真菌病害的補(bǔ)骨脂酚，該化合物可作為殺菌劑用于防治多種植物病害，如蘋(píng)果腐爛病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌和辣椒疫霉病菌等。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚，該化合物是將5kg補(bǔ)骨脂種子粉碎，用70%乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得浸膏1200g;將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進(jìn)行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g;四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1一25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復(fù)純化得到補(bǔ)骨脂酚。如上所述的用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚，該補(bǔ)骨脂酚為油狀液體，254nm下顯紫色熒光，EI-MS給出分子離子峰[M-H]+為m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C陽(yáng)6)，127.36(C陽(yáng)7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(010)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14),25.67(C-15),145.95(C-16)，111.86(C-17),17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:1.67(3H，H-1)，5.11(1H，J=8.1Hz,H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8)，7.25(1H，J=7.5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16)，5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);補(bǔ)骨脂酚結(jié)構(gòu)式HO本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是1.補(bǔ)骨脂酚是天然有效成分，本身作為農(nóng)用殺菌劑具有高效、低毒、低殘留、不易產(chǎn)生抗藥性等特點(diǎn)。2.藥效高。補(bǔ)骨脂酚、福美胂、銀泰、甲基托布津、多菌靈5種原藥對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用EC5。分別為6.12、8.93、26.18、9.16、10.47mg/L?？梢?jiàn)，補(bǔ)骨脂酚的抑菌活性高于防治蘋(píng)果腐爛病菌的其它藥劑。3.殺菌譜廣。補(bǔ)骨脂酚對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌、蘋(píng)果輪紋病菌、水稻稻瘟病菌、水稻紋枯病菌、黃瓜枯萎病菌、小麥赤霉病菌、黃瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多種常見(jiàn)植物病害均具有很好的抑制活性。具體實(shí)施方式本發(fā)明的化合物補(bǔ)骨脂酚是將5kg補(bǔ)骨脂種子粉碎，用70%乙醇在室溫條件下浸提，固液比為l:5g/mL，提取4次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得浸膏1200g。將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進(jìn)行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g。四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱(100-200目，700g，6.0X80cm)，用氯仿乙酸乙酯(l:0，20:1，10:1，5:l)梯度洗脫，流速2.5mL/min，每50mL為l流份，通過(guò)薄層層析檢測(cè)，合并具有相同Rf值的流份，得到A、B、C、D四部分，A(流份9-52)為氯仿洗脫物。A經(jīng)硅膠柱(200-300目，70g，2.5X40cm)，用石油醚乙酸乙酯(7:1-1:l)梯度洗脫，流速1.5mL/min，每10mL為1流份，流份1—25為石油醚乙酸乙酯(7:1)洗脫物，經(jīng)反復(fù)純化得到補(bǔ)骨脂酚(24mg)。實(shí)例1:用丙酮或二甲基亞砜將補(bǔ)骨脂酚溶解配成10g/L的粗提物母液。加入適量粗提物母液于5(TC的PDA培養(yǎng)基中，充分混勻，配成粗提物終濃度分別為0.12mg/L、0.6mg/L、3mg/L、15mg/L、75mg/L的含藥培養(yǎng)基，以等體積的丙酮或二甲基亞砜加入到PDA培養(yǎng)基中作對(duì)照，然后倒入直徑90mm培養(yǎng)皿內(nèi)制成平板，備用。用直徑6mm的打孔器從事先在PDA平板上28'C下培養(yǎng)7-12d的各供試病菌菌落邊緣處切取菌餅，并移植于上述含不同濃度的粗提物平板和對(duì)照平板中央，每次處理重復(fù)3次，置28"C下培養(yǎng)7-12d，測(cè)量菌落直徑。每菌落取相交垂直線(xiàn)方向測(cè)其直徑，以其均值減去菌餅直徑即得菌落凈生長(zhǎng)直徑(CK)，相對(duì)抑制率(％)=(對(duì)照凈生長(zhǎng)量一處理凈生長(zhǎng)量)/對(duì)照凈生長(zhǎng)量XIOO。根據(jù)病菌抑制率等有關(guān)指標(biāo)，采用相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析軟件，計(jì)算出EC5Q值及EC9。值限。補(bǔ)骨脂酚對(duì)幾種常見(jiàn)植物病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。蘋(píng)果蘋(píng)果水稻水稻黃瓜黃瓜小麥辣椒抑制腐爛輪紋稻瘟紋枯炭疽枯萎赤霉疫霉作用病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌病菌EC506.127.2210.6635.3050.2018.124.6641.00(mg/L)EC卯204.50182.1346.30201.10166.0691.0132.25209.10Cmg/L)實(shí)例2:試驗(yàn)方法同實(shí)例l，補(bǔ)骨脂酚、福美胂、銀泰、甲基托布津、多菌靈6種原藥對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明的化合物補(bǔ)骨脂酚，對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌(W/^mfl/f)，蘋(píng)果輪紋病菌(尸一fl/os/ora/H'n.co/fl)，水禾舀禾舀瘟病菌(i^/7'cw/fln'flo，fle)，水禾舀紋枯病菌(朋&o"om'flso/flm'Xw/m)，黃瓜枯萎病菌(Fwsfln'Mwio平j(luò)www)，小麥赤霉病菌(G她ere/Zfl2eae)，黃瓜炭疽病菌(Co//etoWc/iMmorWcw/flre),辣椒疫霉病菌(尸一op/^/ion2c"戶(hù)'a')等多種植物病原菌具有很好的抑制活性。權(quán)利要求1.用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚，其特征在于該化合物是將5kg補(bǔ)骨脂種子粉碎，用70％乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得浸膏1200g；將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進(jìn)行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分98g、四氯化碳部分139g、氯仿部分32g、正丁醇部分30g、水部分14g；四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1-25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復(fù)純化得到補(bǔ)骨脂酚。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚，其特征在于，該補(bǔ)骨脂酚為油狀液體，254nm下顯紫色熒光，EI-MS給出分子離子峰[M-H]+為m/z=255.2;13C—NMR(CDCl3)d:23.35(C-1)，135.88(C-2)，126.45(C-3)，23.22(C-4)，42.51(C-5)，41.27(C-6)，127.36(C-7)，124.80(C-8)，130.92(C-9)，131.281(C-10)，115.34(C-11)，154.59(C-12)，115.34(C-13)，131.28(C-14)，25.67(C-15)，145.95(C-16)，111.86(C-17)，17.62(C-18);NMR(CDCl3)dppm:L67(3H，H-l)，5.11(1H，J=8.1Hz，H-3)，1.95(2H，H-4)，1.49(2H，H-5)，6.05(1H，J=16.5Hz，H-7)，6.25(1H，J=16.9Hz，H-8),7.25(1H，J=7,5，H-IO)，6.77(1H，J=8.4Hz，H-ll)，16.77(1H，H-13)，17.25(1H，H-14)，1.19(3H，H-15)，5.86(1H，H-16),5.02(2H，J=4.2，9.9Hz，H-17)，1.58(3H，H-18);補(bǔ)骨脂酚結(jié)構(gòu)式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>全文摘要用于防治植物病害的補(bǔ)骨脂酚，涉及一種化合物，該化合物是將5kg補(bǔ)骨脂種子粉碎，用70％乙醇在室溫條件下浸提4次，合并提取液，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得浸膏1200g；將所得浸膏懸浮于水中，依次用石油醚、四氯化碳、氯仿、正丁醇進(jìn)行系統(tǒng)溶劑萃取，得到石油醚部分、四氯化碳部分、氯仿部分、正丁醇部分、水部分；四氯化碳部分經(jīng)硅膠柱，用氯仿和乙酸乙酯進(jìn)行梯度洗脫，合并具有相同Rf值的流份，得到氯仿洗脫物；氯仿洗脫物再經(jīng)硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯梯度洗脫，流份1-25為石油醚和乙酸乙酯洗脫物，經(jīng)反復(fù)純化得到補(bǔ)骨脂酚。本發(fā)明的化合物對(duì)多種植物病原菌具有很好的抑制活性。文檔編號(hào)C07C39/00GK101219932SQ20081001022公開(kāi)日2008年7月16日申請(qǐng)日期2008年1月25日優(yōu)先權(quán)日2008年1月25日發(fā)明者關(guān)麗杰,李海燕,蔡麗麗,雙邵,紅邵申請(qǐng)人:沈陽(yáng)化工學(xué)院