專利名稱：用于調(diào)節(jié)c-kit和pdgfr受體的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白激酶抑制劑以及使用該化合物的方法。

背景技術(shù)：
蛋白激酶代表一大族蛋白質(zhì)，它們在調(diào)節(jié)各種細(xì)胞過程和保持對細(xì)胞功能的控制中扮演重要角色。這些激酶的部分非限制性列表包括受體酪氨酸激酶例如血小板衍生生長因子受體激酶(PDGFR)、干細(xì)胞因子(c-kit)、神經(jīng)生長因子受體(trkB)、成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR3)和集落刺激因子1受體(CSF1R)的受體激酶；非受體酪氨酸激酶如Abl、融合激酶BCR-Abl、Fes、Lck和Syk；和絲氨酸/蘇氨酸激酶如b-RAF、MAP激酶(例如，MKK6)和SAPK2β。在許多疾病狀態(tài)中觀察到了異常的激酶活性，所述疾病狀態(tài)包括良性和惡性的增殖性疾病以及由免疫和神經(jīng)系統(tǒng)不合適的激活所導(dǎo)致的疾病。
發(fā)明的公開 本發(fā)明提供了可用作蛋白激酶抑制劑的化合物及其藥物組合物。
本發(fā)明一方面提供了式(1)的化合物
或其可藥用的鹽，其中 Y和Z獨(dú)立地是CR或N； L是NR-C(O)、C(O)NR、C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO、NRS(O)0-2或NRCONRS(O)0-2； R1和R3獨(dú)立地是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R2是(CR2)kR6、(CR2)1-4OR9、(CR2)1-4NR7R8或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R4是(CR2)kR6、(CR2)kOR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R5是H、鹵素或C1-6烷基； R6是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、或任選地被取代的5-12員芳基、雜環(huán)或雜芳基； R7和R8獨(dú)立地是H、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；或者R7和R8可以與各NR7R8中的N一起形成一種任選地被取代的環(huán)； R9是H、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； 各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)k中的兩個(gè)亞烷基可以形成鏈烯基或炔基； 各任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基任選地被鹵化或任選地被N、O或S取代； k是0-6；且 n是0-2； 條件是，當(dāng)R1是鹵素、(CR2)kNR7R8或C5-8雜環(huán)烷基且R2是C1-6烷基時(shí)，L 是C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO或NRCONRS(O)0-2。
在上面的式(1)中，Y可以是CH。在另一些實(shí)例中，Z是N。在另一些實(shí)例中，n是1；且R3是鹵素或C1-6烷基。
在上面的式(1)中，R4可以是C1-6烷基、(CR2)kO(C1-6烷基)或(CR2)kR6； R6是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基；且 k是0-4。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式(2)的化合物
其中R1是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基或C2-6鏈烯基； R2是C1-6烷基、(CR2)R6’、(CR2)1-4OR9或(CR2)1-4NR7R8； R3是鹵素或C1-6烷基； R4是C1-6烷基、(CR2)kO(C1-6烷基)或(CR2)kR6； R6’是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基； R6是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基； R7、R8和R9獨(dú)立地是H或C1-6烷基；或者R7和R8可以一起形成一種任選地被取代的5-7員雜環(huán)；且 各k是0-4。
在上面的式(2)中，R6’可任選地被鹵素或任選地被鹵化的C1-6烷基所取代；且R6可任選地被一個(gè)或多個(gè)下面所定義的取代基所取代。
在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式(3)的化合物
在上面的式(1)、(2)或(3)中，R1是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基或C2-6鏈烯基； R2是C1-6烷基、C2-6鏈烯基、(CR2)kR6、(CR2)1-4OR9或(CR2)1-4NR7R8； R6是苯基、C3-7環(huán)烷基或一種包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基，其各自任選地被鹵素或任選地被鹵化的C1-6烷基所取代； R7、R8和R9獨(dú)立地是H或C1-6烷基；或者R7和R8可以一起形成一種任選地被取代的5-7員雜環(huán)；且 各k是0-4。
上面的式(1)、(2)和(3)中適宜的5-12員雜環(huán)或雜芳基R6基團(tuán)的實(shí)例非限制性地包括噻唑基、噻吩基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、吡咯基、二氫吡咯基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、噻二唑基、苯并咪唑基、喹啉基、四氫喹啉基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、吲唑基、吲哚基、茚基、二氫茚基或二氫苯并呋喃。
適宜R10基團(tuán)的實(shí)例非限制性地包括任選地被取代的苯基、哌嗪-2-酮基、嗎啉基、噻唑基、噻吩基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、咪唑烷-2-酮基、吡唑基、呋喃基、吡咯基、二氫吡咯基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、噻二唑基或四氫吡喃基。
在上面的式(1)、(2)或(3)中，各任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基可任選地被鹵化或任選地被N、O或S所取代(例如，羥基、脲基或胍基)。
在上面的式(1)、(2)或(3)中，所述各任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基可任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、NR7R8、NRCOR7、NRCO(CR2)pNR7R8、NRCONR(CR2)pNR7R8、(CR2)pOR9、(CR2)pR10和任選地被鹵素、羥基、C1-6烷氧基或氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代； 各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)p中的兩個(gè)亞烷基可以形成一種鏈烯基或炔基； R7和R8獨(dú)立地是H、C1-6烷基或(CR2)p-R10；或者R7和R8可以和各NR7R8中的N一起形成一種任選地被取代的環(huán)； R9是H、任選地被鹵化的C1-6烷基或(CR2)pR10； R10是C3-7環(huán)烷基、芳基、或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基，其各自任選地被一個(gè)或多個(gè)所述取代基所取代；且 p是0-4。
本發(fā)明另一方面提供了藥物組合物，其包含治療有效量的式(1)、(2)或(3)的化合物和可藥用的賦形劑。
本發(fā)明另一方面還提供了調(diào)節(jié)激酶活性的方法，其包括給需要其的系統(tǒng)或個(gè)體施用治療有效量的式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物，藉此調(diào)節(jié)所述激酶活性。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型的方法。在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)c-kit、PDGFRα、PDGFRβ或其突變型的方法，并且可以在體外或體內(nèi)直接接觸c-kit、PDGFRα或PDGFRβ。
本發(fā)明還提供了治療其中激酶活性的調(diào)節(jié)可阻止、抑制或改善所述疾病或情況的病理學(xué)和/或癥狀的疾病或情況的方法，其包括給系統(tǒng)或個(gè)體施用治療有效量的式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物，并任選地聯(lián)用治療有效量的第二種活性劑。當(dāng)與第二種活性劑一起給藥時(shí)，式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物可以在第二種活性劑給藥前被給藥、與其同時(shí)給藥或者在第二種活性劑給藥后被給藥。在一個(gè)實(shí)例中，所述第二種活性劑是支氣管擴(kuò)張藥、抗炎藥、白三烯拮抗劑或IgE阻滯劑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療由c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型介導(dǎo)的疾病或情況的方法，其包括給系統(tǒng)或個(gè)體施用治療有效量的式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物。在一些特定的實(shí)例中，本發(fā)明提供了治療由c-kit、PDGFRα或PDGFRβ或其突變型介導(dǎo)的疾病或情況的方法。
可以用本發(fā)明化合物和組合物調(diào)停的激酶介導(dǎo)的疾病或情況的實(shí)例非限制性地包括腫瘤性病癥、過敏性病癥、炎性病癥、腸易激綜合征(IBS)、自身免疫性病癥、移植物抗宿主疾病、肥大細(xì)胞介導(dǎo)的疾病、代謝綜合征、CNS相關(guān)病癥、神經(jīng)變性病癥、疼痛情況、物質(zhì)濫用、朊病毒病、癌癥、心臟病、纖維變性疾病、特發(fā)性動脈壓過高(IPAH)、原發(fā)性肺動脈高壓(PPH)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和心血管疾病。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的肥大細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的實(shí)例非限制性地包括痤瘡和痤瘡丙酸桿菌、進(jìn)行性骨化性纖維發(fā)育不良(FOP)、炎癥和由于接觸化學(xué)或生物武器(如炭疽和硫-芥子氣)引起的組織破壞、囊性纖維化病；腎病、炎性肌肉病癥、HIV、II型糖尿病、腦局部缺血、肥大細(xì)胞增多癥、黃斑變性、鼻息肉癥、藥物依賴和戒斷癥狀、CNS病癥、預(yù)防和最小化脫發(fā)、細(xì)菌感染、間質(zhì)性膀胱炎、炎性腸病(例如，克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、不確定的結(jié)腸炎和感染性結(jié)腸炎)、腫瘤血管生成、自身免疫性疾病、炎性疾病、多發(fā)性硬化(MS)、過敏性病癥(包括哮喘)和骨損失。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的腫瘤性病癥的實(shí)例非限制性地包括肥大細(xì)胞增多癥、胃腸道間質(zhì)瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征、慢性髓細(xì)胞性白血病、結(jié)腸直腸癌、胃癌、睪丸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和星形細(xì)胞瘤。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的過敏性病癥的實(shí)例非限制性地包括哮喘、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏性綜合征、蕁麻疹、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形性紅斑、皮膚壞死性靜脈炎(cutaneous necrotizing venulitis)、昆蟲叮咬皮膚炎癥和吸血性寄生蟲感染。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的炎性病癥的實(shí)例非限制性地包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的自身免疫性病癥的實(shí)例非限制性地包括多發(fā)性硬化、牛皮癬、腸的炎性疾病、炎性腸病(IBD)、潰瘍性、不確定的或感染性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、局部或全身性硬皮病、全身性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、皮膚紅斑、皮肌炎、多發(fā)性肌炎、斯耶格倫氏綜合征、結(jié)節(jié)性全動脈炎、自身免疫性腸病和增生性腎小球腎炎。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的移植物抗宿主疾病的實(shí)例非限制性地包括器官移植，如腎移植、胰腺移植、肝移植、心臟移植、肺移植、和骨髓移植的移植物排斥。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的代謝綜合征的實(shí)例非限制性地包括I型糖尿病、II型糖尿病和肥胖。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的CNS相關(guān)病癥的實(shí)例非限制性地包括抑郁、心境惡劣障礙、循環(huán)型情感性障礙、厭食癥、易餓病、月經(jīng)前期綜合征、絕經(jīng)后綜合征、精神遲緩(mental slowing)、集中力缺失、悲觀煩惱、精神激動、自嘲和性欲降低、焦慮癥、精神病學(xué)病癥和精神分裂癥。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的抑郁情況的實(shí)例非限制性地包括雙相性抑郁、嚴(yán)重的或憂郁性抑郁、非典型的抑郁、難治性抑郁和季節(jié)性抑郁?？梢杂帽景l(fā)明化合物和組合物治療的焦慮癥的實(shí)例非限制性地包括與換氣過度和心律失常有關(guān)的焦慮、恐怖癥、強(qiáng)迫癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙、急性應(yīng)激障礙和泛化性焦慮癥。可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的精神病學(xué)病癥的實(shí)例非限制性地包括恐慌發(fā)作，包括精神病、妄想性障礙、轉(zhuǎn)換障礙、恐怖癥、躁狂癥、譫妄、分離性發(fā)作(dissociative episode)，包括分離性遺忘癥、分離性漫游和分離性自殺行為、自我忽視、劇烈的或攻擊性行為、創(chuàng)傷、邊緣型人格、和急性精神病如精神分裂癥，包括偏執(zhí)型精神分裂癥、錯(cuò)亂型精神分裂癥、緊張型精神分裂癥和未分化型精神分裂癥。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的神經(jīng)變性病癥的實(shí)例非限制性地包括阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、朊病毒病、運(yùn)動神經(jīng)元病(MND)和肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的疼痛情況的實(shí)例非限制性地包括急性痛、術(shù)后痛、慢性痛、傷害性疼痛、癌癥痛、神經(jīng)性疼痛和心理性疼痛綜合征。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的物質(zhì)使用障礙的實(shí)例非限制性地包括藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴性、戒斷綜合征和超劑量用藥。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的癌癥的實(shí)例非限制性地包括黑素瘤、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、小細(xì)胞肺癌和其它實(shí)體腫瘤。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的纖維變性疾病的實(shí)例非限制性地包括心臟纖維化、丙型肝炎(HCV)、肝纖維化、非酒精性脂肪肝(NASH)、肝硬化、肺纖維化和骨髓纖維化。
可以用本發(fā)明化合物和組合物治療的心血管疾病的實(shí)例非限制性地包括心絞痛、心肌梗死、充血性心力衰竭、心肌病、高血壓、動脈狹窄和靜脈狹窄。
在一個(gè)實(shí)施方案中，可以用式(1)、(2)或(3)的化合物來治療嗜曙紅細(xì)胞增多癥、纖維化、肺動脈高壓、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和心血管疾病。
此外，本發(fā)明還提供了式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物任選地與治療有效量的第二種活性劑聯(lián)合在制備治療由激酶活性調(diào)節(jié)的疾病或情況的藥物中的應(yīng)用，所述激酶特別是c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。在一些特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被用于制備治療由PDGFRα、PDGFRβ、c-kit激酶受體或其突變型調(diào)節(jié)的疾病或情況的藥物。
在上面使用本發(fā)明化合物的方法中，可以將式(1)、(2)或(3)的化合物給藥于一種包含細(xì)胞或組織的系統(tǒng)中。在另一些實(shí)施方案中，可以將式(1)、(2)或(3)的化合物給藥于人或動物個(gè)體。
定義 “烷基”是指一種基團(tuán)和作為其它基團(tuán)例如鹵代烷基和烷氧基的結(jié)構(gòu)元素，并且可以是直鏈或支鏈的。本文所用的任選地被取代的烷基、鏈烯基或炔基可以任選地被鹵化(例如，CF3)，或者可以具有一個(gè)或多個(gè)被雜原子，如NR、O或S取代或替代的碳(例如，-OCH2CH2O-、烷基硫醇、硫代烷氧基、烷基胺等)。
“芳基”是指包含碳原子的單環(huán)或稠合的二環(huán)芳族環(huán)。例如，芳基可以是苯基或萘基?！皝喎蓟笔侵赣煞蓟苌亩r(jià)基團(tuán)。
本文所用的“雜芳基”是其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)成員是雜原子的上面所定義的芳基。雜芳基的實(shí)例非限制性地包括吡啶基、吲哚基、吲唑基、喹喔啉基、喹啉基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并噻喃基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯、咪唑基、苯并-咪唑基、嘧啶基、呋喃基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。
本文所用的“碳環(huán)”是指包含碳原子的飽和或部分不飽和的單環(huán)、稠合的二環(huán)或橋連的多環(huán)，其可任選地被取代，例如，被＝O取代。碳環(huán)的實(shí)例非限制性地包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)丙烯、環(huán)己酮等。
本文所用的“雜環(huán)”是其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳是雜原子的上面所定義的碳環(huán)。例如，雜環(huán)可以包含N、O、S、-N＝、-S-、-S(O)、-S(O)2-或-NR-，其中R可以是氫、C1-4烷基或一種保護(hù)基團(tuán)。雜環(huán)的實(shí)例非限制性地包括嗎啉代、吡咯烷基、吡咯烷基-2-酮、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、1，4-二氧雜-8-氮雜-螺環(huán)[4.5]癸-8-基等。
除非另有說明，否則當(dāng)一個(gè)取代基被認(rèn)為是“任選地被取代的”時(shí)，其是指該取代基是一種可以被一個(gè)或多個(gè)各自獨(dú)立地選自例如任選地被鹵化的烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、烷基胺、烷硫基、炔基、酰胺、氨基(包括單-和二-取代的氨基)、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、碳環(huán)、氰基、環(huán)烷基、鹵素、雜烷基、雜鏈烯基、雜炔基、雜芳基、雜環(huán)、羥基、異氰酰基、異硫氰酸根合、巰基、硝基、O-氨基甲?；?、N-氨基甲?；?、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲?；-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、全鹵代烷基、全氟代烷基、甲硅烷基、磺?；?、硫代羰基、硫氰酸根合、三鹵代甲磺?；捌浔槐Ｗo(hù)的化合物的基團(tuán)所取代的基團(tuán)?？梢孕纬缮厦嫒〈谋槐Ｗo(hù)化合物的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的并且可以在參考文獻(xiàn)如Greene和Wuts，有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups in Organic Synthesis)，第3版，John Wiley & Sons，紐約，NY，1999和Kocienski，保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups)，Thieme Verlag紐約，NY，1994中找到，二者被全部引入本文作為參考。
本文所用的術(shù)語“共同給藥”或“聯(lián)合給藥”等意指包括給單一患者施用所選擇的治療劑，并且意指包括其中這些治療劑不一定通過相同給藥途徑或同時(shí)被給藥的治療方案。
本文所用的術(shù)語“藥物組合”是指通過將活性成分混合或合并獲得的產(chǎn)品，并且既包括活性成分的固定組合，又包括活性成分的非固定組合。術(shù)語“固定組合”是指活性成分例如式(1)的化合物和共活性劑以單一實(shí)體或劑量的形式被同時(shí)給藥與患者。術(shù)語“非固定組合”是指活性成分，例如式(1)的化合物和共活性劑以獨(dú)立實(shí)體的形式被同時(shí)、并行或在沒有特定時(shí)間限制的情況下相繼給藥于患者，其中該類給藥在患者體內(nèi)提供了活性成分的治療有效水平。后一種情況也適用于雞尾酒療法，例如三種或多種活性成分的給藥。
術(shù)語“治療有效量”是指將在細(xì)胞、組織、器官、系統(tǒng)、動物或人體內(nèi)引起研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的主題化合物的數(shù)量。
術(shù)語主題化合物的“給藥”或“施用”是指為需要其的個(gè)體提供本發(fā)明的化合物或其前體藥物。
“BCR-Abl的突變型”是指野生型序列的單個(gè)或多個(gè)氨基酸變化。一組突變(G250E、Q252R、Y253F/H、E255K/V)包括形成ATP的磷酸結(jié)合環(huán)(也被稱為P-環(huán))的氨基酸。第二組突變(M351T、E355G)聚集在催化結(jié)構(gòu)域附近。第三組突變(H396R/P)位于活化環(huán)中，其構(gòu)象是控制激酶活化/失活的分子開關(guān)。還報(bào)道了第四組突變(V289A、F311L、T315I、F317L)。除非本發(fā)明另有說明，否則Bcr-Abl是指該酶的野生型和突變型。
本發(fā)明的實(shí)施方式 本發(fā)明提供了可用作蛋白激酶抑制劑的化合物以及其藥物組合物。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了式(1)的化合物
或其可藥用的鹽，其中 Y和Z獨(dú)立地是CR或N； L是NR-C(O)、C(O)NR、C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO、NRS(O)0-2或NRCONRS(O)0-2； R1和R3獨(dú)立地是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R2是(CR2)kR6、(CR2)1-4OR9、(CR2)1-4NR7R8或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R4是(CR2)kR6、(CR2)kOR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； R5是H、鹵素或C1-6烷基； R6是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、或任選地被取代的5-12員芳基、雜環(huán)或雜芳基； R7和R8獨(dú)立地是H、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；或者R7和R8可以和各NR7R8中的N一起形成一種任選地被取代的環(huán)； R9是H、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基； 各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)k中的兩個(gè)亞烷基可以形成鏈烯基或炔基； 各任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基任選地被鹵化或任選地被N、O或S取代； k是0-6；且 n是0-2； 條件是當(dāng)R1是鹵素、(CR2)kNR7R8或C5-8雜環(huán)烷基且R2是C1-6烷基時(shí)，L是C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO或NRCONRS(O)0-2。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式(2)的化合物
其中R1是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基或C2-6鏈烯基； R2是C1-6烷基、(CR2)R6’、(CR2)1-4OR9或(CR2)1-4NR7R8； R3是鹵素或C1-6烷基； R4是C1-6烷基、(CR2)kO(C1-6烷基)或(CR2)kR6； R6’是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或一種包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基； R6是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或一種包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基； R7、R8和R9獨(dú)立地是H或C1-6烷基；或者R7和R8可以一起形成一種任選地被取代的5-7員雜環(huán)；且 各k是0-4。
在另一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了式(3)的化合物，
在上面的式(1)、(2)或(3)中，對于R1、R2和R3而言，可以使用其它對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是顯而易見的取代基。例如，R1和R3可以是氰基、硝基或其它吸電子或供電子取代基。
式(1)、(2)或(3)的化合物可用作蛋白激酶抑制劑。例如，式(1)、(2)或(3)的化合物以及其可藥用的鹽、溶劑化物、N-氧化物、前體藥物和異構(gòu)體可用于治療激酶介導(dǎo)的情況或疾病，如由c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明的化合物還可以與第二種治療劑聯(lián)用來改善由蛋白激酶介導(dǎo)的情況，如c-kit、PDGFRα或PDGFRβ-介導(dǎo)的情況。在一些實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與用于治療哮喘的第二種治療劑聯(lián)用。例如，所述第二種治療劑可以是支氣管擴(kuò)張藥、抗炎藥、白三烯拮抗劑或IgE阻滯劑。
還可以將本發(fā)明的化合物與治療細(xì)胞增殖性病癥的化療劑聯(lián)用，所述增殖性病癥非限制性地包括淋巴瘤、骨肉瘤、黑素瘤、或乳房、腎、前列腺、結(jié)腸直腸、甲狀腺、卵巢、胰臟、神經(jīng)元、肺、子宮或胃腸腫瘤?？捎糜诒景l(fā)明組合物和方法中的化療劑的實(shí)例非限制性地包括蒽環(huán)類抗生素、烷化劑(例如，絲裂霉素C)、烷基磺酸酯、氮丙啶類、乙撐亞胺類、甲基密胺類、氮芥類、亞硝基脲類、抗生素、抗代謝物、葉酸類似物(例如，二氫葉酸鹽還原酶抑制劑如甲氨蝶呤)、嘌呤類似物、嘧啶類似物、酶類、鬼臼毒素類、含鉑活性劑、干擾素類和白介素類?？捎糜诒景l(fā)明組合物和方法中的已知化療劑的特定實(shí)例非限制性地包括白消安、英丙舒凡、哌泊舒凡、芐替派、卡波醌、美妥替哌、烏瑞替派、六甲蜜胺、三亞乙基密胺、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺、三羥甲蜜胺(trimethylolomelamine)、苯丁酸氮芥、萘氮芥、環(huán)磷酰胺、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、雙氯乙基甲胺、氧氮芥鹽酸鹽、美法侖、新氮芥、苯芥膽甾醇、潑尼莫司汀、曲酰胺、烏拉莫司汀、卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀、達(dá)卡巴嗪、甘露莫司汀、二溴甘露醇、二溴衛(wèi)矛醇、溴丙哌嗪、阿克拉霉素、放線菌素F(1)、氨茴霉素、氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、卡柔比星、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔紅霉素、道諾霉素、6-重氮基-5-氧代-1-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、絲裂霉素C、麥考酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、培洛霉素、普卡霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、鏈黑霉素、鏈佐星、塊菌素、烏苯美司、新制癌菌素、佐柔比星、二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙、氟達(dá)拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤、安西他濱、氮雜胞苷、6-氮雜尿嘧啶核苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟嘧啶脫氧核苷、氟尿嘧啶、替加氟、L-天門冬酰胺酶、阿法鏈道酶、醋葡醛內(nèi)酯、醛磷酰胺糖苷、氨基乙酰丙酸、安吖啶、Bestrabucil、比生群、卡鉑、順鉑、Defofamide、秋水仙胺、地吖醌、依氟鳥氨酸(elfornithine)、依利醋銨、依托格魯、依托泊苷、氟他胺、硝酸鎵、羥基脲、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-γ、白介素-2、香菇多糖、氯尼達(dá)明、丙米腙、米托蒽醌、莫哌達(dá)醇、二胺硝吖啶、噴司他汀、氮氨氮芥、吡柔比星、鬼臼酸、2-乙基酰肼、丙卡巴肼、雷佐生、西佐喃、螺旋鍺、紫杉醇、他莫昔芬、替尼泊苷、細(xì)格孢氮雜酸、三亞胺醌、2，2′，2″-三氯三乙基胺、烏拉坦、長春堿、長春新堿和長春地辛。
藥理和用途 本發(fā)明的化合物可調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶的活性并因此可用于治療其中蛋白酪氨酸激酶與疾病的病理和/或癥狀有關(guān)的的疾病或病癥，所述激酶特別是c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。
c-Kit 肥大細(xì)胞是得自表達(dá)CD34、c-kit和CD13抗原的造血干細(xì)胞的特定亞型的組織成分。肥大細(xì)胞的特征在于其異質(zhì)性，其不僅組織定位和結(jié)構(gòu)不均勻，而且在功能和組織化學(xué)水平方面也不均勻。未成熟的肥大細(xì)胞祖細(xì)胞在血流中循環(huán)并分化成各種組織。這些分化和增殖過程受細(xì)胞因子(一種重要的因子是干細(xì)胞因子(SCF)、也被稱為Kit配體、青灰因子或肥大細(xì)胞生長因子)的影響。該干細(xì)胞因子受體被原癌基因，c-kit所編碼，該基因在造血組細(xì)胞、肥大細(xì)胞、胚細(xì)胞、Cajal的間質(zhì)細(xì)胞(ICC)和一些人類腫瘤中進(jìn)行表達(dá)并且也被非造血細(xì)胞表達(dá)。
酪氨酸激酶是受體型或非受體型蛋白，其將ATP的末端磷酸根轉(zhuǎn)移給蛋白的酪氨酸殘基，從而活化或滅活信號傳導(dǎo)途徑。該干細(xì)胞因子受體c-kit是一種III型跨膜受體蛋白酪氨酸激酶，其發(fā)動細(xì)胞生長和響應(yīng)于SCF結(jié)合的增殖信號傳導(dǎo)級聯(lián)。SCF對c-kit受體的結(jié)合誘導(dǎo)了其二聚化，然后誘導(dǎo)了其轉(zhuǎn)磷酸化(transphorylation)，從而導(dǎo)致了各種胞漿內(nèi)底物的募集和活化。這些被活化的底物誘導(dǎo)了許多負(fù)責(zé)細(xì)胞增殖和活化的細(xì)胞內(nèi)發(fā)信號途徑。已知在許多細(xì)胞機(jī)制中都涉及這些蛋白，在其被破壞的情況中，會導(dǎo)致一些病癥如異常細(xì)胞增殖和遷移以及炎癥。本發(fā)明的化合物可以抑制涉及SCF的細(xì)胞過程，如抑制SCF受體自磷酸化和SCF-刺激的MAPK激酶(促細(xì)胞分裂劑-活化的蛋白激酶)的活化。
在正常細(xì)胞中，c-kit受體蛋白酪氨酸激酶的活性受到調(diào)控，并且c-kit基因產(chǎn)物的正常功能活性對于正常造血作用、黑素生成、genetogensis以及肥大細(xì)胞的生長和分化的維持都是很重要的。除其在正常細(xì)胞生理學(xué)活性中的重要性外，c-kit還在一些人類癌癥的生物學(xué)方面起效，并且在人癌癥的發(fā)病機(jī)理中和一些類型的腫瘤中涉及不受調(diào)節(jié)的c-kit激酶活性?？赏ㄟ^導(dǎo)致配體非依賴性活化的c-kit多肽的特定突變或通過該受體的自分泌刺激來發(fā)生c-kit介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長的增殖。在前一種情況中，在人惡性癌癥(包括干細(xì)胞腫瘤、肥大細(xì)胞腫瘤、胃腸道間質(zhì)瘤、小細(xì)胞肺癌、黑素瘤、乳癌、急性骨髓性白血病、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和肥大細(xì)胞增多癥)中涉及一些在缺乏SCF結(jié)合的情況下造成c-kit激酶活性的組成活化的突變。
存在于患者組織中的肥大細(xì)胞參與或有助于一些疾病的發(fā)生，所述疾病如自身免疫性疾病(多發(fā)性硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病(IBD))、過敏性疾病(過敏性鼻竇炎、過敏性鼻炎和哮喘)、腫瘤血管生成、炎性疾病和間質(zhì)性膀胱炎。在這些疾病中，肥大細(xì)胞通過釋放不同蛋白酶和介質(zhì)如組胺、中性蛋白酶、脂質(zhì)衍生的介質(zhì)(前列腺素類、血栓烷類和白三烯類)和各種細(xì)胞因子(IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、TNF-A、GM-CSF、MIP-LA、MIP-lb、MIP-2和IFN-y)的混合物來參與組織的破壞。
在現(xiàn)代社會中，越來越多的人受到過敏性病癥如過敏性鼻竇炎、過敏性鼻炎和哮喘的折磨。例如，僅在USA，估計(jì)八千七百萬以上的人口正在與一些形式的過敏性疾病抗?fàn)?。這些過敏性疾病包括過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏性綜合征、紅斑、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形性紅斑、皮膚壞死性靜脈炎和昆蟲叮咬皮膚炎癥，但是，支氣管哮喘是嚴(yán)重影響人群的最為常見的復(fù)發(fā)性疾病。
哮喘的特征在于氣流阻塞、支氣管過反應(yīng)性和氣道炎癥。氣道炎癥是哮喘形成和持續(xù)存在的主要因素。在過敏性哮喘中，認(rèn)為變應(yīng)原通過誘導(dǎo)T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的響應(yīng)(TH2)(其導(dǎo)致產(chǎn)生變應(yīng)原特異性的IgE)來引發(fā)炎性過程。IgE與肺肥大細(xì)胞上的其高親合力受體FcεRI結(jié)合，觸發(fā)I型(IgE-介導(dǎo)的)速發(fā)型過敏性響應(yīng)。
肥大細(xì)胞活化誘導(dǎo)了不同的效應(yīng)器響應(yīng)，如分泌過敏性介質(zhì)、蛋白酶、趨化因子如MCP-1和RANTES、白三烯類、前列腺素和神經(jīng)營養(yǎng)因子類；和誘導(dǎo)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13、TNFA和GM-CSF)。這些介質(zhì)通過其對內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的作用和對細(xì)胞外基質(zhì)的作用和通過募集其它炎癥細(xì)胞而有助于產(chǎn)生哮喘表型。
如通過人源化抗-IgE單克隆抗體治療所表明的那樣，肥大細(xì)胞可能在哮喘中起一定的作用。抗-IgE治療的原理是特異性靶向IgE，從而導(dǎo)致游離抗-IgE的滅活和阻止IgE的進(jìn)一步產(chǎn)生。此外，因?yàn)镮gE水平是IgE受體FcεRI表達(dá)水平的主要調(diào)節(jié)劑，因此這一治療的一個(gè)目標(biāo)就是降低肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞上的FcεRI表達(dá)，并因此降低這些細(xì)胞被活化的能力。已經(jīng)在嗜堿細(xì)胞上證明了抗-IgE療法降低FcεRI表達(dá)的能力。嗜堿細(xì)胞上FcεRI表達(dá)的降低與嗜堿細(xì)胞在活化時(shí)分泌介質(zhì)的能力降低有關(guān)。
C-kit抑制劑也可被用于治療非胰島素依賴性糖尿病(NLDDM)，其也被稱為II型糖尿病，其是一種當(dāng)胰島素不能有效促進(jìn)細(xì)胞吸收葡萄糖，從而使得血糖水平增加時(shí)表現(xiàn)出來的慢性病。這種疾病在世界范圍內(nèi)影響著約1億人，其中75％在確診時(shí)也伴有肥胖。在多年中不能調(diào)節(jié)葡萄糖吸收導(dǎo)致形成II型糖尿病，并需要用藥品來調(diào)節(jié)血糖水平。最后，未受調(diào)節(jié)的血糖水平造成血管、腎和眼睛損害以及心血管疾病。這種組織損害是造成糖尿病死亡率的原因。
此外，不同刺激如應(yīng)激、創(chuàng)傷、感染以及神經(jīng)遞質(zhì)對肥大細(xì)胞的活化也會加劇造成CNS病癥的化學(xué)物質(zhì)失衡。更具體地講，肥大細(xì)胞的脫粒受常見的神經(jīng)遞質(zhì)如神經(jīng)降壓素、生長抑素、P物質(zhì)和乙酰膽堿的刺激，以及生長或存活因子，特別是如NGF的刺激。參與對該刺激的響應(yīng)的肥大細(xì)胞可以是腦肥大細(xì)胞，但是也可以是在血流中釋放其顆粒的內(nèi)含物(最終達(dá)到感覺、運(yùn)動或腦神經(jīng)元)的其它肥大細(xì)胞。腦肥大細(xì)胞染色是CTMC染色樣，但是其表現(xiàn)出MMC的分泌模式，暗示其組成了肥大細(xì)胞呈遞特異性的一個(gè)特定子集。
在肥大細(xì)胞活化后，被釋放出來的顆粒釋放各種能調(diào)節(jié)和改變神經(jīng)傳遞和神經(jīng)元存活的因子。因?yàn)樵谝钟艋颊咧幸呀?jīng)觀察到游離血清素水平的增加，因此在該類因子中，血清素很重要?；蛘?，血清素的突釋后可能是一段血清素不足的時(shí)期，從而導(dǎo)致疼痛和偏頭痛。因此，認(rèn)為肥大細(xì)胞以自分泌或旁分泌的方式加劇神經(jīng)傳遞的失控。例如，焦慮或應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)遞質(zhì)如血清素釋放活化了肥大細(xì)胞，其又釋放了其顆粒內(nèi)含物，從而進(jìn)一步促進(jìn)了導(dǎo)致CNS病癥的腦中的化學(xué)失衡。
肥大細(xì)胞釋放的其它介質(zhì)可以被分類成作用于血管的、感受傷害的、促炎癥反應(yīng)的和其它神經(jīng)遞質(zhì)。這些因子結(jié)合起來能誘導(dǎo)神經(jīng)元(不管其是感覺神經(jīng)元、運(yùn)動神經(jīng)元、還是CNS神經(jīng)元)活性嚴(yán)重紊亂。此外，受肥大細(xì)胞增多癥折磨的患者比正常群體更容易形成CNS病癥。可以用在c-kit受體中存在活化突變來解釋這一點(diǎn)，這些突變誘導(dǎo)了肥大細(xì)胞的脫粒以及造成化學(xué)失衡和神經(jīng)傳遞改變的因子的突釋。
在一些情況中，活化的肥大細(xì)胞也可通過釋放不同蛋白酶和介質(zhì)的混合物來參與神經(jīng)元組織的破壞，所述蛋白酶和介質(zhì)被分類成三組預(yù)先形成的顆粒相關(guān)的介質(zhì)(組胺、蛋白聚糖類和中性蛋白酶)、脂質(zhì)衍生的介質(zhì)(前列腺素類、血栓烷類和白三烯類)和各種細(xì)胞因子(IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、TNF-A、GM-CSF、MIP-LA、MIP-lb、MIP-2和IFN-y)?；罨姆蚀蠹?xì)胞釋放介質(zhì)(TNF-A、組胺、白三烯類、前列腺素等)以及蛋白酶可以i)誘導(dǎo)炎癥和血管舒張和ii)參與神經(jīng)元組織破壞過程。c-kit活性的抑制降低了細(xì)胞增生、耗竭了引起疾病和/或情況的肥大細(xì)胞，從而表明可以用c-kit抑制劑來治療c-kit依賴性疾病和/或情況，如CNS病癥。
還已經(jīng)確定了肥大細(xì)胞參與或有助于藥物依賴性和戒斷癥狀。藥物依賴性是一種被稱為耐受性的現(xiàn)象(對于這種現(xiàn)象而言，需要增加藥物的劑量以維持其完整的作用)和生理依賴性(其是機(jī)體對藥物的習(xí)慣)的結(jié)果。當(dāng)停止使用藥物時(shí)，個(gè)體可能經(jīng)歷令人不愉快的戒斷綜合征。
不同藥物(非限制性地包括水楊酸衍生物、嗎啡衍生物、阿片樣物質(zhì)、海洛因、苯丙胺類、酒精、尼古丁、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑和抗焦慮藥)對肥大細(xì)胞的活化導(dǎo)致了肥大細(xì)胞的脫粒，其加劇了造成藥物習(xí)慣性和戒斷綜合征的化學(xué)失衡。在肥大細(xì)胞活化后，被釋放出來的顆粒釋放出各種能調(diào)節(jié)和改變神經(jīng)傳遞的因子。該類因子中有嗎啡，其被結(jié)合或儲存在肥大細(xì)胞顆粒中。煙草煙霧也誘導(dǎo)了由犬科肥大細(xì)胞釋放介質(zhì)并調(diào)節(jié)導(dǎo)致哮喘的前列腺素的產(chǎn)生。此外，受肥大細(xì)胞增多癥折磨的患者比正常群體更容易形成物質(zhì)使用障礙。這一點(diǎn)可以用在c-kit受體中存在活化突變來解釋，這些突變誘導(dǎo)了肥大細(xì)胞的脫粒和造成化學(xué)失衡和神經(jīng)傳遞改變的因子的突釋。
目前還沒有治療方法能夠緩解和幫助個(gè)體由其成癮的物質(zhì)脫癮。C-kit抑制劑可以被用于治療物質(zhì)濫用，特別是藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴性、戒斷綜合征和超劑量用藥，其包括給需要該類治療的人施用能耗竭肥大細(xì)胞的化合物。
c-Kit與PDGF受體和CSF-1受體(c-Fms)具有相當(dāng)高的同源性。對各種紅系細(xì)胞和骨髓細(xì)胞系進(jìn)行的研究表明c-Kit基因在分化早期進(jìn)行表達(dá)(Andre等人，Oncogene 1989 41047-1049)。某些腫瘤如成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞同樣表現(xiàn)出顯著的c-Kit基因表達(dá)。
PDGF(血小板衍生生長因子) PDGF(血小板衍生生長因子)是一種普遍存在的生長因子，其在正常生長中起重要作用，并且如在致癌作用和血管平滑肌細(xì)胞的疾病例如動脈粥樣硬化和血栓形成中看到的那樣，其在病理學(xué)細(xì)胞增殖中也起重要作用。本發(fā)明的化合物可抑制PDGF受體(PDGFR)活性，并且因此適于治療腫瘤疾病，如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肉瘤、前列腺腫瘤、以及結(jié)腸、乳房和卵巢的腫瘤。
本發(fā)明的化合物不僅可用作抑制腫瘤的物質(zhì)(例如用于小細(xì)胞肺癌)，而且還可用作治療非惡性增殖性病癥，如動脈粥樣硬化、血栓形成、牛皮癬、硬皮病和纖維化的活性劑。本發(fā)明的化合物還可用于保護(hù)干細(xì)胞，例如對抗化療劑如5-氟尿嘧啶的血毒素作用；并且還可用于治療哮喘和嗜曙紅細(xì)胞增多癥。本發(fā)明的化合物尤其是可用于治療對PDGF受體激酶的抑制有響應(yīng)的疾病。
本發(fā)明的化合物可在由移植例如同種異體移植導(dǎo)致的病癥的治療中表現(xiàn)出有用的作用，所述病癥尤其是組織排斥，如閉塞性細(xì)支氣管炎(OB)，即同種異體肺移植物的慢性排斥。與未患OB的患者相反，那些患有OB的患者常常表現(xiàn)出支氣管肺泡灌洗液中的PDGF濃度升高。
本發(fā)明的化合物還可有效對抗纖維化和對抗與血管平滑肌細(xì)胞遷移和增殖有關(guān)的疾病(在這些疾病中，PDGF和PDGFR也常常起一定作用)，如再狹窄和動脈粥樣硬化?？梢酝ㄟ^給予本發(fā)明的化合物在體外和體內(nèi)證實(shí)對于血管平滑肌細(xì)胞增殖或遷移的這些作用及其后果，并且還可以通過研究其對體內(nèi)機(jī)械損傷后血管內(nèi)膜增厚的作用來證明這一點(diǎn)。
CSF1R(FMS) 由這種基因編碼的蛋白是集落刺激因子1的受體，該因子是一種控制巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生、分化和功能的細(xì)胞因子。即使不是全部，CSFR1也介導(dǎo)著這種細(xì)胞因子的大部分生物學(xué)作用。其所編碼的蛋白是酪氨酸激酶跨膜受體和酪氨酸-蛋白激酶CSF1/PDGF受體族的成員。已經(jīng)表明該基因的突變與惡性骨髓瘤易感性有關(guān)。(見例如，Casas等人，Leuk.Lymphoma 2003，441935-41)。
Abl、Trk、Syk、Ras、Raf、MAPK、TGFβ、FGFR3、c-Src、SAPK、Lck、Fes、Csk Abelson酪氨酸激酶(即Abl，c-Abl)參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、對遺傳毒性應(yīng)激的細(xì)胞響應(yīng)、和通過整聯(lián)蛋白信號傳導(dǎo)來傳遞關(guān)于細(xì)胞環(huán)境的信息。Abl蛋白似乎起作為細(xì)胞模塊的復(fù)雜作用，該細(xì)胞模塊整合來自各種細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)來源的信號并影響關(guān)于細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的決定。Abelson酪氨酸激酶包括一些亞型衍生物如具有失調(diào)的酪氨酸激酶活性的嵌合體融合(癌蛋白)BCR-Abl或v-Abl。
融合蛋白BCR-Abl是融合Abl原癌基因與Bcr基因的相互易位的結(jié)果。然后，BCR-Abl能通過增加促有絲分裂活性來轉(zhuǎn)化B-細(xì)胞。這種增加導(dǎo)致對細(xì)胞凋亡的敏感性降低并改變CML祖細(xì)胞的粘附和歸巢。
BCR-Abl在95％的慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)和10％的急性淋巴細(xì)胞性白血病的發(fā)病中都是重要的。STI-571

是致癌的BCR-Abl酪氨酸激酶的抑制劑并且可用于治療慢性髓細(xì)胞白血病(CML)。但是，在CML的急性發(fā)作階段，一些患者由于BCR-Abl激酶的突變而耐受STI-571。迄今為止，已經(jīng)報(bào)告了超過22種突變，如G250E、E255V、T315I、F317L和M351T。
本發(fā)明的化合物可抑制abl激酶，例如，v-abl激酶。本發(fā)明的化合物還可抑制野生型BCR-Abl激酶和BCR-Abl激酶的突變型，并且因此適用于治療Bcr-abl-陽性的癌癥和腫瘤疾病，如白血病(尤其是慢性髓細(xì)胞白血病和急性成淋巴細(xì)胞性白血病，其中尤其是發(fā)現(xiàn)了作用的細(xì)胞凋亡機(jī)理)。本發(fā)明的化合物也可有效對抗白血病干細(xì)胞，并且在將所述細(xì)胞(例如骨髓細(xì)胞)取出后，可將本發(fā)明的化合物用于這些細(xì)胞的體外純化并且一旦清除了這些細(xì)胞中的癌細(xì)胞，可用于這些細(xì)胞的再植入(例如，進(jìn)行了純化的骨髓細(xì)胞的再植入)。
神經(jīng)營養(yǎng)因子受體的Trk族(trkA、trkB、trkC)能控制腫瘤細(xì)胞生長和存活以及分化、遷移和轉(zhuǎn)移。Trk受體的信號途徑下游涉及貫穿Shc、活化的Ras、ERK-1和ERK-2基因的MAPK活化的級聯(lián)、和PLC-γ轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(Sugimoto等人，Jpn J Cancer Res.2001，92152-60)。有跡象表明，Trk酪氨酸激酶在許多癌癥的發(fā)展中起一定作用，所述癌癥包括例如乳癌和前列腺癌。(Guate等人，p75LNGFR和Trk神經(jīng)營養(yǎng)因子受體在正常和瘤性人前列腺中的表達(dá)，BJU Int.1999，84495502；Tagliabue等人，J.BiolChem.2000，27553885394)。此外，還有跡象表明Trk激酶發(fā)信號的調(diào)停將提供有益的生物學(xué)作用。(LeSauteur等人，Adv.Behav.Biol.1998，49615625；Zhu等人，(1999)J.Clin.Oncology，1999，17241928；Friess等人，Annals of Surgery 1999，230615-24)。
Syk是一種在肥大細(xì)胞脫粒和嗜曙紅細(xì)胞活化中起重要作用的酪氨酸激酶。因此，Syk激酶參與許多過敏性病癥，特別是哮喘。已經(jīng)表明Syk通過N-末端SH2結(jié)構(gòu)域與FcεR1受體被磷酸化的γ鏈結(jié)合并且對于下游信號傳導(dǎo)而言很重要。
Ras-Raf-MEK-ERK信號傳導(dǎo)途徑介導(dǎo)了對生長信號的細(xì)胞響應(yīng)。在約15％的人類癌癥中，Ras突變成致癌形式。Raf族屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶并且包括三個(gè)成員——A-Raf、B-Raf和c-Raf(或Raf-1)。B-Raf在不需要活化的Ras等位基因的某些腫瘤的形成中有重要作用(Nature 2002，417949-954)。在很大百分比的惡性黑素瘤中已經(jīng)探測到B-Raf突變。
現(xiàn)有的黑素瘤的醫(yī)學(xué)治療的效力有限，對于晚期黑素瘤而言尤其如此。本發(fā)明的化合物還抑制了一些涉及b-Raf激酶的細(xì)胞過程，從而提供了治療人類癌癥，尤其是黑素瘤的新治療機(jī)遇。
細(xì)胞分裂素-活化蛋白激酶(MAPK)是活化轉(zhuǎn)錄因子、翻譯因子和對許多細(xì)胞外信號發(fā)生響應(yīng)的其它目標(biāo)分子的保守信號傳導(dǎo)途徑的成員。MAPK通過細(xì)胞分裂素-活化蛋白激酶激酶(MKK)在具有Thr-X-Tyr序列的雙重磷酸化基序上磷酸化而被活化。在高級真核生物中，已經(jīng)將MAPK信號傳導(dǎo)的生理學(xué)作用與一些細(xì)胞事件如增殖、腫瘤生成、發(fā)展和分化聯(lián)系起來。因此，調(diào)節(jié)通過這些途徑(特別是通過MKK4和MKK6)的信號傳導(dǎo)的能力使得可以開發(fā)出用于與MAPK信號傳導(dǎo)有關(guān)的人類疾病如炎性疾病、自身免疫性疾病和癌癥的治療和預(yù)防性療法。
p38 MAPK的多重形式(α、β、γ、δ)(其各自由獨(dú)立的基因編碼)形成了參與許多刺激的細(xì)胞響應(yīng)的激酶級聯(lián)的一部分，所述刺激包括滲透性應(yīng)激、UV線和細(xì)胞因子介導(dǎo)的事件。認(rèn)為p38的這四種亞型調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的不同方面。它的活化是導(dǎo)致致炎細(xì)胞因子如TNFα的合成和產(chǎn)生的信號傳導(dǎo)事件級聯(lián)的一部分。P38通過磷酸化下游底物(包括其它激酶和轉(zhuǎn)錄因子)來發(fā)揮作用。已經(jīng)表明抑制p38激酶的活性劑阻斷了細(xì)胞因子(非限制性地包括TNFα、IL-6、IL-8和IL-1β)的產(chǎn)生。
當(dāng)在體外用脂多糖(LPS)進(jìn)行刺激時(shí)，已經(jīng)表明外周血單核細(xì)胞(PBMC)表達(dá)和分泌致炎細(xì)胞因子。當(dāng)在用LPS刺激前用該化合物預(yù)處理PBMC時(shí)，P38抑制劑有效地阻斷了這種作用。P38抑制劑在炎性疾病的動物模型中有效。許多疾病狀態(tài)的破壞性作用都是由致炎細(xì)胞因子的過度產(chǎn)生造成的。p38抑制劑調(diào)節(jié)這種過度產(chǎn)生的能力使其可用作疾病改善劑。
已經(jīng)表明阻斷p38功能的分子可有效抑制骨再吸收、炎癥以及其它基于免疫和炎癥的疾病。因此，安全和有效的p38抑制劑將提供一種治療方法，可以用該方法來治療可通過調(diào)節(jié)p38信號傳導(dǎo)來進(jìn)行控制的使人虛弱的疾病。因此，抑制p38活性的本發(fā)明的化合物可用于治療炎癥、骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥、自身免疫性疾病和用于治療其它細(xì)胞因子介導(dǎo)的疾病。
轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGFβ)表示一種包括例如GFβ1、TGFβ2和TGFβ3的蛋白的超家族，其是細(xì)胞生長和分化、胚胎和骨發(fā)育、細(xì)胞外基質(zhì)形成、血細(xì)胞生成、免疫和炎性響應(yīng)的多效調(diào)節(jié)劑。TGFβ族的成員引發(fā)一些細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑，這些信號傳導(dǎo)途徑最終導(dǎo)致一些基因的表達(dá)，這些基因調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、控制增殖響應(yīng)或與介導(dǎo)細(xì)胞外信號內(nèi)傳、細(xì)胞粘附、遷移和細(xì)胞間通訊的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白有關(guān)。
因此，作為TGFβ細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑抑制劑的本發(fā)明化合物是纖維增生性疾病的有用治療劑，所述疾病包括與TGFβ活性失調(diào)有關(guān)的腎病癥和過度纖維化，包括腎小球腎炎(GN)，如腎小球系膜增殖性GN、免疫性GN和新月體性GN。另一些腎情況包括糖尿病性腎病、腎間質(zhì)纖維化、接受環(huán)孢菌素的移植患者的腎纖維化和與HIV有關(guān)的腎病。膠原血管病癥包括進(jìn)行性全身性硬化癥、多發(fā)性肌炎、硬皮病、皮肌炎、嗜曙紅細(xì)胞筋膜炎、局限性硬皮病或那些與雷諾氏綜合征的發(fā)生有關(guān)的疾病。由TGFβ活性過度造成的肺纖維化包括成人呼吸窘迫綜合征、COPD、特發(fā)性肺纖維化和常常與自身免疫性病癥如全身性紅斑狼瘡和硬皮病、化學(xué)品接觸或變態(tài)反應(yīng)有關(guān)的間質(zhì)性肺纖維化。另一種伴有纖維增殖特性的自身免疫性病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。纖維增殖性情況可能與眼睛手術(shù)操作有關(guān)。這些操作包括伴有增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病的視網(wǎng)膜復(fù)置術(shù)、伴有人工晶狀體植入的白內(nèi)障摘除術(shù)和青光眼后的引流術(shù)。
已證實(shí)成纖維細(xì)胞生長因子受體3對骨生長發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用并對軟骨細(xì)胞增殖發(fā)揮抑制作用。致死性骨發(fā)育不全是由成纖維細(xì)胞生長因子受體3的不同突變造成的。一種突變——TDII FGFR3具有活化轉(zhuǎn)錄因子Stat1的組成酪氨酸激酶活性，從而導(dǎo)致了細(xì)胞周期抑制劑的表達(dá)、生長抑制和骨發(fā)育異常(Su等人，Nature 1997，386288-292)。FGFR3也常常在多發(fā)性骨髓瘤型癌癥中進(jìn)行表達(dá)。
激酶c-Src傳遞許多受體的致癌信號。例如，EGFR或HER2/neu在腫瘤中的過表達(dá)導(dǎo)致了c-src的組成活化，其是惡性細(xì)胞的特征，正常細(xì)胞并不具有該特征。另一方面，c-src表達(dá)不足的小鼠表現(xiàn)出一種骨硬化表型，表明c-src在破骨細(xì)胞功能中起關(guān)鍵作用并且可能在相關(guān)病癥中被涉及。
人核蛋白體S6蛋白激酶族由至少8個(gè)成員(RSK1、RSK2、RSK3、RSK4、MSK1、MSK2、p70S6K和p70S6Kb)組成。核蛋白體蛋白S6蛋白激酶發(fā)揮重要的多效性功能，其中，一種關(guān)鍵作用是在蛋白生物合成期間調(diào)節(jié)mRNA翻譯(Eur.J.Biochem 2000，267(21)6321-30；Exp Cell Res.1999，253(1)100-9；Mol Cell Endocrinol.1999，151(1-2)65-77)。已經(jīng)表明在細(xì)胞活力的調(diào)節(jié)(Immunol.Cell Biol.2000，78(4)447-51)和細(xì)胞生長(Prog.Nucleic Acid Res.Mol.Biol.2000，65101-27)中涉及p70S6對S6核蛋白體蛋白的磷酸化，因此，其在腫瘤轉(zhuǎn)移、免疫應(yīng)答和組織修復(fù)以及其它一些疾病情況中可能很重要。
SAPK′s(也被稱為“jun N-末端激酶”或“JNK′s”)是代表了一些信號傳導(dǎo)途徑中的次末級步驟的蛋白激酶族，所述信號傳導(dǎo)途徑導(dǎo)致了c-jun轉(zhuǎn)錄因子的活化和c-jun調(diào)節(jié)的基因的表達(dá)。具體地講，c-jun參與基因的轉(zhuǎn)錄，所述基因編碼因遺傳毒性損傷而被損害的DNA的修復(fù)中所涉及的蛋白。抑制細(xì)胞中SAPK活性的物質(zhì)阻止了DNA修復(fù)并使細(xì)胞對那些通過誘導(dǎo)DNA損害來起作用的癌癥治療藥物敏感。
Lck在T-細(xì)胞信號傳導(dǎo)中起作用。缺乏Lck基因的小鼠形成胸腺細(xì)胞的能力差。Lck作為T-細(xì)胞信號傳導(dǎo)的陽性活化劑的功能表明Lck抑制劑可以用于治療自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
Fes在骨髓造血細(xì)胞中強(qiáng)烈表達(dá)并參與骨髓粒細(xì)胞的分化和存活信號傳導(dǎo)途徑。在癌癥，特別是結(jié)腸直腸癌和乳癌中涉及CSK。
根據(jù)前述，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種預(yù)防或治療需要該類治療的個(gè)體的任何上述疾病或病癥的方法，該方法包括給所述個(gè)體施用治療有效量的式(1)、(2)或(3)的化合物或其可藥用的鹽。對于任何上面的應(yīng)用而言，所需劑量將根據(jù)給藥方式、所治療的特定情況和所需作用來進(jìn)行變化。(參見下文的“給藥和藥物組合物”)。
給藥和藥物組合物 本發(fā)明的化合物通常通過本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)和可接受的方式、單獨(dú)地或與一種或多種治療藥物組合來以治療有效量進(jìn)行給藥。治療有效量可隨疾病的嚴(yán)重程度、個(gè)體的年齡和相對健康狀況、所用化合物的效能和其它因素而在寬范圍內(nèi)進(jìn)行變化。表明以每日每公斤體重約0.03至2.5mg的日劑量系統(tǒng)給藥通?？色@得滿意結(jié)果。對于大型哺乳動物例如人而言，每日推薦劑量為約0.5mg至約100mg，例如方便地以每日最多4次的分次劑量或以緩釋劑型進(jìn)行給藥?？诜o藥的適宜單位劑型包含大約1至50mg活性成分。
本發(fā)明化合物可通過任何常規(guī)途徑以藥物組合物的形式給藥，特別是可以被經(jīng)腸給藥，例如，口服給藥，例如以片劑或膠囊劑的形式進(jìn)行給藥；或胃腸外給藥，例如，以可注射的溶液或混懸液的形式進(jìn)行給藥；局部給藥，例如，以洗劑、凝膠劑、軟膏劑或霜劑的形式進(jìn)行給藥；或以鼻腔制劑或栓劑的形式進(jìn)行給藥。
包含游離形式或可藥用鹽形式的本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物可按照常規(guī)方式，通過混合、制?；虬路椒▉磉M(jìn)行制備。例如，口服組合物可以是片劑或明膠膠囊，它含有活性組分和a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇；對于片劑來說還可以含有c)粘合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要還可以含有d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、藻酸或其鈉鹽，或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑?？勺⑸涞慕M合物可以是等滲水溶液或混懸液，并且栓劑可以由脂肪乳劑或混懸液來進(jìn)行制備。
組合物可以被滅菌和/或含有輔助劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。適宜的經(jīng)皮用制劑包含有效量本發(fā)明的化合物和載體。載體包括有助于通過宿主皮膚的可吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑。例如，經(jīng)皮吸收裝置是一種含有背襯膜、含有所述化合物并任選地含有載體和使所述化合物在較長的一段時(shí)間內(nèi)以受控和預(yù)定速度釋放到宿主皮膚的控速屏障的貯藥庫、以及確保所述裝置附著在皮膚上的部件的繃帶形式。也可以使用基質(zhì)經(jīng)皮制劑。合適的局部用，例如皮膚和眼睛用制劑優(yōu)選為本領(lǐng)域眾所周知的水溶液、軟膏劑、霜劑或凝膠。所述制劑可包含增溶劑、穩(wěn)定劑、張力增強(qiáng)劑、緩沖劑和防腐劑。
本發(fā)明化合物可以與一種或多種治療劑一起以治療有效量進(jìn)行給藥(藥物組合形式)。例如，可以與其它免疫調(diào)節(jié)或抗炎物質(zhì)一起產(chǎn)生協(xié)同作用，例如，當(dāng)與環(huán)孢菌素、雷帕霉素或子囊霉素或其免疫抑制劑類似物，例如環(huán)孢菌素A(CsA)、環(huán)孢菌素G、FK-506、雷帕霉素或相當(dāng)?shù)幕衔?、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、布喹那、來氟米特、咪唑立賓、麥考酚酸、麥考酚酸莫酯、15-脫氧精胍菌素、免疫抑制劑抗體，尤其是白細(xì)胞受體的單克隆抗體例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD25、CD28、B7、CD45、CD58或它們的配體，或其它免疫調(diào)節(jié)化合物，如CTLA41g聯(lián)用時(shí)。當(dāng)本發(fā)明化合物與其它治療劑一同給藥時(shí)，共同給藥的化合物的劑量當(dāng)然將根據(jù)一起使用的藥物類型、所使用的特定藥物、被治療的情況等來進(jìn)行調(diào)節(jié)。
本發(fā)明也提供了一種藥物組合形式，例如藥盒，其包含a)游離形式或可藥用鹽形式的第一種藥物，它是本文所公開的本發(fā)明化合物，和b)至少一種聯(lián)用的藥物。該藥盒可包含用于指導(dǎo)給藥的使用說明。
制備本發(fā)明化合物的方法 在下文的實(shí)施例中描述了制備本發(fā)明化合物的一般操作(A-N)。在所述反應(yīng)中，可能有必要保護(hù)在終產(chǎn)物中所需的反應(yīng)性官能團(tuán)，例如羥基、氨基、亞氨基、巰基或羧基，以避免它們不必要地參與反應(yīng)。可按照標(biāo)準(zhǔn)操作使用常規(guī)的保護(hù)基團(tuán)，例如，參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)(Protective Groups in Organic Chemistry)”，JohnWiley和Sons，1991。
可通過將游離堿形式的化合物與可藥用的無機(jī)或有機(jī)酸反應(yīng)來將本發(fā)明化合物制備為可藥用酸加成鹽的形式?；蛘?，可通過將游離酸形式的化合物與可藥用的無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)來制備本發(fā)明化合物的可藥用的堿加成鹽?；蛘?，鹽形式的本發(fā)明化合物可利用起始材料或中間體的鹽來進(jìn)行制備。
游離酸或游離堿形式的本發(fā)明化合物可分別從相應(yīng)的堿加成鹽或酸加成鹽制備。例如可通過用合適的堿(例如，氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)進(jìn)行處理來將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離堿。可通過用合適的酸(例如，鹽酸等)進(jìn)行處理來將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的游離酸。
非氧化形式的本發(fā)明化合物可通過在適宜的惰性有機(jī)溶劑(例如乙腈、乙醇、二噁烷水溶液等)中，于0至80℃下，用還原劑(例如，硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化磷、三溴化磷等)處理本發(fā)明化合物的N-氧化物而制備。
本發(fā)明化合物的前藥衍生物可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法(例如，詳情見Saulnier等人(1994)，Bioorganic and Medicinal ChemistryLetters，第4卷，第1985頁)來進(jìn)行制備。例如，合適的前藥可通過將未衍生化的本發(fā)明化合物與適宜的氨基甲?；噭?例如，1，1-酰氧基烷基羰基氯(carbanochloridate)、對硝基苯基碳酸酯等)反應(yīng)來制備。
本發(fā)明化合物的被保護(hù)衍生物可用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行制備。用于產(chǎn)生保護(hù)基團(tuán)和除去保護(hù)基團(tuán)的技術(shù)的詳細(xì)描述可見于T.W.Greene，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基團(tuán)(Protecting Groups in OrganicChemistry)”，第3版，John Wiley和Sons，Inc.，1999。
在本發(fā)明化合物的制備過程中，本發(fā)明化合物可方便地被制備為或形成溶劑化物(例如水合物)。本發(fā)明化合物的水合物可通過采用有機(jī)溶劑如二噁英、四氫呋喃或甲醇，在水/有機(jī)溶劑混合物中重結(jié)晶來方便地制備。
本發(fā)明化合物可通過將化合物的外消旋混合物與光學(xué)活性的拆分劑反應(yīng)以形成一對非對映異構(gòu)體化合物、分離非對映異構(gòu)體并回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體來制備其單個(gè)的立體異構(gòu)體。對映異構(gòu)體的拆分可利用本發(fā)明化合物的共價(jià)非對映異構(gòu)體衍生物來進(jìn)行，或者可以用易于解離的復(fù)合物(例如，結(jié)晶的非對映異構(gòu)體鹽)來進(jìn)行。非對映異構(gòu)體具有不同的物理性質(zhì)(例如，熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、溶解度、反應(yīng)性等)并且可以很容易地利用這些差異進(jìn)行分離。非對映異構(gòu)體可以通過色譜法分離，或者可以通過基于溶解度差異的分離/拆分技術(shù)進(jìn)行分離。然后通過任何不會導(dǎo)致消旋化的操作方法回收光學(xué)純的對映異構(gòu)體與拆分劑。用于從外消旋混合物中拆分化合物的立體異構(gòu)體的技術(shù)的更詳細(xì)描述可見于Jean Jacques，Andre Collet，Samuel H.Wilen，“對映異構(gòu)體，外消旋體和拆分(Enantiomers，Racematesand Resolutions)”，John Wiley And Sons，Inc.，1981。
總之，式(1)、(2)或(3)的化合物可通過下述方法制備，其包括 (a)下面實(shí)施例中所述的一般操作；和 (b)任選地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽； (c)任選地將鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為非鹽形式； (d)任選地將非氧化形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的N-氧化物； (e)任選地將N-氧化物形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為其非氧化物形式； (f)任選地從異構(gòu)體混合物拆分本發(fā)明化合物的單個(gè)的異構(gòu)體； (g)任選地將未衍生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為可藥用的前藥衍生物；和 (h)任選地將本發(fā)明化合物的前藥衍生物轉(zhuǎn)化為其未衍生化的形式。
用下面的實(shí)施例來對本發(fā)明進(jìn)行非限制性說明。只要沒有對起始材料的制備進(jìn)行特別描述，則該化合物是已知的或者可以用與本領(lǐng)域已知方法或下文實(shí)施例中所公開方法類似的方法來進(jìn)行制備。本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識到，下面的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明化合物制備方法的代表，也可以類似地使用其它眾所周知的方法。
實(shí)施例1 中間體的合成 3-(5-氨基-2-甲基苯基)-7-氯-1-甲基-1，6-萘啶-2(1H)-酮(8)
流程

圖1 向一個(gè)2L的燒瓶中加入1，3-丙酮二甲酸二乙酯1(160g，0.79mol)、原甲酸三乙酯(129g，0.87mol)和乙酸酐(161g，1.58mol)。將所得的混合物加熱至120℃達(dá)1.5h。將該混合物冷卻至室溫并通過在90-100℃下真空蒸餾(150-200mmHg)來除去揮發(fā)物。在冷凝器中收集亮黃色油狀物。然后，將燒瓶中的殘余物在冰浴上冷卻并將其與30％的氨水(65mL)混合到一起。使該反應(yīng)在冰浴上靜置1小時(shí)，然后用2N HCl將其酸化至pH＜5。將該混合物真空濃縮并將粗品用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)。分離出無色油狀物形式的產(chǎn)物2。
將4，6-二羥基煙酸乙酯2(5g，0.3mol)與POCl3(500mL)在一個(gè)2L的燒瓶中混合到一起并將其加熱至110℃達(dá)3小時(shí)。在將其冷卻至室溫后，真空除去大部分POCl3。將深色的粗產(chǎn)物傾倒到少量冰-水混合物中并用飽和碳酸鈉水溶液對其進(jìn)行中和。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取兩次。將所合并的有機(jī)層用飽和氯化鈉水溶液洗滌并用Na2SO4進(jìn)行干燥。用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶3)，得到白色固體形式的產(chǎn)物，4，6-二氯煙酸乙酯3。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.85(s，1H)，7.47(s，1H)，4.43(q，J＝7.2Hz，2H)，1.41(t，J＝7.2Hz，3H)。
將4，6-二氯煙酸乙酯3(43g，195mmol)溶解于乙腈(600mL)中，冷卻至0℃并緩慢向其中加入甲基胺(125mL 40％水溶液，977mmol)。將該反應(yīng)在0℃下攪拌30分鐘并將其再加溫至室溫達(dá)3小時(shí)。真空除去溶劑并將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)。分離出白色固體形式的產(chǎn)物4。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，8.12(bs，1H)，6.53(s，1H)，4.34(q，J＝7.2Hz，2H)，2.92(s，3H)，1.37(t，J＝7.2Hz，3H)。
將6-氯-4-甲基氨基煙酸乙酯4(33g，156mmol)溶解于無水THF(500mL)中并將其冷卻至-78℃。向該溶液中緩慢加入LAH(12.5g，329mmol)在THF(500mL)中的溶液。在完全加入后，將該反應(yīng)在-78℃下保持1小時(shí)。將該混合物加溫至室溫并緩慢加入少量MeOH∶乙酸乙酯＝1∶1以破壞過量的LAH。將粗產(chǎn)物用硅藻土塞過濾并將其用乙酸乙酯洗滌兩次。在真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)。獲得白色固體形式的產(chǎn)物5。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36(s，1H)，6.48(s，1H)，5.55(bs，1H)，4.63(s，2H)，2.89(d，J＝5.1Hz，3H)。
將化合物5(20g，116mmol)溶解于DCM(250mL)中并向其中加入MnO2(100g，1.16mol)。將該反應(yīng)在室溫下攪拌一夜，然后用硅藻土塞過濾并用乙酸乙酯進(jìn)行洗滌。在真空除去溶劑后，得到6并將其不進(jìn)行進(jìn)一步純化地用于下一步。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，8.59(bs，1H)，8.31(s，1H)，6.59(s，1H)，2.96(d，J＝5.1Hz，3H)。
將6-氯-4-甲基氨基-吡啶-3-甲醛6(19.8g，116mmol)與2-(5-氨基-2-甲基-苯基)乙酸甲酯7(27g，151mmol)和碳酸鉀(48.1g，348mmol)一起在DMF(1L)中進(jìn)行混合。將該混合物加熱至100℃達(dá)16小時(shí)。在冷卻至室溫并真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)。得到灰色固體形式的題化合物8。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.56(s，1H)，7.63(s，1H)，7.27(s，1H)，7.06(d，J＝8.1Hz，1H)，6.74(dd，J＝2.4，8.1Hz，1H)，6.58(d，J＝2.4Hz，1H)，3.71(s，2H)，2.10(s，3H)。
2-(5-氨基-2-甲基苯基)乙酸甲酯(7)
流程圖2 將2-甲基-5-硝基苯甲酸9(125g，690mmol)溶解于無水THF(1.25L)中。在加入硼烷(517mL 2M的THF溶液，1.04mol)后，將該反應(yīng)在室溫下攪拌18h。用碳酸鉀水溶液(112.5g，位于2.5L水中)將該反應(yīng)淬熄。在真空除去THF后，將該水溶液用DCM進(jìn)行萃取并將所合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并用硫酸鈉干燥。在過濾和真空除去溶劑后，得到淺黃色固體形式的產(chǎn)物10。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.29(d，J＝3Hz，1H)，8.50(m，1H)，7.29(m，1H)，4.78(s，2H)，2.41(s，3H)。
將(2-甲基-5-硝基苯基)甲醇10(96g，574mmol)溶解于無水DCM(2.5L)中，冷卻至0℃，用甲磺酰氯(72g，632mmol)和二-異丙基乙基胺(89g，689mmol)處理30分鐘。將該反應(yīng)加溫至室溫并將其再攪拌30分鐘。通過加入水(600mL)將其淬熄。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并對其進(jìn)行過濾。在真空除去溶劑后，分離出黃色油狀物形式的產(chǎn)物11并將其不進(jìn)行進(jìn)一步純化地用于下一步。
向粗品11(141g，0.575mol)在乙腈(4L)中的溶液中加入氰化鈉(84.4g，1.7mol)并將所得的混合物在回流下加熱8小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫并真空除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶解于DCM中并對其進(jìn)行過濾。將濾液用鹽水洗滌并用硫酸鈉干燥。在真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)。得到黃色固體形式的產(chǎn)物12。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.25(d，J＝2.4Hz，1H)，8.13(dd，J＝2.4，8.1Hz，1H)，7.41(d，J＝8.1Hz，1H)，3.78(s，2H)，2.48(s，3H)。
將2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙腈12(87g，494mmol)溶解于甲醇∶水＝1∶1(1.2L)中。加入位于水(1L)中的氫氧化鉀(277g，4.94mol)并將該反應(yīng)在回流下加熱14小時(shí)。在將其冷卻至室溫并真空除去甲醇后，將水層用DCM和醚洗滌。將所合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并對其進(jìn)行過濾。在真空除去溶劑后，得到橙色固體形式的產(chǎn)物13。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.07(m，2H)，7.35(d，J＝8.1Hz，1H)，3.78(s，2H)，2.43(s，3H)。
將2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙酸13(30g，154mmol)溶解于甲醇(700mL)中并向其中加入HCl(79mL 4M位于1，4-二惡烷中的溶液，316mmol)。將該反應(yīng)加熱回流14小時(shí)。在冷卻至室溫并真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物溶解于水(500mL)中并用2N氫氧化鈉將其堿化至pH＞12。將該溶液用乙酸乙酯萃取并將所合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并對其進(jìn)行過濾。在真空除去溶劑后，得到深黃色固體形式的產(chǎn)物14。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.06(m，2H)，7.33(d，J＝8.4Hz，1H)，3.73(s，3H)，3.72(s，2H)，2.41(s，3H)。
將2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙酸甲酯14(32g，153mmol)溶解于乙醇(750mL)中。向該溶液中加入10％鈀披碳(3.2g)。在清除反應(yīng)瓶中的氧后，安裝填充了氫氣的氣囊。將該反應(yīng)在室溫下攪拌16小時(shí)。通過用硅藻土塞過濾除去催化劑并真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶石油醚＝5∶1)。分離出黃色油狀物形式的產(chǎn)物7。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.9(d，J＝7.8Hz)，6.59(m，1H)，6.56(m，1H)，3.69(s，3H)。
3-(5-氨基-2-甲基苯基)-1，7-二甲基-1，6-萘啶-2(1H)-酮(15)
流程圖3 向3-(5-氨基-2-甲基苯基)-7-氯-1-甲基-1，6-萘啶-2-酮8(0.53mmol)在二惡烷(3mL)中的溶液中加入三苯基膦(0.08mmol)、Pd2(dba)3(16umol)和三甲基鋁(0.8mL 2.0M的甲苯溶液)。將該混合物脫氣10分鐘，然后將該反應(yīng)密封并將其在150℃下微波加熱10分鐘。將該反應(yīng)冷卻至室溫并將其傾倒到1M HCl(30mL)中并用EtOAc進(jìn)行洗滌。用3M NaOH使水層呈堿性并用EtOAc(3×20mL)對其進(jìn)行萃取。將所合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾并將其減壓干燥。將該黃色油狀物粗品用二氧化硅快速柱色譜進(jìn)行純化，用二氯甲烷3-5％MeOH作為洗脫劑，從而得到一種黃色的玻璃狀固體15。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.67(s，1H)，7.63(s，1H)，7.08(s，1H)，7.05(d，J＝8.4Hz，1H)，6.65(dd，J＝8.4，2.4Hz，1H)，6.57(d，J＝2.4Hz，1H)，3.72(s，3H)，2.70(s，3H)，2.11(s，3H)。MS(m/z)(M+1)+280.1。
3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-7-甲基-1-苯基-1H-[1，6]萘啶-2-酮(20)
流程圖4 將4，6-二氯煙酸乙酯16(500mg，2.27mmol)溶解于無水二惡烷(10mL)中并向其中加入苯胺(0.66mL，7.72mmol)。將該反應(yīng)在100℃下攪拌一夜。真空除去溶劑并將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)，從而得到6-氯-4-苯基氨基-煙酸乙酯17。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.77(s，1H)，8.70(s，1H)，7.33-7.37(m，2H)，7.15-7.21(m，3H)，6.80(s，1H)，4.31(q，2H)，1.34(t，3H)。
將6-氯-4-苯基氨基煙酸乙酯17(35mg，0.126mmol)溶解于1.2mL無水THF中并將其冷卻至-78℃。向該溶液中緩慢加入LAH溶液(1M THF溶液，0.14mL，0.14mmol)。在完全加入后，將該反應(yīng)在-78℃下再保持1小時(shí)。將該混合物在2小時(shí)內(nèi)加溫至室溫并緩慢加入少量MeOH∶乙酸乙酯＝1∶1以破壞過量的LAH。將粗產(chǎn)物用硅藻土塞過濾并用乙酸乙酯進(jìn)行洗滌。在真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)。獲得黃色固體形式的相應(yīng)的醇。將該醇(26mg，0.11mmol)溶解于DCM(2mL)中并向其中加入MnO2(56mg，0.55mmol)。將該反應(yīng)在室溫下攪拌一夜，然后用硅藻土塞過濾并用乙酸乙酯進(jìn)行洗滌。在真空除去溶劑后，得到6-氯-4-苯基氨基-吡啶-3-甲醛18并將其不進(jìn)行進(jìn)一步純化地用于下一步。
將6-氯-4-苯基氨基-吡啶-3-甲醛18(21mg，0.09mmol)與2-(5-氨基-2-甲基-苯基)乙酸甲酯7(18mg，0.1mmol)和碳酸鉀(37mg，0.27mmol)一起在DMF(2mL)中進(jìn)行混合。將該混合物加熱至100℃達(dá)16小時(shí)。在冷卻至室溫并真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)。得到灰色固體形式的標(biāo)題化合物3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-7-氯-1-苯基-1H-[1，6[萘啶-2-酮19。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.53(s，1H)，7.68(s，1H)，7.53-7.57(m，2H)，7.47-7.51(dt 1H)，7.20-7.23(m，2H)，6.96(d，1H)，6.59(dd，1H)，6.58(s，1H)，6.52(s，1H)，2.05(s，3H)。
向一個(gè)小瓶中裝入19(208mg，0.575mmol)、Pd2(dba)3(26mg，0.028mmol)和Ph3P(37mg，0.14mmol)。將該小瓶抽空并用N2再填充。向該小瓶中加入二惡烷(12mL)并將該溶液用AlMe3(0.86mL 2M的己烷溶液1.72mmol)進(jìn)行處理。將該混合物在微波烘箱中在140℃下加熱20分鐘。將該小瓶冷卻至室溫并將該混合物用乙酸乙酯進(jìn)行萃取。將有機(jī)相用1NNaOH溶液、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌。真空除去溶劑并將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)，從而得到3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-7-甲基-1-苯基-1H-[1，6]萘啶-2-酮20。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.71(s，1H)，7.75(s，1H)，7.58-7.63(m，2H)，7.52-7.56(m，1H)，7.28-7.30(m，2H)，7.03(d，1H)，6.67(d，1H)，6.64(d，1H)，6.38(s，1H)，5.32(s，1H)，3.60(brs，2H)，2.46(s，3H)，2.18(s，3H)。
3-溴-5-(三氟甲基)-N-(3-(1，2-二氫-1，7-二甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺(22)
流程圖5 在室溫下，向3-溴-5-三氟甲基-苯甲酸21(193mg，0.716mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入HATU(272mg，0.716mmol)和二-異丙基乙基胺(278mg，2.15mmol)。將所得的混合物攪拌2分鐘。向其中加入3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-1，7-二甲基-1H-[1，6]萘啶-2-酮15(200mg，0.716mmol)在DMF(5mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌一夜，用EtOAc稀釋并用鹽水洗滌三次。將有機(jī)層干燥(MgSO4)并將其濃縮。將殘余物用自動色譜進(jìn)行純化，從而得到米白色固體形式的所需產(chǎn)物22。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.50(s，1H)，8.99(s，1H)，8.38(s，1H)，8.22(s，1H)，8.17(s，1H)，8.00(s，1H)，7.72(s，1H)，7.66(d，J＝2.1Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.3，2.2Hz，1H)，7.25(d，J＝8.4Hz，1H)，3.63(s，3H)，2.65(s，3H)，2.08(s，3H)。
3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸(29)
流程圖6 將3-溴-4-甲基苯甲酸甲酯23(2.28g，10.0mmol)、硼酸酯(10mmol)、CsF(3.04g，20.0mmol)和Pd(PPh3)4(1.16g，1mmol)加入到一個(gè)配有攪拌棒的10-mL的Schlenk燒瓶中。將該燒瓶抽空并用氮?dú)庠偬畛湮宕?。通過注射器加入THF(8mL)。將該Schlenk燒瓶密封并在140℃下在微波條件下加熱20分鐘。在其反應(yīng)完全后，真空除去溶劑。將殘余物溶解于DCM(200mL)中并用水洗滌。將有機(jī)相用Na2SO4干燥，過濾并將其濃縮，從而得到一種粗品。通過硅膠柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶己烷＝1∶7)，得到兩種異構(gòu)體的混合物，可以將其不進(jìn)行進(jìn)一步純化地用于下一步中。
將該包含3-烯丙基-4-甲基苯甲酸甲酯24的混合物(1.18g，6.18mmol)溶解于CCl4∶ACN∶H2O(60mL∶60mL∶80mL)中。然后，向其中加入NaIO4(6.6g)和RuCl3H2O(0.21g)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘。將該混合物傾倒到水(100mL)中并用DCM(100mL)進(jìn)行萃取。將有機(jī)層用Na2SO4干燥，過濾并將其濃縮，從而得到粗品。將粗品25溶解于MeOH(100mL)中并緩慢向該溶液中加入TMSCHN2(18.0mL，2M的己烷溶液)。將該反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌10分鐘。在其反應(yīng)完全后，除去溶劑，從而得到一種粗品26，用硅膠柱色譜對其進(jìn)行純化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.86(s，1H)，7.84(d，J＝10Hz，1H)，7.23(d，J＝10Hz，1H)，3.88(s，3H)，3.68(m，5H)，2.34(s，3H)。LC/MS(M+Na，m/z)245。
將6-氯-4-甲基氨基-吡啶-3-甲醛6(233mg，1.36mmol)與3-((甲氧基羰基)甲基)-4-甲基苯甲酸甲酯26(303mg，1.36mmol)和碳酸鉀(564mg，4.08mmol)一起在DMF(8mL)中進(jìn)行混合。將該混合物加熱至100℃達(dá)16小時(shí)。在冷卻至室溫并真空除去溶劑后，將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(乙酸乙酯∶己烷＝1∶1)。得到固體形式的化合物27。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.73(s，1H)，8.05(s，1H)，7.88(dd，J＝9.4，2.5Hz，1H)，7.78(d，J＝2.5Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.43(d，J＝9.4Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.62(s，3H)，2.21(s，3H)。LC/MS(M+Na，m/z)365，367。
將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸甲酯27(3g，8.6mmol)、AlMe3(13.2mL，26.4mmol)、PPh3(318mg，1.29mmol)和Pd2(dba)3(240mg，0.018mmol)加入到一個(gè)配有攪拌棒的50mL的Schlenk燒瓶中。將該燒瓶抽空并用氮?dú)庠偬畛湮宕巍Ｍㄟ^注射器加入1，4-二惡烷(50mL)。將該Schlenk燒瓶密封并將其在100℃下加熱16小時(shí)。在其反應(yīng)完全后，緩慢加入1N HCl(100mL)以將該反應(yīng)淬熄。將該混合物用DCM(200mL)進(jìn)行萃取。將有機(jī)相用1N HCl(2×50mL)進(jìn)一步洗滌。將所合并的水相用6N LiOH處理直至pH＝10。將該黃色固體濾出并將其真空干燥，從而得到產(chǎn)物28，用快速柱色譜對其進(jìn)行純化(5-10％MeOH的DCM溶液)。LC/MS(M+1，m/z)323.1。
將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸甲酯28(3g，9mmol)混懸于MeOH/水(1∶1，mL)的混合物中并用NaOH(2.2g，55mmol)在80℃下處理2小時(shí)。真空除去MeOH。將所得的混合物酸化至pH＝7，將固體濾出，用水洗滌并將其干燥一夜，從而得到29。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.8(s，1H)，8.02(s，1H)，7.88(dd，J＝7.9，1.8Hz，1H)，7.78(d，J＝1.7Hz，1H)，7.44(s，1H)，7.42(d，J＝8Hz，1H)，3.65(s，3H)，2.62(s，3H)，2.23(s，3H)。LC/MS(M+1，m/z)309.1。
3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲?；? 異氰酸酯(31)
流程圖7 將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸29(620mg，2mmol)在SOCl2(2mL)中的溶液在回流下加熱2小時(shí)。真空除去過量的SOCl2，將所得固體混懸于THF中并將其在室溫下加入到氨水中。將所得的固體濾出并將其真空干燥，從而得到白色固體形式的30。LC/MS(M+1，m/z)308.1。
將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酰胺30(310mg，1mmol)與草酰氯(1mL)一起在1，2-二氯乙烷(2mL)中在回流下加熱2小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑，從而得到白色固體形式的31，將其不進(jìn)行純化地進(jìn)行應(yīng)用。
實(shí)例性化合物的制備 實(shí)施例2 3-(5-氨基-2-甲基苯基)-7-氯-1-甲基-1，6-萘啶-2(1H)-酮(A1) 一般操作A
在0℃下，向3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-7-氯-1-甲基-1H-[1，6]萘啶-2-酮8(749mg，2.50mmol)和3-三氟甲基苯甲酰氯(521mg，2.50mmol)在DCM(25mL)中的溶液中加入二-異丙基乙基胺(452mg，3.5mmol)。將該反應(yīng)混合物加溫至室溫并將其攪拌16小時(shí)。真空除去溶劑。將殘余物用自動色譜進(jìn)行純化，用乙酸乙酯∶己烷(0∶100至100∶0)梯度洗脫，從而得到亮黃色固體形式的所需產(chǎn)物A1。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.59(s，1H)，8.25(s，1H)，8.13(s，1H)，8.08(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78(d，J＝7.9Hz，1H)，7.71(s，1H)，7.65-7.60(m，2H)，7.45(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.20(d，J＝8.4Hz，1H)，3.76(s，3H)，2.04(s，3H)。
也可以用可以根據(jù)流程圖4合成的其它N-取代的萘啶酮，用同樣的操作來制備A型結(jié)構(gòu)的化合物。表1描述了按照實(shí)施例2所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表1
實(shí)施例3 N-[3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-4-甲基-苯基]-3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺(B1) 一般操作B
向3-(4-乙基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酸HCl鹽(15.0mg，0.044mmol)和二-異丙基乙基胺(21uL，0.121mmol)在DMF(0.8mL)中的溶液中加入HATU(16.5mg，0.043mmol)。將其在室溫下攪拌10分鐘后，向該反應(yīng)中加入3-(5-氨基-2-甲基-苯基)-1，7-二甲基-1H-[1，6]萘啶-2-酮15(11.4mg，0.041mmol)在DMF(0.25mL)中的溶液。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用DMSO(1mL)稀釋并用LCMS進(jìn)行純化，從而得到TFA鹽形式的標(biāo)題化合物B1。MS m/z 564.5(M+1)。
表2描述了按照實(shí)施例3所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表2






















實(shí)施例4 N-[4-甲基-3-(7-甲基-2-氧代-1-苯基-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-苯基]-3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-苯甲酰胺(C1) 一般操作C
向胺20(18.7mg，0.0548mmol)和3-(三氟甲基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酸(21.4mg，0.065mmol)在DCM(1mL)和DMF(0.3mL)中的溶液中加入二-異丙基乙基胺(28μL，0.16mmol)和HATU(21mg，0.082mmol)。將該混合物在室溫下攪拌一夜。真空除去溶劑并將粗產(chǎn)物用快速柱色譜進(jìn)行純化(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)，從而得到C1。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.36(s，1H)，8.88(s，1H)，8.11(s，1H)，7.70-7.73(m，3H)，7.58-7.67(m，4H)，7.40-7.42(m，2H)，7.36(s，1H)，7.27(d，1H)，6.31(s，1H)，3.25-3.30(m，4H)，2.3-2.50(m，4H)，2.40(s，3H)，2.21(s，3H)，2.18(s，3H)。
還可以用可以根據(jù)流程圖4合成的其它N-取代的萘啶酮類，用同樣的操作制備C型結(jié)構(gòu)的化合物。表3描述了按照實(shí)施例4所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表3



實(shí)施例5 N-[3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-4-甲基-苯基]-3-哌嗪-1-基-5-三氟甲基-苯甲酰胺(D1) 一般操作D
在氮?dú)鈿夥障?，向一根密封的管中加?-溴-N-[3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-4-甲基-苯基]-5-三氟甲基-苯甲酰胺22(25mg，0.047mmol)、哌嗪(4.9mg，0.056mmol)、Pd2(dba)3(4.3mg，0.0047mmol)、叔-丁醇鈉(6.3mg，0.066mmol)、BINAP(5.9mg，0.094mmol)和甲苯(0.30mL)。將該密封的管在油浴中在80℃下加熱16小時(shí)。真空除去溶劑。將殘余物溶解于DMSO(2mL)中并用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到白色固體形式的產(chǎn)物D1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.67(s，1H)，7.86(s，1H)，7.63(s，1H)，7.57-7.52(m，3H)，7.38(s，1H)，7.29(s，1H)，7.20(d，J＝7.7Hz，1H)，3.67(s，3H)，3.28-3.26(m，4H)，3.03-3.02(m，4H)，2.60(s，3H)，2.10(s，3H)，1.82(s，3H)。
表4描述了按照實(shí)施例5所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表4

實(shí)施例6 N-[4-甲基-3-(1-甲基-2-氧代-7-丙基-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺(E2) 一般操作E
將N-[3-(7-氯-1-甲基-2-氧代-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-4-甲基-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺A1(35.4mg，0.075mmol)、反式-丙烯基硼酸(9.7mg，0.113mmol)、PdCl2(PPh3)2(5.3mg，0.0075mmol)和Na2CO3(55.6mg，0.525mmol)在THF和水的混合物(4∶1，0.75mL)中的混懸液用氮?dú)饷摎獠⑵湓?0℃下加熱16小時(shí)。真空除去溶劑。將殘余物用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到白色固體形式的所需產(chǎn)物E1。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.97(s，1H)，8.26(s，1H)，8.21(d，J＝7.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.90(d，J＝7.2Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.76-7.73(m，2H)，7.61(d，J＝5.4Hz，1H)，7.33(d，J＝8.1Hz，1H)，7.18-7.12(m，1H)，6.73(d，J＝15.9Hz，1H)，3.84(s，3H)，2.23(s，3H)，2.10(d，J＝6.8Hz，3H)。
向N-[4-甲基-3-(1-甲基-2-氧代-7-丙烯基-1，2-二氫-[1，6]萘啶-3-基)-苯基]-3-三氟甲基-苯甲酰胺E1(12mg，0.025mmol)在MeOH(2mL)中的溶液中加入10％鈀披活性碳(潮濕的，12mg)。將所得的混合物在氫氣下在室溫下攪拌1小時(shí)。將Pd/C濾出并將濾液濃縮。將殘余物用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到白色固體形式的所需產(chǎn)物E2。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.48(s，1H)，8.84(s，1H)，8.31(s，1H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.96(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(t，J＝7.7Hz，1H)，7.73(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.41(s，1H)，7.29(d，J＝8.5Hz，1H)，3.67(s，3H)，2.84(t，J＝7.5Hz，2H)，2.14(s，3H)，1.78(q，J＝7.5Hz，3H)，0.96(t，J＝7.3Hz，3H)。
表5描述了按照實(shí)施例6所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表5





實(shí)施例7 1-(3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)-3-(4-甲基芐基)脲(F24) 一般操作F
向3-(5-氨基-2-甲基苯基)-1，7-二甲基-1，6-萘啶-2(1H)-酮15(20mg，0.072mmol)在THF(1mL)中的溶液中加入三光氣(6.38mg，0.022mmol)和DIEA(0.158mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30分鐘，然后向其中加入4-甲基芐基胺(0.108mmol)并將其繼續(xù)在室溫下攪拌8小時(shí)。將濾液濃縮。將殘余物用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到所需產(chǎn)物F24。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.04(s，1H)，8.57(s，1H)，8.0(s，1H)，7.77(s，1H)，7.42(s，1H)，7.23(d，J＝8.8Hz，1H)，7.16(m，4H)，4.22(d，J＝5.6Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.49(s，3H)，2.27(s，3H)，2.06(s，3H)。
表6描述了按照實(shí)施例7所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表6







實(shí)施例8 N-(3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基氨基甲?；?-4-甲氧基苯甲酰胺(G8) 一般操作G
向4-甲氧基苯甲酰胺(50mg，0.33mmol)在1，2-二氯乙烷(2mL)中的溶液中加入草酰氯(0.33mmol)。將該反應(yīng)混合物在55℃下加熱1小時(shí)。在將該反應(yīng)混合物冷卻時(shí)，向其中加入3-(5-氨基-2-甲基苯基)-1，7-二甲基-1，6-萘啶-2(1H)-酮15(0.16mmol)并將其繼續(xù)加熱8小時(shí)。將該反應(yīng)濃縮并用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到所需產(chǎn)物G8。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.03(s，1H)，8.05(m，3H)，7.76(s，1H)，7.50(m，2H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，7.06(d，J＝8.8Hz，2H)，2.72(s，3H)，2.51(s，3H)，2.13(s，3H)，2.07(s，3H)。
表7描述了按照實(shí)施例8所述的操作，用適宜的試劑制得的化合物。
表7




實(shí)施例9 1-苯乙酮基-3-(3-(1，2-二氫-1，7-二甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)硫脲(H1) 一般操作H
向苯甲酰氯(62μL，0.54mmol)在乙腈(3mL)中的溶液中加入KSCN(52mg，0.54mmol)并將其在55℃下加熱1小時(shí)。在冷卻至室溫時(shí)，將該反應(yīng)液濃縮至干燥，將其重新溶解于乙醇(2mL)中，然后用15在甲苯/乙醇(5/1mL)中的溶液對其進(jìn)行處理。將該多相的反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)，然后用冰浴冷卻并用乙醇過濾。將沉淀用水和乙醇洗滌。將該白色固體真空風(fēng)干。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ12.65(s，1H)，11.60(s，1H)，8.83(s，1H)，8.00-7.97(m，3H)，7.72-7.65(m，2H)，7.57-7.52(m，3H)，7.47(s，1H)，7.34(d，J＝8Hz，1H)，3.66(s，3H)，2.62(s，3H)，2.17(s，3H)；MS m/z443.1(M+1)。
實(shí)施例10 N-(3-(1，2-二氫-7-甲氧基-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺(I1)
將N-(3-(7-氯-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺A6(70mg，0.17mmol)用甲醇鈉(0.8mL 0.5M的甲醇溶液)處理并將其加熱至65℃達(dá)3小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫并用EtOAc和氯化銨水溶液對其進(jìn)行分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶解于DMF(1mL)中并用制備LCMS進(jìn)行純化，從而得到所需產(chǎn)物。1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.56(s，1H)，7.92(d，J＝8Hz，2H)，7.88(s，1H)，7.64-7.46(m，5H)，7.28(d，J＝8Hz，1H)，6.84(1H)，4.05(s，3H)，3.71(s，3H)，2.20(s，3H)；MS m/z 400.2(M+1)。
表8描述了按照與上述那些方法類似的方法制得的本發(fā)明的其它實(shí)例性化合物。
表8
實(shí)施例11 N-(3-(7-(二甲基氨基)-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺(J1)
將N-(3-(7-氯-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺A6(45mg，0.11mmol)溶解于NMP(1mL)中并用二甲胺(0.56mL2.0M的甲醇溶液)進(jìn)行處理。將該反應(yīng)混合物加熱至100℃達(dá)12小時(shí)。在冷卻至室溫時(shí)，將該反應(yīng)用制備LCMS進(jìn)行純化。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ10.23(s，1H)，8.51(s，1H)，7.97-7.94(m，2H)，7.78(s，1H)，7.68-7.66(m，2H)，7.61-7.51(m，3H)，7.23(d，J＝9Hz，1H)，6.37(s，1H)，3.61(s，3H)，3.20(s，6H)，2.12(s，3H)；MS m/z 413.2(M+1)。
實(shí)施例12 1-(3-(7-(二甲基氨基)-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)-3-苯基脲(K1)
將1-(3-(7-氯-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)-3-苯基脲A6(50mg，0.12mmol)溶解于NMP(1mL)中并用二甲胺(0.60mL2.0M的甲醇溶液)進(jìn)行處理。將該反應(yīng)混合物加熱至100℃達(dá)12小時(shí)。在冷卻至室溫時(shí)，將該反應(yīng)用制備LCMS進(jìn)行純化。1H NMR 400MHz(DMSO-d6)δ8.65(s，1H)，8.62(s，1H)，8.50(s，1H)，7.75(s，1H)，7.45-7.42(m，2H)，7.38(d，J＝2Hz，1H)，7.29-7.25(m，3H)，7.15(d，J＝8Hz，1H)，6.96(m，1H)，6.37(s，1H)，3.60(s，3H)，3.19(s，6H)，2.08(s，3H)；MS m/z428.2(M+1)。
實(shí)施例13 1-甲基-7-(甲硫基)-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺(L1)
將N-(3-(7-氯-1，2-二氫-1-甲基-2-氧代-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯基)苯甲酰胺A6(70mg 0.17mmol)溶解于NMP(1mL)中并用甲硫醇酸鈉(15mg，0.21mmol)處理。將該反應(yīng)混合物加熱至100℃達(dá)12小時(shí)。將該反應(yīng)冷卻至室溫并用EtOAc和水對其進(jìn)行分配。將有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶解于DMF(1mL)中并用制備LCMS進(jìn)行純化。1H NMR 400MHz(MeOD)δ8.82(s，1H)，7.95-7.92(m，2H)，7.67-7.50(m，5H)，7.41(s，1H)，7.30(d，J＝8Hz，1H)，3.78(s，3H)，2.77(s，3H)，2.21(s，3H)；MS m/z 416.1(M+1)。
實(shí)施例14 3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基-N-(5-甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(M6)
將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸29(50mg，0.17mmol)在DMF(1mL)中的溶液用HATU(97mg，0.255mmol)、5-甲基吡啶-2-胺(22mg，0.2mmol)和DIPEA(0.089mL，0.51mmol)在80℃下處理2小時(shí)。將殘余物用制備LC/MS進(jìn)行純化，從而得到米白色固體形式的所需產(chǎn)物M6。1H NMR(400MHz，MeOH-d4)δ9.12(s，1H)，8.26(m，1H)，8.22(d，J＝8.7Hz，1H)，8.16(s，1H)，8.07(dd，J＝8，1.6Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.94(s，1H)，7.86(m，1H)，7.57(d，J＝8Hz，1H)，3.85(s，3H)，2.87(s，3H)，2.46(s，3H)，2.35(s，3H)；LC/MS(M+1，m/z)399.2。
實(shí)施例15 3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-N-(5-氟吡啶-2-基)-4-甲基苯甲酰胺(M32)
將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酸29(154mg，0.5mmol)在SOCl2(1mL)中的溶液在回流下加熱2小時(shí)。真空除去過量的SOCl2并將所得的固體在室溫下加入到5-氟吡啶-2-胺(112mg，1mmol)和吡啶(0.4mL，5mmol)的溶液中。將所得的混合物攪拌30分鐘并對其進(jìn)行蒸發(fā)。將殘余物用制備LC/MS進(jìn)行純化，從而得到米白色固體形式的所需產(chǎn)物M32。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.84(s，1H)，8.28(m，1H)，8.04(s，1H)，7.95(dd，J＝8，2Hz，1H)，7.86(d，J＝1.9Hz，1H)，7.65(dt，J＝9.1，2.9Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.48(d，J＝8Hz，1H)，3.8(s，3H)，2.73(s，3H)，2.32(s，3H)；LC/MS(M+1，m/z)403.1。
表9描述了按照與上述那些方法類似的方法制得的本發(fā)明的其它實(shí)例性化合物。
表9









實(shí)施例16 3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基-N-(苯基氨基甲酰基)苯甲酰胺(N1)
在室溫下，將3-(1，7-二甲基-2-氧代-1，2-二氫-1，6-萘啶-3-基)-4-甲基苯甲酰基異氰酸酯31(10mg，0.03mmol)和苯胺(3mg，0.3mmol)一起混懸于DCM中達(dá)1小時(shí)。除去溶劑并將殘余物用制備LC/MS進(jìn)行純化，從而得到所需產(chǎn)物N1。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11(s，1H)，10.8(s，1H)，8.99(s，1H)，8.1(s，1H)，8.01(d，J＝8Hz，1H)，7.95(s，1H)，7.69(s，1H)，7.59(s，1H)，7.57(s，1H)，7.48(d，J＝7.9Hz，1H)，7.36(m，2H)，7.12(t，J＝7Hz，1H)，2.7(s，3H)，2.51(s，3H)，2.25(s，3H)；LC/MS(M+1，m/z)427.2。
表10描述了按照與上述那些方法類似的方法制得的本發(fā)明的其它實(shí)例性化合物。
表10




表11描述了相關(guān)化合物(1-5)和可以用上述一般方法A-N中的任意一種制備的其它化合物。
表11










試驗(yàn) 用下面一般性描述的試驗(yàn)或現(xiàn)有技術(shù)中已知的試驗(yàn)對本發(fā)明的化合物進(jìn)行測定以測量其抑制蛋白激酶如c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型的能力。例如，對本發(fā)明的化合物進(jìn)行測定以測量其選擇性抑制野生型Ba/F3細(xì)胞和用Tel c-kit激酶和Tel PDGFR融合的酪氨酸激酶轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞增殖的能力和選擇性抑制Mo7e細(xì)胞的SCF依賴性增殖的能力。
增殖試驗(yàn)BaF3 Library-Bright glo讀數(shù)方案 對化合物抑制野生型Ba/F3細(xì)胞和用Tel融合的酪氨酸激酶轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞增殖的能力進(jìn)行分析。將未被轉(zhuǎn)化的Ba/F3細(xì)胞維持在包含重組IL3的培養(yǎng)基中。將細(xì)胞以每孔50μL培養(yǎng)基中5,000個(gè)細(xì)胞的密度涂到384-孔TC板中，并以0.06nM至10μM的濃度向其中加入試驗(yàn)化合物。然后，將這些細(xì)胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)48小時(shí)。在對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后，按照制造商的指導(dǎo)向各孔中加入25μL BRIGHT

(Promega)，并用Analyst GT-Luminescence mode-50000積分時(shí)間在RLU中對這些板進(jìn)行讀數(shù)。由劑量響應(yīng)曲線確定IC50值(50％抑制所需的化合物濃度)。
Ba/F3FL FLT3增殖試驗(yàn) 所用鼠科動物細(xì)胞系是過表達(dá)全長FLT3構(gòu)建體的Ba/F3鼠科動物pro-B細(xì)胞系。將這些細(xì)胞維持在補(bǔ)加了青霉素50μg/mL、鏈霉素50μg/mL和L-谷酰胺200mM的RPMI 1640/10％胎牛血清(RPMI/FBS)中，同時(shí)加入鼠科動物重組IL3。Ba/F3全長FLT3細(xì)胞經(jīng)歷16小時(shí)的IL3饑餓，然后以每孔25μL培養(yǎng)基中5,000個(gè)細(xì)胞的密度將其涂到384-孔TC板中；并以0.06nM至10μM的濃度向其中加入試驗(yàn)化合物。在加入化合物后，以適宜的濃度向各孔25μL的培養(yǎng)基中加入FLT3配體或IL3來進(jìn)行細(xì)胞毒性控制。然后，將這些細(xì)胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)48小時(shí)。在對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后，按照制造商的指導(dǎo)向各孔中加入25μL BRIGHT

(Promega)并用Analyst GT-Luminescence mode-50000積分時(shí)間在RLU中對這些板進(jìn)行讀數(shù)。
Mo7e試驗(yàn) Mo7e細(xì)胞是人前巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞系，其依賴SCF來進(jìn)行增殖。用內(nèi)源性表達(dá)c-kit的Mo7e細(xì)胞在96-孔板中對本文所述化合物抑制SCF依賴性增殖的作用進(jìn)行試驗(yàn)。簡單地說，對兩倍系列稀釋的試驗(yàn)化合物(Cmax＝10μM)對用人重組SCF刺激的Mo7e細(xì)胞的抗增殖活性進(jìn)行評估。將其在37℃下培養(yǎng)48小時(shí)后，用得自Promega的MTT比色測定測量細(xì)胞活力。
對細(xì)胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制(高通量方法) 可將鼠細(xì)胞系32D造血祖細(xì)胞系用BCR-Abl cDNA轉(zhuǎn)化(32D-p210)。將這些細(xì)胞保持在補(bǔ)充有青霉素(50μg/mL)、鏈霉素(50μg/mL)和L-谷酰胺(200mM)的RPMI/10％胎牛血清(RPMI/FCS)中。將未轉(zhuǎn)化的32D細(xì)胞保持在類似條件下并添加15％WEHI條件培養(yǎng)基作為IL3源。
將50μl 32D或32D-p210細(xì)胞混懸液以每孔5000個(gè)細(xì)胞的密度接種于Greiner 384孔微孔板(黑色)中。向各孔中加入50nl測試化合物(1mM，在DMSO儲備液中)(包含STI571作為陽性對照)。在37℃、5％CO2下將細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)。向各孔中加入10μl 60％的Alamar BlueTM溶液(Tek診斷試劑)并將細(xì)胞再培養(yǎng)24小時(shí)。使用AcquestTM系統(tǒng)(Molecular Devices)測定熒光強(qiáng)度(530nm激發(fā)，580nm發(fā)射)。
對細(xì)胞BCR-Abl依賴性增殖的抑制 將32D-p210細(xì)胞以每孔15,000個(gè)細(xì)胞的密度接種于96孔TC板中。向各孔中加入50μL測試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為40μM)(包含STI571作為陽性對照)。將細(xì)胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)48小時(shí)后，向各孔中加入15μL MTT(Promega)并將細(xì)胞再培養(yǎng)5小時(shí)。通過分光光度法定量測定570nm處的光密度并通過量效曲線確定IC50值。
對細(xì)胞周期分布的影響 將32D和32D-p210細(xì)胞以每孔5mL培養(yǎng)基中2.5×106個(gè)細(xì)胞的數(shù)量接種于6孔TC板中并加入1或10μM的測試化合物(包含STI571作為對照)。然后，將細(xì)胞在37℃、5％CO2下培養(yǎng)24或48小時(shí)。用PBS洗滌2ml細(xì)胞混懸液，在70％EtOH中固定1小時(shí)并用PBS/EDTA/RNase A處理30分鐘。加入碘化丙錠(Cf＝10μg/ml)并用流式細(xì)胞儀在FACScaliburTM系統(tǒng)(BD Biosciences)上測定熒光強(qiáng)度。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的測試化合物顯示對32D-p210細(xì)胞具有細(xì)胞凋亡作用但不在32D母本細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
對細(xì)胞BCR-Abl自身磷酸化的影響 使用c-abl特異性捕獲抗體和抗磷酸酪氨酸抗體通過捕獲Elisa測定BCR-Abl的自身磷酸化作用。將32D-p210細(xì)胞以每孔50μL培養(yǎng)基中2×105個(gè)細(xì)胞的數(shù)量加入96孔TC板中。每孔加入50μL測試化合物的兩倍系列稀釋液(Cmax為10μM)(包含STI571作為陽性對照)。在37℃、5％CO2下培養(yǎng)細(xì)胞90分鐘。然后，將細(xì)胞在冰上用150μL含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液(50mM Tris-HCl，pH7.4，150mM NaCl，5mM EDTA，1mM EGTA和1％NP-40)處理1小時(shí)。將50μL細(xì)胞溶胞產(chǎn)物加到96孔光學(xué)板中，該板預(yù)先用抗-abl特異性抗體涂覆和封閉。在4℃下培養(yǎng)該板4小時(shí)。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入50μL結(jié)合有堿性磷酸酶的抗-磷酸酪氨酸抗體并將該板在4℃下培養(yǎng)過夜。用TBS-吐溫20緩沖液洗滌后，加入90μL發(fā)光底物并用AcquestTM體系(Molecular Devices)定量測定發(fā)光情況。
對表達(dá)突變型BCR-Abl的細(xì)胞增殖的影響 測試本發(fā)明化合物對表達(dá)野生型或突變型BCR-Abl(G250E、E255V、T315I、F317L、M351T)的Ba/F3細(xì)胞的抗增殖作用，所述BCR-Abl可以引起對STI571耐受或?qū)ζ涿舾行越档?。?0、3.3、1.1和0.37μM的濃度如上所述(培養(yǎng)基中不含IL3)測試這些化合物對表達(dá)突變型-BCR-Abl的細(xì)胞和未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗增殖作用。由如上所述獲得的量效曲線確定對未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞沒有毒性的化合物的IC50值。
FGFR3(酶試驗(yàn)) 在終體積為10μL的含有0.25μg/mL酶的激酶緩沖液(30mM Tris-HClpH7.5、15mM MgCl2、4.5mM MnCl2、15μM Na3VO4和50μg/mL BSA)和底物(5μg/mL生物素-聚-EY(Glu，Tyr)(CIS-US，Inc.)和3μM ATP)中，使用純化的FGFR3(Upstate)進(jìn)行激酶活性試驗(yàn)。制備兩種溶液首先將含有位于激酶緩沖液中的FGFR3酶的5μL的第一種溶液分配到384-型

(Perkin-Elmer)中，隨后加入溶于DMSO中的50nL的化合物。然后，向各孔中加入含有位于激酶緩沖液中的底物(聚-EY)和ATP的第二種溶液(5μl)。將該反應(yīng)在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)，通過加入10μL HTRF檢測混合物來終止該反應(yīng)，所述混合物含有30mM Tris-HCl pH7.5、0.5MKF、50mM ETDA、0.2mg/mL BSA、15μg/mL鏈霉抗生物素-XL665(CIS-US，Inc.)和150ng/mL結(jié)合有抗磷酸酪氨酸抗體的穴合物(CIS-US，Inc.)。于室溫下培養(yǎng)1小時(shí)使鏈霉抗生物素-生物素相互作用后，在Analyst GT(Molecular Devices Corp.)上讀取隨時(shí)間改變的熒光信號。根據(jù)每一化合物在12個(gè)濃度下(從50μM到0.28nM的1∶3稀釋液)的抑制百分比的線性回歸分析計(jì)算IC50值。
FGFR3(細(xì)胞試驗(yàn)) 測試本發(fā)明化合物抑制轉(zhuǎn)化的Ba/F3-TEL-FGFR3細(xì)胞增殖(其依賴于FGFR3細(xì)胞激酶的活性)的能力。將Ba/F3-TEL-FGFR3在混懸液中培養(yǎng)至多達(dá)800,000細(xì)胞/mL，用補(bǔ)充有10％胎牛血清的RPMI1640作為培養(yǎng)基。將細(xì)胞以每孔5000個(gè)細(xì)胞分配于384-孔板中的50μL培養(yǎng)基中。將本發(fā)明化合物在二甲基亞砜(DMSO)中溶解和稀釋。用DMSO制備12個(gè)1∶3的系列稀釋液以產(chǎn)生范圍通常在10mM到0.05μM的濃度梯度。將50nL的稀釋化合物加到細(xì)胞中，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)。向細(xì)胞中加入

(TREK Diagnostic Systems)(可用于監(jiān)測由增殖細(xì)胞產(chǎn)生的還原性環(huán)境)，終濃度達(dá)到10％。在37℃的細(xì)胞培養(yǎng)器中再培養(yǎng)4小時(shí)后，在Analyst GT(Molecular Devices Corp.)上定量測定被還原的


的熒光信號(于530nm激發(fā)，于580nm發(fā)射)。根據(jù)每個(gè)化合物12個(gè)濃度的抑制百分比的線性回歸分析來計(jì)算IC50值。
FLT3和PDGFRβ(細(xì)胞試驗(yàn)) 采用以上關(guān)于FGFR3細(xì)胞活性所述的相同方法，但分別采用Ba/F3-FLT3-ITD和Ba/F3-Tel-PDGFRβ代替Ba/F3-TEL-FGFR3，分析本發(fā)明化合物對FLT3和PDGFRβ的細(xì)胞活性的影響。
b-Raf(酶試驗(yàn)) 測試本發(fā)明化合物抑制b-RAF活性的能力。在黑色壁和透明底的384孔MaxiSorp板(NUNC)中進(jìn)行測定。將底物IκBα在DPBS中稀釋(1∶750)并向各孔中加入15μL。將這些板在4℃下培養(yǎng)過夜并用EMBLA板清洗器以TBST(25mM Tris，pH8.0，150mM NaCl和0.05％吐溫-20)洗滌3次。在室溫下用Superblock(15μL/孔)封閉板子3小時(shí)，用TBST洗滌3次并輕拍干燥。將含有20μM ATP(10μL)的測試緩沖液加入各孔，然后加入100nL或500nL化合物。將B-RAF在測試緩沖液中稀釋(1μL稀釋至25μl)并將10μl被稀釋的B-RAF加入各孔(0.4μg/孔)。將這些板在室溫下培養(yǎng)2.5小時(shí)。用TBST洗滌該板6次以終止激酶反應(yīng)。以Superblock稀釋Phosph-IκBα(Ser32/36)抗體(1∶10,000)并將15μL加入各孔。將這些板在4℃下培養(yǎng)過夜并用TBST洗滌6次。用Superblock稀釋結(jié)合有AP的山羊-抗-小鼠IgG(1∶1,500)并將15μL加到各孔中。將這些板在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)并用TBST洗滌6次。在各孔中加入15μL Attophos AP底物并將這些板在室溫下培養(yǎng)15分鐘。在Acquest或Analyst GT上使用FluorescenceIntensity Nanxin BBT陰離子(505分色鏡)對這些板進(jìn)行讀數(shù)。
b-Raf(細(xì)胞試驗(yàn)) 在A375細(xì)胞中測試本發(fā)明化合物抑制MEK磷酸化的能力。A375細(xì)胞系(ATCC)得自人類黑色素瘤患者，它在B-Raf基因上具有V599E突變。由于B-Raf突變使得磷酸化的MEK水平上升。在無血清培養(yǎng)基中，在37℃下將接近匯合至匯合的A375細(xì)胞與化合物一起培養(yǎng)2小時(shí)。然后用冷PBS洗滌細(xì)胞一次并用含有1％TritonX100的裂解緩沖液裂解細(xì)胞。離心后，上清液進(jìn)行SDS-PAGE，接著將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。然后將膜用抗-磷酸MEK抗體(ser217/221)(細(xì)胞信號傳導(dǎo))進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析。通過磷酸化MEK在硝酸纖維素膜上的條帶密度考察磷酸化MEK的量。
人TG-HA-VSMC增殖試驗(yàn) 使人TG-HA-VSMC細(xì)胞(ATCC)在補(bǔ)加了10％FBS的DMEM中生長至80-90％的融合，然后將其以6e4個(gè)細(xì)胞/mL的數(shù)量重新混懸于補(bǔ)加了1％FBS和30ng/mL重組人PDGF-BB的DMEM中。然后，將這些細(xì)胞以50μL/孔的數(shù)量等分至384-孔板中，將其在37℃下培養(yǎng)20小時(shí)，然后用0.5μL 100x化合物將其在37℃下處理48小時(shí)。在處理后，向各孔中加入25μL CellTiter-Glo處理15分鐘，然后在CLIPR(Molecular Devices)上對這些板進(jìn)行讀數(shù)。
UPSTATE KINASE PROFILERTM-放射-酶促濾紙結(jié)合試驗(yàn) 對本發(fā)明化合物抑制激酶小組各成員的能力進(jìn)行評價(jià)，所述激酶如c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf和b-raf激酶。按照該一般方法一式兩份地測定終濃度為10μM的化合物。需要注意的是激酶緩沖液成分和底物隨“Upstate Kinase ProfilerTM”中所包含的激酶的不同而變化。在置于冰上的微量離心管中混合激酶緩沖液(2.5μL，10x，需要時(shí)可含有MnCl2)、活化的激酶(0.001-0.01個(gè)單位；2.5μL)、在激酶緩沖液中的特異性或多聚(Glu4-Tyr)肽(5-500μM或0.01mg/ml)和激酶緩沖液(50μM；5μL)。加入Mg/ATP混合物(10μL；67.5(或33.75)mM MgCl2、450或225μM ATP和1μCi/μl[γ-32P]-ATP(3000Ci/mmol))并在約30℃下將反應(yīng)培養(yǎng)約10分鐘。將反應(yīng)混合物(20μl)點(diǎn)在2cm×2cm P81(磷酸纖維素，用于帶正電的肽底物)或Whatman No.1(用于多聚(Glu4-Tyr)肽底物)方形紙上。用0.75％磷酸洗滌該方形紙4次，每次5分鐘，并用丙酮洗滌一次，洗滌5分鐘。將該方形紙轉(zhuǎn)移到閃爍小瓶中，加入閃爍混合液(5ml)并用Beckman閃爍計(jì)數(shù)器定量摻入肽底物中的32P(cpm)。計(jì)算每個(gè)反應(yīng)的抑制百分比。
游離形式或可藥用鹽形式的式(1)、(2)或(3)的化合物表現(xiàn)出有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，例如，如本申請的體外試驗(yàn)所述。在上述實(shí)驗(yàn)中，IC50值是以產(chǎn)生的細(xì)胞計(jì)數(shù)比用不含抑制劑的對照所獲得的細(xì)胞計(jì)數(shù)低50％的所討論試驗(yàn)化合物的濃度的形式給出的。一般而言，本發(fā)明的化合物具有1nM至10μM的IC50值。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的化合物具有0.01μM至5μM的IC50值。在另一些實(shí)例中，本發(fā)明的化合物具有0.01μM至1μM的IC50值，或者更特定地具有1nM至1μM的IC50值。在另一些實(shí)例中，本發(fā)明的化合物具有低于1nM或高于10μM的IC50值。式(1)或(2)的化合物在10μM下對一種或多種下面的激酶可能表現(xiàn)出高于50％的抑制百分比，或者在另一些實(shí)施方案中，可能表現(xiàn)出高于約70％的抑制百分比c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。
應(yīng)當(dāng)理解，本文所述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅僅是出于舉例說明的目的，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以據(jù)此進(jìn)行各種修飾或改變，并且這些修飾和改變均包括在本申請的精神和范圍內(nèi)以及所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。本文所引用的所有公開出版物、專利和專利申請均引入本文作為參考并用于所有目的。
權(quán)利要求
1.式(1)的化合物
或其可藥用的鹽，其中
Y和Z獨(dú)立地是CR或N；
L是NR-C(O)、C(O)NR、C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO、NRS(O)0-2或NRCONRS(O)0-2；
R1和R3獨(dú)立地是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；
R2是(CR2)kR6、(CR2)1-4OR9、(CR2)1-4NR7R8或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；
R4是(CR2)kR6、(CR2)kOR9或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；
R5是H、鹵素或C1-6烷基；
R6是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、或任選地被取代的5-12員芳基、雜環(huán)或雜芳基；
R7和R8獨(dú)立地是H、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；或者R7和R8可以和各NR7R8中的N一起形成任選地被取代的環(huán)；
R9是H、(CR2)k-R6或任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基；
各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)k中的兩個(gè)亞烷基可以形成鏈烯基或炔基；
各任選地被取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基或C2-6炔基任選地被鹵化或任選地被N、O或S取代；
k是0-6；且
n是0-2；
條件是當(dāng)R1是鹵素、(CR2)kNR7R8或C5-8雜環(huán)烷基且R2是C1-6烷基時(shí)，L是C(O)NRC(O)NR、NRC(O)NR、NRC(O)NRC(O)、NRC(S)NRCO或NRCONRS(O)0-2。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中Y是CH。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中Z是N。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基或C2-6鏈烯基；
R2是C1-6烷基、C2-6鏈烯基、(CR2)kR6、(CR2)1-4OR9或(CR2)1-4NR7R8；
R6是苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基，其各自任選地被鹵素或任選地被鹵化的C1-6烷基所取代；
R7、R8和R9獨(dú)立地是H或C1-6烷基；或者R7和R8可以一起形成一種任選地被取代的5-7員雜環(huán)；且
各k是0-4。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中n是1；且R3是鹵素或C1-6烷基。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是C1-6烷基、(CR2)kO(C1-6烷基)或(CR2)kR6；
R6是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基；且
k是0-4。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中所述5-12員雜環(huán)或雜芳基是噻唑基、噻吩基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、吡唑基、呋喃基、吡咯基、二氫吡咯基、噁唑基、異噁唑基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、噻二唑基、苯并咪唑基、喹啉基、四氫喹啉基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、吲唑基、吲哚基、茚基、二氫茚基或二氫苯并呋喃。
8.權(quán)利要求6的化合物，其中所述任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、NR7R8、NRCOR7、NRCO(CR2)pNR7R8、NRCONR(CR2)pNR7R8、(CR2)pOR9、(CR2)pR10和任選地被鹵素、羥基、C1-6烷氧基或氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代；
各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)p中的兩個(gè)亞烷基可以形成鏈烯基或炔基；
R7和R8獨(dú)立地是H、C1-6烷基或(CR2)p-R10；或者R7和R8可以和各NR7R8中的N一起形成任選地被取代的環(huán)；
R9是H、任選地被鹵化的C1-6烷基或(CR2)pR10；
R10是C3-7環(huán)烷基、芳基、或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基，其各自任選地被一個(gè)或多個(gè)所述取代基所取代；且
p是0-4。
9.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式(2)的化合物
10.權(quán)利要求9的化合物，其中R1是鹵素、(CR2)kR6、(CR2)kNR7R8、(CR2)kOR9、(CR2)kSR9或任選地被取代的C1-6烷基或C2-6鏈烯基；
R2是C1-6烷基、(CR2)R6’、(CR2)1-4OR9或(CR2)1-4NR7R8；
R3是鹵素或C1-6烷基；
R4是C1-6烷基、(CR2)kO(C1-6烷基)或(CR2)kR6；
R6’是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基；
R6是任選地被取代的苯基、C3-7環(huán)烷基或包含N、O或S的5-12員雜環(huán)或雜芳基；
R7、R8和R9獨(dú)立地是H或C1-6烷基；或者R7和R8可以一起形成一種任選地被取代的5-7員雜環(huán)；且
各k是0-4。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中R6’任選地被鹵素或任選地被鹵化的C1-6烷基所取代；且R6任選地被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、NR7R8、NRCOR7、NRCO(CR2)pNR7R8、NRCONR(CR2)pNR7R8、(CR2)pOR9、(CR2)pR10、任選地被鹵素、羥基、C1-6烷氧基或氰基取代的C1-6烷基的取代基所取代；
各R是H或具有任選地被N、O、＝O、S取代或替代的碳的C1-6烷基；或者(CR2)p中的兩個(gè)亞烷基可以形成鏈烯基或炔基；
R7和R8獨(dú)立地是H、C1-6烷基或(CR2)p-R10；或者R7和R8可以和各NR7R8中的N一起形成任選地被取代的環(huán)；
R9是H、任選地被鹵化的C1-6烷基或(CR2)pR10；
R10是任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基；并且
p是0-4；
其中所述任選地被取代的C3-7環(huán)烷基、芳基或包含N、O或S的5-7員雜環(huán)或雜芳基各自可進(jìn)一步被一個(gè)或多個(gè)所述取代基所取代。
12.權(quán)利要求10的化合物，其中所述化合物是式(3)的化合物
13.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自

14.一種藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)的化合物和可藥用的賦形劑。
15.權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)的化合物或其藥物組合物用于調(diào)節(jié)激酶活性的應(yīng)用，其中所述激酶是c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、Fms、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。
16.一種調(diào)節(jié)激酶活性的方法，其包括給需要其的系統(tǒng)或個(gè)體施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用的鹽或藥物組合物，其中所述激酶是c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、Fms、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。
17.權(quán)利要求16的方法，其中使權(quán)利要求1的化合物在體外或體內(nèi)直接接觸c-kit、PDGFRα或PDGFRβ或其突變型。
18.權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)的化合物或其藥物組合物任選地與治療有效量的第二種活性劑聯(lián)合用于制備治療激酶介導(dǎo)的情況的藥物的應(yīng)用，其中所述激酶是c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2β、BRK、Fms、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型。
19.如權(quán)利要求18所述的化合物的應(yīng)用，其中所述激酶介導(dǎo)的情況或疾病是由c-kit、PDGFRα或PDGFRβ激酶介導(dǎo)的。
20.如權(quán)利要求18所述的化合物的應(yīng)用，其中第二種活性劑是支氣管擴(kuò)張藥、抗炎藥、白三烯拮抗劑或IgE阻滯劑；并且所述第二種活性劑在權(quán)利要求1的化合物給藥前、給藥后或給藥的同時(shí)被給藥。
21.如權(quán)利要求18所述的化合物的應(yīng)用，其中所述激酶介導(dǎo)的疾病或情況是與肥大細(xì)胞有關(guān)的疾病、腫瘤性病癥、過敏性病癥、炎性病癥、腸易激綜合征(IBS)、自身免疫性病癥、移植物抗宿主疾病、代謝綜合征、CNS相關(guān)病癥、神經(jīng)變性病癥、疼痛情況、物質(zhì)濫用、朊病毒病、癌癥、心臟病、纖維變性疾病、特發(fā)性動脈壓過高(IPAH)、原發(fā)性肺動脈高壓(PPH)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或心血管疾病。
22.如權(quán)利要求21所述的化合物的應(yīng)用，其中與肥大細(xì)胞有關(guān)的疾病是痤瘡、進(jìn)行性骨化性纖維發(fā)育不良(FOP)、炎癥和組織破壞、囊性纖維化??；腎病、炎性肌肉病癥、HIV、腦局部缺血、肥大細(xì)胞增多癥、黃斑變性、鼻息肉癥、預(yù)防和最小化脫發(fā)、細(xì)菌感染、間質(zhì)性膀胱炎、腫瘤血管生成或骨損失；
其中腫瘤性病癥是肥大細(xì)胞增多癥、胃腸道間質(zhì)瘤、小細(xì)胞肺癌、非-小細(xì)胞肺癌、急性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、脊髓發(fā)育不良綜合征、慢性髓細(xì)胞性白血病、結(jié)腸直腸癌、胃癌、睪丸癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤或星形細(xì)胞瘤；
其中過敏性病癥是哮喘、過敏性鼻炎、過敏性鼻竇炎、過敏性綜合征、蕁麻疹、血管性水腫、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、結(jié)節(jié)性紅斑、多形性紅斑、皮膚壞死性靜脈炎、昆蟲叮咬皮膚炎癥或吸血性寄生蟲感染；
其中炎性病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)膜炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；
其中自身免疫性病癥是多發(fā)性硬化、牛皮癬、腸的炎性疾病、炎性腸病(IBD)；潰瘍性、不確定的或感染性結(jié)腸炎；克羅恩氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多關(guān)節(jié)炎、局部或全身性硬皮病、全身性紅斑狼瘡、盤狀紅斑狼瘡、皮膚紅斑、皮肌炎、多發(fā)性肌炎、斯耶格倫氏綜合征、結(jié)節(jié)性全動脈炎、自身免疫性腸病或增生性腎小球腎炎；
其中移植物抗宿主疾病是器官移植的移植物排斥；
其中代謝綜合征是I型糖尿病、II型糖尿病或肥胖；
其中CNS相關(guān)病癥是抑郁、心境惡劣障礙、循環(huán)型情感性障礙、厭食癥、易餓病、月經(jīng)前期綜合征、絕經(jīng)后綜合征、精神遲緩、集中力缺失、悲觀煩惱、精神激動、自嘲和性欲降低、焦慮癥、精神病學(xué)病癥或精神分裂癥；
其中神經(jīng)變性病癥是阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、朊病毒病、運(yùn)動神經(jīng)元病(MND)或肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)；
其中疼痛情況是急性痛、術(shù)后痛、慢性痛、傷害性疼痛、癌癥痛、神經(jīng)性疼痛或心理性疼痛綜合征；
其中物質(zhì)使用障礙是藥物成癮、藥物濫用、藥物習(xí)慣性、藥物依賴性、戒斷綜合征或超劑量用藥；
其中癌癥是黑素瘤、胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、小細(xì)胞肺癌或其它實(shí)體腫瘤；
其中纖維變性疾病是心臟纖維化、丙型肝炎(HCV)、肝纖維化、非酒精性脂肪肝(NASH)、肝硬化、肺纖維化或骨髓纖維化。
23.如權(quán)利要求22所述的化合物的應(yīng)用，其中器官移植是腎移植、胰腺移植、肝移植、心臟移植、肺移植或骨髓移植。
24.選自
的化合物或其可藥用鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供了可用作蛋白激酶抑制劑的化合物及其藥物組合物、以及用該化合物來治療、改善或預(yù)防與異?；蚴д{(diào)的激酶活性有關(guān)的情況的方法。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用該類化合物來治療、改善或預(yù)防涉及c-kit、PDGFRα、PDGFRβ、CSF1R、Abl、BCR-Abl、CSK、JNK1、JNK2、p38、p70S6K、TGFβ、SRC、EGFR、trkB、FGFR3、FLT3、Fes、Lck、Syk、RAF、MKK4、MKK6、SAPK2、BRK、KDR、c-raf或b-raf激酶或其突變型的異常活性的疾病或病癥的方法。
文檔編號C07D471/04GK101528744SQ200780039037
公開日2009年9月9日 申請日期2007年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月20日
發(fā)明者D·基亞內(nèi)利, C·考, 耘 賀, 蔣松春, 李小林, 劉曉東, 劉佐勝, J·洛佐, V·莫爾泰尼, J·納巴卡, 任平達(dá), 沈臺輔, 王曉冬, 游書力 申請人:Irm責(zé)任有限公司