專利名稱：：Gpr100受體在糖尿病和肥胖癥調(diào)節(jié)中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新鑒定的核酸、由其編碼的多肽以及其產(chǎn)生和用途。更具體地，本發(fā)明的核酸和多肽涉及G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，以下稱為“Gpr100GPCR”。本發(fā)明還涉及抑制或活化所述核酸和多肽的作用。
背景技術(shù)：
：已確定許多醫(yī)學(xué)上重要的生物學(xué)過(guò)程由包括G-蛋白和/或第二信使，例如cAMP的參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的蛋白質(zhì)介導(dǎo)(Lefkowitz，Nature，1991，351353-354)。這些蛋白質(zhì)稱為參與具有G-蛋白或“PPG蛋白”的途徑的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)的一些實(shí)例包括GPC受體，如用于腎上腺素能劑和多巴胺的那些(Kobilka，B.K.，etal.，Proc.NatlAcad.Sci.，USA，1987，8446-50；KobilkaB.K.，etal.，Science，1987，238650-656；Bunzow，J.R.，etal.，Nature，1988，336783-787)，G-蛋白本身，效應(yīng)物蛋白質(zhì)，例如磷脂酶C、腺苷酸環(huán)化酶和磷酸二酯酶，以及驅(qū)動(dòng)物(actuator)蛋白質(zhì)，例如蛋白激酶A和蛋白激酶C(Simon，M.I.，etal.，Science，1991，252802-8)。例如，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一種形式中，激素結(jié)合的作用為細(xì)細(xì)胞內(nèi)腺苷酸環(huán)化酶的活化。酶由激素的活化依賴核苷酸，GTP的存在。GTP還影響激素的結(jié)合。G蛋白將激素受體連接至腺苷酸環(huán)化酶。當(dāng)由激素受體活化時(shí)G蛋白顯示用GTP交換結(jié)合的GDP。攜帶GTP的形式隨后結(jié)合活化的腺苷酸環(huán)化酶。由G蛋白自身催化GTP水解至GDP，G蛋白回到其基本的、無(wú)活性形式。因此，G蛋白提供雙重作用，作為中間體將信號(hào)從受體交接至效應(yīng)物，以及作為時(shí)鐘控制信號(hào)的持續(xù)時(shí)間。G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的膜蛋白基因超家族已表征為具有七個(gè)推定的跨膜結(jié)構(gòu)域。認(rèn)為該結(jié)構(gòu)域代表由胞外或胞質(zhì)環(huán)連接的跨膜α-螺旋。G蛋白偶聯(lián)受體包括各種各樣的生物學(xué)活性受體，如激素、病毒、生長(zhǎng)因子和神經(jīng)受體。G蛋白偶聯(lián)受體(亦稱7TM受體)已表征為包括約20至30個(gè)氨基酸的這七個(gè)保守疏水的序列段(Stretch)，連接至少八個(gè)發(fā)散親水環(huán)。G蛋白偶聯(lián)受體家族包括結(jié)合用于治療精神病和神經(jīng)學(xué)病癥的神經(jīng)安定藥物的多巴胺受體。該家族成員的其他實(shí)例包括但不限于，降鈣素、腎上腺素能、內(nèi)皮素(endothelin)、cAMP、腺苷、毒蕈堿、乙酰膽堿、5-羥色胺、組胺、凝血酶、激肽、促卵泡激素、視蛋白、內(nèi)皮分化基因-1、視紫紅質(zhì)、除臭劑以及巨細(xì)胞病毒受體。大多數(shù)G蛋白偶聯(lián)受體在形成認(rèn)為穩(wěn)定功能蛋白結(jié)構(gòu)的二硫鍵的前兩個(gè)胞外環(huán)的每個(gè)中具有單個(gè)保守的半胱氨酸殘基。7個(gè)跨膜域稱為TM1、TM2、TM3、TM4、TM5、TM6和TM7。TM3涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。半胱氨酸殘基的磷酸化和脂化(棕櫚?；蚍峄?可影響一些G蛋白偶聯(lián)受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。大多數(shù)G蛋白偶聯(lián)受體在第三個(gè)胞質(zhì)環(huán)和/或羧基末端內(nèi)包含潛在的磷酸化位點(diǎn)。對(duì)于一些G蛋白偶聯(lián)受體，如β-腎上腺素受體，通過(guò)蛋白激酶A和/或特定的受體激酶的磷酸化介導(dǎo)受體的脫敏作用。對(duì)于一些受體，認(rèn)為G蛋白偶聯(lián)受體的配體結(jié)合位點(diǎn)包括由數(shù)個(gè)G蛋白偶聯(lián)受體跨膜結(jié)構(gòu)域形成的親水窩(socket)，該窩由G蛋白偶聯(lián)受體的疏水殘基包圍。認(rèn)為每個(gè)G蛋白偶聯(lián)受體跨膜螺旋的親水側(cè)面向內(nèi)部并且形成極性配體結(jié)合位點(diǎn)。TM3因具有配體結(jié)合位點(diǎn)，如TM3天冬氨酸殘基而與數(shù)個(gè)G蛋白偶聯(lián)受體相關(guān)聯(lián)。TM5絲氨酸、TM6天冬酰胺和TM6或TM7苯丙氨酸或酪氨酸也參與配體結(jié)合。G蛋白偶聯(lián)受體可由異源三聚體的G-蛋白細(xì)胞內(nèi)偶聯(lián)至不同的細(xì)胞內(nèi)酶、離子通道和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(參見(jiàn)，Johnsonetal.，Endoc.Rev.，1989，10317-331)。不同的G蛋白α-亞基優(yōu)先刺激特定的效應(yīng)物以調(diào)整細(xì)胞中不同的生物學(xué)功能。已確定G蛋白偶聯(lián)受體胞質(zhì)殘基的磷酸化為調(diào)節(jié)一些G蛋白偶聯(lián)受體的G蛋白偶聯(lián)的重要機(jī)制。在哺乳動(dòng)物宿主內(nèi)的許多部位發(fā)現(xiàn)G蛋白偶聯(lián)受體。在過(guò)去的15年中，差不多350種靶向7個(gè)跨膜(7TM)受體的治療劑已成功引入市場(chǎng)。因此，G蛋白偶聯(lián)受體具有確定的、證實(shí)的作為治療靶的歷史。顯然，需要鑒定和表征可在預(yù)防、改善或矯正機(jī)能障礙或疾病中起作用的其它受體，所述機(jī)能障礙或疾病包括而不限于，肥胖癥，包括肥胖癥或體重增加的預(yù)防、食欲抑制，脂類代謝病癥，包括高脂血癥、血脂障礙(dyslipidemia)和高甘油三酯血癥，抑郁癥和焦慮，糖尿病和相關(guān)病癥，包括但不限于I型糖尿病、II型糖尿病、葡萄糖耐量受損、胰島素抗性綜合癥、X綜合癥、高血糖癥、急性胰腺腺炎、心血管疾病、高血壓、心臟肥大和高膽固醇血癥。摘要鑒定適于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，尤其是糖尿病和肥胖癥的分子的方法，所述方法包括確定候選分子是否為Gpr100多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑，其中Gpr100多肽包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5中所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列。優(yōu)選，Gpr100多肽由SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4中所示的核酸序列或與其至少90％同一的序列編碼。優(yōu)選，所述方法包括將候選分子與Gpr100多肽接觸，以及檢測(cè)作為所述接觸結(jié)果的細(xì)胞內(nèi)鈣水平的變化。優(yōu)選，該方法包括使非人動(dòng)物或其部分，優(yōu)選細(xì)胞、組織或器官接觸候選分子以及確定作為所述接觸結(jié)果所述動(dòng)物的生物學(xué)參數(shù)是否變化。優(yōu)選，所述生物學(xué)參數(shù)選自下組參數(shù)血清葡萄糖水平、體重、胰高血糖素水平、脂肪百分率(fatpercentage)。根據(jù)本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供具有功能遭破壞的內(nèi)源性Gpr100的轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物或其分離的細(xì)胞或組織作為葡萄糖調(diào)節(jié)或Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病模型的用途。優(yōu)選，所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物包括功能遭破壞的Gpr100基因，優(yōu)選包括Gpr100基因或其部分的缺失。優(yōu)選，所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物與野生型動(dòng)物相比呈現(xiàn)下列表型中任何一種或多種的改變血清葡萄糖水平降低、體重增加、脂肪百分率更高。優(yōu)選，所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物為嚙齒類動(dòng)物，優(yōu)選小鼠。根據(jù)本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5中所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列的Gpr100多肽用于鑒定治療、預(yù)防Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的激動(dòng)劑或其拮抗劑的用途。作為本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供包括SEQIDNO.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4中所示的核酸序列，或與其至少90％同一的序列的Gpr100多核苷酸用于鑒定治療、預(yù)防Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的激動(dòng)劑或其拮抗劑的用途。根據(jù)本發(fā)明的第五個(gè)方面，提供非人動(dòng)物或其部分，優(yōu)選細(xì)胞、組織或器官在鑒定治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選糖尿病或肥胖癥的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法中的用途。本發(fā)明在第六個(gè)方面提供通過(guò)前述任何權(quán)利要求的方法或用途鑒定的激動(dòng)劑或拮抗劑用于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的用途。本發(fā)明的第七個(gè)方面提供通過(guò)調(diào)控個(gè)體中包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5中所示的氨基酸序列或與其至少90％同一的序列的Gpr100多肽活性而調(diào)控個(gè)體中葡萄糖、脂肪代謝或體重增加的調(diào)節(jié)的方法。優(yōu)選，所述方法包括將Gpr100的激動(dòng)劑或拮抗劑施用給個(gè)體。根據(jù)本發(fā)明的第八個(gè)方面，提供治療患有Gpr100相關(guān)疾病的個(gè)體的方法，該方法包括提高或降低個(gè)體中Gpr100多肽的活性或量。優(yōu)選，所述方法包括將Gpr100多肽、Gpr100多肽的激動(dòng)劑或Gpr100的拮抗劑施用給所述個(gè)體。根據(jù)本發(fā)明的第九個(gè)方面，提供Gpr100相關(guān)疾病的診斷方法，所述方法包括步驟(a)檢測(cè)患有或疑似患有所述疾病的動(dòng)物中Gpr100多肽的表達(dá)水平或模式；和(b)將所述表達(dá)水平或模式與正常動(dòng)物的進(jìn)行比較。根據(jù)本發(fā)明的第十個(gè)方面，提供Gpr100相關(guān)疾病的診斷方法，所述方法包括檢測(cè)疑似患有所述疾病的個(gè)體中如上所述生物學(xué)參數(shù)的改變。作為本發(fā)明的第十一個(gè)方面，提供對(duì)Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的易感性的診斷試劑盒，所述試劑盒包括下列中任何一種或多種Gpr100多肽或其部分；Gpr100多肽的抗體；或能編碼它們的核酸。優(yōu)選，Gpr100相關(guān)疾病選自下組肥胖癥或體重增加、食欲抑制、代謝失調(diào)、糖尿病，包括I型糖尿病和II型糖尿病，以及相關(guān)病癥和體重相關(guān)病癥，葡萄糖耐量受性、胰島素抗性綜合癥、X綜合癥、外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、與糖尿病有關(guān)的蛋白尿、脂類代謝病癥，包括高血糖癥、高脂血癥、血脂障礙(dyslipidemia)、高甘油三酯血癥、急性胰腺腺炎、心血管疾病、外周血管疾病、高血壓、心臟肥大、局部缺血性心臟疾病、高膽固醇血癥、肥胖癥，以及肥胖癥或體重增加的預(yù)防。附圖簡(jiǎn)述圖1為顯示利用pfam的HMM結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件(http://www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/search.shtml)分析人Gpr100多肽(SEQIDNO3)的結(jié)果的圖。圖2為敲除質(zhì)粒的圖。圖3為顯示通過(guò)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)產(chǎn)生的人Gpr100GPCR表達(dá)分布型的圖。圖4顯示Gpr100敲除小鼠和野生型對(duì)照的白色脂肪組織的組織學(xué)切片。圖5顯示來(lái)自Gpr100動(dòng)物的血樣分析的圖。圖5A為來(lái)自Gpr100雄性動(dòng)物的血樣分析的圖。圖5B為來(lái)自Gpr100雌性動(dòng)物的血樣分析的圖。圖6為野生型動(dòng)物和Gpr100敲除動(dòng)物在禁食期間隨著時(shí)間的血葡萄糖水平圖。圖7為來(lái)自野生型動(dòng)物和Gpr100敲除動(dòng)物的血樣分析圖。圖8為野生型動(dòng)物和Gpr100敲除動(dòng)物的胰高血糖素水平圖。圖9為顯示過(guò)夜禁食的(16小時(shí))野生型動(dòng)物和Gpr100敲除動(dòng)物葡萄糖耐量試驗(yàn)結(jié)果的圖。圖10為過(guò)夜禁食的(16小時(shí))野生型動(dòng)物和Gpr100敲除動(dòng)物葡萄糖水平的圖。圖11為顯示過(guò)夜禁食的(16小時(shí))野生型和Gpr100敲除動(dòng)物的末端血樣中胰高血糖素水平RIA分析的圖。圖12顯示葡萄糖耐量(GTT)試驗(yàn)后0、60和120分鐘時(shí)的胰島素水平。圖13顯示禁食期間0、6和12小時(shí)時(shí)的胰島素水平。序列表SEQIDNO1顯示人Gpr100的cDNA序列。SEQIDNO2顯示源自SEQIDNO1的可讀框。SEQIDNO3顯示人Gpr100的氨基酸序列。SEQIDNO4顯示小鼠Gpr100的cDNA的可讀框。SEQIDNO5顯示小鼠Gpr100的氨基酸序列。SEQIDNO6-19顯示載體構(gòu)建體啟動(dòng)子和敲除載體序列。詳細(xì)說(shuō)明GPR100GPCR描述了G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)，尤其是孤兒G蛋白偶聯(lián)受體(稱為Gpr100GPCR)，其同源物、變體或衍生物，以及其在治療、緩解或診斷包括Gpr100相關(guān)疾病如糖尿病和肥胖癥在內(nèi)的疾病中的用途。本發(fā)明的這一和其他實(shí)施方案將在底下進(jìn)一步詳細(xì)描述。Gpr100也稱為Gpcr102和松弛素-3受體-2，并且如對(duì)編碼人Gpr100的擴(kuò)增的cDNA產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序的結(jié)果所示，與G蛋白偶聯(lián)受體家族的其他蛋白質(zhì)在結(jié)構(gòu)上相關(guān)聯(lián)。SEQIDNO1的cDNA序列包含編碼SEQIDNO3中所示374個(gè)氨基酸的多肽的可讀框(SEQIDNO2，核苷酸編號(hào)112至1039)。人Gpr100被發(fā)現(xiàn)定位于人染色體1q22。除非另有注明，本發(fā)明的實(shí)施將使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能力范圍內(nèi)的化學(xué)、分子生物學(xué)、微生物學(xué)、重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)。所述技術(shù)解釋于文獻(xiàn)中。參見(jiàn)例如，J.Sambrook，E.F.Fritsch，andT.Maniatis，1989，MolecularCloningALaboratoryManual，SecondEdition，Books1-3，ColdSpringHarborLaboratoryPress；Ausubel，F(xiàn).M.etal.(1995andperiodicsupplements；CurrentProtocolsinMolecularBiology，ch.9，13，and16，JohnWiley&Sons，NewYork，N.Y.)；B.Roe，J.Crabtree，andA.Kahn，1996，DNAIsolationandSequencingEssentialTechniques，JohnWiley&Sons；J.M.PolakandJamesO’D.McGee，1990，InSituHybridizationPrinciplesandPractice；OxfordUniversityPress；M.J.Gait(Editor)，1984，OligonucleotideSynthesisAPracticalApproach，IrlPress；D.M.J.LilleyandJ.E.Dahlberg，1992，MethodsofEnzymologyDNAStructurePartASynthesisandPhysicalAnalysisofDNAMethodsinEnzymology，AcademicPress；UsingAntibodiesALaboratoryManualPortableProtocolNO.IbyEdwardHarlow，DavidLane，EdHarlow(1999，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ISBN0-87969-544-7)；AntibodiesALaboratoryManualbyEdHarlow(Editor)，DavidLane(Editor)(1988，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ISBN0-87969-314-2)，1855，Lars-IngeLarsson“ImmunocytochemistryTheoryandPractice”，CRCPressinc.，BacaRaton，F(xiàn)lorida，1988，ISBN0-8493-6078-1，JohnD.Pound(ed)；“ImmunochemicalProtocols，vol80”，intheseries“MethodsinMolecularBiology”，HumanaPress，Totowa，NewJersey，1998，ISBN0-89603-493-3，HandbookofDrugScreening，editedbyRamakrishnaSeethala，PrabhavathiB.Fernandes(2001，NewYork，NY，MarcelDekker，ISBN0-8247-0562-9)；LabRefAHandbookofRecipes，Reagents，andOtherReferenceToolsforUseattheBench，EditedJaneRoskamsandLindaRodgers，2002，ColdSpringHarborLaboratory，ISBN0-87969-630-3；andTheMerckManualofDiagnosisandTherapy(17thEdition，Beers，M.H.，andBerkow，R，Eds，ISBN0911910107，JohnWiley&Sons)。這些普通教科書的每一本在此通過(guò)引用引入。GPR100的表達(dá)模式Gpr100cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增檢測(cè)在小腸、肺、腎、白細(xì)胞和脾臟中Gpr100表達(dá)的不同豐度。Gpr100GPCR的表達(dá)模式顯示于圖2中。利用SEQIDNO1的Gpr100cDNA通過(guò)BLASTN搜索人EST數(shù)據(jù)源，在來(lái)源于骨髓的文庫(kù)的cDNA中(BF90022)發(fā)現(xiàn)同一性。這表明Gpr100在這些正?；虍惓＝M織中表達(dá)。因此，Gpr100多肽、核酸、探針、抗體、表達(dá)載體和配體可用于與Gpr100GPCR在這些和其他組織中的過(guò)度表達(dá)、不足表達(dá)和異常表達(dá)相關(guān)的疾病的檢測(cè)、診斷、治療和其他測(cè)定。本發(fā)明的這一和其他實(shí)施方案將在底下進(jìn)一步詳細(xì)描述。GPR100GPCR相關(guān)疾病根據(jù)這里所述的方法和組合物，Gpr100GPCR可用于治療和診斷一系列疾病。為方便起見(jiàn)，這些疾病稱為“Gpr100相關(guān)疾病”。因此，Gpr100缺陷動(dòng)物可用作Gpr100相關(guān)疾病的模型。Gpr100、其片段、同源物、變體和其衍生物，以及調(diào)節(jié)劑，尤其包括激動(dòng)劑和拮抗劑，可用于診斷或治療Gpr100相關(guān)疾病。尤其，Gpr100可用于篩選能影響其功能的分子，所述分子可用于治療Gpr100相關(guān)疾病。這里我們證實(shí)了人Gpr100定位于人類染色體1q22。因此在具體的實(shí)施方案中，Gpr100GPCR可用于治療或診斷定位于該基因座、染色體帶、區(qū)域、臂或相同染色體的疾病。已確定為與Gpr100GPCR的染色體位置(即，人類染色體1q22)連鎖于相同基因座、染色體帶、區(qū)域、臂或染色體的已知疾病包括下列(括號(hào)中為位置)癲癇癥(1q21)、戈謝病(Gaucher’sdisease)(1q21)、淋巴瘤的進(jìn)展(lymphomaprogression)(1q22)、進(jìn)行性腓骨肌萎縮1B型(1q22)、先天性髓鞘形成不足神經(jīng)病(1q22)和對(duì)家族聯(lián)合高脂血癥(1q22-q23)的易感性。因此根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，Gpr100GPCR可用于通過(guò)本文獻(xiàn)中所描述的任何手段診斷或治療癲癇癥、戈謝病、淋巴瘤的進(jìn)展、進(jìn)行性腓骨肌萎縮1B型、先天性髓鞘形成不足神經(jīng)病和對(duì)家族聯(lián)合高脂血癥的易感性。如實(shí)施例中證實(shí)的，Gpr100缺陷的敲除小鼠呈現(xiàn)一系列表型?？傊瑢?shí)施例中所述的實(shí)驗(yàn)揭示了Gpr100受體對(duì)II型糖尿病和肥胖癥的影響。Gpr100缺陷小鼠經(jīng)受以下過(guò)程，包括GTT、胰島素抑制試驗(yàn)(IST)和葡萄糖刺激的胰島素分泌試驗(yàn)(GSIST)。如II型糖尿病中所見(jiàn)的，葡萄糖耐受不良可能是胰島素不敏感(其為肌肉、脂肪或肝細(xì)胞不能響應(yīng)胰島素而吸收葡萄糖)的結(jié)果，或胰島素缺乏(通常由于胰腺β-細(xì)胞機(jī)能障礙)的結(jié)果，或兩者。這些測(cè)量小鼠代謝和/或儲(chǔ)存葡萄糖的能力、血葡萄糖對(duì)外源胰島素的靈敏度和響應(yīng)葡萄糖的胰島素分泌。這些試驗(yàn)還指關(guān)注與糖尿病和肥胖癥有關(guān)的其他可觀察量，如食物攝入、代謝率、呼吸交換率、活動(dòng)水平、身體脂肪組成、血清化學(xué)參數(shù)，例如瘦蛋白和相關(guān)器官的組織學(xué)。實(shí)施例表明Gpr100突變體動(dòng)物在過(guò)夜禁食的代謝應(yīng)激后呈現(xiàn)嚴(yán)重的低血糖。這在剝奪食物后6小時(shí)變得明顯。因此，Gpr100參與葡萄糖的調(diào)節(jié)并且Gpr100缺陷動(dòng)物因此可用作葡萄糖調(diào)節(jié)，尤其用于葡萄糖調(diào)節(jié)障礙的疾病如糖尿病的模型。Gpr100可用于篩選其功能的調(diào)節(jié)劑；所述調(diào)節(jié)劑可給予患有疾病如糖尿病的動(dòng)物?？偟膩?lái)說(shuō)，公開了降低個(gè)體中血糖水平，優(yōu)選用于糖尿病治療的方法，該方法包括降低個(gè)體中Gpr100的水平或活性。如在別處指出的，此可通過(guò)下調(diào)Gpr100的表達(dá)或通過(guò)使用Gpr100拮抗劑而實(shí)現(xiàn)。實(shí)施例還表明突變體具有對(duì)葡萄糖的正常耐受性并且不顯示胰高血糖素水平的顯著改變。與低血糖表型相聯(lián)系，這些結(jié)果提示突變體動(dòng)物存在向脂肪酸氧化轉(zhuǎn)換以用于能量產(chǎn)生的能力的缺陷。因此，Gpr100缺陷動(dòng)物尤其可用作疾病的模型，在所述疾病中饑餓時(shí)無(wú)法向脂肪酸氧化轉(zhuǎn)換以用于能量產(chǎn)生為其組成或原因。Gpr100可用于篩選能影響其功能的分子，所述分子可用于治療所述疾病。此外，實(shí)施例3表明禁食狀況后，與年齡和性別匹配的對(duì)照小鼠相比，純合的突變體小鼠呈現(xiàn)白色脂肪組織增多和脂肪細(xì)胞大小增大。因此，Gpr100參與肥胖癥的調(diào)節(jié)并且Gpr100缺陷動(dòng)物可因此用作肥胖癥模型。Gpr100、其片段、同源物、變體和其衍生物，以及調(diào)節(jié)劑，尤其包括激動(dòng)劑和拮抗劑，可用于診斷或治療肥胖癥。尤其，Gpr100可用于篩選能影響其功能的分子，所述分子可用于治療肥胖癥。總的來(lái)說(shuō)，公開了降低個(gè)體中體脂肪，優(yōu)選用于肥胖癥治療的方法，該方法包括提高個(gè)體中Gpr100的水平或活性。如在別處指出的，此可通過(guò)上調(diào)Gpr100的表達(dá)或通過(guò)使用Gpr100激動(dòng)劑而實(shí)現(xiàn)。Gpr100相關(guān)疾病因此，Gpr100相關(guān)疾病包括下列中任何一種肥胖癥，包括肥胖癥或體重增加的預(yù)防，食欲抑制，代謝失調(diào)，糖尿病。包括I型糖尿病和II型糖尿病，以及相關(guān)病癥和體重相關(guān)的病癥，葡萄糖耐量受損、胰島素抗性綜合癥、X綜合癥、外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、與糖尿病相關(guān)的蛋白尿、脂類代謝病癥，包括高血糖癥、高脂血癥、血脂障礙、高甘油三酯血癥、急性胰腺炎、心血管疾病、外周血管病、高血壓、心臟肥大、局部缺血性心臟病、高膽固醇血癥、肥胖癥，和肥胖癥或體重增加的預(yù)防。如上所述，利用這里所述的任何方法和組合物，Gpr100GPCR可用于診斷和/或治療這些特定疾病中的任何一種。此外，指出Gpr100敲除具有食欲和攝水量抑制，因此能調(diào)節(jié)Gpr100功能的化合物可用作減肥添加劑或用于減肥和減肥計(jì)劃。我們特別地關(guān)注核酸、包括Gpr100GPCR核酸的載體、多肽，包括其同源物、變體或衍生物、包括Gpr100GPCR核酸和/或多肽的藥物組合物、宿主細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用于治療或診斷上面所列特定疾病的用途。此外，我們關(guān)注能與Gpr100GPCR相互作用或結(jié)合的化合物，優(yōu)選Gpr100GPCR的拮抗劑，優(yōu)選能降低細(xì)胞中環(huán)腺苷酸內(nèi)源水平的化合物，Gpr100GPCR的抗體，以及制備或鑒定這些的方法在診斷或治療上述特定疾病和病癥或病情中的用途。尤其，我們包括任何這些化合物、組合物、分子等等在生產(chǎn)用于治療或預(yù)防特定疾病的疫苗中的用途。還公開了用于檢測(cè)個(gè)體中特定疾病的診斷試劑盒。鑒定通過(guò)利用Gpr100GPCR能治療的或可診斷的這些或另外的特定疾病的連鎖作圖方法為本領(lǐng)域所知，并且也在該文獻(xiàn)的其他地方描述。葡萄糖調(diào)節(jié)葡萄糖為保證所有器官適當(dāng)?shù)墓δ芎痛婊钏匦璧?。雖然低血糖導(dǎo)致細(xì)胞死亡，慢性高血糖也能引起器官或組織損傷。血漿葡萄糖維持在窄的范圍，通常在4和7mM之間，其通過(guò)葡萄糖從腸的吸收由肝臟產(chǎn)生、和由外周組織攝取和代謝之間的平衡所控制。響應(yīng)葡萄糖血漿水平提高，如進(jìn)餐后，郎格罕氏胰島的β-細(xì)胞分泌胰島素。胰島素隨后作用于肌肉和脂肪組織以刺激葡萄糖攝入那些細(xì)胞，以及作用于肝細(xì)胞以抑制葡萄糖的產(chǎn)生。此外，胰島素也通過(guò)刺激脂肪形成、糖原和蛋白質(zhì)合成以及抑制脂肪分解、糖原分解和蛋白質(zhì)分解而刺激細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，并且促進(jìn)底物在脂肪、肝臟和肌肉中的貯藏。當(dāng)葡萄糖的血漿水平降低時(shí)，胰腺α-細(xì)胞分泌胰高血糖素，其隨后刺激肝臟中的糖酵解以及葡萄糖釋放入血液中。糖尿病和肥胖癥為本領(lǐng)域熟知的疾病。每種的概要說(shuō)明如下糖尿病糖尿病定義為其中糖類和脂類代謝通過(guò)胰島素不恰當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)的狀態(tài)。已鑒定出糖尿病的兩種主要形式，I和II型。I型糖尿病代表該疾病不太普遍的形式，波及5-10％的糖尿病患者。認(rèn)為其由郎格罕氏胰島產(chǎn)生胰島素的β-細(xì)胞的自體免疫破壞所引起。胰島素的外源給藥通常減輕該病理生理。II型糖尿病為該疾病最常見(jiàn)的形式并且可能由胰島素分泌和作用機(jī)理的聯(lián)合缺陷所引起。兩種形式，I型和II型具有類似的并發(fā)癥，但不同的病理生理學(xué)。II型糖尿病的第一個(gè)階段特征為肌肉和/或其他器官無(wú)法對(duì)胰島素正常循環(huán)濃度應(yīng)答。這通常與肥胖癥、久坐的生活方式和/或遺傳易感性有關(guān)。隨后為胰腺β-細(xì)胞胰島素分泌的提高，該病情稱為高胰島素血癥。最終，胰腺β-細(xì)胞不再能補(bǔ)償，導(dǎo)致葡萄糖耐量受損、慢性高血糖癥和組織損傷。參與血葡萄糖調(diào)節(jié)和代謝的復(fù)雜信號(hào)途徑提供若干潛在靶，用于治療異常葡萄糖代謝病情如II型糖尿病或肥胖癥。肥胖癥肥胖癥為影響至少三千九百萬(wàn)美國(guó)人的疾病即超過(guò)所有成人中的四分之一和約五個(gè)兒童中有一個(gè)。每年，肥胖癥在美國(guó)至少引起至少300,000例額外死亡并且花費(fèi)國(guó)家超過(guò)一千億美元。過(guò)去十年，美國(guó)的肥胖癥人口比例從25％提高至32％。肥胖癥通過(guò)體重指數(shù)或BMI測(cè)量，其為用于確定一個(gè)人是否肥胖癥或超重的數(shù)學(xué)計(jì)算。BMI通過(guò)將人體重公斤數(shù)除以其身高米數(shù)的平方而計(jì)算。30或更大的BMI認(rèn)為為肥胖癥，而25-29.9的BMI認(rèn)為為超重。然而，診斷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于比普通人具有更多肌肉塊以及更少體脂肪的人，如運(yùn)動(dòng)員來(lái)說(shuō)可能引起誤導(dǎo)。超過(guò)七千萬(wàn)美國(guó)人被認(rèn)為超重的。健康問(wèn)題，包括但不限于心血管疾病、血壓、II型糖尿病、高膽固醇、痛風(fēng)、某些類型的癌癥以及骨關(guān)節(jié)炎，與超重病情和肥胖癥有關(guān)。GPR100的同一性和相似性G蛋白偶聯(lián)受體SALPR促生長(zhǎng)素抑制素和血管緊張素樣肽受體。(同一性＝141/322(43％)，陽(yáng)性＝194/322(59％))。使用pfam的HMM結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)軟件(http://www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/search.shtml)分析Gpr100多肽(SEQIDNO3)證實(shí)Gpr100肽為7TM-1結(jié)構(gòu)組的GPCR(參見(jiàn)圖1)。已克隆人Gpr100GPCR的小鼠同源物，并且其核酸序列和氨基酸序列分別顯示為SEQIDNO4和SEQIDNO5。SEQIDNO4的小鼠Gpr100GPCRcDNA顯示與人Gpr100GPCR(SEQIDNO2)序列的高度同一性(同一性＝571/693(82％))，而小鼠Gpr100GPCR的氨基酸序列(SEQIDNO5)顯示與人Gpr100GPCR(SEQIDNO3)的高度同一性和相似性(同一性＝235/379(62％)，陽(yáng)性＝264/379(69％))。人和小鼠Gpr100GPCR因此為G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)大家族的成員。GPR100GPCR多肽如這里所用的，術(shù)語(yǔ)“Gpr100GPCR多肽”用來(lái)指包含SEQIDNo.3或SEQIDNO5所示氨基酸序列的多肽，或其同源物、變體或衍生物。優(yōu)選，多肽包含SEQIDNO3所示序列的同源物、變體或衍生物?！岸嚯摹敝赴ㄟ^(guò)肽鍵或修飾的肽鍵相互結(jié)合的兩個(gè)或多個(gè)氨基酸的任何肽或蛋白質(zhì)，即肽同電子排列體?！岸嚯摹奔戎付替?，通常稱作肽、寡肽或寡聚體，也指長(zhǎng)鏈，通常稱作蛋白質(zhì)。多肽可包含20個(gè)編碼基因的氨基酸以外的氨基酸?！岸嚯摹卑ㄍㄟ^(guò)天然過(guò)程例如翻譯后加工修飾的氨基酸序列，或通過(guò)本領(lǐng)域已知的化學(xué)修飾技術(shù)修飾的氨基酸序列，這些修飾技術(shù)較好地描述于基礎(chǔ)課本中，更詳細(xì)地描述于專著中，在長(zhǎng)篇的研究文獻(xiàn)中也有描述。修飾可發(fā)生于多肽的任何區(qū)域，包括肽主鏈、氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端。應(yīng)當(dāng)理解在給定的多肽中，相同類型的修飾可在相同位點(diǎn)或在幾個(gè)位點(diǎn)以不同的程度存在。而且，給定多肽可包含多種類型的修飾。作為遍在蛋白化的結(jié)果，多肽可以是分支的；也可以是環(huán)狀的，具有或不具有分支。環(huán)狀、分支和分支環(huán)狀多肽可產(chǎn)生自翻譯后自然過(guò)程，或可通過(guò)合成方法制備。修飾包括乙?；Ⅴ；?、ADP-核糖基化、酰胺化、黃素的共價(jià)結(jié)合、亞鐵血紅素部分的共價(jià)結(jié)合、核苷酸或核苷酸衍生物的共價(jià)結(jié)合、脂類或脂類衍生物的共價(jià)結(jié)合、磷脂酰肌醇的共價(jià)結(jié)合、交聯(lián)、環(huán)化、形成二硫鍵、脫甲基作用、形成共價(jià)交聯(lián)、形成胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲?；?、γ-羧化作用、糖基化、GPI錨形成、羥基化作用、碘化作用、甲基化、豆蔻?；⒀趸饔?、蛋白水解加工、磷酸化作用、異戊二烯化、外消旋化、selenoylation、硫酸鹽化作用、轉(zhuǎn)移-RNA介導(dǎo)的向蛋白質(zhì)中增加氨基酸，例如精氨?；捅樵诘鞍谆⒁?jiàn)，例如，Proteins-StructureandMolecularProperties，2ndEd.，T.E.Creighton，W.H.FreemanandCompany，NewYork，1993andWold，F(xiàn).，PosttranslationalProteinModificationsPerspectivesandProspects，pgs.1-12inPosttranslationalCovalentModificationofProteins，B.C.Johnson，Ed.，AcademicPress，NewYork，1983；Seifteretal.，“Analysisforproteinmodificationsandnonproteincofactors”，MethEnzymol(1990)182626-646andRattanetaL，“ProteinSynthesisPosttranslationalModificationsandAging”，AnnNYAcadSci(1992)66348-62.本文涉及的術(shù)語(yǔ)“變體”、“同源物”、“衍生物”或“片段”包括對(duì)序列進(jìn)行任何的取代、改變、修飾、代替、缺失或添加一個(gè)(或多個(gè))氨基酸。除非上下文中認(rèn)可其它含義，提及“Gpr100”和“Gpr100GPCR”包括提及Gpr100的這種變體、同源物、衍生物和片段。優(yōu)選，對(duì)于Gpr100，得到的氨基酸序列具有GPCR活性，更優(yōu)選至少與具有SEQIDNO3或SEQIDNO5所示Gpr100GPCR相同的活性。尤其，術(shù)語(yǔ)“同源物”涵蓋了結(jié)構(gòu)和/或功能上的同一性，只要得到的氨基酸序列具有GPCR活性。關(guān)于序列同一性(即相似性)，優(yōu)選有至少70％、更優(yōu)選至少75％，更優(yōu)選至少85％，甚至更優(yōu)選至少90％的序列同一性。更優(yōu)選有至少95％，更優(yōu)選至少98％的序列同一性。這些術(shù)語(yǔ)也包括源自Gpr100GPCR核酸序列等位變體的氨基酸的多肽。當(dāng)提到受體如Gpr100GPCR的“受體活性”或“生物學(xué)活性”時(shí)，這些術(shù)語(yǔ)用來(lái)指Gpr100受體的代謝或生理功能，包括相似的活性或改善的活性或具有降低的不良副作用的這些活性。還包括Gpr100受體的抗原性和免疫原的活性。GPCR活性的實(shí)例以及檢測(cè)和定量這些活性的方法是本領(lǐng)域已知的，并在本發(fā)明其它部分詳述。如此處所用的“缺失”定義為核苷酸和氨基酸序列的改變，其中分別為一或多個(gè)核苷酸和氨基酸殘基缺失。如此處所用的“插入”或“添加”指核苷酸或氨基酸序列的改變，其導(dǎo)致與天然存在的物質(zhì)相比，分別為一或多個(gè)核苷酸或氨基酸殘基的添加。如此處所用的“取代”是一或多種核苷酸或氨基酸分別被不同的核苷酸或氨基酸取代的結(jié)果。Gpr100多肽還可具有氨基酸殘基的缺失、插入或取代，其產(chǎn)生沉默改變以及導(dǎo)致功能相當(dāng)?shù)陌被嵝蛄?。有?jì)劃的氨基酸取代可基于殘基的極性、電荷、溶解性、疏水性、親水性和/兩親性特征等的相似性進(jìn)行。例如，帶負(fù)電的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電的氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；具有相似的親水性值、具有不帶電極性頭部基團(tuán)的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。例如可依據(jù)下表進(jìn)行保守取代。第二欄相同單元中的氨基酸、優(yōu)選在第三欄同一行中的氨基酸可相互取代。Gpr100多肽可進(jìn)一步包含異源氨基酸序列，通常在N-末端或C-末端，優(yōu)選N-末端。異源序列可包括影響細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外蛋白質(zhì)靶向的序列(例如前導(dǎo)序列)。異源序列還可包括提高Gpr100多肽免疫原性和/或便于多肽鑒定、提取和/或純化的序列。另一個(gè)特別優(yōu)選的異源序列為多氨基酸序列，例如優(yōu)選為N-末端的多組氨酸。至少10個(gè)氨基酸，優(yōu)選至少17個(gè)氨基酸但少于50個(gè)氨基酸的多組氨酸序列為特別優(yōu)選的。Gpr100GPCR多肽可以是“成熟”蛋白質(zhì)的形式，或者可以是較大蛋白質(zhì)例如融合蛋白的一部分。包括額外氨基酸序列常常是有利的，所述額外氨基酸序列含有分泌或前導(dǎo)序列、前序列、輔助純化的序列如多組氨酸殘基，或在重組生產(chǎn)過(guò)程中用于穩(wěn)定的附加序列。通過(guò)重組方法，使用已知的技術(shù)方便地制備Gpr100多肽。然而，也可通過(guò)合成方法，使用本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員已知的技術(shù)例如固相合成制備。Gpr100多肽也可制成融合蛋白，例如以輔助提取和純化。融合蛋白配偶體的實(shí)例包括谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA結(jié)合和/或轉(zhuǎn)錄活化功能域)和β-半乳糖苷酶。在融合蛋白配偶體和目的蛋白序列之間包含蛋白水解酶切位點(diǎn)，例如凝血酶酶切位點(diǎn)也是方便的，以允許除去融合蛋白序列。優(yōu)選融合蛋白不會(huì)妨礙目的序列的蛋白質(zhì)功能。Gpr100多肽可以是基本上分離的形式。該術(shù)語(yǔ)是指通過(guò)人工從天然狀態(tài)進(jìn)行改造。如果“分離的”組合物或物質(zhì)在自然中存在，其已經(jīng)從其最初的環(huán)境中被改變或除去，或者二者兼有。例如，天然存在于活的動(dòng)物體內(nèi)的多核苷酸、核酸或多肽不是“分離的”，但是從其天然狀態(tài)的共存原料中分離的相同的多核苷酸、核酸或多肽是“分離的”，如此處采用的術(shù)語(yǔ)。然而，應(yīng)當(dāng)理解Gpr100GPCR蛋白可與不會(huì)干擾蛋白質(zhì)預(yù)期效果的載體或稀釋劑混合，并仍認(rèn)為是基本上分離的。Gpr100多肽還可以是基本上純化的形式，在這種情況下，其通常包含存在于制品中的蛋白質(zhì)，其中所述制品中超過(guò)90％，例如95％、98％或99％的蛋白質(zhì)為Gpr100GPCR多肽。本文件還涉及包含Gpr100多肽的部分的肽。因此，包括Gpr100GPCR的片段及其同源物、變體或衍生物。所述肽長(zhǎng)度可以在2和200個(gè)氨基酸之間，優(yōu)選在4和40個(gè)氨基酸之間。所述肽可源自這里公開的Gpr100GPCR多肽，例如通過(guò)用適當(dāng)?shù)拿咐缫鹊鞍酌高M(jìn)行消化。或者肽、片段等可通過(guò)重組方法制備或合成方法合成。術(shù)語(yǔ)“肽”包括本領(lǐng)域已知的各種合成肽的變體，例如retroinversoD肽。該肽可以是抗原決定簇和/或T-細(xì)胞表位。該肽在體內(nèi)可具有免疫原性。優(yōu)選該肽能在體內(nèi)誘導(dǎo)中和抗體。通過(guò)對(duì)比來(lái)自不同物種的GPCR序列，可以確定不同種類之間氨基酸序列的哪些區(qū)域是保守的(“同源區(qū)域”)，以及不同種類之間哪些區(qū)域發(fā)生變化(“異源區(qū)域”)。因此，Gpr100多肽可包含對(duì)應(yīng)于至少一部分同源區(qū)域的序列。同源區(qū)域在至少兩個(gè)物種之間顯示高度的同源性。例如，使用上述的檢驗(yàn)方法，同源區(qū)域在氨基酸水平上可顯示至少70％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％，甚至更優(yōu)選至少95％的同一性。如下文更詳細(xì)闡述的，包含對(duì)應(yīng)于同源區(qū)域的序列的肽可用于治療策略。或者，Gpr100GPCR肽可包含對(duì)應(yīng)于至少一部分異源區(qū)域的序列。異源區(qū)域在至少兩個(gè)物種之間顯示低同源性程度。GPR100GPCR多核苷酸和核酸如在本文別處所進(jìn)一步詳細(xì)描述的，本發(fā)明包括Gpr100多核苷酸、Gpr100核苷酸和Gpr100核酸、生產(chǎn)方法以及這些的用途等。術(shù)語(yǔ)“Gpr100多核苷酸”、“Gpr100核苷酸”和“Gpr100核酸”可互換使用，并且用來(lái)指包含SEQIDNO1、SEQIDNO2或SEQIDNO4所示的核酸序列的多核苷酸/核酸，或其同源物、變體或衍生物。優(yōu)選，多核苷酸/核酸包含或?yàn)楹怂嵝蛄蠸EQIDNO1或SEQIDNO2，最優(yōu)選SEQIDNO2的同源物、變體或衍生物。這些術(shù)語(yǔ)還包括能編碼Gpr100多肽和/或肽的核酸序列。因此，Gpr100GPCR多核苷酸和核酸包括能編碼包含SEQIDNO3或SEQIDNO5所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列，或其同源物、變體或衍生物。優(yōu)選，Gpr100GPCR多核苷酸和核酸包括能編碼包含SEQIDNO3所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列，或其同源物、變體或衍生物。“多核苷酸”通常指任何多核糖核苷酸或多脫氧核糖核苷酸，其可以是未修飾的RNA或DNA或修飾的RNA或DNA?！岸嗪塑账帷卑ǘ幌抻趩魏碗p鏈DNA，是單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物的DNA，單鏈和雙鏈RNA，是單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物的RNA，包含DNA和RNA的雜交體，所述DNA和RNA可以是單鏈的，或更典型地，是雙鏈的或單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物。此外，“多核苷酸”指包含RNA或DNA或者RNA和DNA都包含的三鏈區(qū)域。術(shù)語(yǔ)多核苷酸還包括含有一個(gè)或多個(gè)修飾堿基的DNA和RNA，以及因穩(wěn)定或其它原因主鏈被修飾的DNA或RNA?！靶揎椀摹眽A基包括，例如三苯甲基化堿基和稀有堿基如次黃苷。DNA和RNA進(jìn)行了多種修飾；因此，“多核苷酸”包括通常在自然狀況下發(fā)現(xiàn)的化學(xué)、酶促或代謝修飾形式的多核苷酸，以及病毒和細(xì)胞所特有的DNA和RNA的化學(xué)形式?！岸嗪塑账帷边€包含相對(duì)短的多核苷酸，常常稱作寡核苷酸。技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，遺傳密碼子簡(jiǎn)并的結(jié)果，使得許多核苷酸序列可編碼相同的多肽。如此處所用的，術(shù)語(yǔ)“核苷酸序列”指核苷酸序列、寡核苷酸序列、多核苷酸序列及其變體、同源物、片段和衍生物(如其部分)。核苷酸序列可以是基因組的或合成的或重組來(lái)源的DNA或RNA，其可以是雙鏈的或單鏈的，而不管是否代表有義鏈或反義鏈或其組合。術(shù)語(yǔ)核苷酸序列可使用重組DNA技術(shù)制備(例如，重組DNA)。優(yōu)選，術(shù)語(yǔ)“核苷酸序列”指DNA。本文涉及的術(shù)語(yǔ)“變體”、“同源物”、“衍生物”或“片段”包括從或向Gpr100核苷酸序列的序列進(jìn)行任何取代、改變、修飾、替代、缺失或添加一個(gè)(或多個(gè))核酸。除非上下文另外認(rèn)可的，提及“Gpr100”和“Gpr100GPCR”包括提及Gpr100的所述變體、同源物、衍生物和片段。優(yōu)選，獲得的核苷酸序列編碼具有GPCR活性，優(yōu)選具有與SEQIDNO3或SEQIDNO5所示的GPCR至少相同的活性的多肽。優(yōu)選，術(shù)語(yǔ)“同源物”意圖涵蓋結(jié)構(gòu)和/或功能的同一性，使得獲得的核苷酸序列編碼具有GPCR活性的多肽。關(guān)于序列的同一性(即相似性)，優(yōu)選有至少70％、更優(yōu)選至少75％、更優(yōu)選至少85％、更優(yōu)選至少90％的序列同一性。更優(yōu)選有至少95％，更優(yōu)選至少98％的序列同一性。這些術(shù)語(yǔ)也包括該序列的等位變體。序列同源性的計(jì)算關(guān)于這里出現(xiàn)的任何序列的序列同一性可通過(guò)將任何一個(gè)或多個(gè)序列與另一個(gè)序列的簡(jiǎn)單“眼球(eyeball)”比較(即，嚴(yán)格比較)來(lái)看另外的序列與一個(gè)或多個(gè)序列是否具有例如至少70％的序列同一性。相對(duì)序列同一性也可通過(guò)可商購(gòu)的計(jì)算機(jī)程序來(lái)確定，所述計(jì)算機(jī)程序能夠使用例如缺省參數(shù)、使用用來(lái)確定同一性的任何合適算法來(lái)計(jì)算兩個(gè)或多個(gè)序列之間的％同一性。這種計(jì)算機(jī)程序的典型實(shí)例是CLUSTAL。用來(lái)確定兩個(gè)序列之間的同一性和相似性的其他計(jì)算機(jī)程序方法包括但不限于，GCG程序包(Devereuxetal1984NucleicAcidsResearch12387)和FASTA(Atschuletal1990JMolecBiol403-410).％同源性可在毗鄰序列上來(lái)計(jì)算，即，將一個(gè)序列與另一個(gè)序列進(jìn)行序列比對(duì)，并且一個(gè)序列中的每個(gè)氨基酸直接與另一個(gè)序列的相應(yīng)氨基酸進(jìn)行，比較每次一個(gè)殘基。這被稱為“無(wú)缺口的”序列比對(duì)。通常，所述無(wú)缺口的對(duì)比只在相對(duì)少量的殘基上進(jìn)行。盡管這是非常簡(jiǎn)單且一致的方法，但是它沒(méi)有考慮到，例如，在其它方面相同的序列對(duì)中，一個(gè)插入或缺失將導(dǎo)致隨后的氨基酸殘基被逐出序列比對(duì)，因此當(dāng)進(jìn)行整體比對(duì)時(shí)，將可能導(dǎo)致％同源性的大幅度下降。因此，多數(shù)序列比較方法被設(shè)計(jì)成產(chǎn)生最佳比對(duì)，所述最佳比對(duì)考慮到可能的插入和缺失而不會(huì)對(duì)整體同源性評(píng)分不適當(dāng)?shù)亓P分。這通過(guò)在序列對(duì)比中插入“缺口”來(lái)試圖最大化局部的同源性而實(shí)現(xiàn)。但是，這些更復(fù)雜的方法對(duì)序列對(duì)比中出現(xiàn)的每個(gè)缺口指定了“缺口罰分”，這樣，對(duì)于相同數(shù)量的相同氨基酸，帶有盡可能少的缺口的序列對(duì)比(其反映應(yīng)兩個(gè)被比較序列之間的更高相關(guān)性)將比有許多缺口的序列獲得更高的評(píng)分。一般用“遠(yuǎn)交缺口成本(Affinegapcosts)”來(lái)給缺口的存在扣(charge)相對(duì)高的成本，給缺口中每個(gè)隨后的殘基扣較少罰分。這是最普遍使用的缺口評(píng)分系統(tǒng)。高缺口罰分當(dāng)然將產(chǎn)生具有較少缺口的最優(yōu)化的序列對(duì)比。多數(shù)序列對(duì)比程序允許修改缺口罰分。但是當(dāng)使用這種軟件作序列比較時(shí)，優(yōu)選使用缺省值。例如，當(dāng)使用GCGWisconsinBestfit程序包時(shí)，氨基酸序列的缺省缺口罰分是缺口為-12、每個(gè)延伸為-4。因此最大％同源性的計(jì)算首先需要產(chǎn)生考慮到缺口罰分的最佳比對(duì)。進(jìn)行這種比對(duì)的合適計(jì)算機(jī)程序?yàn)镚CGWisconsinBestfit程序包(UniversityofWisconsin，U.S.A.；Devereuxetal.，1984，NucleicAcidsResearch12387)。能進(jìn)行序列比較的其他軟件的實(shí)例包括但不限于，BLAST程序包(Ausubeletal.，1999ibid-Chapter18)、FASTA(Atschuletal.，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS系列(suite)的比較工具。BLAST和FASTA都是可得到的，以用于離線和在線搜索(Ausubeletal.，1999ibid，pages7-58to7-60。盡管最終的％同源性能夠用同一性來(lái)測(cè)量，但比對(duì)過(guò)程本身通常并不是基于全或無(wú)的配對(duì)比較。相反，通常使用分級(jí)的相似評(píng)分矩陣，以根據(jù)化學(xué)相似性或進(jìn)化距離為每個(gè)成對(duì)比較指定評(píng)分。通常使用的這種矩陣的實(shí)例為BLOSUM62矩陣，其為BLAST系列程序的缺省矩陣。GCGWisconsin程序通常使用公共缺省值，或者如果提供的話，可使用自定義符號(hào)比較表。優(yōu)選使用GCG程序包中的公共缺省值，或在使用其他軟件的情況下，使用缺省矩陣，例如BLOSUM62。有利的是，使用BLAST算法將參數(shù)設(shè)置為缺省值。在http://www.ncbi.nih.gov/BLAST/blasthelp.html中詳細(xì)描述了BLAST算法，其在此引入作為參考。搜索參數(shù)也可有利地設(shè)置為所定義的缺省參數(shù)。有利的是，當(dāng)通過(guò)BLAST評(píng)估時(shí)，“基本上同一”等同于以至少大約7的EXPEXT值加以匹配的序列，優(yōu)選至少為大約9，以及最優(yōu)選10或以上。BLAST搜索中，EXPECT的缺省閾值通常是10。BLAST(BasicLocalAlignmentSearchTool)是程序blastp、blastn、blastx、tblastn，和tblastx使用的啟發(fā)式搜索算法；這些程序使用Karlin和Altschul的統(tǒng)計(jì)方法(KarlinandAltschul1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264-68；KarlinandAltschul，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA905873-7；參見(jiàn)http://www.ncbi.nih.gov/BLAST/blasthelp.html)并進(jìn)行一些改進(jìn)以賦予它們的搜索結(jié)果顯著性。BLAST程序被改造以適用于序列相似性搜索，例如鑒定查詢序列的同源物。對(duì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)的相似性搜索中基本問(wèn)題的討論參見(jiàn)Altschuletal(1994)NatureGenetics6119-129。可從//www.ncbi.nlm.nih.gov獲得的五個(gè)BLAST程序進(jìn)行下列任務(wù)blastp-將氨基酸查詢序列與蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)比較；blastn-將核苷酸查詢序列與核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)比較；blastx-將核苷酸查詢序列(兩條鏈)的六框(six-frame)概念性翻譯產(chǎn)物與蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(kù)比較；tblastn-將蛋白質(zhì)查詢序列與核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)比較，所述核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)以全部六個(gè)閱讀框動(dòng)態(tài)翻譯(兩條鏈)；tblastx-將核苷酸查詢序列的六框翻譯物與核苷酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的六框翻譯物比較。BLAST利用下列搜索參數(shù)HISTOGRAM-顯示每次搜索的評(píng)分直方圖；缺省為yes。(參見(jiàn)BLAST指南的參數(shù)H)。DESCRIPTIONS-限制對(duì)報(bào)告給所指定的數(shù)字的匹配序列的簡(jiǎn)短描述的數(shù)量；缺省限制為100個(gè)描述。(參見(jiàn)手冊(cè)頁(yè)中的參數(shù)V)。EXPECT-報(bào)告針對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)序列的匹配的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性閾值；缺省值是10，因此使得根據(jù)Karlin和Altschul(1990)隨機(jī)性模型，10個(gè)匹配被預(yù)期僅偶然被發(fā)現(xiàn)。如果賦予匹配的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性大于EXPECT閾值，該匹配將不被報(bào)道。較低的EXPECT閾值更加嚴(yán)格，致使更少的隨機(jī)配比被報(bào)告。分?jǐn)?shù)值是可接受的(參見(jiàn)BLAST手冊(cè)中的參數(shù)E)。CUTOFF——報(bào)告高得分片段對(duì)的截?cái)嗟梅帧腅XPECT值計(jì)算缺省值(見(jiàn)上文)。僅當(dāng)賦予數(shù)據(jù)庫(kù)序列的HSP的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性至少與賦予得分等于CUTOFF值的獨(dú)立的HSP一樣高時(shí)，才報(bào)告數(shù)據(jù)庫(kù)序列的HSP。較高的CUTOFF值更嚴(yán)格，致使較少隨機(jī)匹配被報(bào)告(參見(jiàn)BLAST手冊(cè)中的參數(shù)S)。典型地，顯著性閾值可使用EXPECT更直觀地控制。ALIGNMENTS——將數(shù)據(jù)庫(kù)序列限制到為報(bào)告高得分片段對(duì)(HSPs)所指定的數(shù)量；缺省限制是50。如果比這一數(shù)量更多的數(shù)據(jù)庫(kù)序列碰巧滿足報(bào)告的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性閾值(參見(jiàn)下面的EXPECT和CUTOFF)，僅報(bào)告被賦予最大統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的匹配(參見(jiàn)BLAST手冊(cè)中的參數(shù)B)。MATRIX——為BLASTP、BLASTX、TBLASTN和TBLASTX指定可替換的評(píng)分矩陣。缺省矩陣是BLOSUM62(Henikoff&Henikoff，1992)。有效的可替換的選擇包括PAM40、PAM120、PAM250和IDENTITY。沒(méi)有可替換的評(píng)分矩陣能夠用于BLASTN；在BLASTN請(qǐng)求中指定MATRIX指令得到出錯(cuò)應(yīng)答。STRAND——將TBLASTN搜索限定至數(shù)據(jù)庫(kù)序列的僅僅頂部或底部鏈；或者將BLASTN、BLASTX或TBLASTX搜索限定至查詢序列的僅僅頂部或底部鏈上的讀框。FILTER——掩蔽如使用Wootton&Federhen(1993)ComputersandChemistry17149-163的SEG程序所測(cè)定的具有低組合復(fù)雜性的查詢序列的片段，或者如使用Claverie&States(1993)ComputersandChemistry17191-201的XNU程序測(cè)定的由短周期性內(nèi)部重復(fù)序列組成的片段，或者對(duì)于BLASTN使用TatusovandLipman的DUST程序(參見(jiàn)http://www.ncbi.nlm.nih.gov)。過(guò)濾可從blast輸出中除去統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著但生物學(xué)上無(wú)意義的報(bào)告(例如針對(duì)共同的酸性-、堿性-或脯氨酸豐富的區(qū)域的查詢結(jié)果)，留下可用于針對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)序列進(jìn)行特定匹配的、查詢序列中更具有生物學(xué)意義的區(qū)域。通過(guò)過(guò)濾程序發(fā)現(xiàn)的低復(fù)雜性序列在核苷酸序列中使用字母“N”代替(例如，“NNNNNNNNNNNNN”)，而在蛋白質(zhì)序列中使用字母“X”代替低復(fù)雜性序列(例如“XXXXXXXXX”)。過(guò)濾僅用于查詢序列(或其翻譯產(chǎn)物)，不適用于數(shù)據(jù)庫(kù)序列。對(duì)于BLASTN缺省過(guò)濾是DUST，對(duì)于其它程序是SEG。當(dāng)用于SWISS-PROT中的序列時(shí)，沒(méi)有任何東西被SEG、XNU或二者掩蔽是正常的，所以不要期望過(guò)濾總能產(chǎn)生效果。此外，在某些情況下，序列完全被掩蔽，顯示針對(duì)未過(guò)濾的查詢序列報(bào)告的任何匹配的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性是令人懷疑的。NCBI-gi-除入藏登記和/或基因座名稱外，在輸出中引起NCBIgi標(biāo)識(shí)符被顯示。最優(yōu)選地，序列比較使用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST上提供的簡(jiǎn)單BLAST搜索算法進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)測(cè)定序列同一性時(shí)不使用缺口罰分。雜交本文還包含能夠與這里提出的序列雜交的核苷酸序列，或者其任何片段或衍生物，或者與任何上述物質(zhì)的補(bǔ)體雜交的核苷酸序列。雜交是指“核酸鏈與補(bǔ)體鏈通過(guò)堿基配對(duì)結(jié)合的過(guò)程(CoombsJ(1994)DictionaryofBiotechnology，StocktonPress，NewYorkNY)以及如在DieffenbachCW和GSDveksler(1995，PCRPrimer，aLaboratoryManual，ColdSpringHarborPress，PlainviewNY)中描述的以聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行的擴(kuò)增過(guò)程。如Berger和Kimmel(1987，GuidetoMolecularCloningTechniques，MethodsinEnzymology，152卷，AcademicPress，SanDiegoCA)中所講授的，雜交條件取決于核酸結(jié)合復(fù)合物的解鏈溫度(Tm)，并賦予如下文說(shuō)明的確定的“嚴(yán)格性”。能夠與本文提出的核苷酸序列或者它們的互補(bǔ)鏈選擇性雜交的核苷酸序列，通常與本文提出的相應(yīng)的核苷酸序列在至少20，優(yōu)選地至少25或30，例如至少40、60或100或更多連續(xù)核苷酸的區(qū)域具有至少70％，優(yōu)選地至少75％，更優(yōu)選地至少85％或90％，甚至更優(yōu)選地至少95％或98％的同源性。優(yōu)選的核苷酸序列將包含與SEQIDNO1，2或4同源的區(qū)域，優(yōu)選地與其中一個(gè)序列具有至少70％、80％或90％和更優(yōu)選地至少95％的同源性。術(shù)語(yǔ)“選擇性雜交”是指用作探針的核苷酸序列在發(fā)現(xiàn)靶核苷酸序列與探針以顯著高于背景的水平雜交的條件下被使用。背景雜交可因其它核苷酸序列的存在而發(fā)生，例如在被篩選的cDNA或基因組DNA文庫(kù)中。在這一事件中，背景是指由探針和文庫(kù)的非特異性DNA成員之間相互作用產(chǎn)生的信號(hào)水平，該水平與用靶DNA觀察到的特異性相互作用的強(qiáng)度相比低10倍，優(yōu)選低100倍。可測(cè)定相互作用的強(qiáng)度，例如通過(guò)放射性標(biāo)記探針，例如用32P。在中度至最嚴(yán)格條件下能夠與本文提出的核苷酸序列雜交的核苷酸序列也包括在本文范圍內(nèi)。如Berger和Kimmel(1987，GuidetoMolecularCloningTechniques，MethodsinEnzymology，152卷，AcademicPress，SanDiegoCA)中所講授的，雜交條件取決于核酸結(jié)合復(fù)合物的解鏈溫度(Tm)，并賦予如下文說(shuō)明的確定的“嚴(yán)格性”。最嚴(yán)格條件典型地發(fā)生在Tm-5℃(低于探針Tm5℃)；高嚴(yán)格條件發(fā)生在低于Tm約5℃-10℃；中度嚴(yán)格條件發(fā)生在低于Tm約10℃-20℃；低嚴(yán)格條件發(fā)生在低于Tm約20℃-25℃。本領(lǐng)域熟練的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，最嚴(yán)格雜交可用于鑒別或檢測(cè)相同的核苷酸序列，而中度(或低)嚴(yán)格雜交可用于鑒別或檢測(cè)相似或相關(guān)的核苷酸序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，我們描述了能夠在嚴(yán)格條件下(例如65℃和0.1xSSC{1xSSC＝0.15MNaCl，0.015M檸檬酸鈉pH7.0})與一個(gè)或多個(gè)Gpr100GPCR核苷酸序列雜交的核苷酸序列。當(dāng)核苷酸序列是雙鏈時(shí)，雙螺旋的兩條鏈，無(wú)論其為單獨(dú)或者結(jié)合的，都包括在本文內(nèi)。當(dāng)核苷酸序列是單鏈時(shí)，應(yīng)當(dāng)理解該核苷酸序列的互補(bǔ)序列也包括在本文的范圍內(nèi)。本公開還包括能與此處出現(xiàn)的序列互補(bǔ)的序列雜交的核苷酸序列，或其任何片段或衍生物。同樣的，本公開包括與能夠與相關(guān)序列雜交的序列互補(bǔ)的核苷酸序列。這些核苷酸序列類型是變體核苷酸序列的實(shí)例。在這個(gè)方面，術(shù)語(yǔ)“變體”包括與能夠與此處出現(xiàn)的核苷酸序列雜交的序列互補(bǔ)的序列。然而，術(shù)語(yǔ)“變體”優(yōu)選包括與能夠在嚴(yán)格條件(例如65℃和0.1×SSC{1×SSC＝0.15MNaCl，0.015檸檬酸三鈉pH7.0})下，與此處出現(xiàn)的核苷酸序列雜交的序列相互補(bǔ)的序列。GPR100GPCR和同源物的克隆本公開也包含互補(bǔ)于本文提出的序列的核苷酸序列，或其任何片段或衍生物。如果序列互補(bǔ)于它的片段，那么在其它有機(jī)體中該序列可用作鑒別和克隆相似GPCR序列的探針。因此本文使得從人和其他物種，例如小鼠、豬、羊等克隆Gpr100GPCR、其同源物和其他結(jié)構(gòu)或功能上相關(guān)的基因得以實(shí)現(xiàn)。與SEQIDNO1、SEQIDNO2、SEQIDNO4或其片段中包含的核苷酸序列同一或足夠同一的多核苷酸，可用作cDNA和基因組DNA的雜交探針，來(lái)從適合的文庫(kù)分離編碼Gpr100GPCR的部分或全長(zhǎng)cDNA和基因組克隆。所述探針也可用于分離與Gpr100GPCR基因具有序列相似性，優(yōu)選具有高度序列相似性的其他基因的cDNA和基因組克隆(包括編碼來(lái)自除人類以外的物種的同源物或直向同源物的基因)。雜交篩選、克隆和測(cè)序技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且在例如Sambrook等(同上)中描述。一般適合用作探針的核苷酸序列與參照物70％同一、優(yōu)選80％同一、更優(yōu)選90％同一、甚至更優(yōu)選95％同一。該探針一般包含至少15個(gè)核苷酸。優(yōu)選所述探針具有至少30個(gè)核苷酸，并且可具有至少50個(gè)核苷酸。特別優(yōu)選的探針在150到500個(gè)核苷酸范圍之間，更特別的是大約300個(gè)核苷酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，為了獲得編碼Gpr100GPCR多肽的多核苷酸，包括來(lái)自除人類以外的物種的同源物和直向同源物，包括用具有SEQIDNO1，SEQIDNO2，SEQIDNO4或其片段的標(biāo)記探針在嚴(yán)格雜交條件下篩選適當(dāng)?shù)奈膸?kù)，并且分離含有所述多核苷酸序列的部分或全長(zhǎng)cDNA和基因組克隆的步驟。所述雜交技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。嚴(yán)格雜交條件如上面所定義，或可替換在42℃，在包含如下的溶液中溫育過(guò)夜50％甲酰胺，5×SSC(150mMNaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5×Denhardt′s溶液，10％硫酸葡聚糖，和20微克/ml變性、剪切的鮭精DNA，之后在0.1×SSC中于大約65℃洗滌濾器。GPR100GPCR的功能性分析克隆的推定Gpr100GPCR多核苷酸可通過(guò)序列分析或功能性分析驗(yàn)證。例如，推定的Gpr100GPCR或同源物可如下分析受體活性。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)程序用RNA聚合酶體外合成來(lái)自編碼Gpr100受體cDNA的線性化質(zhì)粒模板的加帽RNA轉(zhuǎn)錄本。體外轉(zhuǎn)錄本以終濃度為0.2mg/ml懸浮于水溶液中。從成年雌性蟾蜍中除去卵巢葉，獲得階段V的去囊泡卵母細(xì)胞，使用顯微注射器以50nl顆粒(bolus)注射RNA轉(zhuǎn)錄本(10ng/卵母細(xì)胞)。使用兩個(gè)電極的電壓鉗測(cè)定個(gè)體非洲爪蟾卵母細(xì)胞響應(yīng)接觸激動(dòng)劑的電流。在無(wú)Ca2+的Barth’s培養(yǎng)基中在室溫下進(jìn)行記錄。如下文進(jìn)一步詳細(xì)描述的，非洲爪蟾系統(tǒng)也可用于篩選已知的配體和活化配體的組織/細(xì)胞提取物。GPR100GPCR的表達(dá)分析為了設(shè)計(jì)治療Gpr100GPCR相關(guān)疾病的有效療法，確定Gpr100(無(wú)論野生型或具體突變體)的表達(dá)模式是有用的。因此，本領(lǐng)域已知的方法可用來(lái)確定表達(dá)Gpr100的器官、組織和細(xì)胞類型(以及發(fā)育階段)。例如，可進(jìn)行常規(guī)的或“電子”的Northern。也可使用逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(RT-PCR)來(lái)檢測(cè)Gpr100基因或突變體的表達(dá)。用來(lái)確定Gpr100表達(dá)模式的更靈敏方法包括如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的RNAse保護(hù)分析。Northern分析是用于檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄本存在的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，并涉及標(biāo)記的核苷酸序列與其上已經(jīng)結(jié)合了來(lái)自特定細(xì)胞類型或組織的RNA的膜雜交。(Sambrook，supra，ch.7andAusubel，F(xiàn).M.，etal.supra，ch.4and16.)。應(yīng)用BLAST的類似計(jì)算機(jī)技術(shù)(“電子Northern”)可用于在諸如GenBank或LIFESEQ數(shù)據(jù)庫(kù)(IncytePharmaceuticals)的核苷數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索同一或相關(guān)的分子。這種類型分析的優(yōu)點(diǎn)在于其可能比基于多重膜的雜交更為快速。而且，可改進(jìn)計(jì)算機(jī)搜索的靈敏度來(lái)確定任何具體匹配是否被分類為精確的或同源的。如本文別處所進(jìn)一步詳細(xì)描述的，包括上述探針的多核苷酸和多肽可用作發(fā)現(xiàn)治療和診斷動(dòng)物和人疾病的研究試劑和材料。GPR100GPCR多肽的表達(dá)本公開包括產(chǎn)生Gpr100GPCR多肽的方法。該方法一般包括在適當(dāng)?shù)臈l件下(即，表達(dá)Gpr100GPCR多肽的條件)培養(yǎng)包含編碼Gpr100GPCR多肽的核酸，或其同源物、變體或衍生物的宿主細(xì)胞。為了表達(dá)有生物活性的Gpr100GPCR，編碼Gpr100GPCR的核苷酸序列或其同源物、變體或衍生物被插入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，即包含對(duì)于插入的編碼序列轉(zhuǎn)錄和翻譯必需的元件的載體。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法用來(lái)構(gòu)建含有編碼Gpr100GPCR的序列和適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、合成技術(shù)、和體內(nèi)基因重組。這些技術(shù)在Sambrook，J.等中描述。(1989；MolecularCloning，ALaboratoryManual，ch.4，8，and16-17，ColdSpringHarborPress，Plainview，N.Y.)andAusubel，F(xiàn).M.etal.(1995andperiodicsupplements；CurrentProtocolsinMolecularBiology，ch.9，13，and16，JohnWiley&Sons，NewYork，N.Y.).多種表達(dá)載體/宿主系統(tǒng)可用來(lái)包含和表達(dá)編碼Gpr100GPCR的序列。這些包括但不限于，微生物，例如用重組噬菌體、質(zhì)?；蛘沉NA表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；用酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母；用病毒表達(dá)載體(例如桿狀病毒)感染的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；用病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒(CaMV)或煙草花葉病毒(TMV))，或用細(xì)菌表達(dá)載體(例如，Ti或pBR322質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)。本發(fā)明不受所用宿主細(xì)胞的限制?！罢{(diào)控元件”或“調(diào)控序列”是與宿主的細(xì)胞蛋白相互作用來(lái)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯的載體非翻譯區(qū)(即增強(qiáng)子、啟動(dòng)子、和5′和3′的非翻譯區(qū))。這些元件的長(zhǎng)度和特異性可不同。取決于使用的載體系統(tǒng)和宿主，可利用任何數(shù)量的合適的轉(zhuǎn)錄和翻譯元件，包括組成型和誘導(dǎo)型的啟動(dòng)子。例如當(dāng)在細(xì)菌系統(tǒng)中克隆時(shí)，可利用誘導(dǎo)型的啟動(dòng)子，例如BLUESCRIPT噬菌粒(Stratagene，LaJolla，Calif.)或PSPORT1質(zhì)粒(GIBCO/BRL)等的雜合LacZ啟動(dòng)子。桿狀病毒多角體蛋白啟動(dòng)子可用于昆蟲細(xì)胞中。源自植物細(xì)胞基因組(例如熱休克、RUBISCO和貯藏蛋白基因)或源自植物病毒的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子(例如病毒啟動(dòng)子或前導(dǎo)序列)可克隆到載體中。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)中，來(lái)自哺乳動(dòng)物基因或哺乳動(dòng)物病毒的啟動(dòng)子是優(yōu)選的。如果必須產(chǎn)生含有編碼Gpr100GPCR序列的多個(gè)拷貝的細(xì)胞系，可使用帶合適的選擇性標(biāo)記的基于SV40或EBV的載體。在細(xì)菌系統(tǒng)中，可根據(jù)Gpr100GPCR的預(yù)期用途而選擇許多表達(dá)載體。例如，當(dāng)需要大量的Gpr100GPCR來(lái)誘導(dǎo)抗體時(shí)，可使用指導(dǎo)易被純化的融合蛋白的高水平表達(dá)的載體。所述載體包括但不限于，多功能的大腸桿菌克隆和表達(dá)載體，如BLUESCRIPT(Stratagene)，其中編碼Gpr100GPCR的序列可連接到載體中，與氨基末端的Met和β-半乳糖苷酶的隨后7個(gè)殘基處于閱讀框內(nèi)，從而制備雜合蛋白，pIN載體(VanHeeke，G.andS.M.Schuster(1989)J.Biol.Chem.2645503-5509)等。pGEX載體(Promega，Madison，Wis.)也可用于作為帶有谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)的融合蛋白來(lái)表達(dá)外源多肽。通常，所述融合蛋白是可溶的，并且能夠通過(guò)吸附至谷胱甘肽-瓊脂糖珠，之后在存在游離谷胱甘肽下洗脫，從而容易地從裂解細(xì)胞中純化出來(lái)。所述系統(tǒng)中制備的蛋白可設(shè)計(jì)成包括肝素、凝血酶、或因子X(jué)A蛋白酶切割位點(diǎn)，以使得克隆的目的多肽能夠隨意地從GST部分釋放出來(lái)。在釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中，可使用含有組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的許多載體，例如α因子、醇氧化酶，和PGH。有關(guān)綜述，參見(jiàn)Ausubel(同上)和Grantetal.(1987；MethodsEnzymol.153516-544).在使用植物表達(dá)載體的情況中，編碼Gpr100GPCR的序列的表達(dá)可由許多啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。例如，可單獨(dú)使用病毒啟動(dòng)子，如CaMV的35S和19S啟動(dòng)子，或可與來(lái)自TMV的ω前導(dǎo)序列組合使用(Takamatsu，N.(1987)EMBOJ.6307-311.)?；蛘?，可使用植物啟動(dòng)子，如RUBISCO的小亞基，或熱休克啟動(dòng)子(Coruzzi，G.etal.(1984)EMBOJ.31671-1680；Broglie，R.etal.(1984)Science224838-843；和Winter，J.etal.(1991)ResultsProbl.CellDiffer.1785-105.)。這些構(gòu)建體可通過(guò)直接的DNA轉(zhuǎn)化或病原體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染導(dǎo)入植物細(xì)胞中。所述技術(shù)在通常可得到的綜述中描述(參見(jiàn)，例如，Hobbs，S.orMurry，L.E.inMcGrawHillYearbookofScienceandTechnology(1992)McGrawHill，NewYork，N.Y.；pp.191-196.).昆蟲系統(tǒng)也可用來(lái)表達(dá)Gpr100GPCR。例如，在一種所述系統(tǒng)中，苜蓿銀紋夜蛾(Autographacalifornica)核型多角體病毒(AcNPV)用作載體以在草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)細(xì)胞或粉紋夜蛾(Trichoplusia)幼蟲中表達(dá)外源基因。編碼Gpr100GPCR的序列可克隆入病毒的非必需區(qū)，例如多角體蛋白基因，并且受多角體蛋白啟動(dòng)子的調(diào)控。Gpr100GPCR的成功插入將使得多角體蛋白基因失活，并且產(chǎn)生缺乏衣殼蛋白的重組病毒。之后，該重組病毒可用于感染例如其中可表達(dá)Gpr100GPCR的草地夜蛾細(xì)胞或粉紋夜蛾幼蟲。(Engelhard，E.K.etal.(1994)Proc.Nat.Acad.Sci.913224-3227.)在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中，可使用基于病毒的許多表達(dá)系統(tǒng)。在腺病毒用作表達(dá)載體的情況下，編碼Gpr100GPCR的序列可連接到由晚期啟動(dòng)子和三聯(lián)前導(dǎo)序列組成的腺病毒轉(zhuǎn)錄/翻譯復(fù)合物中。插入病毒基因組的非必需E1或E3區(qū)，可獲得能在受感染的宿主細(xì)胞中表達(dá)Gpr100GPCR的活病毒(Logan，J.andT.Shenk(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.813655-3659.)。而且，轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，如勞斯肉瘤病毒(RSV)增強(qiáng)子，可用于提高在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的表達(dá)。因此，例如Gpr100受體可在人胚腎293(HEK293)細(xì)胞或貼壁的dhffCHO細(xì)胞中表達(dá)。為了使表達(dá)最大化，在插入pCDN或pCDNA3載體之前，通常將全部的5′和3′未翻譯區(qū)(UTR)從受體cDNA中移除。用單獨(dú)的受體cDNA通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞，并在400mg/mlG418下進(jìn)行選擇。選擇3周后，挑出單個(gè)克隆并擴(kuò)展用于進(jìn)一步分析。用載體單獨(dú)轉(zhuǎn)染的HEK293或CHO細(xì)胞作為陰性對(duì)照。為了分離穩(wěn)定表達(dá)單獨(dú)的受體的細(xì)胞系，通常選取大約24個(gè)克隆，并用Northern印跡分析進(jìn)行分析。受體mRNA通?？稍谒治龅腉418-抗性克隆中的大約50％中檢測(cè)到。人類人工染色體(HAC)也可用來(lái)傳遞比能夠在質(zhì)粒中包含和表達(dá)的DNA片段更大的DNA片段。為治療目的，構(gòu)建大約6kb至10Mb的HAC，并通過(guò)常規(guī)傳遞方法(脂質(zhì)體、聚陽(yáng)離子氨基聚合物或載體)傳遞。還可使用人的人工染色體(HAC)，傳遞比可包含并在質(zhì)粒中表達(dá)的DNA片段大的DNA片段。為了治療的目的構(gòu)建約6kb到10Mb的HAC并通過(guò)常規(guī)輸送方法(脂質(zhì)體、聚陽(yáng)離子氨基聚合物或小泡)傳遞。也可用特異的起始信號(hào)來(lái)更高效地翻譯編碼Gpr100GPCR的序列。所述信號(hào)包括ATG起始密碼子和鄰近序列。在編碼Gpr100GPCR的序列及其起始密碼子和上游序列被插入合適的表達(dá)載體時(shí)，可不再需要附加的轉(zhuǎn)錄或翻譯控制信號(hào)。但是，在僅插入編碼序列或其片段的情況下，應(yīng)提供包括ATG起始密碼子的外源翻譯調(diào)控信號(hào)。而且，起始密碼子應(yīng)位于正確的閱讀框中，以確保整個(gè)插入物的翻譯。外源翻譯元件和起始密碼子可以有多種來(lái)源，無(wú)論是天然的還是合成的。通過(guò)包括適于所用的具體細(xì)胞系統(tǒng)的增強(qiáng)子，例如文獻(xiàn)中所描述的，可提高表達(dá)的效率。(Scharf，D.etal.(1994)ResultsProbl.CellDiffer.20125-162.)此外，可根據(jù)調(diào)節(jié)插入序列表達(dá)，或以需要的方式加工所表達(dá)蛋白質(zhì)的能力來(lái)選擇宿主細(xì)胞株。多肽的所述修飾包括但不限于，乙?；?、羧化、糖基化、磷酸化、脂化、以及酰化。對(duì)蛋白質(zhì)的“前原”形式進(jìn)行切割的翻譯后加工也可用于促進(jìn)正確的插入、折疊、和/或功能。具有特定細(xì)胞內(nèi)機(jī)制和翻譯后活性的特有機(jī)制的不同宿主細(xì)胞(例如，CHO、HeLa、MDCK、HEK293和WI38)可從美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC，Bethesda，Md.)獲得，并可加以選擇以確保外源蛋白的正確修飾和加工。對(duì)于重組蛋白的長(zhǎng)期高產(chǎn)量生產(chǎn)，穩(wěn)定的表達(dá)是優(yōu)選的。例如，能夠穩(wěn)定表達(dá)Gpr100GPCR的細(xì)胞系可用含有病毒復(fù)制起點(diǎn)和/或內(nèi)源性表達(dá)元件以及可選擇標(biāo)記基因(在相同或分開的載體上)的表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化。導(dǎo)入載體后，在轉(zhuǎn)移到選擇性培養(yǎng)基之前，可允許細(xì)胞在富集培養(yǎng)基中生長(zhǎng)大約1到2天。選擇性標(biāo)記的目的是賦予對(duì)選擇的抗性，并且其存在允許成功表達(dá)了導(dǎo)入序列的細(xì)胞的生長(zhǎng)和恢復(fù)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的抗性克隆可使用適合該細(xì)胞類型的組織培養(yǎng)技術(shù)來(lái)增殖。任何數(shù)量的選擇系統(tǒng)可用來(lái)回收轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。這些包括但不限于，單純皰疹病毒胸苷激酶基因(Wigler，M.etal.(1977)Cell11223-32)和腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因(Lowy，I.etal.(1980)Cell22817-23)，其可分別用于tk-或apr-細(xì)胞?？勾x物、抗生素、或除草劑抗性也可用作選擇的基礎(chǔ)。例如，dhfr賦予對(duì)甲氨蝶呤的抗性(Wigler，M.etal.(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.773567-70)；npt賦予對(duì)氨基甙類新霉素和G-418的抗性(Colbere-Garapin，F(xiàn).etal(1981)J.Mol.Biol.1501-14)；以及als或pat分別賦予對(duì)氯磺隆(chlorsulfuron)和草銨膦(phosphinotricin)乙酰轉(zhuǎn)移酶的抗性(Murry，同上)。附加的選擇性基因已經(jīng)有描述，例如trpB，其容許細(xì)胞利用吲哚代替色氨酸，或hisD，其容許細(xì)胞利用histinol代替組氨酸(Hartman，S.C.andR.C.Mulligan(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.858047-51.)。最近，可見(jiàn)標(biāo)記的使用已經(jīng)開始流行，這些標(biāo)記例如花色苷(anthocyanin)、β-葡糖苷酸酶及其底物GUS，以及熒光素酶及其底物熒光素。這些標(biāo)記不僅可用于鑒定轉(zhuǎn)化體，還可用來(lái)定量特定載體系統(tǒng)所致(attributeable)的瞬時(shí)或穩(wěn)定蛋白表達(dá)量。(Rhodes，C.A.etal.(1995)MethodsMol.Biol.55121-131.)盡管標(biāo)記基因表達(dá)的存在/缺乏暗示目的基因也存在，但該基因的存在和表達(dá)可能需要證實(shí)。例如，如果編碼Gpr100GPCR的序列插入標(biāo)記基因序列中，含有編碼Gpr100GPCR的序列的轉(zhuǎn)化細(xì)胞可通過(guò)標(biāo)記基因功能的缺乏而鑒定。或者，標(biāo)記基因能夠在單個(gè)啟動(dòng)子的控制下與編碼Gpr100GPCR的序列串連排列。標(biāo)記基因響應(yīng)誘導(dǎo)或選擇的表達(dá)通常也表明了串連基因的表達(dá)。或者，含有編碼Gpr100GPCR的核酸序列并且表達(dá)Gpr100GPCR的宿主細(xì)胞，可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法進(jìn)行鑒定。這些方法包括但不限于，DNA-DNA或DNA-RNA雜交，以及蛋白質(zhì)生物檢測(cè)或免疫檢測(cè)技術(shù)，其包括用來(lái)檢測(cè)和/或定量核酸或蛋白質(zhì)序列的基于膜、溶液、或芯片的技術(shù)。編碼Gpr100GPCR的多核苷酸序列的存在能夠通過(guò)利用探針或片段或編碼Gpr100GPCR的多核苷酸片段的DNA-DNA或DNA-RNA雜交或擴(kuò)增來(lái)檢測(cè)?；诤怂釘U(kuò)增的檢測(cè)涉及使用基于編碼Gpr100GPCR的序列的寡核苷酸或寡聚體來(lái)檢測(cè)含有編碼Gpr100GPCR的DNA或RNA的轉(zhuǎn)化體。利用對(duì)該蛋白質(zhì)特異的多克隆或單克隆抗體來(lái)檢測(cè)和測(cè)量Gpr100GPCR表達(dá)的多種方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。所述技術(shù)的實(shí)例包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、放射免疫測(cè)定(RIA)、和熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)。利用與Gpr100GPCR上的兩個(gè)非干擾表位起反應(yīng)的單克隆抗體進(jìn)行的雙位點(diǎn)、基于單克隆的免疫測(cè)定是優(yōu)選的，但也可使用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法。這些和其他測(cè)定法在本領(lǐng)域中已有詳細(xì)描述，例如Hampton，R.etal(1990；SerologicalMethods，aLaboratoryManual，SectionIV，APSPress，StPaul，Minn.)和Maddox，D.E.etal.(1983；J.Exp.Med.1581211-1216)。多種標(biāo)記物和偶聯(lián)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，并且可用于各種核酸和氨基酸分析。制備標(biāo)記的雜交或PCR探針來(lái)檢測(cè)與編碼Gpr100GPCR的多核苷酸相關(guān)序列的方法包括，寡聚標(biāo)記(oligolabeling)、缺口平移、末端標(biāo)記、或使用標(biāo)記核苷酸的PCR擴(kuò)增?；蛘?，編碼Gpr100GPCR的序列，或其任何片段，可克隆入用于制備mRNA探針的載體。所述載體是本領(lǐng)域已知的，是商業(yè)化提供的，并且通過(guò)加入合適的RNA聚合酶，例如T7、T3、或SP6和標(biāo)記的核苷酸，可用于在體外合成RNA探針。這些方法可用多種商業(yè)化提供的試劑盒來(lái)進(jìn)行，例如由Pharmacia&Upjohn(Kalamazoo，Mich.)，GEHealthcare(UK)和U.S.BiochemicalCorp.(Cleveland，Ohio)提供的試劑盒。方便地用于檢測(cè)的合適的報(bào)告分子或標(biāo)記物包括放射性核素、酶、熒光的、化學(xué)發(fā)光的、或顯色劑，以及底物、輔因子、抑制劑、磁性顆粒等。用編碼Gpr100GPCR的核苷酸序列轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞可在適于蛋白質(zhì)表達(dá)并從細(xì)胞培養(yǎng)物回收的條件下培養(yǎng)。由轉(zhuǎn)化細(xì)胞制備的蛋白質(zhì)可根據(jù)使用的序列和/或載體而位于細(xì)胞膜上、分泌或包含在細(xì)胞內(nèi)。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，含有編碼Gpr100GPCR的多核苷酸的表達(dá)載體可設(shè)計(jì)成包含指導(dǎo)Gpr100GPCR通過(guò)原核或真核的細(xì)胞膜分泌的信號(hào)序列。其他構(gòu)建體可用來(lái)將編碼Gpr100GPCR的序列和編碼利于可溶性蛋白純化的多肽結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列連接。所述促進(jìn)純化的結(jié)構(gòu)域包括但不限于，金屬鰲合肽，如容許在固定的金屬上進(jìn)行純化的組氨酸-色氨酸組件，容許在固定的免疫球蛋白上純化的蛋白質(zhì)A結(jié)構(gòu)域，以及用于FLAGS延伸/親合純化系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)域(ImmunexCorp.，Seattle，Wash.)。在純化結(jié)構(gòu)域和Gpr100GPCR編碼序列之間包括可切除的連接序列，例如對(duì)因子X(jué)A或腸激酶(Invitrogen，SanDiego，Calif.)特異的序列，可以促進(jìn)純化。一種所述表達(dá)載體可使含有Gpr100GPCR和編碼在硫氧還蛋白或腸激酶切割位點(diǎn)前的6個(gè)組氨酸殘基的核酸的融合蛋白表達(dá)。組氨酸殘基利于在固定的金屬離子親合層析上的純化(IMIAC；Porath，J.etal.(1992)Prot.Exp.Purif.3263-281中描述)，而腸激酶切割位點(diǎn)提供了從融合蛋白純化Gpr100GPCR的手段。對(duì)含融合蛋白的載體的論述見(jiàn)Kroll，D.J.etal.(1993；DNACellBiol.12441-453).Gpr100GPCR的片段不僅可通過(guò)重組制備，而且可通過(guò)利用固相技術(shù)(MerrifieldJ.(1963)J.Am.Chem.Soc.852149-2154.)的直接肽合成來(lái)制備。蛋白質(zhì)合成可通過(guò)人工技術(shù)或自動(dòng)進(jìn)行。自動(dòng)合成可通過(guò)，例如使用AppliedBiosystems431A肽合成儀(PerkinElmer)來(lái)實(shí)現(xiàn)。Gpr100GPCR的多種片段可分別合成，之后組合產(chǎn)生全長(zhǎng)的分子。生物傳感器Gpr100多肽、核酸、探針、抗體、表達(dá)載體和配體可用作(并可用于生產(chǎn))生物傳感器。按照Aizawa(1988)，AnaLChem.Symp.17683，生物傳感器被定義為，用于分子識(shí)別的受體的獨(dú)特組合，例如，具有固定抗體或受體如Gpr100G蛋白偶聯(lián)受體的選擇性層，和用于傳遞測(cè)量值的傳導(dǎo)器。一組這樣的生物傳感器將檢測(cè)由于該受體與周圍介質(zhì)的相互作用而在表面層的光學(xué)特性上引起的變化。在所述技術(shù)中，可特別提及橢圓偏振術(shù)和表面等離子共振術(shù)。結(jié)合有Gpr100的生物傳感器可用于檢測(cè)Gpr100配體的存在或水平，例如核苷酸，例如嘌呤或嘌呤類似物，或這些配體的類似物。所述生物傳感器的構(gòu)建是本領(lǐng)域公知的。因此表達(dá)Gpr100受體的細(xì)胞系可借助于受體促進(jìn)的[3H]磷酸肌醇或其他第二信使的形成，用作檢測(cè)配體如ATP的報(bào)告系統(tǒng)(Wattetal.，1998，JBiolChemMay29；273(22)14053-8)。受體-配體生物傳感器也在Hoffinanetal.，2000，ProcNatlAcadSciUSAOct10；97(21)11215-20中有描述。包含Gpr100的光學(xué)和其他生物傳感器也可用來(lái)檢測(cè)與G蛋白和其他蛋白質(zhì)相互作用的水平或存在，如例如Figleretal，1997，BiochefsaistfyDec23；36(51)16288-99和Sarrioetal.，2000，MolCellBiol2000Jul；20(14)5164-74)所述。生物傳感器的傳感器單元在例如US5,492,840中描述。篩選分析Gpr100GPCR多肽，包括同源物、變體、和衍生物，無(wú)論是天然的還是重組的，都可應(yīng)用于結(jié)合受體和活化(激動(dòng)劑)或抑制(抑制劑)Gpr100活化的化合物的篩選方法中。因此，Gpr100多肽也可用于評(píng)估小分子底物和配體在例如，細(xì)胞、不含細(xì)胞的制品、化學(xué)文庫(kù)和天然產(chǎn)物混合物中的結(jié)合。這些底物和配體可以是天然的底物和配體，或可以是結(jié)構(gòu)性或功能性的模擬物。參見(jiàn)Coliganetal.，CurrentProtocolsinImmunology1(2)Chapter5(1991).Gpr100GPCR多肽決定很多生物功能，包括很多病理。因此，希望發(fā)現(xiàn)一方面刺激Gpr100GPCR且另一方面抑制Gpr100GPCR功能的化合物和藥物。通常，激動(dòng)劑和拮抗劑用于如Gpr100相關(guān)疾病的病情的治療和預(yù)防目的。對(duì)可能與Gpr100GPCR蛋白相互作用的候選化合物的合理設(shè)計(jì)可基于多肽的分子形狀的結(jié)構(gòu)研究。一種確定哪些位點(diǎn)與特定的其他蛋白質(zhì)相互作用的方法為物理結(jié)構(gòu)測(cè)定，例如，X-射線晶體學(xué)或二維NMR技術(shù)。這會(huì)提供對(duì)于哪些氨基酸殘基形成分子接觸區(qū)域的指導(dǎo)。關(guān)于蛋白結(jié)構(gòu)測(cè)定的詳細(xì)描述，參見(jiàn)例如BlundellandJohnson(1976)ProteinCrystallography，AcademicPress，NewYork。對(duì)合理設(shè)計(jì)的另一種選擇利用篩選方法，所述方法涉及合適細(xì)胞的通常制備，所述細(xì)胞在其表面上表達(dá)Gpr100受體多肽。所述細(xì)胞包括來(lái)自動(dòng)物、酵母、果蠅或大腸桿菌的細(xì)胞。之后將表達(dá)受體的細(xì)胞(或含有所表達(dá)受體的細(xì)胞膜)與被試化合物接觸以觀察結(jié)合、或功能性反應(yīng)的刺激或抑制。例如，可用Gpr100mRNA或多肽注射爪蟾卵母細(xì)胞，并且利用電壓鉗測(cè)量通過(guò)接觸被試化合物而誘導(dǎo)的電流，見(jiàn)其他部分更詳細(xì)的描述。此外，微生理測(cè)量(microphysiometric)分析可用于分析Gpr100受體活性。多種第二信使系統(tǒng)的活化引起少量酸從細(xì)胞擠出。形成的酸主要是增強(qiáng)的代謝活動(dòng)的結(jié)果，所述代謝活動(dòng)是為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程提供能量所需的。細(xì)胞周圍介質(zhì)pH的改變非常小但可通過(guò)例如CYTOSENSOR微生理計(jì)(microphysiometer)(MolecularDevicesLtd.，MenloPark，Calif.)檢測(cè)。CYTOSENSOR因此能檢測(cè)與利用能量的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑偶聯(lián)的受體如Gpr100G蛋白偶聯(lián)受體的活化。除用Gpr100受體分別檢測(cè)各個(gè)候選化合物外，可方便地產(chǎn)生和篩選候選配體的文庫(kù)或庫(kù)(bank)。因此，例如，裝配了超過(guò)200個(gè)推定受體配體的庫(kù)用于篩選。該庫(kù)包含遞質(zhì)、激素和已知通過(guò)人七個(gè)跨膜(7TM)受體起作用的趨化因子；天然存在的化合物，其可為推定為其哺乳動(dòng)物對(duì)應(yīng)物尚未被鑒定的人7TM受體、非哺乳動(dòng)物、生物活性肽的激動(dòng)劑；以及非天然存在、但用未知的天然配體活化7TM受體的化合物。如其他部分更詳細(xì)描述的功能性分析(即，鈣、cAMP、微生理計(jì)、卵母細(xì)胞電生理學(xué)等，見(jiàn)其他部分)以及結(jié)合分析，該庫(kù)用于篩選已知配體的受體。但是，仍然存在大量的哺乳動(dòng)物受體，其至今沒(méi)有同源的活化配體(激動(dòng)劑)或鈍化配體(拮抗劑)。因此這些受體的活化配體可能沒(méi)有包括在迄今為止已鑒定的配體庫(kù)中。因此，也可針對(duì)組織提取物對(duì)Gpr100受體進(jìn)行功能性篩選(使用鈣、cAMP、微生理計(jì)、卵母細(xì)胞電生理法等，功能性篩選)來(lái)鑒定天然的配體。產(chǎn)生陽(yáng)性功能性反應(yīng)的提取物可繼續(xù)被亞分級(jí)，其級(jí)分如本文所述進(jìn)行分析，直到分離和鑒定出活化配體。在HEK293細(xì)胞中表達(dá)的7TM受體已顯示與PLC的活化和鈣遷移和/或cAMP刺激或抑制在功能上偶聯(lián)。因此，一種篩選技術(shù)包括在測(cè)量由受體活化引起的胞外pH或細(xì)胞內(nèi)鈣變化的系統(tǒng)中利用表達(dá)Gpr100GPCR受體的細(xì)胞(例如，轉(zhuǎn)染的爪蟾卵母細(xì)胞、CHO或HEK293細(xì)胞)。在該技術(shù)中，化合物可與表達(dá)Gpr100受體多肽的細(xì)胞接觸。之后測(cè)量第二信使應(yīng)答，例如，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、pH變化、或鈣水平的改變，以確定潛在的化合物是否活化或抑制該受體。在所述實(shí)驗(yàn)中，觀察受體轉(zhuǎn)染或載體對(duì)照細(xì)胞中的HEK293細(xì)胞的基礎(chǔ)鈣水平處于正常的100nM到200nM范圍之內(nèi)。表達(dá)Gpr100GPCR或重組Gpr100GPCR的HEK293細(xì)胞用fura2上樣，并且在一天中，對(duì)超過(guò)150個(gè)所選的配體或組織/細(xì)胞提取物評(píng)估激動(dòng)劑誘導(dǎo)的鈣遷移。類似地，利用標(biāo)準(zhǔn)的cAMP定量測(cè)定法評(píng)估對(duì)表達(dá)Gpr100GPCR或重組Gpr100GPCR的HEK293細(xì)胞cAMP產(chǎn)生的刺激或抑制。在載體對(duì)照細(xì)胞中檢測(cè)呈現(xiàn)鈣瞬時(shí)或cAMP波動(dòng)的激動(dòng)劑，以確定該應(yīng)答是否為表達(dá)受體的轉(zhuǎn)染細(xì)胞所獨(dú)有的。另一種方法涉及通過(guò)確定Gpr100受體介導(dǎo)的cAMP和/或腺苷酸環(huán)化酶累積的抑制或刺激來(lái)篩選受體抑制劑。所述方法包括用Gpr100受體轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞以在細(xì)胞表面上表達(dá)受體。之后該細(xì)胞在存在受體時(shí)接觸潛在的拮抗劑。隨后測(cè)量cAMP累積的量。如果潛在的拮抗劑結(jié)合受體，并且因此抑制受體結(jié)合、受體介導(dǎo)的cAMP或腺苷酸環(huán)化酶水平，則活性降低或提高。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該篩選使用細(xì)胞內(nèi)鈣濃度變化的檢測(cè)來(lái)篩選Gpr100的激動(dòng)劑和拮抗劑。具體地，我們公開了一種方法，其中Gpr100的拮抗劑降低、減弱或阻斷配體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)、優(yōu)選合適轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中的鈣釋放。優(yōu)選，存在Gpr100的拮抗劑時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鈣水平的提高降低了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或以上。優(yōu)選，存在Gpr100的拮抗劑時(shí)，細(xì)胞內(nèi)鈣釋放降低了1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、10mM、15mM、25mM、35mM、45mM、60mM、70mM或以上。我們進(jìn)一步公開了一種方法，其中Gpr100的激動(dòng)劑提高合適轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度。優(yōu)選，存在Gpr100的激動(dòng)劑時(shí)，電導(dǎo)提高了10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或以上。優(yōu)選，存在Gpr100的激動(dòng)劑時(shí)，電導(dǎo)提高了1mM、2mM、3mM、4mM、5mM、10mM、15mM、25mM、35mM、45mM、60mM、70mM或以上。用于檢測(cè)Gpr100受體激動(dòng)劑或拮抗劑的另一種方法為基于美國(guó)專利No.5,482,835中所述技術(shù)的酵母，在此引入作為參考。當(dāng)候選化合物是蛋白質(zhì)，尤其是抗體或肽時(shí)，可利用噬菌體展示技術(shù)篩選候選化合物的文庫(kù)。噬菌體展示是利用重組噬菌體的分子篩選方案。該技術(shù)涉及用編碼來(lái)自候選化合物文庫(kù)的化合物的基因轉(zhuǎn)化噬菌體，以使得每個(gè)噬菌體或噬菌粒表達(dá)特定的候選化合物。經(jīng)轉(zhuǎn)化的噬菌體(優(yōu)選連接至固相支持物上)表達(dá)合適的候選化合物，并將其展示在噬菌體衣殼上。能夠結(jié)合Gpr100多肽或肽的特定候選化合物通過(guò)基于親合相互作用的選擇策略而富集。隨后表征成功的候選試劑。噬菌體展示比標(biāo)準(zhǔn)的親合配體篩選技術(shù)更具有優(yōu)勢(shì)。噬菌體表面以三維構(gòu)型展示候選試劑，更緊密地反映了其天然存在的構(gòu)象。這提供了用于篩選目的更特異并具有更高親和力的結(jié)合。篩選化合物文庫(kù)的另一種方法利用用表達(dá)化合物文庫(kù)的重組DNA分子穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的真核或原核宿主細(xì)胞。所述細(xì)胞，不論是存活還是固定的形式，能夠用于標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)合-配對(duì)物分析。也參見(jiàn)Parceetal.(1989)Science246243-247；和Owickietal.(1990)Proc.Nat′1Acad.Sci.USA87；4007-4011，其描述了檢測(cè)細(xì)胞反應(yīng)的靈敏方法。競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定特別有用，其中表達(dá)化合物文庫(kù)的細(xì)胞與已知結(jié)合Gpr100多肽的標(biāo)記抗體，例如125I-抗體，和被試樣品相接觸或溫育，所述被試樣品例如候選化合物，所述候選化合物與結(jié)合組合物的結(jié)合親和力被測(cè)量。隨后分離多肽的結(jié)合和游離的標(biāo)記結(jié)合配偶體以評(píng)估結(jié)合程度。被試樣品的結(jié)合量與結(jié)合多肽的標(biāo)記抗體的量成反比。多種技術(shù)中的任何一種都能夠用于將結(jié)合的與游離的結(jié)合配偶體分離以評(píng)估結(jié)合的程度。該分離步驟通常包括以下的操作步驟，例如附著于濾器，然后洗滌，附著于塑料，之后洗滌，或離心細(xì)胞膜。還有另一種方法是利用可溶的、未純化或可溶的純化多肽或肽，所述多肽或肽例如從轉(zhuǎn)化的真核或原核宿主細(xì)胞提取的。這允許進(jìn)行優(yōu)點(diǎn)在于提高的特異性、自動(dòng)化能力、和藥物檢測(cè)高通量的“分子”結(jié)合分析。候選化合物篩選的另一種技術(shù)涉及提供高通量篩選新化合物的方法，所述新化合物例如對(duì)Gpr100多肽具有合適的結(jié)合親合力，并且在1984年9月13日公開的國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朩O84/03564(CommonwealthSerumLabs.)中詳細(xì)描述。首先，大量不同的小肽被試化合物在固相基質(zhì)，例如，塑料針(pin)或一些其他適宜的表面上合成；參見(jiàn)Fodoretal.(1991)。隨后，全部的針與溶解的Gpr100多肽反應(yīng)并洗滌。下一個(gè)步驟包括檢測(cè)結(jié)合的多肽。如此鑒定出與多肽特異性相互作用的化合物。配體結(jié)合分析提供了確定受體藥理學(xué)的直接方法并且適用于高通量形式。純化的受體配體可放射性標(biāo)記為高比放射性(50-2000Ci/mmol)而用于結(jié)合研究。隨后確定放射性標(biāo)記的過(guò)程不會(huì)減弱配體對(duì)其受體的活性。優(yōu)化緩沖液、離子、pH和其他調(diào)節(jié)劑如核苷酸的分析條件，以建立膜和整個(gè)細(xì)胞的受體來(lái)源的可用信噪比。對(duì)于這些分析，特異性受體結(jié)合定義為總的相關(guān)放射性減去在存在過(guò)量未標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)性配體時(shí)測(cè)定的放射性。可能的話，使用一個(gè)以上的競(jìng)爭(zhēng)性配體來(lái)限定殘留的非特異性結(jié)合。該分析可簡(jiǎn)單地測(cè)試候選化合物的結(jié)合，其中與攜帶受體的細(xì)胞的附著借助于與該候選化合物直接或間接相關(guān)的標(biāo)記物或在涉及與標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)劑競(jìng)爭(zhēng)的分析中被檢測(cè)。進(jìn)一步，利用對(duì)在其表面攜帶受體的細(xì)胞適合的檢測(cè)系統(tǒng)，這些分析可測(cè)試該候選化合物是否導(dǎo)致由受體活化所產(chǎn)生的信號(hào)。通常在存在已知激動(dòng)劑時(shí)測(cè)定活化的抑制劑，并且觀察存在候選化合物時(shí)激動(dòng)劑對(duì)活化的作用。此外，該分析可僅包括下列步驟混合候選化合物與包含Gpr100GPCR多肽的溶液以形成混合物，測(cè)量混合物中Gpr100GPCR的活性，并且將混合物的Gpr100GPCR活性與標(biāo)準(zhǔn)物比較。Gpr100GPCRcDNA、蛋白質(zhì)和該蛋白質(zhì)的抗體也可用于配置檢測(cè)加入的化合物對(duì)細(xì)胞中Gpr100GPCRmRNA和蛋白質(zhì)的產(chǎn)生的作用的分析。例如，利用單克隆和多克隆抗體，通過(guò)本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法可構(gòu)建測(cè)量Gpr100GPCR蛋白的分泌的或細(xì)胞相關(guān)水平的ELISA，并且這可用于發(fā)現(xiàn)可抑制或增強(qiáng)從適當(dāng)操作的細(xì)胞或組織制備Gpr100GPCR的試劑(也分別稱為拮抗劑或激動(dòng)劑)。用于進(jìn)行篩選分析的標(biāo)準(zhǔn)方法是本領(lǐng)域熟知的。潛在Gpr100GPCR拮抗劑的實(shí)例包括抗體或，有時(shí)候包括核苷酸及其類似物，包括嘌呤和嘌呤類似物、寡核苷酸或蛋白質(zhì)，其與Gpr100GPCR的配體緊密相關(guān)，例如配體片段，或結(jié)合受體但不激發(fā)應(yīng)答、使得受體的活性被妨礙的小分子。本文因此也提供能夠特異性結(jié)合Gpr100多肽和/或肽的化合物。術(shù)語(yǔ)“化合物”指(天然存在的或合成的)化學(xué)化合物，如生物大分子(例如，核酸、蛋白質(zhì)、非肽、或有機(jī)分子)，或從例如細(xì)菌、植物、真菌、或動(dòng)物(尤其是哺乳動(dòng)物)細(xì)胞或組織的生物材料制備的提取物，以及無(wú)機(jī)元素或分子。優(yōu)選該化合物為抗體。為進(jìn)行這種篩選必需的材料可包裝于篩選試劑盒中。所述篩選試劑盒可用于鑒定Gpr100GPCR多肽的激動(dòng)劑、拮抗劑、配體、受體、底物、酶等，或降低或提高Gpr100GPCR多肽產(chǎn)生的化合物。該篩選試劑盒包括(a)Gpr100GPCR多肽；(b)表達(dá)Gpr100GPCR多肽的重組細(xì)胞；(c)表達(dá)Gpr100GPCR多肽的細(xì)胞膜；或(d)抗Gpr100GPCR多肽的抗體。該篩選試劑盒可選擇性地包括使用說(shuō)明書。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物本文進(jìn)一步包括與正常的表達(dá)水平相比能以提高或降低的水平表達(dá)天然或重組的Gpr100GPCR、或同源物、變體或衍生物的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。還包括作為一種或多種喪失功能的突變，包括Gpr100基因缺失的結(jié)果而不表達(dá)功能性Gpr100受體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(“Gpr100敲除的”)。優(yōu)選，所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為非人哺乳動(dòng)物，如豬、綿羊或嚙齒類動(dòng)物。最優(yōu)選該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為小鼠或大鼠。所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可用于篩選方法中以鑒定Gpr100GPCR的激動(dòng)劑和/或拮抗劑，以及檢測(cè)其作為體內(nèi)疾病治療的效力。例如，經(jīng)改造在Gpr100GPCR產(chǎn)生上有缺陷的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可用于測(cè)定法中以鑒定Gpr100GPCR的激動(dòng)劑和/或拮抗劑。一種測(cè)定法設(shè)計(jì)為評(píng)估潛在的藥物(候選配體或化合物)以確定其是否在缺乏Gpr100GPCR受體下產(chǎn)生生理反應(yīng)。這可通過(guò)將藥物施用給上述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，并且隨后測(cè)定所述動(dòng)物的特定反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)。雖然可在該測(cè)定法中任何生理參數(shù)，優(yōu)選反應(yīng)包括下列的一種或多種疾病抗性的變化；炎癥反應(yīng)的改變；腫瘤易感性的改變血壓的變化；新血管形成；飲食行為的變化；體重的變化；骨密度的變化；體溫的變化；胰島素分泌；促性腺激素分泌；鼻和支氣管分泌；血管收縮；記憶喪失；焦慮；反射減退或反射亢進(jìn)；疼痛或應(yīng)激反應(yīng)。源自Gpr100敲除動(dòng)物的組織可用于受體結(jié)合測(cè)定以確定潛在的藥物(候選配體或化合物)是否結(jié)合Gpr100受體。所述測(cè)定可通過(guò)從改造成為Gpr100受體產(chǎn)生缺陷的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得第一受體制品，和從已知結(jié)合任何鑒定的Gpr100配體或化合物的來(lái)源獲得第二受體制品而進(jìn)行。通常，除獲得的來(lái)源外，第一和第二受體制品在各個(gè)方面都相似。例如，如果來(lái)自轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的腦組織(如上文和下文描述的)用于測(cè)定，來(lái)自正常(野生型)動(dòng)物的可比較的腦組織被用作第二受體制品的來(lái)源。單獨(dú)地和在候選配體或化合物存在下，每一受體制品用已知結(jié)合Gpr100受體的配體溫育。優(yōu)選，候選配體或化合物以幾種不同的濃度進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于第一和第二受體制品，測(cè)定用測(cè)試化合物替代已知配體的結(jié)合程度。源自轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的組織可直接用于測(cè)定，或者可加工該組織以分離其本身用于測(cè)定的膜或膜蛋白。優(yōu)選的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為小鼠?？墒褂眠m于結(jié)合測(cè)定的任何方法標(biāo)記配體。此包括而不限于，放射性的、酶促的、熒光的或化學(xué)發(fā)光標(biāo)記(以及上文進(jìn)一步詳細(xì)描述的其它標(biāo)記技術(shù))。此外，可通過(guò)將候選化合物等給予表達(dá)功能性Gpr100的野生型動(dòng)物和鑒定其呈現(xiàn)與降低或消除Gpr100受體功能表達(dá)有關(guān)的任何表型特征的動(dòng)物，而鑒定Gpr100GPCR受體的拮抗劑。下文中進(jìn)一步詳細(xì)描述了產(chǎn)生非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的詳細(xì)方法。轉(zhuǎn)基因的基因構(gòu)建體可導(dǎo)入動(dòng)物的生殖系以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因的哺乳動(dòng)物。例如，一個(gè)或幾個(gè)拷貝的構(gòu)建體可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)整合進(jìn)入哺乳動(dòng)物胚胎的基因組。在例證性的實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因的非人類動(dòng)物通過(guò)將轉(zhuǎn)基因?qū)敕侨祟悇?dòng)物的生殖系而產(chǎn)生。在不同發(fā)育階段的胚胎靶細(xì)胞可用于導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因。根據(jù)胚胎靶細(xì)胞的發(fā)育階段使用不同的方法。針對(duì)總體上健康、良好胚胎產(chǎn)率、胚胎中可見(jiàn)良好前核、和良好的生殖適應(yīng)性，選擇任何動(dòng)物的特定種系。另外，單倍型是重要的因素。轉(zhuǎn)基因?qū)肱咛タ赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如，顯微注射、電穿孔、或脂質(zhì)轉(zhuǎn)染。例如，可通過(guò)將構(gòu)建體顯微注射到哺乳動(dòng)物受精卵的前核中而將Gpr100受體轉(zhuǎn)基因?qū)氩溉閯?dòng)物，從而導(dǎo)致一個(gè)或多個(gè)拷貝的構(gòu)建體保持在發(fā)育中的哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中。將轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體導(dǎo)入受精卵后，該卵可在體外培養(yǎng)不同長(zhǎng)度的時(shí)間，或再植入代孕宿主，或兩者皆進(jìn)行。也可進(jìn)行體外培養(yǎng)至成熟。通常方法是根據(jù)物種，在體外培養(yǎng)胚胎大約1-7天，然后將其再植入代孕宿主?？赏ㄟ^(guò)Southern印跡分析組織片段來(lái)測(cè)試轉(zhuǎn)基因操作的胚胎后代中該構(gòu)建體的存在。如果一個(gè)或多個(gè)拷貝的外源克隆構(gòu)建體保持穩(wěn)定地整合到這種轉(zhuǎn)基因胚胎的基因組中，則有可能建立攜帶用轉(zhuǎn)基因方法加入的構(gòu)建體的持久的轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物系。轉(zhuǎn)基因改變的哺乳動(dòng)物的窩崽可在出生后分析測(cè)定該構(gòu)建體向后代基因組中的摻入。優(yōu)選，這個(gè)測(cè)定通過(guò)使對(duì)應(yīng)于編碼所需重組蛋白質(zhì)產(chǎn)品的DNA序列或其節(jié)段的探針雜交到來(lái)自后代的染色體物質(zhì)上來(lái)實(shí)現(xiàn)。被發(fā)現(xiàn)在其基因組中包含至少一個(gè)拷貝的構(gòu)建體的那些哺乳動(dòng)物的后代逐漸生長(zhǎng)至成熟。為了本文的目的，合子基本上是二倍體細(xì)胞的形成，所述二倍體細(xì)胞能夠發(fā)育成為完整生物體。通常，合子由包含核的卵組成，所述核天然或人工地通過(guò)來(lái)自一或多個(gè)配子的兩個(gè)單倍體的核的融合而形成。因此，配子的核必須是天然相容的，即產(chǎn)生能夠經(jīng)歷分化和發(fā)育成為有功能生物體的有存活力的合子。通常，整倍體的合子是優(yōu)選的。如果獲得非整倍體的合子，則就任一配子所來(lái)源的生物體的整倍體數(shù)目而論，染色體的數(shù)目的變化將不會(huì)超過(guò)1個(gè)。除相似的生物學(xué)因素之外，物理因素也控制可加入合子核或加入形成合子核的一部分的遺傳物質(zhì)的外源遺傳物質(zhì)的量(例如，體積)。如果不除去遺傳物質(zhì)，則可加入的外源遺傳物質(zhì)的量受到不被物理破壞也被吸收的量的限制。通常，插入的外源遺傳物質(zhì)的體積不會(huì)超過(guò)大約10皮升。加入的物理效應(yīng)不必太大以物理破壞該合子的存活力。DNA序列的數(shù)目和種類的生物學(xué)限制將根據(jù)特定的合子和外源遺傳物質(zhì)的功能而變化，并且對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的，因?yàn)樗玫降暮献拥倪z傳物質(zhì)，包括外源遺傳物質(zhì)，必須在生物學(xué)上能夠起始并維持該合子分化發(fā)育成為有功能的生物體。加入受精卵的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體的拷貝數(shù)目取決于加入的外源遺傳物質(zhì)的總量，并且將是能夠使遺傳轉(zhuǎn)化發(fā)生的數(shù)量。理論上只有一個(gè)拷貝是必要的；然而，通常使用許多拷貝，例如1,000-20,000個(gè)拷貝的轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體，以確保一個(gè)拷貝是有功能的。每一插入的外源DNA序列具有一個(gè)以上功能拷貝來(lái)增強(qiáng)外源DNA序列的表型表達(dá)經(jīng)常是有利的。可利用容許外源遺傳物質(zhì)加入核遺傳物質(zhì)的任何技術(shù)，只要其對(duì)細(xì)胞、核膜或其他已存在的細(xì)胞或遺傳結(jié)構(gòu)不是有害的。外源的遺傳物質(zhì)優(yōu)選通過(guò)顯微注射插入核遺傳物質(zhì)。細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的顯微注射是本領(lǐng)域已知和常用的。再植入術(shù)利用標(biāo)準(zhǔn)的方法完成。通常，麻醉代孕宿主，并將胚胎插入輸卵管。植入特定宿主的胚胎的數(shù)目將根據(jù)物種而變化，但通常與該物種天然產(chǎn)生后代的數(shù)目具有可比性?？赏ㄟ^(guò)任何合適的方法篩選代孕宿主的轉(zhuǎn)基因后代中該轉(zhuǎn)基因的存在和/或表達(dá)。篩選經(jīng)常通過(guò)Southern印跡或Northern印跡分析，利用與轉(zhuǎn)基因的至少部分互補(bǔ)的探針來(lái)完成。利用抗由轉(zhuǎn)基因編碼的蛋白質(zhì)的抗體的Western印跡分析可用作篩選該轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物存在的可替代的或附加的方法。通常地，DNA從尾部組織制備并通過(guò)Southern分析或PCR來(lái)分析轉(zhuǎn)基因?？蛇x，利用Southern分析或PCR來(lái)測(cè)試被認(rèn)為以最高水平表達(dá)該轉(zhuǎn)基因的組織或細(xì)胞中該轉(zhuǎn)基因的存在和表達(dá)，盡管任何組織或細(xì)胞類型可用于此分析。用于評(píng)估轉(zhuǎn)基因存在的任選或附加的方法包括但不限于，合適的生物化學(xué)測(cè)定，例如酶和/或免疫學(xué)測(cè)定、特定標(biāo)記物或酶活性的組織染色、流式細(xì)胞分析等。血液的分析也可用于檢測(cè)血液中轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的存在，以及用于評(píng)估該轉(zhuǎn)基因?qū)Ω鞣N類型的血細(xì)胞及其他血液成分的水平的影響。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的后代可通過(guò)使轉(zhuǎn)基因動(dòng)物與合適的配偶交配，或通過(guò)從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物獲得的卵子和/或精子的體外受精來(lái)獲得。在要與配偶進(jìn)行交配時(shí)，該配偶可能或可能不是轉(zhuǎn)基因的和/或敲除的；當(dāng)其是轉(zhuǎn)基因的時(shí)候，可包含相同或不同的轉(zhuǎn)基因，或兩者皆有。可選，配偶可以是親本品系。當(dāng)使用體外受精時(shí)，受精的胚胎可被植入代孕宿主或體外培養(yǎng)，或兩者皆有。使用任何方法，可使用如上所述的方法，或其他適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)評(píng)估后代中轉(zhuǎn)基因的存在。根據(jù)這里描述的方法產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物將包括外源的遺傳物質(zhì)。如上所述，在某些實(shí)施方案中，外源的遺傳物質(zhì)是會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生Gpr100GPCR受體的DNA序列。此外，在所述實(shí)施方案中，該序列將附著于轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件，例如優(yōu)選容許該轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物在特定的細(xì)胞類型中表達(dá)的啟動(dòng)子。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染也可用于將轉(zhuǎn)基因?qū)敕侨祟悇?dòng)物。發(fā)育中的非人類胚胎可體外培養(yǎng)至胚泡階段。在這個(gè)時(shí)候，卵裂球可以是逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的靶(Jaenich，R.(1976)PNAS731260-1264)。對(duì)卵裂球的有效感染可通過(guò)酶促處理以除去透明帶而獲得(ManipulatingtheMouseEmbryo，Hoganeds.(ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，1986)。用于導(dǎo)入轉(zhuǎn)基因的病毒載體系統(tǒng)通常是攜帶轉(zhuǎn)基因的復(fù)制缺陷的逆轉(zhuǎn)錄病毒(Jahneretal.(1985)PNAS826927-6931；VanderPuttenetal.(1985)PNAS826148-6152)。轉(zhuǎn)染通過(guò)在產(chǎn)生病毒的細(xì)胞的單層細(xì)胞上培養(yǎng)卵裂球而容易且有效地實(shí)現(xiàn)(VanderPutten，supra；Stewartetal.(1987)EMBOJ.6383-388)?；蛘?，感染可在稍后的階段進(jìn)行。病毒或產(chǎn)生病毒的細(xì)胞可被注射進(jìn)入囊胚腔(Jahneretal.(1982)Nature298623-628)。大部分建立者(founder)將是轉(zhuǎn)基因的嵌合體，因?yàn)閾饺胫辉谛纬赊D(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物的細(xì)胞亞組(subset)中發(fā)生。此外，該建立者可在基因組的不同位置包含轉(zhuǎn)基因的若干逆轉(zhuǎn)錄病毒插入物，所述插入物通常于后代中分離。另外，也可能將轉(zhuǎn)基因通過(guò)妊娠中期(midgestation)胚胎的子宮內(nèi)逆轉(zhuǎn)錄感染而導(dǎo)入生殖系(Jahneretal.(1982)同上)。用于轉(zhuǎn)基因?qū)氲牡谌惏屑?xì)胞是胚胎的干細(xì)胞(ES)。ES細(xì)胞從體外培養(yǎng)的植入前胚胎獲得并與胚胎融合(Evansetal.(1981)Nature292154-156；Bradleyetal.(1984)Nature309255-258；Gossleretal.(1986)PNAS839065-9069；andRobertsonetal.(1986)Nature322445-448)。轉(zhuǎn)基因可通過(guò)DNA轉(zhuǎn)染或通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)導(dǎo)而有效地導(dǎo)入ES細(xì)胞。這樣轉(zhuǎn)化的ES細(xì)胞之后可與來(lái)自非人類動(dòng)物的胚泡結(jié)合。之后該ES細(xì)胞定位于胚胎并對(duì)所得嵌合動(dòng)物的生殖系作出貢獻(xiàn)(contribute)。綜述參見(jiàn)Jaenisch，R.(1988)Science2401468-1474。還提供非人類的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的特點(diǎn)在于具有改變的Gpr100基因，優(yōu)選如上所述，作為Gpr100受體功能的模型。對(duì)該基因的改變包括缺失或其他喪失功能的突變，導(dǎo)入具有靶向或隨機(jī)突變的核苷酸序列的外源基因，導(dǎo)入來(lái)自另一物種的外源基因，或其組合。該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物對(duì)于該變化可以是純合的或雜合的。由此衍生的動(dòng)物和細(xì)胞對(duì)篩選可調(diào)節(jié)Gpr100受體功能的生物活性劑是有用的。該篩選法特別用于測(cè)定肥胖癥，尤其是食欲抑制、脂類代謝的潛在療法的特異性和作用。該動(dòng)物用作研究Gpr100受體在正常的腦、心臟、脾和肝功能中的作用的模型。另一個(gè)方面為具有功能破壞的內(nèi)源Gpr100基因，但也在其基因組中攜帶，并且表達(dá)編碼異源Gpr100蛋白(即，來(lái)自另一個(gè)物種的Gpr100)的轉(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物。優(yōu)選，該動(dòng)物為小鼠，異源的Gpr100為人Gpr100。可用已用人Gpr100重建的動(dòng)物、或源自所述動(dòng)物的細(xì)胞系來(lái)鑒定體內(nèi)和體外抑制人Gpr100的試劑。例如，可在被試試劑存在和缺乏時(shí)，將通過(guò)人Gpr100誘導(dǎo)信號(hào)傳導(dǎo)的刺激施用于動(dòng)物或細(xì)胞系，并且可測(cè)量動(dòng)物或細(xì)胞系中的反應(yīng)。體內(nèi)或體外抑制人Gpr100的試劑可根據(jù)與缺乏該試劑時(shí)的反應(yīng)相比，存在該試劑時(shí)反應(yīng)降低而鑒定。本公開還提供Gpr100GPCR缺陷的轉(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物(“Gpr100GPCR敲除動(dòng)物”)。所述動(dòng)物為表達(dá)降低的或無(wú)Gpr100GPCR活性的動(dòng)物，優(yōu)選為內(nèi)源Gpr100GPCR基因組序列被破壞或缺失的結(jié)果。優(yōu)選，所述動(dòng)物不表達(dá)GPCR活性。更優(yōu)選，該動(dòng)物不表達(dá)如SEQIDNO3或SEQIDNO5所示Gpr100GPCR的活性。Gpr100GPCR敲除動(dòng)物可通過(guò)本領(lǐng)域已知的各種方法制備，如下文更詳細(xì)所述的。本公開的內(nèi)容也包括用于在宿主細(xì)胞中功能性破壞Gpr100基因的核酸構(gòu)建體。該核酸構(gòu)建體包括a)非同源的置換部分；b)位于非同源置換部分上游的第一同源區(qū)，該第一同源區(qū)具有與第一Gpr100基因序列基本同一的核苷酸序列，和c)位于非同源置換部分下游的第二同源區(qū)，該第二同源區(qū)具有與第二Gpr100基因序列基本同一的核苷酸序列，該第二Gpr100基因序列在天然存在的內(nèi)源Gpr100基因中位于第一Gpr100基因序列下游的位置。另外，當(dāng)該核酸分子導(dǎo)入宿主細(xì)胞時(shí)，第一和第二同源區(qū)具有在核酸構(gòu)建體和宿主細(xì)胞中的內(nèi)源Gpr100基因之間進(jìn)行同源重組的足夠長(zhǎng)度。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，非同源置換部分包括表達(dá)報(bào)告子，優(yōu)選包括lacZ和陽(yáng)性選擇表達(dá)盒，優(yōu)選包括與一個(gè)或多個(gè)調(diào)控元件有效連接的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因。優(yōu)選，所述第一和第二Gpr100基因序列源自SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4、或其同源物、變體或衍生物。本公開另一個(gè)方面包括已經(jīng)摻入核酸構(gòu)建體的重組載體。又一個(gè)方面包括已導(dǎo)入核酸構(gòu)建體，從而在該核酸構(gòu)建體和宿主細(xì)胞的內(nèi)源Gpr100基因之間容許同源重組，導(dǎo)致內(nèi)源Gpr100基因的功能破壞的宿主細(xì)胞。該宿主細(xì)胞可以是正常表達(dá)來(lái)自肝、腦、脾或心臟、或多能細(xì)胞，如小鼠胚胎干細(xì)胞的Gpr100的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。已導(dǎo)入核酸構(gòu)建體并與內(nèi)源Gpr100基因同源重組的胚胎干細(xì)胞的進(jìn)一步發(fā)育，產(chǎn)生了具有從胚胎干細(xì)胞傳代并因此在其基因組中攜帶Gpr100基因破壞的細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因非人類動(dòng)物。因此可選擇在其生殖系中攜帶Gpr100基因破壞的動(dòng)物，并且使其繁殖以制備在全部體細(xì)胞和生殖細(xì)胞中具有Gpr100基因破壞的動(dòng)物。所述小鼠因此可繁殖至Gpr100基因破壞具有純合性。體外系統(tǒng)可用來(lái)鑒定能結(jié)合Gpr100受體基因產(chǎn)物的化合物。所述化合物可包括但不限于，由D-和/或L-BRBR構(gòu)型氨基酸組成的肽(例如以隨機(jī)肽文庫(kù)形式)，磷肽(例如以隨機(jī)或部分簡(jiǎn)并的、直接的磷肽文庫(kù)形式)，抗體，和小的有機(jī)或無(wú)機(jī)分子。鑒定的化合物例如可用于調(diào)節(jié)Gpr100受體基因蛋白，優(yōu)選突變體Gpr100受體基因蛋白的活性；發(fā)揮Gpr100受體基因蛋白的生物學(xué)功能；或篩選破壞正常Gpr100受體基因相互作用或本身破壞所述相互作用的化合物。顯示結(jié)合特定的Gpr100受體基因產(chǎn)物的化合物可進(jìn)一步檢測(cè)其引起來(lái)自Gpr100受體基因蛋白的生化反應(yīng)的能力。表達(dá)產(chǎn)物的激動(dòng)劑、拮抗劑和/或抑制劑可利用本領(lǐng)域熟知的測(cè)定法鑒定?？贵w為了本文的目的，除非特別說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“抗體”包括但不限于，多克隆、單克隆、嵌合、單鏈、Fab片段和由Fab表達(dá)文庫(kù)制備的片段。這些片段包括保持對(duì)靶物質(zhì)的結(jié)合活性的完整抗體的片段、Fv、F(ab′)和F(ab′)2片段，以及單鏈抗體(scFv)、融合蛋白及其他包括該抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的合成蛋白?？贵w及其片段可以是人源化抗體，例如如EP-A-239400所述。此外，也可使用具有完全人可變區(qū)(或其片段)的抗體，如美國(guó)專利No.5,545,807和6,075,181所述。中和抗體，即抑制所述物質(zhì)氨基酸序列的生物活性的抗體，尤其優(yōu)選用于診斷和治療。抗體可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，如通過(guò)免疫接種或使用噬菌體展示文庫(kù)來(lái)制備?？赏ㄟ^(guò)已知技術(shù)用多肽或肽來(lái)開發(fā)抗體。所述抗體能特異性結(jié)合Gpr100GPCR蛋白或同源物、片段等。如果需要多克隆的抗體，所選擇的哺乳動(dòng)物(例如，小鼠、兔、山羊、馬等)可用包含Gpr100多肽或肽的免疫原性組合物免疫接種。根據(jù)宿主物種，各種佐劑可用來(lái)提高免疫反應(yīng)。所述佐劑包括但不限于，弗氏的、礦物鹽凝膠例如氫氧化鋁、和表面活性物質(zhì)例如溶血卵磷脂、聚醚多羥基化合物(pluronicpolyol)，聚陰離子，肽，油乳液，匙孔血藍(lán)蛋白(keyholelimpethemocyanin)和二硝基酚。BCG(卡介苗)和短小棒狀桿菌(Corynebacteriumparvum)為可能有用的人類佐劑，如果將所述物質(zhì)的純化氨基酸序列施用到缺乏免疫力的個(gè)體以刺激系統(tǒng)防御時(shí)，可使用所述佐劑。收集來(lái)自免疫接種動(dòng)物的血清并根據(jù)已知的方法處理。如果包含針對(duì)可獲自Gpr100多肽的表位的多克隆抗體的血清包含其他抗原的抗體，則該多克隆抗體可通過(guò)免疫親合層析來(lái)純化。用于制備和加工多克隆抗血清的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。為了制備所述抗體，本公開還提供半抗原化成其它氨基酸序列以用作動(dòng)物或人的免疫原的Gpr100的氨基酸序列或其片段。獲自Gpr100多肽或肽表位的單克隆抗體也可由本領(lǐng)域技術(shù)人員輕易制備。通過(guò)雜交瘤來(lái)制備單克隆抗體的常用方法是眾所周知的。產(chǎn)生抗體的無(wú)限增殖細(xì)胞系可通過(guò)細(xì)胞融合建立，也通過(guò)其他方法，例如用致癌DNA直接轉(zhuǎn)化B淋巴細(xì)胞，或用Epstein-Barr病毒轉(zhuǎn)染來(lái)建立?？珊Y選針對(duì)orbit表位制備的單克隆抗體系列的各種性質(zhì)；即同種型和表位親合力。單克隆抗體可使用任何可通過(guò)培養(yǎng)物中的連續(xù)細(xì)胞系制備抗體分子的技術(shù)來(lái)制備。這些包括但不限于，最初由Koehler和Milstein(1975Nature256495-497)描述的雜交瘤技術(shù)、三體瘤(trioma)技術(shù)、人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kosboretal(1983)ImmunolToday472；Coteetal(1983)ProcNatlAcadSci802026-2030)和EBV-雜交瘤技術(shù)(Coleetal.，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy，pp.77-96，AlanR.Liss，Inc.，1985)。此外，可使用為制備“嵌合抗體”發(fā)展的技術(shù)，如將小鼠抗體基因與人抗體基因進(jìn)行拼接以獲得具有適當(dāng)抗原特異性和生物學(xué)活性的分子的技術(shù)(Morrisonetal(1984)ProcNatlAcadSci816851-6855；Neubergeretal(1984)Nature312604-608；Takedaetal(1985)Nature314452-454)?？蛇x，為制備單鏈抗體(美國(guó)專利No.4,946,779)所描述的技術(shù)可適于制備物質(zhì)特異性的單鏈抗體。針對(duì)可獲自Gpr100多肽或肽的表位的抗體(單克隆和多克隆的)對(duì)于診斷是特別有用的，而中和抗體對(duì)被動(dòng)免疫療法有用。單克隆抗體，尤其可用于激發(fā)抗獨(dú)特型抗體?？躬?dú)特型抗體是免疫球蛋白，其攜帶物質(zhì)和/或試劑的“內(nèi)部圖像”，針對(duì)所述物質(zhì)和/或試劑需要產(chǎn)生保護(hù)反應(yīng)。用于激發(fā)抗獨(dú)特型抗體的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的。這些抗獨(dú)特型抗體也可用于治療。抗體也可通過(guò)在淋巴細(xì)胞群中誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生或通過(guò)篩選重組免疫球蛋白文庫(kù)或高度特異的結(jié)合試劑的組來(lái)制備，如Orlandietal(1989，ProcNatlAcadSci863833-3837)，和WinterGandMilsteinC(1991；Nature349293-299)所述。也可制備包含多肽或肽的特異結(jié)合部位的抗體片段。例如，這種片段包括但不限于，能通過(guò)胃蛋白酶消化抗體分子而制備的F(ab’)2片段，和能通過(guò)還原F(ab’)2片段的二硫鍵而制備的Fab片段?；蛘?，可構(gòu)建Fab表達(dá)文庫(kù)來(lái)容許快速和容易地鑒定具有所需要特異性的單克隆Fab片段(HuseWDetal(1989)Science2561275-1281)。用于生產(chǎn)單鏈抗體(美國(guó)專利No.4,946,778)的技術(shù)還可被改造以制備Gpr100多肽的單鏈抗體。轉(zhuǎn)基因的小鼠、或其他生物體包括其他哺乳動(dòng)物也可用來(lái)表達(dá)人源化的抗體。上述抗體可用來(lái)分離或鑒定表達(dá)該多肽的克隆或通過(guò)親合層析純化該多肽。Gpr100GPCR多肽的抗體也可用來(lái)治療Gpr100相關(guān)疾病。診斷分析本公開的內(nèi)容也涉及利用Gpr100GPCR多核苷酸和多肽(以及其同源物、變體和衍生物)作為診斷劑用于診斷或用于遺傳分析。與Gpr100GPCR核酸(包括同源物、變體和衍生物)互補(bǔ)或能夠與其雜交的核酸，以及Gpr100多肽的抗體也可用于所述分析。與機(jī)能障礙相關(guān)的Gpr100GPCR基因突變形式的檢測(cè)，將提供能夠加入或限定對(duì)由于Gpr100GPCR低表達(dá)、過(guò)表達(dá)或表達(dá)改變所引起的疾病或疾病易感性診斷的診斷工具。攜帶Gpr100GPCR基因(包括調(diào)控序列)突變的個(gè)體可通過(guò)多種技術(shù)在DNA水平予以檢測(cè)。例如，可從患者分離DNA并確定Gpr100的DNA多態(tài)性模式。將鑒定的模式與已知患有與Gpr100的過(guò)-、低-或異常表達(dá)相關(guān)的疾病的患者對(duì)照作比較。然后可鑒定表達(dá)與Gpr100相關(guān)疾病有關(guān)的遺傳多態(tài)性模式的患者。Gpr100GPCR基因的遺傳分析可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)進(jìn)行。例如，可通過(guò)RFLP或SNP分析等，測(cè)定Gpr100等位基因的DNA序列來(lái)篩選個(gè)體?？赏ㄟ^(guò)檢測(cè)Gpr100的基因序列或調(diào)控其表達(dá)的任何序列中DNA多態(tài)性的存在，來(lái)鑒定患者具有與Gpr100過(guò)-、低-或異常表達(dá)相關(guān)的疾病的遺傳易感性。因此可治療如此鑒定的患者以預(yù)防Gpr100相關(guān)疾病的發(fā)生，或在Gpr100相關(guān)疾病的早期更積極地阻止該疾病的進(jìn)一步發(fā)生或發(fā)展。本發(fā)明進(jìn)一步公開了用于鑒定患者與Gpr100相關(guān)疾病有關(guān)的遺傳多態(tài)性模式的試劑盒。該試劑盒包括DNA取樣手段和測(cè)定遺傳多態(tài)性模式的手段，然后將其與對(duì)照樣品相比較以測(cè)定患者對(duì)Gpr100相關(guān)疾病的易感性。還提供用于診斷Gpr100相關(guān)疾病、包含Gpr100多肽和/或針對(duì)所述多肽(或其片段)的抗體的試劑盒。用于診斷的核酸可從受試者的細(xì)胞，例如從血液、尿、唾液、組織活檢或尸檢材料獲得。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該DNA從扎患者的手指并用吸水紙收集的血液的血細(xì)胞獲得。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，血液將在AmpliCard.TM.(UniversityofSheffield，DepartmentofMedicineandPharmacology，RoyalHallamshireHospital，Sheffield，EnglandS102JF)上收集。DNA可直接用于檢測(cè)或可在分析前利用PCR或其他擴(kuò)增技術(shù)來(lái)酶促擴(kuò)增?？芍苽浒邢蚋信d趣基因內(nèi)特異多態(tài)性DNA區(qū)域的寡核苷酸DNA引物，以使得在PCR反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)靶序列的擴(kuò)增。RNA或cDNA也可以相似的方式用作模板。然后擴(kuò)增自模板DNA的DNA序列可利用限制酶分析，以測(cè)定存在于擴(kuò)增序列中的遺傳多態(tài)性，由此提供該患者的遺傳多態(tài)性模式。限制片段長(zhǎng)度可通過(guò)凝膠分析鑒定?？蛇x或聯(lián)合，可使用例如SNP(單核苷酸多態(tài)性)分析的技術(shù)。缺失和插入可通過(guò)擴(kuò)增產(chǎn)物相對(duì)于正?；蛐偷拇笮∽兓鴻z測(cè)。點(diǎn)突變可通過(guò)將擴(kuò)增的DNA與標(biāo)記的Gpr100GPCR核苷酸序列雜交而鑒定。完全匹配的序列可通過(guò)RNase消化或解鏈溫度差異而不同于錯(cuò)配的雙鏈體。DNA序列差異也可通過(guò)DNA片段在凝膠中的電泳遷移率變化、有或沒(méi)有變性劑、或通過(guò)直接的DNA測(cè)序而檢測(cè)。參見(jiàn)例如，Myersetal，Science(1985)2301242。在特定位置的序列變化也可通過(guò)核酸酶保護(hù)測(cè)定，例如RNAse和S1保護(hù)或化學(xué)切割法來(lái)顯示。參見(jiàn)Cottonetal.，ProcNatlAcadSciUSA(1985)854397-4401。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可構(gòu)建包含Gpr100GPCR核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探針陣列來(lái)進(jìn)行例如，遺傳突變的有效篩選。陣列技術(shù)方法是已知的，具有廣泛的適用性，并且可用于針對(duì)分子遺傳學(xué)，包括基因表達(dá)、遺傳連鎖和遺傳變異中的多種問(wèn)題。(參見(jiàn)例如M.Cheeetal.，Science，Vol274，pp610-613(1996)).單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)可用于檢測(cè)突變體和野生型核酸之間電泳遷移率的差異(Oritaetal.(1989)ProcNatl.Acad.SciUSA862766，也參見(jiàn)Cotton(1993)MutatRes285125-144；andHayashi(1992)GenetAnalTechAppl973-79)。樣品的單鏈DNA片段和對(duì)照Gpr100核酸可被變性并使其復(fù)性。單鏈核酸的二級(jí)結(jié)構(gòu)根據(jù)序列而變化，所得到的電泳遷移率變化可檢測(cè)甚至單個(gè)堿基的變化。DNA片段可被標(biāo)記或用標(biāo)記探針檢測(cè)。分析的靈敏度可通過(guò)使用RNA(而不是DNA)來(lái)提高，其中二級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)序列的變化更靈敏。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，目標(biāo)方法使用異源雙鏈分析根據(jù)電泳遷移率的變化而分離雙鏈的異源雙鏈分子(Keenetal.(1991)TrendsGenet75)。診斷分析提供了通過(guò)所述方法檢測(cè)Gpr100GPCR基因的突變來(lái)診斷或測(cè)定對(duì)病癥如Gpr100相關(guān)疾病易感性的方法。Gpr100GPCR多肽和核酸的存在可在樣品中檢測(cè)到。因此，如上列出的感染和疾病可通過(guò)如下方法來(lái)診斷，該方法包括在源自受試者的樣品中確定Gpr100GPCR多肽或Gpr100GPCRmRNA水平的異常下降或上升。該樣品可包含細(xì)胞或組織樣品，其來(lái)自患有或疑似患有與提高的、降低的或其他異常的Gpr100GPCR表達(dá)(包括表達(dá)水平或模式在空間或時(shí)間上的改變)相關(guān)的疾病的生物體。作為診斷疾病的方法，患有或疑似患有所述疾病的生物體中Gpr100表達(dá)的水平或模式可有效地與正常生物體中表達(dá)的水平或模式進(jìn)行比較。因此通常，我們描述了檢測(cè)樣品中包含Gpr100GPCR核酸的核酸存在的方法，該方法是通過(guò)將樣品接觸對(duì)所述核酸特異的至少一種核酸探針，并且監(jiān)測(cè)所述樣品中該核酸的存在。例如，該核酸探針可特異性結(jié)合Gpr100GPCR核酸或其部分，并且檢測(cè)兩者之間的結(jié)合，也可檢測(cè)該復(fù)合物自身的存在。此外，描述了檢測(cè)Gpr100GPCR多肽存在的方法，該方法通過(guò)將細(xì)胞樣品接觸能夠結(jié)合該多肽的抗體，并且監(jiān)測(cè)所述樣品中該多肽的存在。這可通過(guò)監(jiān)測(cè)在抗體和多肽之間形成的復(fù)合物的存在，或監(jiān)測(cè)多肽和抗體之間的結(jié)合而便利地實(shí)現(xiàn)。檢測(cè)兩個(gè)實(shí)體之間結(jié)合的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括FRET(熒光共振能量轉(zhuǎn)移)，表面胞質(zhì)團(tuán)共振等。表達(dá)的降低或提高可利用本領(lǐng)域公知用于定量多核苷酸的任何方法，如PCR、RT-PCR、RNAse保護(hù)、Northern印跡及其他雜交方法在RNA水平測(cè)量。可用于測(cè)定在源自宿主的樣品中的蛋白質(zhì)，如Gpr100GPCR水平的分析技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。所述測(cè)定法包括放射免疫測(cè)定、競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定、Western印跡分析和ELISA測(cè)定。本文涉及用于疾病或疾病易感性(包括感染)的診斷試劑盒，所述疾病例如肥胖癥、食欲抑制、代謝失調(diào)、食欲抑制。該診斷試劑盒包含Gpr100GPCR多核苷酸或其片段；互補(bǔ)的核苷酸序列；Gpr100GPCR多肽或其片段、或Gpr100GPCR多肽的抗體。染色體分析這里描述的核苷酸序列也對(duì)染色體鑒定很有價(jià)值。該序列特異地靶向單條人染色體上的特定位置并且能與其雜交。如上所述，人Gpr100GPCR發(fā)現(xiàn)定位于人染色體1q22。將相關(guān)序列定位于染色體上是使那些序列與疾病相關(guān)基因相關(guān)聯(lián)的重要的第一步。一旦序列已定位于精確的染色體位置，該序列在染色體上的物理位置就與遺傳圖譜數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)了。所述數(shù)據(jù)例如在V.McKusick，MendelianheritanceinMan(通過(guò)JohnsHopkinsUniversityWelchMedicalLibrary在線獲得)中查找。隨后通過(guò)連鎖分析(物理相鄰基因的共遺傳)確定已定位于相同染色體區(qū)域的基因和疾病之間的關(guān)系。也可測(cè)定感染的和未感染的個(gè)體之間cDNA或基因組序列的差異。如果在一些或所有感染的個(gè)體，而不是在任何正常的個(gè)體中觀察到突變，則該突變可能是疾病的致病劑。預(yù)防和治療方法本文提供治療與Gpr100GPCR活性過(guò)量和不足量相關(guān)的異常病情的方法。如果Gpr100GPCR的活性過(guò)量，可利用幾種方法。一種方法包括給受試者有效量的如上所述的抑制劑化合物(拮抗劑)和藥物學(xué)上可接受載體以通過(guò)阻斷配體與Gpr100GPCR的結(jié)合，或通過(guò)抑制第二信號(hào)，由此減輕異常狀況而抑制活化。另一種方法中，可施用仍然能與內(nèi)源Gpr100GPCR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合配體的可溶形式的Gpr100GPCR多肽。所述競(jìng)爭(zhēng)劑的典型實(shí)施方案包含Gpr100GPCR多肽的片段。還有一種方法中，該編碼內(nèi)源Gpr100GPCR的基因的表達(dá)可用表達(dá)阻斷技術(shù)來(lái)抑制。已知所述技術(shù)包括以內(nèi)部產(chǎn)生或分開施用的方式使用反義序列。參見(jiàn)例如，O′Connor，JNeurochem(1991)56560inOligodeoxvnucleotidesasAntisenseInhibitorsofGeneExpression，CRCPress，BocaRaton，F(xiàn)la.(1988)?；蛘?，可提供與基因形成三鏈螺旋的寡核苷酸。參見(jiàn)例如，Leeetal.，NucleicAcidsRes(1979)63073；Cooneyetal.，Science(1988)241456；Dervanetal.，Science(1991)2511360。這些寡聚體可自身施用或相關(guān)寡聚物可在體內(nèi)表達(dá)。為了治療與Gpr100GPCR低表達(dá)及其活性相關(guān)的異常病情，也可使用幾種方法。一種方法包括對(duì)受試者施用治療有效量的與藥物學(xué)上可接受載體聯(lián)用的活化Gpr100GPCR的化合物，即如上所述的激動(dòng)劑，由此減輕該異常狀況?；蛘?，基因治療可用于影響Gpr100GPCR通過(guò)受試者中的相關(guān)細(xì)胞的內(nèi)源生產(chǎn)。如上所討論的，例如可改造Gpr100多核苷酸而在復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中表達(dá)。隨后可分離改逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)構(gòu)建體并且導(dǎo)入用包含編碼Gpr100多肽的RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染的包裝細(xì)胞，使得該包裝細(xì)胞現(xiàn)在能產(chǎn)生包含感興趣的基因的感染性病毒顆粒?？蓪⑦@些生產(chǎn)細(xì)胞施用于受試者用于體內(nèi)改造細(xì)胞并在體內(nèi)表達(dá)多肽?；蛑委煹木C述參見(jiàn)Chapter20，GeneTherapyandotherMolecularGenetic-basedTherapeuticApproaches，(和其中引用的參考文獻(xiàn))inHumanMolecularGenetics，TStrachanandAPRead，BIOSScientificPublishersLtd(1996)。制劑和給藥肽，例如可溶形式的Gpr100GPCR多肽，和激動(dòng)劑和拮抗劑肽或小分子，可與合適的藥物載體聯(lián)合配制。所述制劑包含治療有效量的多肽或化合物，和藥學(xué)可接受載體或賦形劑。所述載體包括但不限于，鹽水、緩沖鹽水、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其組合。制劑應(yīng)適合給藥的方式，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。我們進(jìn)一步描述了包括充滿上述組合物的一或多種成分的一或多個(gè)容器的藥物包裝和試劑盒。多肽及其他化合物可單獨(dú)使用或與其他化合物，如治療化合物聯(lián)用。全身給藥藥物組合物的優(yōu)選形式包括注射，通常通過(guò)靜脈內(nèi)注射。也可使用其他注射途徑，例如皮下、肌內(nèi)、或腹膜內(nèi)。用于全身施用的替代方式包括利用滲透劑，如膽鹽或梭霉孢酸或其他去污劑的跨粘膜和經(jīng)皮施用。另外，如果適當(dāng)配制為腸溶或包囊化的制劑，口服也可以。這些化合物也可經(jīng)局部(topical)和/或局部化(localize)，以藥膏(salve)，糊劑(paste)，凝膠等形式施用。所需劑量范圍取決于所選的肽，施用途徑，制劑性質(zhì)，以及受試者病情的性質(zhì)以及主治醫(yī)師的判斷。適宜的劑量為0.1-100μg/kg受試者。考慮到可獲得的化合物種類和不同施用途徑的不同效率，預(yù)期所需劑量可有較大的變化。例如預(yù)期口服給藥需要的劑量高于靜脈內(nèi)注射。如本領(lǐng)域熟知的，可利用用于優(yōu)化的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗(yàn)常規(guī)調(diào)節(jié)這些劑量水平的差異。用于治療的多肽還可以經(jīng)常以稱為如上所述的“基因治療”的治療形式而在受試者中內(nèi)源產(chǎn)生。因此例如，來(lái)自受試者的細(xì)胞可用多核苷酸，例如DNA或RNA進(jìn)行改造，以及例如利用逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體而先體外后體內(nèi)編碼多肽。隨后該細(xì)胞導(dǎo)入受試者中。藥物組合物本文還提供藥物組合物，包括給予治療有效量的Gpr100多肽、多核苷酸、肽、載體或抗體以及可選的藥學(xué)可接受載體、稀釋劑或賦形劑(包括其組合)。藥物組合物可以在人類醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)中用于人或動(dòng)物，其通常包含任何一或多種藥學(xué)可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。用于治療用途的可接受載體或稀釋劑是藥學(xué)領(lǐng)域公知的，在例如Remington′sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCo.(A.R.Gennaroedit.1985)中描述。藥物載體、賦形劑或稀釋劑的選擇可考慮意欲施用的途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐來(lái)選擇。該藥物組合物可包含作為載體、賦形劑或稀釋劑、或除載體、賦形劑或稀釋劑之外的任何合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、包被劑(coatingagent)、增溶劑?？稍谒幬锝M合物中提供防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至調(diào)味劑。防腐劑的實(shí)例包括苯甲酸鈉、山梨酸和對(duì)羥苯甲酸的酯。也可使用抗氧化劑和懸浮劑。根據(jù)不同的投遞系統(tǒng)可能有不同的組合物/制劑需求。舉例來(lái)說(shuō)，該藥物組合物可配制為利用微型泵(mini-pump)或通過(guò)粘膜途徑投遞，例如作為噴鼻劑或吸入氣霧劑或可吞咽的溶液，或腸胃外投遞，其中該組合物配制為可注射的形式，通過(guò)例如靜脈內(nèi)的、肌內(nèi)的或皮下的途徑投遞?；蛘?，該制劑可設(shè)計(jì)成通過(guò)這兩種途徑投遞。當(dāng)該試劑通過(guò)胃腸粘膜經(jīng)粘膜投遞時(shí)，其應(yīng)能在通過(guò)胃腸道期間保持穩(wěn)定；例如，其應(yīng)能抵抗蛋白水解的降解作用，在酸性pH穩(wěn)定，以及抵抗膽汁的去污劑作用。適當(dāng)時(shí)，該藥物組合物可通過(guò)如下方式施用經(jīng)吸入，以栓劑或陰道栓劑(pessary)的形式，以洗液、溶液、乳膏、油膏或細(xì)粉(dustingpowder)的形式局部施用，通過(guò)利用貼皮劑(skinpatch)，以含有賦形劑諸如淀粉或乳糖的片劑形式口服，或在膠囊或卵形囊(ovule)中單獨(dú)或與賦形劑一起，或以含有調(diào)味或著色劑的的酏劑、溶液或混懸液的形式，或經(jīng)胃腸外諸如，例如經(jīng)靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)或皮下注射。對(duì)于腸胃外給藥，該組合物最好用于無(wú)菌水溶液的形式，其可包含其他的物質(zhì)，例如足夠的鹽或單糖以使得該溶液與血液等滲。對(duì)于頰部或舌下的給藥，該組合物可以用常規(guī)方式配制的片劑或錠劑的形式施用。疫苗另一個(gè)實(shí)施方案涉及在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的方法，其包括用足夠產(chǎn)生抗體和/或T細(xì)胞免疫應(yīng)答的Gpr100GPCR多肽或其片段接種哺乳動(dòng)物，以保護(hù)所述動(dòng)物免于肥胖癥、食欲抑制、代謝失調(diào)及其他。另一實(shí)施方案涉及在哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包括借助于指導(dǎo)Gpr100GPCR多核苷酸體內(nèi)表達(dá)的載體來(lái)投遞Gpr100GPCR多肽，從而誘導(dǎo)免疫應(yīng)答以產(chǎn)生保護(hù)所述動(dòng)物免于疾病的抗體。進(jìn)一步的實(shí)施方案涉及免疫/疫苗制劑(組合物)，其當(dāng)導(dǎo)入哺乳動(dòng)物宿主時(shí)，在該哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)針對(duì)Gpr100GPCR多肽的免疫應(yīng)答，其中該組合物包括Gpr100GPCR多肽或Gpr100GPCR基因。該疫苗制劑可進(jìn)一步包括合適的載體。由于Gpr100GPCR多肽可在胃中分解，其優(yōu)選通過(guò)腸胃外(包括皮下的，肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、皮內(nèi)等注射)施用。適于腸胃外施用的制劑包括水性和無(wú)水的無(wú)菌注射液，其可包含抗-氧化劑、緩沖液、抑菌藥和使得該制劑與接受者的血液等滲的溶質(zhì)；以及可包括懸浮劑或增稠劑的水性和無(wú)水的無(wú)菌懸浮液。該制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可保存在凍干的條件下，只需要在使用前立即加入無(wú)菌的液體載體。該疫苗制劑也可包括用于增強(qiáng)該制劑免疫原性的佐劑系統(tǒng)，例如水包油系統(tǒng)及本領(lǐng)域已知的其他系統(tǒng)。劑量將取決于疫苗的比活性，并且可通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)輕易地測(cè)定。疫苗可從一種或多種Gpr100多肽或肽制備。包含免疫原性多肽或肽作為活性成分的疫苗的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。通常，所述疫苗制備為可注射的液體溶液或懸浮液；也可制備適于在注射前溶解或懸浮在液體中的固體形式。該制劑也可被乳化，或者蛋白質(zhì)包裹在脂質(zhì)體中?；钚缘拿庖咴猿煞纸?jīng)常與藥學(xué)可接受的以及與該活性成分相容的賦形劑混合。合適的賦形劑為例如，水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等及其組合。此外，如果需要，該疫苗可包含較少量的輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑、和/或增強(qiáng)疫苗有效性的佐劑。可能有效的佐劑的實(shí)例包括但不限于氫氧化鋁、N-乙?；?胞壁?；?L-蘇氨?；?D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰-去甲基-胞壁?；?L-丙氨?；?D-異谷氨酰胺(CGP11637，稱為去甲基-MDP)、N-乙?；邗；?L-丙氨酰基-D-異谷氨?；?L-丙氨酸-2-(1’-2’-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-羥基磷酰氧基)-乙胺(CGP19835A，稱為MTP-PE)，和RIBI，其在2％角鯊烯/Tween80乳液中包含提取自細(xì)菌的三種成分，單磷酰脂質(zhì)A、海藻糖二霉菌酸酯和細(xì)胞壁骨骼(MPL+TDM+CWS)。佐劑及其他試劑另外的實(shí)例包括氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁鉀(明礬)、硫酸鈹、硅石、高嶺土、碳、油包水乳化液、水包油乳化劑、胞壁酰二肽、細(xì)菌內(nèi)毒素、脂質(zhì)X、短小棒狀桿菌(粉刺丙酸桿菌(Propionobacteriumacnes))、百日咳桿菌、多核糖核苷酸、海藻酸鈉、羊毛脂、溶血卵磷脂、維生素A、皂苷、脂質(zhì)體、左旋咪唑、DEAE-右旋糖酐、嵌段共聚物或其他的合成佐劑。所述佐劑可從各種來(lái)源商業(yè)獲得，例如，MerckAdjuvant65(MerckandCompany，Inc.，Rahway，N.J.)或弗氏不完全佐劑和完全佐劑(DifcoLaboratories，Detroit，Michigan)。通常，使用例如Amphigen(水包油)、Alhydrogel(氫氧化鋁)、或Amphigen和Alhydrogel的混合物的佐劑。只有氫氧化鋁批準(zhǔn)用于人類。免疫原和佐劑的比例可以在廣泛的范圍內(nèi)變化，只要兩者都以有效量存在。例如，氫氧化鋁可占疫苗混合物大約0.5％的量(以Al2O3為基礎(chǔ))。方便地，配制的疫苗包含終濃度為0.2至200μg/ml的范圍，優(yōu)選5至50μg/ml，最優(yōu)選15μg/ml的免疫原。配制后，該疫苗可摻入隨后密封的無(wú)菌容器中，并且于低溫，例如4℃保存，或可凍干。凍干法容許以穩(wěn)定的形式長(zhǎng)期儲(chǔ)存。該疫苗按慣例腸胃外給予，通過(guò)注射，例如皮下或肌內(nèi)注射。適于其他給藥方式的附加制劑包括栓劑，以及在一些情況下為口服制劑。對(duì)于栓劑，可包括常規(guī)的粘合劑和載體，例如，聚亞烷基二醇或三酸甘油酯；所述栓劑可從含有0.5％至10％，優(yōu)選1％至2％范圍的活性成分的混合物形成。口服制劑包括通常使用的賦形劑，例如藥物級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些組合物采取溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊劑、持續(xù)釋放的制劑或粉劑的形式，且包含10％至95％，優(yōu)選25％至70％的活性成分。當(dāng)疫苗組合物是冷凍干燥的，該冷凍干燥的材料可在給藥前重構(gòu)，例如為懸浮液。重構(gòu)優(yōu)選在緩沖液中實(shí)現(xiàn)。用于患者口服的膠囊劑、片劑和丸劑可有腸溶包衣，包括例如Eudragit“S”、Eudragit“L”、醋酸纖維素酯、苯二甲酸醋酸纖維素酯或羥丙甲基纖維素酯。Gpr100多肽可配制成為中性或鹽形式的疫苗。藥學(xué)可接受的鹽包括酸加成的鹽(與肽的游離氨基形成)和其與無(wú)機(jī)酸例如鹽酸或磷酸、或有機(jī)酸例如乙酸、草酸、酒石酸和馬來(lái)酸形成的鹽。與游離羧基形成的鹽也可來(lái)源于無(wú)機(jī)堿，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、或氫氧化鐵，以及有機(jī)堿。例如異丙胺、三甲胺、2-乙胺基乙醇、組氨酸和普魯卡因。施用通常，醫(yī)師會(huì)確定最適于個(gè)體受試者的實(shí)際劑量，其將隨著具體患者的年齡、體重和反應(yīng)而變化。下列劑量是平均情況的示例。當(dāng)然存在其中較高或較低的劑量范圍都是有益的個(gè)別情況。該藥物和疫苗組合物可通過(guò)直接注射而施用。該組合物可配制用于腸胃外的、粘膜的、肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、皮下的、眼內(nèi)的或經(jīng)皮的施用。通常，每種蛋白質(zhì)都可以0.01至30mg/kg體重，優(yōu)選0.1至10mg/kg，更優(yōu)選0.1至1mg/kg體重的劑量施用。術(shù)語(yǔ)“施用”包括通過(guò)病毒或非病毒的技術(shù)投遞。病毒的投遞機(jī)制包括但不限于腺病毒載體、腺伴隨病毒(AAV)載體、皰疹病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病毒載體、和桿狀病毒載體。非病毒的投遞機(jī)制包括脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑(lipofectin)、陽(yáng)離子表面的兩性分子(CFAs)及其組合。所述投遞機(jī)制所用的途徑包括但不限于粘膜的、鼻的、口腔的、腸胃外的、胃腸的、局部的或舌下的途徑。術(shù)語(yǔ)“施用”包括但不限于通過(guò)粘膜的途徑投遞，例如作為噴鼻劑或氣溶膠以便吸入或作為可吞咽的溶液；腸胃外的途徑，其中通過(guò)可注射的形式(例如靜脈內(nèi)的、肌內(nèi)的或皮下的途徑)投遞。術(shù)語(yǔ)“共同施用”是指例如每種Gpr100多肽和附加實(shí)體，如佐劑的給藥部位和時(shí)間使得可以實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫系統(tǒng)的必要調(diào)節(jié)。因此，盡管多肽和佐劑可在相同時(shí)間及時(shí)地并在相同部位施用，以與佐劑不同的時(shí)間和不同的部位施用多肽可能是有利的。該多肽和佐劑甚至可以在相同的投遞載體中投遞，并且該多肽和抗原可偶聯(lián)和/或未偶聯(lián)和/或在遺傳上偶聯(lián)和/或未偶聯(lián)。所述多肽、多核苷酸、肽、核苷酸、所述抗體并可選佐劑，可以單劑量或以多劑量分別施用或共同施用至宿主受試者。疫苗組合物和藥物組合物可通過(guò)許多不同的途徑施用，例如注射(其包括腸胃外的、皮下的和肌肉注射)鼻內(nèi)的、粘膜的、口腔的、陰道內(nèi)的、尿道的或眼部的給予。該疫苗和藥物組合物按慣例腸胃外施用，通過(guò)注射，例如皮下或肌內(nèi)注射。適于其他給藥方式的附加制劑包括栓劑，以及在一些情況下為口服制劑。對(duì)于栓劑，可包括常規(guī)的粘合劑和載體，例如，聚亞烷基二醇或三酸甘油酯；所述栓劑可從含有0.5％至10％，優(yōu)選1％至2％范圍的活性成分的混合物形成?？诜苿┌ㄍǔＪ褂玫馁x形劑，例如藥物級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。這些組合物采取溶液、懸浮液、片劑、丸劑、膠囊劑、持續(xù)釋放的制劑或粉劑的形式，且包含10％至95％，優(yōu)選25％至70％的活性成分。當(dāng)疫苗組合物是冷凍干燥的，該冷凍干燥的材料可在給藥前重構(gòu)為，例如懸浮液。重構(gòu)優(yōu)選在緩沖液中實(shí)現(xiàn)?；蛘?，通過(guò)此處所述方法鑒定的治療化合物或試劑可用于糖尿病相關(guān)病癥或體重相關(guān)病癥的治療或預(yù)防。在一個(gè)方面，化合物或試劑可以是天然的、合成的、半合成的或重組的Gpr100受體基因、Gpr100受體基因產(chǎn)物或其片段以及該基因、基因產(chǎn)物或片段的類似物。另一個(gè)方面，化合物可以是基因或基因產(chǎn)物的特異性抗體、反義DNA或RNA或有機(jī)或無(wú)機(jī)小分子。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，化合物或試劑對(duì)Gpr100受體基因或Gpr100受體基因產(chǎn)物的活性、表達(dá)或功能有影響。提供用于糖尿病相關(guān)病癥或體重相關(guān)病癥的治療方法。在一個(gè)方面，將治療有效量的能調(diào)節(jié)Gpr100受體的試劑施用給需要其的受試者。能調(diào)節(jié)Gpr100受體的試劑包括但不限于基因或基因產(chǎn)物的特異性抗體、反義DNA或RNA或有機(jī)或無(wú)機(jī)小分子。Gpr100受體調(diào)節(jié)劑可單獨(dú)，或作為藥學(xué)可接受組合物的部分施用。例如，Gpr100受體調(diào)節(jié)劑可與其他Gpr100受體激動(dòng)劑或拮抗劑或與其他藥學(xué)活性物質(zhì)聯(lián)合施用。例如，另外的藥學(xué)活性物質(zhì)可包括本領(lǐng)域已知的抗-糖尿病試劑或抗-肥胖癥試劑，或用于其他癥狀或疾病治療的試劑。用于糖尿病相關(guān)病癥或體重相關(guān)病癥治療的方法包括將治療有效量的Gpr100受體基因或Gpr100受體施用給需要其的受試者。更多方面現(xiàn)在本發(fā)明的更多方面和實(shí)施方案在下文編號(hào)的段落中陳述；可理解本發(fā)明包括這些方面段落1.包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5所示氨基酸序列或其同源物、變體或衍生物的Gpr100GPCR多肽。段落2.編碼段落1的多肽的核酸。段落3.段落2的核酸，包括SEQIDNO.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4所示核酸序列或其同源物、變體或衍生物。段落4.包括段落1多肽的片段的多肽。段落5.段落3的多肽，其包含在SEQIDNo.3和SEQIDNo.5之間同源的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域，或其包括在SEQIDNo.3和SEQIDNo.5之間異源的一個(gè)或多個(gè)區(qū)域。段落6.編碼段落4或5的多肽的核酸。段落7.包括段落2、3或6的核酸的載體。段落8.包括段落2、3或6的核酸或段落7的載體的宿主細(xì)胞。段落9.包括段落2、3或6的核酸或段落7的載體的轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物。段落10.段落9的轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物，其為小鼠。段落11.段落1、4或5的多肽在鑒定能與G蛋白偶聯(lián)受體特異性相互作用的化合物的方法中的用途。段落12.段落9或10的轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物在鑒定能與G蛋白偶聯(lián)受體特異性相互作用的化合物的方法中的用途。段落13.鑒定Gpr100GPCR拮抗劑的方法，該方法包括將表達(dá)Gpr100受體的細(xì)胞接觸候選化合物，并且測(cè)定細(xì)胞中環(huán)AMP(cAMP)的水平是否由于所述接觸而降低。段落14.鑒定能降低細(xì)胞中環(huán)AMP內(nèi)源水平的化合物的方法，該方法包括將表達(dá)Gpr100GPCR的細(xì)胞接觸候選化合物，并且測(cè)定細(xì)胞中環(huán)AMP(cAMP)的水平是否由于所述接觸而降低。段落15.鑒定能結(jié)合Gpr100GPCR多肽的化合物的方法，該方法包括將Gpr100GPCR多肽與候選化合物接觸并且測(cè)定該候選化合物是否結(jié)合Gpr100GPCR多肽。段落16.通過(guò)段落11至15任一的方法鑒定的化合物。段落17.能特異性結(jié)合段落1、4或5的多肽的化合物。段落18.段落1、4或5的多肽或其部分、或段落2、3或6的核酸在制備抗體的方法中的用途。段落19.抗體，能特異性結(jié)合段落1、4或5的多肽或其部分、或由段落2、3或6的核苷酸編碼的多肽或其部分。段落20.藥物組合物，包括下列任何一種或多種以及藥學(xué)可接受載體或稀釋劑段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；以及段落19的抗體。段落21.疫苗組合物，包括下列任何一種或多種段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；以及段落19的抗體。段落22.用于疾病或疾病易感性的診斷試劑盒，包括下列任何一種或多種段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；以及段落19的抗體。段落23.治療患有與增強(qiáng)的Gpr100GPCR活性相關(guān)疾病的患者的方法，該方法包括給予患者Gpr100GPCR的拮抗劑。段落24.治療患有與降低的Gpr100GPCR活性相關(guān)疾病的患者的方法，該方法包括給予患者Gpr100GPCR的激動(dòng)劑。段落25.段落23或24的方法，其中Gpr100GPCR包括具有SEQIDNO3或SEQIDNO5所示序列的多肽。段落26.用于治療和/或預(yù)防患者中疾病的方法，其包括將下列任何一種或多種給予患者的步驟段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；段落19的抗體；段落20的藥物組合物；以及段落20的疫苗。段落27.試劑，包括段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；和/或段落19的抗體，所述試劑用于治療或預(yù)防疾病的方法中。段落28.段落1、4或5的多肽或其部分；段落2、3或6的核酸或其部分；段落7的載體；段落8的細(xì)胞；段落16或17的化合物；以及段落19的抗體用于制備治療或預(yù)防疾病的藥物組合物的用途。段落29.非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，特征在于該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物包含改變的Gpr100基因。段落30.段落29的非人類的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述變化選自如下組成的組Gpr100的缺失、導(dǎo)致功能喪失的Gpr100突變、將具有靶向或隨機(jī)突變的核苷酸序列的外源基因?qū)隚pr100，將來(lái)自另一個(gè)物種的外源基因?qū)隚pr100，以及任何這些的組合。段落31.具有功能遭破壞的內(nèi)源Gpr100基因的非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在其基因組內(nèi)包含并表達(dá)編碼異源Gpr100蛋白的轉(zhuǎn)基因。段落32.用于功能性破壞宿主細(xì)胞中的Gpr100基因的核酸構(gòu)建體，該核酸構(gòu)建體包括(a)非同源的置換部分；(b)位于非同源置換部分上游的第一同源區(qū)，該第一同源區(qū)具有與第一Gpr100基因序列基本相同的核苷酸序列，以及(c)位于非同源置換部分下游的第二同源區(qū)，該第二同源區(qū)具有與第二Gpr100基因序列基本同一的核苷酸序列，所述第二Gpr100基因序列在天然存在的內(nèi)源Gpr100基因中位于第一個(gè)Gpr100基因序列的下游。段落33.用于產(chǎn)生Gpr100GPCR多肽的方法，該方法包括在表達(dá)編碼Gpr100GPCR多肽的核酸的條件下培養(yǎng)段落8的宿主細(xì)胞。段落34.檢測(cè)樣品中段落2、3或6的核酸存在的方法，該方法包括將樣品接觸對(duì)所述核酸特異的至少一種核酸探針，并且監(jiān)測(cè)所述樣品中該核酸的存在。段落35.檢測(cè)樣品中段落1、4或5的多肽存在的方法，該方法包括將樣品接觸段落19的抗體，并且監(jiān)測(cè)所述樣品中該多肽的存在。段落36.診斷由Gpr100GPCR表達(dá)提高、降低或此外異常引起的、或與其相關(guān)的疾病或綜合征的方法，該方法包括如下步驟(a)檢測(cè)患有或疑似患有肥胖癥，包括肥胖癥或體重增加的預(yù)防、食欲抑制、脂類代謝病癥，包括高脂血癥、血脂障礙和高甘油三酯血癥、糖尿病和相關(guān)病癥，包括但不限于II型糖尿病、葡萄糖耐量受損、胰島素抗性綜合癥、X綜合癥、高血糖癥、急性胰腺炎、心血管疾病、高血壓、心臟肥大和高膽固醇血癥的動(dòng)物中Gpr100GPCR的表達(dá)水平或模式；和(b)將該表達(dá)水平或模式與正常動(dòng)物的作比較。實(shí)施例實(shí)施例1.轉(zhuǎn)基因Gpr100敲除小鼠Gpr100基因靶向載體的構(gòu)建利用基因組數(shù)據(jù)庫(kù)的同源性搜索用生物信息方法鑒定Gpr100基因。從若干數(shù)據(jù)庫(kù)中裝配62kb的基因組重疊群。該重疊群提供足夠的側(cè)翼序列信息以使得能設(shè)計(jì)克隆進(jìn)入靶向載體的同源性臂。鼠的Gpr100基因有1個(gè)編碼外顯子。設(shè)計(jì)靶向策略以除去大部分編碼序列，包括大多數(shù)跨膜結(jié)構(gòu)域。通過(guò)PCR擴(kuò)增在待缺失區(qū)域兩側(cè)的3.1kb的5′同源臂和1.8kb的3′同源臂，并且將片段克隆入靶向載體中。合成用于擴(kuò)增所述臂的各個(gè)寡核苷酸引物的5′末端，以包含切割位點(diǎn)稀少的(rare-cuting)限制酶的不同切割位點(diǎn)，所述切割位點(diǎn)與載體多接頭的克隆位點(diǎn)相適合，但在所述臂中不存在。就Gpr100來(lái)說(shuō)，設(shè)計(jì)如下列引物表所列出的引物，所述引物具有NotI/SpeI的5′臂克隆位點(diǎn)和AscI/FseI的3′臂克隆位點(diǎn)(所使用的靶向載體的結(jié)構(gòu)，包括相關(guān)的限制酶切位點(diǎn)，顯示在圖2中)。除了臂的引物對(duì)(5′armF/5′armR)和(3′armF/3′armR)之外，為了下列目的設(shè)計(jì)對(duì)Gpr100基因座特異的更多引物5′和3′探針引物對(duì)(5′prF/5′prR和3′prF/3′prR)，用來(lái)擴(kuò)增在各個(gè)臂之外、并且延伸超過(guò)各個(gè)臂的非重復(fù)基因組DNA的兩個(gè)短的150-300bp片段，從而允許在分離的推定的靶向克隆中進(jìn)行該靶向基因座的Southern分析；小鼠基因分型的引物對(duì)(hetF和hetR)，所述引物對(duì)在利用載體特異性引物(在這種情況下為Asc350)的多重PCR中使用時(shí)可區(qū)分野生型、雜合和純合型小鼠；以及最后為靶篩選引物(3′scr)，其在3’臂區(qū)域末端的下游退火，并且當(dāng)其與對(duì)載體(TK5IBLMNL)3′末端特異的引物配對(duì)時(shí)(在這種情況下為Asc53)產(chǎn)生靶向事件(targetevent)特異性的1.9kb擴(kuò)增物。該擴(kuò)增物只能源自已經(jīng)出現(xiàn)了所需基因組變化、并允許從包含載體的隨機(jī)整合拷貝的克隆本底中鑒定出正確靶向的細(xì)胞的模板DNA。SEQIDNO19顯示用于靶向策略的這些引物的位置和Gpr100基因座區(qū)域的基因組結(jié)構(gòu)。表1.Gpr100引物序列TTGTGCAGAGTTCAATGGAGAATGTTG-SEQIDmusGpr100C5′prFNo.6CCAGAAACACTCTACGCCTGTCACCTG-SEQIDmusGpr100C5′prRNo.7musGpr100CTttgcggccgcAAAGTGACTCATGCTGCTCCCATCTTC-5′armFNotSEQIDNo.8musGpr100CAaaactagTCCCAGCAAGCCAATGATACCTACAAG-5′armRSpeSEQIDNo.9musGpr100CTttggcgcgCCTGGGACAGTACTTTCTACACCTTTC-3′armFAscSEQIDNo.10musGpr100CTttggccggccTCCATTTAAGAAGAGATCTTGAGCCAG3′armRFse-SEQIDNo.11TGGATCCTTTTATTTTGGAGACTGAAC-SEQIDmusGpr100C3′scrNo.12CCTGGCTCAAGATCTCTTCTTAAATGG-SEQIDmusGpr100C3′prFNo.13GGTGAGCAATCAGATCATGAGACTTAC-SEQIDmusGpr100C3′prRNo.14GCTTACCAGCTACAGAGGGTAGTTCTG-SEQIDmusGpr100ChetFNo.15TGATGGGAAGGATGTAAGTATGAAAGGTG-SEQmusGpr100hetR3IDNo.16GTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTG-SEQIDAsc350No.17CGGATCCACTAGATAACTTCGTATAGC-SEQIDAsc53No.18選擇同源臂的位置以功能性破壞Gpr100基因。制備靶向載體，其中待缺失的Gpr100區(qū)域被由選擇盒上游的內(nèi)源基因表達(dá)報(bào)告子(獨(dú)立于框的lacZ基因)組成的非同源序列替代，該選擇盒由與Gpr100基因相同方向排列的帶啟動(dòng)子的(promoted)新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(neo)基因組成。一旦5’和3’同源臂克隆入靶向載體TK5IBLMNL，就可利用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)制備大量高純度的DNA制品。將20μg新鮮制備的無(wú)內(nèi)毒素的DNA用另一個(gè)切割位點(diǎn)稀少的限制酶PmeI切割，所述位點(diǎn)在載體骨架中氨芐青霉素抗性基因和細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)之間是唯一的。隨后沉淀線性化的DNA并重懸浮于100μl磷酸鹽緩沖鹽水中，準(zhǔn)備用于電穿孔。電穿孔后24小時(shí)，在含有200μg/ml新霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞9天。在通過(guò)PCR篩選(如上所述利用引物3’scr和Asc53)鑒定其中已在內(nèi)源Gpr100基因和靶向構(gòu)建體之間發(fā)生同源重組的克隆前，將克隆挑入96孔板，復(fù)制并擴(kuò)增?？梢?至5％的比率鑒定陽(yáng)性克隆。擴(kuò)增這些克隆以將復(fù)制物冷凍，制備足夠高質(zhì)量的DNA而準(zhǔn)備Southern印跡，所述Southern印跡用于使用如上所述制備的外部5′和3′探針來(lái)證實(shí)該靶向事件，這些全部使用標(biāo)準(zhǔn)方法(Russetal，Nature2000Mar2；404(6773)95-99)。當(dāng)用診斷性限制酶消化的DNA的Southern印跡與外部的探針雜交時(shí)，通過(guò)突變條帶和未改變的野生型條帶的存在來(lái)確認(rèn)同源靶向的ES細(xì)胞克隆。例如，利用5′探針，用SpeI消化的基因組DNA會(huì)產(chǎn)生15.7kb的野生型條帶和8.5kb的靶條帶；而用3′探針，SpeI切割的DNA將產(chǎn)生15.7kb的野生型條帶和11.5kb的靶條帶。Gpr100GPCR缺陷小鼠的產(chǎn)生C57BL/6雌性和雄性小鼠進(jìn)行交配，在妊娠的第3.5天分離胚泡。向每個(gè)胚泡注射來(lái)自所選克隆的10-12個(gè)細(xì)胞，并將7-8個(gè)胚泡植入假孕F1雌性的子宮。出生一窩嵌合幼崽，所述幼崽包含若干高水平(達(dá)100％)鼠灰色(agouti)雄性(鼠灰色毛色表明派生自靶向克隆的細(xì)胞的影響)。這些雄性嵌合體與雌性MF1和129小鼠進(jìn)行交配，分別通過(guò)鼠灰色毛色和通過(guò)PCR基因分型來(lái)確定生殖系傳遞。PCR基因分型在裂解的尾部夾片上，利用引物hetF和hetR與第三種載體特異性引物(Asc350)一起進(jìn)行。該多重PCR允許從野生型基因座(如果存在)從引物hetF和hetR擴(kuò)增從而產(chǎn)生285bp條帶。hetF位點(diǎn)在敲除小鼠中缺失，所以無(wú)法從靶向等位基因進(jìn)行該擴(kuò)增。然而，Asc350引物將與恰好位于3’臂內(nèi)側(cè)的區(qū)域退火的hetR引物聯(lián)合，從靶向基因座擴(kuò)增397bp的條帶。因此，該多重PCR如下顯示了幼崽的基因型野生型樣品顯示單條285bp的條帶；雜合的DNA樣品在285bp和397bp產(chǎn)生兩條帶；而純合型樣品將只顯示靶特異性的397bp條帶。Gpr100受體基因遭破壞的轉(zhuǎn)基因小鼠呈現(xiàn)代謝異常。具體地，接觸高脂肪飲食后，相對(duì)野生型對(duì)照小鼠，轉(zhuǎn)基因小鼠體重、身長(zhǎng)和體脂肪增加較少，提示Gpr100受體的破壞可響應(yīng)高脂肪飲食產(chǎn)生對(duì)體重增加或體脂肪增加的某些抗性。對(duì)體重增加的抗性可提供對(duì)相關(guān)病癥如糖尿病和肥胖癥的治療和/或預(yù)防的有價(jià)值的認(rèn)識(shí)。因而，Gpr100受體可用作靶而用于發(fā)現(xiàn)治療糖尿病相關(guān)病癥的治療劑。實(shí)施例2.生物學(xué)數(shù)據(jù)血清化學(xué)血液通過(guò)末梢心臟穿刺收集樣品至注射器中。一百微升每種全血樣品轉(zhuǎn)移入預(yù)裝滿EDTA的管中。剩余的血樣通過(guò)在帶有凝膠分離器的血清管中離心而轉(zhuǎn)變成血清。隨后如下所述分析每種血清樣品。通過(guò)后眼窩靜脈穿刺收集年老小鼠的末梢血樣至毛細(xì)管中。該方法產(chǎn)生大約200μL全血，其轉(zhuǎn)移入帶有凝膠分離器的血清管而用于血清化學(xué)分析(見(jiàn)下文)，或轉(zhuǎn)移入預(yù)裝滿EDTA的管中用于血液學(xué)分析。利用標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和測(cè)定法分析血清的下列參數(shù)胰島素、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白、堿性磷酸酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶、重碳酸鹽、總膽紅素、血液尿素氮、鈣、氯化物、膽固醇、肌酸激酶、肌酐、球蛋白、葡萄糖、高密度脂蛋白(HDL)、乳酸脫氫酶、低密度脂蛋白(LDL)、滲透壓度、磷、鉀、總蛋白、鈉和甘油三酯。實(shí)施例3.生物學(xué)數(shù)據(jù)組織學(xué)和密度分析禁食后的脂肪組織組織學(xué)小鼠(對(duì)于突變體和野生型，n＝4)禁食16h、殺死，隨后解剖白色脂肪組織，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的組織學(xué)方法，固定于4％低聚甲醛中，包埋于蠟中，切片并且利用蘇木精和伊紅染色。結(jié)果在圖4中顯示。圖4顯示來(lái)自4個(gè)突變體和4個(gè)野生型的白色脂肪組織，上圖顯示對(duì)照未禁食動(dòng)物，而底部3個(gè)圖顯示來(lái)自禁食動(dòng)物的組織。數(shù)據(jù)表明，禁食后野生型小鼠脂肪細(xì)胞的細(xì)胞大小降低。未在敲除小鼠中觀察到該降低，因此表明敲除在禁食期間不能使脂肪流動(dòng)。密度測(cè)定法殺死小鼠并且利用PiximusTM密度計(jì)分析。用X射線源使得小鼠暴露于高能量和低能量的X射線束。高能量和低能量的衰減比率使得骨與軟組織、以及與組織樣品內(nèi)的瘦肉和脂肪分離。獲得和記錄密度計(jì)量數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)包括骨礦物質(zhì)密度(以g/cm2表示的BMD)、骨礦物質(zhì)含量(以g表示的BMC)、骨和組織面積、總的組織質(zhì)量和脂肪占身體軟組織的百分比(以脂肪％表示)。當(dāng)與年齡和性別匹配的對(duì)照小鼠相比時(shí)，純合型突變體小鼠呈現(xiàn)出脂肪占身體軟組織的百分比(脂肪％)增高。在大約49天齡的雌性純合型突變體小鼠中觀察到該脂肪百分比的增高。當(dāng)小鼠被給予正常飲食(非高脂肪飲食)時(shí)進(jìn)一步看到脂肪百分比的增高。測(cè)量整個(gè)高脂肪飲食激發(fā)期間記錄身長(zhǎng)和體重。結(jié)果敲除小鼠呈現(xiàn)糖尿病和肥胖癥的代謝特征。對(duì)敲除小鼠進(jìn)行高脂肪飲食激發(fā)約8周，并且進(jìn)行葡萄糖耐量檢驗(yàn)。高脂肪飲食激發(fā)后還記錄密度測(cè)量和體重以及身長(zhǎng)(測(cè)量)。葡萄糖耐量試驗(yàn)(GTT)小鼠禁食約5小時(shí)并且在注射之前通過(guò)從尾端收集約5至10微升血液以及利用糖度計(jì)(GlucometerElite，BayerCorporation，Mishawaka，IN)測(cè)量尾靜脈血葡萄糖水平。葡萄糖值用作時(shí)間T＝0。在t＝0稱重小鼠并且以約每公斤體重2克的劑量口服或通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用葡萄糖。通過(guò)與用來(lái)測(cè)量基礎(chǔ)(T＝0)血葡萄糖的方法相同的方法在注射后約15、30、60、90和120分鐘測(cè)量血漿葡萄糖濃度。小鼠放回籠中允許隨意進(jìn)食約一周，其后重復(fù)GTT。對(duì)兩次檢驗(yàn)的葡萄糖值進(jìn)行平均以用于統(tǒng)計(jì)分析。利用Studentt檢驗(yàn)確立成對(duì)方式的(pair-wise)統(tǒng)計(jì)顯著性。統(tǒng)計(jì)顯著性限定為P＜0.05。實(shí)施例4.生物學(xué)數(shù)據(jù)胰島素抑制試驗(yàn)(IST)如以上GTT中那樣，在t＝0時(shí)測(cè)量尾靜脈的葡萄糖水平和體重。對(duì)于日常飲食(或高脂肪飲食)的雄性小鼠，以約每公斤體重0.5或0.7單位通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用胰島素(HumulinR，EliLillyandCompany，Indianapolis，IN)。在少數(shù)情形下當(dāng)使用雌性小鼠時(shí)，使用每公斤體重0.5單位的胰島素。在胰島素注射后約15、30、60、90和120分鐘測(cè)量血漿葡萄糖水平并且表示為基礎(chǔ)葡萄糖的百分比。得到的葡萄糖水平可代表小鼠對(duì)胰島素的靈敏度，例如某些組織響應(yīng)胰島素而攝取葡萄糖的能力。實(shí)施例5.生物學(xué)數(shù)據(jù)葡萄糖刺激的胰島素分泌試驗(yàn)(GSIST)試驗(yàn)之前采取尾靜脈血樣以測(cè)量T＝0時(shí)的血清胰島素水平。以大約每公斤小鼠體重2克口服或通過(guò)腹膜內(nèi)注射施用葡萄糖。隨后在葡萄糖負(fù)載后約7.5、15、30和60分鐘收集尾靜脈血樣。通過(guò)ELISA試劑盒測(cè)定血清胰島素水平(CrystalChemInc.，Chicago，Il)。代謝室小鼠在代謝室中(ColumbusInstruments，Columbus，Ohio)單獨(dú)安置。在約48小時(shí)的一段時(shí)間中監(jiān)測(cè)代謝率(VO2/Kg/hr)、呼吸交換率(RER＝VC02/V02)、走動(dòng)/運(yùn)動(dòng)活動(dòng)性以及食物和水?dāng)z入。約每48分鐘記錄數(shù)據(jù)。小鼠隨后禁食過(guò)夜約18小時(shí)并且在大約下一個(gè)24小時(shí)中收集相同的數(shù)據(jù)以觀察小鼠對(duì)過(guò)夜禁食的食欲過(guò)盛應(yīng)答。密度測(cè)定法通過(guò)DEXA(雙能量X射線吸收測(cè)定法)顯像密度計(jì)(Piximus，GEMedicalSystemsLunar，Madison，WI)分析身體脂肪組成和骨礦物質(zhì)密度(BMD)。尸體剖檢通過(guò)心臟穿刺收集血液，用于標(biāo)準(zhǔn)血清化學(xué)以及通過(guò)ELISA對(duì)leptin的血清水平進(jìn)行測(cè)量。分別稱重腸系膜的、附睪的、腹股溝的以及棕色脂肪墊以評(píng)估脂肪分布。采集胰腺、肝臟和腎臟用于組織學(xué)分析。一旦在上述試驗(yàn)中當(dāng)與野生型小鼠相比時(shí)Gpr100受體基因缺陷型行為有所不同，則支持Gpr100基因在糖尿病和葡萄糖耐受性中的作用。實(shí)施例6.生物學(xué)數(shù)據(jù)禁食期間隨時(shí)間的血葡萄糖水平測(cè)量突變體和野生型動(dòng)物禁食16h并且利用OneTouchUltra糖度計(jì)(LifeScan)采取尾靜脈血樣。圖5顯示雄性(對(duì)于突變體和野生型，n＝7)和雌性(對(duì)于突變體和野生型，n＝7)的血葡萄糖水平。該圖表明在受檢驗(yàn)的年齡時(shí)兩種性別的突變體均具有明顯降低的血葡萄糖。實(shí)施例7.生物學(xué)數(shù)據(jù)禁食期間隨時(shí)間的血葡萄糖和胰島素水平測(cè)量基礎(chǔ)血葡萄糖(利用OneTouchUltraGlucometer，LifeSpan)取自突變體和年齡匹配的野生型雄性動(dòng)物(n＝5)。隨后移開食物，將動(dòng)物移到干凈的籠中并且每小時(shí)測(cè)量葡萄糖。結(jié)果(圖6)表明在禁食5小時(shí)至6小時(shí)之間突變體的血葡萄糖水平與野生型相比顯著下降至更低。此可能是由于糖原儲(chǔ)存耗盡后動(dòng)物向FAO轉(zhuǎn)變的能力缺陷。用n＝6的突變體和野生型重復(fù)禁食測(cè)試的實(shí)驗(yàn)(參見(jiàn)圖7)。再次檢測(cè)初始的血葡萄糖樣品并且同時(shí)從尾部采取血樣(大約50μl)用于基礎(chǔ)胰島素測(cè)量。隨后移開食物，動(dòng)物移到干凈的籠中并且每小時(shí)測(cè)量葡萄糖。在6小時(shí)時(shí)從尾靜脈采取血樣用于胰島素測(cè)量；該樣品和基礎(chǔ)樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘隨后在10,000rpm離心5分鐘。除去血清并且貯存在-80℃直至進(jìn)一步分析。該實(shí)驗(yàn)中禁食延長(zhǎng)至12h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)利用EDTA作為抗凝血?jiǎng)瑥慕佑|過(guò)量CO2的動(dòng)物腔靜脈采取末梢血樣，移去50μl該樣品用于胰島素測(cè)量，將其按照上述參數(shù)離心并且得到的血清儲(chǔ)存在-80℃直至進(jìn)一步分析。剩余的全血添加抑肽酶至終濃度500KIU/ml，隨后如上離心，除去血清并且儲(chǔ)存在-80℃直至進(jìn)一步分析。結(jié)果顯示在圖7和圖13中。這些實(shí)驗(yàn)表明移開食物后6小時(shí)，突變體動(dòng)物的血葡萄糖水平與野生型相比顯著下降至更低，而胰島素水平在突變體中比在野生型中提高得更多，表明突變體為胰島素過(guò)多的。實(shí)施例8.生物學(xué)數(shù)據(jù)禁食期間隨時(shí)間的胰高血糖素水平的測(cè)量按照產(chǎn)品說(shuō)明書，利用GlucagonRIA(Linco)在上述末梢樣品中測(cè)量胰高血糖素水平。如圖8所示，突變體和野生型之間無(wú)差異。因此當(dāng)葡萄糖水平降低存在時(shí)突變體不顯示胰高血糖素的提高，所述提高通常預(yù)期發(fā)生在低血糖狀態(tài)。此導(dǎo)致假設(shè)，即一旦糖原供應(yīng)耗盡，動(dòng)物將不能向脂肪酸氧化轉(zhuǎn)變。實(shí)施例9.生物學(xué)數(shù)據(jù)葡萄糖/胰島素耐量試驗(yàn)在過(guò)夜禁食(16小時(shí))小鼠中用2mg/g(劑量/g體重)葡萄糖腹膜內(nèi)注射后測(cè)量葡萄糖耐量和胰島素分泌。用OneTouchGlucometer(LifeScan)測(cè)量基礎(chǔ)血糖并且從尾部采取50μl血樣用于胰島素測(cè)量。此樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘，隨后如前離心。隨后每種動(dòng)物(n＝7)用葡萄糖激發(fā)且隨后在注射后15、30、60和120分鐘進(jìn)行葡萄糖測(cè)量。注射后60分鐘從尾部采取另一個(gè)血樣用于胰島素測(cè)量；這利用與用于本底樣品的方法相同的方法制備。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)如以上用于12小時(shí)禁食試驗(yàn)所述的采取末梢血樣。參見(jiàn)Guerre-Millo，M.，etal.(2001)“PPAR-α-nullmiceareprotectedfromhigh-fatdiet-inducedinsulinresistance.”Diabetes502809-2814。結(jié)果顯示在圖9、圖10和圖12中。在時(shí)間為零時(shí)突變體動(dòng)物具有較低的血糖水平，基于之前的結(jié)果，這預(yù)期在16h禁食后的這些動(dòng)物中會(huì)存在，這一較低的設(shè)定點(diǎn)意味著曲線分析下的GTT面積在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有所不同(數(shù)據(jù)沒(méi)有顯示)。然而當(dāng)數(shù)據(jù)被標(biāo)準(zhǔn)化至相對(duì)于基礎(chǔ)的改變時(shí)突變體動(dòng)物對(duì)葡萄糖激發(fā)的應(yīng)答與野生型動(dòng)物沒(méi)有差異。末梢血樣中胰高血糖素水平(如上測(cè)量)的RIA分析表明突變體的胰高血糖素水平?jīng)]有明顯改變。結(jié)果在圖11中顯示。胰島素水平的ELISA分析表明胰島素水平在突變體中比在野生型動(dòng)物中達(dá)到更高的水平，表明突變體是胰島素過(guò)多的?？傊?，Gpr100突變體動(dòng)物在過(guò)夜禁食的代謝應(yīng)激后呈現(xiàn)嚴(yán)重的低血糖，此在剝奪食物后6小時(shí)時(shí)變得明顯。該突變體具有對(duì)葡萄糖的正常耐受性并且不呈現(xiàn)胰高血糖素水平的顯著改變。綜合起來(lái)，這些結(jié)果提示突變體動(dòng)物存在向脂肪酸氧化轉(zhuǎn)變以用于能量產(chǎn)生能力的缺陷。參考文獻(xiàn)Steneberg，P.，etal.(2005)“TheFFAreceptorGPR40linkshyperinsulinemia，hepaticsteatosis，andimpairedglucosehomeostasisinmouse.”CellMetabolism1245-258。以上說(shuō)明書中提及的所有出版物此處通過(guò)引用引入。本發(fā)明所描述的方法和系統(tǒng)的不同改進(jìn)和變化對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，并不背離本發(fā)明的范圍和精神。雖然本發(fā)明已經(jīng)與具體的優(yōu)選實(shí)施方案相聯(lián)系而進(jìn)行描述，應(yīng)理解如所要求保護(hù)的本發(fā)明將不應(yīng)被不當(dāng)?shù)叵抻谒鼍唧w的實(shí)施方案。實(shí)際上，對(duì)于分子生物學(xué)或相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員明顯的、用于實(shí)施本發(fā)明的所述方式的不同改進(jìn)應(yīng)包括在下列權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。SEQIDNO1顯示人Gpr100的cDNA序列。GAGAAGCACTTAATTCTACAGCCTCCTTCCTAGAGCCTTCAGTGGCCTCTGCCAGTCTGGCAGACACTTGCAGACCTCTCTTCTCAGCACCACCAATCTCTGATGCCCTGCGATGCCCACACTCAATACTTCTGCCTCTCCACCCACATTCTTCTGGGCCAATGCCTCCGGAGGCAGTGTGCTGAGTGCTGATGATGCTCCGATGCCTGTCAAATTCCTAGCCCTGAGGCTCATGGTTGCCCTGGCCTATGGGCTTGTGGGGGCCATTGGCTTGCTGGGAAATTTGGCGGTGCTGTGGGTACTGAGTAACTGTGCCCGGAGAGCCCCTGGCCCACCTTCAGACACCTTCGTCTTCAACCTGGCTCTGGCGGACCTGGGACTGGCACTCACTCTCCCCTTTTGGGCAGCCGAGTCGGCACTGGACTTTCACTGGCCCTTCGGAGGTGCCCTCTGCAAGATGGTTCTGACGGCCACTGTCCTCAACGTCTATGCCAGCATCTTCCTCATCACAGCGCTGAGCGTTGCTCGCTACTGGGTGGTGGCCATGGCTGCGGGGCCAGGCACCCACCTCTCACTCTTCTGGGCCCGAATAGCCACCCTGGCAGTGTGGGCGGCGGCTGCCCTGGTGACGGTGCCCACAGCTGTCTTCGGGGTGGAGGGTGAGGTGTGTGGTGTGCGCCTTTGCCTGCTGCGTTTCCCCAGCAGGTACTGGCTGGGGGCCTACCAGCTGCAGAGGGTGGTGCTGGCTTTCATGGTGCCCTTGGGCGTCATCACCACCAGCTACCTGCTGCTGCTGGCCTTCCTGCAGCGGCGGCAACGGCGGCGGCAGGACAGCAGGGTCGTGGCCCGCTCTGTCCGCATCCTGGTGGCTTCCTTCTTCCTCTGCTGGTTTCCCAACCATGTGGTCACTCTCTGGGGTGTCCTGGTGAAGTTTGACCTGGTGCCCTGGAACAGTACTTTCTATACTATCCAGACGTATGTCTTCCCTGTCACTACTTGCTTGGCACACAGCAATAGCTGCCTCAACCCTGTGCTGTACTGTCTCCTGAGGCGGGAGCCCCGGCAGGCTCTGGCAGGCACCTTCAGGGATCTGCGGTTGAGGCTGTGGCCCCAGGGCGGAGGCTGGGTGCAACAGGTGGCCCTAAAGCAGGTAGGCAGGCGGTGGGTCGCAAGCAACCCCCGGGAGAGCCGCCCTTCTACCCTGCTCACCAACCTGGACAGAGGGACACCCGGGTGASEQIDNO2顯示源自SEQIDNO1的可讀框。ATGCCCACACTCAATACTTCTGCCTCTCCACCCACATTCTTCTGGGCCAATGCCTCCGGAGGCAGTGTGCTGAGTGCTGATGATGCTCCGATGCCTGTCAAATTCCTAGCCCTGAGGCTCATGGTTGCCCTGGCCTATGGGCTTGTGGGGGCCATTGGCTTGCTGGGAAATTTGGCGGTGCTGTGGGTACTGAGTAACTGTGCCCGGAGAGCCCCTGGCCCACCTTCAGACACCTTCGTCTTCAACCTGGCTCTGGCGGACCTGGGACTGGCACTCACTCTCCCCTTTTGGGCAGCCGAGTCGGCACTGGACTTTCACTGGCCCTTCGGAGGTGCCCTCTGCAAGATGGTTCTGACGGCCACTGTCCTCAACGTCTATGCCAGCATCTTCCTCATCACAGCGCTGAGCGTTGCTCGCTACTGGGTGGTGGCCATGGCTGCGGGGCCAGGCACCCACCTCTCACTCTTCTGGGCCCGAATAGCCACCCTGGCAGTGTGGGCGGCGGCTGCCCTGGTGACGGTGCCCACAGCTGTCTTCGGGGTGGAGGGTGAGGTGTGTGGTGTGCGCCTTTGCCTGCTGCGTTTCCCCAGCAGGTACTGGCTGGGGGCCTACCAGCTGCAGAGGGTGGTGCTGGCTTTCATGGTGCCCTTGGGCGTCATCACCACCAGCTACCTGCTGCTGCTGGCCTTCCTGCAGCGGCGGCAACGGCGGCGGCAGGACAGCAGGGTCGTGGCCCGCTCTGTCCGCATCCTGGTGGCTTCCTTCTTCCTCTGCTGGTTTCCCAACCATGTGGTCACTCTCTGGGGTGTCCTGGTGAAGTTTGACCTGGTGCCCTGGAACAGTACTTTCTATACTATCCAGACGTATGTCTTCCCTGTCACTACTTGCTTGGCACACAGCAATAGCTGCCTCAACCCTGTGCTGTACTGTCTCCTGAGGCGGGAGCCCCGGCAGGCTCTGGCAGGCACCTTCAGGGATCTGCGGTTGAGGCTGTGGCCCCAGGGCGGAGGCTGGGTGCAACAGGTGGCCCTAAAGCAGGTAGGCAGGCGGTGGGTCGCAAGCAACCCCCGGGAGAGCCGCCCTTCTACCCTGCTCACCAACCTGGACAGAGGGACACCCGGGTGASEQIDNO3顯示人Gpr100的氨基酸序列。MPTLNTSASPPTFFWANASGGSVLSADDAPMPVKFLALRLMVALAYGLVGAIGLLGNLAVLWVLSNCARRAPGPPSDTFVFNLALADLGLALTLPFWAAESALDFHWPFGGALCKMVLTATVLNVYASIFLITALSVARYWVVAMAAGPGTHLSLFWARIATLAVWAAAALVTVPTAVFGVEGEVCGVRLCLLRFPSRYWLGAYQLQRVVLAFMVPLGVITTSYLLLLAFLQRRQRRRQDSRVVARSVRILVASFFLCWFPNHVVTLWGVLVKFDLVPWNSTFYTIQTYVFPVTTCLAHSNSCLNPVLYCLLRREPRQALAGTFRDLRLRLWPQGGGWVQQVALKQVGRRWVASNPRESRPSTLLTNLDRGTPGZSEQIDNO4顯示小鼠Gpr100的cDNA的可讀框。TAGACCAACACCCAGATTCCAAGGGCTCTTCTAAGAGCTCTCCTGAGACAACAGCGGCGGCGGGTGGTTGCTTGCCAGGCCGGAAGGCGGGCACTCCCTGGTTCCTCTGCTCTGCTGTGCTCTAGCAACCTCCGCGGTCTTGCGATGGCCACATCCAATTCTTCTGCCTCTCTGCCCACCCTCTTCTGGGTCAATGGCTCTGGAGACAGCGTGCTGAGCACTGACGGTGCTGCCATGCCTGTCCAGTTCCTTGTTCTGAGGATCATGGTTGCACTGGCCTATGGACTTGTAGGTATCATTGGCTTGCTGGGAAATTTGGCCGTACTGTGGGTTCTAGGTAACTGTGGTCAGCGTGTGCCCGGCCTGTCTTCTGATACCTTTGTCTTCAGCCTGGCTCTAGCAGACTTGGGGCTGGCCCTTACTCTCCCTTTCTGGGCAACCGAGTCAGCAATGGACTTCCACTGGCCTTTCGGAAGTGCCCTCTGCAAGGTAGTCCTGACCACCACCGTCCTCAGCATCTATGCCAGCACCTTCCTAATCACAGCACTGAGTATCGCGCGATACTGGGTGGTAGCCATGGCTGTGGGACCAGGTAGTCACCTCTCAGTCTTTTGGGCCCGTGTGGTCACCCTGGCAGTGTGGGTGGCAGCTGCCCTGGTGACTGTGCCCACAGCAATCTTTGGGGCTGAAGTTGAGTTGTGGGGCGTGTGCCTCTGTCTTCTGCGTTTCCCCAGCAGATACTGGCTGGGAGCTTACCAGCTACAGAGGGTAGTTCTGGCCTTCATCGTGCCCTTGGGAGTCATTACCACCAGTTACCTGCTGCTGTTGGCCTTTCTAGAGCGGCAGCAAAGATGCAGGCCACGACAATGGCAGGACAGCCGAGTGGTAGCCCGCTCTGTCCGTGTCCTGGTGGCTTCCTTCGCCCTCTGCTGGGTTCCCAACCATGTAGTCACTCTCTGGGAAATTCTGGTAAGGTTTGACCTGGTGCCCTGGGACAGTACTTTCTACACCTTTCATACTTACATCCTTCCCATCACCACCTGCTTGGCCCACAGCAACAGCTGCCTCAACCCTGTGATCTATTGTCTCCTGCGGCGGGAGCCCCAGCAGGTTCTTGTCAGCTCCTTCAGAGCTCTCTGGTCAAGACTGTGGCCTCAAAGGAAGGCCTGCATGGAACAAATGGCCCTCAAGGAGGTAGGCGGGAGAACGGTAGCCAGCACCCAGGAGAGTGGCTCTTCTAGGACACACACAAACACAATGGAACACCTGGATGAAGGATGCAGCCTGAACACTCTCCTTTCTGAGACCTATCAGGGGCAGAGCCCACAGATTCTAGGGAGGAGCAGCTGCTCTCTCAGTCAGGCTGCTGTGTCCCCAGGAGAAGTCTGASEQIDNO5顯示小鼠Gpr100的氨基酸序列。MATSNSSASLPTLFWVNGSGDSVLSTDGAAMPVQFLVLRIMVALAYGLVGIIGLLGNLAVLWVLGNCGQRVPGLSSDTFVFSLALADLGLALTLPFWATESAMDFHWPFGSALCKVVLTTTVLSIYASTFLITALSIARYWVVAMAVGPGSHLSVFWARVVTLAVWVAAALVTVPTAIFGAEVELWGVCLCLLRFPSRYWLGAYQLQRVVLAFIVPLGVITTSYLLLLAFLERQQRCRPRQWQDSRVVARSVRVLVASFALCWVPNHVVTLWEILVRFDLVPWDSTFYTFHTYILPITTCLAHSNSCLNPVIYCLLRREPQQVLVSSFRALWSRLWPQRKACMEQMALKEVGGRTVASTQESGSSRTHTNTMEHLDEGCSLNTLLSETYQGQSPQILGRSSCSLSQAAVSPGEVZTTGTGCAGAGTTCAATGGAGAATGTTG-SEQIDNo.6CCAGAAACACTCTACGCCTGTCACCTG-SEQIDNo.7TttgcggccgcAAAGTGACTCATGCTGCTCCCATCTTC-SEQIDNo.8AaaactagTCCCAGCAAGCCAATGATACCTACAAG-SEQIDNo.9TttggcgcgCCTGGGACAGTACTTTCTACACCTTTC-SEQIDNo.10TttggccggccTCCATTTAAGAAGAGATCTTGAGCCAG-SEQIDNo.11TGGATCCTTTTATTTTGGAGACTGAAC-SEQIDNo.12CCTGGCTCAAGATCTCTTCTTAAATGG-SEQIDNo.13GGTGAGCAATCAGATCATGAGACTTAC-SEQIDNo.14GCTTACCAGCTACAGAGGGTAGTTCTG-SEQIDNo.15TGATGGGAAGGATGTAAGTATGAAAGGTG-SEQIDNo.16GTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTG-SEQIDNo.17CGGATCCACTAGATAACTTCGTATAGC-SEQIDNo.18SEQIDNo.19從5’prF至3’prR的基因組基因座序列范圍25401to32500>5’prF||25500GTGTGTGTTTGTGTGCACTTATGCATTTGTGCAGAGTTCAATGGAGAATGTTGGGTGATAGTCTTCACTAGCCACCTTAAGATGGTCTTCTTGTTCACCCCACACACAAACACACGTGAATACGTAAACACGTCTCAAGTTACCTCTTACAACCCACTATCAGAAGTGATCGGTGGAATTCTACCAGAAGAACAAGTGGG25600ATAGGTGACCCATGAGTYYCCCAGGTCCAACTATGTAGTGGTTTAAATAAGTATTTGCCCGTAGGCTCAGATATTTAAACACTGGGAGTTCAGTTAGTGATATCCACTGGGTACTCAAAGGGTCCAGGTTGATACATCACCAAATTTATTCATAAACGGGCATCCGAGTCTATAAATTTGTGACCCTCAAGTCAATCACT<5’prR||25700CCCTAACTGTGCTGTTTGGGGAGGTTGGAAACCTTTGACAGGTGGAGCCTTGTTAGAAGAATGTCTCCAGGTGACAGGCGTAGAGTGTTTCTGGTCTTGCGGGATTGACACGACAAACCCCTCCAACCTTTGGAAACTGTCCACCTCGGAACAATCTTCTTACAGAGGTCCACTGTCCGCATCTCACAAAGACCAGAACG25800CTCACTTCCTGCTCTCTTAGTGCCAAGCTCTTGTTACTGTGCCTGCTGCCCTGCCTCCATTCTTCCCCACCATGGTGGACTCTAGCCTTCAGGAACCATAGAGTGAAGGACGAGAGAATCACGGTTCGAGAACAATGACACGGACGACGGGACGGAGGTAAGAAGGGGTGGTACCACCTGAGATCGGAAGTCCTTGGTAT25900AGCCGAAAGAAACTTCCTTAATTAAGTTGCCTTGGCCATGGCATTTTCTCAGAGCAACAGAAAAGTGTAGTGAGAATTTTGGTTTCTTTAAAAACCACATTCGGCTTTCTTTGAAGGAATTAATTCAACGGAACCGGTACCGTAAAAGAGTCTCGTTGTCTTTTCACATCACTCTTAAAACCAAAGAAATTTTTGGTGTA26000GACGGCCGGGCATGGTGGCGCATGCCTTTAATCCCAGCACTCGGGAGGCAGAGGCAGGCGGATTTCTGAGTTTGAGGCCAGCCTGGTCTACAAAGTGAGCCTGCCGGCCCGTACCACCGCGTACGGAAATTAGGGTCGTGAGCCCTCCGTCTCCGTCCGCCTAAAGACTCAAACTCCGGTCGGACCAGATGTTTCACTCG26100TCCAGGACAGCCAGGGCTATACAGAGAAACCATGTCTCGAAAAAACAAACAAACAAACAAAAACAAAAAACAAAAAAACCACAGAACTAGGAATGTGCTTAGGTCCTGTCGGTCCCGATATGTCTCTTTGGTACAGAGCTTTTTTGTTTGTTTGTTTGTTTTTGTTTTTTGTTTTTTTGGTGTCTTGATCCTTACACGAA26200CTGTTTTGATCCTAGGTGTGGGGACACGGGGCTGCTTCAGATTGAGCACAGCAGCTGACCTTGGCTTGCCCCGTGCTCTAACAGCAGTGTGACTTTCCCAGACAAAACTAGGATCCACACCCCTGTGCCCCGACGAAGTCTAACTCGTGTCGTCGACTGGAACCGAACGGGGCACGAGATTGTCCTCACACTGAAAGGGT26300GTTACAGATAGTTTTTGTGACTGTGTGACAATTGGGATGCTGGGGACTTTTCAGAGGGTCTATAAATGCTAGGGCCCCAAGAGGGAGCATGGGTTGTTGGCAATGTCTATCAAAAACACTGACACACTGTTAACCCTACGACCCCTGAAAAGTCTCCCACATATTTACGATCCCGGGGTTCTCCCTCGTACCCAACAACC26400TTGCTGTGAATTGTTGTCAGTCTCCATTTGTTAAGTGGTTGTGTGCAAAGAAGAAGCAAGAAAAAGAAATTAGATATCCTGATGGCAAAGATCAAACTTGAACGACACTTAACAACAGTCAGAGGTAAACAATTCACCAACACACGTTTCTTCTTCGTTCTTTTTCTTTAATCTATAGGACTACCGTTTCTAGTTTGAAC26500CCTCAAGGAACTCAATGCTCCTAAGAAGGGAGTGGCCTAACAATAACATCGCCCCTTCCCGACCCCTGAATTTACCCAGGAATCTCTTTCCTTTCCTCTCGGAGTTCCTTGAGTTACGAGGATTCTTCCCTCACCGGATTGTTATTGTAGCGGGGAAGGGCTGGGGACTTAAATGGGTCCTTAGAGAAAGGAAAGGAGAG>5’armF|26600TGTCCCCTTTTCTCTTCTATCTAATGCTGCAAGAAAAGGGATGGAGAAGGGTGGAAGAAAGAAAAACTCACAACGTAGCCCAAGTCCTGCTACAGAAAAGACAGGGGAAAAGAGAAGATAGATTACGACGTTCTTTTCCCTACCYCTTCCCACCTTCTTTCTTTTTGAGTGTTGCATCGGGTTCAGGACGATGTCTTTTC26700TGACTCATGCTGCTCCCATCTTCCTGGGAGTCCCAGGGTTACAGGTGCTCTCTGCTGAGCACAGCTCTGCCTGCATAAGCTCTAGGCCTCTGAATGGGGAACTGAGTACGACGAGGGTAGAAGGACCCTCAGGGTCCCAATGTCCACGAGAGACGACTCGTGTCGAGACGGACGTATTCGAGATCCGGAGACTTACCCCT26800CCCTCATGCATGCATCTTATCTCCTCAGTAAACTCCCTCTCCAACCTAAGCTGCATGGTTTTGGTTTTATTCTGTGTGCAAGTGATGGGGTTGGAGGATTGGGAGTACGTACGTAGAATAGAGGAGTCATTTGAGGGAGAGGTTGGATTCGACGTACCAAAACCAAAATAAGACACACGTTCACTACCCCAACCTCCTAA26900GCAGCAAGCAAGGGAGCAGTGTTCTGCTGATCTACACCGGCAGCCGGGTCGCTGGAGTGCCTAAGCTGGCTATACAATTCTGGCCAAAACAGCATGGCCGCGTCGTTCGTTCCCTCGTCACAAGACGACTAGATGTGGCCGTCGGCCCAGCGACCTCACGGATTCGACCGATATGTTAAGACCGGTTTTGTCGTACCGGC27000TAAGAAATGAATACTTGACATGAGTCGGACTCAGACTATGACGTCAGGAAGACCCCTCCGCGCACAAGCTCAGGCTGTGAAATCTCACCAACCCCCACCCATTCTTTACTTATGAACTGTACTCAGCCTGAGTCTGATACTGCAGTCCTTCTGGGGAGGCCCGTGTTCGAGTCCGACACTTTAGACTGGTTGGGGGTGGG27100TGGAAAACTCTGCCCCACAAGAAAAGCTGTATAACACGTGTCTTCTGCTCAGTTCTCTGTAGCTTCTCTCCCTAGCTGAGGTGTCTTTCCCAATAAATCTACCTTTTGAGACGGGGTGTTCTTTTCGACATATTGTGCACAGAAGACGAGTCAAGAGACATCGAAGAGAGGGATCGACTCCACAGAAAGGGTTATTTAGA27200ATTGTGTGGGGTTTGTTGTGCCGAGTGACTTTGTCCTATTATTCCTTGACTCCTGACTGCTAGGACACCTTTCTCTTCACAGCTATAACACAGGTAGCCCTAACACACCCCAAACAACACGGCTCACTGAAACACGATAATAAGGAACTGAGGACTGACGATCCTGTGGAAAGAGAAGTGTCGATATTGTGTCCATCGGG27300TTGGGTTGCAGCTGAGTGCCTTCTGCCAACCTCATCCCACCTCTCTCTTGCTCAAAACCCCAACATTCTCTTTCCCAGAAAGCAACTCTCTCACGTCTGGAACCCAACGTCGACTCACGGAAGACGGTTGGAGTAGGGTGGAGAGAGAACGAGTTTTGGGGTTGTAAGACAAAGGGTCTTTCGTTGAGAGAGTGCAGACC27400GGTTCTCATATGGGCTAGAGCTTCTCTGAAATGCCTCTCTGACCCCACCCCCAGCACCCCAAGACAACCGAGTACCAGATACTTCCTTAACCAGCAGAAGCCAAGAGTATACCCGATCTCGAAGAGACTTTACGGAGAGACTGGGGTGGGGGTCGTGGGGTTCTGTTGGCTCATGGTCTATGAAGGAATTGGTCGTCTTC27500AGTGCCGAACTGCTCTCAGAATCCTTGAAAAAAAAATCTCACTCTTACCTCCCCACTCCATGCTCTCTCCCAAAGCTCCTGCCGTGGAGAGAGATGTGAGTCACGGCTTCACGAGAGTCTTAGGAACTTTTTTTTTAGAGTGAGAATGGAGGGGTCAGGTACGAGAGAGGGTTTCGAGGACGGCACCTCTCTCTACACTC27600GAGAGAAAGGAGATGATGCCATTAGAGACGGTCTTCAGCTGAGACTGAGCTCATGGGGAGACAGGATGAGGTGTGGTAAAGGCTTTTCTCAGGTTCCAGACTCTCTTTCCTCTACTACGGTAATCTCTGCCAGAAGTCGACTCTGACTCGAGTACCCCTCTGTCCTACTCCACACCATTTCCGAAAAGAGTCCAAGGTCT27700ACTCTACAGTGAGGCTTGGGATATGGAGGAATGTGGATATGACGGGGCTCTGAGTACACCAGAAAAATGGAGTGGCAGTGGGGGTGGGACAGGTTGGCAGTGAGATGTCACTCCGAACCCTATACCTCCTTACACCTATACTGCCCCGAGACTCATGTGGTCTTTTTACCTCACCGTCACCCCCACCCTGTCCAACCGTC27800GACTGTTCAGGGATGTAGAGCAGACCTGAAGGTGTGGCCGTGGTCATCCACCTATGGCCTCACAAGTCCAATGTGCCCAGAAGGGGTATACAGGCAAGTGCTGACAAGTCCCTACATCTCGTCTGGACTTCCACACCGGCACCAGTAGGTGGATACCGGAGTGTTCAGGTTACACGGGTCTTCCCCATATGTCCCTTGAC27900CAACTTCCTCCGTCTCATTTCTTTCCCCTTCTTAGCATCAAGGTCACATGGTACTGCACTGAATTCTGACCTGTGTTTTAGTTGGCAGTGTTCCCTTGGCGTTGAAGGAGGCAGAGTAAAGAAAGGGGAAGAATCGTAGTTCCAGTGTACCATGACGTGACTTAAGACTGGACACAAAATCAACCGTCACAAGGGAACCG28000ATGATAACAGCTGTTCATTGTCCTGCTTCCTTCCATGACCAATGCTCCAAACTTCCCCTTGAAATGACAGTCATCATGCAAAGAACAAGGTATGGACTCATACTATTGTCGACAAGTAACAGGACGAAGGAAGGTACTGGTTACGAGGTTTGAAGGGGAACTTTACTCTCAGTAGTACGTTTCTTGTTCCATACCTGAGT28100CGCTAGCTCCCTGAACAACGGACTATCTTCATCTGATTTAACTTCTGTAAGGAATTTTTATTTATATGTATGTCTGCACGTATGGACATGTAGCACATTCGCGATCGAGGGACTTGTTGCCTGATAGAAGTAGACTAAATTGAAGACATTCCTTAAAAATAAATATACATACAGACGTGCATACCTGTACATCGTGTAAG28200GAGCCAGTGGAGACCAAAAGAGGGGGTCAAATTCTTTAGAACTGGAGTGATAGATGACGGTGAGATACTAGATGGGTGCTGGGTACCACACGCAGGTCATCTCGGTCACCTCTGGTTTTCTCCCCCAGTTTAAGAAATCTTGACCTCACTATCTACTGCCACTCTATGATCTACCCACGACCCATGGTGTGCGTCCAGTA28300CTGCAAGATACTAACTCCTTAGGTATCTCTAGCCCCAATTTAAAACTATTTAAATAGTATTTGCCTGTGTGAGCATGGATGTTCAGTATGCTACTGAATGGACGTTCTATGATTGAGGAATCCATAGAGATCGGGGTTAAATTTTGATAAATTTATCATAAACGGACACACTCGTACCTACAAGTCATACGATGACTTAC28400CAGGCAAATGTCAGGACAACTTTCAGGAATCTGTTCTCTCCTCCCACCTTGTGGATCCTGACCACCCAGTGCACATTGTCAGGGCCGACAAGCAGGTACTGTCCGTTTACAGTCCTGTTGAAAGTCCTTAGACAAGAGAGGAGGGTGGAACACCTAGGACTGGTGGGTCACGTGTAACAGTCCCGGCTGTTCGTCCATGA28500TGATATCTAGTCCCAAACTTGTTTGGTTTGGTTTTGAGACAGGGTTTCAGAACCTAACCTTGTCTGGCCTGGAATTCAGTAGACAGACCAGGCTGGGTGTACTATAGATCAGGGTTTGAACAAACCAAACCAAAACTCTGTCCCAAAGTCTTGGATTGGAACAGACCGGACCTTAAGTCATCTGTCTGGTCCGACCCACA28600GCCAGCAAACCATTAAGCCTGTCACCATCTAATCTTATTTTGAAGATTTAGTAGTGCTGGGGGGTACATACTACTGTGCATCTATAAAAGTCAGAAGACACGGTCGTTTGGTAATTCGGACAGTGGTAGATTAGAATAAAACTTCTAAATCATCACGACCCCCCATGTATGATGACACGTACATATTTTCAGTCTCTTGT28700ACCCCGGGATGCCTGTCCTCTCCTACCTTTATGTAGGCAGGTTCCAGGGACAGCCATCTCCACGGGCGTATTTATTTATATATAGATTATACCTTGTTGTTGGGGCCCTACGGACAGGAGAGGATGGAAATACATCCGTCCAAGGTCCCTCTCGCTAGAGGTGCCCGCATAAATAAATATATATCTAATATGGAACAACA28800ACTGCCAAGTTTGGCCTTGGTGATCAGGTGATCCAGCTGCCTCAGCCATGCAGGTAGCAGTGACCACAGCTCTTTGGCATCTCGCTGAATTGTATATTTTTGACGGTTCAAACCGGAACCACTAGTCCACTAGTCGACGGAGTCGGTCACGTCCATCGTCACTGGTGTCGAGAAACCGTAGAGCGACTTAACATATAAAA28900CTTAACACTTTTGGGGGGAGAATTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGAGATGAGTGTGGAGGTCAAAGGGCAGCTTGTGAGTGAATTGTGAAAACCCCCCTCTTAACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACACTCTACTCACACCTCCAGTTTCCCGTCGAACACTCA29000GGCATGTCTATCCTTCTCCTATGCAGATCCTGTAGACTGAATTCAAATCACCAGGCTTGGCAGCAGGCCCCTTTCCCCAAACAGCCCCGATCTCTGGCCTCCGTACAGATAGGAAGAGGATACGTCTAGGACATCTGACTTAAGTTTAGTGGTCCGAACCGTCGTCCGGGGAAAGGGGTTTGTCGGGGCTACAGACCGGA29100GCCCCCATTAACATTTTAAGCAAAGCAGCACAGGGCCCCAATCAGAGAGACACAGGAAAGGCACAGCAACTGTGGGACTCTGAGTGATGTGTGTTCCTCTCGGGGGTAATTGTAAAATTCGTTTCGTCGTGTCCCGGGGTTAGTCTCTCTGTGTCCTTTCCCTGTCCTTGACACCCTGAGACTCACTACACACAAGGAGA29200CTCTTTTTCTGACTCCCAGTCTGGTTTTCTAATGCCATATTCCTTCCCTAACCTCTCCTCACACCTCTCCTTTTCTCAGAGAGCTCTCTGCACTCCGGGGGAGAAAAAGACTGAGGGTCAGACCAAAAGATTACGGTATAAGGAAGGGATTGGAGAGGAGTGTGGAGAGGAAAAGAGTCTCTCGAGAGACGTGAGGCCCC29300AGAGAGAAAAAGCGTCTTCTGGTTTGGCTCCACATCTCTACTGTTTCCCTTTCCTTCCCTATTACATGCATGTTGACAGTGTGAACATAGCCCTCCCTTGTCTCTCTTTTTCGCAGAAGACCAAACCGAGGTGTAGAGATGACAAAGGGAAAGGAAGGGATAATGTACGTACAACTGTCACACTTGTATCGGGAGGGAAC29400CACTGCCCCACCCACCACGGTTGTCCAACTGGGAAGAAGCAGGCTGTTCTACCCACACCTGTCCCTCTTAGGTGTGAGCATGGGCAGGGGCTCTTACAACGTGACGGGGTGGGTGGTGCCAACAGGTTGACCCTTCTTCGTCCGACAAGATGGGTGTGGACAGGGAGAATCCACACTCGTACCCGTCCCCGACAATGTTG29500CCGAAGCTCTAGACCAACACCCAGATTCCAAGGGCTCTTCTAAGAGCTCTCCTGAGACAACAGCGGCGGCGGGTGGTTGCTTGCCAGGCCGGAAGGCGGGGGCTTCGAGATCTGGTTGTGGGTCTAAGGTTCCCGAGAAGATTCTCGAGAGGACTCTGTTGTCGCCGCCGCCCACCAACGAACGGTCCGGCCTTCCGCCC29600CACTCCCTGGTTCCTCTGCTCTGCTGTGCTCTAGCAACCTCCGCGCTCTTGCGATGGCCACATCCAATTCTTCTGCCTCTCTGCCCACCCTCTTCTGGGTGTGAGGGACCAAGGAGACGAGACGACACGAGATCGTTGGAGGCGCCAGAACGCTACCGGTGTAGGTTAAGAAGACGGAGAGACGGGTGGGAGAAGACCCAMATSNSSA9LPTLFWV>_______________________MUSGPR100C__________________>29700CAATGGCTCTGGAGACAGCGTGCTGAGCACTGACGGTGCTGCCATGCCTGTCCAGTTCCTTGTTCTGAGGATCATGGTTGCACTGGCCTATGGACTTGTAGTTACCGAGACCTCTCTGCACGACTCGTGACTGCCACGACGGTACGGACAGGTCAACGGAACAAGACTCCTAGTACCAACGTGACCGGATACCTGAACATNGSGDSVLSTDGAAMPVQFLVLRIMVALAYGLV>____________________________________________MUSGPR100C______________________________________________><5’armR|>7tm||||29800GGTATCATTGGCTTGCTGGGAAATTTGGCCGTACTGTGGCTTCTAGGTAACTGTGGTCAGCGTGTGCCCGGCCTGTCTTCTGATACCTTTGTCTTCAGCCCCATAGTAACCGAACGACCCTTTAAACCGGCATGACACCCAAGATCCATTGACACCAGTCGCACACGGGCCGGACAGAAGACTATGGAAACACAAGTCGGGIIGLLGNLAVLWVLGNCGQRVPGLSSDTFVFS>____________________________________________MUSGPR100C_____________________________________________>29900TGGCTCTAGCAGACTTGGGGCTGGCCCTTACTCTCCCTTTCTGGGCAACCGAGTCAGCAATGGACTTCACTGGACCTTTCGGAAGTGCCCTCTGCAAGGTACCGAGATCGTCTGAACCCCGACCGGGAATGAGAGGGAAAGACCCGTTGGCTCAGTCGTTACCTGAAGGTGACCGGAAAGCCTTCACGGGAGACGTTCCALALADLGLALTLPFWATESAMDFHWPFGSALCKV>____________________________________________MUSGPR100C_______________________________________________>30000AGTCCTGACCACCACCGTCCTCAGCATCTATGCCAGCACCTTCCTAATCACAGCACTGAGTATCGCGCGATACTGGGTGGTAGCCATGGCTGTGGGACCATCAGGACTGGTGGTGGCAGGAGTCGTAGATACGGTCGTGGAAGGATTAGTGTCGTGACTCATAGCGCGCTATGACCCACCATCGGTACCGACACCCTGGTVLTTTVLSIYASTFLITALSIARYWVVAMAVGP>____________________________________________MUSGPR100C______________________________________________>30100CCTAGTCACCTCTCAGTCTTTTGGGCCCGTGTGGTCACCCTGGCAGTGTGGGTGGCAGCTGCCCTGGTGACTGTGCCCACAGCAATCTTTGGGGCTGAAGCCATCAGTGGAGAGTCAGAAAACCCGGGCACACCAGTGGGACCGTCACACCCACCGTCGACGGGACCACTGACACGGGTGTCGTTAGAAACCCCGACTTCGSHLSVFWARVVTLAVWVAAALVTVPTAIFGAE>___________________________________________MUSGPR100C_______________________________________________>>hetF||30200TTGAGTTGTGGGGCGTGTGCCTCTGTCTTCTGCGTTTCCCCAGCAGATACTGGCTGGCAGCTTACCAGCTACAGAGGGTAGTTCTGGCCTTCATCCTGCCAACTCAACACCCCGCACACGGAGACAGAAGACGCAAAGGGGTCGTCTATGACCGACCCTCGAATGGTCGATGTCTCCCATCAAGACCGGAAGTAGCACGGVELWGVCLCLLRFPSRYWLGAYQLQRVVLAFIVP>____________________________________________MUSGPR100C______________________________________________>30300CTTGGGAGTCATTACCACCAGTTACCTGCTGCTGTTGGCCTTTCTAGAGCGGCAGCAAAGATGCAGGCCACGACAATGGCAGGACAGCCGAGTGGTAGCCGAACCCTCAGTAATGGTGGTCAATGGACGACGACAACGGAAAGATCTCGCCGTCGTTTCTACGTCCGGTGCTGTTTACCGTCCTGTCGGCTCACCATCGGLGVITTSYLLLLAFLERQQRCRPRQWQDSRVVA>____________________________________________MUSGPR100C_____________________________________________>>3’arm|>3’armF|30400CGCTCTGTCCGTGTCCTGGTGGCTTCCTTCGCCCTCTGCTGGGTTCCCAACCATGTAGTCACTCTCTGGGAAATTCTGGTAAGGTTTGACCTGGTGCCCTGCGAGACAGGCACAGGACCACCGAAGGAAGCGGGAGACGACCCAAGGGTTGGTACATCAGTGAGAGACCCTTTAAGACCATTCCAAACTGGACCACGGGARSVRVLVASFALCWVPNHVVTLWEILVRFDLVP>____________________________________________MUSGPR100C______________________________________________><hetR||30500GGGACAGTACTTTCTACACCCCTTTCATACTTACATCCTTCCCATCACCACCTGCTTGGCCCACAGCAACAGCTGCCTCAACCCTGTGATATTGTCTCCTCCCTCTCATGAAAGATGTGGAAAGTATGAATGTAGGAAGGGTAGTGGTGGACGAACCGGGTGTCGTTGTCGACGGAGTTGGGACACTAGATAACAGAGGAWDSTFYTFHTYILPITTCLAHSNSCLNPVIYCLL>____________________________________________MUSGPR100C_______________________________________________>30600GCGGCGGGAGCCCCAGCAGGTTCTTGTCAGCTCCTTCAGAGCTCTCTGGTCAAGACTGTGGCCTCAAAGGAAGGCCTGCATGGAACAAATGGCCCTCAAGCGCCGCCCTCGGGGTCGTCCAAGAACAGTCGAGGAACTCTCGAGAGACCAGTTCTGACACCGGAGTTTCCTTCCGGACGTACCTTGTTTACCGGGAGTTCRREPQQVLVSSFRALWSRLWPQRKACMEQMALK>____________________________________________MUSGPR100C_____________________________________________>30700GAGGTAGGCGGGAGAACGGTAGCCAGCACCCAGGAGAGTGGCTCTTCTAGGACACACACAAACACAATGGAACACCTGGATGAAGGATGCAGCCTGAACACTCCATCCGCCCTCTTGCCATCGGTCGTGGGTCCTCTCACCGACAAGATCCTGTGTGTGTTTGTGTTACCTTGTGGACCTACTTCCTACCTCGGACTTCTEVGGRTVASTQESGSSRTHTNTMEHLDEGCSLN>____________________________________________MUSGPR100C_____________________________________________>30800CTCTCCTTTCTGAGACCTATCAGGGGCAGAGCCCACAGATTCTAGGGAGGAGCAGCTGCTCTCTCAGTCAGGCTGCTGTGTCCCCAGGAGAAGTCTGATCGAGAGGAAAGACTCTGGATAGTCCCCGTCTCGGGTGTCTAAGATCCCTCCTCGTCGACGAGAGAGTCAGTCCGACGACACAGGGGTCGTCTTCAGACTAGTLLSETYQGQSPQILGRSSCSLSQAAVSPGEV*>___________________________________________MUSGPR100C____________________________________________>30900TTTGATCACCAACTCTGGGTGTGACAGAACGGAGAAGCTGGAGTCCAAACAGGAGGTGGATGTGGCAAACCTTATCTCTGGAGATGGCAAAGAGGAACTGAAACTAGTGGTTGAGACCCACACTGTCTTGCCTCTTCGACCTCAGGTTTGTCCTCCACCTACACCGTTTCGAATAGAGACCTCTACCGTTTCTCCTTGAC31000AGAATAAACCAGATCGGTCAGAGACTGTCTTGACCTTTCATGCAAGTACTTCACAGGATAACTAACGTCCATCACCCGGTTTAGACTAACAGGTCAGGTGTCTTATTTGGTCTAGCCAGTCTCTGACAGAACTGGAAACTACGTTCATGAAGTGTCCTATTGATTCCAGGTAGTGGGCCAAATCTGATTGTCCAGTCCAC31100TCGGTTCTCCCTGTCACTTTAGAATAGGGCACCCGTTATGCCTCTTTGGTACCAAACCCAAAAATGTATTCTCTGGCCAATAAGCTTTTTGTCATCTTAGAGCCAAGAGGGACAGTGAAATCTTATCCCGTGGGCAATACGGAGAAACCATGGTTTGGGTTTTTACATAAGAGACCGGTTATTCGAAAAACAGTAGAATC31200AGGTACCCATTAGGAATGATGTAGAACCCTCCCCTTCAACGTTTGTCTGTCGTTTTGCTGCCACAAGATGCAGACCCTGAGTGTATAGCCTTTGAGAATATCCATGGGTAATCCTTACTACATCTTCGGAGGGGAAGTTGCAAACAGACACGAAAACGACGGTGTTCTACGTCTGGGACTCACATATCGGAAACTCTTAT31300GTGAATAGATCTGTCCCTTTCAATCAAGGATTGGGTAACAATCACAAGGGTCTGGGCGTGGGGGTGGGGACTCAAGAGATACAGAAAAGTTTTGTAGGCTCACTTATCTAGACAGGGAAAGTTACTTCCTAACCCATTGTTAGTGTTCCCAGACCCGCACCCCCACCCCTCAGTTCTCTATGTCTTTTCAAAACATCCGA31400GAGGGTCAGAAACCAGAAGCTAGTCTCACTGAGTACAACTGCACTTCAGCCAAGCGCCAGAGCATGTGGGCTGGAATCTTCCCCCCACGCAAATTATTCTCTCCCAGTCTTTGGTCTTCGATCAGAGTGACTCATGTTGACGTGAAGTCGGTTCGCGGTCTCGTACACCCGACCTTAGAAGGGGGGTCCGTTTAATAAGA31500AGAAGTCAGTTCTCCCCTTCTAAAATTGGAGGCAGGGTTTCATCATACCCAGGCTGGTCTCACACTGTAAAGCTGAGGGTCGCTTGGAATCTTTAATCTTTCTTCAGTCAAGAGGGGAAGATTTTAACCTCCGTCCCAAAGTAGTATGGGTCCGACCAGAGTGTGACATTTCGACTCCCAGCGAACCTTAGAAATTAGAA31600GATCCCAGATGCTCGAATTATAGGCATGTGCCAACAAGTTGAGCTTTTCAGATCATTTTAGCCTATTCTTCCTTCTTTCCTGTACTTATGTATGTATGTACTAGGGTCTACGAGCTTAATATCCGTACACGGTTGTTCAACTCGAAAAGTCTAGTAAAATCGGATAAGAAGGAAGAAAGGACATGAATACATACATACAT31700TGCATGGCTTGCATGTACATTTGTGTTCACACTTCTACGTGTGTCAGAAGCAAACATAAGGTTTTTCATTTCCTCGTCTTTGTTTTTATTGAGACGGTCTACGTACGAACGTACATGTAAACACAAGTGTGAACATGCACACAGTCTTCGTTTGTATTCCAAAAAAGTAAAGGAGCAGAAACAAAAATAACTCTGCCAGA31800TACGACCTAACCCTAACTGTCCTGGAATTCACTCTGTAGACCAGGCTGTCCCTTGAACTCAGACACTCACCTGCTTCTGCCTCCCATGTGCTGGAACTACATGCTGGATTGGGATTGACAGGACCTTAAGTGAGACATCTGGTCCGACAGGGAACTTGAGTCTGTGAGTGGACGAAGACGGAGGGTACACGACCTTGATG31900AGGCATGTGCCAACGCACCTTGCTTTGATTTTTAAAAAATTACACTTTATTCAAGTCTGTTCAGACGAGGAGACATGTTCCACATGCATGTGGGCGATCATCCGTACACGGTTGCGTGGAACGAAACTAAAAATTTTTTTAATGTGAAATAAGTTCACACAAGTCTGCTCCTCTGTACAAGGTGTACGTACACCGCTAGT32000GGACAGCTTGGGGTCTGCTTTCTCTTTCCCCCCCTCTTAAGATTCTGGAGTCAGCTTAGGCCATCAGGCTTTCGGGCAAGGGTCTTTACCCGGGGAAGCACCTCTCGAACCCCAGACGAAAGAGAAAGGGGGGAGAATTCTAAGACCCTCAGTCGAATCCGGTAGTCCGAAAGCCCGTTCCCAGAAATGGGCCCCTTCGT32100GTTTTCTAAACCCTCCACACGATGTTTATTTGGGTTTTCTTGTTTTTTTCTGAGACAGGGTTTCTCTGTGTAGCCCTGGCTGTCCTGGAGCTCACTTTGTCAAAAGATTTGGGAGGTGTGCTACAAATAAACCCAAAAGAACAAAAAAAGACTCTGTCCCAAAGAGACACATCGGGACCGACAGGACCTCGAGTGAAACA>3’prF||32200AGACCAAGCTGACTTCGAATTCAGAAATCCGCCTGCCTCTGCCTCCCAAGAGCTGGGATTAAAGGCGTGCTCCACCACGCCTGGCTCAAGATCTCTTCTTTCTGGTTCGACTGAAGCTTAAGTCTTTAGGCGGACGGAGACGGAGGGTTCTCGACCCTAATTTCCGCACGAGGTGGTGCGGACCGAGTTCTAGAGAAGAA<3’armR<3’scr||||32300AAATGGAATAAAAGGTTCAGTCTCCAAAATAAAAGGATCCAGCAGTGCCATAGGCAGGGTTCCCGGTACTGACACCTTCCATGGAAAATGGAAAGACGACTTTACCTTATTTTCCAAGTCAGAGGTTTTATTTTCCTAGGTCGTCACGGTATCCGTCCCAAGGGCCATGACTGTGGAAGGTACCTTTTACCTTTCTCGTG32400AGAAAACATGGGCAGCTGGCAGACAGGTACAGGTGAGCCACTGAGGTCTCAGTGGTATCTTACATGGACTTGTTTATGGAATATAATGTAAGTCTCATGATCTTTTGTACCCGTCGACCGTCTGTCCATGTCCACTCGGTGACTCCAGAGTCACCATAGAATGTACCTGAACAAATACCTTATATTACATTCAGAGTACT<3’prR||32500TCTGATTGCTCACCCTCACGCGCGCGCCGCACATTTGTGAGAACACACACACATAATAAAGTAGAACCAGCAAGATGGCGCAGCAGGGAAAACACATGGCAGACTAACGAGTGGGAGTGCGCGCGCGCGCGTGTAAACACTCTTGTGTGTGTATTATTTCATTCTTGGTCGTTCTACCGCGTCGTCCCTTTTGTGTACCG權(quán)利要求1.鑒定適于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，特別是糖尿病和肥胖癥的分子的方法，該方法包括確定候選分子是否為Gpr100多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑，其中所述Gpr100多肽包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述Gpr100多肽由SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4所示的核酸序列或與其至少90％同一的序列編碼。3.權(quán)利要求1或2的方法，包括使候選分子接觸Gpr100多肽，以及檢測(cè)由于接觸引起的細(xì)胞內(nèi)鈣水平的變化。4.權(quán)利要求1或2的方法，包括使非人動(dòng)物或其部分，優(yōu)選細(xì)胞、組織或器官接觸候選分子，并且確定所述接觸是否引起所述動(dòng)物生物學(xué)參數(shù)的改變。5.權(quán)利要求4的方法，其中所述生物學(xué)參數(shù)選自以下組血清葡萄糖水平、體重、胰高血糖素水平、脂肪百分率。6.具有功能被破壞的內(nèi)源Gpr100的轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物或其分離的細(xì)胞或組織作為葡萄糖調(diào)節(jié)或Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的模型的用途。7.權(quán)利要求6的用途，其中所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物包括功能被破壞的Gpr100基因，優(yōu)選在Gpr100基因或其部分中包括缺失。8.權(quán)利要求6或7的用途或方法，其中所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物與野生型動(dòng)物相比呈現(xiàn)下列表型中的任何一種或多種的變化血清葡萄糖水平降低、體重增高、脂肪百分率更高。9.權(quán)利要求6、7或8的用途或方法，其中所述轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物為嚙齒類動(dòng)物，優(yōu)選小鼠。10.Gpr100多肽用于鑒定治療、預(yù)防Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的其激動(dòng)劑或其拮抗劑的用途，所述Gpr100多肽包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列。11.Gpr100多核苷酸用于鑒定治療、預(yù)防Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的其激動(dòng)劑或其拮抗劑的用途，所述Gpr100多核苷酸包括SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNO4所示的核酸序列，或與其至少90％同一的序列。12.非人動(dòng)物或其部分，優(yōu)選細(xì)胞、組織或器官在鑒定用于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選糖尿病或肥胖癥的Gpr100多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法中的用途。13.通過(guò)前述任何一項(xiàng)權(quán)利要求的方法或用途鑒定的激動(dòng)劑或拮抗劑用于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病的用途。14.通過(guò)調(diào)控個(gè)體中Gpr100多肽的活性而對(duì)個(gè)體中葡萄糖、脂肪代謝或體重增加的調(diào)節(jié)加以調(diào)控的方法，所述Gpr100多肽包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列。15.權(quán)利要求14的方法，包括對(duì)所述個(gè)體施用Gpr100的激動(dòng)劑或拮抗劑。16.治療患有Gpr100相關(guān)疾病的個(gè)體的方法，所述方法包括提高或降低所述個(gè)體中Gpr100多肽的活性或量。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述方法包括對(duì)所述個(gè)體施用Gpr100多肽、Gpr100多肽的激動(dòng)劑或Gpr100的拮抗劑。18.診斷Gpr100相關(guān)疾病的方法，所述方法包括以下步驟(a)檢測(cè)患有或疑似患有所述疾病的動(dòng)物中Gpr100多肽的表達(dá)水平或表達(dá)模式；和(b)將所述表達(dá)水平或表達(dá)模式與正常動(dòng)物的表達(dá)水平或表達(dá)模式進(jìn)行比較。19.診斷Gpr100相關(guān)疾病的方法，所述方法包括在疑似患有所述疾病的個(gè)體中檢測(cè)如權(quán)利要求5所述的生物學(xué)參數(shù)的變化。20.Gpr100相關(guān)疾病，優(yōu)選肥胖癥或糖尿病易感性的診斷試劑盒，包括下列中的任何一種或多種Gpr100多肽或其部分；針對(duì)Gpr100多肽的抗體；或能編碼它們的核酸。21.前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中Gpr100相關(guān)疾病選自下組的疾病肥胖癥，包括肥胖癥或體重增加的預(yù)防、食欲抑制、代謝失調(diào)、糖尿病，包括I型糖尿病和II型糖尿病，以及相關(guān)病癥和體重相關(guān)的病癥、葡萄糖耐受性受損、胰島素抗性綜合癥、X綜合癥、外周神經(jīng)病、糖尿病性神經(jīng)病、與糖尿病相關(guān)的蛋白尿、脂類代謝病癥，包括高血糖癥、高脂血癥、血脂障礙、高甘油三酯血癥、急性胰腺炎、心血管疾病、外周血管疾病、高血壓、心臟肥大、局部缺血性心臟病、高膽固醇血癥、肥胖癥、和肥胖癥或體重增加的預(yù)防。22.參照并如附圖的圖1至13所示基本上在上文中所描述的方法或用途。全文摘要描述了鑒定適于治療、預(yù)防或減輕Gpr100相關(guān)疾病，尤其是糖尿病和肥胖癥的分子的方法，該方法包括確定候選分子是否為Gpr100多肽的激動(dòng)劑或拮抗劑，其中該Gpr100多肽包括SEQIDNO.3或SEQIDNO5所示的氨基酸序列，或與其至少90％同一的序列。文檔編號(hào)C07K14/435GK101031799SQ200580026868公開日2007年9月5日申請(qǐng)日期2005年6月21日優(yōu)先權(quán)日2004年6月21日發(fā)明者塞繆爾·阿帕里西奧,約翰·狄克遜,阿蘭·亨德里克,珍妮弗·M·霍伍德,德克·扎恩申請(qǐng)人:帕拉迪姆醫(yī)療有限公司