專(zhuān)利名稱(chēng)：用于在細(xì)胞抑制治療中抑制或降低抗性產(chǎn)生的核苷的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特殊的核苷，并且還涉及包含這些核苷的藥物。此外， 本發(fā)明涉及這些核苷在制備藥物(尤其是用于在細(xì)胞抑制治療中抑制或 降>[氐抗性產(chǎn)生的藥物)中的用途。
背景技術(shù)：
化療是癌癥疾病的標(biāo)準(zhǔn)療法。細(xì)胞抑制影響細(xì)胞分裂并因此尤其對(duì) 快速生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞是有毒性的。細(xì)胞抑制誘導(dǎo)凋亡，即其可導(dǎo)致腫瘤 細(xì)胞的細(xì)胞死亡。遺憾的是，目前在售的細(xì)胞抑制劑的無(wú)抗性治療期通 常沒(méi)有長(zhǎng)到足以完全破壞腫瘤。為改善這種狀況，已開(kāi)發(fā)出了 "化學(xué)增 敏劑"來(lái)對(duì)抗目前的耐藥性。
如果抗性是由"多藥抗性"基因(MDR-1)的擴(kuò)增(倍增)和過(guò)度 表達(dá)而引起的，那么這種抗性可通過(guò)其基因產(chǎn)物(P-糖蛋白)的失活而 降低(Takara K, Sakaeda T， Okumura K. An update on overcoming MDRl-mediated multidrug resistance in cancer chemotherapy. Curr. Pharm. Des. 2006; 12 (3): 273 - 86 )。
迄今，嚴(yán)重的副作用已阻礙了 P-糖蛋白抑制劑的使用。由于第三代 物質(zhì)的毒性作用，其很可能僅能用于短期治療，并且還僅能用于少數(shù)某 些腫瘤中，這些肺瘤的抗性完全基于所述"多藥抗性"基因的作用。此 外，已開(kāi)發(fā)了用于酪氨酸激酶受體或個(gè)別癌基因過(guò)表達(dá)的抑制劑。但是， 仍然僅有少數(shù)胂瘤適于治療(Desoize B., Jardillier J.， Multicellular resistance: a paradigm for clinical resistance Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2000; 36: 193 - 207 )。
由EP0 806 956已知用于在細(xì)胞抑制治療情況下抑制抗性產(chǎn)生的5-取代核苷。此處引用的化合物涉及(E)-5，-(2-溴乙烯基)-2'-脫氧尿苷 (BVDU)和(E)-5'-(2-溴乙烯基)尿嘧啶(BVU)。
這些化合物防止抗性的產(chǎn)生并對(duì)抗尚未存在的抗性。與數(shù)十年來(lái)對(duì)比的是，在世界范圍內(nèi)并沒(méi)有針對(duì)該技術(shù)方法的竟?fàn)?Fahrig， R.， Heinrich, J.C.， Nickel, B., Wilfert, F" Leisser, C.， Krupitza, G" Praha, C.， Sonntag， D.， Fiedler, B., Scherthan, H., and Ernst, H. Inhibition of induced chemoresistance by co-treatment with
(E)-5-(2-bromovinyl)-2，-deoxyuridine (RP101), Cancer Res. 63 (2003) 5745 - 5753 )。第 一種藥物BVDU在胰腺癌患者的兩個(gè)臨床研究中顯示 統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的效果。細(xì)胞抑制劑與BVDU共治療的效果較之任何其 它前述化學(xué)療法都更有效。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供在細(xì)胞抑制治療情況下抑制或降低抗性 產(chǎn)生方面相比現(xiàn)有技術(shù)中已知的化合物具有更高有效性的物質(zhì)。
此目的是通過(guò)具有權(quán)利要求1特征的核苷和具有權(quán)利要求20特征的 藥物而實(shí)現(xiàn)的。在權(quán)利要求22中提供了該類(lèi)型核苷的用途。其它的從 屬權(quán)利要求顯示了有利的發(fā)展。
本發(fā)明提供了通式I的核苷
其中，
Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通過(guò)氧原 子鍵合的前藥基團(tuán)，
R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Q亞烷基，
R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NR^R7或者R4與t^一;fe^示與A和R4相鄰的c碳原子之間的第二鍵，
R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及
R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙酰基，
排除具有以下基團(tuán)的化合物
Ri-Ny R2=OH， R3=R4=R5 = H;
R,Ns， R^O陽(yáng)乙SL^， R3 = R4 = R5 = H;
Ri-N3， 112=0-三苯甲基，R3 = R4=R5 = H;
R! = N3， R2=褲酸酯，R3 = R4 = R5=H;
Ri-N3， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5=H;
R,冊(cè)2， R2=OH， R3=R4=R5 = H;
R,NH2， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5 = H;
I^-F, R2=OH， R3 = R4 = R5=H;
R,F， R;j-O-乙?；?，R3 = R4 = R5 = H;
Ri-F， R2=三磷酸酯，R3 = R4 = R5 = H;
R,Cl, R2=OH， R3=R4=R5=H;
R,OH， R2=N3， R3 = R4=R5 = H;
R,OH， R2 = NH2， R3 = R4=R5 = H;
R^OH, R2 = NHS02(CH2)3-C1， R3 = R4 = R5=H;
R^OH， R2=NH-S02-(CH2)3-S03H， R3 = R4 = R5 = H;
R,OH， R2=C1, R3 = R4 = R5=H;
R^OH, R2=Br， R3 = R4 = R5 = H;
R,OH， R2 = I, R3 = R4 = R5=H;1^ = 011， R2=前藥基團(tuán)，R3 = R4 = R5 = H;
Rl=選自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R2=OH， R3 = R4=R5 = H;
Rl =選自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R2 =選自酯、氨基酸 酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R3 = R4=R5 = H; R4 = N3, R2 = N3， R3 = R4=R5 = H;
R!-NH2， R2-NHR9并且R9-H、 COCH3、 COC3H7、 COPh、 COOC2H5、 COOCH2CH=CH2、 COCH=CHCH3、 CHO或COOCH2Ph， R3 = R4=R5 = H;
R!-NHR9并且R9-COCH3、 COOC2H5， R2 = NH2， R3 = R4=R5=H;
R^NHCOOCHzPh, R2= NHCOOCH2CHCH2， R3 = R4 = R5=H;
R;NHCOOCH2Ph， R2=NH2， R3 = R4=R5 = H;
Ri-NHCOOCH2CI^CH2, R2 = NH2， R3 = R4=R5=H;以及
RfNHCHO, R2 = NHCHO， R3 = R4 = R5 = H。 同樣還提供了包含通式I核苷的藥物。
就用途而言，本發(fā)明特別涉及在細(xì)胞抑制治療情況下抑制或降低抗 性的產(chǎn)生。因此使用通式I的核苷其中，
Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、 子鍵合的前藥基團(tuán)，
OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通過(guò)M
R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-C8亞烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NRfiR" R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及
R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；?，
排除具有以下基團(tuán)的所述化合物
R,OH， R2 = OH， R3 = R4 = R5 = H;以及
Ri-OH， R2=前藥基團(tuán)，R3 = R4 = R5 = H。
其它用途涉及針對(duì)由細(xì)菌、瘧原蟲(chóng)或利什曼原蟲(chóng)(￡"^附"/|/")引 起的感染性疾病的無(wú)抗性(resistance-free)治療。
因此，可通過(guò)單次制劑(即以組合制劑的形式)或分開(kāi)的制劑來(lái)實(shí) 現(xiàn)本申請(qǐng)。在分開(kāi)的制劑的情況下，時(shí)間分離性施用所述兩種制劑也是 可以的。
就制劑(galenics)而言并沒(méi)有限制，現(xiàn)有技術(shù)中已知的所有劑型均 可使用。用于此目的的劑型包括例如片劑、膠嚢劑、噴霧劑、糖錠劑、 乳液劑、液體劑和安瓿。
與目前并不十分成功的用于對(duì)抗抗藥性的運(yùn)作模式相比，本發(fā)明的 物質(zhì)介入得要早得多。其防止抗性的產(chǎn)生。因此對(duì)抗了疾病的病因而非 其癥狀。


參考以下附圖和實(shí)施例，旨在更詳細(xì)地解釋本發(fā)明的主題，而不希 望將本發(fā)明的主題限于本文中所示的具體實(shí)施方案。
圖1至12顯示了根據(jù)本發(fā)明的化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相 比于單獨(dú)施用MMC或施用MMC和BVDU對(duì)時(shí)間進(jìn)程中AH13r細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響。因此，AH13r細(xì)胞接受增加劑量的細(xì)胞抑制性MMC。在 所有附圖中可觀察到，MMC與根據(jù)本發(fā)明的化合物一起使用的效果顯 著好于MMC和BVDU。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例 概述
根據(jù)以下所述文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，合成了以下反應(yīng)物5，-0-(4-氯苯曱SL^)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷(P. Herdewijn， J. Balzarini, E. De Clerq， R. Pauwels， M. Baba， J. Med. Chem. 1987, 30， 1270 — 1278 )、 5'-0-曱基碌?；?-2'-脫氧誦5-(丑)-溴乙烯基尿苷(P. M. Reddy， T. C. Bruice; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003,13; 1281 - 1286 ), 5'-0-三苯甲基-2'國(guó)脫氧-5-乙基-尿苷(C. K. Chu， R. F: Raymond, M. K: Ahn， V. Giliyar， Z. P. Gu， J. Med. Chem. 1989， 32, 612 — 617 )、 S畫(huà)(2隱羥乙基)畫(huà)疏代特戊酸酯(I. Lefebvre， C. P6rigaud， A. Pompon， A. -M. Aubertin， J. -L. Girardet， A. Kirn, G Gilles和J.畫(huà)L. Imbach， J. Med. Chem. 1995,38， 3941 - 3950 )、 5-(E)國(guó)溴乙烯基尿普(E. De Clercq, C. Desgranges， P. Herdewijn, A. S. Jones, M. J. McLean, R. T. Walker， J. Med. Chem. 1986， 29， 213 — 217 )、 5畫(huà)珙尿嘧啶(J. Asakura， M. J. Robins, J. Org. Chem. 19卯，55， 4928 - 4933 )、 2'國(guó)脫氧-2'-氟尿苷(Y. Saito， K. Utsumi, T. Maruyama, T. Kimura， I. Yamamoto， D. D. Richman， Chem. Pharm. Bull. 1994， 42， 595 — 598 )、 5國(guó)碟國(guó)2，-脫氧-2'-氟尿苷(T. Kniess, M. Grote, B. Noll, B. Johannsen, P. Naturforsch. 2003, 58b， 226 — 230)、 3畫(huà)(2'-脫氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸甲酯(J. Matulic-Adamic， A. T. Daniher， A. Karpeisky， P. Haeberli， D. Sweedler， L Beigdman， Bioorg. Med. Chem. Lett. 2000， 10,1299 - 1302)、 3,5-二-0-苯甲?；?2-脫氧-2-氟-a-D-溴化阿拉 伯糖、l-(2'-脫氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶(H. G Howell， P. R. Brodfuehrer, S. R. Brundige， D. A. Benigni, C. Sapino， J. Org. Chem. 1988,53,85-88)、 5-(E)-溴乙烯^^香(P. J. Barr, A. S. Jones, G Verhelst， R. T. Walker, J. Chem. Soc. Perkin Transactions 1， 1981, 565 — 570)和 l-(2，3，6-三-0-乙SL^-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-碟尿嘧啶(M. J. Robins, S. Manfredini， S. G Wood, R. J. Wanklin, B. A. Rennie， S. L. Sacks, J. Med.Chem. 1991， 34, 2275 - 2280 )、 5，-^J^2',5，-雙脫氧-5畫(huà)(E)-溴乙烯基尿苷、 5'-溴-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷、5'-氯-2'，5，-雙脫氧-5-(E)-澳乙烯基 尿苷、5'-疊氮基-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷、3'-氯-2'，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和3'-疊氮基-2，，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷(R. Busson, L. Colla， H. Vanderhaeghe, E. De Clercq, Nucleic Acids Research, Symposium Series, 1981， 9, 49 — 52)、 3'-0-(叔丁基二甲基曱珪烷基-2，-脫氧-5-(E)-溴乙 烯基尿香(P. Herdewijn， R. Ramamurthy， E. De. Clercq， W. Pfleiderer, Helv. Chim. Acta, 1989, 72， 1739 — 1748 )、 2'國(guó)脫氧誦3，畫(huà)曱lt^國(guó)5-(E)-溴乙烯 基尿苷(M. Ashwell， A. S. Jones, A. Kumar, J. R. Sayers, R. T. Walker, Tetrahedron, 1987, 43, 20, 4601 — 4608 )。
所有其它的反應(yīng)物都是可商業(yè)獲得的。
通過(guò)在珪膠60 ( FLUKA, 0.040 -0.063 mm)上利用指定溶劑來(lái)進(jìn)行 這些物質(zhì)的柱色譜純化。對(duì)于薄層色譜而言，使用硅膠薄層(Merck， silica gel 60 F254 )。
利用85%磷酸作為外部標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)量"P-NMR譜。 1. 3'-取代的BVDU衍生物
1.1. 3'腸卣素國(guó)BVDU
1.1.1.2'，3，-雙脫氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
1.1.1.1. 2，3'-脫7J^2'-脫氧-5'-0-苯甲StJ^5-(E)-溴乙烯基尿苷
在155分鐘內(nèi)，將13.8 g (68 mmol)偶氮二曱酸二異丙酯和8.3 g (68 mmol)苯曱酸在75 ml DMF中的溶液滴加到15.0 g (45 mmol) BVDU和 17.8 g (68 mmol)三苯基膦的溶液中。然后在室溫下再攪拌30分鐘并向其 中再加入17.8 g三苯基膦。在10分鐘內(nèi)，向其中滴加13.8 g (68 mmol)偶 氮二甲酸二異丙酯在10 ml DMF中的溶液，在室溫下對(duì)其攪拌3小時(shí)。 DC-對(duì)照(二氯曱烷/甲醇5:1)顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物倒入L5升 乙醚中，抽濾出沉淀物并用乙醚清洗。干燥后產(chǎn)量為10.1 g (53.5%)。
1.1.1.2. 2',3，-雙脫氧-3'-溴-5，-0-苯曱?；?5-(E)-溴乙烯基尿苷
將3.0 g (7.16 mmol) 2，3'-脫7J^2'陽(yáng)脫氧誦5'國(guó)0國(guó)苯曱?；鶉?guó)5國(guó)(E)隱溴乙烯基
29尿苷和2.40 g (15.0 mmol)氫溴酸吡啶混懸于20 ml DMF中并加熱至100 r。 3小時(shí)后停止反應(yīng)(DC-對(duì)照，20:1的二氯甲烷/曱醇)。用200ml水 稀釋所得溶液并用乙酸乙酯萃取。將純化的乙酸乙酯相分別用100 ml 0.5
M鹽酸清洗兩次和用100 ml食鹽溶液清洗三次，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并 通過(guò)柱色譜先用二氯甲烷/乙酸乙酯12 : 1純化，然后再用氯仿/甲醇25 : 1 純化數(shù)次。產(chǎn)量為2.0 g (55.8%)的無(wú)色泡沫。
1.1.1.3. 2'，3'-雙脫氧-3，-溴-5'-(E)誦溴乙烯基尿苷
將1.92克(3.84 mmol)2',3'-雙脫氧-3'-溴-5，-0-苯曱絲-5-(E)-溴乙烯基 尿苷溶于25 ml THF中并與10 ml水和9.6 ml (19.2 mmol) 2 M氬氧化鈉溶 液混合。2.5小時(shí)后停止轉(zhuǎn)化(DC-對(duì)照，15 : l的二氯甲烷/曱醇)。將該 批次倒入50 ml飽和食鹽溶液中并用乙酸乙酯萃取。將合并的萃取物用硫 酸鎂干燥。過(guò)濾后蒸發(fā)掉溶劑，通過(guò)柱色鐠(氯仿/甲醇15 : 1)反復(fù)純化 而得到1.3 g (81.2%)白色穩(wěn)定泡沫。
iH國(guó)NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.45 (m, 1H); 2.72 (m, 1H); 3.71 (m， 2H); 4.19 (m, 1H); 4.61 (m, 1H); 5.31 (s, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.83 (d， 1H); 7.25 (d， 1H); 8.07 (s， 1H); 11.60 (s， 1H) ppm。
圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相比于 單獨(dú)施用MMC或者M(jìn)MC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
l.l丄 l-(3'-氯-2,3-雙脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧咬二酮
1.1.2.1 l-(5'-0-(4國(guó)氯苯曱?；?-3'-氯-2',3'-雙脫氧-p-D-蘇國(guó)呋喃戊糖
基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2,4-(lH，3H)-嘧咬二酮
將2.0 g (4.24 mmol) 5'-0-(4-氯苯甲?；?-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于40gHMPT中，并向其中加入1.6g(13.44mmo1)亞石克酰氯。45分鐘 后停止反應(yīng)。將其與水混合并用乙酸乙酯萃取。用硫酸鈉干燥后，過(guò)濾并 離心除去溶劑，通過(guò)柱色i脊純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯7:3)。得到1.32 g (64%) 熔點(diǎn)為89-9lX:的無(wú)色固體。
1.1.2.2.1-(3'-氯-2'，3'- 二脫氧-P-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2,4-(lH，3H)-嘧啶二酮
將0.9 g (1.84 mmol) l-(5'-0誦(4-氯苯甲絲)畫(huà)3，隱氯國(guó)2'，3，-二脫氧-P-D-蘇國(guó) 呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮溶于50 ml甲醇中， 加入0.15 g (2.78 mmol)甲醇鈉。2小時(shí)后，DC對(duì)照(二氯曱烷/甲醇95 : 5 ) 顯示反應(yīng)已結(jié)束。加入離子交換劑(DOWEX-H+ 50 WX 4 (Merck， 105238)， 甲醇活化)，過(guò)濾并再次用甲醇清洗。離心甲醇后，通過(guò)柱色鐠實(shí)現(xiàn)純化 (乙酸乙酯)。得到0.43 g (67%)熔點(diǎn)183 - 185'C的無(wú)色固體。
^-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.37 (m， 1H); 3.00 (m， 1H); 3.77 (m， 2H); 4.20 (m， 1H); 4.76 (m， 1H); 5.00 (t, 1H); 6.00 (m， 1H); 6.95 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 7.92 (s， 1H); 11.63 (s， 1H) ppm.
1.2.3'-由素-BVDU的5'-0-衍生物 1.2.1. 3'-卣素-BVDU的5'-0-?；苌?br> 1.2.1.1. 5'-0-特戊?；?3，-氯-2'，3'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿香
將1.25 g (3.55 mmol) 2'，3'-雙脫氧-3'-氯-5誦(E)誦溴乙烯基尿普、0.05 g (0.41 mmol)4-二甲基氨基吡咬溶于THF/吡咬(各自5 ml)中，冷卻至0 。C并與0.54 g (4.44 mol)特戊酰氯混合。4吏其升至室溫。
2小時(shí)以后，停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇20 : 1)。在倒入含 有檸檬酸的50ml水溶液中后，用乙酸乙酯萃取，用磷酸鹽緩沖液清洗合 并的萃取物，用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色譜實(shí)現(xiàn)純 化(二氯甲烷/甲醇75 : 1 )。得到1.33 g (86.4%)熔點(diǎn)136'C的無(wú)色固體。
力-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.14 (s, 9H); 2.57 (m， 1H); 2.71 (m, 1H); 4.28 (m， 3H); 4.70 (m, 1H); 6.23 (m, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.29 (s， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.65 (s， 1H) ppm.
1.2.1.2. 5'-0-乙IUJ1^-(E)腸5誦(2畫(huà)溴乙烯基)-3，國(guó)氯-2'，3'-雙脫氧尿苷)
將310 mg (0.88 mmol) 2',3'-雙脫氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于二氯 甲烷/他咬(各3ml)中并與108mg(lmmol)乙氡基甲酰氯在0。C下混合。 2小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇25 : 1)。用20 ml二氯曱烷 進(jìn)##釋?zhuān)?M鹽酸清洗，然后用磷酸鹽緩沖液清洗。用硫酸鎂干^，
31過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色譜實(shí)現(xiàn)純化(氯仿/甲醇25:l)。得到200 mg (53.6%)熔點(diǎn)181'C的無(wú)色固體。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.23 (t, 3H); 2.65 (m， 2H); 4.15 (q， 2H); 4.37 (m, 3H); 4.71 (m, 1H); 6.22 (m， 1H); 6.87 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.78 (s， 1H); 11.64 (s， 1H) ppm.
1.2.2. 3'國(guó)卣素-BVDU的^J^酸酯
1.2.2.1. 5'-0-(叔丁氧羰基氨基乙酰基)-3'-氯-2'，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙蹄基 尿苦
將1.06 g (3 mmol) 2'，3'-雙脫氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷、0.58 g (3.3 mmol) N-BOC-甘氨酸、0.45 g (3.3 mmol)l-羥基苯并三唑和0.99 g (3.3 mmol) l畫(huà)(3誦二甲基絲丙基)-3畫(huà)乙基碳二亞胺曱;^f匕物溶于25 ml 二氯曱 烷中。8小時(shí)后，再次各自加入同樣量的N-BOC-甘氨酸、1-羥基苯并三唑 和l-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺曱碘化物。再過(guò)16小時(shí)后停止反 應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇25: 1)。用水清洗二氯甲烷溶液，用硫酸鈉 干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色鐠實(shí)現(xiàn)純化(二氯曱烷/甲醇25: 1 )。得到1.03 g (68%)無(wú)色泡沫。
tH-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.37 (s， 9H); 2.57 (m, 1H); 2.71 (m, 1H); 3.72 (m， 2H); 4.23 (m, 1H); 4.33 (m, 2H); 4.69 (m， 1H); 6.24 (m， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.26 (t, 1H); 7.31 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
1.2.2.2. 5，-0-(銨乙酰基-3'-氯-2'，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷-三氟乙酸 鹽
將0.81 g (1.6 mmol) 5'國(guó)0誦(叔丁ltJJl^^J^乙絲)畫(huà)3'-氯-2，，3'-雙脫 氧一5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于20 ml三氟乙酸中。45分鐘后BOC保護(hù)基的 脫除完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/曱醇95 :5)。離心除去三氟乙酸，將殘留 物吸收在一些曱醇中并用乙醚進(jìn)行處理。將沉淀物抽濾出來(lái)，用乙醚清洗 并用甲醇/乙醚再次沉淀。過(guò)濾后，用乙醚清洗并千燥，得到產(chǎn)量為0,38g (45.7%)的無(wú)色粉末。
iH國(guó)匪R (300 MHz, DMSO-d6): 2.59 (m， 1H); 2.75 (m， 1H); 3.87 (m， 2H);4.26 (m, 1H); 4.44 (m, 2H); 4.73 (m， 1H); 6.24 (m， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.32 (d， 1H); 7.80 (s, 1H); 8.32 (s, 3H); 11.68 (s， 1H) ppm.
1.2.2.3. 4-(叔丁氧基羰基)氨基小(3'-氯-2'，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 國(guó)5'-基)丁酸酯
將2.0 g (9.84 mmol) N畫(huà)BOC-4-^Jl丁酸和1.2 g (9.84 mmol) 4國(guó)二曱基 #^吡咬溶于20 ml 二氯曱烷中。向其中加入3.46 g (9.84 mmol) 2',3'-雙脫 氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷，冷卻至0。C后，再向其中加入2.03 g (9.84 mmol) N，N，-二環(huán)己基碳二亞胺。使其升至室溫并在室溫下攪拌20小時(shí)后 停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯曱烷/曱醇20:l)。將該批次過(guò)濾并混合。在溶 于乙酸乙酯后，將其冷卻至-20。C，過(guò)濾出沉淀物并用少量冷卻至-20。C的 乙酸乙酯清洗。將濾液混合并通過(guò)柱色鐠用二氯甲烷/乙酸乙酯(4:1)純 化數(shù)次。得到3.2 g (60.6%)無(wú)色泡沫。
力曙匪R (500 MHz, DMSO-d6): 1.36 (s， 9H); 1.62 (m， 2H); 2.31 (m， 2H); 2.52 (m, 1H); 2.72 (m， 1H); 2.92 (m， 2H); 4.31 (m， 3H); 4.71 (m， 1H); 6.22 (m， 1H); 6.79 (m， 1H); 6.92 (d, 1H); 7.31 (m， 1H); 7.77 (s， 1H); 11.64 (s, 1H)。
圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的該化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC )相比于單 獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
1.2.2.4. 4-銨-l-(3'-氯-2',3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷-5'-基)丁酸酯-三 氟乙酸鹽
將310 mg (0.577 mmol) 4-(叔丁|^^1^)#^-1-(3，-氯-2'，3'-雙脫氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷-5'-基)丁酸酯溶于5 ml二氯甲烷中并與5 ml三氟乙酸 混合。在室溫下攪拌30分鐘后，轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇20: 1)。蒸出二氯甲烷和三氟乙酸，將殘留物與20 ml乙醚混合。對(duì)其攪拌2 小時(shí)直到產(chǎn)生微細(xì)的粉狀沉淀，過(guò)濾，用乙醚清洗并在真空下干燥。得到 250 mg (78.7%)熔點(diǎn)89。C的無(wú)色固體。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.82 (m, 2H); 2.49 (m， 2H); 2.59 (m, 1H); 2.72 (m， 1H); 2.81 (m， 2H); 4.22 (m， 1H); 4.32 (m, 2H); 4.69 (m， 1H); 6.22 (m, 1H); 6.94 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.73 (s, 3H); 7.78 (s， 1H); 11.65 (s，
331H)。
1.2.2.5. 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰)-3'-氯-2，,3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙
婦基尿香
在0"C下，將1.00 g (2.84 mmol) 3'-氯-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20ml二氯甲烷中。然后加入618 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N-叔丁氧 基絲-L-纈氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N，N-二甲基絲吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺，隨后在室溫下攪拌jl應(yīng) 混合物20小時(shí)。濾出所得沉淀物并用二氯甲烷清洗。將濾液用稀檸檬酸溶 液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na;jS04干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上除去溶劑。通過(guò)柱色if( CHCVMeOH， 95/5 )純化，得到1.09 g (1.98 mmol， 70。/0)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰)-3'-氯-2'，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷白色固體，其熔點(diǎn)為75-76'C。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.85 (d， 3H); 0.87 (d, 3H); 1.38 (s, 9H); 1.98 (m， 1H); 2.54 (m, 1H); 2.73 (m, 1H); 3.81 (t， 1H); 4.26 (m， 2H); 4.34 (m， 1H); 4.68 (q, 1H); 6.24 (t， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.21 (d, 1H); 7.31 (d， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.6. (3'-氯-2'，3'-雙脫氧-5'-0-L-纈氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸 鹽
在0。C下，將600 mg (1.09 mmol) 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰 基)-3'-氯-2，,3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入1.0 ml (14 mmol)三氟乙酸，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀上除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5ml乙醚混合并在室溫下攪拌20小時(shí)。傾 析出溶劑，在40'C下將殘留物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到540 mg (956 Hmol 880/c)的(3'-氯-2'，3，-雙脫氧-5'-0-L-纈氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟 乙酸鹽白色固體，其熔點(diǎn)為110-112°C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 0.95 (d， 3H); 0.97 (d, 3H); 2.17 (m， 1H); 2.60 (m, 1H); 2.79 (m， 1H); 3.93 (bs， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.46 (m， 2H); 4.74 (q, 1H); 6.26 (dd， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.32 (d, 1H); 7.80 (s， 1H); 8.34 (bs， 3H); 11.69 (s, 1H) ppm.1.2.2.7. 5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰-L-纈氨酰)-3，-氯-2，，3，-雙脫氧
-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下，將1.00 g (2.84 mmol)3，-氯-2'，3'-雙脫氧-5'-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20 ml二氯曱烷中。然后加入880 mg (2.78 mmol， 1.0當(dāng)量)N-叔丁氧 基餘-L-纈氨酰-L-翔氨酸、347 mg (2.84 mmol, 1.0當(dāng)量)N，N-二曱基M 吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺，然后在室溫 下攪拌^^應(yīng)混合物3天。過(guò)濾出所得的沉淀物并用二氯曱烷清洗。將濾液 用稀檸檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S(Xt干燥。 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色譜純化(二氯甲烷/乙酸3/1),得到 610 mg (939 nmol, 33%)的5'國(guó)0畫(huà)(N-叔丁flJJli^L-纈氨酰(valvyl)畫(huà)L曙 纈氨酰(valinoyl) )-3'-氯-2，,3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，其熔 點(diǎn)為102-103。C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.81畫(huà)0.卯(m, 12H); 1.37 (s， 9H); 1.91 (m, 1H); 2.06 (m， 1H); 2.54 (m, 1H); 2.74 (m， 1H); 3.88 (t， 1H); 4.19 (t, 1H); 4.23-4.35 (m, 3H); 4.68 (q， 1H); 6.24 (t, 1H); 6.64 (d， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 8.03 (d, 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
1.2.2.8.3，-氯-2，，3，-雙脫氧-5'-0-(L-纈氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴乙烯基尿 苷三氟乙酸鹽
在0。C下，將300 mg (462 nmol)5'-0-(N-叔丁lLU^-L-纈氨酰-L-纈 氨酰)-3'-氯-2，,3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入 0.5ml(6.7mmol)三氟乙酸，然后將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀上除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5ml乙醚混合并在室溫下攪拌l小時(shí)。傾析 出溶劑，在40。C下將殘留物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到280 mg (422 fimol， 91。/。)的[3'-氯-2',3'-雙脫氧-5，-0-(L-綴氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴乙烯 基尿苷三氟乙酸鹽白色固體，其熔點(diǎn)為169-170°C。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.91-0.96 (m， 12H); 2.08-2.14 (m, 2H); 2.59 (m, 1H); 2.76 (m, 1H); 3.71 (t, 1H); 4.22-4.26 (m, 2H); 4.31-4.38 (m, 2H); 4.68 (q， 1H); 6.25 (t, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.32 (d， 1H); 7.81 (s， 1H); 8.06 (bs， 3H); 8.56 (d， 1H); 11.68 (s， 1H) ppm.1.2.2.9 3，-疊氮基-5'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰-L-纈氨酰)-2',3，-雙脫
氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下，將1.02 g(2.84 mmol)3，-疊氮基-2，，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷置于20 ml 二氯甲烷中。然后加入880 mg (2.78 mmol， 1.0當(dāng)量)N-叔 丁HiJl^-L-纈氨酰-L-翔氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N，N，-二甲 基^J^吡啶和587 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N,N，-二環(huán)己^^碳二亞胺，然后 在室溫下攪拌^^應(yīng)混合物24小時(shí)。過(guò)濾出所得的沉淀物并用二氯甲烷清 洗。用稀檸檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCI溶液清洗濾液，然后用Na2S04 干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(二氯曱烷/乙酸乙酯 3/1 )，得到550 mg (838 pmol, 30%)的3'國(guó)疊氮基陽(yáng)5'國(guó)0-(N-叔??？LiJl^-(L誦 纈氨酰-L-纈氨酰)-2'，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，其熔點(diǎn)為95 -97°C。
^國(guó)NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.81-0.91 (m， 12H); 1.37 (s， 9H); 1.91 (m， 1H); 2.07 (m， 1H); 2.38 (m， 1H); 2.51 (m， 1H); 3.88 (t， 1H); 4.01 (q, 1H); 4.19 (t, 1H); 4.30 (m， 2H); 4.45 (q， 1H); 6.12 (t, 1H); 6.64 (d， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); 8.04 (d, 1H); 11.66 (s, 1H) ppm.
1.2.2.10.3'-疊氮基-2，，3，-雙脫氧-5，-0-(L-纈氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴乙烯
基尿苷三氟乙酸鹽
在0。C下，將200 mg (305 ^111101)3'-疊氮基-5，-0-(]\-叔丁^^1^-(1^ 纈氨酰-L-纈氨酰)-2，，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于4 ml 二氯甲烷中， 加入0.33 ml (4.47 mmol)三氟乙酸，然后將室溫下攪拌反應(yīng)混合物3小時(shí)。 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5 ml乙醚混合并在室溫下攪拌1小 時(shí)。傾析出溶劑，在40。C下將殘留物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到200 mg (298 nmol 98%)的[3，-疊氮基國(guó)2，，3'國(guó)雙脫氧-5'-0-(L-纈氨酰-L-纈氨 酰)-5-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸鹽白色固體，其熔點(diǎn)為113-115。C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.91-0.96 (m， 12H); 2.08-2.14 (m， 2H); 2.40 (m, 1H); 2.53 (m， 1H); 3.72 (t， 1H); 4.00 (q, 1H); 4.25 (m, 1H); 4.31-4.38 (m, 2H); 4.45 (q， 1H); 6.13 (t, 1H); 6.卯(d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.80 (s, 1H); 8.08 (m， 3H); 8.58 (d, 1H); 11.67 (s， 1H) ppm.
361.2.3. 3，-閨素-BVDU的^J^磷酸酯
1.2.3.1. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-氟-2，,3'-雙脫氧尿苷-5'-[苯基-(甲猛-L-丙 氨酰)-磷酸酯
將255 mg (1.20 mmol)二氯磷酸苯酯和169 mg (1.20 mmol) L-丙氨酸 甲酯鹽酸鹽溶于或混懸于4mlTHF中。利用干水浴將其冷卻到-78'C，在 此溫度下滴加244 mg (2.40 mmol)溶解在4 ml THF中的三乙胺。30分鐘 后停止滴加并逐漸使其升至室溫，總共攪拌24小時(shí)。此后加入270 mg (0.80 mmol) 2'，3'-雙脫氧-3'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿普并用干水浴冷卻至-78r。向 所得的混懸液中滴加265 mg (3.22 mmol)N-甲基咪唑在5 ml THF中的溶 液。30分鐘后停止滴加并逐漸使其升至室溫。再過(guò)48小時(shí)停止反應(yīng)(DC 對(duì)照，氯仿/乙酸乙酯3:2)。將該批次加入到20ml磷酸鹽緩沖液和25ml 乙酸乙酯的混合物中，將水相分別用20 ml乙酸乙酯再萃取兩次。用硫酸 鎂干燥后，過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色鐠以二氯甲烷/乙酸乙酯3 : 2 實(shí)現(xiàn)純化。得到180mg(38.8Yo)無(wú)色泡沫。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.23 (d， 3H); 2.35 (m， 1H); 2.49 (m, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.85 (m, 1H); 4.21 (m, 2H); 4.39 (m， 1H); 5.32 (m, 1H); 6.18 (m， 2H); 6.84 (d， 1H); 7.19 (m， 3H); 7.29 (d， 1H); 7.36 (m， 2H); 7.87 (s， 1H);11.67 (s， 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 5.08; 5.29 ppm.
1.2.3.2. (E)-5國(guó)(2-溴乙烯基)-3'-氯畫(huà)2，，3，-雙脫氧尿苷-5'誦[苯基-(甲l^畫(huà)L誦丙 氨酰)]-磷酸酯
將1.19 g (5.67 mmol)二氯磷酸苯酯和0.79 g (5.67 mmol) L-丙氨酸曱酯 鹽酸鹽溶解或混懸于12mlTHF中。利用干水浴將其冷卻到-78'C，在此溫 度下滴加1.15 g (11.34 mmol)溶解在12 ml THF中的三乙胺。30分鐘后停 止滴加并逐漸使其升至室溫，總共攪拌24小時(shí)。
此后加入1.0 mg (2.84 mmol) 2',3'-雙脫氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷 并用千水浴冷卻至-78t:。向所得的混懸液中滴加1.17 g (14.2 mmol)N-甲基 咪唑在12 ml THF中的溶液。30分鐘后停止滴加并逐漸^使其升至室溫。再 過(guò)48小時(shí)停止>^應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/乙酸乙酯3:2)。將該批次加入到75ml磷酸鹽緩沖液和50ml乙酸乙酯的混合物中，將水相分別用40 ml乙酸 乙酯再萃取兩次。用硫酸鎂干燥后，過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色語(yǔ)以 二氯曱烷/乙酸乙酯3 :2和氯仿/丙酮3:1實(shí)現(xiàn)純化。得到950 mg (56.5%) 無(wú)色泡沫。
^國(guó)NMR (500 MHz, CDC13): 1.37 (m， 3H); 2.38 (m， 1H); 2.62 (m， 1H); 3.71， 3.72 (s， 3H); 3.75, 3.85 (m, 1H); 4.09 (m， 1H); 4.41 (m， 4H); 6.24， 6.32 (m， 1H); 6.71 (m， 1H); 7.41 (m, 6H); 7.66， 7.70 (s， 1H); 8.88. 8.92 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, CDC13): 2.87; 2.74 ppm.
圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC )相比于單 獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
1.2.3.3. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-氯-2，，3'-雙脫氧尿苷-5'-[苯基-節(jié)氧基-L-丙 氨酰)-磷酸酯
將606 mg (2.87 mmol) 二氯磷酸苯酯和1010 mg (2.87 mmol) L-丙氨 酰芐基4誦曱基^^酸酯(L-alaninbenzylester 4國(guó)Methylbenzolsulfonat)溶 于15mlTHF中。利用干水浴將其冷卻到-78。C，在此溫度下滴加582 mg (5.75 mmol)溶解在5 ml THF中的三乙胺。35分鐘后停止滴加并逐漸使其 升至室溫，總共攪拌24小時(shí)。此后加入505 mg (1.44 mmol) 2，,3，-雙脫氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷并用干水浴冷卻至-78X:。向所得的混懸液中滴加 650 mg (8.0 mmol) N-甲基咪唑在5 ml THF中的溶液。30分鐘后停止滴加 并逐漸使其升至室溫。再過(guò)48小時(shí)停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/曱醇25:1 )。 將該批次加入到50 ml磷酸鹽緩沖液和25 ml乙酸乙酯的混合物中，將水 相分別用25 ml乙酸乙酯再萃取兩次。用硫酸鎂干燥后，過(guò)濾并離心除去 溶劑，通過(guò)柱色鐠以二氯甲烷/乙酸乙酯3 : 2實(shí)現(xiàn)純化。得到520 mg (53.0%) 無(wú)色泡沫。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.25 (2 X d, 3H); 2.58 (m, 2H); 3.92 (m， 1H); 4.26 (m， 3H); 4.67 (m， 1H); 5.08 (m, 2H); 6.25 (m， 2H); 6.88 (2 X d, 1H); 7.18 (m， 3H); 7.36 (m, 8H); 7.81 (2 X s， 1H); 11.87 (2 X d， 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 4.40; 4.57 ppm.1.2.3.4. (E)-5-(2-溴乙烯基)-3'-溴-2'，3'-雙脫氧尿苷-5'-[苯基-(曱氣基-L-丙 氨酰)-磷酸酯
將401 mg (1.9 mmol)二氯磷酸苯酯和265 mg (1.9 mmol) L-丙氨酸曱 酯鹽酸鹽溶解或混懸于6mlTHF中。利用干冰^P其冷卻到-78。C，在此 溫度下滴加385 mg (3.8 mmol)溶解在6 ml THF中的三乙胺。30分鐘后停 止滴加并逐漸使其升至室溫，總共攪拌24小時(shí)。此后加入500 mg (1.26 mmol) 2，，3'-雙脫氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷并用干水浴冷卻至-78"C。向 所得的混懸液中滴加415 mg (5.05 mmol) N-甲基咪唑在6 ml THF中的溶 液。30分鐘后停止滴加并逐漸使其升至室溫。此后再過(guò)48小時(shí)停止反應(yīng) (DC對(duì)照，氯仿/乙酸乙酯1:1)。將該批次加入到25ml磷酸鹽緩沖液和 25 ml乙酸乙酯的混合物中，將水相分別用20 ml乙酸乙酯再萃取兩次。用 硫酸鎂干燥后，過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色鐠實(shí)現(xiàn)純化(二氯甲烷/ 乙酸乙西旨3:2)。得到386 g (48.1%)無(wú)色泡沫。
工H畫(huà)NMR (500 MHz, DMSO-d6): 1.25 (d， 3H); 2.71 (m， 2H); 3.61 (s， 3H); 3.85 (m， 1H); 4.18 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.42 (m, 1H); 4.66 (m， 1H); 6.11 (m, 1H); 6.28 (m， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.19 (m， 3H); 7.31 (m， 1H); 7.38 (m， 2H); 7.81 (s, 1H); 11.65 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， DMSO-d6): 5.04; 5.11 ppm.
1.2.3.5. [3'-疊氮基-5-(E)-溴乙烯基-2，,3'-雙脫氧尿苷l(shuí)-5'-基-(甲氧基-L-丙
氨酰)-苯基磷酸酯
在陽(yáng)78。C下將600 mg (2.84 mmol， 2當(dāng)量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2當(dāng)量)L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽置于7 ml THF中。將576 mg (5.69 mmo1，4當(dāng)量)三乙胺溶于7mlTHF中，在30分鐘內(nèi)逐滴加入，然后在室 溫下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至-78"C并加入509 mg (1.42 mmol) 3，-疊氮基-2'，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分鐘內(nèi)向所得溶液中滴加 700 mg (8.53 mmol， 6當(dāng)量)N-甲基咪唑在7 ml THF中的溶液，^在室 溫下攪拌20小時(shí)。將該批次加入到25 ml磷酸鹽緩沖液和25 ml乙酸乙酯 的混合物中，將水相分別用20 ml乙酸乙酯再萃取兩次。將合并的有^M目 用Na2S04千燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(二
39氯甲烷/乙酸乙酯1/1;乙酸乙酯),得到250 mg (417 jtmol, 29%)的[3'-疊氮 基-5-(E)-溴乙烯基-2',3'-雙脫氧尿苷-5，-基-(甲氧基-L-丙氨酰)-苯基磷酸酯 白色固體。
力誦醒R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20 (d, 3H); 1.23* (d, 3H); 2.38-2.47 (m， 4H); 3.57 (s， 3H); 3.59* (s， 3H); 3.80-3.91 (m， 2H); 4.03 (q， 1H); 4.08 (q, 1H); 4.16-4.21 (m, 1H); 4.23-4.29 (m, 3H); 4.45-4.52 (m， 2H); 6.09-6.16 (m， 4H); 6.86-6.89 (m, 2H); 7.16-7.22 (m, 6H); 7.28-7.32 (m, 2H); 7.34-7.38 (m， 4H); 7.82 (s, 2H); 11.65 (s, 1H); 11.66* (s, 1H) ppm.該物質(zhì)包含非對(duì)映體 混合物(比例約為1.2 : 1 )。標(biāo)有的*信號(hào)與較少的異構(gòu)體相關(guān)。
31P-NMR (122 MHz， DMSO-d6): 5.06; 5.20 ppm 1.2.4. 3'-卣素-BVDU的磷酸衍生物
1.2.4.13'-氯-2，,3'-雙脫氧-5-(E)-(2-溴乙烯基尿苷)-5'-基-二乙基磷酸酯
將500 mg (1.42 mmol)2，,3，-雙脫氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于10 ml THF和1 ml吡咬中。在冰浴中冷卻至0°C,在5分鐘內(nèi)滴加735 mg (4.3 mmol)氯磷酸二乙酯的溶液。18小時(shí)后，再次加入1 ml吡啶和735 mg氯 磷酸二乙酯，再18小時(shí)后，轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。將 該批次加入到20 ml磷酸鹽緩沖液和25 ml乙酸乙酯的混合物中，將水相 用15 ml乙酸乙酯再萃取三次。將合并的有;M目用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離 心除去溶劑后，通過(guò)反復(fù)柱層析(氯仿/甲醇15:1)實(shí)現(xiàn)純化。所得的油 在用環(huán)己烷研磨之后固化。干燥后，得到510mg(73.6"/o)無(wú)色泡沫。
^隱NMR (300 MHz, CDC13): 1.38 (m， 6H); 2.55 (m, 1H); 2.67 (m， 1H); 4.21 (m, 5H); 4.32 (m， 2H); 4.49 (m, 1H); 6.35 (t， 1H); 6.78, (d， 1H); 7.44 (d, 1H); 7.74 (s, 1H); 8.91 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz, CDC13): 0.75 ppm.
1.2.4.2. 環(huán)水楊醇基-5'-0-(E)-(2-溴乙烯基)-3'-氯-2'，3'-雙脫氧尿苷基-磷
匕 曰
將265 mg (2.13 mmol)2-羥基千醇溶于5 ml THF中并冷卻至-78匸(丙 酮/干冰)。此后加入327 mg磷酰氯，最后加入431 mg三乙胺在THF中的
405ml溶液。20分鐘后停止反應(yīng)。在-78C下再攪拌45分鐘，然后移除冷浴 并使其升至室溫。將形成的無(wú)色混懸液在室溫下攪拌2.5小時(shí)。
此后再次冷卻到-78C并加入溶解在2.5 ml THF中的466 mg (5.68 mmol)N-曱基咪唑。將500 mg (1.42 mmol)2'，3'-雙脫氧-3'-氯-5-(E)-溴乙烯 基尿苷溶解在10 ml THF中并在30分鐘內(nèi)逐滴加入。逐漸使其升至室溫 并在室溫下再攪拌18小時(shí)。此后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲烷20 : 1 )。 將該批次加入到20 ml磷酸鹽緩沖液和20 ml MTBE的混合物中并用 MTBE萃取數(shù)次。將合并的萃取液用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后， 通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/甲醇3:2)，之后得到210 mg (28.5%)無(wú)色泡沫。
^-NMR (300 MHz, CDC13): 2.50 (m, 1H); 2.67 (m， 1H); 4.34 (m, 1H); 4.48, (m, 3H); 5.45 (m, 2H); 6.27 (m, 1H); 6.62 (m, 1H); 7.15, (m， 3H); 7.42 (m, 2H); 7.58 (m， 1H); 8.23 (s, 1H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， CDC13): -7.84; -7.99 ppm.
1.2.4.3.苯基-S-特戊酰基-2-硫乙基-3'-溴-2，,3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷-5'-基-磷酸酯
將1.50 g (9.24 mmol)S-(2-羥基乙基)-硫代特戊酸酯溶于80 ml THF中， 冷卻至-78X:，并與0.95 g (9.44 mmol)三乙胺混合。將1.99 g (9.44 mmol) 二氯磷酸苯酯溶于5 ml THF中并在-78X:下逐滴加入。攪拌20小時(shí)，從而 逐漸使其升至室溫。此后過(guò)濾，用THF (2x10 ml)清洗并蒸餾出溶劑。將 微黃色油吸收進(jìn)50 ml四氯甲烷中，再次過(guò)濾，用四氯甲烷清洗殘留物。 除去溶劑后，將油狀殘留物在真空下干燥。得到2.55 g (苯基-S-(2-羥基乙 基)-硫代特戊酸酯)-單氯磷酸酯的粗產(chǎn)物，其不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。
將前述得到的粗產(chǎn)物(2.55 g)溶于15 ml THF中，然后加入l.Og (2.52 mmol)2',3，-雙脫氧-3，-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在室溫下攪拌5分鐘后，加 入1.24 g (15.15 mmol)N-甲基咪唑并在室溫下攪拌3小時(shí)。然后停止反應(yīng) (DC對(duì)照，氯仿/甲醇20:1; 二氯曱烷/丙酮10:1)。將反應(yīng)混合物倒入 100ml磷酸鹽緩沖液和60ml乙酸乙酯的兩相混合物中，并將水相用50 ml 乙酸乙酯分別再萃取兩次。將合并的乙酸乙酯相用5%檸檬酸清洗，然后 用5%碳酸氫鈉溶液清洗，最后用飽和食鹽溶液清洗。用硫酸鎂干燥后， 過(guò)濾并蒸餾出溶劑，用氯仿/丙酮10:1進(jìn)行柱色鐠，得到920 mg (52.6%)淺黃色泡沫。
iH畫(huà)NMR (500 MHz， CDC13): 8.97 (s, 1H); 7.63 and 7.68 (s， 1H); 7.39 (m， 3H); 7.22， (m， 3H); 6.66 (d， 1H); 6.29 (m， 1H); 4.43 (m, 4H); 4.26 (m， 2H); 3.16 (m, 2H); 2.75 (m， 1H); 2.60 (m， 1H); 1.21 and 1.22 (s， 9H) ppm.
31P-NMR (122 MHz， CDC13): -5.67; -5.90 ppm. 1.3. BVDU的3'-或5'-氣基酸酯
1.3.1. 5，-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己?；?-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷
在0。C下，將7.72 g (23.2 mmol)5-(E)-溴乙烯基-2'-脫氧尿苷和9.12 g (34.8 mmol, 1.5當(dāng)量)三苯基膦置于80 ml DMF中。然后將8.04 g (34.8 mmol, 1.5當(dāng)量)N-叔丁fL&^J^-氣基己酸和7.03 g (34.8 mmol， 1.5當(dāng)量) 偶氮二羧酸二異丙酯溶于50 mlDMF中并在1小時(shí)內(nèi)逐滴加入。然后在室 溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化 (CHCl3/MeOH， 95/5乙酸乙酯)，得到2.98 g (5.45 mmol， 23%)的5'誦0-(N訓(xùn) 叔丁氧基羰基-s-JL&己?；?-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，其熔 點(diǎn)為121 - 122'C。還能分離1.05 g (1.92 mmol， 8%)作為副產(chǎn)物的3'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-ll^己?；?-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體(熔點(diǎn) 204-205。C)。
5'-0-(N-叔丁狄録-s-絲己絲)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
力-匪R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20-1.26 (m， 2H); 1.31-1.40 (m, 2H); 1.36 (s， 9H); 1.48-1.53 (m, 2H); 2.15-2.26 (m, 2H); 2.28-2.32 (m, 2H); 2.87 (q， 2H); 3.92 (q， 1H); 4.19-4.25 (m, 3H); 5.43 (d， 1H); 6.15 (t， 1H); 6.74 (t， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); 11.62 (s, 1H) ppm.
1.3.2. 3'-0-(N-叔丁氧基羰基《-氨基己酰基)-2，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿 苷
3'-0-(N-叔丁llJ^^i^-氨基己S^)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 iH-醒R (500 MHz, DMSO-d6): 1.20-1.26 (m， 2H); 1.31-1.40 (m, 2H); 1.36(s， 9H); 1.47-1.52 (m， 2H); 2.09-2.32 (m， 6H); 2.87 (q， 2H); 3.93-3.97 (m， 2H); 4.10-4.14 (m， 1H); 4.21-4.28 (m， 5H); 5.42 (d， 1H); 5.45 (d， 1H); 6.09-6.12 (m， 1H); 6.18-6.21 (m, 1H); 6.73 (t， 1H); 6.96 (d， 1H); 6.99 (d, 1H); 7.29-7.36 (m， 2H); 7.86 (s, 1H); 8.01 (s, 1H); 11.58 (s， 1H) ppm.存在兩種旋 光異構(gòu)體混合物。
1.3.3. [5'-0-(s-氨基己i^)-:2'-脫氧-S-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸鹽
在0。C下，將300 mg (549 nmol)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己酰 基)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入0.4 ml (5.6 mmol)三氟乙酸，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上 除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5 ml乙醚混合并在室溫下攪拌20小時(shí)。傾析出溶 劑并在40。C下將殘留物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到300 mg (535 nmol， 98%)的[5，-0-(￡-氨基己?；?-:2，-脫氧-S-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸鹽白色 固體，其熔點(diǎn)為169-170。C。
丄H國(guó)NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.23-1.38 (m, 2H); 1.45-1.58 (m， 4H); 2.12-2.27 (m， 2H); 2.29-2.37 (m， 2H); 2.70-2.80 (m, 2H); 3.89-3.94 (m， 1H); 4.19-4.29 (m， 3H); 5.46 (d， 1H); 6.16 (t， 1H); 6.94 (d， 1H); 7.30 (d, 1H); 7.69 (bs， 3H); 7.77 (s， 1H); 11.62 (s, 1H) ppm.
1.3.4. [3'-0-(s-氨基己g)-2，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷l(shuí)三氟乙酸鹽
在0。C下，將300 mg (549 nmol)5'-0-(N-叔丁氧基羰基-s-氨基己酰 基)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入0.4 ml (5.6 mmol)三氟乙酸，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上 除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5 ml乙醚混合并在室溫下攪拌20小時(shí)。傾析出溶 劑并在40。C下將殘留物置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到280 mg (500 pmol， 91%)的[3'-0-(￡-#J^己?；?-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷三氟乙酸鹽白色 固體，其在高于180'C的溫度下分解。
^-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.21-1.35 (m, 2H); 1.45-1.58 (m, 4H); 2.08-2.38 (m， 6H); 2.70-2.80 (m， 2H); 3.91-3.98 (m, 2H); 4.10-4.32 (m， 6H); 5.41-5.49 (m, 2H); 6.08-6.15 (m, 1H); 6.16-6.23 (t， 1H); 6.95 (d, 1H); 7.00 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.35 (d， 1H); 7.62 (bs， 3H); 7.86 (s， 1H); 8.01 (s, 1H); 11.59 (s， 1H) ppm.該物質(zhì)作為兩種旋光異構(gòu)體的混合物存在。
431.4. BVDU的3'-或5'-乙酰#^衍生物
1.4.1. 5，-乙酰"i^-3，-氯-2'，3',5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
1.4.1.1. 5'-乙酰絲-2',5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下將1.41 g (4.26 mmol)5，-^J^-2，，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于15 ml DMF中，加入674 mg (8.52 mmol)吡啶。滴加401 mg (5.11 mmol) 在5mlDMF中的乙酰氯，然后再攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒于50g水 上并用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH-7。分別利用100 ml乙酸乙酯萃取混合物三次。將 有^W目用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純 化(CHCl3/MeOH， 9/1),得到870 mg (2.33 mmol， 55%)的5'畫(huà)乙酰^J^ -2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體。
1.4.1.2. 5'-乙酰^^-2',3，-脫7jC-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將870 mg (2.33 mmol) 5'-乙酰^^-2'，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置 于15 ml DMF中并加入915 mg (3.49 mmol) PPH3。隨后將705 mg (3.49 mmol)偶氮二羧酸二異丙酯溶于5 ml DMF中并逐滴加入。一'J、時(shí)后，將 反應(yīng)混合物倒入100 ml乙醚中，抽濾出所得固體并用20 ml乙醚清洗三次。 干絲，得到720 mg (2.02 mmol， 87%)的5，國(guó)乙酰^J^畫(huà)2，，3'-脫(2'，5'國(guó)雙脫 氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體。
1.4.1.3. 5'-乙酰^jL-3'-氯-2，,3',5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿香
將720 mg (2.02 mmol)5，-乙酰^^-2，，3'-脫7K-2'，5'-雙脫氧-5曙(E)-溴乙 烯基尿苷置于10 ml DMF中并加入467 mg (4.04 mmol)鹽酸吡啶，然后在 回流下加熱2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑，通過(guò)柱色鐠純化 (CHCWMeOH， 9/1, 二氯甲烷/乙酸乙酯1/2)，得到460 mg (1.17 mmol, 58%)的5，-乙酰^J^3'-氯-2'，3',5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，其 熔點(diǎn)為163-165'C。
力-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.83 (s, 3H); 2.47-2.73 (m, 2H); 3.36-3.43 (m, 2H); 4.02 (q, 1H); 4.55 (q, 1H); 6.19 (t， 1H); 6.96 (d, 1H); 7.32 (d, 1H); 7.84 (s， 1H); 8.10 (t, 1H); 11.64 (s， 1H).
1.4.2. 3'-乙酰氨基-5'-溴-2'，3'，5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
441.4.2.1. 3，-乙酰^tJ^2，,3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將l.OO g (2.79 mmol)3'-疊氮基-2，，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于 40 ml (0.1 M, pH = 7.4)磷酸鹽緩沖溶液中，加入638 mg (8.38 mmol)硫代乙 酸并在6(TC下攪拌30小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色語(yǔ)純化 (CHCl3/MeOH， 9/1 )，得到470 mg (1.26 mmol， 45%)的3'-乙酰^J^誦2'，3'畫(huà) 雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體。
1.4.2.23，-乙酰^J-5'-0-(甲基碌醃基)-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下將500 mg (1.34 mmol)3'-乙酰^J^2'，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苷置于5 ml吡啶中。滴加160 mg (1.40 mmol)甲磺酸在2 ml THF中 的溶液，隨后在室溫下攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒于水上，用濃鹽酸調(diào) 節(jié)pH == 5并用乙酸乙酯萃取三次。將有;W目用稀鹽酸和飽和NaCl溶液清 洗，用Na2S04干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。得到440 mg (973 nmol， 73%)的3'-乙酰氨基-5'-0-(甲基磺酰基)-2'，3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 白色固體。
1.4.2.3. 3，-乙酰^J^5，-溴-2，，3，,5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將440 mg (973 pmol) 3'-乙酰氨基-5，-0-(曱基磺?；?-2',3，-雙脫氧 -5誦(E)-溴乙烯基尿苷置于5ml DMF中。加入253 mg (2.92 mmol) LiBr并 加熱反應(yīng)混合物3小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑。將反應(yīng)混合物吸收進(jìn) 20 ml乙酸乙酯中并利用NaCl溶液清洗有糸l4目。利用乙酸乙酯萃取水相三 次。將合并的有;M目用飽和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠(氯仿/甲醇9/1)純化，得到290 mg (663 nmol， 68%)的3'-乙酰^J^5'-溴-2，,3，，5，-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，其 熔點(diǎn)為178-180'C。
^-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.84 (s， 3H); 2.15-2.45 (m, 2H); 3.70-3.80 (m, 2H); 3.94 (q, 1H); 4.31 (m, 1H); 6.21 (t， 1H); 6.95 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.87 (s， 1H); 8.30 (t, 1H); 11.63 (s, 1H).
^_5'-取代的BVDU-和BVRU衍生物
2.1. 5'國(guó)卣素畫(huà)BVDU2.1.1. 2'，5'-雙脫氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將3.5 g (7.18 mmol)5'-0國(guó)甲基磺酰基誦2，誦脫氧譯5-(E)-溴乙烯基尿苷和 9.06 (28.72 mmol)氟化四丁基銨三水合物溶于50 ml DMF中。加入20 g分 子篩(3A)后加熱到40。C。 4.5小時(shí)后停止jl應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。在珪藻土上過(guò)濾，用DMF再次充分清洗，蒸餾出DMF。加入二甲苯 作為夾帶劑(schlepper)。將殘留物溶解在乙酸乙酯中并用1M鹽酸清洗。 將乙酸乙酯相用磷酸鹽緩沖液清洗，然后用飽和食鹽溶液清洗。中和合并 的水相，然后用乙酸乙酯萃取。合并全部乙酸乙酯相并用硫酸鎂干燥。過(guò) 濾和離心除去溶劑后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行純化(氯仿/甲醇15 : 1)。得到熔 點(diǎn)為208'C的1.05 g (43.8%)無(wú)色固體。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.18 (m， 2H); 3.93 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.60 (m, 2H); 5.45 (d, 1H); 6.18 (d， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.28 (d， 1H); 7.74 (s, 1H); 11.60 (s, lH)ppm.
圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC )相比于單 獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
2.1.2. 3'-0-甲基-5'-氯-2',5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.55 g (1.56 mmol)2，,5，-雙脫氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于9 ml 二^惡烷中。向其中加入3 ml曱苯、0.03 ml水和0.46 g (8.2 mmol)氫氧化鉀。 2小時(shí)后形成了微細(xì)的混懸液。然后加入0.44 g (3.12 mmol)碘甲烷。l小 時(shí)后加入同樣量的碘曱烷，再過(guò)一小時(shí)后再加入同樣量的碘甲烷。然后停 止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1 )。將該批次加入到25 ml乙酸乙酯和 25 ml磷酸鹽緩沖液的兩相混合物中，用乙酸乙酯萃取水相。用硫酸鎂干 燥合并的有機(jī)相。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色語(yǔ)進(jìn)行純化(氯仿/ 曱醇60 : 1 )。得到熔點(diǎn)為145。C的430 mg (75.4%)無(wú)色固體。
力-匪R (500 MHz, DMSO-d6): 2.30 (m， 2H); 3.31 (s， 3H); 3.86 (m， 2H); 3.99 (m, 1H); 4.11 (m, 1H); 6.12 (m, 1H); 6.90 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.82 (s, 1H); 11.65 (s， 1H) ppm.
2.1.3. 3'-0-甲基-5'-氟-2，，5'-雙脫氧-3-甲基-5-(E)-溴乙烯基尿苷 將1.24 g (3.7 mmol)2'，5'-雙脫氧-5'-氟-5畫(huà)(E)-溴乙烯基尿香溶于40 ml二嚅烷中并與15 ml甲苯混合。然后加入1.12 g (20 mmol)氫氧化鉀和65 jil 水。在室溫下攪拌2小時(shí)，形成微細(xì)混懸液。向其中加入碘甲烷1.57 g， 在攪拌2小時(shí)和4小時(shí)后，再加入同樣量的碘甲烷。在室溫下攪拌16小時(shí) 后，轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。將反應(yīng)混合物倒入100 ml 磷酸鹽緩沖溶液中并用乙酸乙酯萃取(3 x 50 ml )。用硫酸鎂干燥合并的萃 取物。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行純化(二氯甲烷/丙酮50: l;環(huán)己烷/乙酸乙酯1:1)。利用環(huán)己烷4吏產(chǎn)物從濃縮溶液中沉淀出來(lái)并干 燥產(chǎn)物。得到0.63g(46.9。/o)無(wú)色固體，其熔點(diǎn)為95。C。
力-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.24 (m, 1H); 2.35 (m， 1H); 3.18 (s, 3H); 3.30 (s， 3H); 4.05 (m， 1H); 4.19 (m， 1H); 4.61 (m， 1H); 4.71 (m, 1H); 6.15 (t， 1H); 6.94 (d, 1H); 7.33 (d, 1H); 7.82 (s， 1H) ppm.
2.1.4. 3'-0-曱基-5，-氟-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
2丄4丄5'-0-(4,4，-二曱ltJ^三苯曱基)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將8.20 g (24.6 mmol)2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于100 ml吡啶中。 向其中加入0.75 g (6.15 mmol)4-N，N-二甲基^J^吡咬和5.06 g (50 mmol) 三乙胺。冷卻至0。C，分別加入兩份各5 g (總共IO.O g， 29.51 mmol)的 4,4'-二甲氧基三苯甲基氯。攪拌30分鐘，然后移除冷浴并4吏其升至室溫。 22小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇15:1)。加入30ml乙醇并 攪拌20分鐘后，利用甲苯數(shù)次蒸餾出吡啶。將獲得的深棕色油溶于乙酸乙 酯(200 ml)中并用5%碳酸氫鉀溶液清洗。用乙酸乙酯再萃取水相3次， 合并全部的乙酸乙酯相并用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并蒸餾出溶劑后，通過(guò)柱色 鐠進(jìn)行純化(二氯甲烷/甲醇35 : 1，含有1%三乙胺)。得到13.57 g (86.8%) 無(wú)色泡沫。
2.1.4.2. 3'-0-曱基-5'-0-(4，4，-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷
將7.5 g (11.8 mmol)5'-0-(4，4，-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧-5-(E)-溴乙 烯基尿苷溶于150 ml 二"惡烷和50 ml甲苯的混合物中并向其中加入3.37 g (60 mmol)氫氧化鉀和0.29 ml水。在室溫下攪拌2小時(shí)后，得到微細(xì)的無(wú) 色混懸液。向其中加入6.71 g (47.3 mmol)碘曱烷并再攪拌1小時(shí)。然后再 次加入同樣量的碘甲烷，再過(guò)2小時(shí)后再次加入一半量的碘曱烷。1.5小
47時(shí)后轉(zhuǎn)化完全(DC對(duì)照，二氯甲烷/曱醇20:1;氯仿/甲醇20:1)。將該 批次倒入200ml磷酸鹽緩沖溶液中，然后用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的 萃取物用硫酸鎂干燥，離心除去溶劑后利用柱色語(yǔ)進(jìn)行純化(二氯甲烷/ 曱醇50 :1 )。得到6.32 g (82.5%)淺黃色泡沫。
2.1.4.3. 3'-0-甲基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿普
將6.32 g (9.72 mmol)3，畫(huà)0隱甲基國(guó)5，腸0-(4，4，國(guó)二甲lL^三苯甲基)-2，畫(huà)脫氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于120 ml氯仿中。向其中加入60 ml曱醇，冷卻到 0。C后，加入1.85 g (9.72 mmol)4-甲差J黃酸一水合物。1小時(shí)后停止反應(yīng)(DC 對(duì)照，二氯甲烷/甲醇15:1)。加入2.3經(jīng)(2311111101)碳酸氫鉀，攪拌5分鐘 并與200 ml飽和食鹽溶液混合。用氯仿和乙酸乙酯萃取，合并全部萃取物 并用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并蒸餾出溶劑后，用環(huán)己烷萃取，過(guò)濾并用環(huán)己烷 清洗殘留物。干燥后，得到3.33§(98.5%)無(wú)色固體。
2.1.4.4. 5'-0-(4-曱基糾?；?-3'-0-曱基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將3.33 g (9.6 mmol)3'-0-甲基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于30 ml 吡啶中并將所得溶液冷卻至0。C。然后加入2.2§4-甲基苯磺酰氯，將其在 0t:下攪拌30分鐘，然后4吏其升至室溫。7小時(shí)后，再次加入1.55 g (8.13 mmol)4-甲基苯磺酰氯并攪拌20小時(shí)。然后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲 烷/甲醇15:1)。將其倒于水上，攪拌30分鐘并用6M鹽酸酸化。用乙酸 乙酯萃取后，用1M鹽酸清洗合并的萃取物，然后用磷酸鹽緩沖液清洗并 用硫酸鎂干燥。蒸餾出溶劑后，通過(guò)柱色譜純化(環(huán)己烷/丙酮2:1)，得 到3.32 g (68.9%)無(wú)色固體。
2.1.4.5. 3'-0-甲基-5'-氟-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將2.5 g (4.98 mmol)5，畫(huà)0-(4-甲基^t酰基)醒3'誦0畫(huà)甲基-2'-脫氧-5-(E)-溴 乙烯基尿苷溶于40 ml DMF中并加入6.27 g (20 mmol)氟化四叔丁基銨三 7jC合物和15g分子篩(3A)。加熱至35"C。 l小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照， 環(huán)己烷/乙酸乙酯1:1)。通過(guò)分子篩過(guò)濾，隨后利用DMF清洗。通過(guò)用 二甲苯蒸餾除去DMF，將殘留物溶于乙酸乙酯中并用1M鹽酸(80 ml) 清洗。用乙酸乙酯萃取7JC相并將全部合并的乙酸乙酯相利用磷酸鹽緩沖溶 液清洗。在用硫酸鎂干燥有^目并蒸餾出溶劑之后，通過(guò)柱色語(yǔ)進(jìn)行純化 (環(huán)己烷/乙酸乙酯1:1)。得到0.99 g (56.9%)無(wú)色固體，其熔點(diǎn)為177x:。
iH畫(huà)NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.23 (m, 1H); 2.34 (m, 1H); 3.30 (s, 3H); 4.14 (m， 1H); 4.32 (m, 1H); 4.58 (m， 1H); 4.68 (m, 1H); 6.12 (m， 1H); 6.81 (d， 1H); 7.28 (d, 1H); 7.76 (s, 1H); 11.63 (s， 1H) ppm.
2.2. 5'-齒素-BVDU的酯
2.2.1. 3'-0乙錄-5'-氟-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將300 mg (0.9 mmol) 2'，5'-雙脫氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷混懸于5 ml 二氯曱烷和1 ml吡咬的混合物中，冷卻至0'C并與l卯mg (2.4 mmol) 乙酰氯混合。2小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇15 : 1)。用25 ml 乙酸乙酯進(jìn)行稀釋并用2 x 25 ml 0.1 M鹽酸清洗有^M目。用磷酸鹽緩沖液 進(jìn)行中性清洗。在減，酸鎂干燥后，過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行 純化(二氯甲烷/乙酸乙酯4:1)。從叔丁基甲基^/環(huán)己烷中沉淀后，得到 卯mg(27y。)無(wú)色固體，熔點(diǎn)81"C。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.07 (s, 3H); 2.42 (m， 2H); 4.25 (m， 1H); 4.70 (m， 2H); 5.24 (m， 1H); 6.16 (m, 1H); 6.92 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.81 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
2.2.2. 5'國(guó)卣素畫(huà)BVDU的^J^酸酯
2.2.2.1. 4-(叔丁氧基羰基)氨基-l-(5'-氟-2',5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿普 -3'-基)丁酸酯
將280 mg (1.33 mmol)N國(guó)BOC國(guó)4-^J^丁酸和2卯mg (2.39 mmol)4-二 甲基^J^比咬溶于20 ml 二氯甲烷中。向其中加入400 mg (1.19mmol)2',5'畫(huà) 雙脫氧-5，-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷和280 mg (1.34 mmol)N，N，-二環(huán)己基碳 二亞胺。2小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇15:1)。將該批次過(guò)濾 并離心。溶于乙酸乙酯后，冷卻至-20。C，過(guò)濾出沉淀并用少量已冷卻至-20 。C的乙酸乙酯清洗。將濾液離心并通過(guò)柱色譜利用二氯曱烷/甲醇純化(30: 1)數(shù)次。得到400 mg (64.1%)無(wú)色泡沫。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.37 (s， 9H); 1.62 (m， 2H); 2.37 (m， 2H); 2.40 (m， 1H); 2.51 (m, 1H); 2.94 (m， 2H); 4.25 (m， 1H); 4.68 (m， 2H); 5.24
49(m， 1H); 6.18 (m. 1H); 6.84 (t, 1H); 6.91 (d, 1H); 7.28 (d, 1H); 7.83 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
2.2.2.2. 4-銨國(guó)l-(5'國(guó)氟誦2',5'-雙脫氧畫(huà)5-(E)國(guó)溴乙烯基尿苷-3，-基)丁酸酯國(guó)三 氟乙酸鹽
將2卯mg (0.56 mmol)來(lái)自2.2.2.1.的產(chǎn)物溶于5 ml二氯甲烷中并與5 ml三氟乙酸混合。30分鐘后停止轉(zhuǎn)化(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇25:1)。 多次離心除去二氯甲烷后，用乙醚處理殘留物，過(guò)濾出無(wú)色殘留物并用乙 醚清洗。干燥后，得到270mg(卯.6"/。)無(wú)色粉末，熔點(diǎn)129'C。
力曙匪R (500 MHz， DMSO-d6): 11.75 (s， 1H); 7.82 (s, 1H); 7.71 (s (br.), 3H); 7.29 (d, 1H); 6.91 (d, 1H); 6.18 (m， 1H); 5.27 (m， 1H); 4.74 (m, 1H); 4.67 (m， 1H); 4.24 (m， 1H); 2.83 (m, 2H); 2.44 (m, 3H); 2.37 (m， 1H); 1.80 (m, 2H); ppm.
2.2.2.3. 4-(叔丁氧基羰基)氨基-l-(5，-氯-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 -3'-基)丁酸酯
向12 ml二氯甲烷中加入500 mg (1.42 mmol)5'-氯-2'，5'-雙脫氧-5-(E)誦 溴乙烯基尿苷、290 mg (1.42 mmol)N-BOC-4-t^丁酸和175 mg (1.42 mmol)4-二甲基氨基吡咬，將所得混懸液冷卻至0。C ，然后加入423 mg (1.42 mmol)l-(3-二曱基絲丙基)-3-乙M二亞胺甲^f匕物。移除冷浴后，攪拌 6小時(shí)。然后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10:1)。離心除去二氯曱烷， 然后將殘留物吸收進(jìn)乙酸乙酯中。用飽和食鹽溶液清洗有W目數(shù)次。用乙 酸乙酯萃取合并的水相。合并全部有;W目并用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除 去溶劑后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行純化(二氯甲烷/甲醇50:1;環(huán)己烷/乙酸乙酯 1:1)。得到520mg(68.2o/。)無(wú)色泡沫。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.37 (s, 9H); 1.64 (m, 2H); 2.36 (m, 3H); 2.51 (m， 1H); 2.94 (m, 2H); 3.91 (m, 2H); 4.21 (m, 1H); 5.24 (m, 1H); 6.18 (m, 1H); 6.82 (t， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.87 (s, 1H); 11.67 (s, 1H) ppm.
2.2.2.4. 4-銨-l-(5'-氯-2',5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苦-3，-基)丁酸酯-三氟乙酸鹽
將200 mg (0.372 mmol) 4-(叔丁猛絲)絲-l-(5'-氯-2，,5，-雙脫氧 -5-(￡)-溴乙烯基尿苷-3，-基)丁酸酯溶于4 ml 二氯曱烷中，然后加入7 ml 三氟乙酸。30分鐘后全部轉(zhuǎn)化(DC對(duì)照，環(huán)己烷/乙酸乙酯l : 1)。多次 離心除去二氯甲烷后，用乙醚處理殘留物，過(guò)濾無(wú)色沉淀并干燥。得到160 mg(78.0Vo)無(wú)色粉末，其熔點(diǎn)為148。C。
力國(guó)醒R (500 MHz, DMSO-d6): 11.75 (s， 1H); 7.87 (s, 1H); 7.72 (s, 3H); 7.30 (d, 1H); 6.91 (d, 1H); 6.20 (m， 1H); 5.25 (m， 1H); 4.21 (m， 1H); 3.91 (m, 2H); 2.83 (m, 2H); 2.35 (m， 4H); 1.81 (m， 2H) ppm.
圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC )相比于單 獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
2.2.2.5. 3'-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰)-5'-氯-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙
在0r;下，將1.00 g (2.84 mmol) 5'-氯-2，，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20ml二氯甲烷中。然后加入618 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N-叔丁氧 基絲-L-纈氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N,N-二曱基絲吡啶和587 mg (2.84 mmol 1.0當(dāng)量)N，N'-二環(huán)己基碳二亞胺，然后將反應(yīng)混合物在室 溫下攪拌20小時(shí)。將所得沉淀過(guò)濾并用二氯甲烷清洗。將濾液用稀檸檬酸 溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(CHCl3/MeOH， 95/5; 二氯甲烷/乙酸乙 酯，3/1),得到1.00 g (1.82 mmol, 64%)的3，-0-(N-叔丁IU^^-L-纈氨 酰)-5'-氯-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，熔點(diǎn)87 - 88*C 。
iH國(guó)NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.89-0.91 (m, 6H); 1.39 (s， 9H); 2.03 (m, 1H); 2.31 (m, 1H); 2.53 (m, 1H); 3.83 (t, 1H); 3.88-3.91 (m， 2H); 4.12 (m, 1H); 5.28 (m， 1H); 6.22 (t， 1H); 6.91 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.32 (d， 1H); 7.87 (s， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.6. (5'-氯-2，，5，-雙脫氧-3'-0-L-纈氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸 鹽在O"C下，將600 mg (1.09 mmol) 3，-0-(^叔丁#^^1&丄-纈氨酰)-5'-氯-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入1.0 ml (14 mmol)三氟乙酸，然后在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上 除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5 ml乙醚混合并在室溫下攪拌20小時(shí)。傾析出溶 劑并使殘留物在40X:下置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到450 mg (797 jtmol， 730/0)的(5，-氯-2'，5'-雙脫氧-3'-0-L-纈氨酰-5-(E)-溴乙烯基尿苷)三氟乙酸鹽 白色固體，熔點(diǎn)108-109匸。
iH國(guó)NMR (500 MHz， DMSO-d6): 0.97-1.01 (m， 6H); 2.19 (m, 1H); 2.37 (m, 1H); 2.58 (m, 1H); 3.89-3.97 (m， 2H); 4.00 (bs, 1H); 4.27 (m， 1H); 5.39 (m, 1H); 6.25 (dd， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.87 (s, 1H); 8.37 (bs， 3H); 11.71 (s, 1H) ppm.
2.2.2.7. 3，-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰-L-纈氨酰)-5，-氯-2',5，-雙脫氧
畫(huà)5-(E)-溴乙烯基尿苷
在Ot:下，將1.00 g (2.84 mmol) 5'-氯-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于20 ml二氯甲烷中。然后加入卯0 mg (2.84 mmol, 1.0當(dāng)量)N-叔丁氧 基n-L-纈氨酰-L-纈氨酸、347 mg (2.84 mmol， 1.0當(dāng)量)N，N-二甲基^J^ 吡啶和587 mg (2.84 mmol 1.0當(dāng)量)N,N，-二環(huán)己基碳二亞胺，然后將>^應(yīng) 混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將所得沉淀過(guò)濾并用二氯甲烷清洗。將濾液 用稀檸檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04干燥。 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯，3/1)， 得到850 mg (1.31 mmol， 46%)的3，-0-(N-叔丁fU^^-L-纈氨酰-L-纈氨 酰)-5'-氯-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，熔點(diǎn)114 - 116匸。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.83-0.93 (m， 12H); 1.37 (s, 9H); 1.91 (m, 1H); 2.09 (m, 1H); 2.30 (m， 1H); 3.88-3.91 (m， 3H); 4.13-4.22 (m， 2H); 5.27 (m， 1H); 6，20 (m, 1H); 6.70 (m， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.87 (s， 1H); 8.15 (m， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
2.2.2.8. [5'-氯-2',5'-雙脫氧-3，-0-(L-纈氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴乙烯基尿 苷三氟乙酸鹽
在0t:下，將200 mg (308 nmol)3，-0-(N-叔丁fLi^l^-L-翔氨跣-L國(guó)纈
52氨酰)-5'-氯-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯甲烷中，加入 0.35ml(4.7mmol)三氟乙酸，然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。在 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5 ml乙醚混合并在室溫下攪拌1小時(shí)。 傾析出溶劑，將殘留物在40n下置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上l小時(shí)。得到180 mg (271 jimol, 88。/。)的[5'-氯-2，，5'-雙脫氧-3'-0-(L-翔氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴 乙烯基尿苷三氟乙酸鹽白色固體，熔點(diǎn)135-136匸。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0.92-0.99 (m， 12H); 2.08-2.18 (m， 2H); 2.35 (m， 1H); 2.55 (m， 1H); 3.73 (m， 1H); 3.91 (m， 1H); 4.17 (m， 1H); 4.28 (m， 1H); 5.31 (m， 1H); 6.21 (m， 1H); 6.91 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.87 (s， 1H); 8.10 (bs， 3H); 8.73 (d, 1H); 11.70 (s, 1H) ppm.
2.2.2.9. 5'-疊氮基-3，-0-(N-叔丁氧基羰基-L-纈氨酰-L-纈氨酰)-2',5'-雙脫
氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0X:下，將1.10 g (3.07 mmol) 5'-疊氮基-2，，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基 尿苷置于20 ml 二氯曱烷中。然后加入950 mg (3.07 mmol， 1.0當(dāng)量)N-叔 丁緣g-L-纈氨酰-L-纈氨酸、375 mg (3.07 mmol, 1.0當(dāng)量)N,N-二甲基 ^J^吡咬和634 mg (3.07 mmol, 1.0當(dāng)量)N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺，隨后將 反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2天。過(guò)濾出所得的沉淀物并用二氯曱烷清洗。 將濾液用稀檸檬酸溶液、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗，然后用Na2S04 干燥。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色譜純化(二氯甲烷/乙酸乙酯， 2/1 )，得到600 mg (914 jimol， 30%)的5，國(guó)疊氮基-3，-0誦(]\-叔丁氧基^&丄-纈氨酰-L-纈氨酰)-2'，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體，熔點(diǎn)133 -135"C。
力-畫(huà)R (300 MHz, DMSO-d6): 0.83-0.94 (m， 12H); 1.38 (s， 9H); 1.93 (m, 1H); 2.10 (m， 1H); 2.34 (m， 1H); 2.53 (m， 1H); 3.58-3.76 (m, 2H); 3.91 (m, 1H); 4.04-4.24 (m, 2H); 5.24 (m， 1H); 6.22 (m， 1H); 6.72 (m, 1H); 6.94 (d， 1H); 7.32 (d, 1H); 7.92 (s， 1H); 8.14 (m， 1H); 11.70 (s, 1H) ppm.因?yàn)榇嬖?按l:l比例的兩種旋光異構(gòu)體混合物，所以某些信號(hào)出現(xiàn)兩次。
2.2.2.10. [5'-疊氮基-2',5'-雙脫氧-3，-0-(L-纈氨酰-L-纈氨酰)-5-(E)-溴乙烯
基尿苷]三氟乙酸鹽 在0"C下，將200 mg (305 nmol) 5'-疊氮基-3'-0-(1\-叔丁氧基羰基丄-
53纈氨酰-L-纈氨酰)-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置于5 ml 二氯曱烷中， 加入0.33 ml (4.47 mmol)三氟乙酸，然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小 時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將粗產(chǎn)物與5ml乙醚混合并在室溫下攪拌 20小時(shí)。傾析出溶劑，將殘留物在40"C下置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上1小時(shí)。得到 160 mg (239 fimol， 78。/。)的[5'-疊氮基-2'，5'-雙脫氧-3，-0-(L-纈氨酰-L-纈氨 酖)-5-(E)-溴乙烯基尿苷三^乙酸鹽白色固體，熔點(diǎn)122畫(huà)124匸。
工H誦NMR (300 MHz， DMSO-d6): 0.92-0.99 (m, 12H); 2.09-2.18 (m, 2H); 2.25-2.40 (m， 1H); 2.50-2.62 (m, 1H); 3.56-3.80 (m, 3H); 4.04-4.15 (m, 1H); 4.22-4.29 (m, 1H); 5.25 (m， 1H); 6.20 (m， 1H); 6.92 (d， 1H); 7.31 (d， 1H); 7.91 (s， 1H); 8.10 (bs， 3H); 8.68 (d， 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.因?yàn)榇嬖诎? : 2比例的兩種旋光異構(gòu)體混合物，所以某些信號(hào)出現(xiàn)兩次。
2.2.3. 5'-卣素-BVDU的^tj^磷酸酯
2.2.3.1. (E)-5-(2-溴乙烯基)-5'-氯-2，,5'-雙脫氧尿苷-3，-苯基-(曱狄-L畫(huà)丙 氨酰)-磷酸酯
將1.55 g (7.35 mmol)二氯磷酸苯酯和1.03 g (7.35 mmol)L-丙氨酸甲酯 鹽酸鹽溶解或混懸于15 ml二氯甲烷中并冷卻至-78t:。將三乙銜1.52 g (15 mmol))溶解在15 ml 二氯甲烷中并在-78。C下在2小時(shí)內(nèi)逐滴加入。滴加 后，使其升至室溫并攪拌18小時(shí)。離心除去二氯曱烷，將殘留物吸收進(jìn)乙 醚中并過(guò)濾出未溶解部分。然后除去乙醚，并將油狀粗產(chǎn)物不經(jīng)純化而進(jìn) 行進(jìn)一步處理。
將0.57 g (1.62 mmol) 2'，5'-雙脫氧曙5'-氯-5國(guó)(E)-溴乙烯基尿苷和前述獲 得的粗產(chǎn)物溶于15 ml THF中并將溶液冷卻至-78"C 。將0.82 g (10 mmol)N-曱基咪唑溶于5 ml THF并在20分鐘內(nèi)逐滴加入。逐漸使其升至室溫并在 該溫度下再攪拌20小時(shí)。然后>^應(yīng)完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。 將該批次加入到磷酸鹽緩沖液和乙酸乙酯的兩相混合物中并將水相用乙 酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的萃取物用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并離心除去溶劑。 通過(guò)柱色鐠純化(二氯甲烷/甲醇30 : 1;氯仿/丙酮5 : 1)后，得到0.62 g (64.6%)無(wú)色泡沫。
力-醒R (500 MHz, CDC13): 8.56 (s， 1H); 8.55* (s， 1H); 7.66 (s， 1H); 7.63* (s， 1H); 7.35 (m， 3H); 7.22 (m， 3H); 6.68 (d， 1H); 6.66* (d， 1H); 6.30 (m,1H); 5.11 (m， 1H); 4.50* (m, 1H); 4.37 (m， 1H); 4.02 (m, 1H); 3.91* (m, 2H); 3.83 (m, 2H)， 3.76* (s, 3H); 3.73 (s， 3H); 3.71* (m, 1H); 3.63 (m， 1H); 2.65 (m, 1H); 2.58* (m， 1H); 2.25 (m， 1H): 1.40 (d, 3H) ppm.
該物質(zhì)包含非對(duì)映體混合物(比例約1.2 : 1 )。標(biāo)有*的NMR信號(hào)與以 稍小比例存在的非對(duì)映體相關(guān)。
31P-NMR(202 MHz, CDC13); 2.31; 1.61 ppm
圖6顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C ( MMC )相比于單 獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
2.2.3.2.[-5-(E)-溴乙烯基-5'-氟-2，，5'-雙脫氧尿苷-3'-基-(甲氧基-L-丙氨 酰)-苯基磷酸酯
在-78"C下將600 mg (2.84 mmol, 2當(dāng)量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2當(dāng)量)L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽置于7 ml THF中。將576 mg (5.69 mol， 4當(dāng)量)三乙胺溶于7 ml THF中，在30分鐘內(nèi)逐滴加入，然后在室溫下攪 拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至-78匸并加入477 mg (1.42 mmol) 2'，5'-雙 脫氧-5'-氟-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分鐘內(nèi)向所得混懸液中滴加700 mg (8.53 mmo1，6當(dāng)量)N-曱基咪唑在7 ml THF中的溶液，然后在室溫下攪拌 20小時(shí)。向25 ml ^酸鹽緩沖液和25 ml乙酸乙酯的混合物中加入該批次， 并再分別用20 ml乙酸乙酯萃取7K相兩次。將合并的有糸l4目用Na2S04干燥， 過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(二氯曱烷/乙酸乙酯 1/1;乙酸乙酯)，得到310 mg (523 jimol, 37。/。)的[5-(E)-溴乙烯基-5，-氟-2，,5'畫(huà) 雙脫氧尿苷-3'-基-(甲lL^-L-丙氨酰)-苯基磷酸酯白色固體。
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.22 (d， 3H); 1.25* (d， 3H); 2.40-2.59 (m， 4H); 3.61 (s， 3H); 3.62 (8s， 3H); 3.81-3.98 (m, 2H); 4.19-4.35 (m, 2H); 4.52-4.82 (m， 4H); 5.00-5.12 (m， 2H); 6，13隱6.26 (m, 4H); 6.89* (d， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.16-7.43 (m, 12H); 7.79* (s, 1H); 7.80 (s, 1H), 11.67* (s， 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
該物質(zhì)包含非對(duì)映體混合物(比例約1.2 : 1)。標(biāo)有*的信號(hào)與較少的 異構(gòu)體相關(guān)。
55"P曙NMR (122 MHz, DMSO-d6): 3.91; 4.54 ppm.
2.2.3.3. [5'疊氮基-5-(E)-溴乙烯基-2'，5'-雙脫氧尿苷-3'-基-(曱氧基-L-丙
氨酰)-苯基磷酸酯
在-78C下將600 mg (2.84 mmol， 2當(dāng)量)二氯磷酸苯酯和397 mg (2.84 mmol， 2當(dāng)量)L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽置于7 ml THF中。將576 mg (5.69 mmo1，4當(dāng)量)三乙胺溶于7mlTHF中，在30分鐘內(nèi)逐滴加入，然后在室 溫下攪拌20小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻到-78"C,加入509 mg (1.42 mmol)5，-疊氮基-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。在30分鐘內(nèi)向所得的混懸液中 滴加700 mg (8.53 mmol， 6當(dāng)量)N-曱基咪唑在7ml THF中的溶液，然后在 室溫下攪拌20小時(shí)。將該批次加入到25 ml磷酸鹽緩沖液和25 ml乙酸乙 酯的混合物中，再分別用20 ml乙酸乙酯萃取7jC相兩次。將合并的有^W目 用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(二 氯曱烷/乙酸乙酯，1/1;乙酸乙酯)，得到160 mg (267 jimol， 19%)白色固體 的5'疊氮基-5-(E)-溴乙烯基-2',5'-雙脫氧尿苷]-3，-基-(曱氧基-L-丙氨酰)-苯 基磷酸酯。
工H-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 1.22 (d， 3H); 1.25* (d， 3H); 2.35-2.58 (m, 4H); 3.57-3.70 (m, 4H); 3.62 (s, 6H); 3.87-3.92 (m, 2H); 4.13-4.18 (m， 2H); 4.94-4.99* (m, 1H); 5.00-5.05 (m， 1H); 6.14-6.22 (m, 4H); 6.90* (d, 1H); 6.93 (d, 1H); 7.16-7.24 (m， 6H); 7.28-7.32 (m， 2H); 7.36-7.42 (m， 4H)， 7.88* (s, 1H); 7.89 (s, 1H); 11.69 (s, 2H) ppm.
該物質(zhì)包含非對(duì)映體混合物(比例約1.5 : 1)。標(biāo)有*的信號(hào)與較少的 異構(gòu)體相關(guān)。
31P-NMR (122 MHz, DMSO-d6): 3.93; 4.54 ppm. 2丄5'-溴-5，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿普
2.3.1. 2',3'-0-異丙叉-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將1.0 g (2.86 mmol)5-(E)-溴乙烯基尿苷混懸于15 ml丙酮中。向其中 加入3.13 g (30 mmol)2,2-二甲H^丙烷和0.05 g對(duì)甲^t酸。2小時(shí)后反 應(yīng)完成(DC對(duì)照，氯仿/曱醇20:l)。加入(K50g碳酸氫鉀、20 ml水和 25ml乙酸乙酯，進(jìn)行相分離，用乙酸乙酯萃取7JC相數(shù)次。用硫酸鎂干燥合并的有W目。過(guò)濾出干燥劑后蒸餾出溶劑，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(氯仿
/甲醇30 : 1 )，得到0.57 g (51.2%)無(wú)色泡沫。
2.3.2. 2',3，-0-異丙叉-5，-溴-5'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.57 g (1.46 mmol)2'，3，-0-異丙叉-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.81 g (3.1 mmol)三苯基膦溶于12 ml吡啶中。滴加0.92 g (2.77 mmol)四溴甲烷在8 ml 吡啶中的溶液。卯分鐘后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇30 : 1)。利用 乙酸乙酯蒸餾出吡啶，通過(guò)柱色鐠(二氯甲烷/乙酸乙酯12 : 1)純化殘留 物。得到380 mg (57.7%)無(wú)色泡沫。
2.3.3. 5'-溴-5，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.38 g (0.84 mmol)2，，3'-0-異丙叉-5，-溴-5'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于5 ml三氟乙酸和1 ml水中并在室溫下溶解30分鐘。然后轉(zhuǎn)化完成(DC 對(duì)照，氯仿/甲醇30:l)。將其蒸干，吸收到甲醇中數(shù)次，然后再次蒸發(fā)。 通過(guò)柱色譜純化后，得到0.25g(72.2。/。)無(wú)色固體，熔點(diǎn)201。C。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.71 (m， 1H); 3.81 (m， 1H); 3.99 (m, 2H); 4.19 (m, 1H); 5.41 (d, 1H); 5.55 (d， 1H); 5.82 (d, 1H); 6.93 (d, 1H); 7.30 (d， 1H); 7.81 (s, 1H); 11.68 (s， 1H) ppm.
2.4.BVDU的5，-或3'-tJ^磷酸酯
2.4.1. [5-(E)-溴乙烯基-5'-甲氧基-2'-脫氧尿苷-3，-基-(2-氰乙基)-二異 丙基^J^磷酸酯
2.4.1.1. 3'-0-(叔丁基二曱基曱硅烷基)-5'-曱氧基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯
基尿*
將1.33 g (2.97 mmol)3'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2，-脫氧-5-(E)-溴乙 烯基尿苷溶于17 ml 二嚅烷和6 ml甲苯中，加入0.88 g (15.6 mmol) KOH 和60 nl (3.3 mmol)水。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2^小時(shí)，然后加入0.85 g (6.0 mmol) Mel。再攪拌3小時(shí)后，加入120 ml磷酸鹽緩沖溶液(pH = 7 ), 用50 ml乙酸乙酯萃取混合物3次。將合并的有:M目用MgS04干燥，過(guò)濾 并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色譜純化(氯仿/曱醇100/1),得到 1.04g (2.25 mmol, 76%)白色固體的3'-0-(叔丁基二甲基甲珪烷基)-5，-甲氧
57基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷。
2.4.1.2. 2'-脫氧-5'-甲緣-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將26.2 g (5.68 mmol)3，-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-5'-甲IL^-2'-脫氧 陽(yáng)5國(guó)(E)-溴乙烯基尿苷溶于25 ml THF中，滴加2.69 g (8.52 mmol)在25 ml THF中的氟化四丁基銨。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色語(yǔ)純化(氯仿/曱醇25/1),得到1.73g (4.98 mmol， 88%)的2'-脫氧-5'-曱l^-5-(E)-溴乙烯^i^普白色固體。
2.4.1.3. [5-(E)-溴乙烯基-5，-甲lL基-2'-脫氧尿苷-3'-基-(2-氰乙基)-二異丙 基M磷酸酯
將200 mg (574 nmol)2'-脫氧-5'-甲fl^-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于5 ml 二氯曱烷中并加入200 jil(1.15mmol)二異丙基乙胺。將反應(yīng)混合物冷卻至 0°C，然后加入192 nl (861 nmol)2-氰乙基-二異丙基氯代^J^褲酸酯。3小 時(shí)后在0。C下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑，將殘留物吸收進(jìn)50 ml NaHC03 溶液中并用50 ml乙酸乙酯萃取三次。將合并的有;M目用50ml飽和NaCl 溶液清洗，用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色 鐠純化(氯仿/曱醇9/1，環(huán)己烷/乙酸乙酯1/1),得到130 mg (237 pmol, 41。/。)的[5-(E)-溴乙烯基-5，-甲lL^-2'-脫氧尿苷-3'-基-(2-氰乙基)-二異丙基 ^J^磷酸酯白色固體。
iH-NMR (300 MHz, CDC13): 1.19 (d, 12H); 2.17-2.24 (m, 1H); 2.41-2.58 (m, 1H); 2.64 (t， 2H); 3.46-3.47 (2 x s， 3H); 3.55-3.91 (m， 6H); 4.16-4.23 (m, 1H); 4.57-4.61 (m, 1H); 6.30-6.36 (m， 1H); 6.63 (d, 1H); 7.33 (d， 1H); 7.92-7.94 (2 x s， 1H); 8.23 (bs， 1H) ppm.
該物質(zhì)包含非對(duì)映異構(gòu)體混合物(比例約1:1)。
31P-NMR (122匪z, CDC13): 149.45; 149.51 ppm.
2.4.2. [5-(E)-溴乙烯基-3，-甲iL基-2'-脫氧尿苷-5'-基-(2-氰乙基)-二異丙 基M磷酸酯
將200 mg (574 jimol)2，-脫氧-3，-曱l^-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于5 ml 二氯曱烷中并加入200 jil (1.15 mmol)二異丙基乙胺。將反應(yīng)混合物冷卻到0。C，然后加入192 nl (861 jimol)2-氰乙基-二異丙基氯代^J^磷酸酯。2小 時(shí)后在0"C下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑，將殘留物吸收進(jìn)50 ml NaHC03 溶液中，用50 ml乙酸乙酯萃取三次。將合并的有;W目用50ml飽和NaCl 溶液清洗，用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色 譜純化(氯仿/甲醇9/1; 二氯甲烷/乙酸乙酯1/1)，得到120 mg (219 nmol， 38%)的[5-(E)-溴乙烯基-3'-甲緣-2'-脫氧尿苷-5'-基-(2-氰乙基)-二異丙基 JL^磷酸酯白色固體。
^國(guó)NMR (300 MHz, CDC13): 1.17-1.26 (m, 12H); 1.96-2.17 (m， 1H); 2.45-2.57 (m, 1H); 2.65-2.74 (m, 2H); 3.35-3.37 (2x s, 3H); 3.55-3.65 (m， 2H); 3.81-4.09 (m， 5H); 4.17-4.25 (2x m， 1H); 6.20-6.34 (2x m， 1H); 6.74-6.83 (2x d, 1H); 7.40-7.42 (2x d, 1H); 7.85， 8.10 (2x s, 1H); 8.03 (bs， 1H) ppm.
該物質(zhì)包含非對(duì)映異構(gòu)體混合物(比例約1:1)。 31P-NMR(122 MHz, CDC13): 150.02; 150.48 ppm.
^_BVDU的3'，5'-二卣素衍生物
3.1.3',5'陽(yáng)二氟-2',3',5'-三脫氧-5陽(yáng)(E)-溴乙烯基尿苷
3.1.1. 5'-0-三苯甲基-2，3'-脫^2'-脫氧-5-乙基-尿苷
將17.84 g (35.78 mmol)5'-0-三苯甲基-2，-脫氧-5-乙基-尿苷和14.08 g (53.67 mmol)三苯基膦溶于170 ml THF中。在40分鐘內(nèi)滴加10.85 g (53.67 mmol)偶氮二碳酸二異丙酯在120 ml THF中的溶液。室溫下攪拌l小時(shí)后， 轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/曱醇10:1)?；旌虾?，通過(guò)柱色鐠純化(氯仿 /曱醇10 : 1)后得到13.00 g (75.6%)無(wú)色泡沫。
3.1.2. l-(5，-0-三苯曱基-2'-脫氧-P-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-乙基)-2,4-(lH， 3H)-嘧咬二酮
將14.24 g (29.63 mmol)5，-0-三苯甲基-2,3'-脫7j^2'-脫氧-5-乙基-尿苷 在500 ml乙醇和140 ml水的混合物中與3.03 g (75.85 mmol)氬氧化鈉一起 加熱卯分鐘直至沸騰。然后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10:1)。將 溶液混勻，用磷酸鹽緩沖液和乙酸乙酯處理并進(jìn)行相分離。用乙酸乙酯萃 取水相數(shù)次。用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯相。過(guò)濾并離心除去溶劑后，
59干燥所得產(chǎn)物，得到13.25 g(卯.4。/。)無(wú)色固體。
3.1.3. 5'-0-三苯曱基-3'-氟-2，,3'-雙脫氧-5-乙基-尿苷
在0。C下將7.73 g (15.51 mmol)l-(5'-0-三苯甲基-2'-脫氧-p-D-蘇-呋喃 戊糖基)-5-乙基)-2，4-(lH,3H)-吡咬二酮溶于130 ml 二氯曱烷中，在30分鐘 內(nèi)滴加5.0 g (31.02 mmol)二乙基^J^三氟化硫(DAST)。在0。C下攪拌1 小時(shí)后，轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇20:l)。將該批次倒入冰冷 的碳酸氬鈉溶液(5%)中，進(jìn)行相分離，再分別用50ml二氯甲烷萃取水 相兩次。將合并的有W目用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并離心后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行 純化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:1)，得到5.17 g (66.6%)無(wú)色泡沫。
3.1.4. 3'-氟-2'，3'-雙脫氧-5-乙基-尿苷
將4.69 g (9.37 mmol)5'-0-三笨甲基-3，-氟-2，,3，-雙脫氧-5-乙基-尿苷 溶于70 ml乙酸中并緩慢加入18 ml水。加熱20分鐘至90°C ，然后停止反 應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇15:l)。將該批次置于水浴中1小時(shí)，過(guò)濾，用 80%乙酸清洗殘留物。用400ml水稀釋濾液并用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合 并的萃取物用飽和食鹽溶液清洗并用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑 后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行純化(氯仿/曱醇15:1)，得到1.33g(55.0。/。)無(wú)色固 體。
3.1.5. 5'-0-甲基磺?；?3，國(guó)氟誦2，,3'國(guó)雙脫氧誦5國(guó)乙基-尿苷
將1.33 g (5.15 mmol)3，-氟-2'，3'-雙脫氧-5-乙基-尿苷溶于8 ml吡啶 中，在0。C下在20分鐘內(nèi)向其中加入1.78 g (15.5 mmol)甲基碌酰氯在2.5 ml THF中的溶液。使其升至室溫。然后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。將該批次倒入冰水中并攪拌15分鐘。酸化(pH約1.5)后，用乙酸 乙酯進(jìn)行萃取，用磷酸鹽緩沖液清洗合并的萃取物。用硫酸鎂干燥后，過(guò) 濾并蒸餾出溶劑，得到1.68 g (97.1%)無(wú)色泡沫。
3.1.6. 3，,5'畫(huà)二氟國(guó)2，,3',5'畫(huà)三脫氧-5畫(huà)乙基國(guó)尿苷
將1.68 g (4.99 mmol)5'-0-曱基磺Sfe^-3'-氟-2'，3'-雙脫氧-5國(guó)乙基國(guó)尿 苷和6.30 g (20.00 mmol)四丁基氟化銨三水合物溶于30 ml DMF中并加入 20g分子篩(3A)。加熱1，5小時(shí)至40'C后，停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/ 甲醇20:1)。用二甲苯除去DMF并將殘留物溶于乙酸乙酯中。用1M鹽酸和磷酸鹽緩沖液清洗乙酸乙酯相。將合并的水相中和并用乙酸乙酯萃 取。將全部合并的乙酸乙酯相用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并離心除去溶劑后，用
柱色諳純化(氯仿/甲醇30 : 1;氯仿/乙酸乙酯3:1)數(shù)次，得到0.52 g (40.0%)無(wú)色固體。
3.1.7. 3'，5，-二氟-2'，3'，5'-三脫氧5-(E)-溴乙烯基尿苷
將520 mg (1.99 mmol)3'，5'-二氟-2'，3',5'-三脫氧-5-乙基-尿苷溶于15 ml氯仿中并加熱直到沸騰。加入IO mg偶氮-雙-異丁腈(AIBN)并滴加 702mg溴在2ml氯仿中的溶液。在滴加期間，用500W燈輻照。40分鐘 后，所有溴都已加入，再在回流下加熱l小時(shí)。冷卻后，將氬氣通入溶液 中并加入304mg三乙胺。在室溫下攪拌1,5小時(shí)后，與磷酸鹽緩沖液一起 振搖，再用乙酸乙酯萃取水相數(shù)次。用硫酸鎂千燥合并的有;M目。過(guò)濾并 離心除去溶劑后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)4亍多次純化(氯仿/甲醇25:1;氯仿/乙酸 乙酯5 : 1),然后用乙醇和甲醇/水進(jìn)行重結(jié)晶。得到211 mg (31.3%)無(wú)色 固體，熔點(diǎn)177-18(TC。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.38 (m， 2H); 4.43 (m， 1H); 4.69 (m， 2H); 5.42 (m， 1H); 6.19 (m, 1H); 6.89 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.79 (s, 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.
圖7顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相比于 單獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
3.2.3'-氟-5，-氯-2',3，,5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將l卯mg (0.57 mmol)3'-氟-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和200 mg (0.76 mmol)三苯基膦溶于7 ml DMF中并向其中加入440 mg (2.83 mmol)四氯甲烷。在室溫下攪拌18小時(shí)后，加入100 mg (0.38 mmol)三苯 基膦和220 mg (1.42 mmol)四氯甲烷。22小時(shí)后及^應(yīng)完成(DC對(duì)照，二 氯甲烷/乙酸乙酯4:1)。通過(guò)與二甲苯共蒸餾除去DMF，將殘留物通過(guò) 柱色鐠純化(二氯曱烷/乙酸乙酯5:1)，得到60 ml (30%)晶體，熔點(diǎn)203 。C。
工H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.36 (m， 2H); 3.88 (m, 2H); 4.36 (m， 1H); 5.35 (d， 1H); 6.21 (m， 1H); 6.89 (d， 1H); 7.28 (d， 1H); 7.85 (s， 1H); 11.69 (s, 1H) ppm.3.3. 3',5'-二氯-2',3',5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.70 g (2.0 mmol)3，-氯-2',3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.70 g (2.7 mmol)三苯基膦溶于10 ml DMF中并向其中加入1.59 g (10.0 mmol)四 氯甲烷。在室溫下24小時(shí)后反應(yīng)完成(DC對(duì)照，二氯曱烷/乙酸乙酯4: 1)。通過(guò)與二甲苯共蒸餾除去DMF,將殘留物通過(guò)柱色謙純化(二氯甲 烷/乙酸乙酯4:1)。用正己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶后，得到180 mg (24.3%) 晶體，熔點(diǎn)184'C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.59 (m， 1H); 2.76 (m， 1H); 3.94 (m, 2H); 4.27 (m, 1H); 4.71 (m， 1H); 6.26 (m, 1H); 6.卯(d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.81 (s， 1H); 11，67 (s, 1H) ppm.
3.4. 3'-疊氮基-5'-氟-2',3,5"-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.4.1. 2'，3，-雙脫氧-3'-疊氮基-5'-0-(4-甲基苯基磺?；?-5-(E)-溴乙烯基 尿香
在0。C下將2.54 g (7.09 mmol)2'，3，-雙脫氧-3'-疊氮基-5-(E)-溴乙烯基 尿苷溶于20 ml吡啶中并向其中加入2.56 g (13.42 mmol)4-甲基-苯基磺酰 氯。使其升至室溫并攪拌20小時(shí)。然后反應(yīng)完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇20 : 1)。將該批次倒入80ml冰水中并用6M鹽酸酸化。用乙酸乙酯萃取，將 合并的萃取物用飽和食鹽溶液清洗，用硫酸鎂千燥。過(guò)濾并離心除去溶劑 后，得到3.32 g (91.5%)無(wú)色泡沫。
3.4.2. 3'-疊氮基-5，國(guó)氟-2'，3,5"-三脫氧畫(huà)5畫(huà)(E)畫(huà)溴乙烯基尿苷
將3.32 g (6.48 mmol)2',3'-雙脫氧-3'誦疊氮基-5，-0-(4-曱基苯基磺酰 基)-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于50 ml DMF中并向其中加入20 g分子篩(3 A) 和8.17 g四叔丁基氟化銨三水合物。加熱至40。C6小時(shí)后，停止反應(yīng)(DC 對(duì)照，環(huán)己烷/乙酸乙酯1:1)。利用二甲苯除去DMF，將棕色油狀殘留 物溶于乙酸乙酯中并用100mllM鹽酸清洗，分別用50ml磷酸鹽緩沖液 清洗兩次以及用飽和食鹽溶液清洗。將7JC相合并、中和并用乙酸乙酯萃取。 將全部合并的有M目用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色譜 進(jìn)行純化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:1;環(huán)己烷/乙酸乙酯1.2:1)，得到0.72 g(19.2。/o)無(wú)色固體，熔點(diǎn)135'C。
62丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.45 (m, 2H); 4.05 (m, 1H); 4.53 (m, 1H); 4.62 (m, 1H); 4.73 (m， 1H); 6.13 (m, 1H); 6.90 (d， 1H); 7.28 (d, 1H); 7.74 (s, 1H); 11.64 (s, 1H) ppm.
3.5.3'-氯-5，-溴-2',3',5，-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.5.1. 2',3，-雙脫氧-3,-氯-5'-0-甲基磺絲-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下將1.0 g (2.84 mmol)3'-氯-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶 于5 ml THF/吡啶(1 : l)中，將溶解在5 ml THF中的1.10 g (9.6 mmol)甲基 磺酰氯逐滴加入。使其升至室溫并攪拌總共20小時(shí)。然后轉(zhuǎn)化完成(DC 對(duì)照，二氯甲烷/曱醇15:1)。將該批次倒入冰水中并攪拌15分鐘。利用 2 M鹽酸將其酸化并用乙酸乙酯萃取沉淀的油。用磷酸鹽緩沖液清洗合并 的乙酸乙酯相并用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并蒸餾出溶劑后，得到1.22 g(定量 產(chǎn)量)無(wú)色泡沫。
3.5.2 3'-氯-5'-溴-2',3',5，-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將510 mg(1.18 mmol)3'-氯-5'-0-(甲基磺酰基)畫(huà)5國(guó)(E)國(guó)溴乙烯基尿苷與 515mg(6mmol)溴化鋰共同加熱3小時(shí)。然后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯 曱烷/甲醇25:1)。通過(guò)與二甲苯共蒸餾除去DMF，將殘留物通過(guò)柱色譜 純化(氯仿/甲醇60 : 1， 二氯甲烷/甲醇40 : 1以及環(huán)己烷/乙酸乙酯1.2 : 1 )，得到240 mg (49.1%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)149'C 。
iH-醒R (500 MHz, DMSO-d6): 2.52 (m, 1H); 2.76 (m， 1H); 3.73 (m， 1H); 3.81 (m， 1H); 4.27 (m， 1H); 4.68 (m, 1H); 6.27 (m， 1H); 6.90 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.82 (s, 1H); 11.67 (s， 1H) ppm.
3.5.3 5'-疊氮基-3'-氯-2'，3，，5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在20 ml DMF中將3.50 g (8.15 11111101)3，-氯-5'陽(yáng)0-(曱基磺^^)誦2,,3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷與1.20 g (24.4 mmo1,3.0當(dāng)量)疊氮化鋰一^ 熱1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色語(yǔ)純化(氯仿/曱醇12/1)， 得到2.12 g (5.63 mmol， 69%)白色固體的5，-疊氮基-3'-氯-2'，3'，5，-三脫氧 -5-(E)-溴乙烯基尿苷，熔點(diǎn)58 - 60。C 。
力國(guó)NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.58 (m, 1H); 2.75 (m， 1H); 3.60 (m， 1H); 3.71 (m， 1H); 4.19 (m， 1H); 4.71 (m， 1H); 6.25 (dd， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.30(d， 1H); 7.86 (s, 1H); 11.69 (s， 1H) ppm.
3.5.4. 3'-疊氮基-5'-氯-2'，3，，5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
3.5.4.1. 5'-氯-3'-0-(曱基磺?；?-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
在0。C下將1.00 g (2.84 mmol)5'-氯-2'，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷 置于10 ml吡咬中。向5 ml THF中滴加0.34 g (2.99 mmol)甲碌酰氯并隨 后在室溫下攪拌4小時(shí)。將v^應(yīng)混合物傾倒于冰上，用濃鹽酸調(diào)節(jié)至pH-5并用乙酸乙酯萃取3次。用稀鹽酸、飽和NaCl溶液清洗有;M目，用Na2S04 干燥，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。得到1.03 g (2.40 mmol, 84%)的5，-氯 -3'-0-(甲基磺絲)-2，，5'-雙脫氧-5-(￡)-溴乙烯基尿苷白色固體。
3.5.4.2. 2，3'-脫;^2'-脫氧-5'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿香
將800 mg (1.86 mmol)5'-氯醒3'國(guó)0誦(甲基磺酰基)謹(jǐn)2，，5'國(guó)雙脫氧-5-(E)-溴 乙烯基尿普置于10 ml THF中。加入340 mg (2.23 mmol)l，8-二氮雜雙環(huán)并5.4.0I十一烷-7-烯(DMU)并在回流下加熱4小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶 劑。通過(guò)柱色譜純化(氯仿/甲醇9/1),得到470 mg (1.41 mmol， 76% ) 的2,3'-脫7J^2'-脫氧-5'-氯-5-(E)-溴乙烯基尿苷白色固體。
3.5.4.3. 3'-疊氮基-5'-氯-2',3'，5，-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將470 mg (1.41 mmol)2，3'-脫7j^5'-氯-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷置 于10 ml DMF中。加入345 mg (7.05 mmol)LiN3并將>^應(yīng)混合物加熱20 小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將反應(yīng)混合物吸收進(jìn)50ml乙酸乙酯中， 利用NaCl溶液清洗有;M目。利用乙酸乙酯萃取水相三次。將合并的有機(jī) 相用飽和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通 過(guò)柱色諳純化(氯仿/甲醇9/1 )，得到370 mg (982 pmol， 70%)白色固體的 3'-疊氮基-5，-氯-2',3'，5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷，熔點(diǎn)124-125°C。
工H-NMR (300 MHz， CDC13): 2.33-2,57 (m， 2H); 3.58-3.66 (m， 1H); 3.80-3.87 (m, 1H); 3.96-4.02 (m, 1H); 4.21-4.28 (m, 1H); 6.14 (t, 1H); 6.68 (d 1H); 7.42 (d， 1H); 7.54， (s, 1H); 8.39 (bs, 1H).
3.6.3',5，-二溴-2',3',5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.52 g (1.31 mmol)2，，3，-雙脫氧-3'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于15
64ml吡咬中并向其中加入0.69 g (2.62 mmol)三苯基膦。在10分鐘內(nèi)向此溶 液中滴加0.79 mg (2.36 mmol)四溴甲烷在5 ml吡咬中的溶液。1小時(shí)后停 止^^應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇20 : 1)。將其傾倒于冰上并用37%鹽酸酸 化。用乙酸乙酯萃取(3 x 40 ml )，然后用1 M鹽酸和飽和食鹽溶液清洗 合并的乙酸乙酯相。利用硫酸鎂干燥并過(guò)濾后，將粗物質(zhì)通過(guò)柱色鐠純化 (二氯曱烷/乙酸乙酯4:1)并用環(huán)己烷/乙酸乙酯再沉淀。干燥后，得到 0.21g(35.0。/o)無(wú)色固體，熔點(diǎn)153'C。
iH-醒R (500 MHz， DMSO-d6): 2.68 (m, 1H); 2.81 (m, 1H); 3.74 (m, 1H); 3.82 (m， 1H); 4.38 (m, 1H); 4.65 (m， 1H); 6.27 (m, 1H); 6.91 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.82 (s, 1H); 11.66 (s, 1H) ppm.
圖8顯示了根據(jù)本發(fā)明的此化合物聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相比于 單獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
4. 2',3，-雙脫氫-2'，3',5'-三脫氧-5'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.1 2',3，-雙脫氫-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.1.1. l-(2，-脫氧-(5-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH， 3H)-嘧咬二酮
將20.07 g (47.87 mmol)2,3'-脫7jC-2，-脫氧-5'-0-苯甲跣基畫(huà)5-(E)-溴乙 烯基尿苷混懸于400 ml乙醇中并與4.78 g (120 mmol)氫氧化鈉在95 ml水 中的溶液混合。將其加熱2.5小時(shí)至沸騰，然后停止^^應(yīng)(DC對(duì)照，二氯 甲烷/甲醇10:l)。用鹽酸中和后，蒸餾出溶劑至干，將殘留物用丙酮/乙 酸乙酯混合物(1:1)萃取數(shù)次。得到13.5 g (84.6%)產(chǎn)物。
4.1.2. 5，-0-苯甲?；?l-(2'-脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2,4(lH，3H)-嘧啶二酮
將5.0 g (15.00 mmol)l-(2，-脫氧-P-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯 基)-2,4(lH,3H)-嘧啶二酮溶于125 ml吡啶中并冷卻至0"C。在此溫度下向 其中滴加2.53 g (18.0 mmol)苯甲酰氯在30 ml吡啶中的溶液。60分鐘后停 止滴加。在0X:下再攪拌60分鐘。然后停止>^應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/ 甲醇20 :1 )。將該批次倒入400 ml冰水中，用4 x 100 ml乙酸乙酯萃取，將合并的萃取物用5%碳酸氫鉀和飽和食鹽溶液清洗。用硫酸鎂干燥后， 過(guò)濾并蒸餾出溶劑，通過(guò)柱色語(yǔ)進(jìn)行純化(氯仿/甲醇20 : 1 )。得到5.52 g (84.1%)無(wú)色固體。
4.1.3. 3'-0-(甲磺酰基)-5，-0-苯曱?；?1-(2，-脫氧-(5-0-蘇-呋喃戊糖
基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH，3H)-嘧咬二酮
將3.50 g (8.00 mmol)5'-0-苯甲?；?l-(2'-脫氧-(5-D-蘇-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙)^基)-2,4(lH,3H)-嘧咬二酮溶于15 ml吡啶中并在0*€下 與1.14 g (10.00 mmol)甲磺酰氯混合。18小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯 仿/曱醇12:1)。然后將該批次傾倒于水上并使之靜置20分鐘。利用6M 鹽酸將其酸化并用乙酸乙酯(3 x 50 ml)萃取。中性清洗合并的萃取物并 用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，得到3.95g(95.8。/。)微黃色泡沫。
4.1.4. 5'-0-苯曱?；?2，,3，-雙脫氫-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將3.38 (6.56 mmol)3'-0-(甲磺?；?誦5'-0-苯曱^^-l國(guó)(2'-脫氧-p國(guó)D-蘇 -呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH,3H)-嘧啶二酮溶于120 ml THF 中。向其中加入6.20 g (19.68 mmol)四正丁基氟化銨三水合物和25.0 g分 子篩(3 A)并使其在室溫下攪拌20小時(shí)。然后反應(yīng)完成(DC對(duì)照，二 氯甲烷/乙酸乙酯3:1)。通過(guò)珪藻土過(guò)濾，用乙酸乙酯充分清洗，濃縮至 80 ml并用3 x 80 ml飽和食鹽溶液清洗。用硫酸鎂干燥后，過(guò)濾并通過(guò)柱 色鐠純化，得到2.20 g (80.0%)無(wú)色固體。
4.1.5. 2',3'-雙脫氫-2，，3，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將2.47 g (5.89 mmol)5'-0-苯甲酰基-2'，3'-雙脫氫國(guó)2'，3'-雙脫氧-5-(E)國(guó) 溴乙烯基尿苷混懸于70 ml THF中并與8.8 ml (17.6 mmol) 2 M氫氧化鈉 溶液混合。5小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇20:1)。將該批 次倒入100 ml磷酸鹽緩沖溶液(pH = 7)中并用5 x 50 ml乙酸乙酯萃取。 用硫酸鎂千燥，蒸餾出溶劑并通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/丙酮3 : 1)后，得 到1.73 g (93%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)> 250X:(分解)。
力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.63 (m， 2H); 4.81 (m, 1H); 5.09 (t, 1H); 5.92 (m, 1H); 6.42 (m， 1H); 6.75 (d， 1H); 6.82 (m, 1H); 7.17 (d, 1H); 8.04 (s， 1H); 11.59 (s， 1H) ppm.
664.2.2',3，-雙脫氬-2',3',5'-三脫氧-5'-溴-5-(E)-溴乙烯基尿苷
4.2.1. 5'-0-(4-甲基苯基碌?；?-2',3，-雙脫氫-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苦
將0.55 g (1.75 mmol)2',3'-雙脫氫-2',3'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶 于5 ml吡咬中并在0"C下與0.67 g (3.5 mmol)4-甲基^t^酰氯混合。20小 時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇20 : 1)。將其傾倒于水上，攪拌20 小時(shí)并過(guò)濾。用水充分清洗后，通過(guò)氯化鈞干燥。通過(guò)柱色語(yǔ)純化(環(huán)己 烷/丙酮2 : 1)后，得到0.65 g (79.4%)無(wú)色固體。
4.2.2. 2'，3，-雙脫氫-2',3，,5，-三脫氧誦5'誦溴畫(huà)5-(E)國(guó)溴乙烯基尿苷
將0.65 g (1.39 mmol)5'-0國(guó)(4-曱基苯基碌?；?-2'，3，-雙脫氬-2'，3，-雙 脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苦和0.87 g (10.00 mmol)溴化鋰溶于10 ml DMF中 并加熱至50t:。 3.5小時(shí)后，再加入400 mg (4.6 mmol)溴化鋰，再過(guò)60 分鐘后轉(zhuǎn)化完成。將該批次倒入40 ml水中，過(guò)濾出沉淀的沉淀物并通過(guò) 氯化鉤干燥。通過(guò)柱色譜純化(環(huán)己烷/丙酮2 : 1 )后，得到510 mg (97.3%) 無(wú)色固體，熔點(diǎn)>150^！。
丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.75 (m， 2H); 5.03 (m， 1H); 6.06 (m， 1H); 6.47 (m， 1H); 6.82 (m, 1H); 6.96 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.65 (s, 1H); 11.68 (s, 1H) ppm爭(zhēng)
^_BVDU的2'-氟衍生物
5.1.2'-氟-2，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
5.1.1. 3-(2'-脫氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸
將2.2 g (6.66 mmol)3-(2'-脫氧-2'-氟尿香-5-基)-丙烯酸甲酯溶于20 ml (40 mmol) 2 M氫氧化鈉溶液中。3小時(shí)后，利用12 M鹽酸將其酸化并在 冰浴中冷卻l小時(shí)。過(guò)濾后，用水水清洗并在干燥器中干燥，得到1.31 g (62.1%)無(wú)色固體。
5.1.2. 2，-氟-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將1.31 g (3.97 mmol)3-(2'-脫氧-2'-氟尿苷-5-基)-丙烯酸溶于40 mlDMF中，然后加入1.58 g (16.04 mmol)碳酸氫鉀。在室溫下攪拌20分鐘 后，將溶解在20 ml DMF中的0.86 g (4.81 mmol)N-溴代琥珀酰亞胺在30 分鐘內(nèi)逐滴加入。在室溫下攪拌4小時(shí)后，過(guò)濾，用DMF清洗殘留物并 利用二甲苯蒸餾出DMF。通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/甲醇9:1)殘留物。在 乙醚中處理并干燥后，得到0.84g(62.7。/o)無(wú)色產(chǎn)物，熔點(diǎn)1821C。
iH-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 3.63 (m， 1H); 3.85 (m, 1H); 3.89 (m， 1H); 4.17 (m， 1H); 5.04 (dd, 1H); 5.35 (t， 1H); 5.61 (d， 1H); 5.88 (d， 1H); 6.75 (d, 1H); 7.21 (d， 1H); 8.19 (s， 1H); 11.65 (s, 1H) ppm.
5.2. 2'-氟-5'-溴-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.25 g (0.71 mmol)2'-氟-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和0.37 g (1.42 mmol)三苯基膦溶于10 ml吡啶中。將0.42 g (1.28 mmol)四溴曱烷溶于5 ml 吡啶中并在5分鐘內(nèi)逐滴加入。l小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10 : 1)。利用曱苯除去吡咬后，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(氯仿/曱醇30 : 1)，得 到0.23 g (78%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)223"C。
iH-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.78 (m, 1H); 3.85 (m， 1H); 4.0 (m, 1H); 4.13 (m, 1H); 5.19 (dd， 1H); 5.87 (d, 1H); 5.91 (dd， 1H); 6.89 (d, 1H); 7.29 (d， 1H); 7.77 (s, 1H); 11.72 (s， 1H) ppm.
5.3. 5-(E)-2-溴乙烯基)-l-(2'-脫氧-2'-氟-B-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶 5.3.1 5-碘-l-(2，-脫氧-2，-氟-3',5'-雙-0-苯甲酰基-B-D-阿拉伯呋喃糖基)
尿嘧啶
將7.08 g (29.75 mmol)5-械尿嘧啶混懸于105 ml 1，2-二氯乙烷中。向 其中加入13.32 g (65.47 mmol) N，O-雙-三甲基甲硅烷基乙酰胺(BSA)并在 室溫下攪拌5小時(shí)，得到澄清無(wú)色溶液。向其中加入11.40 g (26.9 mmol)3,5-雙-0-苯甲酰基-2-脫氧-2-氟-a-D-阿拉伯糖基溴化物。將其在回流下加熱22 小時(shí)。然后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇100:1)。將該批次用450 ml 乙酸乙酯稀釋并用400ml磷酸鹽緩沖液(pH = 7)處理。分離有W目并用 3 x 150 ml乙酸乙酯萃取水相。將合并的女;W目用硫酸鎂干燥后，過(guò)濾出 干燥劑并蒸憤出溶劑，用異丙醇重結(jié)晶。得到8.47g(54,3。/。)無(wú)色產(chǎn)物。5.3.2. 5-碟-l-(2，-脫氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶
將8.14 (14.03 11111101)5國(guó)湊1-(2'-脫氧-2'陽(yáng)氟-3，，5'-雙國(guó)0國(guó)苯曱?；?卩"0-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬溶于250 ml THF中并與50 ml (100 mmol) 2 M氫 氧化鈉溶液混合。4小時(shí)后停止反應(yīng)。將溶液中和并用乙酸乙酯萃取數(shù)次。 將合并的萃取物用硫酸鎂干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，通過(guò)柱色鐠進(jìn)行 純化(氯仿/甲醇10 : 1 )，得到4.80 g (91.8%)無(wú)色固體。
5.3.3. 3-((2'-脫氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)-丙烯酸甲酯
將0.75 g (2.84 mmol)三苯基膦、0.34 g (1.52 mmol)乙酸把(II)和6.17 g (61 mmol)三乙胺在160 ml 1,4-二^惡烷中加熱至80"C。形成深紅色。將其 在此溫度下加熱10分鐘，然后加入6.54 g (76 mmol)丙烯酸甲酯、4.80 g (12.9 mmol)5-碘-l-(2，-脫氧-2'-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶和40 ml 1,4-二嚅烷。在回流下加熱l小時(shí)后，轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇9:1)。 冷卻后，將其通過(guò)硅藻土與未溶解部分過(guò)濾分離并用THF充分清洗直到 濾液變?yōu)闊o(wú)色。離心濾液，將油狀殘留物通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/曱醇10: 1),得到2.72 g (54.4%)無(wú)色固體。
5.3.4. 3-((2'-脫氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)-丙烯酸
將2.72 g (8.25 mmol)3-((2，-脫氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶 -5-基)-丙烯酸甲酯溶于40 ml (80 mmol) 2 M氫氧化鈉溶液中。4小時(shí)后停 止^^應(yīng)(DC對(duì)照，氯仿/甲醇8:1)。將其用12 M鹽酸酸化并在水浴中靜 置1小時(shí)。抽濾出沉淀，用水水清洗并在干燥器中干燥。得到2.61 g (100%) 無(wú)色產(chǎn)物。
5.3.5. 5-(E)-(2-溴乙烯基)-l-(2'-脫氧-2'-氟-(5-D-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧啶
將2.61 g (7.9 11111101)3-((2'-脫氧-2，-氟-&-0-阿拉伯呋喃糖基)尿嘧咬-5-基)國(guó)丙烯酸溶于60 ml DMF中并與3.2 g (32 mmol)碳酸氫鉀混合。在室溫 下攪拌30分鐘，然后在50分鐘內(nèi)滴加1.78 g (10 mmol)在30 ml DMF中 的溶液。在室溫下再攪拌3.5小時(shí)后，過(guò)濾出未溶解部分，將殘留物用丙 酮/甲醇1 : 1充分清洗并離心。通過(guò)與二曱苯共蒸餾除去DMF。通過(guò)柱色 鐠純化(氯仿/甲醇9 : 1以及二氯甲烷/乙酸乙酯1 : 2)后，得到1.51 g (54.5%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)202n。
69衛(wèi)H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.62 (m， 1H); 3.65 (m， 1H); 3.81 (m, 1H); 4.25 (dq, 1H); 5.06 (dt, 1H); 5.14 (t, 1H); 5.89 (d, 1H); 6.11 (dd， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 7.99 (s， 1 H); 11.75 (s, 1H).
5.4. 5-(EW2-溴乙烯基M-(2，,5'-雙脫氧-2'-氟-5'-溴-B-D-阿拉伯呋喃糖 基)-尿嘧啶
將0.60 g (1.71 mmol)5-(E)-(2-溴乙烯基)-l陽(yáng)(2'誦脫氧-2'國(guó)氟-p-D-阿拉伯 呋喃糖基)尿嘧啶和950 mg (3.62 mmol)三苯基膦溶于10 ml吡啶中。然后 在10分鐘內(nèi)加入1.08 g (3.25 mmol)四溴甲烷在10 ml吡咬中的溶液。1.5 小時(shí)后反應(yīng)完成(DC對(duì)照，氯仿/甲醇10:1)。利用曱苯蒸餾出吡啶，將 殘留物通過(guò)柱色譜純化(氯仿/曱醇30 : 1 )，得到0.63 g (89.0%)無(wú)色產(chǎn)物， 熔點(diǎn)237"C。
!H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 3.79 (m， 2H); 4.07 (m, 1H); 4.26 (dq， 1H); 5.09 (ddd, 1H); 6.16 (d, 1H); 6.23 (dd, 1H); 6.98 (d, 1H); 7.30 (d, 1H); 7.74 (d， 1H); 11.80 (s, 1H) ppm.
^_BVDU的2',2'-二氟衍生物
6.1. l-(2'-脫氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)-溴乙錄基尿 嘧啶和l-(2，-脫氧-2',2'-二氟-(3-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙 烯基尿嘧啶
6.1.1. l-(3，，5，-二-0-苯甲?；?2',2'-二氟-a-D-呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)誦溴 乙烯基尿嘧咬和l-(3，,5，-雙-0-苯甲酰基-2，,2，-二氟-p-D-呋喃戊糖
-1 '-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬
將1.89 g (8.70 mmol)5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶混懸于40 ml 1,2-二氯乙 烷中并加入4.28 g (19.23 mmol)三曱基甲硅烷基三氟甲磺酸酯和2.14 g (177 mmol) 2,4,6-三甲基他啶。1小時(shí)后，得到澄清溶液。將3.98 g (8.7 mmol)2-脫氧-2,2-二氟-D-呋喃核糖-3,5-二苯甲酸酯-l-甲磺酸酯(a/p混合 物)溶于25 ml 1,2-二氯乙烷中并在20分鐘內(nèi)逐滴加入。然后，在10分鐘 內(nèi)逐滴加入在15 ml 1,2-二氯乙烷中的1.94 g (8.7 mmol)三甲基曱^^基三氟甲磺酸酯并在回流下加熱18小時(shí)。DC對(duì)照(氯仿/甲醇10 : 1和100: l)表明轉(zhuǎn)化完全。蒸餾出溶劑并將油狀殘留物溶于80ml乙酸乙酯中。在 用2 x 80 ml 1 M鹽酸、2 x 80 ml飽和食鹽溶液和1 x 80 ml磷酸鹽緩沖液 清洗后，用硫酸鎂進(jìn)行干燥。過(guò)濾并離心除去溶劑后，將粗物質(zhì)通過(guò)柱色 鐠純化(氯仿/甲醇125 : 1 )，得到3.1 g (61.7%)(o/p = 1.2)無(wú)色泡沫。通過(guò)反復(fù)柱色鐠(環(huán)己烷/乙酸乙酯3:1)進(jìn)行a和p異頭物的分離。 得到1.49 g a-異頭物和1.15 g p-異頭物。6.1.2. l-(2，-脫氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶將1.49 g (2.58 mmol)l-(3'，5，-雙-0-苯甲?；?2',2'-二氟-a-D-呋喃戊糖 國(guó)l'隱基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬溶于55 ml THF中并加入13 ml (26 mmol) 2 M氫氧化鈉溶液。3小時(shí)后將其中和并用乙酸乙酯萃取。用硫酸鎂干^， 過(guò)濾并離心除去溶劑，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(氯仿/甲醇20 :1以及二氯甲 烷/甲醇20:1)。干燥后，得到0.82g(86。/o)無(wú)色固體，熔點(diǎn)192匸。^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.56 (m, 1H); 3.65 (m， 1H); 4.35 (m, 2H); 5.08 (s, 1H); 6.22 (m， 1H); 6.34 (d， 1H); 7.02 (d, 1H); 7.32 (d, 1H); 7.85 (s， 1H); 11.81 (s, 1H) ppm.6.1.3. l-(2'-脫氧-2'，2'-二氟-(5-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶將1.15 g (1.99 mmol)l-(3'，5'-雙-0-苯甲^L^-2',2，-二氟-l5-D-呋喃戊糖 -l'-基)-S-(E)-溴乙烯基尿嘧吱溶于55 ml THF中并與10 ml (20 mmol)氫氧 化鈉溶液混合。如上針對(duì)a-異頭物所述，類(lèi)似地進(jìn)行處理和通過(guò)柱色i普的 純化。得到740mg(100o/。)無(wú)色固體，熔點(diǎn)189"C。丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.64 (m, 1H); 3.81 (m, 1H); 3.87 (m， 1H); 4.22 (m， 1H); 5.36 (t, 1H); 6.06 (t, 1H); 6.33 (d， 1H); 6.83 (d， 1H); 7.27 (d， 1H); 8.05 (s， 1H); 11.86 (s, 1H) ppm.6.1.4. l-(5'-氯-2'，5'-雙脫氧-2',2'-二氟-a-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)-溴71乙烯基尿嘧啶將350 mg (0.95加11101)1-(2'-脫氧-2'，2'-二氟-01-0-赤-呋喃戊糖誦1'-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧咬溶于8 ml DMF中。加入337 mg (1.29 mmol)三 苯基膦，然后加入729 mg (4.74 mmol)四氯甲烷。在室溫下攪拌20小時(shí)后， 轉(zhuǎn)化完全(DC對(duì)照，氯仿/甲醇15 : 1)。加入2 ml甲醇后，利用二甲苯 除去DMF并將棕色殘留物通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/曱醇30 : 1)數(shù)次，得 到240 mg (65.2%)無(wú)色產(chǎn)物，熔點(diǎn)208*C 。^-NMR (500 MHz， DMSO-d6): 3.87 (m， 1H); 3.94 (m， 1H); 4.42 (m， 1H); 4.61 (m, 1H); 6.31 (m， 1H); 6.61 (s (br.)， 1H); 6.99 (d， 1H); 7.33 (d， 1H); 7.89 (d， 1H); 11.82 (s， (br.)， 1H) ppm.6.1.5. l-(5'-氯-2，，5'-雙脫氧-2，，2'-二氟-P-D-赤-呋喃戊糖-l'-基)-5-(E)國(guó)溴 乙烯基尿嘧啶類(lèi)似如上所述，轉(zhuǎn)化520 mg (1.41 mmol)l-(2'-脫氧-2，，2'-二氟-p-D-赤 -呋喃戊糖-l，-基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶、500mg(l.卯mmol)三苯基膦，并 且用1083 mg (7.04 mmol)四氯曱烷處理。通過(guò)柱色傳(氯仿/甲醇20 : 1) 進(jìn)4亍多次純化后，得到460mg(84.1。/o)無(wú)色產(chǎn)物，熔點(diǎn)191t:。力-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 3.99 (m， 2H); 4.05 (m， 1H); 4.25 (m, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.57 (d， 1H); 6.93 (d， 1H); 7.33 (d, 1H); 7.76 (s, 1H); 11.卯(s， 1H) ppm.7. l-(B-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶7.1 3-(1-(2,3,6-三-0-乙酰基-P-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧啶-5-基)-丙烯酸甲酯將0.84 g (3.2 mmol)乙酸鉭(II)、 0.89 g (3.38 mmol)三苯基膦和7.35 g (73.56 mmol)三乙胺在135 ml 二哺烷中加熱至。產(chǎn)生深紅色溶液。在 此溫度下將其加熱IO分鐘，先加入22.74 g (264 mmol)丙烯酸甲酯，然后 再加入9.0 g (18.13 mmol)l-(2,3，6-三-0-乙跣基-P-D-阿拉伯呋喃糖基)-5誦捵 尿嘧咬和90 ml 二嚅烷。在回流下加熱2,5小時(shí)后，停止反應(yīng)(DC對(duì)照， 二氯甲烷/乙酸乙酯5:2)。冷卻后，將其用乙酸乙酯稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)過(guò)濾與未 溶解部分分離并蒸發(fā)濾液。將殘留物通過(guò)柱色語(yǔ)純化(二氯甲烷/乙酸乙酯5:2),得到6.3 g (76.5%)無(wú)色泡沫。7.2. 3-(l-(B-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧咬-5-基)-丙烯酸將6.3 g (13.86 mmol)3-(l-(2，3，6-三-0-乙?；?(5-D-阿拉伯呋喃糖基)畫(huà) 尿嘧咬-5-基)-丙烯酸甲酯溶于140 ml THF中并與140 ml (280 mmol) 2 M 氫氧化鈉溶液混合。5小時(shí)后，濃縮溶液并用12M鹽酸酸化。將該批次保 持在冰浴中l(wèi)小時(shí)，抽濾出沉淀并用冰水清洗。在干燥器中干燥后，得到 3.45g(79.4。/o)無(wú)色固體。7.3. l-(B-D-阿拉伯吹喃糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶將3.46 g (11.01 mmol)3-(l-(p-D-阿拉伯呋喃糖基)-尿嘧咬-5-基)-丙烯 酸溶于100 ml DMF中并加入5.51 g (55.05 mmol)碳酸氫鉀。室溫下攪拌 30分鐘后，在1小時(shí)內(nèi)滴加2.37 g (13.4 mmol)N-溴琥珀酰亞胺的溶液。在 室溫下攪拌4.5小時(shí)后，利用二甲苯除去DMF,將殘留物通過(guò)柱色譜純化 (二氯甲烷/甲醇10:1)。從甲醇中重結(jié)晶后，得到無(wú)色晶體產(chǎn)物(0.84g， 21.8% )。力-麗R (500 MHz， DMSO-d6): 3.63 (m， 2H); 3.74 (m， 1H); 3.91 (m， 1H); 4.03 (m， 1H); 5.11 (t， 1H); 5.45 (d, 1H); 5.55 (d， 1H); 5.97 (d, 1H); 6.87 (d， 1H); 7.24 (d, 1H); 7.89 (s， 1H); (11.57 (s， 1H) ppm.^_5'-脫氧-BVDU和3',5'-雙脫氧-3'-卣素-BVDU8.1. 5'-脫氧-BVPU8.1.1. 2',5'-雙脫氧-5，-硤-5-乙基-尿普將8.0 g (31.22 mmol)2，-脫氧-5-乙基-尿苷和10.66 g (40.64 mmol)三苯 基膦溶于50 ml吡吱中。分幾部分向其中加入10.32 g (40.64 mmol)碘。4 小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇15:1)。真空下蒸餾吡啶，將 殘留物溶于乙酸乙酯中并用1M鹽酸清洗。用乙酸乙酯萃取水相數(shù)次，將 合并的乙酸乙酯相用磷酸鹽緩沖液清洗。用石危酸鎂干燥后，過(guò)濾并用乙酸 乙酯清洗，蒸餾出溶劑至干，用甲苯和二氯甲烷清洗殘留物。得到7.5 g (65.6%)微黃色的產(chǎn)物。8.1.2. 2'，5'-雙脫氧-5-乙基-尿苷將4.68 g (12.78 mmol)2',5，-雙脫氧-5'-硪國(guó)5-乙基畫(huà)尿苷和1.08 g (27.0 mmol)氫氧化鈉溶于280 ml乙醇中，與780 g氬化催化劑(鈀活性炭，10% Pd )混合并氫化12小時(shí)。然后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/曱醇10 : 1 )。 過(guò)濾出氫化催化劑后，蒸發(fā)至干，將殘留物與磷酸鹽緩沖液混合。抽濾出 沉淀物并用冰水清洗，用氫氧化鉀干燥。用乙酸乙酯萃取濾液數(shù)次。將合 并的萃取物用硫酸鎂干燥。過(guò)濾出干燥劑后，用乙酸乙酯清洗，蒸發(fā)至干。 得到總共2.97 g (96.7%)無(wú)色固體。8.1.3. 2'，5，-雙脫氧-3'-0-苯甲?；?5-乙基-尿苷將3.28 g (13.65 mmol)2',5'-雙脫氧-5-乙基-尿苷溶于35 ml吡咬中并 在Or下與2.14 g (15.21 mmol)苯曱酰氯混合。30分鐘后，移除冷浴并在 室溫下再攪拌l小時(shí)。然后轉(zhuǎn)化完成。利用甲苯除去吡啶并將殘留物溶于 氯仿中。利用O.IM鹽酸清洗并用磷酸鹽緩沖液中性清洗。利用硫酸鎂干 燥有^4目后，過(guò)濾出干燥劑并離心除去溶劑，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(二氯 曱烷/丙酮10:1)，得到3.82g(81,3。/n)白色泡沫。8.1.4. 2',5，-雙脫氧-3'-0-苯曱?；?5-(E)-溴乙烯基尿苷將2.79 g (8.1 mmol)2',5，-雙脫氧-3'-0-苯甲?；?5-乙基-尿苷和50 mg AIBN溶于45 ml氯仿中并加熱到沸騰。在1.5小時(shí)內(nèi)向其中滴加2.88 g (18 mmol)溴在15ml氯仿中的溶液。加熱至沸騰并再保持0.5小時(shí)，冷卻至室 溫后，向溶液中通入氬氣l小時(shí)。然后向溶液中加入2.88 g (19.8 mmol)三 乙胺并在室溫下攪拌l小時(shí)。蒸餾出氯仿，將殘留物吸收進(jìn)乙酸乙酯中并 用飽和食鹽溶液清洗。利用硫酸鎂干燥有^M目后，過(guò)濾出干燥劑并離心除 去溶劑，通過(guò)柱色語(yǔ)進(jìn)行純化(二氯甲烷/丙酮20 : 1),得到1.97 g (57.8%) 白色泡沫。8.1.5. 2'，5，-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷將2.48 g (5.88 mmol)2',5，-雙脫氧-3'-0-苯甲酰基-5-(E)-溴乙烯基尿苷 溶于25 ml THF中并與15 ml (30 mmol) 2 M氫氧化鈉溶液混合。在室溫 下攪拌3小時(shí)后停止轉(zhuǎn)化(DC對(duì)照，二氯曱烷/丙酮10:1)。與80ml磷 酸鹽緩沖液混合并利用乙酸乙酯萃取數(shù)次。利用硫酸鎂干燥有擬目后，過(guò) 濾出干燥劑并離心除去溶劑，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(氯仿/曱醇20 : 1)。 得到1.65 g (88.7%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)174n (分解)。工H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 2.11 (d, 3H); 2.15 (m, 2H); 3.81 (m, 1H); 3.98 (m, 1H); 5.26 (d, 1H); 6.09 (m, 1H); 6.99 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.76 (s， 1H); (11.58 (s， 1H) ppm.8.2. 3'-氯-2',3，,5'-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷8.2.1. 2，3'-脫水-l-(2',5，-雙脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶將1.47 g (4.64 mmol)2'，5，-雙脫氧醫(yī)5-(E)-溴乙烯基尿苷和1.83 g (6.96 mmol)三苯基膦溶于40 ml THF中，在20分鐘內(nèi)向此溶液中滴加1.44 g (7.16 mmol)偶氮二碳酸二異丙酯在10 ml THF中的溶液。4小時(shí)后停止反 應(yīng)(DC對(duì)照，二氯甲烷/甲醇15 : 1)。蒸餾出THF并將殘留物吸收進(jìn)曱 苯中。將其過(guò)濾并用甲苯清洗殘留物數(shù)次。得到無(wú)色固體(1.19 g， 85.7%)。8.2.2. 3'國(guó)氯-2',3，，5，國(guó)三脫氧-5畫(huà)(E)腸溴乙烯基尿苷將0.59 g (1.97 mmol)2，3'-脫水-l-(2'，5'-雙脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖 基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶和0.5 g (4.33 mmol)鹽酸吡咬混懸于5 ml DMF 中并加熱至卯t:。 l小時(shí)后停止反應(yīng)(DC對(duì)照，二氯曱烷/甲醇15:1)。 利用二甲苯蒸餾出DMF，用乙酸乙酯和飽和食鹽溶液處理殘留物。用乙 酸乙酯萃取7JC相數(shù)次，用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯相。過(guò)濾出干燥劑后， 用乙酸乙酯清洗并蒸餾出溶劑，通過(guò)柱色譜進(jìn)行純化(氯仿/甲醇100 : 1 以及氯仿/乙酸乙酯5:1)，得到0.25 8(37.8%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)134匸。1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.34 (d， 3H); 2.58 (m， 1H); 2.66 (m， 1H); 4.03 (m， 1H); 4.44 (m， 1H); 6.17 (dd， 1H); 6.97 (d， 1H); 7.31 (d, 1H); 7.77 (s， 1H); (11.62 (s, 1H) ppm.8.3. 3'-溴-2',3，,5-三脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷如8.2.2下所述，將0.59 g (1.97 11111101)2,3'-脫^1-(2',5'-雙脫氧-卩-0-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶和0.96 g鹽酸吡咬(6.0 mmol)在 DMF中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和處理。將產(chǎn)物通過(guò)柱色譜(氯仿/甲醇70 : 1)純化數(shù) 次，得到0.22g(29.4。/。)無(wú)色固體，熔點(diǎn)128匸。iH國(guó)N匿(300 MHz, DMSO-d6): 1.35 (d， 3H); 2.65 (m， 2H); 4.12 (m， 1H);754.41 (m, 1H); 6.15 (dd， 1H); 6.98 (d， 1H); 7.30 (d， 1H); 7.76 (s， 1H); 11.62 (s， 1H) ppm.^_l-2，,5-雙脫氧-B-D-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基l-5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶(1 - f 2 ',5-dideoxv-j3-D國(guó)glvcero-pent—4-enofur anosyll國(guó)5-0EVbromo vinyluracil)9.1 2',5'-雙脫氧-5'-磺-5-(E)-溴乙烯基尿苷將3.0 g (9.0 mmol)2，-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷和3.07 g (11.7 mmol) 三苯基膦溶于30 ml吡啶中并冷卻到10"C。分幾部分向其中加入2.97 g (11.7 mmol)碘。使其升至室溫。6小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，二氯甲烷/ 曱醇15:1)。蒸餾出吡啶并將殘留物吸收進(jìn)乙酸乙酯/2-丁酮(2:1)中， 用硫酸氫鈉溶液清洗。用乙酸乙酯萃取7JC相數(shù)次，用硫酸鎂干燥合并的有 W目。過(guò)濾出干燥劑并蒸餾出溶劑后，將殘留物用曱苯/二氯甲烷1 : l處 理并將所得固體千燥。得到3.77 g (94.5%)無(wú)色固體。9.2. 2',5'-雙脫氧-3'-0-乙g^-5'-缺-5-(E)-溴乙烯基尿苦將2.48 g (5.59 mmol)2，,5，-雙脫氧-5，-硤-5-(E)-溴乙烯基尿苷溶于20 ml吡咬中并與3.20 g (31.34 mmol)乙酸酐混合。90分鐘后停止>^應(yīng)(DC 對(duì)照，二氯甲烷/甲醇10:1)。將該批次倒入磷酸鹽緩沖溶液中，并在15 分鐘后用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合并的萃取物用硫酸鎂干燥，進(jìn)行常規(guī)處 理后，通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/丙酮10:1)，得到2.14g(78.7。/。)無(wú)色固體。9.3. 1-〖3'-0-乙?；?2，,5'-雙脫氣-0~0-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基1-5-(五)-溴乙烯基尿嘧啶將2.14 g (4.41 mmol)2',5'誦雙脫氧-3，-0-乙?；鶉?guó)5'誦湊5畫(huà)(E)-溴乙烯基 尿苷溶于45 ml乙腈中并與2.08 g (13.73 mmol) DBU (1,8-二氮雜雙環(huán)并 [5.4.0十一烷-7-烯)混合。在室溫下攪拌18小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照， 環(huán)己烷/乙酸乙酯1:1)。將其倒入磷酸鹽緩沖液中并用乙酸乙酯萃取數(shù) 次。將合并的萃取物用硫酸鎂干燥，在常規(guī)處理后，通過(guò)柱色譜純化(環(huán) 己烷/乙酸乙酯1 : l以及氯仿/丙酮8:1)。得到1.248(77.3%)無(wú)色固體，熔點(diǎn)148 x:。
丄H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.07 (s, 3H); 2.44 (m， 1H); 2.71 (m, 1H); 4.27 (dd， 1H); 4.47 (d， 1H); 5.78 (m， 1H); 6.37 (t， 1H); 6.88 (d， 1H); 7.29 (d， 1H); 7.90 (s, 1H)， 11.70 (s, 1H) ppm.
9.4. l-2',5，-雙脫氧-B-D-甘油基-呋喃戊糖-4-烯基l-5-(E)-溴乙烯基尿 嘧啶
將0.86 g (2.41 mmol)l-[3'-0-乙?；?2，,5，-雙脫氧-(5-D-甘油基-呋喃戊 糖-4-烯基卜5-(E)-溴乙烯基尿嘧啶溶于10 ml甲醇中并與氨在曱醇中的15 ml飽和溶液混合。7小時(shí)后停止轉(zhuǎn)化(DC對(duì)照，氯仿/曱醇15:1)。除去 溶劑并將殘留物通過(guò)柱色譜純化(氯仿/甲醇15 : 1以及二氯甲烷/乙酸乙 酯1:1)，得到210 mg (27.6%)無(wú)色物質(zhì)，熔點(diǎn)128匸。
力畫(huà)NMR (500 MHz， DMSO-d6): 2.21 (m， 1H); 2.48 (m， 1H); 4.16 (d， 1H); 4.31 (d, 1H); 4.72 (m, 1H); 5.56 (d， 1H); 6.39 (t， 1H); 6.93 (d, 1H); 7.29 (d, 1H); 7.80 (s， 1H); 11.66 (s， 1H) ppm.
10. 5'-^J^-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
10.1. 5'-氰基-2',5，-雙脫氧-5-乙基-尿苷
將2.54 g (6.93 mmol)5'-碘-2，,5'-雙脫氧-5-乙基-尿苷溶于50 ml DMSO中并向其中加入0.52 g (10.61 mmol)氰化鈉。18小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成 (DC對(duì)照，乙酸乙酯)。將該批次倒入飽和食鹽溶液中并用乙酸乙酯萃取 數(shù)次。將合并的萃取物用硫酸鎂干燥，在常規(guī)處理后，通過(guò)柱色鐠用乙酸 乙酯純化。得到0.96 g (52.1%)無(wú)色物質(zhì)。
10.2. 3'-0-乙^-5，-^^-2，,5，-雙脫氧-5-乙基-尿苷
將0.96 g (3.62 mmol)5'-^J^-2，，5'-雙脫氧-5-乙基-尿苷溶于15 ml吡 啶中并與1.77 g (17.35 mmol)乙酸酐混合。1小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照， 乙酸乙酯)。將該批次倒入磷酸鹽緩沖液中并用乙酸乙酯萃取數(shù)次。將合 并的萃取物用硫酸鎂干燥，在常規(guī)處理后，通過(guò)柱色鐠純化(二氯甲烷/ 乙酸乙酯)，得到0.82 g (73.7%)無(wú)色物質(zhì)。
7710.3. 3'-0-乙絲-5'-^J^-2，,5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.82 g (2.67 mmol)3'誦0誦乙^J^5'-^j^-2',5'-雙脫氧畫(huà)5誦乙基-尿苷 和0.01 g AIBN (偶氮-雙-異丁腈)溶于30 ml氯仿中并加熱至沸騰。向其 中滴加0.94 g (5.87 mmol)溴在10 ml氯仿中的溶液。滴加65分鐘后停止。 再在回流下加熱l小時(shí)，冷卻至室溫并加入0.66 g (6.52 mmol)三乙胺。1 小時(shí)后，蒸餾出溶劑，用乙酸乙酯和磷酸鹽緩沖液處理殘留物。用乙酸乙 酯萃取水相數(shù)次，用硫酸鎂干燥合并的乙酸乙酯相。在常規(guī)處理后，通過(guò)
柱色語(yǔ)進(jìn)行純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯2:3)，得到0.62 g (59.7%)無(wú)色物質(zhì)，
熔點(diǎn)96t:。
1H-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.07 (s， 3H); 2.39 (m， 1H); 2.53 (m， 1H); 3.08 (m， 2H); 4.21 (m, 1H); 5.16 (m, 1H); 6.17 (t, 1H); 6.88 (d, 1H); 7.28 (d, 1H); 7.88 (s, 1H); 11.68 (s, 1H) ppm.
10.4 5'-jfi^-2',5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷
將0.41 g (1.07 mmol)3'陽(yáng)0-乙^^-5'國(guó)H^誦2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯 基尿苷溶于20 ml甲醇中并與氯化氫在甲醇中的10 ml飽和溶液混合。36 小時(shí)后轉(zhuǎn)化完成(DC對(duì)照，氯仿/曱醇15:1)。蒸餾出溶劑后，通過(guò)柱色 譜進(jìn)行純化(氯仿/曱醇15 : 1 )，得到0.35 g (95.9%)無(wú)色物質(zhì)，熔點(diǎn)177 ■C (分解)。
工H-NMR (300 MHz， DMSO-d6): 2.15 (m， 1H); 2.29 (m， 1H); 2.99 (m， 2H); 3.92 (m， 1H); 4.18 (m， 1H); 5.55 (d， 1H); 6.19 (t, 1H); 6.91 (d， 1H); 7.29 (d, 1H); 7.80 (s, 1H); 11.63 (s, 1H) ppm.
11. 取代的 1-(2'-脫氧-B-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-2-溴乙烯
基)-2,4-(lH, 3H)-嘧咬二酮 11.1. 1-(5'-碟-2，,5，-雙脫氧-B畫(huà)D-蘇國(guó)呋喃戊糖基)畫(huà)5國(guó)(E)-(2國(guó)溴乙烯
基)-2,4-(lH,3H)-嘧咬二酮 11.1.1.l-(2'-脫氧-p-D-蘇-吹喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH, 3H)-
嘧咬二酮在回流下，在600 ml乙醇/水(5/1)混合物中將15.8 g (37.6 mmol)2，3，-脫^5'-0-苯甲酖基-2'-脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷與65.7 ml (132 mmol， 3.5 當(dāng)量)2 M氫氧化鈉溶液加熱1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，利用 濃鹽酸將其中和，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(乙酸 乙酯/曱醇9/1以及氯仿/甲醇7/1 )，得到10.9 g (32.7 mmol， 87%)白色固體 的l-(2'-脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧啶二 酮。
11.1.2. l-(5'-甲基磺酰基-2'-脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2，4-(lH，3H)-嘧咬二酮
在0C下，將10.9 g (32.7 mmol)l-(2'-脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH， 3H)-嘧咬二酮置于100 ml吡啶中。將3.94 g (34.4 mmol， 1.05當(dāng)量)甲基碌酰氯溶于50 ml THF中并緩慢逐滴加入。然 后在0n下將反應(yīng)混合物再攪拌3小時(shí)。將該批次傾倒于300g冰上，用濃 鹽酸調(diào)節(jié)至pH-5，用3x100乙酸乙酯萃取混合物。將合并的有^目用1 M鹽酸和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶 劑，得到11.8 g (28.7 mmol)白色固體的1-(5'-甲基磺?；?2'-脫氧-|3-0-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH，3H)-嘧咬二酮。在不經(jīng)進(jìn)一步純化 的情況下轉(zhuǎn)化該粗產(chǎn)物。 11.1.3. 1-(5，-碘-2'，5'-雙脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴乙烯
基)-2，4-(lH，3H)-嘧啶二酮
將0.50 g (1.22 mmol)l-(5'-甲基磺?；?2'-脫氧-!5-D-蘇-呋喃戊糖 基)-5-(E)-(2-溴乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮與10 ml DMF中的911 mg (6.08 mmol， 5.0當(dāng)量)^f匕鈉共同加熱20小時(shí)。將反應(yīng)混合物吸收進(jìn)50 ml 乙酸乙酯中，用水和NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/曱醇9/1 )，得到130 mg (293 nmol， 24%)微黃色固體的l-(5'-碘-2，,5'-雙脫氧-p-D-蘇-呋喃戊糖基)-5-(E)-(2-溴 乙烯基)-2，4-(lH,3H)-嘧咬二酮，熔點(diǎn)79 - 81 "C 。
^-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 2.04 (d, 1H); 2.58 (m, 1H); 3.43-3.53 (m， 2H); 4.16 (m, 1H); 4.26 (m， 1H); 5.44 (d， 1H); 6.06 (dd, 1H); 6.93 (d， 1H);7.24 (d, 1H); 7.98 (s, 1H); 11.57 (s， 1H) ppm.
12. 1-(2，,3-雙脫氬-2'-脫氧-2'-氟-13-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶
12.1. l-(2，-脫氧-2'-氟-5，-O-三苯甲基-0-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿 嘧啶
將22.8 g (83.2 mmol)l-(2'-脫氧-2，-氟-p-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿 嘧咬混懸于200 ml吡咬中并加入25.5 g (91.6 mmol)三苯曱基氯。將反應(yīng)混 合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。將殘留物吸收 進(jìn)300ml乙酸乙酯中并用稀鹽酸、NaHC03溶液和NaCl溶液清洗。將有 ;W目用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色i普純化 (氯仿/甲醇9/1 )，得到26.1 g (50.5 mmol， 61%)白色固體的1-(2，-脫氧-2，-氟-5，-0-三苯甲基+D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.2. 2,3'-脫水-l-(2，-脫氧-2，-氟-5'-0-三苯甲基-B-D-阿拉伯呋喃糖
基)-5-乙基尿嘧咬
將26.1 g (50.5 mmol) l-(2，-脫氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-p陽(yáng)D-阿拉伯呋 喃糖基)-5-乙基尿嘧啶置于300 ml DMF中并加入19.9 g (75.7 mmol) PPH3。然后將15.3 g (75.7 mmol)偶氮二碳酸二異丙酯溶于50 ml DMF中 并逐滴加入。兩小時(shí)后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑，將殘留物吸收進(jìn)l升乙 醚中并強(qiáng)烈攪拌16小時(shí)。抽濾所得固體并用50 ml乙醚清洗三次。用環(huán)己 烷/乙酸乙酯重結(jié)晶，得到25.5 g (50.5 mmol， 100%)白色固體的2，3'-脫水 -1-(2'-脫氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-[5-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.3. l-(2，,3'-雙脫氬-2，-脫氧-2，-氟-5'-0-三苯曱基-B-D-阿拉伯呋喃糖
基)-5-乙基尿嘧啶
將25.5 g (50.5 11111101)2，3，-脫7^-1畫(huà)(2'-脫氧-2'-氟誦5'國(guó)0畫(huà)三苯甲基-|5-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧咬溶于600 ml甲醇中，加入125 ml水和62.5 ml (126 mmol) 2 M NaOH溶液，將反應(yīng)混合物在回流下加熱2小時(shí)。在旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上大量除去甲醇。將殘留物用稀鹽酸中和并用乙酸乙酯萃取。將 合并的有^W目用NaCl溶液清洗，用Na2S04干燥，過(guò)濾并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上 除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/甲醇95/5 )，得到19.6 g (39.2 mmol， 78%)白色固體的l-(2'，3'-雙脫氫-2'-脫氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基-p-D-阿拉伯呋喃 糖基)-5-乙基尿嘧啶。
12.4 l-(2',3'-雙脫氫-2，-脫氧-2，-氟-B-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧
將5.00g (10.0 mmol)l-(2，，3'-雙脫氫-2，-脫氧-2'-氟-5'-0-三苯甲基 -P-D-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶溶于50 ml 二哺、烷中并冷卻至0'C。緩 慢滴加在二-惡烷中的4.2 ml (20.0 mmo1)4.8 M HC1。移除冷浴并將攪拌反 應(yīng)混合物2小時(shí)。然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶劑。通過(guò)柱色鐠純化(氯仿/ 曱醇9/1 )，得到2.06 g (8.04 mmol， 80%)白色固體的l-(2，，3'-雙脫氫-2，誦脫 氧_2，-氟-卩-0-阿拉伯呋喃糖基)-5-乙基尿嘧啶，熔點(diǎn)145 - 。
iH-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1.02 (t， 3H); 2.20 (q, 2H); 3.55-3.65 (m, 2H); 4.76-4.84 (m, 1H); 5.16 (t， 1H); 5.95-6.05 (m， 1H); 6.75-6.80 (m， 1H); 7.86 (s， 1H); 11.42 (s, 1H).
圖9 12顯示了根據(jù)本發(fā)明的另一些化合物的結(jié)果。
圖9顯示了 5'-溴-2，，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷聯(lián)用絲裂霉素C (MMC )相比于單獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
圖10顯示了 5'-疊氮基-2'，5'-雙脫氧-5-(E)-溴乙烯基尿苷聯(lián)用絲裂霉 素C (MMC )相比于單獨(dú)使用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
圖11顯示了 1-(3'-疊氮基-2'，3，-雙脫氧-卩-0-赤-呋喃戊糖基)-5-(￡)-(2-溴乙烯基)-2，4(lH,3H)嘧咬二酮聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相比于單獨(dú)使用 MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
圖12顯示了 3，-Cl-BVDU聯(lián)用絲裂霉素C (MMC)相比于單獨(dú)使 用MMC以及MMC聯(lián)用BVDU的結(jié)果。
8權(quán)利要求
1. 通式I的核苷其中，R1和R2彼此獨(dú)立地選自H、鹵素、OR8、CN、N3、NR6R7以及通過(guò)氧原子鍵合的前藥基團(tuán)，R3＝H、直鏈或支鏈的C1-C8烷基、直鏈或支鏈的C1-C8亞烷基，R4＝H、鹵素、OR8、N3、NR6R7或者R4與R1一起表示與R1和R4相鄰的C原子之間的第二鍵，R5＝H、C1-C8烷基或芳基，以及R6、R7和R8彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的C1-C8烷基或者乙?；?，排除具有以下基團(tuán)的所述化合物R1＝N3，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝O-乙酰基，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝O-三苯甲基，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝O-乙?；?，R3＝R4＝R5＝H；R1＝F，R2＝三磷酸酯，R3＝R4＝R5＝H；R1＝Cl，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝N3，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH-SO2-(CH2)3-Cl，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝NH-SO2-(CH2)3-SO3H，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝Cl，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝Br，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝I，R3＝R4＝R5＝H；R1＝OH，R2＝前藥基團(tuán)，R3＝R4＝R5＝H；R1＝N3，R2＝N3，R3＝R4＝R5＝H；R1＝選自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R2＝OH，R3＝R4＝R5＝H；R1＝選自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R2＝選自酯、氨基酸酯、碳酸酯和醚的前藥基團(tuán)，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NH2，R2＝NHR9并且R9＝H、COCH3、COC3H7、COPh、COOC2H5、COOCH2CH＝CH2、COCH＝CHCH3、CHO或COOCH2Ph，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHR9并且R9＝COCH3、COOC2H5，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2Ph，R2＝NHCOOCH2CHCH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2Ph，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；R1＝NHCOOCH2CH＝CH2，R2＝NH2，R3＝R4＝R5＝H；以及R1＝NHCHO，R2＝NHCHO，R3＝R4＝R5＝H。
2.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其中所述前藥基團(tuán)選自其中，Rw和Rn彼此獨(dú)立地為直鏈或支鏈的Cr"Cs烷基、芳基，其還可含有雜原 子，R12=直鏈或支鏈的d-Cs烷基、芳亞烷基、芳基，其還可含有雜原子， R13 =直鏈或支鏈的CrCs烷基，R14 = O-d-Cs烷基、NH-d-C8烷基、 N-(C!-Q烷基)2，其中，Rw和Rn彼此獨(dú)立地為直鏈或支鏈的CrC8烷基、芳基，其還可含有雜原 子，R12=直鏈或支鏈的d-Cs烷基、芳亞烷基、芳基，其還可含有雜原子, R13=直鏈或支鏈的d-Cs烷基，<formula>formula see original document page 5</formula>其中，R15=直鏈或支鏈的d-Cs烷基，其中，R15=直鏈或支鏈的d-Cs烷基，R16=直鏈或支鏈的d-Q烷基、O-芳基,<formula>formula see original document page 5</formula>其中，R17=直鏈或支鏈的d-Cg烷基、卣素，<formula>formula see original document page 6</formula>或其中，R18=直鏈或支鏈的d-C8烷基、芳基或雜芳基， R^烷基畫(huà)CO-、芳基-CO-、o逸oR20O-R20cr 、o——、&。剛，、0一或 ， 其中，R20=直鏈或支鏈的C廠Cs烷基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的核苷，其中所述基團(tuán)Ri和R2彼此獨(dú)立地選自面 素。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式II:r工其中，R2 = H、鹵素、OR8、 CN、 N3、 N&R" OH或通過(guò)fuf、子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Q烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， R4 = H、鹵素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C廣Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；?，排除具有以下基團(tuán)的所述化合物R2=OH， R3 = R4=R5 = H，R2= O-乙酰基，R3 = R4= R5 = H,R2 = O畫(huà)三苯曱基,R3 = R4 = Rs = H, & = N3，R2=磷酸酯，R3-R4-Rs-H，以及 R2=三磷酸酯，R3-R^Rs-H。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式III<formula>formula see original document page 7</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NI^R7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Q烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， Ri = H、卣素、OR8、 N3或NR^R" R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙酰基， 排除具有以下基團(tuán)的所述化合物 R2=OH,R3 = R4 = R5 = H，以及R2=三褲酸酯，R3-R^R5-H。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2的核苷，其特征在于具有通式IV其中，R2 = H、囟素、OR8、 CN、 N3、 NF^R7、 OH或通過(guò)fL^子H:合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， Ri = H、卣素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C廣C8烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；懦哂幸韵禄鶊F(tuán)的所述化合物Hal = F, R2= OH， R3 = & = R5 = H，Hal = F， R2= O-乙?；?，R3 = R4= R5= H，Hal = F，R2=三辨酸酯，R^R4-R5-H，以及Hal = Cl,R2=OH,R3=R4 = R5=H。
7.才艮據(jù)權(quán)利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式V其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， R4 = H、離素、OR8、 N3或NR6R7， R5 = H、 C廣Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；懦哂幸韵禄鶊F(tuán)的所述化合物R^OH,R3-R^Rs-H。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式VI其中，1^ = 11、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的CrQ烷基、直鏈或支鏈的d-C8亞烷基， Rt = H、卣素、OR8、 N3或NRgR7， R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-C8烷基或者乙?；?， 排除具有以下基團(tuán)的所述化合物 Ri= OH, R3 = R4= R5 = H。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2中的核苷，其特征在于具有通式VII其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通過(guò)ft^子鍵合的前藥基團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Q烷基、直鏈或支鏈的d-Q亞烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR^R7，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的C廣Cs烷基或者乙?；?，排除具有以下基團(tuán)的所述化合物Hal = Cl， R！ = OH， R3 = R4 = R5 = H,Hal二Br,Ri-OH，R3-R4-R5-H，以及Hal = I， RfOH，R3-R4-Rs-H。
10.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式vm:
11.根據(jù)權(quán)利要求1的核苷，其特征在于具有式IX:
12.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式X:<formula>formula see original document page 11</formula>
13.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式XI:<formula>formula see original document page 11</formula>
14.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式XII:<formula>formula see original document page 11</formula>
15.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式XIII:<formula>formula see original document page 12</formula>
16.根據(jù)權(quán)利要求1的核苷，其特征在于具有式XIV:<formula>formula see original document page 12</formula>
17.根據(jù)權(quán)利要求l的核苷，其特征在于具有式XV:<formula>formula see original document page 12</formula>
18.通式XVI的核苷H<formula>formula see original document page 12</formula>其中，和R2彼此獨(dú)立地選自H、子^^的前藥基團(tuán)， 卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通過(guò)ft^、R3 = H、直鏈或支鏈的d-Q烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基，Rt和R9彼此獨(dú)立地為卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；?。
19.通式XVII的核普<formula>formula see original document page 13</formula>其中，Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通過(guò)IL^子鍵合的前藥基團(tuán)，R4和R9彼此獨(dú)立地為卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Q烷基或者乙?；?br> 20. 包含至少一種根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)之核普的藥物。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20的藥物，其中所述藥物還包含至少一種細(xì)胞抑制劑。
22. 至少一種通式I<formula>formula see original document page 13</formula>以及至少 一種細(xì)胞抑制劑在制備用于在細(xì)胞抑制治療中抑制或降4氐抗性的核普其中，Rw和Ru彼此獨(dú)立地為直鏈或支鏈的CVC8烷基、芳基，其還可含有雜原子，R12=直鏈或支鏈的d-Cs烷基、芳亞烷基、芳基，其還可含有雜原子，R13=直鏈或支鏈的Cr"Q烷基，產(chǎn)生的藥物中的用途，其中，Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NReR7以及通過(guò)氧原子鍵合的前藥基團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3、 NRgR7或者R4與Ri—^^示與Ri和R4相鄰的C原子之間的第二鍵，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及Rfi、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；懦哂幸韵禄鶊F(tuán)的所述化合物R^OH,R;^OH,R^R4-R5-H，以及Ri-OH,!^-前藥基團(tuán)，R3-R4-R^H。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的用途，其中所述前藥基團(tuán)選自<formula>formula see original document page 14</formula>其中，Rw和Ru彼此獨(dú)立地為直鏈或支鏈的CVC8烷基、芳基，其還可含有雜原子，R12=直鏈或支鏈的d-Cs烷基、芳亞烷基、芳基，其還可含有雜原子,R13 =直鏈或支鏈的d-C8烷基，R14 = O-d-Q烷基、NH-d-Cs烷基、N-(CrCs烷基)2，<formula>formula see original document page 15</formula>其中，R15=直鏈或支鏈的CrCs烷基,其中，R15=直鏈或支鏈的CVQ烷基，R16=直鏈或支鏈的Q-Cs烷基、O-芳基，其中，R17=直鏈或支鏈的C廣C8烷基、卣素，<formula>formula see original document page 16</formula>19其中，R18=直鏈或支鏈的d-Cs烷基、芳基或雜芳基，R19=烷基-CO-、芳基-CO-或^J^酸，<formula>formula see original document page 16</formula>其中，R20=直鏈或支鏈的d-Cs烷基。
24. 根據(jù)權(quán)利要求22或23的用途，其中所述基團(tuán)&和112彼此獨(dú)立地選自鹵素。
25. 根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式II的核普i;工其中，R2 = H、鹵素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或前藥基團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cg烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基，R4 = H、鹵素、ORs、 N3或NReR7，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R^、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；?。
26.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式III的核苷:<formula>formula see original document page 17</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或前藥基團(tuán)， R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3或NReR" R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的C廠C8烷基或者乙?；?br> 27.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式IV的核苷:<formula>formula see original document page 17</formula>其中，R2 = H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Q烷基、直鏈或支鏈的CrQ亞烷基，R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR^R7， R5 = H、 CrCs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Q烷基或者乙?；?。
28.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式V的核苷:其中，Ri:H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cg烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， R4 = H、囟素、OR8、 N3或NReR7， R5 = H、 C廣Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和R8彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙酰基。
29.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式VI的核苷Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 5 N、其中，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Q亞烷基， R4 = H、鹵素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 C廣Cs烷基或芳基，以及&、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的CVCs烷基或者乙?；?
30.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用具有通式VII的核苷其中，Ri-H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NRfiR7、 OH或通過(guò)氧原子鍵合的前藥基 團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cg烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基， R4 = H、卣素、OR8、 N3或NR6R" R5 = H、 d-Q烷基或芳基，以及R^、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙酰基。
31.至少一種通式XVI以及至少產(chǎn)生的藥物中的用途，其中在所述通式XVI中，Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR6R7以及通過(guò)IL^ 子鍵合的前藥基團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的d-Cs亞烷基，Rt和R9彼此獨(dú)立地為卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rg彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙?；?。
32.至少一種通式XVII以及至少 一種細(xì)胞抑制劑在制備用于在細(xì)胞抑制治療中抑制或降低抗性產(chǎn)生的藥物中的用途，其中在所述通式XVII中，Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、卣素、OR8、 CN、 N3、 NR^R7以及通過(guò)^U^ 子^^的前藥基團(tuán)，R4和R9彼此獨(dú)立地為卣素，R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及R6、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基或者乙酰基。
33.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用通式XVIII的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
34.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用通式XIX的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
35.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用通式XX的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
36.根據(jù)權(quán)利要求22至24中任一項(xiàng)的用途，其中使用通式XXI的核苷:<formula>formula see original document page 21</formula>
37. 根據(jù)權(quán)利要求20至36中任一項(xiàng)的用途，其中在單一制劑中使用所述 至少 一種核苷和所述至少 一種細(xì)胞抑制劑。
38. 根據(jù)權(quán)利要求20至36中任一項(xiàng)的用途，其中在分開(kāi)的制劑中使用所 述至少一種核苷和所述至少一種細(xì)胞抑制劑。
39.至少一種通式I的核苷以及至少一種活性物質(zhì)在制備用于無(wú)抗性地治療由細(xì)菌、瘧原蟲(chóng)或利什曼 蟲(chóng)引起的感染性疾病的藥物中的用途，其中在所述通式I中，Ri和R2彼此獨(dú)立地選自H、鹵素、OR8、 CN、 N3、 1^117以及通過(guò)|1^、 子鍵合的前藥基團(tuán)，R3 = H、直鏈或支鏈的d-Cs烷基、直鏈或支鏈的OCs亞烷基， R4 = H、卣素、ORg、 N3或NRfiR7， R5 = H、 d-Cs烷基或芳基，以及Re、 R7和Rs彼此獨(dú)立地為H、直鏈或支鏈的d-Q烷基或者乙跣基， 排除具有以下基團(tuán)的所述化合物 Ri二OH，R;^OH,R3-R4-R5-H，以及 Ri-OH,!^-前藥基團(tuán)，R3-R^Rs-H。
40. 根據(jù)權(quán)利要求39的用途，其中在單一制劑中使用所述至少一種核苷和 所述至少一種細(xì)胞抑制劑。
41. 根據(jù)權(quán)利要求39或40的用途，其中在單一制劑中使用所述至少一種 核苷和所述至少一種細(xì)胞抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及特殊的核苷，并且還涉及包含這些核苷的藥物。此外，本發(fā)明涉及這些核苷在制備藥物(尤其是用于在細(xì)胞抑制治療中抑制或降低抗性產(chǎn)生的藥物)中的用途。
文檔編號(hào)C07D405/04GK101522666SQ200780036649
公開(kāi)日2009年9月2日 申請(qǐng)日期2007年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月11日
發(fā)明者亨利克·迪克斯, 安德烈亞斯·羅爾夫斯, 約爾格-克里斯蒂安·海因里希, 迪特爾·洛曼, 雅內(nèi)克·托伊布納, 魯?shù)婪颉しɡ锵?申請(qǐng)人:雷斯普羅泰克特有限公司