重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子陰道膨脹栓及其制備方法和檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于陰道栓劑領(lǐng)域，特別涉及一種重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子陰道膨 脹栓及其制備方法和檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子（rhGM-CSF)是由活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì) 胞、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等細(xì)胞產(chǎn)生并分泌的一種酸性蛋白質(zhì)。rhGM-CSF具有 生白細(xì)胞的作用，是一種調(diào)節(jié)造血和白細(xì)胞功能必須的細(xì)胞生長因子，它能夠全面改善慢 性潰瘍的病理特征，促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)，增強(qiáng)粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的殺菌能力，在機(jī)體內(nèi)廣泛參與 免疫及抗感染等過程。
[0003] 近些年，由于基因工程技術(shù)可以大量的生產(chǎn)出rhGM-CSF，從而促進(jìn)了對(duì)其的研宄 和臨床應(yīng)用，是已正式投放市場(chǎng)的細(xì)胞因子之一，且臨床應(yīng)用非常廣泛，涉及很多領(lǐng)域。目 前rhGM-CSF的臨床應(yīng)用主要包括：在腫瘤性疾病中的應(yīng)用、在骨髓移植中的應(yīng)用、抗感染 治療中的應(yīng)用及促進(jìn)傷口愈合中的應(yīng)用等。
[0004] 宮頸炎（cervicitis)及誘發(fā)宮頸糜爛是已婚婦女的多發(fā)病，據(jù)統(tǒng)計(jì)已婚婦女宮 頸炎發(fā)病率高達(dá)36. 9%。目前，臨床上對(duì)于宮頸炎的治療，在排出早期宮頸癌之后，多以局 部治療為主。對(duì)于糜爛面積小或炎癥浸潤較淺的病例可用腐蝕性藥物局部敷用；糜爛面積 大或炎癥浸潤較深的病例，可用冷凍、激光或電熨療法；急性宮頸炎一般口服廣譜抗生素治 療。上述臨床治療方法的局限性在于藥物都不能深入達(dá)到炎性組織，因此患者遠(yuǎn)期效果不 滿意，即使近期有療效，但是不久又會(huì)復(fù)發(fā)。
[0005] rhGM-CSF有清除壞死組織、趨化血液循環(huán)中單核細(xì)胞進(jìn)入組織成為巨噬細(xì)胞、 活化炎癥局部聚集的巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的功能?；罨木奘杉?xì)胞和中性粒細(xì)胞可以 產(chǎn)生和分泌膠原酶、彈性蛋白酶、纖溶酶激活劑等；另外，內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞表面含有 rhGM-CSF受體，rhGM-CSF可以直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞迀移、增生及活化，使新的鱗狀上皮覆蓋 創(chuàng)面，最終使得疾病得到徹底治療。
[0006] 迄今為止，rhGM-CSF外用制劑用于治療宮頸炎和宮頸糜爛的研宄工作及相關(guān)文獻(xiàn) 還較為少見。另外，rhGM-CSF作為一種蛋白質(zhì)，本身性質(zhì)不穩(wěn)定，很容易發(fā)生脫氨作用、氧 化作用、水解作用、二硫鍵的錯(cuò)配及變性、聚集、沉淀等現(xiàn)象；同時(shí)其分子較大，并具有一定 的空間結(jié)構(gòu)，在釋放過程中更容易受到空間位阻的影響，影響其藥物釋放效果。專利申請(qǐng) CN200510085861. 5中公開了粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子治療宮頸炎和宮頸糜爛外用制劑的 新用途，但其未對(duì)其栓劑中rhGM-CSF穩(wěn)定性進(jìn)行考察，沒有解決栓劑的長期貯存、運(yùn)輸?shù)?問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決上述技術(shù)問題，增加 rhGM-CSF的穩(wěn)定性，充分發(fā)揮療效，本發(fā)明研宄了 一種rhGM-CSF陰道膨脹栓及其制備方法；同時(shí)還提供了一種能夠控制上述rhGM-CSF陰道 膨脹栓產(chǎn)品質(zhì)量的科學(xué)檢測(cè)方法。
[0008] 本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：
[0009] 一種重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子（rhGM-CSF)陰道膨脹栓，所述膨脹栓包括 含藥基質(zhì)和可膨脹的膨脹載體；所述含藥基質(zhì)主要由rhGM-CSF和基質(zhì)制成，含藥基質(zhì)涂敷 在膨脹載體表面，所述膨脹載體在飽和吸水后的膨脹值大于1. 1，所述膨脹栓各成分的重量 份數(shù)為：
[0010] 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子 0.005-0.18
[0011] 基質(zhì) 166-300
[0012] 膨脹載體 185-500
[0013] 所述基質(zhì)選自合成脂肪酸酯、天然脂肪酸酯、類脂類基質(zhì)、水溶性基質(zhì)、凝膠基質(zhì)、 氫化油、甘油酯、分餾油、硬脂酸酯或膠體化合物中的一種或多種；
[0014] 所述合成脂肪酸酯選自混合脂肪酸甘油酯、硬脂酸丙二醇酯、硬化油、半合成脂肪 酸甘油酯、半合成椰油酯、Witepsol、半合成棕櫚油酯或半合成山蒼子酯中的一種或多種；
[0015] 所述天然脂肪酸酯選自烏桕脂、香果脂、茴香脂、柯克姆脂或可可豆脂中的一種或 多種；
[0016] 所述類脂類基質(zhì)選自羊毛脂或羊毛醇；
[0017] 所述水溶性基質(zhì)選自聚乙二醇400、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇 6000、甘油明膠、吐溫60、吐溫65、聚氧乙稀縮合物Idropostal、聚氧乙稀單硬脂酸醋或泊 洛沙姆中的一種或多種；
[0018] 所述凝膠基質(zhì)選自羧甲基纖維素鈉、羥丙甲纖維素、卡波姆、海藻酸或海藻酸鈉中 的一種或多種；
[0019] 所述氫化油選自氫化花生油、氫化蓖麻油或氫化棉籽油中的一種或多種；
[0020] 所述甘油醋選自Adeps Solidus、Massa Estarinum(飽和12-18碳脂肪酸的甘油 酯）A、Massa Estarinum AS、Massa Estarinum B、Massa Estarinum C、Massa Estarinum D、 Massa Estarinum E、Massa Estarinum I、Massa Estarinum T、Massa Mf13、Suppository Base W、Suppository Base AB、Suppository Base A、Suppository Base B、Suppository Base BC、Suppository Base BD、Suppository Base BBC、Suppository Base E、Suppository Base BCF、Suppository Base C、Suppository Base D、Suppository Base 299、Wecobee W、 Wecobee K、Wecobee S、Wecobee M、Wecobee ES、Massuppol、Massuppoll5、Suppocire 0SI、 Suppocire OSIx Suppocire A、Suppocire B、Suppocire C、Suppocire D、Suppocire DM、 Suppocire H、 Suppocire L、 Tegester Triglyceride Bases-9、 Tegester Triglyceride Bases-MA、Tegester Triglyceride Bases-57、甘油三棕櫚酸醋、甘油三硬脂酸醋、甘油山 崳酸酯或月桂酸甘油三酯中的一種或多種；
[0021] 所述分餾油選自分餾棕櫚油或分餾椰子油；
[0022] 所述硬脂酸酯選自木糖醇酐單硬脂酸酯、硬脂酸棕櫚甘油酯、聚乙二醇單硬脂酸 酯、乙二醇單硬脂酸酯或單硬脂酸甘油酯中的一種或多種；
[0023] 所述膠體化合物選自阿拉伯膠、明膠或果膠中的一種或多種。
[0024] 本發(fā)明所述的英文名稱的基質(zhì)收錄于《工業(yè)藥劑學(xué)理論與實(shí)踐》書中（L.拉赫 曼，H.A.利伯曼，J.L.卡尼希.工業(yè)藥劑學(xué)理論與實(shí)踐，化學(xué)工業(yè)出版社，第二版： 215-217)〇
[0025] 本發(fā)明采用了獨(dú)創(chuàng)的"陰道內(nèi)貼附式給藥技術(shù)"，該技術(shù)通過在栓劑中加入膨脹載 體來實(shí)現(xiàn)。普通栓劑由于重力的關(guān)系，無論使用者是在站立、坐式或躺式體位下，總有陰道 不能或較少接觸到含藥基質(zhì)，所述的膨脹載體膨脹后，含藥基質(zhì)可呈360°與陰道內(nèi)壁接 觸，充分給藥，給藥面積擴(kuò)大6倍，藥物直接貼附到病灶部位，使原來無法接觸藥物的部位 也能得到有效貼附治療；并且由于藥栓在陰道當(dāng)中起到的隔離作用，使創(chuàng)面之間不再互相 接觸，從而避免二次感染，使其不再反復(fù)發(fā)作。此外，膨脹載體的引入應(yīng)用了"防側(cè)漏栓體" 設(shè)計(jì)理念，因?yàn)榕蛎涊d體尾端（非含藥基質(zhì)）的膨脹，可以與陰道壁緊貼，進(jìn)而防止藥物和 基質(zhì)的外流，減少衣物的污染和保持藥物的有效濃度。并且通過"內(nèi)芯膨脹系數(shù)控制技術(shù)"， 可使膨脹載體在飽和吸水后的膨脹值大于1. 1。
[0026] 進(jìn)一步，所述膨脹栓各成分的重量份數(shù)為：
[0027] 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子 0. 05-0. 1
[0028] 基質(zhì) 180-235
[0029] 膨脹載體 205-423
[0030] 所述基質(zhì)為甘油酯、水溶性基質(zhì)和膠體化合物的混合物，所述甘油酯、水溶性基質(zhì) 和膠體化合物的重量份數(shù)為2-4:7-10:1。rhGM-CSF與水溶性基質(zhì)制成栓劑后，可以有效克 服栓劑熔點(diǎn)低，保存困難等問題；本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)得出，加入甘油酯和膠體化合物后可以減 輕對(duì)人體的刺痛性，提高了患者依從性。
[0031] 甘油酯為Massa Estarinum E，所述水溶性基質(zhì)為甘油明膠，所述膠體化合物為阿 拉伯膠，所述膨脹栓各成分的重量份數(shù)為：
[0032] 重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子 0. 06 Massa Fstarinum E 50 甘油明膠 1H4 阿拉伯膠 16.6 膨脹載體 360。
[0033] 優(yōu)選，本發(fā)明所述含藥基質(zhì)還包括重量份為0. 12-1. 02份的克拉替醇、0. 23-1. 45 份的?？宋鞫ê桐? 51-2. 15份的角叉菜膠。
[0034] rhGM-CSF作為大分子蛋白質(zhì)，穩(wěn)定性較差，在水溶液或其他制品中很容易發(fā)生物 理或化學(xué)變化，本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)得出，在含藥基質(zhì)中加入一定比例的克拉替醇、?？宋鞫ê?角叉菜膠能有效降低rhGM-CSF的有害變化，所述優(yōu)選比例下，所述陰道膨脹栓中rhGM-CSF 的活性變化最為微小，大大提高栓劑中主要活性成分rhGM-CSF的穩(wěn)定性。
[0035] 進(jìn)一步優(yōu)選，本發(fā)明所述rhGM-CSF陰道膨脹栓的含藥基質(zhì)還包括重量份為1. 5-3 份的低芥酸菜籽油和1-2份的波拉克林鉀，所述低芥酸菜籽油和波拉克林鉀協(xié)同作用，可 以增加主要活性成分rhGM-CSF的溶出度，且同時(shí)促進(jìn)皮膚黏膜對(duì)藥物的吸收，從而進(jìn)一步 提高栓劑的生物利用度。
[0036] 本發(fā)明所述膨脹載體在飽和吸水后的膨脹值大于1. 5,所述膨脹值為徑向的膨脹 值；所述膨脹載體包括但不限于棉條，還可包括其他能夠膨脹的無菌材料，如無紡布、彈性 纖維等。
[0037] 本發(fā)明的含藥基質(zhì)呈半包圍式涂敷在所述膨脹載體的前端1/5-4/5處，根據(jù)"人 體工程學(xué)栓劑"形狀，設(shè)計(jì)成鴨嘴形、球形、卵形、子彈形、魚雷形、圓柱形、圓錐形或棒形等 形狀。
[0038] 本發(fā)明所述的rhGM-CSF陰道膨脹栓的膨脹載體的后端連有拉線，膨脹后的藥栓， 通過牽拉膨脹載體后端拉線，吸附在膨脹載體上的被殺滅的病毒、毒素、脫落的死皮也一并 拉出體外，每次換藥就等于給陰道做一次徹底清潔，從根本上預(yù)防炎癥再次復(fù)發(fā)，該膨脹栓 即屬于"治療清洗一體化劑型"。
[0039] 為了達(dá)到本發(fā)明的rhGM-CSF陰道膨脹栓遇水可迅速膨脹的效果，所述膨脹載體 吸水后，每粒的最大吸水量不小于1.5毫升