專利名稱：：HERV-W干擾群相關(guān)病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的肽結(jié)構(gòu)域的制作方法HERV-W干擾群相關(guān)病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的肽結(jié)構(gòu)域本發(fā)明涉及引起HERV-W干擾群(HERV-Winterferencegroup)的反轉(zhuǎn)錄病毒被膜和hASCT受體家族之間的相互作用的多肽結(jié)構(gòu)域。人內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒(HERVs)組成人基因組的8%,并且既與病理現(xiàn)象有關(guān)也與非病理現(xiàn)象有關(guān)。人內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒家族W(HERV-W)來源于感染性反轉(zhuǎn)錄病毒元件，其在2,500萬至4，000萬年前整合入該種系。HERV-W#1膜蛋白，也稱為合胞素(syncytin),是一種參與胎盤的合胞滋養(yǎng)層的形成的融合糖蛋白。它由原病毒基因座ERVW1的env基因編碼，并以gPr73前體的形式合成，該gPr73前體被特異切割成兩個(gè)成熟蛋白質(zhì)，表面亞基gp50(SU)和跨膜亞基gp24(TM)。在體外，HERV-W家族的合胞素誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，這依賴于其與ASCT家族(h-ASCT2,hASCTl)的氨基酸的受體-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的相互作用。隨后，系統(tǒng)發(fā)生研究表明，合胞素與一組反轉(zhuǎn)錄病毒有關(guān)，該反轉(zhuǎn)錄病毒組具體包括貓內(nèi)源性病毒RD114、猴內(nèi)源性病毒BaEV、猿反轉(zhuǎn)錄病毒和鳥反轉(zhuǎn)錄病毒——鳥網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病毒REV-A和脾壞死病毒SNV,全部都共同具有2型鈉依賴型中性氨基酸的受體-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或hASCT2(Rasko等，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USAVol.96,pp.2129-2134;Tailor等，1999JournalofVirology,vol.73(5)May1999，P,4470-4474)。因此，用該反轉(zhuǎn)錄病毒組的病毒侵染細(xì)胞將導(dǎo)致特異地氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)減少(Rasko等，1999)。通過與ASCT家族的受體相關(guān)的干擾(相互作用)，用這些反轉(zhuǎn)錄病毒之一侵染細(xì)胞(或在細(xì)胞這些被膜之一中表達(dá))防止了該同一細(xì)胞受到這些反轉(zhuǎn)錄病毒中的另一種的侵染或防止了與表達(dá)另一種被膜的另一種細(xì)胞進(jìn)行融合。通過與ASCT家族的受體相關(guān)的干擾，使細(xì)胞受這些反轉(zhuǎn)錄病毒之一侵染而防止了受到這些反轉(zhuǎn)錄病毒的另一種的侵染。所有這些反轉(zhuǎn)錄病毒屬于同一個(gè)HERV-W病毒干護(hù)O群。被膜和ASCT受體之間的結(jié)合機(jī)制仍不清楚，目前，無論在HERV-W被膜蛋白的SU中還是在同一干擾群的反轉(zhuǎn)錄病毒的SU中，都尚未鑒定出結(jié)合ASCT受體的結(jié)構(gòu)域。然而，這個(gè)主題是重要的，因?yàn)楸荒?ASCT受體相互作用的抑制將另外能夠防止反轉(zhuǎn)錄病毒進(jìn)入細(xì)胞，從而阻斷其復(fù)制循環(huán)，阻斷被膜/ASCT受體相互作用和/或細(xì)胞融合的現(xiàn)象——其在轉(zhuǎn)移細(xì)胞的增殖中或在耐藥現(xiàn)象中可能涉及腫瘤形成(舉例說明，參見出版物"Cellfosion:Ahiddenenemy,CancerCell:May2003，vol.3)，阻斷可能與神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)的被膜/ASCT受體相互作用和/或細(xì)胞融合的現(xiàn)象，甚至抑制涉及滋養(yǎng)層分化的細(xì)胞-細(xì)胞融合(避孕接種疫苗)。而且，被膜/hASCT受體相互作用的抑制可通過對(duì)抗作用于可能由該被膜/hASCT受體相互作用導(dǎo)致的局部免疫抑制而防止腫瘤增殖。實(shí)際上，已經(jīng)表明，一方面，用該反轉(zhuǎn)錄病毒組的病毒(特別是誘導(dǎo)免疫缺陷的那些病毒)侵染細(xì)胞引起氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的特異減少(Rasko等，PNAS,vol.%.pp2129-2134(1999))，另一方面，在氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)受損和免疫抑制之間的直接聯(lián)系被提出(EspinosaA，VillarrealLP"T-AginhibitsimplantationbyECcellderivedembryoidbodies.VirusGenes.2000;20(3):195-200;JE,BattiniJL,GottschalkRJ，MazoI，MillerAD.，TheRDl14/simiantypeDretrovirusreceptorisaneutralaminoacidtransporter.ProcNatlAcadSciUSA,1999，Mar2;96(5):2129-34)。因此，對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)疾病，已知的是，hASCT受體參與中性氨基酸的特異性轉(zhuǎn)運(yùn)，以及對(duì)于傳遞信息，神經(jīng)細(xì)胞主要利用多肽屬性的神經(jīng)遞質(zhì)。因此，Env-HERV-W蛋白與受體——其通常不得不轉(zhuǎn)運(yùn)神經(jīng)遞質(zhì)合成所需的氨基酸——的結(jié)合能夠通過降低諸如氨基酸等生理激動(dòng)劑經(jīng)由ASCT受體的進(jìn)入而影響神經(jīng)元合成神經(jīng)遞質(zhì)的能力。而且，如果神經(jīng)元——其細(xì)胞間網(wǎng)絡(luò)形成對(duì)于在大腦和脊髓中傳播的信息的傳遞所必需的連接點(diǎn)——在由Env-HERV-W蛋白誘導(dǎo)的若干神經(jīng)元的融合之后形成合胞體，則用于信息傳遞的所有網(wǎng)絡(luò)都被中斷并連接于相同的融合"細(xì)胞包"，而且，每一細(xì)胞的神經(jīng)遞質(zhì)產(chǎn)生活性不再個(gè)體化或與特異于該活性的上游或下游傳導(dǎo)通路(樹突和軸突)建立聯(lián)系。令人驚奇地，本發(fā)明人已經(jīng)鑒定出這樣的多肽區(qū)域，其引起屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用。因此，本發(fā)明涉及屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的肽結(jié)構(gòu)域，其特征在于它開始于N端并結(jié)束于C端，并且在于■所述N端由基序定義，所述基序由氨基酸(Z)a-脯氨酸-半胱氨酸-X-半胱氨酸組成，其中Z是任何氨基酸，a是2和30之間的整數(shù)，X是任何氨基酸，所述基序選自SEQIDNo.1至SEQIDNo.29以及SEQIDNo.44至SEQIDNo.72■所述C端由基序定義，所述基序由氨基酸絲氨酸-天冬氨酸-Xa-Xb-Xe-Xd-Xe天冬氨酸-XrXg-(Z)p組成，其中Xa、Xb、Xe、Xd、Xe、Xf、Xg是任何氨基酸，z是任何氨基酸，|3是15和25之間的整數(shù)，優(yōu)選是20，所述基序選自SEQIDNo.30至SEQIDNo.40,并且所述特征在于所述肽結(jié)構(gòu)域在所述N端和所述C端之間包括選自下列基序的至少一個(gè)基序■由氨基酸半胱氨酸-酪氨酸-X2-X3-X4-X5-X6-半胱氨酸組成的基序，其中X2、X3、X4、X5、Xe是任何氨基酸，該基序?qū)?yīng)于SEQIDNo.41,■由氨基酸半胱氨酸-X7隱X8國X9-XKrXu-Xi2-Xn-X!4-X^半胱氨酸-色氨酸組成的基序，其中X"X8、X9、X10、X、X12、X13、X14、Xu是任何氨基酸，該基序3于應(yīng)于SEQIDNo.42或SEQIDNo.73。根據(jù)本發(fā)明，肽結(jié)構(gòu)域的表述被理解為表示識(shí)別hASCT受體所需的HERV-W干擾群的病毒被膜的最小區(qū)域。本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域可通過包括下列步驟的遺傳工程技術(shù)來獲得_培養(yǎng)在根據(jù)本發(fā)明的核苦酸序列的幫助下轉(zhuǎn)化的微生物或真核細(xì)胞，和-回收通過所述孩i生物或所述真核細(xì)胞產(chǎn)生的肽結(jié)構(gòu)域。該技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是熟知的。對(duì)于與其有關(guān)的進(jìn)一步細(xì)節(jié),可參考下面的書RecombinantDNATechnologyI，EditorsAlesProkop,RaskeshKBajpai;AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,Volume646,1991。本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域也可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的常規(guī)的肽合成方法來加以制備。干擾群的表述被理解為表示所有這樣的病毒，對(duì)于該病毒，細(xì)胞受其成員之一侵染(表達(dá))通過受體干擾而防止了該病毒組的另一成員侵染所述細(xì)胞。任何氨基酸的表述被理解為表示特別選自精氨酸、組氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、天冬酰胺、蘇氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、曱硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸的氨基酸。hASCT受體的表述被理解為表示任何鈉依賴型的中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。H的表述被理解為表示對(duì)應(yīng)于根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域的目標(biāo)特定區(qū)的連續(xù)氨基酸，其由HERV-W病毒干擾群的所有病毒表達(dá)。優(yōu)選地，a是3至18之間的整數(shù)。優(yōu)選地，在SEQIDNo.1至SEQIDNo.29中的ProCysXaaCys基序的X或Xaa是選自天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸的氨基酸這些序列優(yōu)選地是那些選自SEQIDNo.44至SEQIDNo.72的序列。優(yōu)選地，Xa、Xb、Xc或在SEQIDNos.30至40的第3、4和5位的氨基酸是甘氨酸，Xd或在SEQIDNos.30至40的第6位的氨基酸Xaa是選自脯氨酸和纈氨酸的氨基酸；Xe或在SEQIDNos.30至40的第7位的氨基酸Xaa是選自谷氨酰胺、亮氨酸和蘇氨酸的氨基酸；Xf或在SEQIDNos.30至40的第9位的氨基酸Xaa是選自賴氨酸、蘇氨酸、曱硫氨酸和谷氨酰胺的氨基酸，Xg或在SEQIDNos.30至40的第10位的氨基酸是選自丙氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸和纈氨酸的氨基酸。優(yōu)選地，P是整數(shù)20。優(yōu)選地，X2或在SEQIDNo.41的第3位的氨基酸Xaa是選自天冬酰胺、蘇氨酸、谷氨酸、組氨酸的氨基酸，X3或在SEQIDNo.41的第4位的氨基酸Xaa是選自組氨酸、丙氨酸、絲氨酸、賴氨酸、谷氨酸的氨基酸；乂4或在SEQIDNo.41的第5位的氨基酸Xaa是選自酪氨酸、蘇氨酸、丙氨酸的氨基酸，Xs或在SEQIDNo.41的第6位的氨基酸Xaa是選自谷氨酰胺、精氨酸、蘇氨酸的氨基酸，X6或在SEQIDNo.41的第7位的氨基酸Xaa是選自亮氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸的M酸。優(yōu)選地，X7或在SEQIDNo.42的第2位的氨基酸Xaa是選自脯氨酸、蘇氨酸、精氨酸和天冬酰胺的氨基酸；Xg或在SEQIDNo.42的第3位的氨基酸Xaa是選自甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺的氨基酸；X9或在SEQIDNo.42的第4位的氨基酸Xaa是選自甘氨酸、天冬酰胺、異亮氨酸、蘇氨酸、絲氨酸的氨基酸，Xw或在SEQIDNo.42的第5位的氨基酸Xaa是賴氨酸或缺失；Xu或在SEQIDNo.42的第6位的氨基酸Xaa是選自賴氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸的氨基酸，X^或在SEQIDNo.42的第7位的氨基酸Xaa是選自甘氨酸、天冬酰胺的氨基酸；X13或在SEQIDNo.42的第8位的氨基酸Xaa是選自谷氨酰胺、賴氨酸、纈氨酸的氨基酸，Xm或在SEQIDNo.42的第9位的氨基酸Xaa是選自纈氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸的氨基酸，X15或在SEQIDNo.42的第10位的氨基酸Xaa是選自纈氨酸、異亮氨酸的氨基酸。優(yōu)選地，SEQIDNo.73的第2位的氨基酸Xaa選自脯氨酸、蘇氨酸、精氨酸和天冬酰胺，SEQIDNo.73的第3位的氨基酸Xaa選自甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺，SEQIDNo.73的第4位的氨基酸Xaa選自甘氨酸、天冬酰胺、異亮氨酸、蘇氨酸、絲氨酸，SEQIDNo.73的第5位的氨基酸Xaa選自賴氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸，SEQIDNo.73的第6位的氨基酸Xaa選自甘氨酸、天冬酰胺，SEQIDNo.73的第7位的氨基酸Xaa選自谷氨酰胺、賴氨酸、纈氨酸，SEQIDNo.73的第8位的氨基酸Xaa選自纈氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸，SEQIDNo.73的第9位的氨基酸Xaa選自纈氨酸、異亮氨酸。根據(jù)本發(fā)明如上所述，結(jié)構(gòu)域中的缺失是可能的。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，Xk)是缺失的。這類序列可以通過化學(xué)合成方法和遺傳工程，利用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟^口的才支術(shù)并4苗述在例長口Sambrook,J.等,MolecularCloning:ALaboratoryManual,1989中的技術(shù)加以制備。本發(fā)明還涉及衍生自根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域的表位，其特征在于它誘導(dǎo)針對(duì)屬于HERV-W干擾群的病毒的免疫應(yīng)答。表位的表述被理解為表示由位于B或T淋巴細(xì)胞的表面的受體或循環(huán)抗體識(shí)別的根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域的全部或一部分。免疫應(yīng)答的表述被理解為表示所有這樣的生物學(xué)機(jī)制,該生物學(xué)機(jī)制允許多細(xì)胞生物體維持組成該生物體的細(xì)胞和組織的一致性(coherence),或進(jìn)行應(yīng)答時(shí)的完整性。本發(fā)明還涉及編碼如上所定義的表位的核苷酸序列。如上所示，這類序列可通過化學(xué)合成方法和遺傳工程，利用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的并描述在例如Sambrook,J.等，MolecularCloning:ALaboratoryManual,1989中的技術(shù)加以制備。本發(fā)明還涉及表達(dá)載體，其特征在于它包括根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，以及其表達(dá)所需的元件。作為表達(dá)載體,可以提及例如質(zhì)粒，痘苗病毒、腺病毒、桿狀病毒、痘病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒類型的病毒載體，沙門氏菌或BCG類型的細(xì)菌載體。其表達(dá)所需的元件的表述被理解為表示得能夠從核苷酸序列獲得肽的任何元件，例如，具體為啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止子、復(fù)制起點(diǎn)以及優(yōu)選地，選擇標(biāo)記。本發(fā)明的載體還可以包括將肽靶向特定細(xì)胞小室所必需的序列。本發(fā)明還涉及用根據(jù)本發(fā)明的至少一種表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主微生物或細(xì)胞。作為適合本發(fā)明目的的微生物的例子,可以提及酵母，例如下列科中的那些酵母優(yōu)選的是，酵母屬(^ccAaram少ca)、裂殖酵母屬(ScA/zasaccAara3;cas)、克魯維酵母屬(A7wvm，cas)、畢赤酵母屬(乃'cA/a)、漢遜氏酵母屬(//imye/wwa)、Kzran^(2屬、5t/麗w'o，ces屬、接合酵母屬(ZygasaccAaramycas);酉良酒酵母(SaccAaramycescerevh/ae)、卡爾酵母(5V7cc/^ra附y(tǒng)cescar/sZ^gew^)和乳酸克魯維酵母(《/wveramyces/acto);以及細(xì)菌，例如大腸桿菌(￡.co//)和下列科中的那些細(xì)菌乳酸菌(丄ac/o6ac/〃w51)、乳3求菌(丄actococctw)、沙門氏菌(Sa/mowe〃a)、鏈J求菌(5^^ptococow)、芽孑包^干菌(5ad〃w51)和鏈霉菌屬(/S^e;tom少ces)。作為轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的例子，可以提及來源于諸如哺乳動(dòng)物、爬行類動(dòng)物、昆蟲等動(dòng)物的那些細(xì)胞。優(yōu)選的真核細(xì)胞是來源于中國倉鼠的細(xì)胞(CHO細(xì)胞)、來源于猴的細(xì)胞(COS和Vero細(xì)胞)、來源于幼倉鼠腎臟的細(xì)胞(BHK細(xì)胞)、來源于豬腎臟的細(xì)胞(PK15細(xì)胞)以及來源于兔腎臟的細(xì)胞(RK13細(xì)胞)、人骨肉瘤細(xì)胞系的細(xì)胞(143B細(xì)胞)、人HeLa細(xì)胞系和人肝瘤細(xì)胞系的細(xì)胞(HepG2細(xì)胞類型)、以及昆蟲細(xì)胞系的細(xì)胞(例如，草地夜蛾)、人胚腎細(xì)胞系的細(xì)胞(例如，HEK293T)。宿主細(xì)胞能夠以在懸液中或在培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)物，以組織培養(yǎng)物、器官培養(yǎng)物等形式加以提供。位的抗體?？贵w的表述被理解為既表示完整抗體又表示抗體片段。根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)方法，可以通過諸如細(xì)菌等原核生物、或通過諸如酵母等真核生物、哺乳動(dòng)物、植物、昆蟲或動(dòng)物的細(xì)胞、或通過胞外生產(chǎn)系統(tǒng)獲得重組抗體。才艮據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)能夠制備單克隆抗體，該常規(guī)技術(shù)諸如其一般原理在下文重新描述的雜交瘤技術(shù)。在第一種情況下，通常，動(dòng)物——通常為小鼠(或者，在體外免疫的背景下為培養(yǎng)的細(xì)胞)以目標(biāo)靶抗原免疫，其B淋巴細(xì)胞隨后能夠產(chǎn)生抗所述抗原的抗體。這些產(chǎn)抗體的^^巴細(xì)胞隨后與"不死的，，骨髓瘤細(xì)胞(在實(shí)施例中為鼠源的)融合，以產(chǎn)生雜交瘤。然后，從如此獲得的異源細(xì)胞混合物中，選擇能夠產(chǎn)生特定抗體并能夠無限增殖的細(xì)胞。每一雜交瘤以克隆形式增殖，各自引起單克隆抗體的產(chǎn)生，該單克隆抗體對(duì)于目標(biāo)抗原相關(guān)的識(shí)別特性可以通過例如ELISA、通過一維或二維免疫轉(zhuǎn)移、通過免疫熒光或在生物傳感器的幫助下進(jìn)行檢測。如此選擇的單克隆抗體接下來根據(jù)親和層析技術(shù)加以純化?？贵w片段的表述被理解為表示針對(duì)屬于HERV-W干擾群的病毒進(jìn)行免疫應(yīng)答的任何抗體片段。例如，這些抗體片段可以通過蛋白質(zhì)水解而獲得。因此，它們可以通過酶促消化獲得，得到Fab類型的片段(用木瓜蛋白酶處理；PorterRR，1959，Biochem.J.，73:199-126)或F(ab)'2類型的片,殳(用胃蛋白酶處理；NisonoffA.等，1960,Science,132:1770-1771)。它們也可通過重組途徑制備(SkerraA.,1993，Curr.Opin.Immunol.，5:256-262)。適于本發(fā)明的方案的另一種抗體片段包括Fv片段，其是二聚體，由Fab片段的可變輕鏈(VL)結(jié)構(gòu)域和可變重鏈(VH)結(jié)構(gòu)域的非共價(jià)結(jié)合組成，因此是兩個(gè)多肽鏈的組合。為了改善由于兩個(gè)多肽鏈的解離所引起的Fv片段的穩(wěn)定性問題，該Fv片段可以通過將合適的連接肽插入VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域之間的遺傳工程加以修飾(HustonP.等,1988,Pro"Natl.Acad.Sci.USA,85:5879-5883)。隨后，表達(dá)scFv片段("單鏈片段可變區(qū)")被使用，因?yàn)樗蓡蝹€(gè)多肽鏈組成。使用優(yōu)選由15至25個(gè)氨基酸組成的連接肽使得將一個(gè)結(jié)構(gòu)域的C端連接到另一個(gè)結(jié)構(gòu)域的N端成為可能，因此構(gòu)成結(jié)合性質(zhì)與其完整形式的抗體的結(jié)合性質(zhì)類似的單體分子。VL和VH結(jié)構(gòu)域的兩種方向都是合適的(VL-連接肽-VH和VH-連接肽-VL),因?yàn)樗鼈儽憩F(xiàn)出相同的功能性質(zhì)。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的并表現(xiàn)出上文所定義的免疫特性的任何片段都適于本發(fā)明的目的。本發(fā)明還涉及至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種根據(jù)本發(fā)明的表位、至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體或至少一種根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于抑制、預(yù)防或治療在動(dòng)物-f尤選人——^中由屬于HERV-W干擾群的病毒引起的感染。根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域可具體用于靶向表達(dá)hASCT家族的受體的細(xì)胞，以轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)以及調(diào)節(jié)氨基酸的流動(dòng)(癌癥治療)。肽的組成型表達(dá)所需的元件的表述被理解為表示特異于真核細(xì)胞的遍在啟動(dòng)子。作為肽的誘導(dǎo)型表達(dá)所需的元件，可以提及調(diào)控抗四環(huán)素的大腸桿菌操縱子的元件(GossenM.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89:5547-5551(1992))。至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種根據(jù)本發(fā)明的表位、或至少一種根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列的應(yīng)用特別適合于制備擬用于在動(dòng)物——優(yōu)選人-體中預(yù)防由屬于HERV-W干擾群的病毒引起的感染的藥物。至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體的應(yīng)用特別適合于制備擬用于在動(dòng)物——優(yōu)選人一一體中抑制或治療由屬于HERV-W干擾群的病毒誘發(fā)的感染或病狀的藥物。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括作為活性物質(zhì)的至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種根據(jù)本發(fā)明的表位、或可選地至少一種根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，特別是置于所述肽結(jié)構(gòu)域或表位的組成型和/或誘導(dǎo)型表達(dá)所需元件的調(diào)控之下的核苷酸序列，與藥學(xué)上適宜的載體的組合。本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括作為活性物質(zhì)的至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體，與同藥學(xué)上適宜的載體的組合。當(dāng)然，根據(jù)藥物組合物的成分，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易確定藥學(xué)上適宜的載體，以及確定將使用的肽結(jié)構(gòu)域、表位、核苷酸或抗體的量。在根據(jù)本發(fā)明的用于口服、舌下給藥、皮下給藥、肌肉內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、局部給藥、氣管內(nèi)給藥、直腸給藥或經(jīng)皮給藥的藥物組合物中，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的常規(guī)步驟，活性物質(zhì)能夠以單位給藥形式或作為與常規(guī)藥物載體的混合物進(jìn)行給藥，并擬通過經(jīng)口途徑給藥，例如以片劑、明膠膠嚢、口服溶液等的形式，或以栓劑的形式通過直腸途徑給藥，或特別以注射溶液的形式通過腸胃外途徑給藥，特別是通過靜脈內(nèi)、皮內(nèi)或皮下途徑等給藥。對(duì)于局部施用，活性物質(zhì)能夠以乳劑、軟膏劑、洗劑、滴眼劑進(jìn)行使用。當(dāng)制備片劑形式的固體組合物時(shí)，活性物質(zhì)與可藥用的賦形劑混合，該可藥用的賦形劑也稱為藥物載體，例如，明膠膠嚢、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石、阿拉伯膠或類似物。片劑可以用蔗糖、用纖維素衍生物或用其它合適的材料進(jìn)行包衣。能夠?qū)υ摻M合物進(jìn)行處理，使得它們具有延長的或遲延的活性并且使得它們連續(xù)釋放預(yù)定量的活性物質(zhì)。通過將活性物質(zhì)與稀釋劑混合并將該混合物倒入軟或硬明膠膠嚢中獲得明膠膠嚢形式的制劑也是可能的。獲得糖漿劑形式或以滴劑形式給藥的制劑也是可能的，其中所述活性物質(zhì)與增甜劑、殺菌劑諸如特別是羥苯曱酸曱酯和羥苯曱酸丙酯、以及風(fēng)味增強(qiáng)劑或合適的著色劑混合。粉末或水分散性顆粒可含有以與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的分散劑或潤濕劑或懸浮劑的混合物為形式的活性物質(zhì)。對(duì)于腸胃外給藥，使用了水懸浮體、等滲鹽水或無菌溶液注射用溶液，其含有分散劑、藥理學(xué)上相容的潤濕劑，諸如特別是聚乙二醇或丁二醇。根據(jù)本發(fā)明的藥物或藥物組合物可另外包括活化劑，該活化劑誘導(dǎo)藥物治療的效果或者通過具體增加主要藥物治療的生物利用度來增強(qiáng)或補(bǔ)充主要藥物治療的效果。劑量取決于病癥的嚴(yán)重性，并根據(jù)常規(guī)步方案調(diào)整。作為指導(dǎo)，當(dāng)活性物質(zhì)是單克隆抗體時(shí)，每周劑量為1至10mg/kg，結(jié)合可藥用的賦形劑。本發(fā)明還涉及用于檢測和/或量化屬于HERV-W干擾群的病毒或者檢測和/或量化針對(duì)所述病毒的免疫應(yīng)答的診斷組合物，其包括至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種根據(jù)本發(fā)明的表位、至少一種根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列、或至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體。如果期望確定患者是否對(duì)屬于HERV-W干擾群的病毒具有免疫應(yīng)答，包括至少一種根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種根據(jù)本發(fā)明的表位、至少一種根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列的診斷組合物是特別合適的，而包括至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體的診斷組合物特別適合于檢測和/或量化屬于HERV-W干擾群的病毒。本發(fā)明還涉及在生物樣品中檢測和/或量化屬于HERV-W干擾群的病毒的方法，所述生物樣品取自易于受屬于HERV-W干擾群的病毒感染的個(gè)體，其特征在于所述方法包括由下列組成的步驟-使所述生物樣品與至少一種根據(jù)本發(fā)明的抗體在使得所述病毒和所述抗體之間能夠形成復(fù)合物的條件下接觸，和-通過合適的方式檢測和/或量化所述復(fù)合物的形成。生物樣品的表述被理解為表示易于含有所述病毒的人或動(dòng)物來源的生物樣品，例如血液、血漿、血清、尿液、腦脊液的樣品，或者諸如胎盤、睪丸、前列腺和乳房等組織的樣品。接觸的步驟是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)上已知的步驟。通過在極小分子的免疫分析領(lǐng)域內(nèi)已知的任何4企測方式，例如直接檢測，即沒有一個(gè)結(jié)合配偶體或多個(gè)結(jié)合配偶體的中間階段，以及間接檢測，即通過一個(gè)結(jié)合配偶體或多個(gè)結(jié)合配偶體的中間階段，而進(jìn)行該檢測/量化步驟。本發(fā)明的抗體或抗體片段和病毒間的結(jié)合的直接檢測可以通過例如表在該情況下，本發(fā)明的抗體用于免疫捕獲所有或部分病毒，該所有或部分病毒隨后被洗脫?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何洗脫方法例如pH沖擊法進(jìn)行洗脫。在間接檢測的情況下，本發(fā)明方法的第二步可根據(jù)常規(guī)ELISA竟?fàn)帨y定技術(shù)進(jìn)行。本發(fā)明的抗體隨后用作用于捕獲樣品中的所有或部分病毒的結(jié)合配偶體。然后，通過待測樣品中可含有的病毒的全部或一部分與先前標(biāo)記的已知量的病毒之間的竟?fàn)帲M(jìn)行該4企測。表達(dá)標(biāo)記被理解為表示能夠直接或間接產(chǎn)生可檢測信號(hào)的標(biāo)記物的連接。這些標(biāo)記物的非限制性名單由下列組成■酶，其產(chǎn)生例如能夠通過比色法、熒光法、發(fā)光法可檢測的信號(hào)，例如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、乙酰膽堿酯酶、P-半乳糖苷酶、葡糖-6-磷艦氬酶，■生色團(tuán)，例如發(fā)光顯色的化合物，放射性分子，例如32P、35S或1251，■熒光分子，例如熒光素、羅丹明(rhodomine)、阿歷克斯紅(alexa)或藻藍(lán)蛋白，和■顆粒，例如金或磁性乳膠顆粒、脂質(zhì)體。間接標(biāo)記系統(tǒng)也可被使用，例如，通過另一配體/抗配體對(duì)進(jìn)行。所述配體/抗配體對(duì)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的，并且下列的配對(duì)可作為例子提及生物素/抗生蛋白鏈菌素、生物素/抗生物素蛋白、半抗原/抗體、抗原/抗體、月i/抗體、糖/凝集素、多核香^/該多核苦物的互^峰。在該情況下，是結(jié)合到所述結(jié)合配偶體的所述配體?？古潴w可以通過在前述段落中描述的標(biāo)記物進(jìn)行直接檢測或本身可以通過酉己體/抗配體進(jìn)行檢測。這些間接系統(tǒng)在某些條件下可以導(dǎo)致信號(hào)的擴(kuò)增。該信號(hào)擴(kuò)增技術(shù)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的，并可參考本申請(qǐng)人以前的專利申請(qǐng)F(tuán)R98/10084或WO95/08000,或者參考文章J.Histochem.Cytochem.,(1997)，45:481-491。分子的標(biāo)記廣為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，并例如由GregT.Hermanson在BioconjugateTechniques,1996,AcademicPressInc.,525BStreet,SanDiego,CA92101USA中加以描述。取決于所用標(biāo)記的類型，例如使用酶，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將加入使所述標(biāo)記可見的試劑。這類試劑廣為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知，并具體描述于PrinciplesandPracticeofImmunoessay，2ndedition,EditedbyC.Price,D.G.Newman,StocktonPress,1997,345ParkAvenueSouth,NewYork中。本發(fā)明還涉及上述組合物在生物樣品或樣本中體外篩選屬于HERV-W干擾群的病毒中的應(yīng)用。具體而言，例如SRV1和SRV2(涉及猴免疫缺陷機(jī)制的病毒)的病毒的早期篩選，使得能夠在免疫缺陷出現(xiàn)之前提供適于宿主的治療。而且，涉及胎盤病理學(xué)的HERV-W的早期篩選使得能夠調(diào)節(jié)該HERV-W的表達(dá)，例如，在先兆子癇期間調(diào)節(jié)。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域或根據(jù)本發(fā)明的表位、或根據(jù)本發(fā)明的抗體在抑制屬于HERV-W干擾群的病毒的i皮膜和ASCT受體之間的相互作用中的應(yīng)用。這使得特別是獲得避孕免疫療法成為可能。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域在鑒定化學(xué)或生物分子中的應(yīng)用，所述化學(xué)或生物分子與該肽結(jié)構(gòu)域的全部或部分的相互作用阻斷屬于HERV-W干擾群的病毒#1膜和hASCT受體之間的相互作用。例如，當(dāng)使用HERV-W的根據(jù)本發(fā)明的肽結(jié)構(gòu)域時(shí)，這使得能夠獲得特別是對(duì)于獲得避孕治療是高度適合的化學(xué)或生物分子。應(yīng)用這類化學(xué)分子來抑制屬于HERV-W干擾群的病毒被膜和ASCT受體之間的相互作用是具有治療益處的。作為指導(dǎo)，兩種允許篩選化學(xué)或生物分子的一般方法在下面被描述，該化學(xué)或生物分子能夠抑制env/受體相互作用。在當(dāng)可能產(chǎn)生可溶被膜的情況下，根據(jù)ELISA型方法，在捕獲階段使用表達(dá)至少一種hASCT受體的細(xì)胞，確定化學(xué)或生物分子是否改變env/受體相互作用是可取的。因此，在96孔板上，表達(dá)目標(biāo)hASCT受體的細(xì)胞被培養(yǎng)或吸附，并且env/受體相互作用通過應(yīng)用標(biāo)記的可溶被膜(組氨酸標(biāo)簽，GPF融合)進(jìn)行檢測，從而能夠產(chǎn)生可以測定的參考信號(hào)。如果在所述可溶被膜與化學(xué)或生物分子預(yù)溫育后觀察到信號(hào)減少，這表示所述化學(xué)或生物分子改變env/受體相互作用?？蛇x地，應(yīng)用由目標(biāo)被膜包裝并表達(dá)可檢測標(biāo)記(LacZ)的假型反轉(zhuǎn)錄病毒載體并進(jìn)行相同檢測是可能的。經(jīng)由融合抑制的測量，能夠選擇目標(biāo)分子。表達(dá)目標(biāo)受體的細(xì)胞(細(xì)胞-受體)，例如HeLa或XC-RDR細(xì)胞，以及以組成型表達(dá)標(biāo)記物(例如LacZ)并瞬時(shí)或穩(wěn)定表達(dá)目標(biāo)被膜的細(xì)胞(細(xì)胞-env-LacZ)被使用；通過與HERV-Wenv的胞質(zhì)內(nèi)結(jié)構(gòu)域交換，目標(biāo)被膜在其胞質(zhì)內(nèi)尾的水平下被事先修飾，以便使其以組成型成融合(Cheynet等，79(9):5586-5593，2005)。兩種細(xì)胞類型的接觸，"細(xì)胞-受體"過量而"細(xì)胞-env-LacZ"不足量，引起多核巨細(xì)胞或合胞體的形成，其含有一種或兩種來源于"細(xì)胞-env-LacZ"的藍(lán)色核和數(shù)十種來源于"細(xì)胞-受體，，的白色核。在存在改變env/受體相互作用的化學(xué)或生物分子的情況下進(jìn)行的相同共培養(yǎng)導(dǎo)致合胞體的數(shù)量和它們的核含量的降低。在CCD相機(jī)的幫助下這類測量的自動(dòng)化是可能的。斷屬于HERV-W干擾群的病毒被膜和hASCT受體之間的相互作用。本發(fā)明還涉及確定屬于HERV-W干擾群的病毒被膜和hASCT受體之間的相互作用所需的多肽區(qū)的方法，其特征在于■鑒定所述病毒的前體被膜的核苷酸和/或肽序列■信號(hào)部分被排除在外■絲氨酸-天冬氨酸-X^Xb-Xe-Xd-Xe-天冬氨酸-XrXg是檢測的結(jié)構(gòu)域其中Xa、Xb、Xc、Xd、Xe、Xf、Xg是對(duì)應(yīng)于SEQIDNo.43的任何氨基酸在對(duì)應(yīng)于SEQIDNo.43的所述絲氨酸-天冬氨酸-Xa-Xb-Xc-Xd-Xe-天冬氨酸-XfXg結(jié)構(gòu)域之后，15至25個(gè)(優(yōu)選15至20個(gè))氨基酸之間的C端被排除在外。優(yōu)選地，Xa、Xb、Xe是氨基酸，其為甘氨酸，Xd是選自脯氨酸和纈氨酸的氨基酸，Xe是選自谷氨酰胺、亮氨酸和蘇氨酸的氨基酸，Xf是選自賴氨酸、蘇氨酸、曱硫氨酸和谷氨酰胺的氨基酸，Xg是選自丙氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸和纈氨酸的氨基酸。為了本發(fā)明的目的，所述病毒的前體被膜的核苷酸序列和/或肽序列通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法(可具體參考Maniatis(ed.1989))進(jìn)行鑒定。通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法將所述信號(hào)部分排除在外，特另'J是在"ImprovedPredictionofSignalPeptide:SignalP3.0"JannickDyrl0vBendtsen，HenrikNielsen,GunnarvonHiejneandS0renBrunak,J.Mol.Biol"340:783-795,2004中所描述的方法。所述結(jié)構(gòu)域通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法進(jìn)行檢測，也就是說使用Blast或Fasta類軟件(具體參見AltschulSF,GishW,MillerW,MyersEW，LipmanDJ"Basiclocalalignmentsearchtool.J.Mol.Biol.1990Oct5;215(3):403-10)。本發(fā)明還涉及能夠通過上述方法獲得的肽結(jié)構(gòu)域。附圖以解釋性實(shí)例的方式給出，并且不具有限制性。它們將4吏得讀者能夠更好地理解本發(fā)明。圖1圖解說明了來源于Env-W的可溶重組蛋白的表型特征和性質(zhì)。具體而言，圖la圖解說明了包括SU和TM亞基(Env-Gp60)的全部或部分的最大可溶重組蛋白，以及相應(yīng)于SU亞基(EnvSU)的可溶重組蛋白。圖lb表示EnvSU重組蛋白分別與XChASCT2細(xì)胞和XChASCTl細(xì)胞的結(jié)合測試的流式細(xì)胞術(shù)分析，所述XChASCT2細(xì)胞和XChASCTl細(xì)胞分別表達(dá)hASCT2與hASCTl受體。圖lc圖解說明了結(jié)合TE671細(xì)胞(對(duì)照hASCT2)、TE671RD細(xì)胞(阻斷hASCT2)和TE671galv細(xì)胞(阻斷Pitl)的干擾測試。圖2圖解說明了結(jié)合至hASCT2受體的ERV-W被膜的最小結(jié)合結(jié)構(gòu)域的定義(RBD表示受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域)。具體而言，圖2a描述了從EnvSU設(shè)計(jì)出的所有缺失突變體。圖2a表示來源于EnvSU的重組蛋白與表達(dá)hASCT2受體的XChASCT2細(xì)胞的結(jié)合測試的流式細(xì)胞術(shù)分析，具體而言，Envl97、Envl68和Envl44突變體的結(jié)合以及Env69-317、Envl69-317和Envl17突變體的結(jié)合缺陷。圖3a圖解說明了對(duì)應(yīng)于HERV-W被膜蛋白前體的區(qū)域21-144的、根據(jù)本發(fā)明的結(jié)構(gòu)域(RBD)內(nèi)部的免疫原性肽的定義。圖3b示出了在通過免疫原性肽產(chǎn)生的抗體(抗SU-EnvW)的幫助下對(duì)RBD與其受體結(jié)合的抑制，以及在非特異性抗體(抗TM-EnvW)存在下對(duì)RBD-受體結(jié)合的缺乏抑制。圖4表示屬于同一干擾群的反轉(zhuǎn)錄病毒被膜序列的比對(duì)，并示出了信號(hào)肽、SU(表面單元)亞基和TM(跨膜)亞基的邊界以及受體結(jié)合位點(diǎn)。序列是HERV-W(人內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒家族W)、RD114(貓內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒)、REV(鳥網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病毒)、BAEV(狒狒內(nèi)源性病毒(菌林M7))、SRV1(猿反轉(zhuǎn)錄病毒SRV-1)、SRV2(猿反轉(zhuǎn)錄病毒SRV-2)和MPMV(猿Mason-Pfizer病毒)。具體實(shí)施例方式下列實(shí)施例以舉例說明的方式給出，并且不具有限制性。它們將使得能夠更好地理解本發(fā)明。實(shí)施例1:重組被膜的分子和表型特征朋及F-『"^OT亞差絲建和/^由含有HERV-W被膜基因(538個(gè)氨基酸)的表達(dá)載體phCMV-Env-W(BlondJVirol,Vol74(7):3321-3329，2000)，設(shè)計(jì)允許可溶重組凈皮膜蛋白表達(dá)的載體phCMVEnv誦Gp60(clonePH74,Blond等.JVirolVol73(2):1175-1185，1999)。以如下所述步驟來構(gòu)建可溶被膜(Gp60,1-435)。(1)在SU和TM亞基之間的天然切割位點(diǎn)RNKR(AA314至317)被突變成AAAR,以使得產(chǎn)生融合蛋白，該融合蛋白穩(wěn)定且不具有被切割然后由二硫橋重新組合的兩個(gè)SU-TM亞基。(2)對(duì)應(yīng)于氨基酸436至538的跨膜(tm)和胞質(zhì)內(nèi)(CYT)區(qū)域被缺失，以獲得可溶蛋白質(zhì)。(3)具有組成(GGGS)3、其后是多聚組氨酸尾(RGS-HHHHHH)的間隔臂:故添加于C端位置，以允i午通過IMAC純化該蛋白以及通過抗組氨酸單克隆抗體(Qiagen,RGSH6)進(jìn)行4企測。以表達(dá)該可溶被膜的載體phCMVEnv-Gp60開始，構(gòu)建載體phCMV-EnvSU,允許SU蛋白質(zhì)的產(chǎn)生?？扇躍U是在緊接序列AAAR的下游含有序列RGS-HHHHHH的C端多聚組氨酸尾的融合蛋白，以允許通過IMAC純化該蛋白以及通過抗組氨酸單克隆抗體(Qiagen,RGSH6)進(jìn)行檢測。通過載體phCMV-Env-W、phCMV-EnvGp60和phCMV-EnvSU產(chǎn)生的各種蛋白質(zhì)的示意性結(jié)構(gòu)被描述于圖la中。通過磷酸鉤沉淀，表達(dá)質(zhì)粒phCMV-EnvGp60或phCMV-EnvSU被轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中。在無血清培養(yǎng)基中產(chǎn)生48小時(shí)之后，收集含有GP60或SU被膜的上清液，并在0.45pm膜上過濾，以除去細(xì)胞碎片。在聚丙烯酰胺凝膠上并通過與抗組氨酸單克隆抗體(Quiagen,RGSH6)的蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行直接分析。GP60和SU蛋白以可溶形式正確表達(dá)。遞過敘劍4迷輛潛合浙試和為、浙在用表達(dá)任一人受體hASCT的載體轉(zhuǎn)染XC細(xì)胞(大鼠肉瘤)并隨后如上所述選擇克隆之后，以組成型表達(dá)hASCT2(XChASCT2)或hASCTl(XChASCTl)受體的穩(wěn)定系XChASCT2和XChASCTl得以建立(Frendo等，Mol.CellBiol.，Vol23(10):3566-3574，2003)。下列人細(xì)胞被描述于BlondJVirol,Vol74(7):3321-3329，2000中。TE671細(xì)胞表達(dá)hASCT2。TE671RD細(xì)胞組成型表達(dá)屬于同一干擾群從而識(shí)別hASCT2受體的RD114被膜(貓內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒)。TE671galv細(xì)胞組成型表達(dá)GALV(長臂猿白血病病毒)被膜，其屬于另一干擾群并識(shí)別PiTl受體。細(xì)胞在PBS溶液中洗滌，并通過脫附作用，利用在PBS中的0.02%乙二胺四乙酸收獲細(xì)胞?？偣?06個(gè)細(xì)胞與1ml的含有該可溶一皮膜(Gp60或SU)的過濾上清液在37。C下溫育1小時(shí)。細(xì)胞用含有2%胎牛血清的PBA(PBS和0.5%的疊氮鈉)洗滌，并在4°C下用抗組氨酸單克隆抗體(RGSH6,Quiagen)標(biāo)記1小時(shí)。細(xì)胞用PBA洗滌一次，并在4。C下用偶聯(lián)于異氰酸熒光素的二抗溫育l小時(shí)。細(xì)胞用PBA洗滌兩次，并用流式細(xì)胞術(shù)分析。使用靶細(xì)胞XChASCT2，本發(fā)明人證明了對(duì)應(yīng)于該一皮膜的可溶形式的重組蛋白Gp60具有與野生型被膜的重組蛋白相同的表型特征，即，它能夠結(jié)合表達(dá)hASCT2受體的XC細(xì)胞。使用輩巴細(xì)胞XChASCT2、XChASCTl、TE671、TE671RD、TE671galv，本發(fā)明人證明了對(duì)應(yīng)于該被膜的SU亞基的重組蛋白表現(xiàn)出與野生型被膜的重組蛋白相同的表型特征。首先，該SU亞基能夠結(jié)合兩種受體hASCTl和hASCT2(圖lb)。而且，該蛋白就人細(xì)胞TE671和衍生細(xì)胞TE671RD和TE671galv進(jìn)行檢測?？扇躍U蛋白結(jié)合到表達(dá)hASCT2受體的TE6781細(xì)胞和PiTl受體被阻斷的TE671galv細(xì)胞，但該可溶SU蛋白不結(jié)合hASCT2受體被阻斷的TE671RD細(xì)胞(圖lc)。SU重組蛋白和RD114反轉(zhuǎn)錄病毒特異性地發(fā)生干擾。實(shí)施例2:用于W^L^的SU部分與其hASCT2受體的相互作用的結(jié)構(gòu)域的鑒定為鑒定被膜結(jié)合hASCT2受體的區(qū)域邊界，本發(fā)明人構(gòu)建了一組從N末端和C末端的缺失突變體。SU亞基的結(jié)構(gòu)域通過PCR獲得，并被亞克隆到表達(dá)載體pHCMV-EnvSU中并進(jìn)行測序。通過磷酸鈣沉淀，表達(dá)質(zhì)粒phCMV-EnvSU、Env69-317、Envl97、Envl68、Envl69-317、Envl17和Envl44(圖2a)被轉(zhuǎn)染到HEK293T細(xì)胞中。蛋白質(zhì)的產(chǎn)生和分析條件與實(shí)施例1中描述那些細(xì)節(jié)相同。EnvSU、Env69-317和Envl97蛋白質(zhì)以可溶形式正確表達(dá)。使用組成型表達(dá)hASCT2的XC細(xì)胞，本發(fā)明人證明了Envl97蛋白能夠結(jié)合在所述細(xì)胞的表面上表達(dá)的受體，如SU亞基(1-317)。因此，成熟SU亞基的前176個(gè)殘基(從而缺乏其信號(hào)肽)足以結(jié)合到表達(dá)hASCT2受體的細(xì)胞表面。該21-68區(qū)的缺失導(dǎo)致與還表明其所包括受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(RBD)的受體結(jié)合的喪失。另一方面，截短的Envl68蛋白表現(xiàn)出較低的結(jié)合hASCT2受體的能力。為了在上清液中獲得各種截短的蛋白質(zhì)之間的當(dāng)量，本發(fā)明人將SU的N端區(qū)的兩個(gè)較小的結(jié)構(gòu)域(Envl17和Envl44)融合于SU亞基的C端區(qū)(Envl69-317)，后一結(jié)構(gòu)域不結(jié)合hASCT2。Envl17和Envl44蛋白的表達(dá)水平是類似的，并且所述蛋白以可溶形式表達(dá)。結(jié)合測試表明，僅Envl44蛋白能夠結(jié)合表達(dá)hASCT2受體的細(xì)胞。Envl17蛋白不與所述細(xì)胞表面結(jié)合表明該117-144區(qū)內(nèi)部至少一個(gè)結(jié)合決定子的喪失。因此，用于W^皮膜與其受體的相互作用的結(jié)構(gòu)域的邊界由氨基酸21至144所限定。應(yīng)該注意到，一般而言，擬分泌或用于膜表達(dá)的蛋白質(zhì)(包括被膜蛋白)在顆粒內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)中合成。在ER中新合成蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)受N端信號(hào)肽的制約(Walter和Lingappa1986)。信號(hào)肽的疏水區(qū)啟動(dòng)穿入網(wǎng)狀組織的膜，帶動(dòng)在其后的該新合成肽的剩余部分。由于轉(zhuǎn)運(yùn)與合成同時(shí)開始，所以是正在被翻譯的肽穿過ER膜。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)通過ER的內(nèi)腔時(shí)，該信號(hào)序列被特異的纟田胞酶、信號(hào)肽酶切割(WalterP,JohnsonAE:Signalsequencerecognitionandproteintargetingtotheendoplasmicreticulummembrane.Annu.Rev.CellBiol.1994,10:87-119)。Env轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入ER被糖蛋白的(疏水性)跨膜結(jié)構(gòu)域所停止，該糖蛋白錨定于磷脂膜。在ER內(nèi)腔中，擬變成胞質(zhì)外的區(qū)(SU和部分TM)被折疊(二硫橋形成)、糖基化和寡聚化。在寡聚化后，經(jīng)歷成熟作用的蛋白質(zhì)被轉(zhuǎn)運(yùn)入高爾基體中，在那里它們經(jīng)歷新的聚糖成熟過程并由識(shí)別基序R/KXXR的弗林蛋白酶型的內(nèi)切蛋白酶切割而產(chǎn)生兩個(gè)SU和TM亞基。由于在含有酪氨酸(脂族/芳族(Y-X-X))的胞質(zhì)內(nèi)尾上存在的基序，該成熟蛋白被靶向原生質(zhì)膜。實(shí)施例3:被膜與其受體結(jié)合的體外抑制檢測(肽的定義和兔抗體的產(chǎn)生)通過實(shí)施例2中定義的區(qū)域和通過SU亞基的潛在抗原性區(qū)域的確定，進(jìn)行肽(112-129，TGMSDGGGVQDQAREKHV+C,19個(gè)氨基酸)的定義。半胱氨酸被添加于C端位置，用于KLH(鑰孔血藍(lán)蛋白，cf.Frendo等，Mol.CellBiol.Vol23(10):3566-3574,2003)偶聯(lián)。該肽被用于兔免疫，隨后親和純化多克隆抗體，該多克隆抗體定向針對(duì)該兔的血清中含有的區(qū)域112-119。Envl44蛋白在37。C下與抗SU多克隆抗體或與抗TM多克隆抗體預(yù)溫育一小時(shí)。Envl44蛋白-抗SU抗體復(fù)合物的形成顯著降低了被膜與表達(dá)hASCT2受體細(xì)胞的結(jié)合。相比之下，不定向針對(duì)RBD的抗體的使用并未對(duì)Envl44蛋白與hASCT2受體的結(jié)合造成不利影響。實(shí)施例4:定向針對(duì)HERV-W被膜蛋白的生成三只雌性六周齡的BALB/c小鼠(IFFA-Credo)通過直接注射含有HERV-W被膜的基因的棵質(zhì)粒DNA(phCMV-env-W)進(jìn)行免疫。該注射在基因槍的幫助下通過皮內(nèi)途徑進(jìn)行。對(duì)每只小鼠首先進(jìn)行五次2貼DNA的注射，隨后兩次4嗎DNA的注射進(jìn)行加強(qiáng)。收集血清，并確定每一血清的抗體滴度。由于抗體滴度太低，所以制備細(xì)胞裂解物。細(xì)胞裂解物的制備橫紋肌肉瘤細(xì)胞TelCeB6(ATCCCRL8805)用質(zhì)粒phCMV-env-W轉(zhuǎn)染。在約20小時(shí)后以及合胞體的存在下，在含有0.5%曲拉通(Triton)的PBS緩沖液中制備細(xì)胞提取物。通過Bradford測定該蛋白提取物。env-W抗原濃度對(duì)應(yīng)于9.5嗎4il的總蛋白。用細(xì)胞裂解物的4是取物免疫小鼠同一小鼠首先通過腹膜內(nèi)途徑接受IO貼的細(xì)胞裂解物的注射，隨后通過腹膜內(nèi)途徑注射2x100嗎的細(xì)胞裂解物進(jìn)行加強(qiáng)。在與骨髓瘤細(xì)胞融合前三天，通過靜脈內(nèi)途徑，用22lig的可溶被膜蛋白Gp60進(jìn)行另一注射，該可溶一皮膜蛋白Gp60通過如實(shí)施例1所述的質(zhì)粒phCMV-Env-Gp60獲得并根據(jù)下列條件在注射前預(yù)先純化到Ni-NTA樹脂(Quiagen)上在pH8的磷酸鹽緩沖液中結(jié)合、在pH8的磷酸鹽緩沖液和在pH6的乙酸銨中洗滌、在pH3.5的乙酸銨中洗脫以及用真空離心蒸發(fā)濃縮器(speedvac)濃縮。如此獲得的47嗎真核Gp60蛋白被保留用于通過上述靜脈內(nèi)途徑注射。在融合后，通過免疫熒光，在轉(zhuǎn)染并結(jié)合的細(xì)胞(TeLCeb6)上，檢測雜交瘤上清液，通過功能性ELISA檢測，使用總蛋白濃度為9.2嗎&1的Env-W蛋白和作為陰性對(duì)照的、總蛋白濃度為13.3pg/iil的EnvAS蛋白來進(jìn)行抗體篩選，并且選擇最有效的抗體。單克隆抗體2H1H8、12C7A3和1F11B10由此獲得。單克隆抗體2H1H8和12C7A3定向針對(duì)Env-HERV-W蛋白的SU區(qū)的非糖基化N端部分。如在Envl44的幫助下進(jìn)行的蛋白質(zhì)印跡測定所示，單克隆抗體2HlH8和12C7A3定向針對(duì)RDB。如在Env169-317的幫助下進(jìn)行的蛋白質(zhì)印跡測定所示，單克隆抗體1FllB10定向針對(duì)Env-HERV-W蛋白的SU區(qū)的糖基化C端部分。該抗體不識(shí)別Env144。實(shí)施例5:被膜與其受體結(jié)合的體外抑制測試和在單克隆抗體的幫助下通過細(xì)胞與細(xì)胞融合測試(共培養(yǎng))合胞體形成的體外抑制測試用于表達(dá)被膜糖蛋白的質(zhì)粒通過磷酸4丐沉淀以100和500ng的量被轉(zhuǎn)染入細(xì)胞TELCeB6中(Cosset等，JournalofVirology,69(10):6314-6322(1995))。表達(dá)該被膜的細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后20小時(shí)與支持體分離，并在37。C下分別與抗HIV23A5單克隆抗體、抗TMEnv-HERV-W6A2B2單克隆抗體(先前獲得)、抗SUEnv-HERV-W2H1H812C7A3和1F11B10單克隆抗體(以1/50稀釋)預(yù)溫育1小時(shí)。接下來，它們以相同的濃度(0.4x105個(gè)細(xì)月&/孔)再接種到12孔板中。然后將上皮樣癌指示的人細(xì)胞(Epithelioid-carcinoma-indicatinghumancells)(海拉癌細(xì)胞抹(Hela),ATCCCCL-2)以每孔2x105個(gè)細(xì)胞的量加入到該轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，并且持續(xù)共培養(yǎng)24h。然后，可以進(jìn)行XGal(5-溴-4-氯-3-。引哚基-P-D-吡喃型半乳糖)染色，以對(duì)細(xì)胞TELCeB6的核進(jìn)行染色(Cosset等，JournalofVirology,69(10):6314-6322(1995))。之后根據(jù)供應(yīng)商的推薦進(jìn)行May-Griinwald和Giemsa溶液(MERCK)染色。所觀察到的融合對(duì)應(yīng)于"從內(nèi)部"的融合，也就是說，以表達(dá)被膜的細(xì)胞開始的細(xì)胞與細(xì)胞的融合，不同于"從外面"的融合——^f應(yīng)于病毒體-細(xì)胞(一個(gè)或多個(gè))融合后合胞體的形成。下面表l中描述的結(jié)果表示所計(jì)算的融合細(xì)胞的數(shù)量。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>ND:未測定上文所描述的結(jié)果表明，Env蛋白-抗SU2H1H8和12C7A3抗體復(fù)合物的形成顯著降低了被膜與表達(dá)hASCT2受體的細(xì)胞的結(jié)合以及細(xì)胞融合。相比之下，不定向針對(duì)rdb的抗體(6A2B2或1F11B10)的應(yīng)用并未顯著地給被膜的結(jié)合和細(xì)胞融合帶來不利影響，如通過與用抗HIV23A5對(duì)照抗體獲得的結(jié)果相比而觀察到的。實(shí)施例6:衫膽蛋白和hASCT2受體之間的體內(nèi)相互作用以及合胞體的體內(nèi)形成的研究為驗(yàn)證體外獲得的結(jié)果，設(shè)計(jì)動(dòng)物模型。橫紋肌肉瘤細(xì)胞TelCeB6(ATCCCRL8805)，在添加有南美血清(SouthAmericanserum)的DMEM培養(yǎng)基(GibcoInvitrogen41966-029)中培養(yǎng)，在LipofectAMINEPLUStm試劑盒(GibcoInvitrogen)的幫助下，根據(jù)下面詳細(xì)描述的步驟，分別用濃度為2嗎4il、對(duì)應(yīng)于以有義方向克隆的HERV-We"v基因的DNA(DNA409),用濃度為1.5pg4il、對(duì)應(yīng)于以反義方向克隆的HERV-We"v基因的DNA(DNA410)和用濃度為1.3ng/pl、對(duì)應(yīng)于突變的HERV-Wewv基因的DNA(DNALQMV)，對(duì)該橫纟文肌肉瘤細(xì)胞TelCeB6進(jìn)行轉(zhuǎn)染。用DNA409轉(zhuǎn)染的細(xì)胞能夠表達(dá)融合的W被膜蛋白，用DNA410轉(zhuǎn)染的細(xì)胞不能表達(dá)該被膜蛋白，而用DNALQMV轉(zhuǎn)染的細(xì)胞能夠表達(dá)融合的突變W被膜蛋白。1).步驟第一天TelCeB6細(xì)胞的培養(yǎng)-直徑100mm的培養(yǎng)皿的接種—50-70%匯合；-于37°C,在5%C02下，在補(bǔ)料DMEM培養(yǎng)基(每培養(yǎng)皿6ml)中培養(yǎng)24小時(shí)。第二天用LipofectAMINEPLUSTM試劑盒轉(zhuǎn)染7Z)AC4的豫婆合，-在15mlFalcon管(目錄號(hào)2096)中混合未添加有上述DNA——即2pi409或3jil410或3|ilLQMV-的750pi培養(yǎng)基；-渦旋攪拌PLUS試劑并將20pi的該試劑加入到DNA溶液中；-在1400rpm下立即渦旋攪拌10秒；-在室溫下溫育15分鐘。2勿應(yīng)的斜務(wù)-用5ml非補(bǔ)料培養(yǎng)基更換。5丄0o/ec"M/A^的^#在用于培養(yǎng)jm的管中，混合30|il的LipofectAMINE試劑與750)il的非補(bǔ)料培養(yǎng)基。4冊v4的婆合混合780|il稀釋的LipofectAMINE和772pi預(yù)絡(luò)合DNA溶液(總共1552pi);在1400rpm下立即渦旋攪拌10秒，在室溫下溫育15分鐘。5通過或未通過注射抗Env抗體處理的靶細(xì)胞移植的受體動(dòng)物的轉(zhuǎn)染和產(chǎn)生在培養(yǎng)皿中1552|nl的沉積；于37。C在5。/。C02下溫育2-3小時(shí)；用具有6ml補(bǔ)料培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基更換；于37。C在5。/qC02下溫育1小時(shí)；通過腹膜內(nèi)途徑(IP)注射入SCID小鼠(體積為lml),每個(gè)培一的1/5達(dá)到70%匯合，額外注射或不注射抗Env蛋白抗體(1/100稀釋的單克隆抗體2H1H8、多克隆抗體69(抗-SU)和71(抗-TM))。耐受該移植物并允許該移植的細(xì)胞在體內(nèi)傳播的動(dòng)物產(chǎn)生，同時(shí)在腹膜腔內(nèi)產(chǎn)生假性腹水。第三天通過腹腔灌洗，從每只動(dòng)物收集細(xì)胞注射2ml空氣，隨后注射2ml生理鹽水，然后按摩并回收2ml的腹膜液(用于在移植的動(dòng)物中腹膜腔內(nèi)植入的細(xì)胞的回收的步驟)；在"倒置相差"顯微鏡下觀察，同時(shí)對(duì)合胞體進(jìn)行計(jì)數(shù)，和/或于載玻片上染色后在"倒置相差"顯《鼓鏡下觀察；在錐蟲藍(lán)存在下(排除死細(xì)胞)，在具有方格室的載玻片上擴(kuò)散之后進(jìn)行直接讀數(shù)。用"廣角"透鏡(40)在每個(gè)視野下對(duì)已經(jīng)互相融合的細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行計(jì)數(shù)，這使得對(duì)超過約一百個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)成為可能，以得到一系列具有統(tǒng)計(jì)代表性的計(jì)數(shù)。每一樣品的細(xì)胞整分試樣在曱醇/丙酮(v/v)存在下被固定，然后儲(chǔ)存在-20。C下，直到獲得結(jié)晶紫染色(1%)。對(duì)染色的載玻片進(jìn)行照相。2)小鼠2只小鼠的組用下列接種在沒有抗體的情況下，用三類質(zhì)粒(DNA409、410和LQMV)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(3x2=6只小鼠)在存在單克隆抗體2H1H8的情況下，用三類質(zhì)粒(DNA409、410和LQMV)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(3x2=6只小鼠)。3)結(jié)果通過在方格計(jì)數(shù)室上的直接讀數(shù)確定的每100個(gè)細(xì)胞中的融合細(xì)胞數(shù)在下面的表2中示出表2ECP(錐蟲藍(lán))讀數(shù)合胞體的直接讀數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>S1,S2*=小鼠1和小鼠2每一個(gè)數(shù)表示每一研究視野下的融合且可見的細(xì)胞的數(shù)目。因?yàn)橐恍┘?xì)胞可能在光路中重疊，所以在對(duì)照中看起來融合的細(xì)胞的計(jì)數(shù)大于零。然后，通過在載玻片上對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，核實(shí)合胞體的真實(shí)性以及細(xì)胞堆積的鑒別，其中可見在由連續(xù)的單個(gè)和單一細(xì)胞膜劃界的空間中含有多個(gè)細(xì)胞核。而且，顯示出在融合過程中的細(xì)胞的照片使通過相差顯微鏡分析的融合的真實(shí)性以及在對(duì)照中的等同現(xiàn)象的完全缺失能夠客觀化。為使由表2中示出的數(shù)所表示的初步分析在統(tǒng)計(jì)學(xué)上客觀化，進(jìn)行Chi-2檢驗(yàn)(卡方檢驗(yàn))，以比較表2中的數(shù)據(jù)。在沒有載玻片染色之后的二次分析或在對(duì)照中從未見過的融合過程中的典型細(xì)胞的研究的情況下，考慮了初步讀數(shù)的"背景噪音"的統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果如下i)體內(nèi)致病效應(yīng)的特異性的統(tǒng)計(jì)確認(rèn)表達(dá)的Env(409):平均計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞有20.5個(gè)陽性,反義Env(410):平均計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞有9.5個(gè)陽性，突變Env(LQMV):平均計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞有6.5個(gè)陽性，對(duì)照的平均值(410和LQMV):9.5+6.5/2=8%.Env對(duì)對(duì)照410:Chi-2=5.89(p<0.02)Env對(duì)對(duì)照LQMV:Chi-2=9.83(p<0.002)Env對(duì)兩種對(duì)照(410和LQMV):Chi-2=7.69(p<0.01)對(duì)照410對(duì)對(duì)照LQMV:Chi-2=0.61(差異不顯著)。因此，對(duì)照是統(tǒng)計(jì)上等Y介的，并且不存在與對(duì)照的類型有關(guān)的"真實(shí)"差異。從該分析階段(未排除與偽像有關(guān)的背景噪音，并通過互相比較兩種類型的對(duì)照(其證明是等價(jià)的))獲得的結(jié)果在統(tǒng)計(jì)上是非常顯著的(總p<0.01)。通過染色，隨后的效應(yīng)特異性分析僅僅是確i^Env蛋白存在條件下體內(nèi)獲得的效應(yīng)特異性，從而驗(yàn)證動(dòng)物模型的合胞體的體內(nèi)研究，該動(dòng)物模型的融合是通過HERV-WEnv誘導(dǎo)的。ii)所4企測的抗體對(duì)體內(nèi)致病效應(yīng)的治療活性的統(tǒng)計(jì)確^人表達(dá)的Env(409):平均計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞有20.5個(gè)陽性，表達(dá)的Env(409)+單克隆抗體2H1H8:平均計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞有3.5個(gè)陽性。單獨(dú)的Env對(duì)注射抗體2H1H8:Chi-2=15.38(p<0.001)所得到的結(jié)果示出了單克隆抗體的統(tǒng)計(jì)上顯著的效應(yīng)(由于機(jī)會(huì)(p)小于0.001得到的結(jié)果概率)。通過染色，隨后的效應(yīng)特異性分析僅僅是確認(rèn)在Env蛋白存在條件下體內(nèi)獲得的效應(yīng)特異性，從而驗(yàn)證對(duì)該動(dòng)物模型的治療效應(yīng)。實(shí)施例7:HERV-WEnv蛋白與具有或不具有1或2型hASCT受體的細(xì)胞結(jié)合的體內(nèi)研究以及通過注射定向針對(duì)HERV-WEnv的抗體來抑制該結(jié)合的體內(nèi)研究1)材料可溶蛋白經(jīng)0.45pm過濾的上清液，含有可溶蛋白(用質(zhì)粒460(被膜-間隔物-His6)轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞)。通過與抗-RGS-His抗體的蛋白質(zhì)印跡確認(rèn)表達(dá)。抗體單克隆抗體2H1H8(IgG,5.50mg/ml)。細(xì)胞XChASCT2，表達(dá)hASCT2受體的細(xì)胞克隆XC(ATCCCCL-165，大鼠細(xì)胞)。DMEM培養(yǎng)基(GibcoInvitrogen41966-029)，含有南美血清。在1.5mlEppendorf管中預(yù)溫育、溫育、標(biāo)記。2)步驟7摔ZC7L^C77、ZC/l4SC"勿/^^^",裙勿應(yīng)XC/l^CT6^if沖j#^A<SC7Z)V、處將達(dá)到培養(yǎng)瓶的1/5的70%匯合以2ml體積注射入小鼠。2縦f在細(xì)胞培養(yǎng)箱中，伴隨著不時(shí)的攪拌(每隔15分鐘)，可溶蛋白上清液(293T細(xì)胞系的過濾上清液)與單克隆抗體2H1H8(990pl上清液與10抗體(以1/100稀釋))在37。C下溫育1小時(shí)。3接神單獨(dú)的蛋白質(zhì)或與所述抗體一起IP(腹膜內(nèi))接種入小鼠，該小鼠用細(xì)胞(每點(diǎn)1x106個(gè)細(xì)胞，即直徑100mm的匯合培養(yǎng)亞的1/5)移才直。在抗體(200微升)注射后，在腹膜內(nèi)維持6小時(shí)，伴隨著不時(shí)的腹腔灌注(每30-60分鐘)。4適d移控小葳的應(yīng)屋滲遂回收勿應(yīng)-在+4。C下，以3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。-細(xì)胞沉淀的回收以及在標(biāo)記培養(yǎng)基中稀釋(在+4。C下維持，直到固定)。5標(biāo)記-"~抗二該沉淀被溶解在100|il的抗-RGSHis抗體(100倍稀釋-Quiagen)的PBA緩沖液(PBS,具有2%胎牛血清和0.1%疊氮鈉)中，維持在+4。C。在冰中l(wèi)小時(shí)，伴隨著不時(shí)的攪拌(每隔15分鐘)。在PBA緩沖液(每管lml)中洗滌，維持在+4。C。-二抗在+4。C下，以3000轉(zhuǎn)離心5分鐘。沉淀被溶解在100pl的抗小鼠抗體-FITC(20倍稀釋-DAKO,目錄號(hào)F0479，在PBA緩沖液中)中，維持在+4。C。在水中1小時(shí)，伴隨著不時(shí)的攪拌(每隔15分鐘)。在PBA緩沖液(每管1ml)中洗滌2次，維持在+4。C。沉淀溶解在500|ilPBA中，維持在+4。C,并通過FACS分析?？蛇x地，在-20。C下，在丙酮/曱醇(50%/50%)中于載玻片上固定并用伊文斯藍(lán)復(fù)染之后，通過IF進(jìn)行分析。3)小鼠2只小鼠的組用下列接種在沒有抗體的情況下，每一類型的細(xì)胞(表達(dá)2種類型的受體hASCTl和hASCT2，而不表達(dá)作為對(duì)照的受體hASCT的細(xì)胞)(3x2=6只小鼠)；具有Env蛋白和單克隆抗體2HlH8的所述三種類型的細(xì)胞(3x2=6只小鼠)。4)結(jié)果利用顯微鏡的免疫熒光(IF)讀數(shù)的結(jié)果示于下面的表3中表3IF讀數(shù)同一視野下，熒光細(xì)胞lt/總細(xì)胞數(shù)(NF/NT)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>每一個(gè)數(shù)表示每一研究視野下發(fā)熒光而可見的細(xì)胞的數(shù)目。因?yàn)橐恍┘?xì)胞可以非特異性方式具有嵌入熒光，所以在對(duì)照條件下出現(xiàn)熒光的細(xì)胞計(jì)數(shù)在兩個(gè)計(jì)凄t的牙見野的一個(gè)中大于零(兩個(gè)牙見野的平均^直=1/28,即0.036%,這對(duì)于這樣的讀數(shù)技術(shù)的背景噪音是完全合理的)。然后，將Env蛋白結(jié)合至它們的hASCTl或hASCT2受體的細(xì)胞的真實(shí)性通過細(xì)胞熒光光度術(shù)加以確認(rèn)。為了在統(tǒng)計(jì)上使表3所示的分析客觀化，進(jìn)行Chi-24全驗(yàn)，以比較在下述條件下獲得的數(shù)據(jù)，根據(jù)所述條件，(i)與移植的對(duì)照細(xì)胞相比，Env蛋白質(zhì)可以結(jié)合到存在于被移植到SCID小鼠中的細(xì)胞的表面上的受體hASCTl(對(duì)照hASCTl)或hASCT2(對(duì)照hASCT2)，所述移植的對(duì)照細(xì)胞不具有注射入相應(yīng)的動(dòng)物中的Env蛋白能夠結(jié)合的受體(對(duì)照X)并且在抗Env抗體存在下不發(fā)出膜熒光；和(ii)與注射定向針對(duì)Env-SU的單克隆抗體相比，Env蛋白可結(jié)合到存在于被移植到SCID小鼠中的細(xì)胞的表面上的受體hASCTl(對(duì)照hASCTl)或hASCT2(對(duì)照hASCT2)。統(tǒng)計(jì)分^f的結(jié)果如下所示i)體內(nèi)致病效應(yīng)的特異性的統(tǒng)計(jì)確認(rèn)對(duì)照hASCTl:平均計(jì)數(shù)77個(gè)細(xì)胞有24個(gè)陽性，對(duì)照hASCT2:平均計(jì)數(shù)57個(gè)細(xì)胞有23個(gè)陽性，hASCT-細(xì)胞平均計(jì)數(shù)28個(gè)細(xì)胞有1個(gè)陽性。Env+移植hASCTl對(duì)hASCT-:Chi-2=8.62(p<0.01)Env+移植hASCT2對(duì)hASCT-:Chi-2=12.53(p<0,001)Env+移植hASCTl對(duì)env+移植hASCT2:Chi-2=1.21(差異不顯著)。在自身的表面上表達(dá)hASCTl或hASCT2受體的細(xì)胞因此實(shí)際是統(tǒng)計(jì)上等價(jià)的，并且在試驗(yàn)條件下在Env與亞型1或2相關(guān)的受體結(jié)合方面沒有差異。根據(jù)應(yīng)用在自身的表面不表達(dá)受體hASCTl或hASCT2的任一種的細(xì)胞來移植的對(duì)照動(dòng)物獲得的結(jié)果，應(yīng)用表達(dá)膜受體hASCTl或hASCT2的細(xì)胞來移植的動(dòng)物得到的結(jié)果是統(tǒng)計(jì)上顯著的。這些結(jié)果確認(rèn)了在動(dòng)物^t型中在Env蛋白存在的條件下體內(nèi)獲得的效應(yīng)的特異性。ii)所檢測的抗體對(duì)體內(nèi)致病效應(yīng)的治療活性的統(tǒng)計(jì)確認(rèn)Env+移植對(duì)照hASCTl:平均計(jì)數(shù)77個(gè)細(xì)胞有24個(gè)陽性，Env+移植hASCTl+單克隆抗體2H1H8:平均計(jì)數(shù)73個(gè)細(xì)胞有2個(gè)陽性。Env+單獨(dú)的移植hASCTl對(duì)注射抗體2H1H8:Chi-2=21.14(p<0.001)所得到的結(jié)果示出了單克隆抗體的統(tǒng)計(jì)上顯著的效應(yīng)(由于機(jī)會(huì)(p)小于0.001得到的結(jié)果概率)。Env+移植hASCT2:平均計(jì)數(shù)57個(gè)細(xì)胞有23個(gè)陽性￡^+移植11/^(712+單克隆抗體2H1H8:平均計(jì)數(shù)45個(gè)細(xì)胞有1個(gè)陽性。Env+單獨(dú)的移植hASCT2對(duì)注射抗體2H1H8:Chi-2=20.31(p<0.001)。所得到的結(jié)果示出了單克隆抗體的統(tǒng)計(jì)上顯著的效應(yīng)(由于機(jī)會(huì)(p)全部小于0.001得到的結(jié)果概率)。針對(duì)適合對(duì)照的動(dòng)物才莫型的確認(rèn)能夠證明抗體通過顯著抑制HERV-WEnv蛋白的致病效應(yīng)而可以具有治療活性。實(shí)施例8:干4W的序列比對(duì)反轉(zhuǎn)錄病毒HERV-W(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(swiss-prot)Q9UQF0)、RD114(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫Q98654)、REV(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫P31796)、BAEV(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫P10269)、SRV1(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫P04027)、SRV2(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫P51515)和MPMV(蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫P07575)的被膜的蛋白序列在MacVector軟件的幫助下，利用ClustalW程序，進(jìn)行比對(duì)。信號(hào)肽、SU(表面單位)亞基和TM(跨膜)亞基被指出。受體結(jié)合位點(diǎn)加下劃線。權(quán)利要求1.屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的肽結(jié)構(gòu)域，其特征在于它開始于N端并結(jié)束于C端，并且在于:所述N端由選自SEQIDNo.1至SEQIDNo.29的基序進(jìn)行定義，所述C端由選自SEQIDNo.30至SEQIDNo.40的基序進(jìn)行定義，并且所述特征在于所述肽結(jié)構(gòu)域在所述N端和所述C端之間包括至少一個(gè)選自SEQIDNo.41、SEQIDNo.42和SEQIDNo.73的基序。2.核苷酸序列，其編碼如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域。3.來源于如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域的表位，其特征在于該表位誘導(dǎo)針對(duì)屬于HERV-W干擾群的病毒的免疫應(yīng)答。4.核苷酸序列，其編碼如權(quán)利要求3所述的表位。5.表達(dá)載體，其特征在于它包括如權(quán)利要求2或4所述的核苷酸序列，以及所述表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)所需的元件。6.孩i生物或宿主細(xì)胞，其以如一又利要求5所述的至少一種表達(dá)載體轉(zhuǎn)化。7.抗體，其定向針對(duì)如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域或針對(duì)如權(quán)利要求3所述的表位。8.至少一種如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域或至少一種如權(quán)利要求3所述的表位或至少一種如權(quán)利要求7所述的抗體或至少一種如權(quán)利要求2或4所述的、處于所述肽結(jié)構(gòu)域或表位的組成型和/或誘導(dǎo)型表達(dá)所必需的元件的調(diào)控之下的核苷酸序列在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于抑制、預(yù)防或治療在動(dòng)物——優(yōu)選人——體中由屬于HERV-W干擾群的病毒引起的感染。9.藥物組合物，其包括作為活性物質(zhì)的至少一種如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種如權(quán)利要求3所述的表位、或可選地至少一種如權(quán)利要求2或4所述的、處于所述肽結(jié)構(gòu)域或表位的組成型和/或誘導(dǎo)型表達(dá)所必需的元件的調(diào)控之下的核苷酸序列、或可選地至少一種如權(quán)利要求7所述的抗體，與藥學(xué)上適宜的載體的組合。10.用于檢測和/或量化屬于HERV-W干擾群的病毒和/或量化針對(duì)屬于HERV-W干擾群的病毒的免疫應(yīng)答的診斷組合物，其包括至少一種如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域、至少一種如權(quán)利要求3所述的表位、或至少一種如權(quán)利要求2或4所述的核苷酸序列、或至少一種如權(quán)利要求7所述的抗體。11.4全測和/或量化在生物樣品中的屬于HERV-W干護(hù)乙群的病毒的方法，所述生物樣品取自易于受所述病毒感染的個(gè)體，其特征在于該方法包括下列步驟-使所述生物樣品與至少一種如權(quán)利要求7所述的抗體在使所述病毒和所述抗體之間能夠形成復(fù)合物的條件下相接觸，和-通過任何合適的方式檢測和/或量化所述復(fù)合物的形成。12.如權(quán)利要求10所述的組合物在體外篩選生物樣品或樣本中的屬于HERV-W干擾群的病毒中的應(yīng)用。13.如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域或如權(quán)利要求3所述的表位或如權(quán)利要求7所述的抗體在抑制屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用中的應(yīng)用。14.如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域在鑒定生物或化學(xué)分子中的應(yīng)用，所述生物或化學(xué)分子與全部或部分所述肽結(jié)構(gòu)域之間的相互作用阻斷屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用。15.如權(quán)利要求1所述的肽結(jié)構(gòu)域在產(chǎn)生抗體中的應(yīng)用，所述抗體阻斷屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用。16.確定屬于HERV-W干擾群的病毒的纟皮膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的多肽區(qū)的方法，其特征在于■鑒定所述病毒的前體被膜的核苷酸和/或肽序列■信號(hào)部分被排除在外■檢測絲氨酸-天冬氨酸-Xa-Xb-Xe-Xd-Xe-天冬氨酸-XrXg基序，該基序?qū)?yīng)于SEQIDNo.43其中Xa、Xb、Xc、Xd、Xe、Xf、Xg是任何氨基酸■在與SEQIDNo.43相對(duì)應(yīng)的所述絲氨酸-天冬氨酸-Xa-Xb-Xe-Xd-Xe-天冬氨酸-XrXg基序之后的15至25個(gè)之間的氨基酸的C端被排除在外。17.肽結(jié)構(gòu)域，其可通過如權(quán)利要求16所述的方法獲得。全文摘要本發(fā)明涉及屬于HERV-W干擾群的病毒的被膜和hASCT受體之間的相互作用所必需的肽結(jié)構(gòu)域，該肽結(jié)構(gòu)域包括N端點(diǎn)和C端點(diǎn)。所述肽結(jié)構(gòu)域在其N端點(diǎn)和C端點(diǎn)被定義，在其N端點(diǎn)，通過氨基酸(Z)_α-脯氨酸-半胱氨酸-X-半胱氨酸形成的模式進(jìn)行定義，其中Z是任何氨基酸，α是2至30間的整數(shù)，且X是任何氨基酸；在其C端點(diǎn)，通過氨基酸絲氨酸-天冬氨酸-X_a-X_b-X_c-X_d-X_e-天冬氨酸-X_f-X_g-(Z)_β形成的模式進(jìn)行定義，其中X_a、X_b、X_c、X_d、X_e、X_f、X_g是任何氨基酸，Z是任何氨基酸，β是15至25間的整數(shù)，優(yōu)先20。所述肽結(jié)構(gòu)域在所述N端點(diǎn)和所述C端點(diǎn)之間包括選自下列模式的至少一個(gè)模式由氨基酸半胱氨酸-酪氨酸-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-半胱氨酸形成的模式，其中X₂、X₃、X₄、X₅、X₆是任何氨基酸；以及由氨基酸半胱氨酸-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-半胱氨酸-色氨酸形成的模式，其中X₇、X₈、X₉、X₁₀、X₁₁、X₁₂、X₁₃、X₁₄、X₁₅是任何氨基酸。文檔編號(hào)C07K14/435GK101379079SQ200780004699公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2007年2月9日優(yōu)先權(quán)日2006年2月9日發(fā)明者居·奧爾拉,弗朗索瓦·馬萊,瓦勒如亞·謝納申請(qǐng)人:拜奧默里克斯公司