專利名稱：治療疼痛的方法和組合物的制作方法
治療疼痛的方法和組合物
相關申請
本申請請求2005年12月22日提交的美國臨時申請順序號 US60/753, 665和2006年6月29日提交的美國臨時申請順序號 US60/817， 892的優(yōu)先權利益。將上述申請的說明書各自完整地引入本 文作為參考。
背景
存在各種介導通過細胞膜的離子流的離子通道蛋白。離子通道蛋 白的適當表達和功能是維持細胞功能，胞內通訊等所必需的。許多疾 病是膜電位錯誤調節(jié)或異常鋦處理的結果。由于得知了離子通道在調 節(jié)細胞中膜電位和離子流中的關鍵重要性，所以鑒定可以促進或抑制 特定離子通道的活性劑作為研究工具和可能的治療劑具有重大意義。
一種這類通道為瞬時型感受器電位Al (TRPA1)通道(ANKTM1)。 TRPA1為鉤可透過通道，特別是非選擇性鈞可透過的陽離子通道。除 鈣離子外，TRPA1通道還可透過其它陽離子，例如鈉。因此，TRPAl 通道通過調節(jié)諸如鉤和鈉離子這類陽離子流調節(jié)膜電位。盡管諸如 TRPAl這類非選擇性陽離子通道調節(jié)鋦離子流等，但是它們在機制上 不同于電壓控制鈣通道。 一般而言，電壓控制鉤通道對通過膜的電位
水平或濃度快:i增加:相反，非選擇性陽離子通道一般^信號轉導控
制的，持續(xù)長久的，并且在離子濃度上產生的快速改變較小。這些機 制上的差異伴隨電壓控制和陽離子可透過通道中的結構差異。因此， 盡管許多不同的通道起調節(jié)各種細胞類型中的離子流和膜電位的作用 并且對大量刺激起反應，但是重要的是認識到不同類離子通道中的顯 著結構，功能和機制差異。
因為離子通道錯誤調節(jié)通常與病理學情況相關，所以期望鑒定和
制備可以調節(jié)離子通道，包括TRPA1的一種或多種功能的化合物。這 類化合物具有各種體外和體內應用。
概述
實現(xiàn)細胞動態(tài)平衡的一個重要方面在于維持發(fā)育過程中不同細胞 類型中的適當離子濃度和對大量刺激物的反應。大量不同類型的離子 通道通過使離子通過質膜運動進入和離開細胞和通過細胞內細胞器使 離子運動通過膜起維持細胞動態(tài)平衡的作用所述的細胞內細胞器包 括，例如內質網，肌質網，線粒體和胞吞細胞器，包括內顆粒和溶酶 體。 一種這類離子通道為非選擇性陽離子通道TRPA1。 TRPA1為陽離子 可透過的并且屬于較大家族的TRP離子通道。
已經將TRP通道分類為至少6族TRPC(短)，TRPV(香草素)， T醒(長，melastatin) ， TRPP(多嚢蛋白)，T醒L(mucolipins)和 TRPA(ANKTM1)。可以基于序列同源性和功能相似性將TRPC族分成4 個亞族(TRPC1， TRPC4，5， TRPC3， 6， 7和TRPC2)。目前TRPV家族具有 6個成員。TRPV5和TRPV6比TRPV1, TRPV2， TRPV3或TRPV4更接近 于彼此相關。TRPA1最接近于與TRPV3相關并且比TRPV5和TRPV6更 接近于與TRPV1和TRPV2相關。TRPM家族具有8個成員。組成包括下 列基礎成員T固l (Melastatin或LTRPC1) ， TRPM3 (KIAA1616或 LTRPC3) , TRPM7(TRP-PLIK， ChaK(l), LTRPC7) ， TRPM6 (ChaK2)， TRPM2(TRPC7或LTRPC2)， TRPM8 (Trp-p8或CMR1), TRPM5(Mtrl或 LTRPC5)和TRPM4 (FLJ20041或LTRPC4) 。 TRPA家族的唯一哺乳動物成 員為ANKTM1。TRPML家族由mucolipins組成，包括TRPML1 (mucolipins 1)， TRPML2 (mucolipins 2)和TRPML3 (mucolipin3) 。 TRPP家族由2 族通道組成預測具有6個跨膜結構域的那些和具有11個跨膜結構域 的那些。預測TRPP2(PKD2)， TRPP3(PKD2L1) ， TRPP5 (PKD2L2)均具有 6個跨膜結構域。認為TRPP1 (PKD1， PC1) ， PKD-REJ和PKD-1L1均具 有11個跨膜結構域。
TRP通道構成了涉及調節(jié)細胞動態(tài)平衡的大和重要類型通道。本 發(fā)明提供了調節(jié)至少一種TRP家族成員的方法和組合物。特別地，本 發(fā)明提供了用于拮抗TRPA1功能的方法和組合物。調節(jié)TRPA1功能提 供了調節(jié)細胞中鈣動態(tài)平衡，鈉動態(tài)平衡，細胞內鈣水平，膜極化(靜 息膜電位)和/或陽離子水平的方式?？梢哉{節(jié)一種或多種TRPA1功能 的化合物用于許多方面，包括，但不限于維持4丐動態(tài)平衡；維持鈉動 態(tài)平衡；調節(jié)胞內鈣水平；調節(jié)膜極化(膜電位)；調節(jié)陽離子水平； 和/或治療或預防與釣動態(tài)平衡，鈉動態(tài)平衡，鈣或鈉生理紊亂或膜極 化/超極化(包括低興奮性和超興奮性)相關的疾病，病癥或疾患，和/ 或治療或預防與調節(jié)或錯誤調節(jié)TRPA1表達或功能相關的疾病，病癥 或疾患。另外，本發(fā)明在某些實施方案中提供了拮抗TRPA1功能和一 種或多種另外的TRP通道功能中的方法和組合物。
本申請?zhí)峁┝丝梢哉{節(jié)TRPA1功能的合物。還提供了使用這些化 合物的方法。某些實施方案提供了調節(jié)細胞或動物的TRPA1功能的方 法，包括給予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制 TRPA1-介導的離子流。某些實施方案提供了調節(jié)細胞中TRPA1功能的 方法，包括對該細胞給予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該 化合物抑制TRPA1介導的外向電流。某些實施方案提供了調節(jié)細胞中 TRPA1功能的方法，包括對該細胞給予有效量的抑制TRPA1功能的化 合物，其中該化合物抑制TRPA1介導的內向電流。某些實施方案提供 了調節(jié)細胞中TRPA1功能的方法，包括對該細胞給予有效量的抑制 TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導的內向和外向電 流。某些實施方案還提供了預防或治療與受試者TRPA1功能相關的疾 病或疾患的方法，包括對該受試者給予治療有效量的抑制TRPA1功能 的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導的內向電流。某些實施方案 還提供了預防或治療與受試者TRPA1功能相關的疾病或疾患的方法， 包括對該受試者給予治療有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該 化合物抑制TRPA1介導的外向電流。某些實施方案還提供了預防或治 療與受試者TRPA1功能相關的疾病或疾患的方法，包括對該受試者給
予治療有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1 介導的內向和外向電流。某些實施方案提供了預防或治療與受試者 TRPA1功能相關的疾病或疾患的方法，包括對該受試者給予治療有效 量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導的離子 流。注意抑制特定的電流意旨化合物在體外或體內試驗中抑制該電流 (例如，內向和/或外向)的能力。在體內或體外試驗中抑制特定電流用 作特定化合物的特定功能活性的代表。
下列文章為有關TRPA1結構和功能的本領域技術狀態(tài)中的典型 (Jordt等(20(H) Nature 427: 260-265; Bautista等，(2005) PNAS: 102 (34): 12248-12252)。將上述文章完整地引入作為參考。
本發(fā)明的一個方面涉及治療或預防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，通過給予抑制TRPA1-介導 的電流和/或TRPAl-介導的離子流的TRPA1拮抗劑來進行。下文詳細 描述了 TRPA1拮抗劑，它們具有測定的IO微摩爾或IO微摩爾以下，5 微摩爾或5微摩爾以下，2微摩爾或2微摩爾以下，l微摩爾或l微摩 爾以下，500納摩爾或500納摩爾以下，200納摩爾或200納摩爾以下， 100納摩爾或100納摩爾以下和甚至10納摩爾或10納摩爾以下的 TRPA1的IC5。。在某些實施方案中，TRPA1拮抗劑以1微摩爾，或l微 摩爾以下，更以優(yōu)選500納摩爾或500納摩爾以下，200納摩爾或200 納摩爾以下，100納摩爾或100納摩爾以下，25納摩爾或25納摩爾以 下和甚至IO納摩爾或IO納摩爾以下的IC5。抑制內向和外向TRPAl-介 導的電流之一或兩者。在某些實施方案中，在以5微摩爾或5微摩爾 以下和甚至更優(yōu)選1微摩爾或1微摩爾給藥時，TRPA1拮抗劑抑制至 少95%的TRPAl-介導的電流或TRPAl-介導的離子流。
在某些實施方案中，主題TRPA1拮抗劑以低于其抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1.2， TRPV1，線粒體單向轉運體和hERG通道活性中的一
種或多種的ICs。至少一個數量級且甚至更優(yōu)選低于其兩個乃至三個數
量級的ICs。抑制TRPA1。
在某些實施方案中，主題TRPA1拮抗劑對抑制TRPA1活性的選擇
性是對抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1. 2， TRPV1，線粒體單向轉運體或hERG 通道活性至少10， 20, 30, 40或50倍。換句話說，該拮抗劑抑制TRPA1 活性(TRPA1中一種或多種功能)的功效是上述通道中的一種或多種 10， 20， 30， 40或50倍。
在某些實施方案中，主題TRPA1拮抗劑以比其對AMPA受體的Ki 更有效至少一個數量級的ICs。抑制TRPA1。在某些實施方案中，主題 TRPA1拮抗劑以比其對AMPA受體的Ki更有效至少兩個數量級或乃至 三個數量級或四個數量級的ICs。抑制TRPA1。在某些實施方案中，主 題TRPA1拮抗劑并非明顯地結合AMPA受體。換句話說，主題拮抗劑以 特定的ICs。抑制TRPA1，并且在以該濃度給藥時，該拮抗劑并非明顯 地結合AMPA受體(例如，特異性和明顯地結合AMPA受體)。在某些實 施方案中，本發(fā)明的化合物以比其對AMPA受體的Ki更有效的ICsq抑 制TRPAl-介導的電流。在這類實施方案中，主題TRPA1抑制劑減輕疼 痛的能力由此不依賴于結合和調節(jié)涉及接受神經性疼痛的(a-氨基 -3-羥基-5-甲基-4-異喁唑丙酸(AMPA)受體。
在某些實施方案中，TRPA1拮抗劑以低于其抑制TRPV1的ICs。至 少一個數量級的，甚至更優(yōu)選兩個或乃至低于其三個數量級的ICs。抑 制TRPA1。在某些實施方案中，基于具有大于IO微摩爾的TRPV1抑制 的ICs。選擇對TRPA1比對TRPV1具有選擇性的主題TRPA1拮抗劑。
在某些實施方案中，TRPA1拮抗劑以IO微摩爾或IO微摩爾以下 的ICs。抑制TRPV2， TRPV4， TRPV3和/或TRPM8中的一種或多種。
在某些實施方案中，TRPA1拮抗劑具有的使用所述化合物治療所 述疾患的治療指數(T. I.)為10或IO以上且甚至更優(yōu)選具有的T. I.至 少為25， 50或乃至100。
在優(yōu)選的實施方案中，TRPA1抑制劑具有TRPA1抑制的IC5。，在該 濃度下，它不會導致患者的QT間隔延長，也不會改變患者的溫度調節(jié)。
在某些實施方案中，TRPA1抑制劑用于治療或改善疼痛。可以使 用TRPA1抑制劑治療的典型類型的疼痛包括，但不限于傷害性疼痛， 炎性疼痛和神經性疼痛?？梢杂肨RPA1抑制劑治療的疼痛可以為慢性
或急性的。
在某些實施方案中，TRPA1抑制劑用于治療或改善失禁癥狀。
在某些實施方案中，TRPA1抑制劑為非鎮(zhèn)靜劑且?guī)缀鯖]有或無鎮(zhèn) 靜副作用。在某些其它實施方案中，TRPA1抑制劑可以以少于鎮(zhèn)靜疼 痛緩解劑的副作用用于治療或改善疼痛。在TRPV3抑制劑的有效劑量 下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，腸能動性 破壞和身體非損傷區(qū)域中的感覺抑制中的一種或多種。
在某些實施方案中，用于治療本文披露的疾病或適應征中的任意 種的TRPAl抑制劑具有本文披露的結構或功能特征中的 一種或多種。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化的 疾患或降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有 效量的式I的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合 物，氧化代謝物或前體藥物
其中
W表示0或S，優(yōu)選S;
R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;
r表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式II的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
<formula>formula see original document page 29</formula>
其中n為1 - 3的整數；且 Rz表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
1
在某些實施方案中，當n-l時，R2不為 <formula>formula see original document page 29</formula>在 某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的式III 的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧化代 謝物或前體藥物<formula>formula see original document page 29</formula>其中
n為1-3的整數；且 R2表示取代基；且 其中所述的化合物以10微> TRPA1。
爾或10微摩爾以下的ICs。抑制
在某些實施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基，
任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
其中
l每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞甲基(例如用低級 烷基，氧代，羥基等取代)，
NR:， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子 是彼此連接的；且
m為0-10的整數；且
其中所述的化合物以IO微摩爾或其以下的ICs。抑制TRPAl介導的 電流。
在某些實施方案中，NUl3表示 x ，其中n為0-4的整 數；且
X為-C(-O)O-或-C(=0)NR4-，其中R4為H或低級烷基，優(yōu)選 -C (=0)NH-。
本發(fā)明的一個方面提供了適用于人類患者或獸類應用的藥物制 劑，其包含有效量的如上所示化合物中的任意種(例如式I，式II,式
in或式iv的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合
物，氧化代謝物或前體藥物)和一種或多種藥學上可接受的賦形劑。在
某些實施方案中，該藥物制劑可以用于治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患。在某些實施方案中，該藥 物制劑具有適用于人類患者或獸類應用的足夠低的熱原活性。在某些 實施方案中，該藥物制劑包含有效量的如上所示化合物中的任意種， 其中該化合物以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1 (例如， TRPAl-介導的電流和/或TRPAl-介導的離子流)。在某些實施方案中， 該化合物以5微摩爾或5微摩爾以下，2微摩爾或2微摩爾以下，1 微摩爾或1微摩爾以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM 或250 nM以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以 下的ICs。抑制TRPA1。
在某些實施方案中，用于本發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑 選自表1-2中所示的化合物。在某些實施方案中，本發(fā)明關注表l-2 中所示任意化合物在本發(fā)明的任何方法或藥物制劑中的應用。
本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用作預防或治療各種病癥和疾患的組 成部分，所示的病癥和疾患包括，但不限于急性和/或慢性痛，觸摸敏 感性，灼傷，炎癥，糖尿病性神經病，銀屑病，濕疹，皮炎，皰疹后 神經痛(帶狀皰滲)，偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關節(jié)炎，口腔 粘膜炎，癌性痛，膀胱炎，與克羅恩病和腸易激綜合征(IBS)相關的疼 痛，類風濕性關節(jié)炎，格-巴綜合征(更熟知為灼熱足綜合征)，口灼傷 綜合征(BMS)和咳嗽；或本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用作促進或抑制患 者毛發(fā)生長的脫毛藥?？梢允褂帽景l(fā)明TRPA1拮抗劑治療的其它典型 疾病或疾患在本說明書中詳細描述。本發(fā)明關注具有本說明書中提供 的任何結構的化合物在治療或減輕本申請中披露的疾病或疾患的癥狀 中的應用。本發(fā)明進一步關注具有本說明書中提供的任何結構的化合 物在制備治療或減輕本說明書中提供的任何疾病或疾患癥狀的藥劑或 藥物制劑中的應用?？梢詫⒂糜谥委熖囟膊』蚣不嫉幕衔锱渲瞥?可通過適合于特定疾病或疾患的途經給藥。
可以單獨或與其它治療劑一起給予TRPA1拮抗劑。例如，將TRPA1
拮抗劑與抗炎藥，抗痤瘡藥，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗牛皮癬藥， 抗增殖藥，抗真菌藥，抗病毒藥，殺菌劑，抗偏頭痛藥，角質層分離 劑或毛發(fā)生長抑制劑中的 一種或多種共同給藥。
可以通過局部，口服，透皮，直腸，陰道，非腸道，鼻內，目艮內，
靜脈內，肌內，動脈內，鞘內，嚢內，B匡內，心內，皮內，腹膜內， 經氣管，皮下，表皮下，關節(jié)內，嚢下，蛛網膜下，脊柱內，胸骨內 或通過吸入給予TRPA1拮抗劑。
在某些優(yōu)選的實施方案中，通過局部給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實施方案中，通過口服給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實施方案中，通過非腸道給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解急性痛，慢性痛，觸摸敏感性，瘙癢敏感性的體征和癥狀或作為 治療灼傷，諸如，例如術后痛，癌性痛或神經性疼痛的組成部分。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解偏頭痛的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解病癥或疾患的體征和癥狀，所示的病癥或疾患選自糖尿病性神經 病，炎癥，銀屑病，濕滲，皮炎，皰疹后神經痛(帶狀皰疹)，失禁， 尿失禁，發(fā)熱，熱潮紅，胰腺炎，慢性區(qū)域性疼痛綜合征，法布里 (Fabray，s)病和咳嗽。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解骨關節(jié)炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解類風濕性關節(jié)炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預防，治療或 緩解口腔粘膜炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便促進患者毛發(fā) 生長的缺失或抑制。
本發(fā)明的另一個方面涉及TRPA1拮抗劑，例如，以l微摩爾或l
微摩爾以下的I C5。抑制內向TRP Al -介導的電流的小分子活性劑在制備 預防，治療或緩解患者的涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕 其嚴重性的疾病，病癥或疾患癥狀的藥劑中的應用。
本發(fā)明在另一個方面中涉及藥物制劑，其包含以1微摩爾或1微 摩爾以下的I C5。抑制內向TRP A1 -介導的電流的活性劑和藥學上可接受
的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預防，治療或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾病，病癥或疾患癥狀的 用量的劑型提供該活性劑。在某些優(yōu)選的實施方案中，該藥物制劑不 會導致患者QT間隔延長。
在某些例證性實施方案中，所述的藥物制劑包含以其低于其抑制 NaV 1.2功能，TRPV1功能，TRPV5功能，TRPV6功能，線粒體單向轉 運體功能和HERG功能的ICs。至少一個數量級的ICs。抑制TRPA1-介導 的電流的活性劑和藥學上可接受的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預 防，治療或緩解患者涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴 重性的疾病，病癥或疾患癥狀的用量的劑型提供該活性劑，但不會導 致患者QT間隔延長。
在另一個例證性實施方案中，所述的藥物制劑包含以l微摩爾或 l微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1-介導的電流的活性劑和藥學上可接受 的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預防，治療或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾病，病癥或疾患癥狀的 用量的劑型提供該活性劑，該藥物制劑不會導致患者QT間隔延長。
一種優(yōu)選的制劑為用于降低皮膚或粘膜中TRPA1活性的局部用制 劑，它包含以l微摩爾或l微摩爾以下的ICs。抑制TRPAl-介導的電流 的活性劑。
另一種優(yōu)選的制劑為可除去的貼劑或繃帶，其包含(i)聚合物 基質；和(ii)以1微摩爾或1微摩爾以下的IC5。抑制TRPAl-介導的 電流的活性劑。
另一種例證性制劑為用于局部施用于動物受試者的皮膚剝脫組合 物，其包含局部用載體； 一種或多種皮膚剝脫組分，它們選自羧酸，
酮基酸，oc-羥基酸，p-羥基酸，維生素a酸類，過氧化物和有機醇類， 所述的一種或多種皮膚剝脫組分以至少約12%重量的總量包含并且能 夠對所述受試者誘導皮膚刺激和進行皮膚剝脫；和以1微摩爾或1微 摩爾以下的ICs。抑制TRPA1-介導的電流的活性劑，在施用于皮膚時以 有效止痛，抗刺激和/或抗炎作用的用量提供該活性劑。
另一個實施方案為用于口服給藥的鎮(zhèn)咳組合物，其包含以l微摩 爾或l微摩爾以下的ICs。抑制兩種TRPAl-介導的電流的活性劑和口服 可接受的基于水的液體或可溶于嘴中的固體形式的藥用載體，該組合 物選自糖漿劑，酏劑，混懸液，噴霧劑，錠劑，咀嚼錠劑，粉末和咀 嚼片。這類鎮(zhèn)咳組合物可以包括一種或多種另外的用于治療咳嗽，過 敏反應或哮喘癥狀的活性劑，它們選自抗組胺藥，5-脂氧合酶抑制 劑，白細胞三烯抑制劑，H3抑制劑，臺-腎上腺素能受體激動劑，黃嘌 呤衍生物，a-腎上腺素能受體激動劑，肥大細胞穩(wěn)定劑，祛痰藥，NK1， NK2和NK3速激肽受體拮抗劑和GABAB激動劑。
另一個實施方案為可計量劑量的氣溶膠配藥器，包括用于肺部或 鼻部遞送的氣溶膠藥物組合物，該組合物包含以l微摩爾或其以下的 ICs。抑制TRPA1介導的電流的活性劑。例如，它可以為計量劑量的吸 入器，干粉吸入器或空氣噴射噴霧器。
另一個實施方案為用于眼部給藥的眼用軟骨或滴眼液。這類眼用 組合物可以用于治療或緩解眼部疼痛，包括因眼部磨損或術后痛多種 的眼部疼痛。
本發(fā)明在另 一個方面中關注本發(fā)明的任何TRPA1抑制劑，包括具 有本文披露特征中的一種或多種的抑制劑可以用于抑制TRPA1功能， 例如TRPAl-介導的電流和/或TRPA1-介導的離子流。在某些實施方案 中，所述的化合物可以用于在體外，例如在培養(yǎng)細胞中抑制TRPA1介 導的電流。在某些實施方案中，所述的化合物可以用于在體內抑制 TRPA1介導的電流。在某些實施方案中，所述的化合物內向和外向 TRPAl-介導的電流。在某些實施方案中，所述的化合物在體外，例如 在培養(yǎng)細胞中抑制TRPA1介導的離子流。在某些實施方案中，所述的
化合物在體內抑制TRPA1介導的流量。
本發(fā)明關注具有上述或下述特征的任意組合和本文所述TRPA1拮 抗劑的結構或功能特征的任意組合的TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應 用。任何這類拮抗劑或制劑可以用于治療本文所述的任何疾病或疾患。 任何這類拮抗劑或制劑可以用于抑制TRPA1功能，例如TRPAl-介導的 電流和/或TRPAl-介導的離子流。
附圖詳細描述
圖la和lb概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕緩激肽疼痛模型中的 疼痛癥狀中的功效的實驗。
圖2概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕福爾馬林疼痛模型中的疼痛 中的功效的實驗。
圖3a和3b概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕角叉菜膠誘導的炎癥 中的功效的實驗。
圖4概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕CFA疼痛模型中的疼痛中的 功效的實驗。圖4中所示的結果還表明TRPA1拮抗劑的作用對受損的 爪而言是特異性的。
表的詳細描述
表1提供了具有作為在膜片箝實驗中評價的體外活性的典型式I 化合物。該表還包括表示各種測試化合物抑制TRPA1活性與其它離子 通道活性的比較的特異性的數據。在膜片箝中評價了對其它離子通道 的對比數據。
表2提供了具有作為在膜片箝實驗中評價的體外活性的典型式H 化合物。該表還包括表示各種測試化合物抑制TRPA1活性與其它離子 通道活性的比較的特異性的數據。在膜片箝中評價了對其它離子通道 的對比數據。表現(xiàn)為以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介導的電流的化 合物中的至少兩種以低于200 nM的ICs。抑制TRPA1介導的電流。表現(xiàn) 為以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介導的電流的化合物中的至少一種
以低于100 nM的ICs。抑制TRPA1介導的電流。 發(fā)明詳述
細胞動態(tài)平衡是涉及離子流和膜電位調節(jié)等的調節(jié)系統(tǒng)的總和結 果。細胞動態(tài)平衡至少部分因離子通過質膜進入和離開細胞和通過胞 內細胞器膜在細胞內運動而實現(xiàn)，所述的胞內細胞器包括，例如內質 網，肌質網，線粒體和胞吞細胞器，包括內顆粒和溶酶體。
離子通過細胞膜的運動通過專門的蛋白質來進行。TRP通道為起
有助于調節(jié)離子流和膜電位功能的一大族非選擇性陽離子通道。將 TRP通道亞分成6個亞族，包括TRPA(ANKTM1)家族。TRPA1為TRP通 道的TRPA類中的成員。
非選擇性陽離子通道，諸如TRPA1調節(jié)通過細胞膜的鈣和鈉離子。 鈉和鉤流入導致細胞去極化。這增加了電壓控制的離子通道達到活化 所需閾值的可能性。作為結果，非選擇性陽離子通道活化可以增加電 興奮性和增加電壓依賴性事件的頻率。電壓依賴性事件包括，但不限 于神經元動作電位，心臟動作電位，平滑肌收縮，心肌收縮和骨駱肌 收縮。
非選擇性陽離子通道，諸如TRPA1活化導致的鈣流入還政變了胞 內游離4丐濃度。釣為細胞內遍在的第二信使分子。因此，胞內鈣水平 的改變對信號轉導和基因表達具有顯著作用。因此，非選擇性陽離子 通道，諸如TRPA1活化導致基因表達和細胞表型改變。基因表達事件 包括，但不限于編碼細胞表面受體，離子通道和激酶的mRNAs產生。 這些基因表達的改變可以在該細胞中產生超興奮性。TRPA1阻滯劑由 此還具有減輕或預防疼痛和/或減少膀胱活動過度的潛能。
TRPA1蛋白質為受體操作的在感覺神經元中表達的通道(例如，參 見Jordt等(2004) Nature 427: 260-265)，包括因存在于背根神經節(jié)， 三叉神經節(jié)和結節(jié)性神經節(jié)中的細胞體產生的那些(參見Jordt等 (2004) Nature 427: 260-265， Nagata等(2005) J. Neurosci 25(16) 4052-61)。此外，低水平的TRPA1信息可以在某些類型的成纖維細胞
中找到(參見Jaquemar等(1999) JBC 274 (11): 7325-33)。還報導了 TRPA1在膀胱中表達。刺激大量胞外受體，包括，但不限于G-蛋白偶 聯(lián)受體或受體酪氨酸激酶足以活化TRPA1。
適用于本文提供的方法的TRPA1蛋白質包括，例如人(分別由 SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 4核苷酸序列編碼的SEQ ID NO: 1和 SEQ ID NO: 3氨基酸序列)和鼠(由SEQ ID NO: 6核苷酸序列編碼的 SEQ ID NO: 5氨基酸序列)。特定的TRPAl蛋白質還包括由可以在嚴 格條件下與TRPAl序列(參見SEQ ID NO: 2)雜交的cDMs編碼的蛋白 質。
TRPAl為對芥子油起響應的離子通道。芥子油中的活性組分(異硫 氰酸烯丙酯)和大蒜中的活性組分(大蒜素)均能夠活化TRPAl。其它刺 激物也能夠活化TRPA1。據報導4 - 15 'C的嚴寒溫度活化TRPAl (參見 Story等,(2003) Cell 112 (6): 819-829)。然而，這一發(fā)現(xiàn)有爭論(參 見Jordt等(2004) Nature 427: 260-265; Nagata等(2005) J. Neurosci 25 (16): 4052-61)。此外，在對機械性刺激響應的低等動物中TRPAl 與TRP通道(即TRPN1，果蠅屬(Drosophila) TRPAl)共有許多結構相 似性。
TRPAl在內耳的毛細胞上皮等組織中表達，并且斑馬魚和小鼠中 這種通道的破壞抑制毛細胞轉導。因此，在本領域中提出了 TRPAl作 為用于機械敏感性脊推動物聽覺轉導通道的候選物(參見Corey等， (2004) Nature 432 (7018): 723-730)。如果這屬實，那么可以提示 TRPAl阻滯劑可以導致聽力損失且由此不具有任何作為治療劑的實際 應用。然而，驚恐反應在TRPAl基因敲除小鼠中基本上未受損的觀察 結果使得我們得出結論TRPAl拮抗劑不會損傷聽覺且由此可以成為 合適的藥物候選物。
調節(jié)TRPAl蛋白質功能提供了調節(jié)該動態(tài)平衡，鈉動態(tài)平衡，膜 極化和/或胞內鈣水平的方式，并且可以調節(jié)TRPAl功能的化合物在許 多方面是有用的，包括，但不限于維持鈣動態(tài)平衡，調節(jié)胞內鈣水平， 調節(jié)膜極化和治療或預防與鈣和/或鈉動態(tài)平衡或生理紊亂相關的疾
病，病癥或疾患。
在某些方面中，本發(fā)明提供了使用以低于IO微摩爾的ICs。抑制 TRPA1 -介導的電流和/或TRPA1 -介導的離子流的小分子治療或改善疾 病和疾患的作用的方法。典型的合適的用于本發(fā)明任何方法的化合物 (例如，治療本文披露的任何疾病或疾患)包括具有本文公開的結構或 功能特征中的一種或多種(例如，結構，特異性，功效，溶解性等)的 化合物。本發(fā)明關注具有本文所述功能或結構屬性中的一種或多種的 任何TRPA1拮抗劑的應用。另外，本發(fā)明關注式I， II， III或IV的 TRPA1拮抗劑的應用和表1和2中提供的任何特定拮抗劑的應用。在 本申請的上下文中，如果特定的功能屬性歸因于TRPA1拮抗劑，那么 可以理解這類屬性可以表征在結構上與式I， II， III或IV的化合物 相關或與之不同的TRPA1抑制劑。
在某些實施方案中，合適的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制內 向和/或外向TRPA1介導的電流。在某些實施方案中，合適的化合物另 外地或可選擇地以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的離子流。例 如，可以在體外試驗中計算IC5。。例如，可以一使用對電流的電生理學 測定，諸如標準膜片箝分析計算IC5。。還可以采用離子指示劑濃度或 流量的改變，諸如本文所述的鉤流量法評價IC5。。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式I的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
<formula>formula see original document page 38</formula>(I)
其中
W表示0或S，優(yōu)選S;
R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;
R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C(hH)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
上述式中的化合物的實例包括<formula>formula see original document page 39</formula>
式I中化合物的另外實例如表1與其相應的體外數據中所示。 在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式II的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物<formula>formula see original document page 39</formula>
其中n為1 - 3的整數；且 l表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實施方案中，當11=1時，R2不為
在某些實施方案中，式II的化合物對其TRPA1活性的選擇性是對 其激肽原酶抑制活性10倍。
式II化合物的實例包括，但不限于化合物200-204， 206-243， 245-255， 257—282， 284-287， 289-290， 294-295， 298， 304-306, 308-310， 312-313， 316-317, 319, 321, 323, 325-326， 330， 332-333， 335， 337-341， 343-386， 389-390， 395-398和400-409，正如表2 與其體外數據中所示。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式III的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物， 氧化代謝物或前體藥物
其中
n為1 - 3的整數；且 R2表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的方法，包括給予有效量的
式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
其中
Ri每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基；
R2的一次出現(xiàn)為不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;
R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞曱基(例如用低級 烷基，氧代，羥基等取代)，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進行選擇， 以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且
m為0-10的整數；且
其中所述的化合物以IO微摩爾或其以下的ICs。抑制TRPA1。 在某些實施方案中，NU3表示、x ，其中n為0-4的整數；
且
X為-C(-0)0-或-C(-O)NR廣，其中R4為H或低級烷基，優(yōu)選 -C (=0)NH-。
在某些實施方案中，式IV的化合物對其TRPA1活性的選擇性是對 其激肽原酶抑制活性10-倍。
式IV化合物的實例包括，但不限于化合物200-202， 204， 207-210， 212-215, 217， 219-224, 226-229， 231， 236-238， 240， 245-254， 256-268， 273, 275-277， 280-286， 288， 290-306， 309-311, 313-316， 318-320， 322， 324-331， 333-334， 336-338， 342, 344-347， 350-351， 353-355， 358- 366， 371， 373-375， 377, 379-380和383-409，正 如表2與其體外數據中所示。
本發(fā)明的一個方面提供了適用于人類患者或獸類應用的藥物制 劑，其包含有效量的如上所示化合物中的任意種(例如式I，式II，式
III或式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合
物，氧化代謝物或前體藥物)和一種或多種藥學上可接受的賦形劑。在
某些實施方案中，該藥物制劑可以用于治療或預防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患。在某些實施方案中，該藥 物制劑具有適用于人類患者或獸類應用的足夠低的熱原活性。在某些 實施方案中，該藥物制劑包含有效量的如上所示化合物中的任意種， 其中該化合物以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1。在某 些實施方案中，所述的藥物制劑包含該化合物，其以l微摩爾或l微 摩爾以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM或250 nM 以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以下的IC50 抑制TRPA1。
在某些實施方案中，用于本發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑 選自表1-2中所示的化合物。在某些實施方案中，本發(fā)明關注表1-2 中所示任意化合物在本發(fā)明的任何方法或藥物制劑中的應用。
本發(fā)明的一個方面提供了 TRPA1抑制劑在制備治療或預防涉及 TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴重性的疾患的藥劑中的應 用，其中所述的TRPA1抑制劑由如上所示的任意化合物表示(例如式I, 式II，式III或式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑 合物，水合物，氧化代謝物或前體藥物)。在某些實施方案中，所述的 化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
在上述式的某些實施方案中，取代的取代基可以被如下基團中的 一個或多個取代烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳基，雜 芳基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)基烷基，芳烷基或雜芳烷基，它們中任一自 身可以進一步被取代，或卣素，羥基，羰基(例如，酯，羧基或曱酰基)， 硫羰基(例如，硫酯，硫代羧酸酯或硫代甲酸酯)，酮，醛，氨基，酰 基氨基，酰氨基，脒基，氰基，硝基，疊氮基，磺?；瑏嗧炕?，硫 酸酯，磺酸酯，氨磺酰基，磺酰氨基和磷酰基。
表1和2中提供了典型化合物。表1中概括了對各種測試化合物 釆集的數據。表1提供了抑制TRPA1介導的電流的ICs。數據。表1還
提供了選擇性數據，如果可利用，那么表明某些化合物還抑制其它離 子通道的程度。另外，注意到表1中表示的化合物具有不同程度的抑
制TRPA1的選擇性。表2提供了抑制TRPA1介導的電流的ICs。數據。 表2還提供了選擇性數據，如果可利用，那么表明某些化合物還抑制 其它離子通道的程度。注意到表2中表示的化合物中以500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導的電流的至少兩種以200 nM或200 nM 以下的IC5。抑制TRPA1介導的電流。此外，表2中表示的化合物中以 500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導的電流的至少一種以100 nM或100 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導的電流。另外，注意到表2 中表示的化合物對抑制TRPA1具有不同程度的選擇性。
在某些實施方案中，本發(fā)明關注可以給予表1或2中所示的具體 化合物以便治療本文披露的任何疾病或疾患。在某些實施方案中，在 給藥前將所述的化合物配制成藥物制劑。在某些實施方案中，用于本 發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑選自表1或2中所示的化合物。 在某些實施方案中，本發(fā)明關注如表1或2中所示的任意化合物在本 發(fā)明方法或藥物制劑中的應用。
本文披露的具體化合物和結構式僅為典型的。類似地關注具有本 文所述功能或結構特征中的一種或多種的小分子TRPA1抑制劑的應 用。
上述任何結構的化合物可以用于制備治療本文披露的任何疾病的 藥劑。
上述任何結構的化合物可以用于體外或體內抑制TRPA1通道功能。
在某些實施方案中，包括任何上述結構的所用或功能部分的化合 物可以用于制備治療本文披露的任何疾病的藥劑。另外或可選擇地， 這類化合物可以在體外或體內用于抑制TRPA1功能，諸如TRPAl-介導 的電5危的方法。
在某些實施方案中，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮抗劑為并非氨基 糖甙的小分子。
在具體的實施方案中，為應用選擇小分子TRPA1拮抗劑，因為它 對一種TRP同種型比對另一種更具有選擇性，例如，對TRPA1的選擇 性是對TRPC6, TRPV5, TRPV6， TRPM8， TRPV1, TRPV2， TRPV4和/或 TRPV3中的一種或多種IO倍且更優(yōu)選至少20， 40， 50， 60, 70， 80 或至少100或乃至1000倍。在其它實施方案中，例如，差別越小，則 它抑制TRPA1比抑制TRPM8， TRPV1， TRPV2， TRPV3和/或TRPV4更強 烈，優(yōu)選更強烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。例如，可以通過 比較I"值進行這類比較。
在具體的實施方案中，為應用選擇小分子TRPA1拮抗劑，因為它 對一種TRPA1同種型比對其它非TRP離子通道更具有選擇性，例如， 對TRPA1的選擇性是對NaVl. 2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG和/或線粒體 單向轉運體中的一種或多種IO倍且更優(yōu)選至少20， 40， 50, 60， 70， 80或至少IOO或乃至IOOO倍。在其它實施方案中，例如，差別越小， 則它抑制TRPA1比抑制NaVl. 2， Cavl.2， Cav3.1， HERG和/或線粒體 單向轉運體更強烈，優(yōu)選更強烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。 例如，可以通過比較ICs。值進行這類比較。
在某些實施方案中，選擇TRPA1拮抗劑的化合物，以便對TRPA1 的選擇性拮抗超過其它離子通道，例如，該化合物對TRPA1活性的調 節(jié)比它對NaV1.2， Cavl.2, Cav3. 1， HERG和/或線粒體單向轉運體中 的一種或多種活性的調節(jié)更強烈至少一個數量級，優(yōu)選更強烈至少兩 個數量級，甚至更優(yōu)選更強烈至少三個數量級。在某些實施方案中， 該化合物對TRPA1活性的調節(jié)比它對NaV1.2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG 或線粒體單向轉運體中的一種或多種活性的調節(jié)更強烈至少1.5個數 據級。例如，可以通過比較IC5。值進行這類比較。
類似地，在具體的實施方案中，為應用選擇小分子，因為它缺乏 對一種或多種非TRPA1的靶標的顯著活性。例如，該化合物可以具有 高于500 nM，高于1 pM或乃至高于10 (iM或100 ^tM的抑制TRPC6， TRPV5, TRPV6， Cavl. 2, Cav3. 1， NaVl. 2， HERG和線粒體單向轉運體 中的一種或多種的IC5。。
在具體的實施方案中，為應用選擇小分子，因為它對一種TRP同 種型比對其它更具有選擇性，例如，對TRPAl的選擇性是對TRPC6， TRPV5， TRPV6, TRPM8， TRPV1， HERG， NaVl. 2，線粒體單向轉運體， TRPV3和/或TRPV4中的一種或多種的10倍且更優(yōu)選至少100或乃至 IOOO倍。在其它實施方案中，例如，差別越小，則它抑制TRPA1比抑 制TRPM8, TRPV1和/或TRPV4更強烈，優(yōu)選更強烈至少2倍，3倍，5 倍或乃至10倍。例如，可以通過比較ICs。值進行這類比較。
在某些實施方案中，為應用選擇小分子，因為它拮抗TRPA1和 TRPM8， TRPH和/或TRPV3的功能。盡管這類化合物選擇性拮抗兩種 離子通道功能，但是IC5。值不需要相同。
在任意上述的某些實施方案中，可以選擇小分子，因為它能夠抑 制受體介導的(或冷/應激介導的)TRPA1活化。在某些實施方案中， TRPA1拮抗劑抑制受體介導的TRPA1活化和芥子油誘導的TRPA1活化。 在某些其它實施方案中，TRPA1拮抗劑抑制受體操縱的TRPA1活化， 但不會抑制芥子油誘導的TRPA1活化。在某些實施方案中，TRPA1拮 抗劑抑制芥子油誘導的TRPA1活化，但不會抑制冷介導的TRPA1活化。
在上述任意的某些實施方案中，可以選擇小分子，因為它以小于 或等于1 |iM，或乃至小于或等于700, 600， 500, 400, 300， 250， 200或100 nM的ICs。抑制TRPA1功能。在其它實施方案中，選擇小分 子，因為它以小于或等于75 nM，小于或等于50nM，或乃至小于或等 于25， 10， 5或lnM的ICs。抑制TRPA1功能。在上述任意的某些其它 實施方案中，所述的小分子以小于或等于IO微摩爾，或小于或等于5 微摩爾，或小于或等于2. 5微摩爾，或小于或等于1.5微摩爾的ICs。 抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些實施方案中，可以基于抑制TRPA1功能的速率 選擇化合物小分子。在一個實施方案中，化合物在少于5分鐘，優(yōu)選 少于4, 3或2分鐘內抑制TRPA1功能。在另一個實施方案中，化合物 在少于約1分鐘內抑制TRPA1功能。在另一個實施方案中，化合物少 于約30秒內抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些實施方案中，TRPA1功能的小分子拮抗劑可以 抑制外向電流，內向電流或這些電流中的一種或多種的任意的組合。 抑制上述電流中的一種以上的化合物可以以具有相同或不同ICs。值進 行。在任意上述實施方案中，可以在體外或體內評價化合物抑制特定 電流的能力?？梢詫⒃隗w外或體內試驗中抑制任意上述電流的化合物 表征為抑制TRPA1功能的化合物。所述的另一種方式，可以用本發(fā)明 化合物抑制的TRPA1的典型功能為TRPAl-介導的電流。另外或可選擇 地，可以用本發(fā)明化合物抑制的TRPA1功能為TRPA1介導的離子流。
在任意上述或下列實施方案中，小分子的特征在于與其它離子通 道相比的某些活性水平(例如，某些化合物對抑制TRPA1的選擇性且其 它化合物表現(xiàn)出對一種或多種其它離子特定的交叉反應性水平)。當小 分子的特征在于其對另一種離子通道的活性時，按照與定義TRPA1通 道功能類似的方式定義另一離子通道的功能或活性。因此，抑制另一 種離子通道的功能意旨，例如抑制另 一 離子通道介導的離子流或抑制 另一離子通道介導的電流。
在任意上述的某些實施方案中，抑制TRPA1功能意旨一種功能， 例如TRPA1介導的電流在存在有效量的化合物存在下比不存在該化合 物或比無效量化合物存在下下降50%以上。在某些其它實施方案中， 抑制TRPA1功能意旨一種功能，例如TRPA1介導的電流或TRPA1介導 的離子流在存在有效量的化合物存在下比不存在該化合物下下降至少 50%, 60%, 70%， 75%, 80%， 85%或90%。在其它實施方案中，抑制TRPA1 功能意旨一種功能，例如TRPA1介導的電流在存在有效量的化合物存 在下比不存在該化合物下下降至少92°/。， 95°/。， 97°/。， 98%, 99°/。或100%。
在任意上述的某些實施方案中，使用例如，膜片箝分析或標準釣 流量測定在體外測定ICs。值。用于基于鉤流量的ICs。估計的典型體外 方法描述在實施例1。用于獲得更確定ICs。測量值的描述在實施例2 中?？蛇x擇地，還可以計算電流或離子流的抑制％估計值并且用于評價 化合物作為抑制劑的功效。
不受理論約束，化合物可以通過共價結合或非共價結合到TRPA1
的部分上抑制TRPA1功能。可選擇地，化合物可以例如，通過結合TRPAl 功能所必需的蛋白質或非蛋白質輔因子間接抑制TRPA1功能。本領域 技術人員易于理解抑制性化合物可以可逆或不可逆地結合TRPAl或其 輔因子。可逆結合TRPAl或其輔因子的化合物甚至可以在解離后持續(xù) 抑制TRPAl功能。
在任意上述的某些實施方案中，抑制TRPAl功能的化合物為小有 機分子或小無分子。典型的小分子包括，但不限于結合TRPAl通道和 抑制TRPAl通道的一種或多種功能的小分子。
在任意上述的某些實施方案中，TRPAl抑制劑用于治療或改善疼 痛。可以使用TRPAl抑制劑治療的典型疼痛類型包括，但不限于傷害 性疼痛，炎性疼痛和神經性疼痛?？梢允褂肨RPAl抑制劑治療的疼痛 可以為慢性或急性的。在本說明書的上下文中，詳細討論了特征至少 部分在于疼痛的各種疾患和疾病。本發(fā)明關注可以使用本文所述的任 何TRPAl抑制劑治療與任意這些疾病或疾患相關的疼痛?？梢詫⒃撘?制劑配制成適合于指定給藥途徑的藥物制劑。
在某些實施方案中，TRPAl抑制劑為非麻醉藥并且?guī)缀鯖]有或無 麻醉副作用。在某些其它實施方案中，TRPAl抑制劑可以用于以低于 麻醉性疼痛緩解劑的副作用治療或改善疼痛。在TRPAl抑制劑有效劑 量下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，腸能動 性破壞和身體非損傷區(qū)域中的感覺抑制中的一種或多種。
在某些實施方案中，TRPAl抑制劑可以用于治療失禁。在某些實 施方案中，TRPAl抑制劑用于通過降低神經支配膀胱的神經元活性而 減少膀胱活動過度。在某些實施方案中，失禁伴隨疼痛。例如，附帶 膀胱炎的失禁或附帶損傷的失禁可能伴隨疼痛。當失禁伴隨疼痛時， 可以給予TRPAl抑制劑治療失禁并且減輕疼痛。
可以單獨使用或與其它藥物活性劑聯(lián)用主題TRPAl抑制劑。這類 其它藥物活性劑的實例包括，但不限于抗炎藥(例如，NSAIDS，緩激肽 受體拮抗劑，激素和自體有效物質，諸如皮質類固醇)，抗痤瘡藥(例 如維生素a酸類)，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗失禁藥(諸如Ml-受 體拮抗劑)，止吐藥(諸如NK1拮抗劑)，抗牛皮癬藥，抗酸藥，抗增殖 藥(例如，抗?jié)駶B藥，抗癌藥)，抗真菌藥，抗病毒藥，防腐劑(例如抗 菌藥)，局部麻醉藥，抗偏頭痛藥，角質層分離劑，毛發(fā)生長刺激劑， 毛發(fā)生長抑制劑和用于治療皮膚疾病或疾患的其它活性劑。某些活性 劑屬于一種以上類型。
就任意上述實施方案而言，可以為通過適合于所治療疾病或損傷 的途經配制TRPA1抑制劑。例如，可以將TRPA1抑制劑配制成，例如， 口服透皮，局部，腹膜內，靜脈內，血管內，鞘內，心包內，心肌內， 皮下，直腸，陰道或尿道遞送。此外，可以為通過裝置遞送配制TRPA1 抑制劑。典型裝置包括，但不限于導管，金屬絲，支架或其它管腔內 裝置。其它典型遞送裝置還包括貼劑，繃帶，護口器或牙具。
本發(fā)明關注任意上述TRPA1抑制劑的藥物組合物。用藥學上可接 受的載體配制典型藥物組合物。
主題TRPA1抑制劑可以單獨^使用或作為治療方案的組成部分與適 合于所治療特定疾病，疾患，損傷或病癥的其它治療，療法或干預聯(lián) 用。當作為治療方案的組成部分時，本發(fā)明關注TRPA1抑制劑與下列 治療方式中的一種或多種的聯(lián)合應用給予非-TRPA1抑制劑藥物，化 療，放療，順勢療法，膳食，應激處理和手術。
在某些實施方案中，當單獨或作為治療方案的組成部分給藥時， 本發(fā)明關注給予TRPA1抑制劑治療特定的原發(fā)性疾病，損傷，病癥或 疾患。另外地或可選擇地，本發(fā)明關注給予TRPA1抑制劑治療與疾病， 損傷，病癥或疾患相關的疼痛。在其它實施方案中，本發(fā)明關注給予 TRPA1抑制劑治療原發(fā)性疾病，損傷，病癥或疾患的繼發(fā)性癥狀。
本發(fā)明關注具有上述或下列特征的任意組合以及本文所述TRPA1 拮抗劑的結構或功能特征的任意組合的TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應 用。任何這類拮抗劑或制劑可以用于治療本文所述的任何疾病或疾患。 另外，本發(fā)明關注任何這類拮抗劑或制劑在治療本文所述的任何疾病 或疾患中的應用。另外，本發(fā)明關注任何這類拮抗劑或制劑在體外抑 制TRPA1介導的電流中的應用。還關注任意上述或下列方面和實施方
案的組合。例如，本發(fā)明關注可以配制用于適當給藥途徑的具有本文
概括的任何特定功效和特異性的TRPA1拮抗劑，并且可以用于治療本 文詳述的任何疾患或疾病。在某些實施方案中，本發(fā)明關注表1或2 中所列的任何TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應用。
在任意上述的某些實施方案中，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮抗劑 化合物具有任意上述特性中的一種或多種(例如，IC5。，特異性，選擇 性，活性，制劑等)。特別關注具有上述特性的任意組合的化合物和拮 抗劑化合物的應用。
定義為
術語"拮抗劑"和"抑制劑"可以互換使用意指降低或抑制離子通道 生物活性，諸如抑制離子通道TRPA1活性的活性劑。TRPA1抑制劑包 括具有本文披露的結構和/或功能特性的任意組合的抑制劑。
例如，TRPA1拮抗劑的"有效量"在本發(fā)明主題的抑制或治療方法 方面意旨在作為所需劑量方案組成部分施用的制劑中引起期望臨床或 功能效果的拮抗劑用量。不受理論約束，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮 抗劑的有效量包括有效減少TRPA1通道的一種或多種體外或體內功能 的TRPA1拮抗劑用量。典型的功能包括，但不限于，膜極化(例如，可 以促進細胞超極化的拮抗劑)，離子流量，細胞內的離子濃度，外向電 流和內向電流。拮抗TRPA1功能的化合物包括拮抗TRPA1的體外或體 內功能活性的化合物。當特定的功能活性僅易于在體外試驗中觀察到 時，化合物在該體外試驗中抑制TRPA1功能的能力用作該化合物活性 的合理替代者。在某些實施方案中，有效量為足以抑制TRPA1-介導的 電流的用量和/或足以抑制TRPA1介導的離子流的用量。
用于本發(fā)明方法的TRPA1抑制劑可以根據其對一種或多種其它離 子通道的它們的活性或缺乏活性表征。當涉及其它離子通道時，類似 地定義抑制這類其它離子通道的功能。例如，抑制離子通道或離子通 道活性意旨拮抗劑抑制其它離子通道的一種或多種功能活性。這類功 能包括特定離子通道，離子流量或膜極化介導的電流。術語"核酸"意旨核苷酸，即核糖核苷酸或脫氧核苷酸的聚合形式 或任一類核苷酸的修飾形式。該術語還應理解為包括由核苷酸類似物
制成的RM或DNA類似物作為等效物并且適合于所述的實施方案，單 鏈(諸如有義或反義)和雙鏈多核苷酸。
術語"預防"為本領域公認的并且在涉及疾患時，諸如局部復發(fā)(例 如疼痛)，疾病諸如癌癥，復雜綜合征諸如心力衰竭或任何其它醫(yī)學疾 患，為本領域充分理解的并且包括相對于不接受組合物的受試者而言 降低受試者醫(yī)學疾患癥狀發(fā)作頻率或延緩其發(fā)作的組合物。因此，預 防癌癥包括，例如比不治療對照群體減少接受預防性治療的患者群體 中可檢測到的癌癥生長的數量，和/或延緩治療群體比不治療對照群體 可檢測到的癌癥生長的出現(xiàn)，例如，其數量具有統(tǒng)計學和/或臨床意義。 預防感染包括，例如，減少治療群體比不治療對照群體的感染診斷數 量和/或延緩治療群體比不治療對照組群體的感染癥狀發(fā)作。預防疼痛 包括，例如，減小治療群體比不治療對照群體中受試者經歷的疼痛感 覺的等級或可選擇地延緩它們。
在本文中可以互換使用的術語"多肽"和術語"蛋白質"和"肽"意旨 氨基酸的聚合物。典型的多肽類包括基因產物，天然存在的蛋白質， 同源物，同源體，paralogs，片段和上述的其它等效物，變體和類似 物。
術語"前體藥物"指定包括在生理條件下被轉化成本發(fā)明治療活性 劑的化合物。制備前體藥物的常用方法在于包括被選擇的在生理條件 下水解而展示出所需分子的部分。在其它實施方案中，前體藥物被宿 主動物的酶活性轉化。
術語"序列同 一性"意旨在對比窗內的序列相同(即對核酸基于核 苷酸與核苷酸，或對多肽類基于氨基酸與氨基酸)。術語"序列同一性 百分比"通過下列計算比較對比窗內的兩種最佳序列對比序列，測定 兩序列內出現(xiàn)的相同氨基酸的位置的數量而得到配對位置的數量，用 配對的位置數除以對比窗中位置總數并且將結果乘以100而得到序列 同一性百分比。計算序列同一性的方法為本領域技術人員公知的并且
進一步在下文中詳細描述。
術語"小分子"意旨具有低于約2500 amu,優(yōu)選低于約2000 amu， 甚至更優(yōu)選低于約1500 amu，更優(yōu)選低于約1000 amu或最優(yōu)選低于 約750 amu分子量的化合物。
術語"嚴格條件"或"嚴格雜交條件"意旨促進兩條互補多核苷酸鏈 之間特異性雜交而形成雙鏈體的條件?？梢詫栏駰l件選為在確定離 子強度和pH下低于指定多核苷酸雙鏈體熱熔點(Tm)約5 'C?；パa多 核苷酸鏈長及其GC含量將決定雙鏈體的Tm和，并且由此獲得期望雜 交特異性所必需的雜交條件。Tm為50°/ 的多核苷酸序列與完全配對互 補鏈雜交時的溫度(在確定的離子強度和pH下)。在某些情況中，期望 增加基本上等于特定雙鏈體的Tm的雜交條件的嚴格性。在某些實施方 案中，嚴格雜交條件包括在65'C下的0. 2X SSC的洗滌步驟。
術語"TRPA1"， "TRPA1蛋白質和"TRPA1通道"在本申請上下文中可 以互換使用。這些術語意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列或其等效多肽或功能性生物活性片段的離子 通道(例如多肽)。在某些實施方案中，該術語意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列，由其組成或基本上 由其組成的多肽。TRPA1包括多肽類，它們保持TRPA1功能并且包含 (i) SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列 的全部或部分；(ii)具有1至約2， 3， 5， 7, 10， 15， 20， 30， 50, 75或75個以上保守氨基酸取代的SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5中所示氨基酸序列;(iii)70%, 75%, 80%， 90%, 95%, 96%, 97%， 98%或99%與SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5相同 的氨基酸序列；和(iv)其功能性片段。本發(fā)明的多肽類還包括SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5的同源物，例如同源體和paralogs。
術語"TRPA1"還意旨編碼本發(fā)明多肽的核酸，例如包含由或基本上 由SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6中所示多核苷酸序 列組成的序列的核酸。本發(fā)明的核酸可以包含如下的全部或部分SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的核苷酸序列；至少70%，
75%, 80%， 90%， 95%， 96%， 97%， 98°/?；?9%與SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6相同的核苷酸序列；在嚴格條件下與SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6雜交的核苷酸序列；編碼與本發(fā)明 多肽類功能等效的多肽類的核苷酸序列；編碼至少約70%, 75%， 80%, 85%， 90%， 95%, 98%， 99%與SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5同源或相同的多肽類的核苷酸序列；編碼具有本發(fā)明多肽活性并且 與SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5具有至少約70%， 75°/。， 80%， 85%， 90%， 95%, 98%， 99%或99%以上同源性或相同的多肽類的 核苷酸序列；不同方面在于1至約2， 3， 5， 7， 10， 15， 20， 30， 50, 75或75個以上核苷酸取代，添加或缺失的核苷酸序列，諸如SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的等位基因變體；來源于SEQIDNO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6并且在進化上與之相關的核酸；和
由針對本發(fā)明所有上述和其它核酸而言的遺傳密碼簡并性產生的補體 和核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還包括同源物，例如，SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的同源體和paralogs，并且還包括為 在特定生物體(例如宿主細胞)中表達而密碼優(yōu)化的SEQIDNO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的變體。盡管未明確描述，但是本領域技 術人員易于評價TRPA1是否意旨核酸或蛋白質。
術語"氧化代謝物"指定包括由母體化合物在正常生理條件下的代 謝產生的化合物。特別地，氧化代謝物因代謝過程中的氧化形成。例 如，石克醚基可以被氧化成相應的亞砜或砜。
本文所用的術語"溶劑合物"意旨通過溶劑化形成的化合物(例如， 通過溶劑分子與溶質分子或離子結合形成的化合物)。
本文所用的術語"水合物"意旨水與母體化合物結合形成的化合物。
術語"治療"包括預防性和/或治療性治療。術語"預防性或治療性" 治療為公認的并且可對宿主給予本發(fā)明主題的組合物中的一種或多 種。如果在不需要情況(例如，宿主動物疾病或其它不需要的狀態(tài))的 臨床表現(xiàn)前給藥，那么治療為預防性的(即防止宿主發(fā)生不需要的情
況)，而如果在不需要的情況表現(xiàn)后給藥，那么治療為治療性的(即期 望減輕，改善或穩(wěn)定存在的不需要的情況或其副作用)。
術語"化合物"和"活性劑"可以互換使用以便指本發(fā)明的抑制劑/ 拮抗劑。在某些實施方案中，化合物為小的有機或無機分子，例如，
它們具有低于7500 amu，優(yōu)選低于5000 amu且甚至更優(yōu)選低于2000， 1500， 1000或500 amu的分子量。小有機或無機分子的一類為非肽基 的，例如，包含2， l個或不含肽和/或糖鍵。在某些在其它實施方案 中，化合物為肽基試劑，諸如多肽類或抗體。在某些其它實施方案中， 化合物為蛋白質，例如抗體或適體。這類化合物可以結合并且抑制 TRPA1功能。在某些其它實施方案中，化合物為核酸，例如，TRPA1 反義寡核苷酸或TRPAl.RMi構建體。這類化合物可以抑制TRPA1表達， 由此抑制TRPA1活性。可以作為抑制劑起作用的其它典型化合物包括 核酶和肽片段。
術語"?；?為公認的并且意旨由式烴基C(O)-，優(yōu)選烷基C(O)-表示的基團。
術語"酰氨基"為公認的并且意旨可以由下式表示的部分
R9
其中R,如上述所定義且R'll表示氫，烷基，鏈烯基或-(CH2)m-R8， 其中m和R8如上述所定義。
本文的術語"脂族基團"意旨直鏈，支鏈或環(huán)狀脂族烴基并且包括 飽和和不飽和脂族基團，諸如烷基，鏈烯基和炔基。
本文所用的術語"鏈烯基"意旨包含至少一個雙鍵的脂族基團并且 指定包括"未被取代的鏈烯基"和"取代的鏈烯基"，后者意旨鏈烯基部 分在鏈烯基的一個或多個碳上具有取代氫的取代基。這類取代基可以 出現(xiàn)在包括或不包括一個或多個雙鍵上的一個或多個碳上。此外，這 類取代基包括所有如下所述對烷基關注的那些取代基，但除外其中穩(wěn) 定性被抑制的情況。例如，關注鏈烯基被烷基，碳環(huán)基，芳基，雜環(huán) 基或雜芳基中的一種或多種取代。
本文所用的術語"烷氧基"意旨如下所定義的帶有與之結合的氧基 的烷基。有代表性的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔丁氧基 等。"醚"為通過氧共價連接的兩個烴。因此，給予醚烷基的該烷基取
代基為或類似烷氧基，諸如可以由-0-烷基，-0-鏈烯基，-o-炔基， -0-(CH2)m-R8之一表示，其中m和R8如上所述。
術語"烷基"意旨飽和脂族基團的基團，包括直鏈烷基，支鏈烷基。 環(huán)烷基(脂環(huán)族)，垸基-取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基-取代的烷基。在優(yōu)選 的實施方案中，直鏈或支鏈烷基在其骨架上帶有30或30個以下碳原 子(例如，直鏈為CI-C30，支鏈為C3-C30)且更優(yōu)選20或20個以下且 最優(yōu)選10或10個以下。同樣，優(yōu)選的環(huán)烷基在其環(huán)結構上帶有3-10 個碳原子并且更優(yōu)選在其環(huán)結構上帶有5， 6或7個碳。
此外，在本說明書，實施例和權利要求中的術語"烷基"(或"低級 烷基")指定包括"未被取代的烷基"和"取代的烷基"，后者意旨烷基在 烴骨架的一個或多個碳上具有取代氬的取代基的部分。這類取代基可 以包括，例如，g素，羥基，羰基(諸如羧基，烷氧羰基，甲酰基或酰 基)，硫羰基(諸如疏酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷酰基， 磷酸酯，膦酸酯，亞膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亞胺，氰基，硝基， 疊氮基，硫氫基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺?；酋０被?， 磺?；s環(huán)基，芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領域技術人員理解， 如果合適，在烴鏈上取代的部分自身可以被取代。例如，取代的烷基 的取代基可以包括氨基，疊氮基，亞氨基，酰氨基，磷?；?包括膦酸 酯和亞膦酸酯)，磺?；?包括硫酸酯，磺酰氨基，氨磺?；突撬狨? 的取代和未被取代的形式和甲硅烷基以及醚類，烷硫基，羰基(包括酮 類，醛類，羧酸酯類和酯類)，-CF3， -CN等。典型的取代烷基如下所 述。環(huán)烷基可以進一步被烷基，鏈烯基，烷氧基，烷疏基，氨基烷基， 羰基-取代的烷基，-CF3， -CN等取代。
鏈烯基和炔基上可以進行類似的取代以便產生，例如，氨基鏈烯 基，氨基炔基，酰氨基鏈烯基，酰氨基炔基，亞氨基鏈烯基，亞氨基 炔基，硫代鏈烯基，硫代炔基，羰基-取代的鏈烯基或炔基。
除非碳的數量另有指定，否則本文使用的"低級烷基"意旨如上述
所定義，但在其骨架結構上具有1 - 10個碳，更優(yōu)選1 - 6個碳原子的 烷基。同樣，"低級鏈烯基"和"低級炔基"具有類似鏈長。在本申請的 上下文中，優(yōu)選的烷基為低級烷基。在優(yōu)選的實施方案中，本文指定 為烷基的取代基為低級烷基。
本文所用的術語"炔基"意旨包含至少一個三鍵的脂族基團并且指 定包括"未被取代的炔基"和"取代的炔基"，后者意旨在炔基的一個或 多個碳上具有取代氫的取代基的炔基部分。這類取代基可以出現(xiàn)在包 括或不包括在一個或多個三鍵的一個或多個碳上。此外，這類取代基 包括對如上所述烷基關注的所有那些取代基，但除外其中穩(wěn)定性被抑 制的情況。例如，關注炔基被烷基，碳環(huán)基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基 中的一個或多個取代。
術語"烷硫基"意旨如本文定義的帶有與之結合的硫基團的烷基。 在優(yōu)選的實施方案中，"烷硫基"部分由-S-烷基，-S-鏈烯基，-S-炔基 和-S-(CH2)m-Rs之一表示，其中m和Rs如上述所定義。有代表性的烷 硫基包括甲硫基，乙疏基等。
術語"胺"和"氨基"為公認的并且意旨未被取代和取代的胺類，例 如，可以由下式表示的部分
R R， 10
/Rio | +
—N\ 或 — —Rlc
其中R9， K。和R、。各自獨立地表示氫，烷基，鏈烯基，-(CH丄-Rs 或R,和IU。與連接它們的N原子共同構成在環(huán)結構上帶有4-8個原子 的雜環(huán)；Rs表示芳基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，雜環(huán)或多環(huán)；和m為0或l -8的整數。在優(yōu)選的實施方案中，僅Rs或R,。之一可以為羰基，例如 R9， Rw和氮彼此不構成二酰亞胺。在某些這類實施方案中，IU和Rw均 不通過羰基連接N，例如，所述的胺不為酰胺或二酰亞胺且所述的胺 優(yōu)選為堿，例如，其共軛酸具有高于7的pKa。在甚至更優(yōu)選的實施方 案中，R,和R,。(和任選的R、)各自獨立地表示氫，烷基，鏈烯基或
-(CH上-Rs。因此，本文所用的術語"烷基胺"意旨如本文定義的具有與 之連接的取代或未被取代的烷基的胺基，即IU和H。中的至少一個為烷基。
術語"酰氨基"公認為氨基-取代的羰基并且包括可以由下式表示 的部分
其中R" !^。如上述所定義。酰胺的優(yōu)選實施方案不包括可能不穩(wěn) 定的二酰亞胺類。
本文所用的術語"芳烷基"意旨被芳基取代的烷基(例如芳族或雜 芳族基團)。
本文所用的術語"芳基"包括可以包括0-4個雜原子的5-， 6-和 7-元單-環(huán)芳族基團，例如，苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，喁唑，噻 唑，三唑，吡唑，吡啶，吡溱，噠"秦和嘧啶等。那些在環(huán)結構上具有 雜原子的芳基還可以稱作"芳基雜環(huán)或"雜芳族化合物"。芳族環(huán)可以在 一個或多個位置上被這類如上所述的取代基取代，例如卣素，疊氮化 物，烷基，芳烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，多環(huán)基，羥基，烷氧基， 氨基，硝基，硫氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸酯，膦酸酯，亞膦酸酯， 羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺?；?，磺酰氨基，酮，醛， 酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，_CF3， -CN等。術語"芳基"還包括帶 有兩個或多個環(huán)的多環(huán)系，其中兩個或多個碳通常與兩個相鄰環(huán)連接 (這些環(huán)為"稠合環(huán)")，其中環(huán)中的至少一個為芳族的，例如，另一個 環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基和/或雜環(huán)基。
本文所用的術語"碳環(huán)"意旨芳族或非-芳族環(huán)，其中環(huán)的各原子為碳。
術語"羰基"為公認的并且包括可以由下式表示的這類部分或其藥 學上可接受的鹽
其中X為鍵表示氧或硫，且Ru表示氫，烷基，鏈烯基，-(CH2) -R8， R、表示氫，烷基，鏈烯基或-(CH2)m-R8，其中m和Rs如上述所定義。 如果X為氧且Rn或R、不為氫，那么該式表示"酯"。如果X為氧且 Ru如上述所定義，那么該部分在本文中意旨羧基，且特別是當Rn為 氫時，該式表示"羧酸"。如果X為氧且R'n為氫，那么該式表示"甲酸 酯"。 一般而言，如果上述式的氧原子被疏取代，那么該式表示"硫代 羰基"。如果X為硫且IU或R、不為氬，那么該式表示"硫酯"。如果X 為硫且Rn為氫，那么該式表示"硫代羧酸"。如果X為硫且R'u為氬， 那么該式表示"巰基甲酸酯"。另一方面，如果X為鍵且Ru不為氫，那 么上述式表示"酮"基。如果X為鍵且Rn為氫，那么上述式表示"醛" 基。
術語"吸電子基團"意旨從連接吸電子基團的原子或原子基團上取 得電子密度的化學基團。取得電子密度包括通過誘導和通過離域/共振 效應取得。與芳族環(huán)連接的吸電子基團的實例包括全卣代烷基，諸如 三氟曱基，囟素，疊氮化物，含羰基的基團，諸如?；?，氰基和含亞 胺的基團。
本文所用的術語"酯"意旨基團-C(0)OR9,其中R'表示烴基。 本文所用的術語"卣素"意旨卣素且包括氯，氟，溴和碘。 本文所用的術語"雜芳烷基"意旨被雜芳基取代的烷基。 術語"雜環(huán)基"意旨3-至10-元環(huán)結構，更優(yōu)選3-至7-元環(huán)，其環(huán) 結構包括l-4個雜原子。雜環(huán)還可以為多環(huán)。雜環(huán)基包括，例如，瘞 吩，噻蒽，呋喃，吡喃，異苯并吹喃，色烯，站噸，吩蓬嚙，吡咯， 咪唑，咪唑，異遂唑，異"惡唑，吡^，吡漆，嘧咬，峻"秦，p引漆，異 p引咮，丐l咮，p引唑，嘌呤，奮喚，異會啉，全啉，酞嚷，萘咬，奮惺 啉，喹唑啉，噌啉，蝶啶，呼唑，<+啉，菲啶，吖啶，嘧啶，菲咯啉， 吩溱，吩吡溱，吩噻溱，呋咱，吩噁喚，吡咯烷，氧戊環(huán)，硫戊環(huán)， 嚙唑，哌啶，哌溱，嗎啉，內酯類，內酰胺類，諸如氮雜環(huán)丁酮類和
吡咯烷酮類，磺內酰胺類，磺內酯類等。雜環(huán)可以在一個或多個位置 上被如上所述這類取代基取代，例如為卣素，烷基，芳烷基，鏈烯基， 炔基，環(huán)烷基，鞋基，氨基，硝基，疏氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亞膦酸酯，羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺酰
基，酮，醛，酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，-CF3, -CN等。
術語"雜芳基"包括取代或未被取代的芳族單環(huán)結構，優(yōu)選5-至 7-元環(huán)，更優(yōu)選5-至6-元環(huán)，其環(huán)結構包括至少一個雜原子，優(yōu)選l -4個雜原子，更優(yōu)選1或2個雜原子。術語"雜芳基"還包括具有 兩個或多個環(huán)的多環(huán)環(huán)系，其中兩個或多個碳共用于兩個相鄰環(huán)，其 中環(huán)中的至少一個為雜芳族的，例如，另一個環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯 基，環(huán)炔基，芳基，雜芳基和/或雜環(huán)基。雜芳基包括，例如，吡咯， 呋喃，漆汾，咪唑，噁唑，蓬唑，吡唑，吡吱，吡漆，峻漆和嘧啶等。 本文所用的術語"雜原子"意旨任意非碳或氫的元素的原子。優(yōu)選 的雜原子為氮，氧和硫。
術語"雜環(huán)基"和"雜環(huán)(heterocycle )"意旨取代或未被取代的非 -芳族環(huán)結構，優(yōu)選3-至10-元環(huán)，更優(yōu)選3-至7-元環(huán)，其環(huán)結構包 括至少一個雜原子，優(yōu)選1 - 4個雜原子，更優(yōu)選1或2個雜原子。術 語"雜環(huán)基"和"雜環(huán)"還包括具有兩個或多個環(huán)的多環(huán)環(huán)系，其中兩個 或多個碳共用于兩個相鄰環(huán)，其中環(huán)中的至少一個為雜環(huán)，例如，另 一個環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基，雜芳基和/或雜環(huán)基。 雜芳基包括，例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，嗎啉，內酯類，內酰胺類 等。 本文所用的術語"雜環(huán)基烷基"意旨被雜環(huán)基取代的烷基。 本文所用的術語"烴基"意旨通過碳原子鍵合的不具有-O或-S取
代基并且一般具有至少一個碳-氫鍵和主要碳骨架，但可以任選包括雜 原子的基團。因此，如甲基，乙氧基乙基，2-吡啶基和三氟甲基這類 基團被視為用于本申請目的的烴基，但并非取代基，諸如乙?；?在連 接碳上具有-O取代基)和乙氧基(通過氧而非碳連接)。烴基包括，但 不限于芳基，雜芳基，碳環(huán)，雜環(huán)，烷基，鏈烯基，炔基及其組合。
術語"低級"在與諸如?；?，酰氧基，烷基，鏈烯基，炔基或烷氧
基這類化學部分聯(lián)用時意旨包括在取代基上存在io個或io個以下原
子，優(yōu)選6個或6個以下原子的基團。"低級烷基"，例如，意旨包含 10或10個以下碳原子，優(yōu)選6或6個以下碳原子的烷基。在某些實 施方案中，?；?，酰氧基，烷基，鏈烯基，炔基或烷氧基取代基分別 為低級?；?，低級酰氧基，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基或低級 烷氧基，無論它們是單獨出現(xiàn)還是與其它取代基組合出現(xiàn)，諸如描述 中的羥基烷基和芳烷基(在此情況中，例如，在統(tǒng)計烷基取代基上的碳 原子時不統(tǒng)計芳基內的原子)。
本文所用的術語"硝基"意旨-N02;術語"鹵素"表示-F, -Cl， -Br 或-I;術語"硫氬基"意旨-SH;術語"羥基"意旨-OH;且術語"磺?；? 意旨-S0廣。
術語"多環(huán)基"意旨兩個或多個環(huán)(例如，環(huán)烷基，環(huán)鏈烯基，環(huán)炔 基，芳基和/或雜環(huán)基)，其中兩個或多個碳共用于相鄰環(huán)，例如，環(huán) 為"稠合環(huán)"。通過非相鄰原子連接的環(huán)稱作"橋連"環(huán)。多環(huán)的各環(huán)可 以被如上所述這類基團取代，例如為卣素，烷基，芳烷基，鏈烯基， 炔基，環(huán)烷基，羥基，氨基，硝基，硫氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亞膦酸酯，羰基，羧基，曱硅烷基，醚，烷硫基，磺酰 基，酮，醛，酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，-CF3， -CN等。
本文所用的術語"保護基"意旨防止反應官能基可能發(fā)生不需要的 化學轉化的臨時取代基。這類保護基的實例包括羧酸酯類醇的甲硅烷 基醚類以及分別為醛和酮的縮醛類和酮縮醇類。已經綜述了保護基化 學領域(Greene, T. W. ; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed. ; Wiley: New York, 1991)。
術語"取代的"意旨在骨架的一個或多個碳上具有取代氫的取代基 的部分?？梢岳斫?取代"或"被取代"包括暗示條件為這類取代按照取 代原子和取代基的允許化合價且取代產生穩(wěn)定的化合物，例如不會諸 如通過重排，環(huán)化，消去等自發(fā)進行轉化。關注本文所用的術語"取代 的"包括所有有機化合物的允許的取代基。在一個寬范的方面中，允許
的取代基包括有機化合物的無環(huán)和環(huán)狀支鏈和非支鏈碳環(huán)和雜環(huán)，芳 族和非-芳族取代基。允許的取代基可以為一種或多種并且對適當的有 機化合物而言可以相同或不同。就本發(fā)明的目的而言，雜原子，諸如 氮可以具有氫取代基和/或本文所述滿足雜原子化合價的有機化合物 的任何允許的取代基。取代基可以包括本文所述的任何取代基，例如， 卣素，羥基，羰基(諸如羧基，烷氧羰基，甲?；蝓；?，硫代羰基(諸 如硫酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷?；?，磷酸酯，膦酸 酯，亞膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亞胺，氰基，硝基，疊氮基，硫 氬基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺?；?，磺酰氨基，磺酰基，雜 環(huán)基，芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領域技術人員可以理解，如果 合適，在烴鏈上取代的部分自身可以被取代。
可以理解"取代"或"被取代"包括暗示條件為這類取代按照取代原 子和取代基的允許化合價且取代產生穩(wěn)定的化合物，例如不會諸如通 過重排，環(huán)化，消去等自發(fā)進行轉化。
術語"氨磺?；?為公認的并且包括可以由下式表示的部分
其中R9和R10如上述所定義。
語"硫酸酯"為公認的并且包括可以由下式表示的部分
<formula>formula see original document page 60</formula>
其中R41如上述所定義。
術語"磺酰氨基"為公認的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R9和R'll如上述所定義。
術語"磺酸酯"公認的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R41為電子對，氫，烷基，環(huán)烷基或芳基。
本文所用的術語"硫氧化物(sulfoxido)基"或"亞磺?；?意旨可
以由下式表示的部 o
<formula>formula see original document page 61</formula>
其中R44選自氬，烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳烷 基或芳基。
本文所用的術語"硫酯"意旨基團-C(0)SR9或-SC(0)R9，其中R'表 示烴基。
本文所用的每種表達方式的定義，例如，烷基，m， n等在它在任 何結構上出現(xiàn)一次以上時指定與其在其它處相同結構上的定義獨立。
術語三氟曱磺酸酯基，曱苯磺?；?，甲磺?；蚽onaflyl為公認 的并且分別意旨三氟甲磺?；?，甲苯磺?；?，甲磺?；途欧』酋?基。術語三氟曱磺酸酯，曱苯磺酸酯，曱磺酰酯和nonaflate為公認的 并且分別意旨三氟甲磺酸酯，對甲苯磺酸酯，甲磺酸酯和九氟丁磺酸 酯官能基和包含所述基團的分子。
縮寫Me， Et， Ph, Tf， Nf， Ts， Ms分別表示曱基，乙基，苯基， 三氟曱磺?；?，九氟丁磺酰基，甲苯磺酰基和曱磺?；?。有機化學普 通技術人員使用的縮寫的更綜合性清單出現(xiàn)在Journal of Organic Chemistry每巻的第一版中；該清單一般以表的形式列出，標題為 Standard List of Abbreviat ions。將在所述清單中包含的縮寫和有 機化學普通技術人員使用的所有縮寫引入本文作為參考。
本發(fā)明的某些化合物可以以特定的幾何或立體異構體形式存在， 本發(fā)明關注所有這類化合物，包括順式-和反式-異構體，R-和S-對映 體，非對映體，(d)-異構體，(l)-異構體，其外消旋混合物及其其它 混合物，因為屬于本發(fā)明的范圍。另外的不對稱碳原子可以存在于取 代基，諸如烷基上。指定所有這類異構體及其混合物均包括在本發(fā)明
中。
制備基本上為異構體純的化合物的方法為本領域公知的。例如， 如果需要本發(fā)明化合物的特定對映體，那么可以通過不對稱合成或通 過使用手性助劑衍生制備它，其中分離所得非對映異構體混合物并且 裂解輔助基團而得到純的所需對映體?？蛇x擇地，如果分子包含堿性 官能基，諸如氨基或酸性官能基，諸如羧基，那么可以使用適當的旋 光酸或堿形成非對映異構體鹽，隨后拆分通過分級結晶或本領域眾所 周知色鐠方式形成的非對映體，且隨后回收純的對映體?？蛇x擇地， 可以通過使用合成中間體與反應制備富含對映體的混合物和純的對映 體化合物，所述的合成中間體為對映體純的，所述的反應使得手性中 心上的立體化學不改變或導致其完全反轉。用于反轉或保留不改變的 特定立體中心的技術和用于拆分立體異構體混合物的那些技術為本領 域眾所周知的并且充分屬于本領域技術人員選擇針對特定情況的適當
方法的能力范圍。 一般參見F證iss等(eds.) ， Vogel's Encyclopedia of Practical Organic Chemistry 5th Ed， Longman Scientific and Technical Ud. , Essex, 1991, pp. 809- 816;和Heller， Acc. Chem. Res. 23: 128 (1990)。
所關注的上述化合物的等效物包括另外與之相當并且具有其相同 的一般特性(例如，抑制TRPA1活性的能力)的化合物，其中進行一種或 多種取代基的簡單變化形式，它們不會對化合物的功效產生不良影響。 一般而言，可以通過在一般反應方案中例證的方法，例如，如下所述 的方法或其修改形式，使用易于利用的原料，試劑和常規(guī)的合成操作 制備本發(fā)明的化合物。在這些反應中，還能夠利用自身公知，但本文 未提及的變化形式。
就本發(fā)明的目的而言，化學元素按照元素周期表CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed. ， 1986-87 (內封) 鑒定。另外，就本發(fā)明的目的而言，關注術語"烴"包括具有至少一個 氫和一個碳原子的所有允許的化合物。在一個寬范的方面中，允許的 烴類包括無環(huán)和環(huán)狀支鏈和非支鏈碳環(huán)和雜環(huán)，可以被取代或未被取代的芳族和非-芳族有機化合物。
本發(fā)明的化合物還可以包含非天然比例的構成這類化合物的原子 的一種或多種上的原子同位素。例如，可以使用放射性同位素，諸如，
例如氚(310，碘-125 (1251)或碳-14(140放射性標記化合物。指定本發(fā) 明化合物的所有同位素變化形式，無論是否未放射性的，均包括在本 發(fā)明范圍內。
符號^ ，無論是作為鍵使用，還是展示出與鍵垂直均表示展示 部分與分子剩余部分，固相支持體等的連接點。
本發(fā)明的某些化合物可以以非溶劑化形式和溶劑化形式存在，包 括水化形式。 一般而言，溶劑化形式與非溶劑化形式等效并且包括在 本發(fā)明范圍內。本發(fā)明的某些化合物可以以多晶型或非晶形形式存在。 一般而言，所有物理形式針對本發(fā)明關注的應用而言均為等效的并且 指定它們屬于本發(fā)明的范圍內。
其中取代基以其常規(guī)的從左到右的書寫的化學式專門指定，它們 同樣包括化學上相同的取代基，這些取代基可以由從右到左的結構書 寫產生例如，還指定-CH20-描述-0CH廣；還指定-NHS(0)f表示 -S (0)2HN-等。
術語"藥學上可接受的鹽"包括使用相對無毒性的酸或堿制備的活 性化合物的鹽，這取決于在本文所述化合物上發(fā)現(xiàn)的特定的取代基。 當本發(fā)明的化合物包含相對所需的官能基時，可以通過使這類化合物 的中性形式接觸足量的所需堿(可以是在凈的或在合適的溶劑中)獲 得堿加成的鹽。藥學上可接受的堿加成的鹽的實例包括鈉，鉀，釣， 銨，有機氨基或鎂鹽或類似的鹽。當本發(fā)明的化合物包含相對堿性官 能基時，可以通過使這類化合物的中性形式接觸足量的所需酸(可以 是在凈的或在合適的溶劑中)獲得酸加成的鹽。藥學上可接受的酸加 成的鹽的實例包括那些來源于無機酸的鹽和來源于相對無毒性的有機 酸的鹽，所述的無機酸如鹽酸，氬溴酸，硝酸，碳酸， 一氫碳酸，磷 酸， 一氫磷酸，二氫磷酸，硫酸， 一氫硫酸，氫碘酸或磷酸等，所述 的有機酸如乙酸，三氟乙酸，丙酸，異丁酸，馬來酸，丙二酸，苯曱
酸，琥珀酸，辛二酸，富馬酸，乳酸，扁桃酸，苯二甲酸，苯磺酸， 對-甲苯磺酸，檸檬酸，酒石酸，曱磺酸等。還包括氨基酸的鹽，諸如 精氨酸鹽等，和有機酸的鹽，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等(例如，參見
Berge等，"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977， 66, 1-19)。本發(fā)明的某些具體化合物包含堿性和酸 性官能基，它們能夠使化合物轉化成堿或酸加成的鹽。
優(yōu)選通過使所述的鹽接觸堿或酸并且按照常規(guī)方式分離母體化合 物再生化合物的中性形式?；衔锏闹行孕问皆谀承┪锢硖匦苑矫娌?同于各種鹽形式，諸如在極性溶劑中的溶解性，但就本發(fā)明的目的而 言，這些鹽在其它方面與化合物的母體形式等效。
術語"足夠低的熱原活性"在涉及藥物制劑時意旨不含可能使該制 劑所給予的受試者產生不良反應(例如，刺激，發(fā)熱，炎癥，腹竭，呼 吸窘迫，內毒素休克等)的量的熱原。例如，該術語意旨包括不含或基 本上不含內毒素，諸如，例如脂多糖(LPS)的制劑。
與TRPA1功能相關的疾病，病癥或疾患
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了抑制體外或體內TRPAl通道功能 的方法和組合物。典型功能包括，但不限于TRPAl-介導的電流。在某 些實施方案中，本發(fā)明提供了通過給予調節(jié)TRPAl蛋白質的水平和/或 活性的活性劑預防或這類疾病或病癥或疾患的方法。在其它實施方案 中，該化合物選擇性地抑制TRPAl蛋白質的表達水平和/或活性。換句 話說，在某些實施方案中，所述的化合物與一種或多種其它離子通道 活性相比優(yōu)先抑制TR P A1蛋白質活性。
在預防或治療本文提供的疾病和病癥的方法的具體實施方案中， 所述的疾病或病癥可以為例如，疼痛或接觸敏感性，諸如與疾病或 病癥相關的疼痛，例如，癌性痛；皮膚病或病癥，例如4艮屑病和基底 細胞和鱗狀細胞癌；神經變性疾病或病癥，例如，阿爾茨海默病(AD)， 帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮側索硬化(ALS)和其它因創(chuàng)傷或其它損傷 導致的腦功能障礙，包括衰老，炎性疾病(例如，哞喘，慢性阻塞性肺
疾病，類風濕性關節(jié)炎，骨關節(jié)炎，炎癥性腸病，腎小球腎炎，神經
炎癥疾病，多發(fā)性硬化和免疫系統(tǒng)病癥)；癌癥(例如脂肪肉瘤)或其它 增殖性疾病，腎疾病和肝疾?。淮x紊亂，諸如糖尿病。其它疾病和 疾患包括術后痛，皰滲后遺神經痛，失禁和帶狀皰滲。
由于鈣調節(jié)在許多細胞過程，包括細胞活化，基因表達，細胞運 輸和凋亡性細胞死亡中起作用的重要作用，所以鈣生理紊亂涉及許多 包4舌這類細力包活動的疾病和病癥。這些疾病和病癥包括皮趺病和病癥； 神經和神經變性疾病和病癥；與各種疾病，病癥或疾患相關的發(fā)熱； 失禁；炎性疾病和病癥，諸如炎癥性腸病和克羅恩??；呼吸性疾病和 病癥；諸如慢性咳嗽，哮喘和慢性阻塞性肺疾病(C0PD);消化性病癥， 諸如潰瘍和酸反流；代謝病和障礙，包括肥胖和糖尿??；肝和腎疾病 和病癥；惡性肺瘤，包4舌癌癥；與老化相關的病癥；和對疼痛和接觸 過敏。
可以治療的另外疾病或疾患包4舌ATP-相關疾病或病癥，包括癲癇 癥，認知，嘔吐，疼痛(例如偏頭痛)，哞喘，外周血管疾病，高血壓 免疫和炎性疾患，腸易激綜合征，膀胱炎，抑郁癥，與衰老相關的變 性疾病，尿失禁，早泄，嚢性纖維化，糖尿病，避孕和不育癥，和傷 口愈合(例如，參見Foresta等(1992) J. Biol. Chem. 257:19443-19447; Wang等(1990) Biochim. Biophys. Res. Commun. 166:251—258; Burnstock和Wi 11 iams ， (2000) J. Pharmacol. Exp. Ther. 295: 862-869;和Burnstock， Pharmacol Rev (2006) 58:58-86)。
本文所述的TRPA1抑制劑可以用于治療4壬意上述或下列疾病或疾 患，包括治療與任意上述或下來疾病或疾患相關的疼痛。當用于治療 方法時，可以基于指定給藥途徑選擇和配制抑制劑。抑制劑可以用于 治療潛在的疾病或疾患或緩解所述疾病或疾患的癥狀。典型癥狀包括 與疾病或疾患相關的疼痛。
a.對疼痛和觸纟莫的敏感性或疼痛-相關疾病或病癥
本文提供的組合物和方法與預防或治療疼痛或對疼痛和觸摸敏感 相關。疼痛或對疼痛和觸摸的敏感性可以涉及各種疾病，病癥或疾患， 包括，但不限于糖尿病性神經病，乳腺痛，銀屑病，濕疹，皮炎，燒 傷，皰滲后神經痛(帶狀皰疹)，傷害性疼痛，外周神經和中樞神經痛， 慢性痛，癌性和腫瘤痛，脊髓損傷，擠壓傷和創(chuàng)傷誘導的疼痛，偏頭 痛，腦血管和血管痛，鐮狀細胞病性疼痛，類風濕性關節(jié)炎性疼痛，
肌肉骨骼痛，包括治療骨關節(jié)炎和類風濕性關節(jié)炎的征候和癥狀，口 面部和顏面痛，包括牙齒，暫時性下頜骨病癥和癌癥相關的疼痛，腰 部或骨盆痛，外科切口相關疼痛，炎性和非炎性疼痛，內臟痛，精神 性疼痛和軟組織炎性痛，纖維肌痛-相關疼痛和反射性交感神經營養(yǎng)障 礙和因腎結石或尿道感染導致的疼痛。本發(fā)明的化合物和方法可以用
于治療慢性以及急性痛。慢性或急性痛可以為損傷，衰老或疾病的結 果。
其它離子通道涉及疼痛的接受或傳輸。例如，已經認識到涉及將
疼痛信號從感覺傳入神經細胞傳輸至中樞神經系統(tǒng)的突觸傳遞中的N-型鉤通道。已經證實某些特異性阻斷N-型鈣通道的天然存在的肽神經 毒素作為廣泛動物疼痛模型，包括炎癥和神經性疼痛模型中的極為有 效和有效的止痛藥起作用。可利用的證據提示N-型鈣通道阻滯劑至少 與阿片類物質同樣有效，避免了許多典型阿片類物質的副作用(例如呼 吸抑制)且止痛作用并非經歷耐受性的發(fā)生。
還證實5-a-誘導的神經類固醇誘導的有效外周止痛部分通過對 T-型0&2+通道的作用介導(Pathirathna等，Pain. 2005 Apr; 114 (3) : 429-43)。
還證實抗癲癇藥和相對選擇性T-類鈣通道阻滯劑乙琥胺高度有效 地反轉以常用細胞毒性劑紫杉醇或長春新堿導致的神經性疼痛 (Flatters和Bennett， Pain. 2004 May; 109 (1-2): 150-61)。
與電壓控制的鉤通道oc(2)-S蛋白質亞單位發(fā)生相互作用的新藥 普瑞巴林可有效和安全地治療糖尿病性神經病的疼痛(Richter等，J Pain. 2005 Apr; 6 (4): 253-60)。
上述內容證實接受或傳輸疼痛中涉及各種非-TRP通道。特別地， 上述內容證實疼痛中涉及各種鉤通道。
本發(fā)明提供了治療疼痛的方法，包括給予(i) TRPA1功能拮抗劑； (i i) TRPA1功能選擇性拮抗劑和TRPV1和/或TRPV3功能選擇性拮抗劑 的組合；或(iii)抑制TRPA1， TRPV1和TRPV3中的兩種或多種的功能 的全-TRP抑制劑。
除TRPV家族成員外，其它TRP通道也涉及疼痛接受和/或感覺。例 如，某些TRPM通道，包括TRPM8涉及疼痛的接受和/或感覺。因此，在 某些實施方案中，本發(fā)明的方法包括通過給予下列藥物治療疼痛(i) 選擇性TRPA1拮抗劑和選擇性TRPM8拮抗劑的組合；(ii)選擇性TRPA1 拮抗劑，選擇性TRPM8拮抗劑和選擇性TRPV1和/或TRPV3拮抗劑中的一 種或多種的組合；(iii)拮抗TRPA1和TRPM8功能的交叉TRP抑制劑； 或(iv)拮抗TRPAl， TRPM8和TRPV1和TRPV3中的一種或多種的功能的全 抑制劑。
不受理論約束，我們提出了TRPA1拮抗劑如何有助于減輕疼痛的一 種可能的機制。TRPA1拮抗劑可以導致細胞超極化。這可以導致神經元 發(fā)炎減輕和/或動作電位頻率減少。此外，TRPA1抑制劑可以減少鈣流 入受損細胞并且可以防止有時伴隨損失的基因表達中的鈣依賴性改 變。
b. 皮膚病或病癥。
鈣通過皮膚細胞質膜流入是參與皮膚表皮中細胞分化的關鍵信號 傳導要素(Dotto， 1999 Crit Rev Oral Biol Med 10: 442-457)。調 節(jié)或調制釣進入途徑和由此皮膚細胞生長的臨界控制點可以治療或預 防特征在于表皮增生的皮膚病或病癥，即一種疾患，其中皮膚細胞增 殖過快且難以分化。這類疾病包括銀屑病和基底和鱗狀細胞癌。據估 計影響達7百萬美國人的銀屑病使得患病者有輕度到極度不適感，對繼 發(fā)性感染的易感性增強和因受侵害區(qū)域的損害導致的心里影響 (Lebwohl和Ali, .2001 J Am Acad Dermatol 45: 487-498)。皮膚的 基底細胞癌(BCC)和鱗狀細胞癌(SCC)代表了在每年在美國診斷的所有 癌癥病例中的至少三分之一。每報導有1百萬以上的新病例并且發(fā)病率 正在增加。盡管相對無侵害性，但是緩慢生長的癌癥BCCs能夠造成顯著的局部組織破壞和受損。SCCs更具侵害性且由此代表了甚至更巨大
的并發(fā)癥。此外，由于8oy。的損害發(fā)生在頭頸部，而在肩部，背部或胸
部還占15。/。，所以皮膚的BCCs和SCCs對受侵害患者的外觀和生活質量具 有顯著影響。
許多皮膚病伴隨癢(瘙癢)。瘙癢和疼痛共有許多機械相似性。兩 者均與C-纖維活化相關，兩者均因溫度和炎癥介體的增加而強化并且 兩者均可以使用阿片類物質壓制。降低神經元興奮性，特別是C-纖維 的興奮性可以緩解與透析皮炎，妊娠，毒物常春藤，過敏反應，干燥 皮膚，化療和濕療相關的瘙癢。
c.神經或3申經變性疾病和病癥
神經變性疾病和病癥包括，但不限于阿爾茨海默病(AD)，帕金森 病，亨廷頓病，肌萎縮側索硬化(ALS)和其它因創(chuàng)傷或其它損傷，包括 衰老導致的腦功能障礙。
與鈣信號傳導相關的機制可能在許多因腦損傷導致的神經變性疾 病和病癥中改變。例如，來自具有AD的患者的成纖維細胞或T-淋巴細 胞與對照組相比具有連續(xù)展示出的從胞內儲存中釋放的Ca'+增加(Ito 等(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 :534-538; Gibson等 (1996) Biochem. Biophys. ACTA 1316:71-77; Etchenberrigaray等 (1998) Neurobiology of Disease, 5: 37-45)。與這些觀察結果一致， 已經證實與家族性AD(FAD)相關的早老素基因(PS1或PS2)中的突變增 加了 InsP3-介導的Ca"從內部儲存中釋放(Guo等(1996) Neuro Report, 8: 379-383 ; Leissring等(1999) J. Neurochemistry , 72:1061-1068 ; Leissring 等(1999) J. Biol. Chem. 274(46): 32535-32538 ;Leissring等(2000)J.Cell Biol. 149 (4): 793-797; Leissring等(2000) Pro" Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (15): 8590- 8593)。此外，據報導與AD中淀粉樣蛋白形成狀態(tài)淀粉 樣蛋白S肽產生增加相關的PS1或PS2中的突變與胞內鈣水平下降相關 (Yoo等(2000) Neuron, 27 (3) :561- 572)。
已經證實實驗性外傷性腦損傷啟動腦中Ca"濃度巨大紊亂，這可能
促成進一步的神經元損害。胞內Cah可以由許多不同的離子通道而升 高。進一步證實通道阻滯劑可以在急性創(chuàng)傷后期中給藥時有益于治療 神經運動功能障礙(Cheney等(2000) J. Neurotra職，17 (1): 83-91)。
d. 炎性疾病和病癥
本文提供的組合物和方法還可以用于涉及治療炎性疾病。這些疾 病包括，但不限于哞喘，慢性阻塞性肺疾病，類風濕性關節(jié)炎，骨關 節(jié)炎，炎癥性腸病，慢性阻塞性肺疾病，神經炎癥疾病，諸如多發(fā)性 硬化和免疫系統(tǒng)病癥。
炎性介體活化中性白細胞(PMN)部分通過增加胞質釣濃度實現(xiàn) ([Ca21》。特別認為某些鈣通道介導的鈣流入在PMN活化中起重要作 用。已經證實創(chuàng)傷增加PMN儲存-操縱的鈣流入(Hauser等(2000) J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48(4) -592-598)， 并且因強化的儲存操縱的鈣流入導致的[Ca2+] i延長升高可以改變與趨 化因子偶聯(lián)的刺激反應并且促成損傷后的PMN功能障礙。通過儲存操縱 的《丐通道調節(jié)PMN [Ca1i由此可以用于調節(jié)PMN-介導的炎癥和損傷， 休克或膿毒癥后剩余的心血管功能(Hauser等(2001) J. Leukocyte Biology 69 (1):63-68)。
周圍神經病，例如糖尿病性神經病為涉及神經元和炎性成分的特 定疾患。不受機械理論約束，本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用于這類周圍 神經病，包括，但不限于糖尿病性神經病。除在這類周圍神經病中的 應用(例如，減輕炎癥)外，本發(fā)明主題的抑制劑還可以用于減輕與周 圍神經病相關的疼痛。
神經源性炎癥通常在神經元超興奮性導致引起炎癥的肽類釋放時 發(fā)生。這些肽類包括物質P和CGRP。阻斷TRPA1可以降低神經元活性且 由此可以阻斷神經源性炎癥。
e. 癌癥和其它增殖性疾病
本文提供的組合物和方法還可以涉及這類惡性胂瘤，包括，但不 限于來源于淋巴網狀內皮細胞的惡性腫瘤，膀胱癌，乳腺癌，結腸癌， 子宮內膜癌，頭頸癌，肺癌，黑素瘤，卵巢癌，前列腺癌和直腸癌，
還有上述皮膚癌。胞內鈣水平可以在癌相比中的相比增殖中起重要作
用 (Weiss 等 (2001) International Journal of Cancer 92 (6): 877-882)。
此外，與癌癥或與癌癥這類相關的疼痛為慢性痛的重要原因。骨 癌，例如骨肉瘤特別被視為痛性的并且具有晚期骨癌的患者可能需要 鎮(zhèn)靜以便耐受強烈和持續(xù)性痛。因此，本發(fā)明的TRPAl拮抗劑代表了治 療疼痛，例如與癌癥或癌癥治療相關的疼痛的可能的重要治療劑。
由于TRPA1在轉化的相比中差別表達，所以TRPAl阻滯劑也可以影 響轉化相比的增殖且由此為緩解疾病的有用方式(參見Jaquemar等 (1999) JBC 274 (11): 7325-33)。因此，TRPAl拮抗劑可以緩解癌性 痛的原因和癥狀。
癌癥治療不僅為痛性的，而且它們甚至可能對健康組織產生毒性。 某些化療劑可以產生痛性神經病。因此，本發(fā)明的TRPAl拮抗劑代表了 治療疼痛和/或與導致神經病的癌癥治療相關的炎癥的可能的重要治 療劑。
前列腺素的主要功能在于保護胃粘膜。在這種功能中包括調節(jié)在 人胃細胞中起細胞增殖中關鍵作用的胞內鈣水平。因此，非類固醇抗 炎藥(NSAIDs)抑制前列腺素可以抑制胃細胞中鉤流入(Kokoska等 (1998) Surgery(St Louis) 124 (2): 429-437)。緩解炎癥的NSAIDs還 最有效地產生最大的胃腸損害(Canadian Family Physician, January 1998， p. 101)。因此，在特異性細胞類型中的獨立地調節(jié)鉤通道的能 力可以有助于減輕抗炎療法的這類副作用。另外或可選擇地，給予本 發(fā)明的TRPAl抑制性化合物可以與NSAIDs聯(lián)用，由此使用減少劑量的 NSAIDs促進疼痛緩解。
f.失禁
失禁為影響男性和女性的顯著社會和醫(yī)學難題。失禁有許多原因， 包括，但不限于年齡，妊娠，接觸放射，手術，損傷，癌癥，前列腺 擴大，前列腺增生和支撐尿道的膀胱或肌肉組織疾病。本發(fā)明關注治 療因上述情況導致的失禁和未知原因的失禁或因焦慮，應激或抑郁癥
導致的節(jié)欲。
本文提供的組合物和方法可以用于涉及治療失禁。失禁的動物模 型通常與自發(fā)性動作電位頻率增加和平滑肌細胞慢性去極化相關。證
據提示非-選擇性陽離子電流可以導致這種去極化。由于TRPA1 mRNA 在神經支配膀胱的神經元中表達，所以阻斷TRPA1可以有效地治失禁。 此外，通過刺激毒蕈堿性l型乙酰膽堿受體活化TRPAl(Ml,參見Jordt 等(2004) Nature 427: 260-265)?？苟抉麎A性藥為未治療諸如膀胱活 動過度這類疾患的眾所周知的藥物。因此，阻斷M1受體的下游靶標的 TRPA1可以緩解這類疾患，而沒有與毒覃堿性拮抗劑相關的副作用。
失禁可以由許多損傷，疾病和疾患中任意種導致。它們中的某些 可以導致明顯的不適感和疼痛以及失禁和失禁自身的窘迫。例如，膀 胱炎為也可能導致失禁的痛性疾患。就導致失禁和疼痛的損傷或疾患 而言，TRPA1抑制劑可以用于治療失禁并且緩解伴隨的疼痛。
就TRPA1抑制劑用于治療失禁的實施方案而言，本發(fā)明關注額外可 能的給藥途徑。例如，在某些實施方案中，可以通過導管或其它管腔 內裝置的尿道或膀胱直接給予TRPA1抑制劑。然而，在其它實施方案中， 可以通過口服，靜脈內，皮下等給予TRPA1抑制劑。
g. 溫度調節(jié)
由于離子流對動脈張力和松弛的作用，所以本發(fā)明的主題的化合 物還可以用于影響熱敏感性。此外，由于TRPA1通道為涉及冷刺激接受 和感覺的熱反應性的熱反應性通道，所以TRPA1拮抗劑可以用于調節(jié)通 常伴隨疼痛的涼，冷和溫度下降感覺。
h. 高血壓
電壓控制的鉤通道阻滯劑屬于最初研發(fā)用于治療高血壓的藥物類 型。這類阻滯劑抑制鈣運動入心臟和動脈的肌細胞。因為這些肌肉的 收縮需要鈣，所以這類阻滯劑通過降低心臟收縮反應的力并且松弛動 脈肌肉壁來降血壓。盡管TRPA1并非電壓控制的鈣通道，但是它仍然可 作為調節(jié)細胞和組織中鈣平衡以及其它離子平衡的手段。因此，本發(fā) 明的TRP A1拮抗劑可以用于治療高血壓。本發(fā)明主題的化合物的額外應
用包括可以通過松弛血管肌壁完全或部分緩解的其它疾患。典型的疾 患包括頭痛和偏頭痛發(fā)作。
如上所述，拮抗TRPA1功能的化合物可以用于治療許多疾病，損傷， 病癥和疾患。在某些實施方案中，TRPA1抑制劑可以用于治療疼痛。如 上所述，TRPA1抑制劑可以用于治療因損傷或疾病導致的疼痛和作為治 療結果經歷的疼痛。典型類型的疼痛包括傷害性疼痛，炎性疼痛和神 經性疼痛。這類疼痛可以為慢性的或急性的。TRPA1抑制劑可以用于治 療任意上述類型疼痛中的一種或多種。在某些實施方案中，TRPA1抑制 劑可以用于治療傷害性疼痛。在某些其它實施方案中，TRPA1抑制劑可 以用于治療炎性疼痛。在某些其它實施方案中，TRPA1抑制劑可以用于 治療神經性疼痛。
如上所述，TRPA1抑制劑特別可以用于治療與癌癥，骨關節(jié)炎，類 風濕性關節(jié)炎，皰滲后神經痛，燒傷和其它上述適應征相關的疼痛。 為了進一步例證，可以使用本發(fā)明化合物所針對的額外典型適應征包 括口腔疼痛，法布里病，復雜性區(qū)域性疼痛綜合征，胰腺炎和纖維肌 痛綜合征。
法布里病
手和足中不明的疼痛主訴可以為出現(xiàn)的特征。這些癥狀稱作肢端 感覺異常，因為它們反映出為該病頻繁表現(xiàn)的周圍神經病。這種疼痛 可以為發(fā)作性的和慢性的。急性發(fā)作與因接觸極端的溫度，應激，情 緒和/或疲勞引起。
纖維肌痛
纖維肌痛(FMS;纖維肌痛綜合征)為泛發(fā)性肌肉骨骼痛和疲勞病 癥。纖維肌痛的特征在于肌肉，韌帶和腱中的疼痛。該疾患對女性的 影響超過男性并且在所有年齡的人中發(fā)生?？傊瑩烙婩MS影響3-6。/。 的人群。
患者描述的與纖維肌痛相關的疼痛，為深度肌肉酸痛，搏動，急 痛和刺痛。疼痛有時包括強烈燒灼感。疼痛和僵硬通常在早晨或特定 肌群反復應用后惡化。
另外，從輕度到致殘的不同水平的疲勞通常與纖維肌痛相關。纖
維肌痛的其它癥狀包括胃腸癥狀。在約40 - 70。/。的FMS患者中發(fā)生腸易 激綜合征和IBS-類癥狀，諸如便秘，腹瀉，頻繁腹痛，腹部脹氣和惡 心。酸反流或胃食管反流病(GERD)以類似頻率發(fā)生。
FMS的另一種頻繁和虛弱性癥狀為慢性頭痛，包括偏頭痛和和緊張 型頭痛。約70。/。的FMS患者經歷這類疼痛。另外，F(xiàn)MS患者通常發(fā)生在顎， 牙齒和口腔中產生疼痛的顳下頜關節(jié)功能紊亂綜合征(也稱作TMJ)。
TMJ還可以加劇疼痛。
FMS的其它常見癥狀包括，但不限于經前期綜合征和痛性期；胸 痛；晨僵；認知或記憶缺陷；麻木和刺痛感；肌肉顫搐；膀胱過敏； 腫脹四肢感覺；皮膚敏感性；干眼和口干燥；頭暈；和協(xié)調受損。另 外，患者通常對氣味，噪音和亮光敏感。
FMS的原因仍然不明了。然而，該病的發(fā)作與感染(病毒或細菌性)， 類風濕性關節(jié)炎，狼瘡和曱狀腺功能減退相關。這些有趣鐵可能的觸 發(fā)器之間的相關性不明確。
FMS對患者的影響直接與疼痛和疲勞水平相關。疼痛可以如此嚴重 至干擾正常工作或家族功能作用。目前無法治愈FMS且最新的療法主要 集中于改善睡眠(緩解疲勞)和治療疼痛。本發(fā)明的化合物可以用于輔 助控制與FMS相關的疼痛。這類疼痛包括，但不限于顎，牙齒和口腔中 的口腔疼痛。這類疼痛還包括非口腔肌肉骨骼肌疼痛，因頭痛導致的
疼痛和因胃腸癥狀導致的疼痛。
復雜性區(qū)域疼痛綜合征(CRPS;也稱作慢性區(qū)域性疼痛綜合征)為 慢性疼痛疾患。CRPS在先稱作反射性交感神經營養(yǎng)不良(RSD)。 CRPS 為影響皮膚，肌肉，關節(jié)和骨的慢性痛性和進行性神經疾患。該綜合 征通常在受損四肢中發(fā)生，諸如斷腿或術后。然而，許多病例僅涉及 小的損傷，諸如扭傷，且有時不能鑒定沉淀性損傷事件。CRPS涉及與 損傷嚴重性不成比例的連續(xù)強烈疼痛。疼痛隨時間惡化而非改善。
盡管CRPS可以影響身體的各種區(qū)域，但是最常見的是影響臂，腿， 手或足。通常疼痛在肢體一部分中開始，并且隨時間擴散以便包括整
個肢體乃至包括不同的肢體。典型特征包括在受損肢體或身體部分的 皮膚顏色和溫度顯著變化，伴隨強烈燒灼感疼痛，皮膚敏感性，出汗 和腫脹。
一般而言，CRPS的特征為兩類。I型在沒有沉淀性神經損傷存在下 發(fā)生-不過，可以存在一定其它類型的沉淀性損傷。II型(在先稱作皮 膚灼痛)在神經損傷后發(fā)生。這些類型僅為描述性的并且不與癥狀或預 后相關。
美國國立神經病和卒中研究所(The National Institute of Neurological Disorders and Strokes, NINDS)報告有2% - 5%的周圍 神經損傷患者和12%-21%的身體一側麻痹(偏癱)患者發(fā)生作為并發(fā)癥 的反射性交感神經營養(yǎng)障礙。The Reflex Sympathetic Dystrophy Syndrome Association of America (RSDSA)報告該疾患在骨折后有 1-2%的發(fā)生。
與CRPS發(fā)作相關的沉淀性事件包括如下腦損害，心臟病，心臟 病發(fā)作，感染，身體一側麻痹(偏癱)，放療，反復運動病癥(例如，腕 管綜合征)，脊髓病癥，手術和創(chuàng)傷(例如，骨折，槍傷，交通事故)。 然而，在10-20%的病例中不能發(fā)現(xiàn)沉淀性事件。注意在CRPS發(fā)作前發(fā) 生的損傷可能顯著，也可能不顯著。
CRPS的癥狀可能在三個階段發(fā)展。急性階段在前l(fā)-3個月過程中發(fā) 生并且可以包括灼痛，腫脹，對觸摸的敏感性增加，受損區(qū)域中的毛 發(fā)增加和指曱生長，關節(jié)痛和顏色和溫度改變。營養(yǎng)不良階段可涉及 持續(xù)疼痛和胂脹。受影響的肢體通常感覺觸摸涼并且看起來淡藍色。
存在典型肌強直和消瘦(萎縮)以及早期骨損失(骨質疏松癥)。這些癥 狀通常在發(fā)生所述病癥后的3-6個月發(fā)生。在萎縮階段過程中，皮膚變 涼和有光澤，發(fā)生肌強直增加和虛弱且癥狀可以擴散至另一肢體。
其它癥狀包括灼痛，對觸摸極度敏感性，皮膚顏色改變(紅色或 淡藍色)，皮膚溫度改變(熱或冷)，關節(jié)痛，腫脹(水胂)，頻繁感染， 肌強直，肌痙攣，顫動，虛弱，皮炎，濕療，出汗過多和偏頭痛。TRPA1 抑制劑不僅可以用于治療與CRPS相關的疼痛，而且可以緩解這些其它
癥狀中的許多，包括皮炎，濕滲和偏頭痛。
具有CRPS的患者通?；加幸蚣膊ι钯|量的影響導致的抑郁癥 和焦慮。
目前無法治愈CRPS且由此治療的一般目的在于緩解痛性癥狀。醫(yī) 生可以開據局部止痛藥，抗抑郁藥，皮質類固醇和用于緩解疼痛的阿 片類物質的處方。然而，在這一點上，無單一藥物或藥物組合產生持 續(xù)長效的癥狀改善。其它治療可以包括物理療法，交感神經阻滯，脊 髓刺激和鞘內藥物泵以便通過脊髓遞送阿片類物質和局部止痛藥。
治療目的在于控制疼痛并且盡可能地維持受侵害的肢體運動能 力。設計通常合并各種治療方式的個體化的治療計劃。目前使用物理 療法，藥物，神經阻滯和心理支持?？梢允褂帽景l(fā)明的TRPA1抑制劑代 替目前的治療方式中的一種或多種，或除目前治療方式的一種或多種 外還使用本發(fā)明的TRPA1抑制劑。例如，TRPA1抑制劑可以用作目前藥
物的可替代選擇，但合并物理療法。
TRPA1抑制劑提供了控制CRPS患者疼痛的可替代選擇。TRPA1抑制 劑可以與任何目前用于治療CRPS患者的藥物聯(lián)用?？蛇x擇地，TRPA1 抑制劑可以用作可選擇的藥物。
除藥物療法外，CRPS患者通常接受物理療法。除物理療法外還可 以使用TRPA1抑制劑。物理療法對輔助保持受侵害的肢體關節(jié)活動度和 功能而言是重要的。例如使用TRPA1抑制劑適當控制疼痛不僅增加患者 的舒適感，而且有利于物理療法的介入。
與用于控制CRPS患者疼痛的特定療法組合無關，心理支持具有重 要意義。TRPA1抑制劑可以與心理支持聯(lián)用。
本發(fā)明的TRPA1抑制劑可用于治療CRPS。例如，本發(fā)明的TRPA1抑 制劑可以用于輔助緩解與CRPS相關的疼痛。TRPA1抑制劑可以單獨使用 或作為輔助控制疼痛和與CRPS相關的其它癥狀的總體治療方案的組成 部分使用?？刂艭RPS患者疼痛對維持有意義的生活質量而言是重要的。 此外，有效控制疼痛能夠使患者參與物理療法，以便輔助保持受侵害 肢體的運動能力和應用。
胰腺炎為胰腺的炎癥。胰腺為胃后部的大腺體并且接近十二指腸。 一般而言，消化酶不會變?yōu)榛钚缘模钡剿鼈冞_到小腸，其中它們開 始消化食物。但如果這些酶在胰腺內部變?yōu)榛钚缘模敲此鼈兙烷_始" 消化"胰腺自身。
急性胰腺炎突發(fā)，持續(xù)短時間期限并且通常自我消退。慢性胰腺 炎不會自我消退并且導致緩慢的胰腺破壞。任一形式均可以導致嚴重 并發(fā)癥，包括出血，組織損害和感染。
急性胰腺炎可以為嚴重的威脅生命的疾病，同時伴隨許多并發(fā)癥。
在美國每年發(fā)生約80, 000個病例并且這些病例中接近20%的特征為嚴 重性的。
盡管并非唯一的，但是急性胰腺炎通常由膽石或酒精濫用導致。 急性胰腺炎通常以上腹部中疼痛開始，可以持續(xù)幾天。疼痛可能是重 度的并且可以變成持續(xù)不斷的。疼痛可以局限于腹部或可以到達背部 和其它區(qū)域。有時并且對某些患者而言，疼痛為突發(fā)的和強烈的。其 它時間或對于其他患者而言，疼痛開始為輕度疼痛，在進餐后加劇。 具有急性胰腺炎的人通?？雌饋聿⑶腋杏X極為痛苦。其它癥狀可以包 括腹部腫脹和觸痛，惡心，嘔吐，發(fā)熱和疾脈。急性胰腺炎的嚴重病 例可以導致脫水和低血壓并且甚至可能導致器官衰竭，內出血或死亡。
在急性胰腺炎發(fā)作過程中，淀粉酶和脂肪酶的血液水平通常增加 至少3倍。葡萄糖，鈣，鎂，鈉，鉀和碳酸氫根的血液水平也可能發(fā)生 變化。
目前的治療取決于發(fā)作的嚴重性。 一般而言，設計治療用于支持 重要身體功能，控制疼痛和預防并發(fā)癥。盡管急性胰腺炎一般在幾天 內消退，但是通常需要控制發(fā)作過程中的疼痛。TPRV3抑制劑可以用于 緩解與急性胰腺炎相關的疼痛。
慢性胰腺炎-如果對胰腺的損傷持續(xù)發(fā)生，那么可以形成慢性胰腺 炎。慢性胰腺炎在消化酶攻擊和破壞胰腺和附近的組織時發(fā)生，導致 瘢痕形成和疼痛。慢性胰腺炎可以由酒精中毒或阻滯的，受損的或狹 窄的胰腺管導致。另外，遺傳因素看起來影響該病，并且在某些病例
中尚無可鑒定的原因(所謂的特發(fā)性胰腺炎)。
具有慢性胰腺炎的大部分人具有腹痛。疼痛在進餐或飲水時可能 加劇，擴散至背部或變成持續(xù)不斷并且可能致殘。其它癥狀包括惡心， 嘔吐，體重減輕和脂糞。
緩解疼痛為治療慢性胰腺炎的第一步。 一旦疼痛得到控制，就考 慮實施高碳水化合物和低脂肪膳食計劃。胰酶可以用于輔助補償減少 的從受損胰腺中產生的酶。有時需要胰島素或其它藥物控制血糖。
盡管一般使用藥物療法控制疼痛，但是手術對緩解疼痛而言可能 是必要的。有必要實施手術以便排空擴大的胰腺管，乃至除去部分嚴 重受損的胰腺。
慢性胰腺炎經常伴有疼痛。例如，在約75%的酒精性慢性胰腺炎患 者，50%的遲發(fā)性特發(fā)性慢性胰腺炎患者和100%的早發(fā)性特發(fā)性慢性胰 腺炎患者中存在疼痛(DiMagno， 1999， Gastroenterology 116(5): 1252- 1257)。
少數具有疼痛的患者具有易于鑒定的損害，它們相對易于采用手 術或內窺鏡方式治療。在其他患者中，通常認為疼痛因不同原因導致， 包括胰內壓升高，局部缺血和纖維化。然而，不受理論約束，這些現(xiàn) 象可能并非疼痛的主要原因，而疼痛可能因對神經束膜的損害和隨后 的神經接觸介體和炎癥產物誘導的神經元致敏背景而產生。
由于有效控制疼痛對慢性胰腺炎患者的重要性，所以治療痛性癥 狀的其它療法是重要和有用的。TRPA1抑制劑可以用于控制與慢性胰腺 炎相關的疼痛。TRPA1抑制劑可以單獨使用或作為控制具有慢性胰腺炎 的患者的總體治療計劃的組成部分使用。例如，可以將TRPA1抑制劑與 作為為控制具有慢性胰腺炎患者設計的治療方案的組成部分的胰酶和 /或胰島素一起給藥。
口腔疼痛為可以使用本發(fā)明TRPAl抑制劑治療的特定疼痛類型。術 語"口腔疼痛"意旨任何在口腔，咽喉，唇，齒齦，舌或顎中的疼痛。
該術語的使用與疼痛的原因和口腔疼痛是特定疾病，損傷或疾患的原 發(fā)癥狀還是繼發(fā)癥狀無關。
口腔疼痛具有許多可能的原因。在某些實施方案中，口腔疼痛因 口腔，顎，牙齒，齒齦，咽喉，唇或舌損傷或疾病導致。在某些其它 實施方案中，口腔疼痛是主要侵害身體另一部分的損傷或疾病的后果。 在其它實施方案中，口腔疼痛是用于治療口腔或身體另一部分損傷或
疾病的療法的副作用。TRPA1抑制劑用于治療口腔疼痛，與其原因無關。 所有疼痛均對患者的健康和良好的生命質量具有嚴重的負面影 響。然而，口腔疼痛可能對患者健康和生命質量具有特別嚴重性的影 響。特別地，口腔疼痛可以干擾合適的飲食和^L水。因此，具有口腔
疼痛的個體易于發(fā)生體重減輕，營養(yǎng)不良和脫水。在某些情況中，口 腔疼痛可以如此嚴重地干擾水化和營養(yǎng)，以至于需要靜脈內，鼻胃或
其它人工支持(例如，管飼和/或水化)。另外，口腔疼痛可以干擾適當 的口腔衛(wèi)生。口腔衛(wèi)生不良可以進一步加劇口腔疼痛的許多原因，例 如，因感染或膿腫導致的口腔疼痛。
某些實施方案中，口腔疼痛因口腔中的潰瘍，瘍或其它損害導致。 例如，口腔疼痛可以由舌，齒齦，唇，咽喉或口腔中的其它組織的潰 瘍，瘍或其它損害導致?？蛇x擇地或另外，口腔疼痛可以由舌，齒齦， 唇，咽喉或口腔中的其它組織炎癥導致。炎癥可以伴隨潰瘍或其它損 害，或炎癥可以在潰瘍或其它損害形成前或沒有潰瘍或其它損害存在 下發(fā)生。
本發(fā)明關注通過經本文所述的任何給藥途徑給予TRPA1抑制劑治 療口腔疼痛。在某些實施方案中，通過口服給予用于治療口腔疼痛的 TRPA1抑制劑。優(yōu)選口腔給予TRPA1抑制劑用于治療口腔疼痛的制劑為 漱口藥，凝膠，牙膏或其它糊劑，液體，錠劑，用拭子或結合護口器 或牙科裝置。給藥的制劑和特定方法取決于口腔疼痛的原因，患者的 總體健康狀況和主要的醫(yī)療條件，疼痛的嚴重性和患者同時接受的其 它藥物或療法。醫(yī)務人員容易地確定用于特定患者的最佳制劑。
下文提供的疾患指定例證可以導致口腔疼痛的不同病因的損傷和 疾病的范圍。本發(fā)明關注給予本發(fā)明的TRPA1抑制劑治療或預防口腔疼 痛。在某些實施方案中，可以口服給予本發(fā)明的化合物，例如作為凝
膠，糊劑，漱口藥或其它口服制劑，以便有助于治療或預防與4壬4可損 傷，疾病或疾患相關的口腔疼痛。與特定的制劑無關，本發(fā)明關注通 過例如直接施用于受侵害的口腔區(qū)域，沖洗整個口腔，用拭子，用注 射器或在護口器或其它牙科裝置上的給藥。
就這些疾患中的任意種而言，本發(fā)明關注單獨給予TRPA1抑制劑或 將其與適合于特定損傷或疾患的一種或多種其它化合物或治療方案聯(lián)
合給予。
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎，也稱作口炎，為許多癌癥治療中的常見并發(fā)癥。接 受全身化療和/或局部放療的患者通常發(fā)生口腔粘膜的極度疼痛的潰 瘍。這種副作用并不限于患有頭頸癌的患者，而是使侵害全部化療患 者的約40%的虛弱'性副作用(Prevention and Treatment of Oral Mucositis in Cancer Patients, 1998, Best Practice: 2, l-6頁)。
口腔粘膜炎為極度疼痛的。另外，口腔粘膜炎干擾癌癥患者的適 當營養(yǎng)和水化。由于進行化療和/或放療的患者的已經受損的狀態(tài)，所
以進一步干擾營養(yǎng)和水化可能嚴重地損害患者的健康。此外，這些潰 瘍產生增加的感染風險。這種風險在免疫系統(tǒng)受損的患者中是特別嚴 重的。處于發(fā)生機會感染的特定風險中的患者的實例為治療包括除去 一個或多個淋巴結的患者，預先接受為準備骨髓或干細胞移植而進行 的高劑量化療的患者和具有潛在的免疫抑制病癥(例如，HIV或肝炎) 的患者。 口瘡
口瘡，也稱作口瘡性潰瘍(口瘡)可以相對小和看不見。然而，它 們通常疼痛，持久和惱人。口瘡為可以使進食和交談不適的口腔中的 表淺潰瘍。它們可以在舌，軟上腭，面頰或唇內或齒齦基上出現(xiàn)?？?瘡不同于感冒瘡的方面在于它們出現(xiàn)在口腔的內部軟組織上，但并非 接觸傳染的。相反，感冒瘡幾乎始終從唇上開始并且通常不會擴散至 口腔的軟組織。此外，感冒瘡由一種形式的皰瘆病毒導致，使得它們 具有極大的接觸傳染性。
研究人員一般認為應激或組織損傷可以導致口瘡發(fā)疹。在某些情 況中，小的損傷，例如口腔內咬傷或食用粗糙的食物可以引起口瘡。
其它原因可以包括(i)有缺陷的免疫系統(tǒng)功能；(ii)營養(yǎng)問題， 諸如維生素B-12，鋅，葉酸或鐵缺乏；(iii)胃腸道疾?。?iv)食 物過敏；或(v)月經周期。
口瘡可以在任何年齡段上發(fā)生，但通常它們首先出現(xiàn)在IO- 40歲 之間。盡管口瘡一般會自我消退，但是它們可以使人極為不適。牙科/ 牙膿腫
感染或腐敗可以導致膿肺。膿腫可以具有嚴重的牙科和醫(yī)學后果。 例如，牙膿腫導致的嚴重感染可以導致竇或全身感染。此外，膿腫可 以導致需要拔出一顆或多顆牙齒。拔牙可以因明顯的齲齒或因為感染 過重而難以在有壞牙存在下完全治療而是必需的。
與最終的結果無關，牙膿腫可以是極端疼痛的。不僅是不適感的 疼痛，而且可以干擾適當的營養(yǎng)和水化。減輕與牙膿腫相關的疼痛的 方法和組合物可以對其控制提供明顯的有益性。
胃食管反流疾病
胃食管反流疾病或GERD在食管下括約肌(LES)無法適當閉合和胃 內容物滲漏回食道時發(fā)生。LES是作為食道與胃之間的閥門起作用的食 道下部的肌肉環(huán)。當反流的胃酸接觸食道內層時，它在胸或咽喉中產 生燒灼感。這通常顯示為胃灼熱。反流的流體甚至可以在返回到口腔 這被嘗到，即通常稱作酸消化不良的感覺。
盡管偶然的胃灼熱并不常見并且不一定表示GERD，但是每周發(fā)生 兩次以上的胃灼熱可能是GERD的征兆。除胃灼熱和消化不良的不適感 外，GERD還可以導致其它嚴重的健康問題。例如，隨時間的推移，酸 反流回咽喉可以導致口腔，齒齦，舌，咽喉或唇中的口瘡，損害或潰 瘍。這些損害可以產生明顯的疼痛，可以干擾營養(yǎng)和水化并且可以使 人易受感染。
給予本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于治療因GERD造成的損吝產生 的口腔疼痛。TRPA1抑制劑可以作為治療方案的組成部分，其中給予
T RP A1抑制劑以便有助于控制口腔損害的不適感，同時將其它活性劑或 治療干預用于控制GERD。 齦口炎
齦口炎為涉及因病毒感染導致的口腔和齒齦上的潰瘍的病癥。齦 口炎的特征在于齒齦和粘膜炎癥和多發(fā)性口腔潰瘍。炎癥和潰瘍因病 毒感染，特別是那些導致常見兒童疾病的病毒感染，諸如皰滲病毒(感 冒瘡和急性皰滲性口炎)和皰滲性口炎病毒(手足口病和皰滲性咽峽 炎)所致。這些病毒產生在齒齦組織(牙齦)，面頰內層(頰粘膜)或口腔 中的其它軟組織上具有淺灰色或淺黃色基底和淺紅色邊緣的表淺潰 瘍。盡管該疾患可以發(fā)生在任何年齡的患者中，但是特別在兒童中常 見。
因這些病毒導致的口腔潰瘍可能極為疼痛。這些潰瘍通常伴隨發(fā) 熱。大體上，該疾患可以持續(xù)幾周才能消退。對齦口炎7>認的治療集 中于減輕因口腔潰瘍導致的疼痛。這對可能因其不適感而拒絕食物或 液體的兒童而言特別重要，由此使他們尤其易發(fā)生脫水。本發(fā)明的化 合物可以用于治療于這些口腔潰瘍相關的疼痛。
鵝口齊
鵝口瘡是一般由因口腔粘膜中酵母真菌白色假絲酵母(Candida albicans)導致的真菌感染。嚴格地講，鵝口瘡僅為嬰兒口腔中暫時 性的假絲酵母屬(Candida)感染。然而，該術語一般應用指在兒童和 成年人口腔和咽喉中的真菌感染。
假絲酵母屬存在于幾乎半數群體的口腔中。例如，每位戴有補齒 的人存在假絲酵母屬，但不一定患有任何疾病作用。 一般而言，假絲 酵母屬不會產生問題，直到在口腔中存在化學改變，使得有利于假絲 酵母屬的生長超過了一般棲息于口腔和咽喉中的其它微生物。足以允 許假絲酵母屬生長的口腔化學改變可以作為服用抗生素或化療劑的副 作用發(fā)生。患者的整體健康也可以影響口腔化學。HIV感染，糖尿病， 營養(yǎng)不良，老化和免疫缺陷為典型情況，它們可以轉換口腔化學以便 足以允許口腔和咽喉中假絲酵母屬過度生長。
除了 口腔化學改變之后，補齒不充分適合的人可能持續(xù)在其口腔 粘膜中發(fā)生破損。這些破損為口腔和唇中的假絲酵母屬感染提供了機 會。
鵝口瘡在口腔中產生白霜色或黃斑。這些斑點為輕度隆起的。如 果刮取這些斑點，那么它們趨向于出血。鵝口療可以極為不適并且可 能導致口腔和咽喉中的燒灼感。這種不適感可以干擾水化和營養(yǎng)。此 外，這種不適感可以干擾適當的口腔衛(wèi)生，諸如刷牙和剔牙。
鵝口瘡的標準治療通過給予抗真菌藥來進行。可以對口腔直接給 予這些活性劑，例如，吸入的軟錠劑形式或在吞咽前在口腔中保持的 口服混懸液劑。實例包括制霉菌素(例如，制霉素口服混懸劑)，兩性
霉素(例如，兩性霉素B錠劑)或咪康唑(例如，達克寧口服凝膠)。除標 準抗真菌療法外，還可以給予本發(fā)明的化合物以便控制與鵝口掩相關 的疼痛和不適感。 舌炎
舌炎為因炎癥導致的舌異常。舌炎在舌的急性或慢性炎癥存在時 發(fā)生。它導致舌腫脹和顏色改變。在舌表面上的指狀突出物(乳頭)消 失，使舌表現(xiàn)出平滑。舌炎有許多原因，包括，但不限于如下細菌 感染；病毒感染(包括口單純皰滲)；損傷或創(chuàng)傷；接觸刺激物(例如煙 草，酒精，熱食物，香辛料調味品)；過敏反應；維生素或礦物缺乏(例 如，缺鐵性貧血，惡性貧血和其它B-維生素缺乏)；或作為其它疾病或 病癥的副作用。
舌炎的癥狀包括腫脹，酸痛和舌壓痛。另外，舌通常改變外觀， 變平滑和顏色暗紅。作為腫脹和不適感的結果，舌炎通常使得咀嚼， 吞咽和說話困難。
治療舌炎的典型療法取決于炎癥的主要原因。與可以給予的特定 的抗生素，抗炎藥或抗病毒藥以抗擊舌炎的主要原因無關，可以給予 本發(fā)明的化合物以便減輕與舌炎相關的疼痛和不適感。減輕與舌炎相 關的疼痛在它干擾適當的營養(yǎng)和水化或在它干擾或阻止了適當的口腔 衛(wèi)生時尤其是重要的。 皮肢病
口腔潰瘍可以因任意許多皮膚病導致。例如，扁平苔癬，天皰瘡， 類天皰瘡和多形紅斑可以導致口腔潰瘍。這類口腔潰瘍可以產生明顯 的疼痛，而這種疼痛可以使用本發(fā)明的化合物治療。
減輕疼痛可以輔助有利于愈合。這對具有發(fā)生口腔潰瘍的天皰瘡 和類天皰瘡的患者而言尤其重要。這類患者易于免疫抑制并且由此可 能更易發(fā)生來自口腔中的損害的機會感染。
胃腸疾病
口腔潰瘍可以因任意許多胃腸疾病導致。對適當的消化，胃酸和 其它消化性酸的控制和流動，運動性和排除產生干擾的疾患可以導致 口腔潰瘍和其它損害。在某些情況中，口腔潰瘍?yōu)樗峄虿糠窒澄?反流入食道的結果。在其它情況中，口腔潰瘍因嘔吐所致。在其它情 況中，口腔潰瘍因維生素缺乏，礦物缺乏或胃腸疾病繼發(fā)的其它營養(yǎng) 缺乏而發(fā)生。在其它情況中，口腔潰瘍?yōu)樘卣髟谟诰S胃腸疾病的復雜 病原的組成部分。
因胃腸疾病或作為胃腸疾病的組成部分產生的口腔潰瘍可能極端 疼痛。它們可以破壞患者適當的營養(yǎng)和水化，該患者的胃腸疾病已經 對膳食產生了多種局限性。因此，減輕與這些口腔潰瘍相關的不適感 和疼痛的方法和組合物為具有潛在胃腸疾患的患者提供了重要的有益 性。
可以導致炎癥，損害或潰瘍的典型胃腸疾患包括，但不限于克羅 恩病，潰瘍性結腸炎，腸易激綜合征，口炎性腹瀉和瘡滲樣皮炎
(Dermatitis herpetiformis)?？梢允褂蒙攀?，應激控制和藥物控 制這些疾患的主要癥狀。本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于輔助控制因任 意這些胃腸疾患導致的口腔炎癥，損害或潰瘍的疼痛和不適感。 類風濕病
幾種類風濕病的后果在于口腔潰瘍。例如，狼瘡，貝切特綜合征， Sweet綜合征和萊特爾病可以導致口腔潰瘍。這類口腔潰瘍可以產生可 以使用本發(fā)明化合物治療的明顯口腔疼痛。
斯耶格倫綜合征
口腔干燥為與斯耶格倫綜合征相關的常見癥狀?？谇桓稍镆蛲僖?產生減少所致。唾液是防護和保護口腔和口腔功能的主要體液。盡管
唾液大部分為水，但是它還包含60種以上用于下列重要功能的物質 保護，潤滑和清潔口腔粘膜；輔助咀嚼，吞咽和談話；防止牙齦腐敗； 防止口腔，牙齒和咽喉受到細菌，酵母和病毒感染；支持和有利于味覺。
由于唾液的重要功能，所以唾液分泌減少可以產生許多問題。如 果這種情況持續(xù)數月或數年，那么患者可能發(fā)生口腔并發(fā)癥，諸如吞 咽困難，嚴重和進行性齲齒，口腔感染(特別是真菌)或它們的組合。 這些情況中的許多可以單獨產生不適感，并且還可以產生口腔損害或潰瘍。
可利用幾種藥物輔助增加具有口腔干燥的患者唾液分泌。毛果蕓 香堿(Salagen )和西維美林(Evoxac )減輕了 口腔干燥癥狀并且增加 了唾液分泌。然而，這些藥物不會預防齲齒或治療與口腔干燥癥狀或 效應相關的口腔疼痛。本發(fā)明的化合物可以用于治療與口腔干燥相關 的疼痛。
維生素或礦物缺乏
在某些情況中，維生素或礦物缺乏可以導致口腔中的潰瘍或其它 潰瘍。例如，維生素C缺乏可以導致特征為壞血病的口腔損害。維生素 Bl, B2， B6或B12缺乏也可以導致口腔損害。另外，鋅，葉酸，鐵，硒 或4丐缺乏可以導致口腔損害。
在某些實施方案中，維生素或礦物缺乏為導致口瘡的誘發(fā)因素。 然而，維生素或礦物缺乏也可以產生其它類型的口腔潰瘍和損害。與 損害的性質無關，本發(fā)明的化合物可以用于輔助控制相關疼痛。
過敏反應
過敏反應有時導致口瘡和其它口腔損害。因過敏反應導致的口腔 損害在人口腔組織接觸致病過敏原時更為可能。然而，過敏原與口腔 組織之間的接觸不一定是產生口腔損害所需要的?？梢詫е驴谇粨p害 的典型過敏原包括食物過敏原，諸如水果和蔬菜(例如，草莓，檸檬，
橙，菠蘿，蘋果，無花果，蕃茄)；貝類；巧克力；堅果；乳制品(例 如，奶和干酪)；谷物(例如，蕎麥，小麥，燕麥，黑麥，大麥，谷物
中發(fā)現(xiàn)的谷蛋白)；添加劑(例如，肉桂醛(矯味劑)，苯甲酸(防腐劑)； 牙膏(例如，某些人對在某些牙骨和漱口液中發(fā)現(xiàn)的十二烷基硫酸鈉敏 感)；非類固醇抗炎藥(NSAID;某些人具有導致對作為對該類藥物反應 的口瘡敏感)。
其它典型疾患和損傷
上述僅為產生或導致炎癥，損害，潰瘍或其它口腔疼痛來源的疾 病和疾患的典型。在其它實施方案中，口腔疼痛因口腔，顎，唇，齒 齦或牙齒損傷所致。在其它實施方案中，口腔疼痛因口腔手術所致， 例如，癌癥手術，拔牙或顎再塑。潰瘍導致口腔潰瘍和由此的口腔疼 痛的其它疾患包括，但不限于水痘(chickpox)，帶狀皰滲，傳染性 單核細胞增多癥，梅毒，肺結核，急性壞死性牙齦炎和口灼傷綜合征。 另外，導致免疫系統(tǒng)受損的疾患使患者處于口腔炎癥，損害或潰瘍等 并發(fā)癥風險中。HIV感染，AIDS和肝炎均為破壞免疫系統(tǒng)并且潰瘍導致 口腔損害或潰瘍的疾患。另外，服用免疫抑制劑的個體(例如，器官移 植接受者，骨髓接受者，千細胞接受者，具有自身免疫疾病的患者) 處于發(fā)生痛性口腔損害的風險增加。
本發(fā)明關注本發(fā)明的TRPA1抑制劑在治療口腔疼痛中的應用-與潛 在原因無關。在某些實施方案中，可以通過口服給予治療口腔疼痛的 TRPA1抑制劑，例如，作為糊劑，漱口液，凝膠或其它液體制劑。在某 些實施方案中，通過拭子，護口器或其它牙科裝置給予糊劑，漱口液, 凝膠或其它液體制劑。在某些實施方案中，將所述的制劑通過局部施 用于口腔，但不攝入。例如，可以使用不吞咽的漱口劑。與制劑和給 藥途徑無關，本發(fā)明關注給予本發(fā)明主題的T R P A1抑制劑作為總體治療 策略的組成部分，該策略還包括適合于導致口腔炎癥，損害或潰瘍的 特定疾病或疾患的療法。
TRPA1抑制劑可用于治療因任意前述損傷，疾病或疾患導致的口腔
疼痛。另外，申請人注意到本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以用于治療 上述主要疾病和疾患自身。特別地，TRPA1抑制劑可以用于治療炎癥并 且由此用于治療具有炎性成分的疾病或疾患，無論這些癥狀是自身在 口腔中表現(xiàn)還是在身體的其它部分表現(xiàn)，只要它們本身可以用本發(fā)明 主題的TRPA1抑制劑治療。因此，本發(fā)明關注和認識到對某些疾患而言， 給予TRPA1抑制劑的治療作用可以為雙重的(i)減輕與疾病或疾患的 一種或多種癥狀相關的疼痛；和(ii)治療主要癥狀或疾病。
疾病和損傷模型
拮抗TRPA1功能的化合物可以用于預防和治療任意上述損傷，疾 病，病癥或疾患。除這些化合物活性的體外測定外，易于在一種或導 致動物模型中測試其功效。作為實例，存在大量眾所周知的動物模型。 可以選擇一種或多種合適的動物模型(例如，就特定適應征而言適合 的)。
一般可以將疼痛分類為慢性痛和急性痛。這兩類疼痛在期限和潛 在機制上不同。慢性痛不僅是持久的，而且一般性對使用目前可利用 的止痛藥，非類固醇抗炎藥和阿片類物質治療不會有充分反應。
慢性痛的兩個廣泛的亞類為神經性疼痛和癌性痛。Wang和 Wang (2003) Advanced Drug Delivery Reviews 55: 949—965。神經 性疼痛意旨因中樞系統(tǒng)(例如，神經，脊髓，CNS， PNS)損害(例如，因 疾病，損傷，老化)導致的疼痛。與癌癥相關的疼痛可以因腫瘤浸潤， 神經壓電，腫瘤分泌的物質或特定的治療方案(例如，；改療，化療劑， 手術)導致。
通常還根據機制將疼痛分類為傷害性的，炎性的或神經性的。傷 害性疼痛為例如溫度改變或極端，接觸酸，接觸化學試劑，接觸力或 接觸壓力后經歷的疼痛。痛性刺激的接受將沖動送至背根神經節(jié)。反 應一般為反射性反應(例如，射開刺激)和情緒反應的組合。炎癥為免 疫系統(tǒng)對損傷或疾病的反應。作為對損傷或疾病的反應，補充免疫系 統(tǒng)的巨噬細胞，肥大細胞和其它細胞。這種細胞浸潤與細胞因子和其
它因子(例如，組胺，5-羥色胺，緩激肽，前列腺素，ATP， H+,神經 生長因子，TNFa,內皮縮血管肽，白細胞介素)的釋放一起可以導致 發(fā)熱，腫脹和疼痛。炎癥疼痛的目前治療包括Cox2抑制劑和阿片類物 質。神經性疼痛意旨因神經系統(tǒng)(例如，神經，脊髓，CNS， PNS)損害(例 如，因疾病，損傷，老化)導致的疼痛。神經性疼痛的目前治療包括三 環(huán)抗抑郁藥，抗驚厥藥，Na+通道阻滯劑，NMDA受體拮抗劑和阿片類物質。
存在大量用于研究疼痛的動物模型。各種模型均使用不同活性劑 或操作以便刺激由損傷，疾病或其它疾患導致的疼痛。 Blackburn-Munro (2004) Trends in Pharmacological Sciences 25: 299-305 (例如，參見表l)。然后可以觀察受攻擊的動物的行為特征。 易于通過在有與沒有測試化合物或操作存在下受攻擊動物的行為特征 來測試能減輕動物疼痛的化合物或操作。
用于研究慢性痛的典型行為試驗包括自發(fā)性疼痛，異常性疼痛和 痛覺過敏試驗。文獻同上。為了評價自發(fā)性疼痛，可以觀察姿勢，步 態(tài)，防傷害性征兆(例如，舔爪，過度修飾，過度探查行為，受損身體 部分保護和自殘)。為了測定引起的疼痛，可以在接觸熱(例如，熱損 傷模型)后檢驗行為反應。
疼痛的典型動物模型包括，但不限于Chung模型，角叉菜膠誘發(fā)的 痛覺過敏模型，弗氏完全佐劑誘發(fā)的痛覺過敏模型，熱損傷模型，福 爾馬林模型和Bennett模型。神經性疼痛(無炎癥)的Chung模型包括結 扎一條或多條脊神經。Chung等(2004) Methods Mol Med 99: 35-45; Kim和Chung(1992) Pain 50: 355-363。結扎脊神經導致動物的各種 行為改變，包括熱痛覺過敏，冷異常性疼痛和進行性疼痛?？梢詫Y
在下觀察到的減少了這些結扎誘發(fā)的行為改變。
角叉菜膠誘發(fā)的痛覺過敏和弗氏完全佐劑(FCA)誘發(fā)的痛覺過敏 為炎性疼痛才莫型。Walker等(2003) Journal of Pharmacol Exp Ther 304: 56-62; McGaraughty等(2003) Br J Pharmacol 140: 1381 -1388;
Honore等(2005) J Pharmacol Exp Ther?？梢詫遣娌四z或FCA攻擊
在下觀察到的減少了熱痛覺過敏。此外，還可以在這些模型中評價化 合物拮抗TRPAl功能以便減輕冷和/或機械性超敏反應的能力。 一般而 言，認為角叉菜膠誘發(fā)的痛覺過敏模型模擬急性炎性疼痛，并且認為 CFA模型模擬慢性痛和慢性炎性疼痛。
Bennett模型使用延長的爪局部缺血反映慢性痛。Xanthos等 (2004) J Pain 5: Sl。這提供了慢性痛的動物模型，包括術后痛，復 雜性區(qū)域性疼痛綜合征和反射性交感神經營養(yǎng)障礙。延長的局部缺血 誘導動物的行為改變，包括對機械刺激的痛覺過敏，對冷的敏感性， 疼痛行為(例如，搖動，舔和/或喜爪)和痛覺過度。可以對受攻擊動物
察到;減少了任意或所有這些行為。可以在用于模擬術后痛的熱損傷 或UV-灼傷模型中進行類似的實驗。
偏頭痛與明顯的疼痛和不能完成正常工作相關。存在偏頭痛的幾 種模型，包括大鼠神經神經源性炎癥模型(參見Buzzi等(1990) Br J Pharmacol; 99: 202—206)和Burstein才莫型(參見Strassman等，(1996) Nature 384: 560-564)。
神經性疼痛的其它模型包括基于脊髓損傷的中樞痛模型。慢性痛 通過誘導脊髓損傷，例如通過使重量落在脊髓手術暴露區(qū)上(例如落重 法模型)。脊髓損傷還可以通過粉碎或壓迫脊髓，通過遞送神經毒素， 使用光化學或通過切成對半來誘導。Wang和Wang(2003)。
神經性疼痛的其它模型包括周圍神經損傷模型。術語周圍神經病 包括各種疾病，疾患和損傷。本領域技術人員容易根據研究中的特定 疾患或疾病選擇合適的模型。典型模型包括，但不限于神經瘤模型， Bennett模型,Seltzer模型，Chung模型(在L5或L5/L6上結扎)，坐骨 神經水凍神經松解術模型，下尾部主干切除術模型和坐骨神經炎性神 經炎模型。文獻同上。
炎性疼痛的典型模型包括足底內緩激肽注射大鼠模型。簡言之，
使用Hargreave儀評價動物的基線熱敏感性。然后全身給予TRPA1阻滯 劑。隨后將緩激肽注入爪并且使痛覺過敏發(fā)生。然后在接下來的幾小 時內的多個時間點測定熱逃逸潛伏期(Chuang等，2001; Vale等，2004)。 還可以利用與特定疾病相關的神經性疼痛的典型模型。糖尿病和 帶狀皰滲為通常伴隨神經性疼痛的兩種疾病。甚至在急性帶狀皰滲發(fā) 作后，某些患者仍然持續(xù)患有帶狀皰滲后神經痛并且經歷持續(xù)數年的 持續(xù)性痛?？梢栽趲畎挐B后神經痛模型(PHN)中研究由帶狀皰滲導致 的神經性疼痛和/或帶狀皰療后神經痛。可以在糖尿病小鼠模型以及糖 尿病性神經病的化學誘導的模型中研究糖尿病性神經病。Wang和 Wang (2003)。
如上所述，癌性痛可以具有任意許多原因且存在大量檢驗涉及例 如化療劑或腫瘤浸潤的癌性痛的動物模型。毒素相關的癌性痛的典型 模型包括長春新堿-誘導的周圍神經病模型，泰素-誘導的周圍神經病 模型和順鉑-誘導的周圍神經病模型。Wang和Wang(2003)。由肺瘤浸潤 導致的癌性痛的典型模型為癌癥侵入疼痛模型(CIP)。文獻同上。
原發(fā)性和轉移性骨癌與巨痛相關。存在幾種骨癌性痛的模型，包 括小鼠股骨癌性痛模型(FBC)，小鼠跟骨癌性痛模型(CBC)和大鼠脛骨 癌模型(TBC)。文獻同上。
疼痛的其它模型為福爾馬林模型。類似于角叉菜膠和CFA模型，福 爾馬林模型包括將刺激物經真皮內或腹膜內注入動物。福爾馬林注射 液，即37%的曱醛溶液為最常用的真皮內爪注射的試劑(福爾馬林試 驗)。將O. 5- 15%福爾馬林的溶液(通常約3. 5%)注入前-或后爪背側或 足面，在注射后的約60分鐘產生了增加和減少強度的雙相痛性反應。 典型反應包括舉，舔，嚙咬或搖動爪。這些反應被視為傷害性的。持 續(xù)3-5分鐘的反應初期(也稱作早期)可能是因傷害感受器的直接化學 刺激所致。隨后是10-15分鐘，在此過程中，動物幾乎未展示出暗示 傷害感受的行為。該反應的第二期(也稱作晚期)在福爾馬林注射后約 15 - 2O分鐘開始并且持續(xù)20-4O分鐘，最初為傷害感受行為的次數和 頻率升高，達到峰值，然后減少。這些傷害性感受行為的強度依賴于
所用福爾馬林的濃度。第二期包括致敏期，在此過程中，炎癥現(xiàn)象發(fā) 生。對福爾馬林注射的反應性的兩期使得福爾馬林模型為研究傷害性 感受和急性炎性痛的合適的模型。在某些方面中，它還可以成為神經 性疼痛的模型。
除上述慢性痛的任意模型外，還可以在一種或多種急性痛模型中
測試拮抗TRPA1功能的化合物。Valenzano等(2005) Neuropharmacology 48: 658-672。與在慢性痛，急性痛或它們兩者 的模型中測試化合物無關， 一般用例如小鼠，大鼠或豚鼠進行這些研 究(不過并非排它的)。另外，可以在提供體外疼痛測定的各種細胞系 中測試化合物。Wang和Wang(2003)。
許多尋求治療疼痛的個體患有內臟痛。內臟痛的動物模型包括炎 性子宮疼痛的大鼠模型(Wesselmann等，(1997) Pain 73: 309-317)， 將芥子油注入胃腸道以便模擬腸易激綜合征(Kimball等，(2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 288 (6): G1266-73)，將芥子 油注入膀胱以便模擬膀胱活動過度或膀胱炎(Riazimand(2004) , BJU. 94: 158-163)?？梢酝ㄟ^扭體，胃腸炎癥或膀胱興奮性下降評價TRPAl 化合物的有效性。
上述動物模型廣泛地用于疼痛研究。下面提供了描述這些模型在 研究疼痛中的應用的額外典型參考熱損傷模型(Jones和Sorkin， 1998 ， Brain Res 810: 93-99 ; Nozaki-Taguchi和Yaksh， 1998 ， Neuroscience Lett 254: 25_ 28; Jun和Yaksh, 1998， Anesth Analg 86: 348-354)，福爾馬林模型(Yaksh等，2001， J Appl Physiol 90: 2386-2402),角叉菜膠-模型(Hargreaves等，1988， Pain 32: 77-88) 和CFA模型(Nagakura等，2003, J Pharmacol Exp Ther 306: 490-497)。
炎癥通常為疼痛的重要促成因素。照此，有用的是鑒定作為抗炎 藥起作用的化合物。減少神經活動的許多化合物也預防神經源性癥。 為了直接測定炎癥，可以使用器官充滿度測量器評價大鼠爪體積。在 取基線測量值后，可以將角叉菜膠注入爪并且可以在用載體或藥物治 療的動物中在數小時內監(jiān)測體積。減輕爪腫脹的藥物被視為抗炎性的。
為了測試TRPAl拮抗劑在治療咳嗽中的功效，可以容易地進行使用 有意識咳嗽豚鼠模型的實驗。Tanaka和Maruyama(2003) Journal Pharmacol Sci 93: 465-470; McLeod等(2001) Br J Pharmacol 132: 1175-1178。簡言之，豚鼠用作有用的咳嗽動物模型，因為不同于其它 嚙齒動物如小鼠和大鼠，豚鼠確實咳嗽。此外，豚鼠咳嗽表現(xiàn)出在咳 嗽動物的姿態(tài)，行為和表現(xiàn)方面模擬人咳嗽。
為了誘導咳嗽，使有意識的豚鼠接觸誘導劑，諸如檸檬酸或辣椒 辣素。通過對咳嗽次數進行計數測定動物反應。可以通過給予活性劑 并且評價該活性劑在減少接觸檸檬酸，辣椒辣素或其它類似的咳嗽-誘導劑引起的咳嗽次數的能力來測定咳嗽抑制劑，例如抑制TRPA1的化 合物的有效性。按照這種方式，易于評價和鑒定用于治療咳嗽的TRPAl 抑制劑。
其它咳嗽模型包括無意識的豚鼠模型。Rouget等(2004) Br J Pharmacol 141: 1077-1083。任一上述模型可以適用于能夠咳嗽的其 它動物。能夠咳嗽的其它典型動物包括貓和狗。
存在大量嚙齒動物失禁模型。它們包括通過神經損害，尿道侵害 和炎癥誘導的失禁模型。尿道侵害模型包括大鼠膀胱流出道梗阻模型 (Pandita ， RK和 Andersson KE. Effects of intravesical administration of the K+ channel opener, Z.D6169, in conscious rats with and without bladder outflow obstruction. J Urol 162: 943-948， 1999)。炎癥模型包括將芥子油注入膀胱。
為了測試TRPA1抑制劑化合物在治療失禁中的有效性，可以在手術 實施部分膀胱流出道梗阻(B00)后對大鼠給予不同濃度的化合物(例 如，低，中和高濃度)?？梢詫⒉煌瑒┝康腡RPAl抑制性化合物的功效 與僅給予賦形劑的對照組(假擬對照組)進行比較。可以進一步將功效 與給予陽性對照，諸如阿托品的大鼠進行比較。預計阿托品減少BOO 模型中部分膀胱流出道梗阻后的膀胱活動過度。注意在B00模型中測試 化合物時，可以對膀胱或尿道直接給予化合物(例如，通過導管)或全 身(例如，口服，靜脈內，腹膜內等)給予化合物。
如上所述，TRPA1抑制劑可以用于治療與胰腺炎相關的疼痛癥狀。 可以在一種或多種動物模型中測試TRPA1抑制劑在胰腺炎疼痛控制中 的功效?？梢栽谝话愕奶弁磩游锬Ｐ椭袦y試抑制劑，例如炎性疼痛或 內臟痛模型。可選擇地或另外，可以在特別模擬伴隨疼痛的胰腺炎或 其它胰腺損傷的動物模型中測試TRPA1抑制劑。
近期描述了胰腺疼痛的幾種大鼠模型(Lu， 2003， Anesthesiology 98 (3): 734-740; Winston等，2003, Journal of Pain 4 (6): 329-337)。 Lu等通過在大鼠中全身遞送dibutylin dichloride誘發(fā)胰腺炎。大鼠 在7天期限過程中表現(xiàn)出腹部von Frey絲刺激后退縮情況增加和熱刺 激后退縮潛伏期下降。在這些動物誘導的疼痛狀態(tài)的特征還在于物質P 在脊髓中的水平增加(Lu等，2003)。為了測試TRPA1抑制劑在該模型中 的功效，可以在遞送dibutylin dichloride后或與之同時給予TRPA1 抑制劑。可以對對照組動物給予載體或公知的疼痛緩解劑?？梢詼y定 疼痛指標?？梢酝ㄟ^比較在接受TRPA1抑制劑的動物中觀察到的疼痛指 標與不接受TRPA1抑制劑的動物的疼痛指標來評價TRPA1抑制劑的功 效。另外，可以將TRPA1抑制劑的功效與公知疼痛藥物的功效比較。
還通過用全身L-精氨酸給藥誘發(fā)胰腺炎證實了 von Frey絲測試作 為測定傷害行為的方式的功效(Winston等，2003)。可以類似地通過在 全身L-精氨酸給藥誘發(fā)胰腺炎后測試TRPA1抑制劑的功效。
Lu等還描述了使用在清醒和自由活動的大鼠中通過內在導管對胰 腺進行急性傷害性刺激的胰腺疼痛的直接行為測定。這些測定包括套 籠交配，銅養(yǎng)和后肢伸展作為對胰腺內緩激肽輸注的反應。鞘內給予 D-APV (NMDA受體拮抗劑)或單獨的嗎啡部分減輕了這種模型中的內臟 痛行為。兩者的聯(lián)合用藥將疼痛行為降至基線。可以類似地在該系統(tǒng) 中測試TRP A1抑制劑的功效。
任意上述動物模型可以用于評價TRPA 1抑制劑在治療與胰腺炎相 關的疼痛中的功效。將該功效與無治療的組或安慰劑對照組比較。另 外或可選擇地，可以與 一種或多種公知疼痛緩解藥物比較評價功效。
疼痛治療的優(yōu)化
本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于治療各種損傷，疾病，疾患和病癥。 TRPA1抑制劑的 一個重要治療應用在于治療疼痛。正如疼痛為明顯且有 時虛弱性癥狀的損傷，疾患和疾病的廣泛實例例證的，用于治療疼痛 的改進方法和組合物為大量患者提供了重大的有益性。這類方法和組 合物有可能改善患有不同范圍損傷，疾病和疾患的患者的護理質量和 生活質量。本申請關注抑制TRPA1的化合物可以用于治療任意上述損 傷，疾患或疾病。
治療疼痛的重要問題在于如何控制疼痛，同時減輕使用許多止痛 藥的副作用。例如，盡管許多阿片類物質和其它麻醉品有效地減輕疼 痛，但是患者通常在服用這些藥物的同時不能駕車，工作或精力集中。 因此，盡管阿片類物質，諸如嗎啡或dilaudin適合于短期應用或在住 院期間應用，但是它們對長期應用而言不是最佳的。另外，阿片類物 質和其它麻醉品會形成習慣并且患者一般發(fā)生對這些藥物的耐藥性。 阿片類物質和其它麻醉品的這些特征使得它們對疼痛控制而言尚未達 到最佳。
本發(fā)明提供了體外和體內應用的TRP A1抑制劑。本發(fā)明還提供了包 含抑制TRP A1活性的特定類型化合物的組合物和藥物組合物。在某些實 施方案中，本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑為選擇性的。換句話說，在某些 實施方案中，該化合物對TRPA1活性的抑制優(yōu)選超過了對其它離子通道 活性的抑制。在某些實施方案中，該化合物對TRPA1活性的抑制優(yōu)選超 過了對TRPV1， TRPV2， TRPV3， TRPV4和/或TRPM8活性的抑制。在某些 其它實施方案中，選擇該化合物是因為它與涉及疼痛的一種或多種其 它TRP通道發(fā)生交叉反應。例如，在某些實施方案中，該化合物抑制 TRPA1活性并且還抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4和TRPM8中的一種 或多種的活性。
聯(lián)合療法
本發(fā)明的另一個方面提供了聯(lián)合療法，其中將一種或多種其它治
療劑與TRPA1調節(jié)劑一起給予。這類聯(lián)合療法可以通過同時，依次或單 獨給予治療中的各成分來進行。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的化合物與止痛藥聯(lián)合給予。合適 的止痛藥包括，但不限于阿片類物質，糖皮質類固醇，非類固醇抗炎 藥，萘基烷酮類，昔康類，對-氨基苯酚衍生物，丙酸類，丙酸衍生物， 水楊酸鹽，滅酸酯類，滅酸酯衍生物，吡唑類和吡唑衍生物。這類止 痛化合物的實例包括，但不限于可待因，氫可酮，氫嗎啡酮，左啡諾 (levorpharnol )，嗎啡，羥考酮，羥嗎啡酮，布托啡諾，地佐辛， 納布啡，噴他佐辛，依托度酸，吲咮美辛，舒林酸，托美丁，萘丁美 酮，吡羅昔康，對乙酰氨基酚，非諾洛芬，氟比洛芬，布洛芬，酮洛 芬，萘普生，雙氯芬酸，奧沙普秦，阿司匹林，二氟尼柳，曱氯芬那 酸，曱芬那酸，潑尼松龍和地塞米松。優(yōu)選的止痛藥為非類固醇抗炎 藥和阿片類物質(優(yōu)選嗎啡)。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的化合物與非類固醇抗炎藥共同給 予。合適的非類固醇抗炎化合物包括，但不限于吡羅昔康，雙氯芬酸， 依托度酸，巧l咮美辛，酮咯酸(ketoralac),奧沙普秦，托美丁，萘 普生，氟比洛芬，非諾洛芬，酮洛芬，布洛芬，曱滅酸，舒林酸，阿 扎丙宗，保泰松，阿司匹林，塞來考昔和羅非昔布。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的化合物與抗病毒藥共同給予。合 適的抗病毒藥包括，但不限于金剛烷胺，阿昔洛韋，西多福韋，地昔 洛韋，脫氧阿昔洛韋，泛昔洛韋，膦甲酸(foscamet)，更昔洛韋， 噴昔洛韋，疊氮尿苷，anasmycin，金剛烷胺，溴乙烯基脫氧尿苷 (bromovinyldeoxusidine ) ， 氯乙烯基脫氧尿香 (chlorovinyldeoxusidine)， 阿糖胞脊(cytarbine)，去羥肌苷， 脫氧野尻霉素，雙脫氧胞二磷膽堿，雙脫氧肌苷，雙脫氧核苷，依度 尿苷(edoxuidine)，恩韋將，非西他濱，膦曱酸，非阿尿苷，氟胸 苷，氟尿苷，金絲桃素，干擾素，白細胞介素，羥乙基磺酸鹽，奈韋 拉平，噴他脒，利巴韋林，金剛乙胺，司他夫定(stavirdine )， sargramostin，舒拉明，天花粉蛋白，三溴胸苷，三氯胸苷，阿糖腺
苷，齊多夫定(zidoviridine )，扎昔他賓3-疊氮基-3-脫氧胸苷，2' ， 3' -雙脫氧腺苷(ddA)， 2'， 3'-雙脫氧鳥苷(ddG) , 2、3'-雙脫氧胞苷 (ddC)， 2'，3'-雙脫氧胸苷(ddT)， 2'3'-雙脫氧-雙脫氧胸苷(d4T)， 2'-脫氧-3'-硫雜-胞嘧啶(3TG或lamivudime) ， 2' ， 3'-雙脫氧-2'-氟 腺苷，2'， 3'-雙脫氧-2'-氟肌苷，2'， 3'-雙脫氧-2'-氟胸苷，2'，3'-雙脫氧-2'-氟胞嘧啶，2、 3'-雙脫氧-2', 3'-雙脫氫-2'-氟胸苷 (Fd4T)， 2'3'-雙脫氧-2'-p-氟腺苷(F-ddA)， 2。'-雙脫氧-2'-p-氟 -肌苷(F-ddl)和2'， 3'-雙脫氧-2'-l3-氟胞嘧啶(F-ddC)，磷酸一甲酸 三鈉，三氟胸苷，3'疊氮基-3'胸苷(AZT)，雙脫氧肌苷(ddl)和碘苷。 在某些實施方案中，將本發(fā)明的化合物與抗菌藥共同給予。合適 的抗菌藥包括，但不限于化合物鹽酸金剛烷胺(amanfadine hydrochloride) ， ^L酸金岡寸坑胺(amanfadine sulfate),阿米卡 星，硫酸阿米卡星，氨基糖甙類(amoglycosides)，阿莫西林，氨千 西林，amsamycins，桿菌肽，p-內酰胺類，殺念珠菌素，巻曲霉素， 羧千西林，頭孢氨節(jié)，頭孢噻啶，頭孢漆吩，頭孢唑林，頭孢匹林， 頭孢拉定，頭孢來星，chilomphenicols，氯己定，葡糖酸氯己定 (chloshexidine gluconate ),鹽酸氯己定，氯鬼星，chlorquiraldol, 金霉素，鹽酸金霉素，環(huán)丙沙星，多肽菌素，克林霉素，鹽酸克林霉 素，克霉唑，氯唑西林，地美環(huán)素，diclosxacillin， 二多典會啉，多 西環(huán)素，乙胺丁醇，鹽酸乙胺丁醇，紅霉素，依托紅霉素，硬脂酸紅 霉素(erhmycin stearate)，法尼醇，氟氯西林，慶大霉素，疏酸慶 大霉素，短桿菌肽，giseofulvin，卣普羅近，haloquinol，六氯酚， iminocylcline，氯碘羥喹，卡那霉素，硫酸卡那霉素，林可霉素， lineomycin， lineomycin hydrochloride, 大環(huán)內酉旨類，曱氯環(huán)素, 美他環(huán)素，鹽酸美他環(huán)素，methenine，馬尿酸烏洛托品，扁桃酸烏洛 托品，曱氧西林，metonidazole，咪康唑，鹽酸咪康峻，米諾環(huán)素， 鹽酸米諾環(huán)素，莫匹羅星，萘夫西林，新霉素，硫酸新霉素，奈替米 星，硫酸奈替米星，呋喃西林，諾氟沙星，制霉菌素，制霉菌素，竹 桃霉素，orcephalosporins，苯峻西林，oxyteacline，鹽酸土霉素，
對氯間二甲酚，巴龍霉素，硫酸巴龍霉素，青霉素類，青霉素G,青霉 素V，噴他脒，鹽酸噴他脒，非奈西林，多黏菌素類，喹諾酮類，硫酸 鏈霉素，四環(huán)素，妥布霉素，托萘酯，三氯生，trifampin,利福霉素， 羅利環(huán)素，大觀霉素，螺旋霉素，struptomycin,磺胺，四環(huán)素類， 四環(huán)素，妥布霉素，石克酸妥布霉素，triclocarbon，三氯生，甲氧芐 啶-磺胺曱喁唑，泰洛星，萬古霉素和yrothricin。
在某些實施方案中，將本發(fā)明的化合物與咳嗽抑制劑，減充血劑 或祛痰藥共同給予。
與本發(fā)明主題TRPAl抑制劑共同給予的維生素a酸類(例如，其中 TRPAl抑制劑可以用于減輕維甲酸類的疼痛和/或炎癥效應)的實例包 括，但不限于化合物，諸如維甲酸(順式和反式)，視黃醇，阿達帕 林，維生素A和他扎羅汀。維生素a酸類用于治療痤瘡，銀屑病，酒渣 鼻，皺紋和皮膚癌和癌前體，諸如黑素瘤和光化性角化病。
類似地，可以與本發(fā)明主題TRPA1抑制劑聯(lián)用的角質層分離劑包括 過氧化苯甲酰，a羥基酸，果酸，乙醇酸，水楊酸，壬二酸，三氯乙 酸，乳酸和吡羅克酮。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與脫毛藥(毛發(fā)脫失) 一起給予。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑可以與抗痤瘡藥，抗-濕滲藥和抗牛皮 痺藥(anti-psoratic agents) —起〗吏用。特別用于治療痤齊的化合 物包括壬二酸(具有抗痤瘡特性的脂族二元酸)，地蒽酚(具有抗真菌和 抗牛皮癬特性的二酚類化合物)和馬索羅酚(去甲二氫愈創(chuàng)木酸，具有 抗氧化特性的四酚類化合物，還用于治療光化性角化病)及其類似物 (諸如奧斯貝木酚素6，氧代奧斯貝木酚素6， 4'-0-甲基-7，7'-二氧代 奧斯貝木酚素6，肉豆蔻木酚素，去甲基二氫愈創(chuàng)木酸，3, 3'，4-三幾 基-4'-甲氧基木酚素，Saururenin， 4-羥基-3， 3'， 4'-三甲氧基木酚素 和異安五脂素)?？?濕滲藥包括吡美莫司和他克莫司。適用于本發(fā)明 的抗牛皮癉活性劑包括維生素a酸類(包括維甲酸的異構體和衍生物以 及其它結合維甲酸受體的其它化合物，諸如維曱酸，阿維a， 13-順式-維甲酸(異維a酸)，9-順式-維甲酸，生育酚-維曱酸酯(維曱酸的生育
酚酯(反式-或順式-))，阿維a酯，莫維A胺，1-(13-順式-視黃酰氧 基)-2-丙酮，1-(13-順式-視黃酰氧基)-3-癸酰氧基-2-丙酮，1,3-雙 -(13-順式-視黃酰氧基)-2-丙酮，2- (13-順式-視黃酰氧基)-乙酰苯， 13-順式-視黃酰氧基曱基-2， 2-二曱丙酸酯，2-(13-順式-視黃酰氧 基)-n-甲基-乙酰胺，1- (13-順式-視黃酰氧基)-3-羥基-2-丙酮， 1 - ( 13-順式-視黃酰氧基)-2， 3-二油?；?，13-順式-視黃酸琥珀酰 亞胺酯，阿達帕林和他扎羅汀)，水楊酸(一銨鹽)，地蒽酚，6-阿扎尿 苷，維生素D衍生物(包括，但不限于羅蓋全(Roche Laboratories)， EB 1089 (24a，26a，27a-三高-22，24-二烯—la，25-(OH)廣D3) , KH 1060 (20-表-22-氧雜-24a， 26a, 27a-三高-la， 25-(OH)2-D3) ， MC 1288， GS 1558， CB 1093， 1， 25-(0H) 2-16-烯-D3， 1， 25-(0H) 2-16-烯-23-炔 -D3和25-(OH) 2-16-烯-23-炔-D3 ，22-氧雜骨化三醇； la-(OH)D5 (UniversityofIllinois) ， ZK161422 和 ZK 157202 (Institute of Medical Chemistry—Schering AG),阿法骨化 醇，骨化二醇，卡泊三醇(卡泊三烯)，馬沙骨化三醇，膽骨化醇，度 骨化醇，麥角沉鈣醇，.氟骨三醇，來沙骨化醇，馬沙骨化醇，帕立骨 化醇，司骨化醇，西奧骨化醇，他卡西醇，卡泊三烯，骨化三醇和披 露在美國專利5， 994, 332中的其它類似物)，焦沒食子酚和他卡西醇。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與維生素及其衍生物一起給藥， 包括維生素A，抗壞血酸(維生素C)， ot-生育酚(維生素E)， 7-脫氫膽 甾醇(維生素D)，維生素K， a-硫辛酸，脂溶性抗氧化劑等。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與皮膚防護劑，諸如尿嚢素和七 葉苷聯(lián)用。
在某些實施方案中，可以共同給予本發(fā)明的兩種或多種化合物。 當共同給予本發(fā)明的兩種或多種化合物時，兩種或多種化合物可以具 有類似的選擇特性和功能活性，或兩種或多種化合物可以具有不同的 選擇特性和功能活性。作為實例，兩種或多種化合物在拮抗TRPA1功能
方面的選擇性超過對TRPV1， TRPV5和TRPV6約10， 100或1000倍(例如， 兩種或多種化合物具有類似的選擇特性)并且可以以類似的IC50進一
步抑制TRPA1功能(例如，類似的功能活性)?？蛇x擇地，兩種或多種化 合物之一可以選擇性地抑制TRPA1，而兩種或多種化合物中的另一種抑 制TRPA1和TRPV1 (例如，兩種或多種化合物具有不同的選擇特性)。關 注給予本發(fā)明具有類似或不同特性的兩種或多種化合物的組合給藥。
在某些實施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與一種或多種拮抗不 同通道功能的其它化合物共同給予。作為實例，可以將本發(fā)明的化合 物與一種或多種拮抗TRPV1， TRPM8和/或TRPV3的化合物共同給予。拮 抗TRPV1， TPRM8或TRPV3的化合物可對TRPV1， TRPM8或TRPV3具有選擇 性(例如抑制TRPV1或TRPV3比抑制TRPA1強10， IOO或IOOO倍以上)。可 選擇地，拮抗TRPV 1或TRPV3的化合物可以與其它TRP通道發(fā)生交叉反 應。
在某些其它實施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與一種或多種適 合于所治療特定損傷，疾病，疾患或病癥的額外的活性劑或治療方案 共同給予。
藥物組合物
盡管可以單獨給予本發(fā)明的化合物，但是優(yōu)選作為藥物制劑(組合 物)的形式給予該化合物?？梢詾槿魏斡糜谌嘶颢F藥應用的便利給藥方 式配制本發(fā)明的化合物。在某些實施方案中，包括在藥物制劑中的化 合物可以為活性成分自身或可以為例如能夠在生理環(huán)境中轉化成活性 化合物的前體藥物。
與選擇的給藥途徑無關，通過諸如如下所述的或本領域技術人員 公知的其它常規(guī)方法將可以以合適的水合物形式使用的本發(fā)明化合物 和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成藥學上可接受的劑型。
因此，本發(fā)明的另一個方面提供了藥學上可接受的組合物，其包 含與上述一種或多種藥學上可接受的載體(添加劑)和/或稀釋劑一起 配制的治療有效量的一種或多種化合物。如下文詳細描述的，可以專 門將本發(fā)明的藥物組合物配制成固體或液體給藥劑型，包括適合于如 下給藥的那些劑型(1) 口服給藥，例如，獸用頓服藥(水或非水溶液
或混懸液)，片劑，大丸劑，粉末，顆粒，施用于舌的糊劑；(2)非腸 道給藥，例如，通過皮下，肌內或靜脈內注射，例如，為無菌溶液或 混懸液；(3)局部施用，例如，為施用于皮膚的霜劑，軟青劑或噴霧 劑；(4)通過陰道內或通過直腸內，例如，為陰道環(huán)，霜劑或泡沫； 或(5)用于吸入。然而，在某些實施方案中，可以將本發(fā)明主題的化 合物簡單溶于或懸浮于無菌水中。在某些實施方案中，藥物制劑為無
熱原的，即不會升高患者體溫。
本文所用的術語"治療有效量"意旨有效產生一定期望的治療作用 的化合物，物質或包含本發(fā)明化合物的組合物的用量，該用量通過在 至少動物細胞亞群中抑制TRPA1功能并由此阻斷在治療細胞中起作用 的生物學后果而有效地產生某種期望的治療效果，具有可應用于任何 醫(yī)療的合理的有益性/風險度之比。
本文所用的術語"全身給藥"，"通過全身給藥"，"外周給藥"和" 通過外周給藥"意旨以非直接進入中樞神經系統(tǒng)的方式給予化合物，藥 物或其它物質，使得它進入患者系統(tǒng)且由此進行代謝和其它類似過程， 例如，皮下給藥。
術語"藥學上可接受的"在本文中使用時意旨那些在合理的醫(yī)學判 斷范圍內適用于接觸人和動物組織，但沒有過度的毒性，刺激性，過 敏反應或其它問題或并發(fā)癥的那些化合物，物質，組合物和/或劑型， 它們與合理的有益性/風險度匹配。
本文所用的術語"藥學上可接受的載體"意旨藥學上可接受的物 質，組合物或載體，諸如液體或固體填充劑，稀釋劑，賦形劑，溶劑 或包嚢材料，它們涉及將本發(fā)明主題的拮抗劑從身體的一個器官或部 分攜帶或轉運至身體的另一個器官或部分。每種載體必需是"可接受的 "，其含義為與制劑中的其它組分相容并且對患者無害?？梢杂米魉帉W 上可接受的載體的物質的某些實例包括(1)糖類，諸如乳糖，葡萄 糖和蔗糖；(2)淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其 衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉，乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)西黃 蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，諸如可可
脂和栓劑蠟；(9)油，諸如花生油，棉子油，紅花油，芝麻油，橄欖
油，玉米油和大豆油；(10) 二醇類，諸如丙二醇；(11)多元醇類， 諸如甘油，山梨醇，甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯類，諸如油酸乙酯 和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁； (15)藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格液；(19)乙 醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它藥物制劑中使用的無毒性相 容性物質。
如上所述，本發(fā)明化合物的某些實施方案可以包含堿性官能基， 諸如氨基或烷基氨基，且由此能夠與藥學上可接受的酸形成藥學上可 接受的鹽。在這方面術語"藥學上可接受的鹽"意旨本發(fā)明化合物的相 對無毒性的無機和有機酸加成鹽?？梢栽诒景l(fā)明化合物最終的分離和 純化過程中原位制備，或通過單獨地使本發(fā)明純化的化合物以其游離 堿形式與合適的有機或無機酸反應并且分離由此形成的鹽來制備。有 代表性的鹽包括氬溴酸鹽，鹽酸鹽，疏酸鹽，疏酸氫鹽，磷酸鹽，硝 酸鹽，乙酸鹽，戊酸鹽，油酸鹽，棕櫚酸鹽，硬脂酸鹽，月桂酸鹽， 苯甲酸鹽，乳酸鹽，磷酸鹽，甲苯磺酸鹽，檸檬酸鹽，馬來酸鹽，富 馬酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，萘甲酸鹽，曱磺酸鹽，葡戾酸鹽，乳 糖醛酸鹽和月桂基磺酸鹽等(例如，參見Berge等(1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19)。
本發(fā)明主題化合物的藥學上可接受的鹽包括這些化合物的常規(guī)無 毒性鹽或季銨鹽，例如來自無毒性的有機或無機酸。例如，這類常規(guī) 的無毒性鹽包括那些來源于無機酸，諸如鹽酸，氫溴酸鹽，硫酸，氨 基磺酸，磷酸，硝酸等的鹽；和由有機酸制備的鹽，所述的有機酸諸 如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，蘋果酸，酒石酸， 檸檬酸，抗壞血酸，棕櫚酸，馬來酸，羥基馬來酸，苯乙酸，谷氨酸， 苯曱酸，水楊酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富馬酸，甲苯磺酸， 甲磺酸，乙二磺酸，草酸，異硫羰酸等.
在其它情況中，本發(fā)明的化合物可以包含一個或多個酸性官能基， 且由此能夠與藥學上可接受的堿形成藥學上可接受的鹽。術語"藥學上
可接受的鹽"在這些情況中意旨本發(fā)明的相對無毒性的無機和有機堿 加成鹽。同樣可以在本發(fā)明化合物最終的分離和純化過程中原位制備， 或單獨地通過使純化的化合物以其游離酸形式與合適的堿，諸如藥學 上可接受的金屬陽離子的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽，與氨或與藥 學上可接受的有機的伯，仲或叔胺反應并且分離由此形成的鹽來制備。 有代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鋰，鈉，鉀，鈣，鎂和鋁鹽等。 用于形成堿加成鹽的有代表性的有機胺類包括乙胺，二乙胺，乙二胺，
乙醇胺，二乙醇胺，哌噪等(例如，參見Berge等，上文)。
濕潤劑，乳化劑和潤滑劑，諸如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂以及 著色劑，釋放劑，包衣劑，甜味劑，矯味劑和香味劑，防腐劑和抗氧 化劑也可以存在于組合物中。
藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括(1)水溶性抗氧化劑，諸如 抗壞血酸，鹽酸半胱氨酸，硫酸氫鈉，焦亞硫酸鈉，亞硫酸鈉等；(2) 油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯，丁羥茴醚(BHA)， 丁羥曱苯 (BHT)，卵磷脂，掊酸丙酯，a生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸 檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA),山梨醇，酒石酸，磷酸等。
本發(fā)明的制劑包括那些適合于口服，鼻部，局部(包括口含和舌 下)，直腸，陰道和/或非腸道給藥的制劑。可以便利地將制劑制成單 位劑型并且可以通過制藥領域眾所周知的任意方法制備?？梢耘c載體 物質合并產生單一劑型的活性組分的量根據所治療宿主，具體給藥方 式的不同而改變?？梢耘c載體物質合并而產生單一劑型的活性組分的 量一般為該化合物產生治療作用的量。 一般而言，在100%中，該量在 約1%-約99%分活性組分，優(yōu)選約5%-約70%，最優(yōu)選約10%-約30%。
制備這些制劑或組合物的方法包括將本發(fā)明的化合物與載體和任 選的一種或多種輔助組分混合的步驟。 一般而言，通過均勻和緊密混 合本發(fā)明化合物與液體載體或固體細粉載體或它們兩者且然后如果必 要使產物成形來制備制劑。
適合于口服給藥的本發(fā)明制劑可以為膠嚢，扁嚢劑，丸劑，片劑， 錠劑(使用矯味基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)，粉末，顆粒，
或為在含水或非水液體中的溶液或混懸液，或為水包油型或油包氷型 液體乳劑，或為酏劑或糖漿劑，或為軟錠劑(使用惰性基質，諸如明膠 和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或為漱口劑等，它們各自包含預定量 的本發(fā)明化合物作為活性組分。還可以將本發(fā)明的化合物作為大丸劑， 藥糖劑或糊劑給藥。
在本發(fā)明用于口服給藥的固體劑型(膠嚢，片劑，丸劑，錠劑，粉 末，顆粒等)中，將活性組分與一種或多種藥學上可接受的載體混合，
所述載體諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或任意如下成分(l)填充劑或 增容劑，諸如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘 合劑，諸如，例如，羧曱基纖維素，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯烷酮， 蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊 脂，碳酸鉤，馬鈴薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶 解阻滯劑，諸如石蠟；(6)吸收促進劑，諸如季銨化合物；(7)濕潤 劑，諸如，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，諸如高嶺土 和皂粘土； (9)潤滑劑，諸如滑石粉，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂，固體聚 乙二醇，十二烷基硫酸鈉及其混合物；和(IO)著色劑。就膠嚢，片劑 和丸劑而言，藥物組合物還可以包含緩沖劑。相似類型的固體組合物 也可以用作軟膠嚢和硬膠嚢中的填充劑，其中使用諸如乳糖(lactose) 或乳糖(milk sugars)以及高分子量聚乙二醇等作為賦形劑。
可以通過制備片劑，任選地使用 一種或多種輔助組分壓制或模制。 可以使用粘合劑(例如，明膠或羥丙基曱基纖維素)，潤滑劑，惰性稀 釋劑，防腐劑，崩解劑(例如，羥基乙酸淀粉鈉或交聯(lián)羧曱基纖維素鈉)， 表面活性劑或分散劑制備壓制片。可以通過在合適的機器中模制用惰 性液體稀釋劑濕潤的粉狀化合物混合物制備模制片。
可以任選給本發(fā)明的藥物組合物的片劑和其它固體劑型，諸如錠 劑，膠嚢，丸劑和顆?？毯刍蛑苽錇榫哂邪潞屯鈿ぃT如腸溶衣和 其它藥物制劑領域眾所周知的包衣。還可以使用提供期望的釋放特性 的例如不同比例的羥丙基曱基纖維素，其它聚合物基質，脂質體和/ 或微球將它們配制成其中的活性組分緩釋或控釋。例如，通過經保留
細菌的濾器過濾或通過以無菌固體組合物形式摻入滅菌劑給它們滅 菌，其中所述的固體組合物可以在使用前即刻溶于無菌水或某些其它 無菌可注射介質。這些組合物還可以任選包含遮光劑并且可以為這類 組合物，它們僅或優(yōu)選在胃腸道的某些部分中任選以延遲方式釋放活 性組分。可以使用的包埋組合物的實例包括聚合物物質和蠟。如果合
適，還可以使用上述賦形劑中的一種或多種使活性組分^:嚢化。
用于本發(fā)明化合物口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳 劑，微乳，溶液，混懸液，糖漿劑和酏劑。除活性組分外，液體劑型 可以包含本領域中常用的惰性稀釋劑，諸如，例如，水或其它溶劑， 增溶劑和乳化劑，諸如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，芐醇， 苯曱酸千酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油(特別是棉子油，花生油，玉米 油，胚油，橄欖油，荒麻油和芝麻油)，甘油，四氫呋喃醇，聚乙二醇 和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯類、及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服組合物還可以包括佐劑，諸如濕潤劑，乳
化劑和懸浮劑，甜味劑，矯味劑，著色劑，香味劑和防腐劑。
除活性化合物外，混懸液還可以包含懸浮劑，例如，乙氧基化異 十八烷醇，聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨糖醇酯類，微晶纖維素，偏氫 氧化鋁，皂粘土，瓊脂和黃蓍膠及其混合物。
公知固醇類，諸如膽固醇與環(huán)糊精形成復合物。因此，在優(yōu)選的 實施方案中，如果抑制劑為甾類生物堿，那么可以使用環(huán)糊精配制它， 諸如a-， P-和y-環(huán)糊精，二曱基-p環(huán)糊精和2-羥丙基-p-環(huán)糊精。
可以將本發(fā)明的直腸，陰道或尿道給藥的藥物組合物制劑制成栓 劑，可以通過將本發(fā)明的 一種或多種化合物與 一種或多種合適的無刺 激性賦形劑或載體混合來制備所述栓劑，所述的無刺激性賦形劑或載 體例如為可可脂，聚乙二醇，栓劑蠟或水楊酸酯，并且該栓劑在室溫 下為固體，而在體溫下為液體且由此在直腸或陰道腔中熔化并且釋放 活性化合物。
可選擇地或另外，可以配制通過導管，支架，金屬線或其它管腔 內裝置遞送的組合物。通過這類裝置遞送尤其用于遞送至膀胱，尿道，
輸尿管，直腸或腸。
適合于陰道給藥的本發(fā)明制劑還包括陰道環(huán)，棉塞，霜劑，凝膠， 糊劑，泡沫或噴霧劑，它們包含諸如本領域公知為合適的這類載體。
用于本發(fā)明化合物局部或透皮給藥的劑型包括粉末，噴霧劑，軟 膏劑，糊劑，霜劑，洗劑，凝膠，溶液，貼劑和吸入劑。可以在無菌 條件下將活性化合物與藥學上可接受的載體和任意所需的防腐劑，緩 沖劑或拋射劑混合。
軟膏劑，糊劑，霜劑和凝膠除包含本發(fā)明的活性化合物外，還可 以包含賦形劑，諸如動物和植物脂肪，油，蠟，石蠟，淀粉，黃蓍膠， 纖維素衍生物，聚乙二醇，硅氧烷類，皂粘土，硅酸，滑石粉和氧化 鋅，或其混合物。
粉末和噴霧劑除包含本發(fā)明的化合物外，還可以包含賦形劑，諸 如乳糖，滑石粉，硅酸，氫氧化鋁，硅酸鈣和聚酰胺粉末，或這些物 質的混合物。噴霧劑還可以包含常用拋射劑，諸如氯氟烴類和揮發(fā)性 的未被取代的烴類，諸如丁烷和丙烷。
透皮貼劑具有將本發(fā)明化合物以受控方式遞送至身體的附加優(yōu) 點?？梢酝ㄟ^將化合物溶于或分散于適當的介質制備這類劑型。吸收 促進劑也可以用于增加化合物流過皮膚。可以通過提供速率控制膜或 將化合物分散于聚合物基質或凝膠中控制這類流量的速率。
還將眼用制劑，眼用軟骨劑，粉末，溶液等關注為本發(fā)明的范圍。
本文所用的術語"非腸道給藥"和"通過非腸道給藥"意旨非腸道和 局部給藥的，通常通過注射的給藥方式，并且包括，但不限于靜脈內， 肌內，動脈內，鞘內，嚢內，眶內，目匡內，心內，真皮內，腹膜內， 經氣管，皮下，表皮下，關節(jié)內，嚢下，蛛網膜下，脊柱內和胸骨內 注射和輸注。
本發(fā)明適合于非腸道給藥的藥物組合物包含本發(fā)明的一種或多種 化合物與一種或多種藥學上可接受的無菌等滲水或非水溶液，分散液， 混懸液或乳劑或恰在使用前再溶解成無菌可注射溶液或分散液的無菌 粉末，它們可以包含抗氧化劑，緩沖劑，制菌劑，使制劑與指定接受
者血流等滲的溶質或懸浮劑或增稠劑。
可以用于本發(fā)明藥物組合物的合適的水和非水載體的實例包括 水，乙醇，多元醇類(諸如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)及其混合物， 植物油，諸如橄欖油和可注射的有機酯類，諸如油酸乙酯。例如，可 以通過使用包衣材料，諸如卵磷脂，就分散體而言通過維持所需的粒 度和通過使用表面活性劑維持適當的流動性。
這些組合物還可以包含佐劑，諸如防腐劑，濕潤劑，乳化劑和分 散劑。可以通過包含各種抗菌劑和抗真菌劑，例如，對羥基苯曱酸酯， 三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等確保預防微生物的作用。還需要在組合 物中包括等滲劑，諸如糖類，氯化鈉等。此外，可以通過包含延緩吸 收的試劑，諸如單硬脂酸鋁和明膠使可注射藥物劑型的吸收延長。
在某些情況中，為了延長藥物釋放，需要減緩藥物從皮下或肌內 注射中吸收?？梢酝ㄟ^使用具有難溶于水的晶體或非晶形物質的液體 混懸液達到這一目的。然后藥物的吸收速率可以取決于其溶出速率， 由此可以依賴于晶體粒度和晶型。可選擇地，可以通過將藥物溶于或 懸浮于油媒介物中使非腸道給藥的藥物延緩吸收。
通過在生物可降解聚合物，諸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成本發(fā)明 主題化合物的微嚢基質制備可注射的長效劑型。根據藥物與聚合物之 比和所用特定聚合物的性質的不同，可以控制藥物釋放速率。其它生 物可降解的聚合物的實例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。還通過將藥物
俘獲在與身體組織相容的脂質體或微乳內制備長效可注射制劑。
當將本發(fā)明的化合物作為藥物給予人和動物時，可以將它們本身
給予或作為包含例如O. 1 - 99. 5°/。(更優(yōu)選0. 5 - 90%)的活性組分與藥學 上可接受的載體的藥物組合物給予。
優(yōu)選通過制備包含有效量活性組分的合適的飼料預混合物并且將 該預混合物摻入最終的定量飼料中將本發(fā)明的化合物添加到動物飼料 中。
可選擇地，可以在飼料中摻入包含活性組分的中間體濃縮物或飼 料添加劑?？梢灾苽溥@類塑料預混合物和最終的定量飼料的方式描述
在參考書中(諸如"Applied Animal Nutrition", W. H. Freedman and
CO.， San Francisco, U.S.A., 1969或"Livestock Feeds and Feeding"
0 and B books, Corvallis， Ore., U.S.A., 1977)。
還可以通過可再填充的或生物可降解裝置提供導入方法。進年來
已經研發(fā)并且在體內測試了用于控釋藥物的各種緩釋聚合物裝置，包
括蛋白質生物藥劑。各種生物相容性聚合物(包括水凝膠)，包括生物 可降解和不可降解的聚合物可以用于形成在特定靶點持續(xù)釋放化合物
的植入物。
活性組分在本發(fā)明藥物組合物中的實際劑量水平可以改變，以便 獲得對于特定患者，組合物和給藥方式有效實現(xiàn)期望的治療反應而對 患者無毒性的活性組分用量。
選擇的劑量水平取決于各種因素，包括所用本發(fā)明特定化合物或 其酯，鹽或酰胺的活性，給藥途徑，給藥時間，所用特定化合物的排 泄速率，治療期限，與所用特定化合物聯(lián)用的其它藥物，化合物和/ 或物質，所治療患者的年齡，性別，體重，狀況， 一般健康情況和在 先的醫(yī)療史等醫(yī)學領域眾所周知的因素。
具有本領域普通技能的臨床醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地確定并且開據 有效量的所需藥物組合物處方。例如，臨床醫(yī)師或獸醫(yī)可以以低于獲 得期望治療作用所需的水平開始使用藥物組合物中所用本發(fā)明化合物 的劑量，并且逐步增加劑量，直到獲得期望的作用。
一般而言，本發(fā)明化合物的合適的每日劑量為有效產生治療作用 的最低劑量的化合物用量。這類有效劑量一般取決于上述因素。 一般 而言，針對患者的本發(fā)明化合物的靜脈內，腦室內和皮下劑量為約 0. 0001 -約IOO mg/千克體重/天。
如果需要，可以將活性化合物的有效日劑量在全天以適當的間隔 分別給予兩次，三次，四次，五次，六次或6六次以上的亞劑量，任選 以單位劑型的形式。
接受該治療的患者為有此需要的任何動物，包括靈長類特別是人，
和其它哺乳動物，諸如馬，牛，豬和綿羊；和一般的家禽和寵物。
可以將本發(fā)明的化合物照此給予或作為與藥學上可接受的載體和 /或無菌載體的混合物給予，并且還可以與其它抗微生物劑 一起給予， 諸如青霉素類，頭孢菌素類，氨基糖苷類和糖肽類。聯(lián)合療法由此包 括依次，同時和分別給予活性化合物，按照這類方式首先給予的藥物 在給予隨后療法時仍然可檢測到。
本發(fā)明關注本發(fā)明主題的化合物在任意上述藥物組合物和制劑中 的制劑。此外，本發(fā)明關注通過任意上述給藥途徑給藥。本領域技術 人員可以基于所治療的疾患和所治療患者的總體健康狀況，年齡和大 小選擇適當的制劑和給藥途徑。
核酸和氨基酸組合物
本發(fā)明在另一個方面中提供了包含特定的TRPA1多肽類和核酸，由 其組成或主要由其組成的組合物和藥物組合物。例如，可以在藥物篩
TRPA1在細胞，組織或生物體中的表達或活性。本文所用的術語"分離 的"在用于指核酸和多肽組合物時意旨以非它們實際在天然狀態(tài)下存 在的狀態(tài)下存在的核酸或多肽類。換句話說，該術語用于表示將蛋白 質與內源性發(fā)現(xiàn)的與其在一起的其它蛋白質和細胞成分以一定水平分 離。分離的在本文上下文中使用時不一定意旨以純化形式提供蛋白質 或核酸。另外，術語"分離的"不一定指從生物體中分離多肽或核酸。 而該術語還包括重組產生的核酸和多肽類。
在某些實施方案中，本發(fā)明提供了分離的多肽，其包括SEQ ID N0: l中表示的氨基酸序列，由其組成或主要由其組成。這類多肽可以包括 相同序列或可以包括一種，兩種或三種保守取代，添加或缺失。在某 些其它實施方案中，本發(fā)明提供了由包含SEQ ID NO: 2中表示的核苷 酸序列，由其組成或主要由其組成的核酸序列或由因遺傳密碼簡并性 而與SEQ ID NO: 2不同的核苷酸序列編碼的分離的多肽。
在某些其它實施方案中，本發(fā)明提供了包含SEQ ID NO: 2中表示 的核苷酸序列，由其組成或主要由其組成或包含因遺傳密碼簡并性而 與SEQIDN0: 2不同的核苷酸序列的分離的核酸。在其它實施方案中， 本發(fā)明提供了包含一核苷酸序列，由其組成或主要由其組成的分離的 核酸，所述的核普酸序列編碼包含SEQ ID No. l中表示的氨基酸序列 的多肽。
在其它實施方案中，本發(fā)明提供了表達栽體，它在原核細胞和真 核細胞中的至少一種中復制。該表達載體包含任意上述TRPA1核酸。類 似地提供了包含這些表達載體的細胞，這些細胞表達由表達的核酸編 碼的TRPA1蛋白質。在某些實施方案中，表達的多肽保持了TRPA1的一 種或多種功能。例如，包含該表達載體的細胞表達TRPA1并且介導電流 和/或離子流(例如，TRPAl-介導的電流)。還提供了生產多肽的方法。 該方法包括在合適的細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)上述細胞之一 (例如，表達 TRPA1多肽的細胞)以表達所述多肽。
在某些實施方案中，使用所述的表達載體瞬時轉染細胞并且該細 胞瞬時表達TRPA1蛋白質。在某些其它實施方案中，使用所述的表達載 體穩(wěn)定轉染所述細胞并且建立表達TRPA1的穩(wěn)定細胞系。在某些實施方 案中，包含所述表達栽體的細胞無法內源性表達TRPA1蛋白質(例如， 細胞在沒有表達載體存在下不表達可檢測水平的TRPA1蛋白質).在其 它實施方案中，包含所述表達載體的細胞內源性表達TRPA1蛋白質。
在某些實施方案中，表達TRPA1的細胞，例如，操縱以包含TRPA1 表達載體的細胞可以用于篩選試驗，以便鑒定調節(jié)TRPA1介導的電流的 化合物。合適的細胞包括，但不限于原核細胞和真核細胞。典型的真 核生物包括脊推動物和無脊稚動物。典型的真核生物包括，但不限于 人，小鼠，大鼠，貓，狗，家兔，綿羊，牛，馬，山羊，非人的靈長 類，蛙，蟾蜍，魚，小雞，蒼蠅，蠕蟲和酵母。典型的原核生物包括 細菌。涉及當"細胞"時，應理解意旨在至少一種細胞中(例如，單一細 胞或細胞培養(yǎng)物)篩選。將細胞制成混懸液或使其粘附生長。可以使用 任何發(fā)育時間和組織的細胞。典型的細胞包括胚胎細胞，幼體細胞， 青少年細胞，胎兒細胞和成年人細胞。典型的細胞和細胞系可以來源 于任何組織或細胞類型。在某些實施方案中，這些細胞為感覺神經元
或結狀神經節(jié)。細胞包括初級細胞和轉化的細胞系。
在某些實施方案中，如上所述，本發(fā)明關注包含如本文提供的
TRPA1蛋白質編碼序列的表達載體。"載體"為復制子，諸如質粒，噬菌 體或粘粒，另一種DM片段可以與之結合。術語"栽體"意旨能夠轉運與 其連接的另一種核酸的核酸分子。 一種類型的載體為附加體，其為能 夠在染色體外復制的核酸。還可以使用能夠自主復制和/或自動表達與 它們連接的核酸的載體。能夠指導可操作地與之連接的基因表達的載 體在本文中稱作"表達載體"。 一般而言，在重組DNA技術中應用的表達 載體通常為"質粒"形式，它一般涉及其載體形式不結合染色體的環(huán)狀 雙鏈DNA環(huán)區(qū)。然而，本發(fā)明指定包括這類表達載體的其它形式，它們 具有等效的功能且今后為本領域中公知的。
DNA或核酸"編碼序列"為在適當調節(jié)序列控制下時在體內轉錄和 翻譯成多肽的DNA序列。編碼的邊界由5'(氨基)末端的起始密碼子和 3'(羧基)末端上的翻譯終止密碼子決定。本發(fā)明的編碼序列可以包括， 但不限于來自真核生物mRNA的cDNA，來自真核生物(例如哺乳動物)DNA 的基因組DNA序列和合成DNA序列。聚腺普酸化信號和轉錄終止序列可 以位于該編碼序列的3'上。
核酸或DNA調節(jié)序列或調節(jié)元件為轉錄和翻譯控制序列，諸如啟動 子，增強子，聚腺苷酸化信號和終止子，它們提供和/或調節(jié)宿主細胞 中編碼序列的表達。指導某些實施方案的真核細胞離子通道和可檢測
擇。調節(jié)序歹'j的實例描迷在Goeddel， Gene Expression Technology: Methods in Enzymology(Academic Press, San Diego, CA(1990))中。 例如，任何控制DM序列表達的各種表達控制序列在可操作地與之連接 時可以用于這些載體以表達編碼離子通道和可檢測標記的DNA序列。這 類有用的表達控制序列包括例如，SV40的早期和晚期啟動子，p2微 管蛋白，腺病毒或巨細胞病毒立即早期啟動子，lac系統(tǒng)，trp系統(tǒng)， TAC或TRC系統(tǒng)，表達由T7 RNA聚合酶指導的T7啟動子，3-磷酸甘油酸 酯激酶或其它糖酵解酶的啟動子，酸性磷酸酶啟動子，例如，Pho5和
酵母a-交配因子和已知控制原核或真核細胞或其病毒中的基因表達 的其它序列的啟動子，和各種組合。應理解表達載體的設計可以取決 于諸如轉化的宿主細胞的選擇這類因素。此外，還應考慮載體的拷貝 數，控制該拷貝數的能力和該載體編碼的任何其它蛋白質，諸如抗生 素標記的表達。
本發(fā)明關注可以驅動原核或真核細胞中TRPA1蛋白質表達的任何 啟動子的應用。本文所用的術語"啟動子"意旨調節(jié)選擇的DM序列表達 的DNA序列，所述選擇的DNA序列可操作地與啟動子連接并且影響選擇 的DNA序列在細胞中的表達。"啟動子"一般為能夠結合細胞中RNA聚合 酶并且啟動編碼序列轉錄的DNA調節(jié)元件。例如，啟動子序列可以通過 與其3'末端結合轉錄起始位點并且向上游延伸(5'方向)以便包括啟動
高于背景的可檢測水平的轉錄所必需的最小數量的堿基或元件。在啟 動子序列中可以發(fā)現(xiàn)轉錄起始位點和負責結合RNA聚合酶的蛋白質結
合結構域。真核啟動子通常，但并非始終包含"TATA"箱和"CAAT"箱。
各種啟動子，包括誘導型啟動子可以用于驅動本發(fā)明的各種載體。
術語"啟動子"還包括原核和/或真核啟動子和啟動子元件。本文所 用的術語"啟動子"包括"細胞特異性"啟動子，即僅在特異性細l包(例 如，特異性組織細胞)中影響選擇的DNA序列表達的啟動子。該術語還 覆蓋所謂的"易漏"啟動子，它們調節(jié)選擇的DNA主要在一種組織中的表 達，并且也在其它組織中產生表達。該術語還包括非組織特異性啟動 子和組成型表達或為誘導型的啟動子(即可以控制表達水平)。
如上所述并且在某些實施方案中，本發(fā)明關注包含TRPA1核酸序列 并且能夠表達TRPA1蛋白質的表達載體。當在細胞中表達時，這些載體 表達TRPA1蛋白質，優(yōu)選功能性蛋白質。功能性TRPA1蛋白質介導電流 和/或離子流和/或膜電位。
達。例如，可以使用蛋白質印跡分析，免疫細胞化學或免疫組織化學 證實蛋白質表達。另外或可選擇地，可以使用，例如評價離子流的鈣 成像分析或評價電流的電生理學方法(例如，膜片箝分析)檢測TRPA1 功能。
合成方案和活性拮抗劑的鑒定 組合文庫
具有不同有代表性類型的取代基的本發(fā)明化合物，特別是變體庫
適合于組合化學和其它平行合成方案(例如，參見PCT W0 94/08051)。 結果為可以在高流通量測定法中快速篩選相關化合物的大文庫，例如 上述化合物的各種文庫，以便鑒定潛在的TRPA1激動劑或拮抗劑前導化 合物，并且精制前導化合物的特異性，毒性和/或細胞毒性-動力學特 性。例如，TRPA1生物化學測定，諸如本文披露的那些可以用于篩選具 有對TRP A1的激動劑活性或拮抗劑活性的那些化合物文庫。
只作為例證，用于本發(fā)明目的的組合文庫為化學上相關的化合物 的混合物，可以針對所需的特性將它們一起篩選。在單一反應中制備 許多相關化合物明顯減少并且簡化了需要進行的篩選過程的數量?？?以通過常規(guī)方法進行使得物理特性的篩選。
可以在文庫中生成各種不同水平的多樣性。例如，用于組合反應
的底物芳基在核芳基部分方面可以不同，例如，在環(huán)結構方面可以各 種各樣和/或可以在其它取代基方面改變。
可以利用本領域中產生小有機分子如本發(fā)明主題的化合物的組合 文庫的各種技術。例如，參見Blondelle等(1995) Trends Anal. Chem. 14:83; Affymax的美國專利5， 359， 115和5， 362， 899; Ellman的美國專 利5， 288， 514; Sti 11等的PCT公開號W0 94/08051; ArQule的美國專利 5， 736， 412和5， 712， 171; Chen等(1994) JACS 116: 2661; Kerr等(1993) JACS 115: 252; PCT公開號W092/10092， WO93/09668和WO91/07087; 和Lerner等PCT公開號W093/20242)。因此，可以合成相當于約100-1， 000， OOO或更多本發(fā)明主題化合物的多變體(diversomers)的各種 文庫并且針對特定的活性或特性進行篩選。
對上迷和相關途徑的許多改變能夠合成廣泛不同的化合物文庫， 可以將它們作為TRP A1抑制劑或激動劑測試。
實施例
實施例1:高流通量篩選測定
本測定法依賴于可誘導地表達TRPA1通道的細胞中通道活化后檢 測的胞內Ca2+濃度([Ca21 J升高。使用栽入細胞且此后指示[Ca2+] i的熒 光Ca2+指示劑定量Ca"升高。TRPA1通道的活化之后發(fā)生Ca"流入。將 抑制[Ca2+]i升高的化合物視為用于進一步研究的選中物(hits)。
用TRPA1構建體(特別是編碼具有SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序 列的TRPA1蛋白質的構建體)穩(wěn)定轉染商購HEK293/TREx品系 (Invitrogen)，并且通過常規(guī)的鈣成像篩選，以便在使用1 ng/ml四 環(huán)素刺激后找到具有TRPA1表達的克隆。將這些細胞維持在補充了 100 pg/ml潮霉素的制造商推薦的生長培養(yǎng)基中，以便促進TRPA1構建體 保留。在生長至近匯合后，以 25，000個細胞/孔的密度在有1 pg/ml 四環(huán)素存在下的384孔CellBind平板(Corning)中鋪板，并且使其生 長20-30小時。得到幾乎匯合的單層。然后給細胞加載Ca"染料將 Fura-2/AM或Fluo4/AM加入到各孔中至終濃度分別為2 )iM或1 joM 并且在室溫下分別孵育80分鐘或60分鐘。然后通過在急劇拍打的同 時倒置平板從細胞中除去上清液，然后向各孔中加入40 pL Hank平 衡鹽溶液(HBSS; 0. 185 g/1 D-葡萄糖，0. 9767 g/1 MgS04 (無水)，0.4 g/1 KC1， 0.06 g/1 KH2P04(無水)，0.35 g/1 NaHC03， 8.0 g/1 NaCl 和0. 04788 g/1肘2肝04(無水);pH 7.4)。在用于從加載回收的 1小 時后， <吏用Hamamatsu FDSS 6000系統(tǒng)測定細胞，該系統(tǒng)允許可選擇 地在340 nM和380 nM處照射以便進行Fura-2實驗或在485 nM下照 射以便進行Fluo4實驗。以0.2 Hz的速率獲得結構。在測定過程中， 連續(xù)渦旋平板，在添加每種試劑后使用移液管在孔中混合。為了進行 篩選測定，在收集短(4個結構)基線后將13 |LiL稀釋儲備溶液(在50 下)加入到各孔中2分鐘。然后將13 nL 37. 5 nM AITC(異硫氰酸烯丙 西旨)加入到各孔中，實現(xiàn)各化合物的終濃度為10pM和AITC為7. 5^iM。 在添加AITC后收集數據 3分鐘，其中熒光強度(就Fluo4而言)和
F340/F38Q之比(就Fura-2而言)與[Ca2+] i成正比。陰性對照由接觸 AITC，但不接觸化合物的HEK293/TREx TRPA1細月包組成。陽性對照通 常為接觸AITC，但不接觸化合物的HEK293/TREx("親代")細胞，而有 時還使用正常，但不接觸AITC或化合物的HEK/293 TRExTRPAl細胞。 這些對照組確定了篩選窗并且將"選中物"定義為將熒光反應抑制至少 40%的那些化合物。測定定義為"選中物"的化合物的IC5。值。將基于 Fluo4細胞的熒光測定法用于測定在有不同藥物濃度存在下的胞內 Ca"濃度。測試濃度為40 |iM， 20 ^iM， 10 )iM， 5 |iM， 2. 5 (^M， 1. 25 和O. 625jLiM。在所有濃度下一式三份測試化合物。標準軟件用于擬合
ICs。曲線。
另外或可選擇地，可以將效率表示為在有(指定濃度化合物)存在 下與沒有化合物存在下或與對照化合物相比的抑制％。例如，將效率表 示為在有與沒有化合物存在下相比的離子流抑制％。
實施例2:膜片箝實驗
膜片箝實驗允許檢測通過上迷細胞系中的TRPA1通道的電流。為 了能夠記錄穩(wěn)定水平下的電流和防止其它實驗室觀察到的"衰減"，有 必要使用穿孔的膜片技術，其防止細胞質與移液管溶液發(fā)生透析。在 正常全細胞膜片箝記錄中，使玻璃電極接觸單一細胞并且用細胞膜建 立高電阻(gigaohm)密封物。然后使膜破碎以便獲得全細胞結構，從而 能夠使用與電極連接的放大器控制細胞膜電壓并且測定通過膜的電 流，并且用移液管溶液替代細胞質。相反，在穿孔的膜片方式中，有 抗生素兩性霉素存在于移液管溶液中并且在獲得密封物后幾分鐘過程 內擴散接觸細胞。兩性霉素在移液管下的膜中形成離子可透過的孔， 從而能夠通過某些離子，但保持大部分天然胞質成分。灌流系統(tǒng)能夠 控制胞外溶液，包括添加的電流阻滯劑和活化劑。通過添加5pMAITC 到該溶液中活化電流。
將TRPA1細胞誘導20-48小時，從生長平板中取出并且以低密度 在玻璃蓋玻片上再鋪板(以便實現(xiàn)良好的單細胞物理分離)以便測^_ 。
在某些情況中，使細胞在玻璃蓋玻片上以低密度生長過夜。在具有-40 mV保持電位的全細胞方式中進行膜片箝記錄。每隔5秒將電壓從-120 等變至+100 mV，期限為400 ms。在-80 mV和+80 mV下將引起的電流 定量。內部溶液由140 mM天冬氨酸銫，10 mM EGTA， 2. 2 mM CaCl2， 2.08 inM MgCL和10 mM HEPES， pH 7.2組成并且在實驗前即刻加入 50nM計算的游離Ca"和60mg/ml兩性霉素。外部溶液由150mMNaCl， 4.5mMKCl， 3 mM MgCh， 10 mM HEPES， 10mM谷氨酰胺，lmM EGTA， pH 7. 4組成。在添加AITC時，僅在表達TRPA1的細胞，但不在親代 HEK293 TREx細胞中誘導TRPA1電流。除去AITC刺激物導致大部分電 流消失。測試可能的阻滯劑在連續(xù)有AITC存在下阻斷內向和外向電流 的能力。
通過測試5 )LiM和500 nM的每種化合物評估化合物的IC5。。當5 |liM 化合物未表現(xiàn)出阻斷時，將ICs評估為〉10 joM。當5 jnM化合物表現(xiàn) 出50%或50%以下的阻斷時，ICs?？梢赃_到5-10 ^M的ICs。近似評估值。 類似地評估了 500 nM-5 ^M的化合物的IC5。。在多個濃度下重新測試 在500 nM下具有50%或50%以上阻斷的化合物并且通過標準方程擬合 每次時的阻斷％以便使用5-6點濃度/相應實驗精確測定IC5。。除所示 的外，還從膜片箝實驗值獲得了表1和2中所示的ICs。值。
實施例3.其它篩選測定
盡管使用實施例1和2中所述的測定法鑒定了本文提供的典型 TRPA1抑制劑，但是其它基于細胞的測定法可以用于鑒定和/或表征 TRPA1抑制劑。 一種這類測定法描述在2005年3月11日提交的美國 申請順序號US11/078，188中，將該文獻的內容完整地引入本文作為參 考?？梢栽谏暾?zhí)?1/078, 188中所述的原核細胞系統(tǒng)中表達TRPA1 蛋白質，并且可以將該系統(tǒng)用于篩選調節(jié)TRPA1蛋白質活性的化合物。 可選擇地，可以在原核細胞系統(tǒng)中表達非TRPA1的離子通道，并且可 以將該系統(tǒng)用于評價鑒定的TRPA1抑制劑在其它離子通道方面的活性 i普。
可以以高流通量方式進行為鑒定和/或表征抑制TRPA1活性的化 合物而進行的任何測定，或可以將其按照小規(guī)模進行以便檢驗單個的 化合物或少量化合物。另外，可以如下進行任何這些測定(i)作為 初步測定以便鑒定抑制TRPA1功能的化合物；(ii)作為二次測定以便 評價化合物在其對其它離子通道活性方面的特異性；(Hi)作為用于 藥物化學程序中的測定以便優(yōu)化受試化合物。
實施例4: TRPA1抑制劑的血漿水平
化合物200在37。C下的大鼠血漿中保持穩(wěn)定^:l小時。
在單一靜脈內推注劑量0. 9mg/kg，腹膜內劑量12mg/kg(混懸液) 和口服劑量12 mg/kg(混懸液)之后，通過HPLC/MS/MS，測定雄性 Sprague-Dawley大鼠中的化合物200血漿水平。
對于靜脈內給藥，用30。/。w/vCAPTIS0L配制化合物200溶液，目 標濃度為0.25 mg/mL，作為通過有意識的大鼠尾部以4 mL/kg劑量體 積的快速推注(2-3秒)給藥。
對于腹膜內給藥，將化合物200配制成在CMC(羧甲基纖維素)中 的均勻混懸液，目標濃度為lmg/mL并且以10mL/kg的劑量體積給藥。
對于口服給藥，將化合物200配制成在CMC(羧甲基纖維素)中的 均勻混懸液，目標濃度為1 mg/mL，以管飼法對有意識的禁食 Sprague-Dawley大鼠給藥，劑量體積為10 mL/kg。
半衰期，血漿清除率和分布體積的估計值分別為32分鐘，27 mL/kg/分鐘和1276 mL/kg。在禁食大鼠中給予混懸液后的生物利用度 估計值為~8%。血漿-濃度-時間曲線圖提示，化合物200被快速吸收， 正如通過45分鐘后出現(xiàn)Cmax的觀察結果所突出顯示的。
在以12 mg/kg腹膜內給藥后(15 - 60分鐘)并且還在以12 mg/kg 口服給予后(45分鐘)觀察到與對TRPA1的ICw類似的血漿水平(lOOO nM = 355 ng/mL)。
制備制劑形式的TRPA1抑制劑并且通過幾種不同給藥途徑給藥。 這表明可以以許多方式配制TRPA1抑制劑并且它們適合于最有效地治
療特定的疾病或損傷。這些特性與對大鼠給予TRPA1抑制劑后觀察到 的最少副作用的組合表明，TRPA1抑制劑具有合適的藥物和藥物候選 物特征。
實施例5: TRPAl拮抗劑在失禁模型中的測試
為了測試TRPAl抑制劑化合物(化合物200)在治療失禁中的有效 性，在以手術方式使膀胱部分出口阻塞(BOO)后對大鼠給予不同濃度的 化合物[例如，低濃度(2. 2微摩爾)，中濃度(6. 6微摩爾)和高濃度(2 0 微摩爾濃度)]。將不同劑量的TRPAl抑制劑性化合物的功效與單獨給 予賦形劑的對照組(偽對照組)功效進行比較。還將功效與給予陽性對 照如阿托品的大鼠進行比較。阿托品并非TRPAl抑制劑，但它確實減 少了 BOO模型中部分膀胱出口阻塞后的膀胱過度活動。
在這些研究中4吏用雌性Sprague Dawley大鼠。大鼠進行手術部分 膀胱出口阻塞(BOO)或假擬手術。BOO(或假擬)手術后5周，以手術方 式將膀胱內導管植入膀胱半球以便進行尿流動力學檢查。導管植入后 1周(BOO或假擬手術后6周)開始尿流動力學檢查。使膀胱導管與壓力 傳感器的一個出口連接并且使該壓力傳感器的另一個出口與注射泵連 接。金屬絲底的動物籠下的分析天平測定了在連續(xù)膀胱測壓過程中排 泄的尿量。將單一膀胱內壓圖(CMG)定義為單一充盈-排泄循環(huán)過程中 的膀胱壓力，輸注體積和排泄體積的同時記錄值。
在假擬阻塞和BOO動物中測試每種濃度的TRPAl抑制劑(化合物 200)。還測試了給予載體的動物。實驗由至少20CMG個循環(huán)組成。簡 言之，將等滲鹽水(O. 9%)以175 ul/分鐘(10. 5ml/小時)的速率輸注入 膀胱。在鹽水輸注后，以175 ul/分鐘輸注拮抗劑化合物。
就每個CMG周期而言，評價下列參數輸注體積(每個CMG循環(huán)輸 注的鹽水或藥物量)；排泄體積(每個CMG循環(huán)動物排泄的尿量)；最小 壓力(充盈過程中的最小壓力)；閾值壓(在膀胱壓力開始快速升高時排 尿前的壓力)；平均壓力(在充盈過程中和閾值前的平均壓力)；最大壓 力；排尿間隔(兩次依次排泄過程之間的時間)；尿流量指數。
這些實驗證實TRPA1抑制劑被膀胱阻塞的動物所耐受。另外，這 些實驗證實TRPA1抑制劑降低了失禁BOO模型中膀胱壓力閾值和最大 膀胱壓力。這些作用為特異性的并且在單獨給予載體后未觀察到。
實施例6: TRPA1拮抗劑在緩激肽誘導的疼痛模型中的測試 如上所述，緩激肽模型涉及足底內注射5 ng/jiL緩激肽溶液。注 射緩激肽溶液一般導致快速致敏。通過評價作為對由改進的 Hargreaves儀器遞送的輕度熱刺激物反應的注射爪的熱逃逸潛伏期 測定致敏作用。


圖1 a和1 b概括了在緩激肽模型中測試化合物2 00后獲得的數據。 本研究檢驗了 200mg/kg， 50mg/kg和12. 5mg/kg腹膜內化合物200對 緩激肽誘導的觸覺異常性疼痛的鎮(zhèn)痛作用。
雄性Holtzmann大鼠在緩激肽注射前30分鐘接受給予的TRPA1 抑制劑或載體(O. 5%曱基纖維素)。通過腹膜內(IP)注射抑制劑或載體。 對接受TRPA1抑制劑的動物給予12. 5 mg/kg, 50 mg/kg或200 mg/kg 劑量。在遞送的TRPA1抑制劑的每個濃度下以及載體下評價8只動物。 給予藥物或載體后30分鐘，在右后爪中遞送30ug/10(^L劑量的緩激 肽。
在整個研究過程中，在每次觀察期限過程中進行一般行為評價。 觀察結果包括觸覺異常性疼痛(通過施加于體表的輕度觸摸誘導的發(fā) 聲/躁動)，自發(fā)發(fā)聲，體表撕咬和咀嚼，后肢放置和步進反射喪失， 后肢承重喪失和正向反射喪失。另外，評價和測定機械性異常性疼痛。 圖la和lb中提供的結果基于對機械性異常性疼痛的測量值。
緩激肽產生了引起退縮行為所需的觸覺閾值的顯著降低。這種異 常性疼痛持續(xù)達240分鐘。以達200mg/kg的劑量IP遞送TRPA1抑制 劑預治療表現(xiàn)出對緩激肽注射后機械性閾值的劑量依賴性作用，它持 續(xù)約60分鐘。然而同時未注意到行為參數的改變并且僅在給予最高劑 量的8只大鼠中的3只中觀察到了輕度的鎮(zhèn)靜作用。
在大鼠足底內的緩激肽產生了顯著性長期持續(xù)的觸覺異常性疼
痛。這些研究證實TRPA1抑制劑產生了異常性疼痛的劑量依賴性降低。 此外，該藥物減輕了疼痛癥狀約60分鐘。這些實驗證實TRPA1抑制劑 有效減輕緩激肽疼痛模型中的疼痛癥狀(例如，機械性異常性疼痛)。
實施例7: TRPA1拮抗劑在福爾馬林疼痛模型中的測試 如上所述，福爾馬林模型涉及透皮或通過腹膜內注射福爾馬林溶 液。注射福爾馬林溶液激活了 二相反應且由此提供了傷害性和炎性疼 痛方式。福爾馬林模型用于評價典型TRPA1抑制劑在治療疼痛中的有 效性。
圖2概括了化合物200在福爾馬林模型中測試后獲得的數據。簡 言之，遵循下列方案。雄性Holtzmann大鼠接受足底內注射50pL 2% 福爾馬林。通過檢測注射的后爪上放置的小金屬條的運動的自動化傳 感器檢測爪的退縮。在注射福爾馬林前約15分鐘給予藥物或載體。通 過在早期(注射福爾馬林后約5分鐘)，晚期(注射福爾馬林后約30分 鐘)和介入疼痛免除期過程中計數每分鐘的退縮次數測定動物對注射 刺激物的反應。在圖2中，每一數據組(早期和晚期)的最右側棒形 圖表示單獨給予載體，且最左棒形圖表示給予加巴噴丁。給予的TRPA1 抑制性化合物的最高濃度為與描繪加巴噴丁給藥相鄰的棒形圖，而給 予的TRPA1抑制性化合物的最低濃度為與描繪給予載體相鄰的棒形 圖。
將典型實驗結果概括在圖2中。在接受不同劑量的TRPA1抑制劑 (化合物200),加巴噴丁或載體對照的動物中注射福爾馬林后測定每 分鐘退縮次數，即動物經歷的疼痛和不適的量度。給予TRPA1抑制劑 基本上減少了早期和晚期過程中每分鐘退縮的次數。這些結果表明 TRPA1抑制劑減少了福爾馬林模型中疼痛的兩個時期。TRPA1抑制劑在 傷害性和炎性疼痛模型的兩個時期中的功效支持了 TRPA1抑制劑在治 療嚴重性疼痛，包括慢性和急性痛中的應用。
實施例8:TRPA1拮抗劑在急性炎性疼痛的角叉菜膠模型中的測
試
如上所述，角叉菜膠模型為急性炎性疼痛模型。照此，它可以用 于評價在緩解炎癥導致的疼痛，例如因關節(jié)炎導致的疼痛中的有效性。
圖3概括了化合物200在角叉菜膠模型中測試后獲得的數據。簡 言之，使用Hargreaves儀器預測試首次用于實驗的大鼠對熱刺激的敏 感性。第二天，在測試前約4.5小時將100 jiL X-角叉菜膠注入右后 爪的足底表面。測試前30-60分鐘給大鼠經腹膜內注射載體或藥物(化 合物200或雙氯芬酸以便評價IP給予TRPA1抑制劑的功效)。
在本研究中，給予的藥物為TRPA1抑制劑或非類固醇抗炎藥雙氯 芬酸。在給予角叉菜膠和藥物或載體對照后，測量爪體積并且用于評 價減輕的炎癥。
圖3概括了這些實驗的結果。就每種"藥物"(TRPA1或雙氯芬酸) 或載體而言，顯示了給藥劑量(以mg/kg計)和給藥途徑(IP)。圖3a 和3b中概括的結果表明TRPA1抑制劑減小了爪體積(例如減輕的炎 癥) 炎癥減輕與給予雙氯芬酸后觀察到的結果類似。
圖3中概括的結果表明TRPA1抑制劑減輕了角叉茱膠模型中的炎 癥。這種炎癥的減輕可能伴隨因炎癥導致的疼痛的同時減輕。TRPA1 抑制劑在這種炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制劑在治療炎癥 和炎性疼痛，例如因關節(jié)炎導致的炎性疼痛中的應用。
注意到在本研究中，測定了爪體積的改變。給予TRPA1抑制劑后 觀察到的體積減小(例如，炎癥減輕)可能伴隨相應的與炎癥相關的疼 痛或不適感的減輕?？蛇x擇地或另外，可以直接評價疼痛指數。簡言 之，遵循上述概括的方案并且在注射角叉菜膠和藥物或載體對照后， 可以測定熱逃逸潛伏期。將數據表示為記錄的爪退縮潛伏期(PWLs)， 以秒計)。
實施例9: TRPA1拮抗劑在炎性疼痛的CFA模型中的測試 如上所述，完全弗氏佐劑(CFA)模型為炎性疼痛模型。照此，它可 以用于評價在緩解炎癥導致的疼痛，例如因關節(jié)炎和其它炎性疾患導
致的疼痛中的有效性。
圖4概括了化合物200在CFA模型中測試后獲得的數據。使用 Hargreaves儀器預測試首次用于實驗的大鼠對熱刺激的敏感性。第二 天，將100 |iL完全弗氏佐劑(CFA)注入右后爪的足底表面。2天后， 在早晨再次預先測試大鼠。在下午，給大鼠注射載體對照或藥物(TRPAl 抑制劑200或非類固醇抗炎藥雙氯芬酸)。經腹膜內注射藥物或載體并 且在45分鐘后通過將熱源施加于注射和未注射CFA的后爪并且測定退
縮潛伏期來測試大鼠的痛覺過敏。
圖4概括了這些實驗的結果，它們表明這種TRPA1抑制劑減輕了 炎性疼痛的CFA模型中的疼痛。特別地，TRPA1抑制劑減輕了這種炎 性疼痛模型中的熱痛覺過敏。這種TRPA1抑制劑的功效優(yōu)于雙氯芬酸 (非類固醇抗炎藥)。另外，這些實驗顯示，TRPA1抑制劑減輕了受傷 害爪的疼痛，而不干擾正常的感覺。這一結果通過對未受侵害的對照 爪(非發(fā)炎的)的分析得以證實。
TRPA1抑制劑在這種炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制劑 在治療炎性疼痛，例如，因關節(jié)炎導致的疼痛中的應用。測試的TRPA1 抑制劑表現(xiàn)出在沒有毒性和不使正常感覺遲緩的情況下減輕疼痛。另 外，測試的TRPA1抑制劑以與非類固醇抗炎藥類似或比它更大的功效 減輕了疼痛。由于觀察到非類固醇抗炎化合物的副作用，所以TRPA1 抑制劑可以在不出現(xiàn)可利用的止痛藥的副作用的情況下減輕疼痛。
實施例10: TRPA1拮抗劑在疼痛熱損傷模型的測試 熱損傷模型用于評價典型TRPA1抑制劑在治療傷害性疼痛中的有 效性。
簡言之，可以使用下列方案。使用Hargreaves型儀器測試雄性 Holtzman大鼠(約300克)的熱逃逸。在輕度麻醉下，將熱損傷(52t: 下45秒)施加于一個足后部。在損傷前和損傷后30， 60， 80和120 分鐘測試動物的受損和未受損爪的熱逃逸潛伏期。在基線測量后和熱 損傷前約15-20分鐘給予藥物(TRPA1抑制劑)或載體(O. 5%甲基纖維
素)。除逃逸潛伏期測定外，在整個實驗過程中進行行為觀察。
實施例11: TRPA1拮抗劑在神經性疼痛的Chung模型的測試 簡言之，通過連接L4/5神經根準備雄性SpragueDawley大鼠(約 175克)。5-8天后，使用VonFrey毛測試動物異常性疼痛。使用"上-下"(up-down)法評估閾值。給予藥物或載體并且在接下來的4小時 內定期測試動物。
實施例12:本發(fā)明化合物的合成
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-異 丙基苯基)乙酰胺(200)
在0'C下向茶堿-7-乙酸(IOI, 32. 5 g， 0. 136mol)在無水DMF(400 mL)中的混懸液中加入DIPEA(54 mL， 0. 31 mol)。加入純凈苯胺(102， 20. 4mL， 0. 143mol),隨后添加DMAP (19. 2 g, 0. 16 mol)和EDCI (30. 1 g, 0.16mol)。將該反應混合物在18小時內溫至室溫，然后在40-43 。C下攪拌1.5天。用CH2Cl2(1.8L)稀釋該反應混合物，用&0(0. 7L)， 10%檸檬酸(0.5 L)， NaHC03(飽和，0. 6 L)，鹽水洗滌，用Na2S04干燥 鹽并且在真空中濃縮且從乙酸乙酯/己烷中重結晶而得到化合物 200 (41%， 19.8 g): MS(APCI) m/z: 356.2 [M+H]+。對C18H21N503的計 算值C, 60.83; H， 5.96; N， 19.71;測定值C， 60.53; H， 5.97; N， 19.76。
通過使用EDCI的偶聯(lián)制備酰胺類的一般操作A
向茶堿-7-乙酸(2 mmol) ， DMAP(2腿o1),取代的苯乙胺(2 mmol) 和DIPEA(4 mmol)在DMF(20 mL)中的混合物中加入EDCI (2 mmol)。將 該反應混合物加熱至401C并且攪拌過夜。在真空中濃縮該溶液并且將
殘余物溶于EtOAc(lOO mL),用H20，檸檬酸(10%), NaHC03(飽和)和 鹽水洗滌，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。通過硅膠快速色鐠法純 化粗產物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脫。
N-[2-(4-氯苯基)-乙基]-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酰胺(268):<formula>formula see original document page 122</formula>
通過一般操作A由101 (500 mg，2. 1 mmol)和103 (292 pL，2. 1 mmol) 制備化合物268 (107 mg, 14%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。
2-(1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N-(2-對 - 曱苯基-乙基) - 乙酰胺(400):
101 104 柳
通過一般操作A由101 (503 mg，2. 1 mmol)和104 (308 jiL，2. 1 mmol) 制備化合物400 (99 mg， 13%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。
通過?；戎苽漉０奉愐话悴僮鰾
在冰-水浴中冷卻茶堿-7-乙酸(2 ramol)在CHC13(15 mL)和 MeCN(15 mL)中的混懸液。然后滴加草酰氯(2. 2 mmol)。然后加入催化 的DMF(~25 ^L)。將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后用水-水浴冷 卻該溶液且一次加入DMAP(2. 5 mmol)。滴加取4戈的苯乙胺并且將該反 應混合物在室溫下攪拌過夜。在用CHCl3(50mL)稀釋后，混合物用H20， 檸檬酸(在1120中10%), NaHC03(飽和)洗滌，用Na2S04干燥并且在真
中濃縮。通過硅膠快速色i普法純化粗產物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脫<
N- [2- (3， 4- 二氯苯基) - 乙基]-2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代 1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)_乙酰胺(396):
<formula>formula see original document page 123</formula>
通過一般操作B由101 (506 mg，2. 1 mmol)和106 (320 |uL，2. 1 mmol) 制備化合物396 (490 mg， 56%)。 MS (APCI): m/z 410 [M+H]+。
N-[2-(4-二曱氨基苯基)-乙基]-2-(l， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-乙酰胺(397):
通過一般操作B由101 (507 mg， 2. 1 mmol)和107 (350 pL， ~2. 2 mmol)制備化合物397 (610 mg， 75%)。 MS(APCI): m/z 385 [M+H]+。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (4-甲氧基-苯基)-乙基]-乙酰胺(261)<formula>formula see original document page 124</formula>
通過一般操作B由101 (1. 01 g,4. 2 mmol)和108 (630 pL,4. 3 mmol) 制備化合物261 (820 mg， 52%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。
2-(l， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫噤呤-7-基)-N- [ 3- (4-甲氧基-苯基)-丙基]-乙酰胺(4 01):
<formula>formula see original document page 124</formula>
通過一般操作B由101 (506 mg, 2. 1 mmol)和109 (360 pL， ~2. 1 mmol)制備化合物401 (495 mg, 60%)。 MS(APCI): m/z 386 [M+H]+。 對(:19}123&04的計算值:C， 59.21; H， 6.01; N， 18.17;測定值C， 59. 37; H， 6. 06; N， 18. 18。
2-(l, 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱基-苯基)-乙基]-乙酰胺(407):
OH
CHCI^CH3CN O
DMAP
407
通過一般操作B由101 (508 mg, 2. 1 ramol)和110 (290 pL, 2. 1. mmol)制備化合物407 (494 mg， 65%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。 對d8HnN力3的計算值:C, 60. 83; H, 5. 96; N， 19. 71;測定值C， 61. 09: H， 6. 03; N， 19. 76。
2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱氧基-苯基) -乙基]乙酰胺(408):
通過一般操作B由101 (502 g， 2. 1 mmol)和111 (310 |uL, 2. 1隱l) 制備化合物4Q8 (462 mg, 59%) 。 MS (APCI): m/z 372 [M+H]+。對C18H21N504 的計算值C， 58.21; H, 5.70; N， 18.86;測定值C, 57.95; H, 5. 78; N， 18. 61。
N-[2-(4-氰基苯基)- 乙基]-2-(l，3-二曱基-2，6-二氧代 2,3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酰胺(409) <formula>formula see original document page 126</formula>2-(4-溴苯基)乙基氨基甲酸叔丁酯(113)
向預冷卻的112(2.0 g， 10 mmol)在THF(IO mL)中的0。C溶液中 滴加(Boc)20(2. 2 g, 10 mmol)。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。 將其在真空中濃縮而得到113(3 g， 100°/。)，為白色固體，將其不經進 一步純化用于下一步。
2-(4-氰基苯基)乙基氨基曱酸叔丁酯(114)
在&環(huán)境中將化合物113 (530 mg, 1. 8 mmol)溶于干,(17 mL)。 加入Zn(CN)2(416 mg, 3.6 mmol)和Pd (PPh3) 4 (200 mg， 0.18 mmol)。 攪拌該反應混合物并且在樣"皮儀器(CEM Discover )中在150。C下加熱 20分鐘且然后在真空中濃縮該反應混合物。通過硅膠快速色鐠法純化 殘余物，用EtOAc/己烷(20-80%)洗脫而得到114 (540 mg， 31%),為 白色固體。MS(APCI,負)m/z 245 [M-H]+。
4-氰基苯乙胺(115)
將化合物114 (308 mg， 1.25 mmol)溶于DCM(4 mL)并且在冰-水 浴中冷卻該溶液。然后加入TFA(3. 5 mL)并且將該混合物在室溫下攪 拌15分鐘。在真空中濃縮該反應混合物并且將殘余物溶于EtOAc(50 mL)。用LC03(飽和，3x)，鹽水洗滌該溶液，干燥并且濃縮而得到 115(175 mg， 95%),為淡黃色油狀物。MS(APCI): m/z 147 [M+H]+。
N-[2-(4-氰基苯基) - 乙基]-2-(1，3-二曱基-2，6-二氧代 -l, 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)乙酰胺(409)
按照一般操作B由101 (300 mg，l. 3 mmol)和115(175 mg，l. 2 mmol) 制備化合物409 (93 mg， 21%)。 MS(APCI): m/z 367 [M+H] +。對 C18H18N6O3.0. 04EtOAc.0. 1H20的計算值C， 58.68; H， 5.02; N， 22.61; 測定值C， 58.75; H， 5.01; N， 22.46。
N- (2-甲氧基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四 氫噤呤-7-基)乙酰胺(403):
<formula>formula see original document page 127</formula>
在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。然后加入 化合物116 (0. 36 mL， 2. 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜且然后加入 乙酸乙酯(100 mL)。用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液并 且用Na2S0,干燥。在干燥過程中形成一定固體沉淀，加入甲醇(10mL) 以便溶解該沉淀且然后過濾該溶液。在真空中濃縮濾液并且通過40 g 硅膠快速色i普法純化固體殘余物，用EtOAc/己烷作為洗脫劑。將純化 的產物與乙醚(25mL)—起研磨并且過濾而得到403，為白色固體(224 mg， 24%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。對C18H21N504的計算值:C， 58.21; H， 5.70; N， 18.86;測定值C， 58.26; H， 5. 73; N， 18.74。
N-(2-氟苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫噪
呤-7-基)乙酰胺(404)<formula>formula see original document page 127</formula>在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合
物117 (Q. 33 mL， 2. 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入EtOAc (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S04干燥 并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色鐠法純化固體 殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產物與乙醚(30 mL)—起研磨 并且過濾而得到404，為白色固體(281mg， 31°/。)。 MS(APCI): m/z 360 [M+H]+。對C17H18FN504 .0. 3H20的計算值C， 55. 98; H, 5. 14; N， 19. 20; 測定值C, 55.87; H, 5.07; N， 19.13。
N-(2-氯苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫噤 呤-7-基)乙酰胺(405)
<formula>formula see original document page 128</formula>
在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合 物118 (Q. 35 mL， 2， 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入Et0Ac (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S(^干燥 并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色語法純化固體 殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產物與MeOH(15 mL)—起研磨 并且過濾而得到405，為白色固體(270 mg， 28%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。對(:171118(:1&03的計算值C， 54.33; H， 4.83; N， 18.64; Cl, 9.43;測定值C， 54.57; H, 4.80; N3 18.66; Cl， 9.52。
N- (2-甲基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-嘌呤-7-基)乙酰胺(406):
四氫
<formula>formula see original document page 128</formula>
在N2環(huán)境中將化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合 物119 (338 mg， 2.5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入乙酸乙酯 (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S04 干燥并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色鐠法純化 固體殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產物與乙醚(3t) mL)—起 研磨并且過濾而得到406，為白色固體(290 mg， 32%)。 MS (APCI): m/z 356 [M+H]+。對(:1811211^03的計算值C， 60.83; H， 5.96; N， 19.71; 測定值C， 60. 85; H， 6.01; N， 19.74。
N- (4-異丙基苯基)-2- (l-曱基-2, 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
(l-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酸乙酯 (121)
向1-曱基黃嘌呤(120, lg， 6. 01 mmol)在DMF中的溶液加入碳酸 鉀(O. 91 g， 6.6 mmol)并且將該反應混合物加熱至90 。C且攪拌1小 時。然后在45分鐘內向反應中滴加ClCH2COOEt(0. 36 g, 3.0 mmol) 在DMF中的溶液。在攪拌另外的15分鐘后，將該反應體系冷卻至室溫 并且傾入水冷的1N HC1(50 ml)。然后用氯仿(50 x 2 ml)萃取該反應 體系。用水(IOO mL)洗滌合并的有機層，用Na2SO^干燥并且在真空中 濃縮。向所得固體中加入在己烷中的30 %二氯甲烷(400 mL)并且將所 得混合物攪拌15分鐘且過濾而得到化合物121,為黃色固體(0.6 g，40%)。 MS(APCI): m/z 253.32 [M+H]+。
(l-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基-乙酸(122) 將酯121(0.6 g， 2.4 mmol)溶于2N HC1 (25 mL)并且回流2小時。 將該反應混合物冷卻至O'C且然后溫至rt。過濾沉淀，用乙醚'冼，滌并 且干燥而得到白色固體122 (0. 23， 45 %)。MS(APCI):m/z 224. 2 [M+H]+。
N-(4-異丙基苯基)-2-(l-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
向0 。C的酸122(0.2 g， 0.89 mmol)在氯仿(35 mL)中的溶液中 加入草酰氯(O. 67 g， 5.3 mmol)和催化量的DMF。將該反應體系在室 溫下攪拌2小時且然后在真空中濃縮。將所得物質溶于CHCl3(30mL)， 冷卻至(TC并且加入4-異丙基苯胺并且將該反應體系攪^半過夜，同時 溫至rt。用CHC13(50 mL)稀釋該反應混合物并且用1 N HC1 (50 mL) 洗滌。用水(75mL)洗滌合并的有機層，用Na2S(h干燥，在真空中濃縮 并且通過珪膠快速色i普法純化粗產物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH 洗脫而得到391 (0. 089g， 33%)，為白色固體。MS(APCI): m/z 342.3 [M+H]+。對C17H19N5Or0. 28 H20的計算值C， 58.94; H， 5.69; N， 20.22; 測定值C, 58.94; H， 5.67; N， 19.78。
2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)一N- (4-異 丙基苯基)-2-甲基丙酰胺(387):
<formula>formula see original document page 130</formula>2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3, 6-四氫嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸乙酯(123)
向茶堿(101， 2g， 11. 10mmol)在DMF中的溶液中加入碳酸鉀(1. 84 g， 13.32 mmol)并且將該反應體系加熱至90 "C且攪拌1小時。然后 在10分鐘內滴加在DMF中的2-溴異丁酸乙酯(2. 59 g， 13. 32 mmol)。 將所得反應混合物在90。C下攪拌16小時。將該反應體現(xiàn)冷卻至rt, 傾入水冷的IN HC1 (50 ml)并且用氯仿(100 x 2 ml)萃取。用水(100 mL) 洗滌合并的有機層，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。獲得粗的123, 為淡黃色固體(l.l g， 34%)。 MS(APCI): m/z 295.5 [M+H]+，并且不 進一步純化下一步。
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸(124)
將酯123(1 g， 3.39 minol)溶于2N HC1 (25 mL)并且將該反應體 系回流30小時。將該反應體系冷卻至O TC且然后溫至rt。過濾所得 沉淀，用乙醚洗滌且干燥至得到124，為白色固體(O. 55, 55.5 %)。 MS(APCI): m/z 267.4 [M+H〗+。
2-(1, 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)N-(4-異 丙基-苯基)-異丁酰胺(387)
在0 "C下向酸124(0. 2 g， 0.75 mmol)在CHC13 (30 mL)中的溶液 中加入草酰氯(O. 57 g, 4.5 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在室 溫下攪拌2小時并且在真空中濃縮且然后再溶于CHC1"將該混合物冷 卻至0'C且然后加入4-異丙基苯胺并且將該反應混合物攪拌過夜，同 時溫至rt。用CHC13(30 mL)稀釋該反應混合物并且用1 N HC1(50 mL) 洗滌。用水(75mL)洗滌合并的有機層，用Na2S04干燥并且在真空中濃 縮且通過硅膠快速色i瞽法純化津且產物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH 洗脫而得到387，為白色固體(O. 19g， 58.8%)。 MS(APCI): m/z 384. 3 [M+H]+。對0;2。112^03的計算值C， 62.65; H， 6.57; N， 18.26;測定
值C， 62. 40; H, 6. 51; N， 18. 15。
N-(4-異丙基苯基)-2-(3-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(388):
<formula>formula see original document page 132</formula>
在0 。C下向酸125(0. 5 g, 2. 23 mmol)在CHCh(50 mL)中的溶液 中加入草酰氯(l. 69 g， 13. 3mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時，在真空中濃縮且再溶于CHC13。將該溶液冷卻至(TC且 然后加入4-異丙基苯胺并且將該反應混合物攪拌過夜，同時溫至rt。 用CHC13(30 mL)稀釋該反應混合物并且用1 N HC1(50 raL)洗滌。用水 (75 iriL)洗滌合并的有機層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮且通過硅 膠快速色鐠法純化粗產物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH洗脫而得 到388,為白色固體(0.23g, 31 %)。 MS(APCI): m/z 342.2 [M+H〗+。 對C17H19N3O3.0. 4 H20的計算值:C， 58.58; H， 5.73; N， 20.09;測定 值C, 58. 72; H， 5. 63; N, 19. 80。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(3-曱基-2，6-二氧代-1，2， 3，6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(394) ， N- (4-環(huán)戊基苯基)-2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -1，2，3，6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-環(huán)戊基苯 基)-2- (1， 3- 二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺 (398):<formula>formula see original document page 132</formula>
1- 環(huán)戊基-2-硝基苯(127a)和l-環(huán)戊基-4-硝基苯(127b) 向在IO 。C下攪拌的環(huán)戊基苯126(5g, 34. 2)在乙酐(50 mL)中的
溶液中滴加70%硝酸(2. 99 g， 34. 2mmo1)。將該黃色均勻混合物在IO 。C下攪拌l小時。然后將該反應體系傾入水，用冷的濃NaOH中和并且 用乙醚萃取幾次。將乙醚層合并并且用過量的碳酸鉀水溶液(IOO mL) 洗滌，用Na2S(h千燥并且在真空中濃縮而得到化合物127a和127b的 混合物(6. 4 g)。將該混合物不經進一步純化用于隨后的步驟。
2- 環(huán)戊基苯胺(128a)和4-環(huán)戊基苯胺(128b)
向粗產物127a和127b(2. 5g)在EtOH(100mL)中的溶液中加入10 % Pd/C(0. 9 g， 3.5 mol %)并且將該反應體系在氫氣嚢下攪拌3小時。 然后通過C鹽過濾該反應體系，在真空中濃縮并且通過硅膠快速色i普 法純化粗產物，用EtOAc/己烷洗脫而得到鄰位-化合物128a(0. 5 g， 23.8%)。 MS(APCI): m/z 162. 3 ([M+H]+)和對位-化合128b (1 g， 47.6 %)。 MS(APCI): m/z 162.3 [M+H]+。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(3-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氳嘌呤 -7-基)乙酰胺(394)
在0 。C下向酸129(2.1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氯(12. 6 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時，在真空中濃縮。奸殘余物再溶于CHCl3并且冷卻至0 。C。向該溶液中加入環(huán)戊胺128a并且將該反應體系在rt下攪拌過夜。 然后用CHC13(30 mL)稀釋該反應體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用 水(75mL)洗滌合并的有機層，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。通過 硅膠快速色語法純化產物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 394，為淡黃色固體(22 %)。 mp: 295-300 。C 。 MS(APCI): m/z 368.2 [M+H]+。對C19H21N5O3.0. 45 H20的計算值C， 60, 77; H， 5. 88; N， 18. 65; 測定值C， 61. 07; H， 5. 85; N， 18. 23。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氬 嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-環(huán)戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2，6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺(398)
在0 'C下向酸130(2. 1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氟(12.6 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時并且在真空中濃縮。將殘余物再溶于CHCh并且冷卻至0 。C。向該溶液中加入環(huán)戊胺128b并且將該反應體系在rt下攪拌過夜。 然后用CHC13(30 mL)稀釋該反應體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用 水(75 mL)洗滌合并的有機層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過 硅膠快速色語法純化產物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 395(31 %)，為淡紅色固體，Mp: 260—262 'C 。 MS (APCI): m/z 382.2 [M+H]+，對C2QH23N5O3.0. 1H20+0. 15 EtOAc的計算值C， 62. 41; H， 6. 20; N， 17.67;測定值C， 62.47; H， 6.20; N， 17.38;和398 (63%)，為 淡棕色固體，Mp: 201-202 °C ， MS(APCI): m/z 382.2 [M+H]+，對的 計算值C2QH23N503: C， 62.98; H, 6,08; N， 18.36;測定值C， 62.94; H， 6. 10; N, 18. 33。
N-(4-異丙基苯基)-N-甲基-2-(1-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四 氫嘌呤-7-基)乙酰胺(392):
O八N, N 120(COCl)a, CHCIa CHaCN H DMF
在O'C下向酸120 (0. 25 g， 1. 11畫l)在CHCl3(20mL)和CH3CN(20 mL)中的溶液中加入草酰氯(O. 84 g, 6.69 mmol)和催化量的DMF。將 所得溶液在rt下攪拌2小時并且在真空中濃縮。將殘余物再溶解于 CHCh并將所得溶液冷卻到(TC。向該混合物中加入N-甲基-4-異丙基 苯胺(O. 29g， 2 mmol)并且將該反應體現(xiàn)攪拌過夜，同時溫至rt。然 后用CHCh(30 mL)稀釋該反應體系并且用1 N HC1(50 mL)洗滌。用水 (75mL)洗滌合并的有機層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過硅
膠快速色謙法純化產物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 392 (0. 2g， 51 °/。)，為淡棕色固體，mp: 271-273 T. MS(APCI): m/z 356.2 [M+H]+,對C18H21N5O3.0. 35H20的計算值:C， 59.77; H， 6.05; N, 19.36;測定值C， 59.77; H， 6.07; N， 19.29。
2- (1， 3-二甲基-2, 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- (4-異 丙基苯基)-N-曱基乙酰胺(393):
在0 。C下向酸101 (0. 5 g， 2, 1 inmol)在CHC13(30 niL)和CH3CN(30 mL)中的溶液中加入草酰氯(l. 59 g， 12.6 mmol)和催化量的DMF。將 所得溶液在rt下攪拌2小時并且在真空中濃縮。將所得殘余物再溶于 CHCl3并且冷卻至0'C。向該混合物中加入N-甲基-4-異丙基苯胺(O. 78 g， 5.2 mmol)并且將該反應體系攪拌過夜，同時溫至rt。然后用 CHCl3(30mL)稀釋該反應體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用水(75mL) 洗滌合并的有機層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過硅膠快速 色鐠法純化產物，用EtOAc/己烷和Et0Ac/Me0H洗脫而得到393,為淡 黃色固體(0. 65g， 84.4%), mp: 231-233 。C. MS(APCI): m/z 370.2 [M+H]+，對C19H23N5O3.0. 1H20的計算值C， 61.47; H， 6.30; N， 18.87; 測定值C， 61.28; H， 6.19; N， 18.57。
2-(2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-異丙基苯基)乙 酰胺(399 ):<formula>formula see original document page 136</formula>
(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酸(131)
將黃嘌呤(4. 8 g， 31.5 mmol)懸浮于水和2 M氫氧化鈉(50 mL) 中并且將所得混懸液攪拌30分鐘。然后加入氯乙酸(3g， 31.5mmo1)。 將所得溶液回流5小時，冷卻至室溫并且攪拌過夜。過濾沉淀且然后 用12 M HCl酸化該水溶液(pH 3)。過濾所得沉淀且然后用熱EtOH洗 滌，且隨后用熱己烷洗滌而得到131和132粗產物的混合物。向這些 粗產物中加入水(65 mL)并且將所得混合物回流30分鐘。將該溶液進 行熱濾并且收集沉淀。然后用熱乙醇和己烷洗滌沉淀而得到131，為 白色固體(O. 9g， 13. 4 %)。
2-(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N- (4-異丙基-苯 基)-乙酰胺(399)
向O'C的酸131(0.05 g， 0.23 mmol)在DMF/DMS0(1: 1 ， 10 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 13g, 0.35 mmol)。將該反應混合物溫至rt 并且攪拌另外的15分鐘。然后將該反應體系冷卻回G"C并且加入4-異丙基苯胺(0.042 g， 0.31 mmol)。然后將該反應體系在室溫下攪拌 過夜。蒸發(fā)DMF并且加入水。用乙酸乙酯洗滌獲得的沉淀且然后溶于 乙醇并且回流20分鐘。熱濾該溶液并且在真空中濃縮而得到399，為 白色固體(O. 025 g， 32.4%)。 mp: 320-325 。C 。 MS (APCI): m/z 326. 1 [M-H]+，對d6H"Ns0r0. 41120的計算值C， 57.44; H， 5.36; N， 20. 93; 測定值C， 57.43; H， 5.40; N， 20. 68。
2- (1， 3- 二曱基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-(2-羥基丙-2-基)苯基)乙酰胺(402):
(E) -1- ((4-溴苯基)二氮烯基)吡咯烷(134) 向O'C的4-溴苯胺(133, 10 g， 58.1 mmol)在濃HC1(11.7 mL) 中的溶液中滴加NaN02(4 g， 57.9 mmol)在H20(5 mL)中的溶液。然后 在添加后在O'C下將該反應體系攪拌另外的IO分鐘。向吡咯烷(4.54 g, 63. 9 mmol)在1M KOH(50 mL)中的溶液中一次加入所得重氮鹽。將 反應體系在0-10。C攪拌30min。然后過濾所得沉淀并且從無水乙醇(50 mL)中重結晶而得到化合物134(6. 8g， 46.2%),為淡黃色晶體。
2- (4-氨基苯基)丙-2-醇(135)
向-78。C的化合物134(lg， 3. 95 mmol)在乙醚(20 mL)中的溶液中 加入仲-BjiLi(在己烷中，1.4M, 0.62g， 9.67 mmol)。將所得溶液在 -78 。C下攪拌30分鐘，隨后在-78"C下滴加丙酮(0.91 g， 15. 81 mmol)。 將該反應混合物溫至室溫下過夜。使該反應混合物在水與乙醚之間分 配，并且將各層分開。用乙醚再萃取水層。合并醚層并且在真空中濃 縮而得到粗的135 (0.33 s， 55.9 %)，將其不經進一步純化用于下一 步。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N- [4- (1-羥基-l-曱基-乙基)-苯基]-乙酰胺(402)
向O'C的酸101(0.32 g， 1.34 mmol)在DMF/DMS0 (1: 1 ， 20 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 0. 76g， 2. Olmmol)。然后將該反應體系在室 溫下攪拌另外的15分鐘。將該溶液冷卻至0。C并且加入胺135 (0. 30 g， 2. Olramol)。然后將該反應體現(xiàn)在rt下攪拌過夜。在真空中濃縮DMF 并且將水加入到該反應體系中。用EtOAc萃取水層。然后再用水洗滌 乙酸乙酯層并且在真空中濃縮有機層。通過硅膠快速色諉法純化產物， 用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到402，為純的淡棕色半固體 (0. 086 g， 17. 5%) 。MS(APCI): m/z 372. 2 [M-H]+，對C18H21N5O4.0. 35EtOAc 的計算值C， 57.93; H， 5.96; N, 17.41;測定值C， 58.36; H， 6.14; N， 16.96。
參考文獻的引入
將本文提及的所有公開文獻和專利完整地引入本文作為參考，就 如同將公開文獻或專利各自特別和分別引入本文作為參考相同。
等效方案
本領域技術人員公認或能夠不使用超過常規(guī)的實驗確定許多與本 文所述本發(fā)明的具體實施方案等效的方案。指定這類等效方案包括在 下列權利要求中。
權利要求
1. 調節(jié)細胞中的TRPA1功能的方法，包括對該細胞給予有效量的小分子，該小分子以低于10微摩爾的IC50抑制TRPA1介導的電流，由此調節(jié)細胞中的TRPA1功能。
2. 預防、治療或緩解與TRPA1功能相關或降低的TRPA1活性能減 輕嚴重性的疾病或病癥的癥狀的方法，包括對有此需要的受試者給予 以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1功能的治療有效量的小分子。
3. 權利要求2所迷的方法，其中所述的TRPA1功能為內向TRPA1-介導的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的IC5。抑制所述 的內向TRPA1-介導的電流。
4. 權利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為外向TRPA1-介導的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的IC5。抑制所述 的外向TRPAl-介導的電流。
5. 權利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為TRPA1-介 導的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的ICs。抑制所述的 TRPA1-介導的電流。
6. 權利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為TRPA1-介 導的離子流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的ICs。抑制所述 的TRPAl-介導的離子流。
7. 權利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于5微摩爾的 ICs。抑制所述的TRPAl-介導的電流。
8. 權利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于l微摩爾的 ICs。抑制所述的TRPAl-介導的電流。
9. 權利要求1-8中任一項所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少IO倍強于對線粒體單向轉運體功能的抑制。
10. 權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少10倍強于對NaV 1.2功能的抑制。
11. 權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少10倍強于對TRPV3功能的抑制。
12. 權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩爾的ICs。抑制HERG介導的電流。
13. 權利要求1-12中任一項所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩爾的IC5。抑制TRPV3介導的電流。
14. 權利要求1-13中任一項所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時，所述的小分子基本上不會抑制TRPV1介導的電流。
15. 權利要求1-14中任一項所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時，所述的小分子基本上不會抑制HERG介導的電流。
16. 權利要求1-15中任一項所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時，所述的小分子基本上不會抑制TRPV3介導的電流。
17. 權利要求1-16中任一項所述的方法，其中所述的小分子以低 于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉運體功 能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一種或多種 的ICs。至少一個數量級的ICs。抑制TRPA1功能。
18. 權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述的小分子以該 小分子抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4或TRPM8中的至少一種或多 種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
19. 權利要求1-18中任一項所述的方法，其中所迷的小分子以該 小分子抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉運體 功能，CaV 1.2功能，CaV 3. 1功能，NaV 1. 2和HERG功能中的至少 一種或多種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
20. 權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所迷的小分子結合 TRPA1。
21. 權利要求1-20中任一項所述的方法，其中將所述的小分子提 供給細胞并且所述的細胞為感覺神經元。
22. 權利要求21所述的方法，其中所迷的感覺神經元存在于背根 神經節(jié)，三叉神經節(jié)或結節(jié)神經節(jié)中。
23. 權利要求2-22中任一項所述的方法，用于預防，治療或緩解 疼痛或對觸摸敏感癥狀。
24. 權利要求23所述的方法，其中所述的疼痛為口腔痛。
25. 權利要求2-23中任一項所述的方法，其中所述的小分子具有 抑制TRPA1的IC5。，并且以該濃度給藥時，所述的小分子不會在患者 中產生QT間隔延長。
26. 權利要求23所述的方法，其中所述的疼痛為術后痛，癌性痛， 神經性疼痛或顳下頜痛。
27. 權利要求2-23中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩解 炎癥癥狀。
28. 權利要求2-23中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩解 膀胱炎或腸易激綜合征癥狀。
29. 權利要求2-23中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩解 選自糖尿病性神經病，銀屑病，濕滲，皮炎，皰滲后神經痛(帶狀皰滲)， 偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關節(jié)炎，胰腺炎，慢性區(qū)域性疼痛 綜合征，類風濕性關節(jié)炎和咳嗽的病癥或疾患的癥狀。
30. 權利要求2-23中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩解 失禁癥狀。
31. 權利要求30所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺擴大或前列腺增生所致。
32. 權利要求1-31中任一項所述的方法，其中將所迷的小分子與 抗炎藥，抗痤疳藥，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗牛皮痺藥，抗增殖 藥，抗真菌藥，抗病毒藥，殺菌劑，抗偏頭痛藥，角質層分離劑或毛 發(fā)生長抑制劑中的一種或多種共同給藥。
33. 權利要求1-32中任一項所述的方法，其中將所述的小分子與 TRPV1抑制劑，TRPV3抑制劑，TRPV4抑制劑或TRPM8抑制劑中的一種 或多種共同給藥。
34. 權利要求1-33中任一項所述的方法，其中通過全身或局部給 予所述的小分子。
35. 權利要求1-33中任一項所述的方法，其中通過口服給予所述 的小分子。
36. 權利要求1-35中任一項所述的方法，其中TRPA1功能為 TRPAl-介導的電流。
37. 權利要求1-35中任一項所述的方法，其中TRPA1功能為 TRPAl-介導的離子流。
38. 治療或預防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式I的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S,優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; IT表示取代或未被取代的烷基、或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
39.治療或預防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式II的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧化代謝物或前體藥物 其中n為l-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于1Q微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
40. 權利要求39所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
41. 治療或預防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式III的化合物或其鹽，或該化 合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為l-3的整數；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO;微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
42.治療或預防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式IV的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中Id每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基; R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞曱基，NR,， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
43. 權利要求38-42中任一項所述的方法，其中所述的TRPA1介 導的電流為內向TRPAl介導的電流，且其中所述的化合物以低于10 微摩爾的ICs。抑制所述的內向TRPAl介導的電流。
44. 權利要求38-42中任一項所述的方法，其中所述的TRPAl-介 導的電流為外向TRPAl介導的電流，且其中所述的化合物以低于10 微摩爾的ICs。抑制所述的外向TRPAl-介導的電流。
45. 權利要求38-42中任一項所述的方法，其中所述的化合物還 以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPAl-介導的離子流。
46. 權利要求38-42中任一項所述的方法，其中所述的化合物以 低于5微摩爾的ICs。抑制所述的TRPAl-介導的電流。
47. 權利要求46所述的方法，其中所述的化合物以低于l微摩爾 的ICs。抑制所述的TRPA1-介導的電流。
48. 權利要求38-47中任一項所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導的電流的抑制至少IO倍強于對線粒體單向轉運體功 能的抑制。
49. 權利要求38-48中任一項所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導的電流的抑制至少10倍強于對NaV 1. 2功能的抑制。
50. 權利要求38-49中任一項所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導的電流的抑制至少IO倍強于對TRPVI功能的抑制。
51. 權利要求38-50中任一項所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導的電流的抑制至少10倍強于對HBRG功能的抑制。
52. 權利要求38-51中任一項所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩爾的ICs。抑制HERG介導的電流。
53. 權利要求38-52中任一項所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩爾的ICw抑制所述的TRPV3介導的電流。
54. 權利要求38-53中任一項所述的方法，其中化合物在以10 微摩爾濃度給藥時基本上不會抑制HERG介導的電流。
55. 權利要求38-54中任一項所述的方法，其中所迷的化合物在 以IO微摩爾濃度給藥時基本上不會抑制TRPV3介導的電流。
56. 權利要求38-55中任一項所述的方法，其中所迷的化合物以 低于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉運體 功能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一種或多 種的ICs。至少一個數量級的IC5。抑制TRPA1介導的電流。
57. 權利要求38-56中任一項所述的方法，其中所述的化合物以 該化合物抑制TRPV1介導的電流，TRPV2介導的電流，TRPV3介導的電 流，TRPV4介導的電流或TRPM8介導的電流中的一種或多種的ICs。的 至少一半的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
58. 權利要求38-57中任一項所述的方法，其中所述的化合物以 該化合物抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉運 體功能，CaV1.2功能，CaV 3. l功能，NaVl. 2和HERG功能中的一種 或多種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
59. 權利要求38-58中任一項所述的方法，其中所述的化合物結 合TRPA1。
60. 權利要求38-59中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩 解疼痛或觸摸敏感癥狀。
61. 權利要求60所述的方法，其中所述的疼痛為口腔痛。
62. 權利要求38-61中任一項所述的方法，其中所述的化合物具 有抑制TRPA1介導的電流的IC5Q，并且當以該濃度給藥時，所述的化 合物不會在患者中產生QT間隔延長。
63. 權利要求60所述的方法，其中所迷的疼痛為術后痛，癌性痛， 神經性疼痛或顳下頜痛。
64. 權利要求38-62中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩 解炎癥癥狀。
65. 權利要求38-62中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩 解膀胱炎或腸易激綜合征癥狀。
66. 權利要求38-62中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩 解選自糖尿病性神經病，銀屑病，濕滲，皮炎，皰滲后神經痛(帶狀皰 瘆)，偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關節(jié)炎，胰腺炎，慢性區(qū)域性 疼痛綜合征，類風濕性關節(jié)炎和咳嗽的病癥或疾患的癥狀。
67. 權利要求38-62中任一項所述的方法，用于預防、治療或緩 解失禁癥狀。
68. 權利要求67所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺擴大或前列腺增生所致。
69. 治療疼痛的方法，包括向有此需要的患者給予有效量的式I 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; R'表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H),酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的IC5o抑制TRPA1介導的電
70.治療疼痛的方法，包括向有此需要的患者給予有效量的式II 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物:其中n為l-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
71. 權利要求70所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
72. 治療疼痛的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式III 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中n為1 - 3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
73.治療疼痛的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式IV 的化合物或其鹽；或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物:其中R:每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且Rz的一次出現(xiàn)為MraR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞甲基，NR" 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于1Q微摩爾的IC5。抑制TRPA1介導的電
74.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式I的 化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物 或前體藥物其中W表示0或S,優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時獨立地表示.H或低級烷基，優(yōu)選H;R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
75.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式II 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1 - 3的整數；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
76. 權利要求75所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
77. 治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式III 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中n為1-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
78.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式IV 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中Ri每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞曱基，NR!， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
79.適用于人類患者或獸類應用的藥物組合物，用于治療或預防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式I的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基; E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且 其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
80.適用于人類患者或獸類應用的藥物組合物，用于治療或預防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式II的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為l-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
81.適用于人類患者或獸類應用的藥物組合物，用于治療或預防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式III的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑 合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物O其中n為l-3的整數；且 Rs表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
82.適用于人類患者或獸類應用的藥物組合物，用于治療或預防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式IV的化合物或其鹽或該化合物，或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物Ri每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電
83. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預防涉及TRPA1活化或降低 的TRPA1活性能減輕嚴重性的疾患的藥劑中的應用，其中所述的TRPA1 抑制劑以式II或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化 代謝物或前體藥物表示其中其中 n為13的整數；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流o
84. 權利要求83所述的應用，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
85. 藥物制劑，包含以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的 電流的小分子；和藥學上可接受的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預 防、治療或緩解在某些部分上依賴于患者TRPA1活性的疾病、病癥或 疾患癥狀的用量的劑型提供活性劑，但該活性劑不會導致QT間隔延 長。
86. 以低于10微摩爾的IC5。抑制TRPA1介導的電流的小分子活性 劑在制備用于預防、治療或緩解在某些部分上依賴于患者TRPA1活性 的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應用。
87. 小分子活性劑在制備用于預防、治療或緩解在某些部分上依賴 于患者TRPA1活性的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應用，所述的 小分子活性劑以低于抑制TRPV5功能、TRPV6功能、線粒體單向轉運 體功能、Cav2. l功能、CaV3. l功能、NaVl. 2功能和HERG功能中的一 種或多種的ICs。的至少一個數量級的ICs。抑制TRPA1介導的電流。
88. 小分子活性劑在制備用于預防、治療或緩解在某些部分上依賴 于患者TRPA1活性的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應用，所述的 小分子活性劑以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制芥子油誘導的 TRPA1介導的電流。
89. 權利要求83-84或86-88中任一項的應用，用于制備預防、 治療或緩解疼痛，觸摸敏感性，炎癥，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，膀胱炎, 腸易激綜合征和/或咳嗽癥狀的藥劑。
90. 權利要求89所述的應用，其中所述的疼痛為癌性痛。
91. 權利要求83-84或86-88中任一項的應用，用于制備抑制增 殖，由此預防、治療或緩解癌癥癥狀的藥劑。
92. 權利要求91所述的應用，其中所述的癌癥為脂肪肉瘤。
93. 權利要求83-84或86-92中任一項所述的應用，其中所述的 活性劑結合TRPA1。
94. 權利要求83-84或86-88中任一項的應用，用于制備預防、 治療或緩解失禁癥狀的藥劑。
95. 用于口服給藥的鎮(zhèn)咳組合物，包含以低于10微摩爾的IC5。 抑制TRPA1介導的電流的活性劑和基于水的液體或在口腔中可溶解的 固體形式的口服可接受的藥用載體，該組合物選自糖漿劑，酏劑，混 懸液，噴霧劑，錠劑，咀嚼錠劑，粉末和咀嚼片。
96. 權利要求95所述的鎮(zhèn)咳組合物，其中除所述的活性劑外，該 組合物還包括一種或多種用于治療咳嗽、過敏反應或哞喘癥狀的另外 活性劑，這些活性劑選自抗組胺藥，5-脂氧合酶抑制劑，白細胞三 烯抑制劑，H3抑制劑，p-腎上腺素能受體激動劑，黃嘌呤衍生物，oc-腎上腺素能受體激動劑，肥大細胞穩(wěn)定劑，祛痰藥，NK1， NK2和NK3 速激肽受體拮抗劑和GABAB激動劑。
97. 可計量劑量的氣溶膠配藥器，包括用于肺部或鼻部遞送的氣 溶膠藥物組合物，該組合物包含以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介 導的電流的活性劑。
98. 權利要求95所述的組合物，其包含在可計量劑量的吸入器、 千粉吸入器或空氣噴射噴霧器中。
99. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預防疼痛的藥劑中的應用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式I表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S; R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;r表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5。抑制TRPA1介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
100. TRP A1抑制劑在制備用于治療或預防疼痛的藥劑中的應用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式II表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的IC5。抑制TRPAl介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
101. 權利要求100所述的應用，其中R2表示任選取代的烷基， 任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代 的環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
102. TRP A1抑制劑在制備用于治療或預防疼痛的藥劑中的應用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式III表示的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物 其中n為l-3的整數；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的IC5Q抑制TRPA1介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
103. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預防疼痛的藥劑中的應用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式IV表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中K每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基；R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞曱基，NK， 0, S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5o抑制TRPA1介導的電流 或TRPAl介導的離子流。
104. T R P A1抑制劑在制備用于治療或預防失禁的藥劑中的應用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式I表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物 其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;IT表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
105. T R P A1抑制劑在制備用于治療或預防失禁的藥劑中的應用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式II表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物(")其中n為1-3的整數；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
106. 權利要求105所述的應用，其中R2表示任選取代的烷基， 任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代 的環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
107. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預防失禁的藥劑中的應用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式III表示的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1-3的整數；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5o抑制TRPA1介導的電流 或TRPA1介導的離子流。
108. TRPAl抑制劑在制備用于治療或預防失禁的藥劑中的應用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式IV表示的化合物或其鹽或該化合物， 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物Ri每次出現(xiàn)時獨立地表示H或低級烷基；R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時獨立地表示取代或未被取代的亞甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進行選擇，以便沒有兩個雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5。抑制TRP A1介導的電流 或TRPAl介導的離子流。
109. 分離的多肽，包含SEQ ID NO: l中所示的氨基酸序列。
110. 由包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的核酸序列編碼的其中 分離的多肽。
111. 包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的分離的核酸。
112. 包含核普酸序列的分離的核酸，所述的核苷酸序列編碼包含 SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序列的多肽。
113. 表達載體，其在原核細胞或真核細胞中的至少一種中復制， 該載體包含權利要求111或112所述的核酸。
114. 細胞，包含權利要求113所述的表達載體并且表達所述的多肽。
115. 生產多肽的方法，包括在細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)權利要求114所 述的細胞以便表達所述的多肽。
全文摘要
本申請涉及用于治療疼痛，失禁和其它病癥的化合物和方法。
文檔編號C07K14/705GK101384261SQ200680053268
公開日2009年3月11日 申請日期2006年12月22日 優(yōu)先權日2005年12月22日
發(fā)明者C·范戈, C·麥克納馬拉, J·A·崇, J·曼德爾-布瑞姆, M·M·莫蘭, 甄曉光 申請人:海德拉生物科學公司