專(zhuān)利名稱(chēng)：大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法
大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法。更具體地，其涉及一種用 以得到白色粉末的大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法。該粉末在儲(chǔ)存一段時(shí)間之后 仍保持白色。
大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素具有大環(huán)內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu)，是一種可連接有糖的具有12 22個(gè)碳原子的內(nèi)酯環(huán)。它們可抑制細(xì)菌繁殖，并與細(xì)菌的核糖體結(jié)合，阻止蛋 白質(zhì)的生成。
大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素包括萬(wàn)古霉素、替考拉寧(teic叩lanin)、紅霉素、阿 奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素、交沙霉素、利托霉素、艾替諾丁 (actinoidin)、 阿伏霉素、阿克他寧(actaplanin)、替考霉素(teichomydn)和泰利霉素。
一般地，本發(fā)明涉及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化，更具體地涉及萬(wàn)古霉素的 純化。
US 5,853,720公開(kāi)了一種純化萬(wàn)古霉素的方法，其純化步驟采用硅膠柱制 備色譜法。
EP 132 117公開(kāi)了采用親和色譜的萬(wàn)古霉素類(lèi)抗生素的純化方法，其中， 通過(guò)形成吸附復(fù)合物，抗生素與基體結(jié)合。
這些基于色譜技術(shù)的方法，可生產(chǎn)出純度提高的抗生素，但不能生產(chǎn)出令 人滿(mǎn)意的白色粉末。對(duì)于萬(wàn)古霉素，在色譜純化后，初始顏色是淡粉紅色，過(guò) 一段時(shí)間后，其顏色變成褐色。這不符合歐洲藥典要求。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素進(jìn)行超濾，可以除去在450nm下具有 高吸光度的雜質(zhì)。
超濾是分離不同大小分子的方法。在超濾中，雖然如分子的形狀、電荷等 其它次要因素也起到作用，但實(shí)際上是分子的分子量起最重要的作用。在市場(chǎng) 上，可獲得按照被膜截留分子的分子量來(lái)定義的不同超濾膜。適用于本發(fā)明的 膜的截留分子量為低于30,000道爾頓。
本發(fā)明的方法是這樣進(jìn)行的將大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素例如商品鹽酸萬(wàn)古霉素 溶于水，所得溶液用標(biāo)稱(chēng)截留分子量小于30,000道爾頓的膜進(jìn)行超濾，所用 膜的截留分子量，以等于或小于15,000道爾頓為佳，等于或小于10,000道爾 頓最佳。優(yōu)選地，超濾膜的標(biāo)稱(chēng)截留分子量大于6,000道爾頓。純化后溶液最 好用反滲透進(jìn)行濃縮，然后在優(yōu)化的壓力和溫度條件下凍干，以得到白色粉末。
如果需要得到無(wú)菌粉末，最好將該溶液，在進(jìn)行反滲透濃縮后，通過(guò)0.22微米 的過(guò)濾器，并將濾液收集于無(wú)菌容器(根據(jù)歐洲GMP標(biāo)準(zhǔn)的A級(jí))。
膜的類(lèi)型取決于抗生素。對(duì)于萬(wàn)古霉素，采用截留分子量30,000道爾頓 的膜，萬(wàn)古霉素可以通過(guò)該膜，而雜質(zhì)保留在滯留液中。相反，使用10,000 道爾頓的膜，可以有效地純化替考拉寧。這樣，雜質(zhì)在透過(guò)液中，而替考拉寧 在滯留液中。因此，對(duì)各種抗生素，都可對(duì)膜的類(lèi)型作最優(yōu)化選擇，以實(shí)現(xiàn)雜 質(zhì)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的最佳分離。
當(dāng)抗生素為萬(wàn)古霉素時(shí)，其在450nm處檢定的吸收值為0.100，最好小于 0細(xì)。
將大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素溶于水，在初始溶液中該抗生素的濃度為0.1 30重 量％，優(yōu)選為1 20重量％，最好為3 18重量％。
實(shí)施例
實(shí)施例所用鹽酸萬(wàn)古霉素是從Alpharma公司獲得的商品。
在450nm下的吸光度是根據(jù)歐洲藥典中萬(wàn)古霉素專(zhuān)論的規(guī)定測(cè)得的。
實(shí)施例l鹽酸萬(wàn)古霉素的純化
將65g Alpharma公司產(chǎn)的商品鹽酸萬(wàn)古霉素溶于500ml蒸餾水。待粉末 完全溶解后，所得溶液用IO，OOO道爾頓的膜進(jìn)行超濾，在透過(guò)液和滯留液之間 維持lbar的壓降，而跨膜壓降為2.5bar。透過(guò)液經(jīng)反滲透濃縮，再通過(guò)0.22 微米過(guò)濾器，然后收集于符合歐洲GMP標(biāo)準(zhǔn)的A級(jí)容器內(nèi)。
實(shí)施例2鹽酸萬(wàn)古霉素的純化
將30g Alpharma公司產(chǎn)的商品鹽酸萬(wàn)古霉素溶于500ml蒸餾水。待粉末 完全溶解后，用10,000道爾頓的膜對(duì)該溶液進(jìn)行超濾，在透過(guò)液和滯留液之間 維持lbar的壓降，而跨膜壓降為2.5bar。透過(guò)液經(jīng)反滲透濃縮，再通過(guò)0.22 微米過(guò)濾器，然后收集于符合歐洲GMP標(biāo)準(zhǔn)的A級(jí)容器。
初始萬(wàn)古霉素 實(shí)施例1 實(shí)施例2 450nm吸光度 0.184 0.064 0.045
實(shí)施例3替考拉寧的純化
將10g替考拉寧溶于100ml蒸餾水。待粉末完全溶解后，所得溶液用10,000 道爾頓的膜進(jìn)行超濾，在透過(guò)液和滯留液之間維持lbar的壓降，而跨膜壓降為 2.5bar。在此情況下，替考拉寧保留在滯留液中，而一些雜質(zhì)通過(guò)到透過(guò)液中。滯留液通過(guò)0.22微米過(guò)濾器，收集于符合歐洲GMP標(biāo)準(zhǔn)的A級(jí)容器，然后在 優(yōu)化的溫度和真空條件下凍干。
用高效液相色譜測(cè)得的替考拉寧的純度在純化前為89.7%，純化后為93.8 %。最重要的雜質(zhì)在純化前后分別為10.8%和6.1%，而純化前為2.9%的第二 雜質(zhì)在純化后全部消失。
權(quán)利要求
1.一種純化大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的方法，包括將該大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素溶于水，然后用標(biāo)稱(chēng)截留分子量小于30,000道爾頓的膜進(jìn)行超濾。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素選自萬(wàn)古霉素、替考拉寧(teicoplanin)、紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉 素、交沙霉素、利托霉素、艾替諾丁 (actinoidin)、阿伏霉素、阿克他寧 (actaplanin)、替考霉素(teichomycin)和泰利霉素。
3. 如權(quán)利要求1 2所述的方法，其特征在于，所述膜的標(biāo)稱(chēng)截留分子量等于 或小于10,000道爾頓。
4. 如權(quán)利要求1 3所述的方法，其特征在于，在超濾后，純化后的溶液任選 地由反滲透法進(jìn)行濃縮，然后在優(yōu)化的壓力和溫度條件下凍干得到白色粉 末。
5. 如權(quán)利要求1 4所述的方法，其特征在于，所述大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素為萬(wàn)古 霉素。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，最終粉末在450nm的吸光度小于 0.100。
7. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述最終粉末在450nm的吸光度 小于0.080。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法。更具體地，其涉及一種用以得到白色粉末大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的純化方法。該粉末在儲(chǔ)存一段時(shí)間之后仍保持白色。本發(fā)明的方法是這樣進(jìn)行的將大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素例如商品鹽酸萬(wàn)古霉素溶于水，所得溶液用標(biāo)稱(chēng)截留分子量小于30,000道爾頓，最好是10,000道爾頓的膜進(jìn)行超濾。純化后溶液最好用反滲透法進(jìn)行濃縮，然后在優(yōu)化的壓力和溫度條件下凍干，以得到白色粉末。
文檔編號(hào)C07K1/34GK101341167SQ200680045911
公開(kāi)日2009年1月7日 申請(qǐng)日期2006年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者文森·德托馬索 申請(qǐng)人:阿爾法馬股份有限公司