專利名稱：：免疫抑制劑化合物和組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明提供了一類新的可用于治療或預防由淋巴細胞相互作用介導的疾病或病癥、特別是與EDG受體介導的信號轉(zhuǎn)導相關疾病的免疫抑制劑化合物。背景EDG受體屬于一族密切相關的脂質(zhì)活化的G-蛋白偶聯(lián)受體。EDG-1、EDG-3、EDG畫5、EDG畫6和EDG-8(也分別稱作S1P1、S1P3、S1P2、S1P4和S1P5)被鑒定為對鞘氨醇-1-磷酸(S1P)具有特異性的受體。EDG2、EDG4和EDG7(也分別稱作LPA1、LPA2和LPA3)為對溶血磷脂酸(LPA)具有特異性的受體。在S1P受體亞型中，EDG-1、EDG-3和EDG-5在各種組織中廣泛表達，而EDG-6的表達主要限于淋巴組織和血小板，EDG-8的表達主要限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。EDG受體負責信號轉(zhuǎn)導并且^皮認為在涉及細胞發(fā)育、增殖、維持、遷移、分化、可塑性和編程性細胞死亡的細胞過程中起重要作用。某些EDG受體與淋巴細胞相互作用介導的疾病、例如移植排斥、自身免疫疾病、炎性疾病、感染性疾病和癌癥相關。EDG受體活性改變促進這些疾病的病理學和/或癥狀學。因此，自身改變EDG受體活性的分子可用作治療這類疾病的治療劑。發(fā)明概述本申請涉及選自式Ia、Ib、Ic和Id的化合物和其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、單個異構(gòu)體和異構(gòu)體混合物；及這類化合物的藥學上可接受的鹽和溶劑合物(例如水合物)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>A選自氰基、-&<:(0)0113、—X!OP(0)(OR3)2、—X,P(0)(OR3)2、-X，P(0)OR3、-X!S(0)20R3、-XiP(0)(R3)OR3、-&<:(0,3113，XiC(0)NR3XiOR3、-&<:(0,3&(:(0)0113、^C(0)X!C(0)OR3和li/-四喳-5-基；其中X,各自獨立地選自鍵、d-3亞烷基和C2-3亞烯基且R3各自獨立地選自氫和d.6烷基；其中在A的任意NR3&部分中R3和&的亞烷基氫可以形成環(huán)狀基團如<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>B選自一CR4=CR5-、—CR4=N-、—N=CR4—、—S-和一NR4-；其中R4和Rs獨立地選自氫、卣素和d—6烷基；C選自=CR4-—=N-;其中R4選自氫、卣素和d-6烷基；L選自-X20X3—、—X2NR3X3—、—X2C(0)NR3X3—、-X2NR3C(0)X3—和-X2S(0)o.2X3-;其中X2和X3各自獨立地選自鍵、Cw亞烷基和Cw亞烯其中:基；且R3選自氫和d一6烷基；Y選自鍵、-O-、-S-、-S(O)-、-S(0)2-、-NR3-、亞曱基和亞乙基；其中R3選自氫和Cw烷基；n選自0、1、2和3;Ri選自Cwo芳基和Cwe雜芳基；其中！^的任意芳基或雜芳基任選被選自C6-10芳基Co-4坑基、C5-6雜芳基Co-4坑基、C3-8環(huán)坑基Co-4坑基、C3-8雜環(huán)烷基Co-4烷基和Cwo烷基的基團取代；其中R,或！^取代基的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可以任選被1-5個基團取代，所述基團獨立地選自鹵素、Cwo烷基、Cwo烷氧基、鹵素-取代的-Cwo烷基和鹵素-取代的-C1-1。烷氧基；且&的任意烷基可以任選具有被選自-S(0)o-2-、一NR3—和—O-的原子或基團替代的亞曱基；其中R3選自氫和C"烷基；R2選自卣素、氰基、硝基、Cf6烷氧基和Cw烷基；且式Ia和Ib的苯基環(huán)可以任選具有至多3個被氮替代的=<:-基團。本發(fā)明的第二個方面為藥物組合物，其包含式I化合物或其N-氧化物衍生物、單個異構(gòu)體或其異構(gòu)體混合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種合適的賦形劑。本發(fā)明的第三個方面為治療動物疾病的方法，其中EDG受體介導的信號轉(zhuǎn)導的改變可以預防、抑制或緩解疾病的病理學和/或癥狀學，該方法包括對所述動物給予治療有效量的式I化合物或其N-氧化物衍生物、單個異構(gòu)體或其異構(gòu)體混合物或其藥學上可接受的鹽。本發(fā)明的第四個方面為式I化合物在制備用于治療其中EDG受體介導的信號轉(zhuǎn)導的改變促進疾病的病理學和/或癥狀學的動物疾病的藥物中的用途。本發(fā)明的第五個方面為制備式I化合物及其N-氧化物衍生物、前體藥物衍生物、被保護的衍生物、單個異構(gòu)體或其異構(gòu)體混合物及其藥學上可接受鹽的方法。優(yōu)選實施方案的描述本發(fā)明提供了可用于治療和/或預防由淋巴細胞相互作用介導的疾病或病癥的化合物。還提供了治療這類疾病或病癥的方法。定義在本說明書中，除非另作陳述"烷基"作為基團和其它基團、例如卣素-取代的-烷基、烷氧基、?；⑼榱蚧?、烷基磺?；屯榛鶃喕酋；慕Y(jié)構(gòu)單元，可以為直鏈或支鏈的。"鏈烯基"作為基團和作為其它基團的結(jié)構(gòu)單元包含一個或多個碳-碳雙鍵，并且可以為直鏈或支鏈的。任意的雙鍵可以為順式-或反式-構(gòu)型。優(yōu)選的鏈烯基為乙烯基。"炔基，，作為基團和作為其它基團和化合物的結(jié)構(gòu)單元包含至少一個C三C三鍵，并且還可以包含一個或多個C=C雙鍵，且盡可能為直鏈或支鏈的。優(yōu)選的炔基為炔丙基。單獨或作為其它基團結(jié)構(gòu)單元的環(huán)烷基可以包含3-8個碳原子、優(yōu)選3-6個碳原子。"亞烷基，，和"亞烯基"為分別衍生自"烷基"和"鏈烯基，，的二價基團。在本申請中，Ri的任意烷基可以任選被選自-S---S(O)-、-S(0)2---NR3-和-O-(其中W為氫或C"烷基)的基團中的成員打斷。這些基團包括-CHrO-CH2-、-CH2—S(0)2-CH2—、-(CH2)2—NR3-CH2—、—CH2-0—(CH2)2—等。"芳基"意旨包含6-10個環(huán)碳原子的單環(huán)或稠合雙環(huán)芳族環(huán)組合。例如，(:6.12芳基可以為苯基、聯(lián)苯基或萘基，優(yōu)選苯基。"亞芳基"意旨衍生自芳基的二價基團。例如，用于本申請中的亞芳基可以為亞苯基、亞聯(lián)苯基、亞萘基等。"卣代"或"囟素"意旨F、Cl、Br或I，優(yōu)選F或C1。卣素-取代的烷基和化合物可以部分卣化或全囟化，其中就多囟化而言，g素取代基可以相同或不同。優(yōu)選的全囟化烷基例如為三氟甲基。"雜芳基"意旨如本申請中定義的芳基，只要所示環(huán)碳原子中的一個或多個被選自N、O或S的雜原子部分替代，并且每個環(huán)由5-6個環(huán)原子組成，除非另作示出。例如，作為本申請中使用的Cwo雜芳基包括噻吩基、吡咬基、呋喃基、異噁唑基、苯并噁唑基或苯并[1，3間二氧雜環(huán)戊烯基，優(yōu)選噻吩基、呋喃基或吡咬基。"亞雜芳基"意旨如本申請中所定義的雜芳基，條件是環(huán)組合包含二價基團。作為本發(fā)明中使用的EDG-1選擇性化合物(活性劑或調(diào)節(jié)劑)具有對EDG-1的選擇性超過EDG-3并且超過EDG-5、EDG-6和EDG-8中的一種或多種的特異性。本文所用的對EDG受體("選擇性受體")的選擇性超過另一種EDG受體("非-選擇性受體")意旨所述化合物在誘導由選擇性EDG受體(例如EDG-l)介導的活性中的功效方面遠高于對非-選擇性S1P-特異性EDG受體介導的活性中的功效。如果在GTP，S結(jié)合測定中測定(如下文實施例中所述)，則EDG-1選擇性化合物一般對選擇性受體(EDG-l)具有的EC50(產(chǎn)生50%最大響應的有效濃度)較其對非-選擇性受體(例如EDG-3、EDG-5、EDG-6和EDG-8中的一種或多種)的EC50至少低5、10、25、50、100、500或1000倍。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了可用于治療或預防由淋巴細胞相互作用介導的疾病或病癥的化合物。在一個實施方案中，就式Ia、Ib、Ic和Id化合物而言，為這類化合物，其中A選自氰基、一&C(0)OR3、一&OP(0)(OR3)2、—X!P(0)(OR3)2、-&P(0)OR3、-X^(0)20R3、-X^(0)(R3)OR3、-&<:(0，3113、-XiC(0)NR3X!OR3、X^(0)NRAC(0)OR3、X，C(0)X!C(0)OR3和四哇-5-基；其中Xi各自獨立地選自鍵、Cw亞烷基和<:2-3亞烯基且113各自獨立地選自氫和d-6烷基；其中在A的任意NR3X!部分中R3和Xt的亞烷基氫可以形成環(huán)狀基團。在另一個實施方案中，n選自0和l;Ri選自Cwo芳基和Cw。雜芳基；其中仏的任意芳基或雜芳基任選被選自Cwo芳基C(M烷基、Cs—6雜芳基C(M烷基、(:3.8環(huán)烷基Co-4烷基、<:3_8雜環(huán)烷基<:。_4烷基和Cw。烷基的基團取代；其中Rt或Ri的取代基的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可以任選被l-5個基團取代，所述基團獨立地選自鹵素、Cwo烷基、CM0烷氧基、鹵素-取代的-Cwo烷基和鹵素-取代的-Cwo烷氧基；且R!的任意烷基可以任選具有被選自-S(0)o-2-、-NR3-和-O-的原子或基團替代的亞曱基；其中R3選自氫和Cw烷基；且R2選自鹵素和d-6烷基。在另一個實施方案中，A選自氰基、-COOH、-CH2C(0)OH、—(CH2)2C(0)OH、-C(0)NH2、-C(0)NH(CH2)2OH、-C(0)NH(CH2)3OH、-C(0)NH(CH2)2C(0)OH、-C(0)(CH2)2C(0)OH、3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-羰基和四峻基。在另一個實施方案中，Ri為任選被1-2個基團取代的苯基，所述基團獨立地選自卣素、曱基、三氟甲基、噻唑基和任選被卣素或甲基取代的苯基；且R2為鹵素。本發(fā)明優(yōu)選的化合物選自5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-曱酸；5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜吡咬-2-曱酸；2-[4-(3，-曱基-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-lH-咪唑-4-甲酸；{5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-3-基}-乙酸；5-4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基]-2-(lH-四唑-5-基)-吡啶；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-曱酰胺；5_[4_(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-lH-咪唑-2-甲酸；5-[4-(3'-甲基-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[2-氯-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡咬-2-曱酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-煙酸；5-[2-氟-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡咬-2-甲酸；5-[2-氟-4-(4-噻唑-2-基-3-三氟甲基-苯氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基甲氧基)-苯基卜吡啶-2-甲酸；5-[4-(4-環(huán)己基-3-三氟甲基-苯氧基甲基)-2-氟-苯基1-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-腈；5-[2-氯-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-1-氧基-吡啶-2-甲酸；4-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡咬-2-曱酸；{6-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-3-基}-乙酸；3-{5-[4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-[2-氯-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-基}-丙酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-2-甲基-苯基-吡咬-2-曱酸；5_[3_氟-4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶-2-甲酸；5-[3-氯-4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡咬-2-甲酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-3-硝基-苯基]-吡啶-2-甲酸；3-氟-5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基1-吡啶-2-甲酸；3-溴-5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯氧基-吡啶-2-曱酸；4-(4-辛氧基-苯基)-吡啶-2-甲酸；3-[4-(4-辛氧基-苯基)-吡啶-2-基-丙酸；3-(5-{2-4-(5-苯基-戊氧基)-苯基-乙基}-吡咬-2-基)-丙酸；3-{4-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-吡唑-l-基}-丙酸；{4-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡唑-1-基}-乙酸；{4-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡唑-1-基}-乙酸；{4-[2-氟-4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜吡唑-1-基}-乙酸;5-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜噻唑-2-曱酸;5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基1-嘧啶-2-甲酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡噪-2-曱酸；5-3-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；4-[3-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-曱酸；6-[3-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-曱酸；5-[3-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-煙酸；{5-[3-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-3-基}-乙酸；5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸(2-羥基-乙基)-酰胺；5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-甲酸(3-羥基-丙基)-酰胺；3-({5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-羰基}-氨基)-丙酸；{5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-基}-(3-羥基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-甲酮；5-[2-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基)-苯并噁唑-6-基-吡啶-2-甲酸；4-[5-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-吲哚-l-基I-4-氧代-丁酸。其它優(yōu)選化合物還如下文實施例和表l中所示。本發(fā)明提供了具有以被保護形式存在的羥基或胺基的化合物形式；它們作為前體藥物起作用。前體藥物為在給藥后通過一種或多種化學或生化轉(zhuǎn)化而被轉(zhuǎn)化成活性藥物形式的化合物。易于在生理條件下轉(zhuǎn)化成請求保護的化合物的本發(fā)明化合物形式為請求保護的化合物的前體藥物并且屬于本發(fā)明范圍內(nèi)。前體藥物的實例包括其中羥基被?；上鄬Σ环€(wěn)定的酯如乙酸酯的形式，和其中胺基被甘氨酸或L-氨基酸如絲氨酸的羧g團酰化從而形成對普通代謝酶水解特別敏感的酰胺鍵的形式。式I化合物可以以游離形式或鹽的形式，例如與無機酸或有機酸的加成鹽存在。如果存在羥基，這些基團也可以以鹽形式存在，例如銨鹽或與金屬形成的鹽，如鋰、鈉、鉀、釣、鋅或鎂或其混合物。水合物或溶劑合物形式的式I化合物及其鹽也為本發(fā)明的組成部分。當式I化合物在分子中具有不對稱中心時，獲得各種光學異構(gòu)體。本發(fā)明還包括對映體、外消旋物、非對映異構(gòu)體及其混合物。此外，當式I化合物包括幾何異構(gòu)體時，本發(fā)明包括順式-化合物、反式-化合物及其混合物。類似的考慮適合于具有不對稱碳原子或如上所述不飽和鍵的原料。治療免疫調(diào)節(jié)病癥的方法和藥物組合物游離形式或藥學上可接受鹽形式的式I化合物表現(xiàn)出有價值的藥理學特性，例如淋巴細胞再循環(huán)調(diào)節(jié)特性，例如如實施例31的體外和體內(nèi)試驗中所示，并且由此適用于治療。式I化合物優(yōu)選表現(xiàn)出的ECso在lxl(r11-1x10_sM的范圍、優(yōu)選低于50nM。這些化合物表現(xiàn)對一種或多種EDG/S1P受體、優(yōu)選EDG-1/S1P-1的選擇性?？梢酝ㄟ^檢測化合物與EDG-1/S1P-1和其它EDG/S1P受體中的一種或多種(例如EDG-3/SlP-3、EDG-5/SlP-2、EDG-6/S1P-4和EDG-8/SlP-5)的結(jié)合來鑒定本發(fā)明的EDG-1/S1P-1選擇性調(diào)節(jié)劑。EDG-1/S1P-1選擇性調(diào)節(jié)劑通常具有的對EDG-1/S1P-1受體的EC50在1xl(T11-1xl(T5M的范圍、優(yōu)選低于50nM、更優(yōu)選低于5nM。它對其它EDG/S1P受體中的一種或多種的EC50高于其對EDG-1/S1P畫1的EC50至少5、10、25、50、100、500或1000倍。因此，某些EDG-1/S1P-1調(diào)節(jié)化合物對EDG-1/S1P-1的EC50低于5nM，而其對其它EDG/S1P受體中的一種或多種的EC50至少為100nM或以上。除了測量與EDG/S1P受體的結(jié)合活性外，EDG-1/S1P-1選擇性活性劑還可以通過檢驗供試活性劑改變EDG/S1P受體介導的細胞過程或活性的能力來鑒定。因此，式I化合物可用于治療和/或預防淋巴細胞相互作用介導的疾病或病癥，例如在移植中，如急性或慢性細胞、組織或器官同種異體移植或異種移植排斥或移植物功能延遲、移植物抗宿主病、自身免疫疾病如類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎(hashimoto，sthyroidis)、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、I或II型糖尿病和與之相關的病癥、脈管炎、惡性貧血、斯耶格侖綜合征、眼色素層炎、銀屑病、格雷夫斯眼病、斑禿等、過敏性疾病如過敏性哞喘、特應性皮炎、過敏性鼻炎/結(jié)膜炎、變應性接觸性皮炎、任選伴有潛在異常反應的炎性疾病如炎性腸病、局限性回腸炎或潰瘍性結(jié)腸炎、內(nèi)源性譯喘、炎癥性肺損傷、炎癥性肝損傷、炎癥性腎小球損傷、動脈粥樣硬化、骨關節(jié)炎、刺激性接觸性皮炎和其它濕滲性皮炎、脂溢性皮炎、免疫介導的病癥的皮膚表現(xiàn)、炎癥性眼病、角膜結(jié)膜炎、心肌炎或肝炎、局部缺血/再灌注損傷如心肌梗死、中風、腸局部缺血、腎衰竭或出血性休克、創(chuàng)傷性休克、T細胞淋巴瘤或T細胞白血病、感染性疾病如中毒性休克(例如超抗原誘導的)、膿毒性休克、成人呼吸窘迫綜合征或病毒感染如AIDS、病毒性肝炎、慢性細菌感染或老年性癡呆。細胞、組織或?qū)嶓w器官移植物的實例包括例如胰島、干細胞、骨髓、角膜組織、神經(jīng)元組織、心臟、肺、聯(lián)合心-肺、腎、肝、腸、胰、氣管或食道。就上述用途而言，所需劑量當然根據(jù)施用方式、所治療的具體疾病和所需作用而改變。此外，式I化合物可用于癌癥化療、特別用于實體瘤、例如乳腺癌的癌癥化療或作為抗血管生成劑。所需劑量當然才艮據(jù)施用方式、所治療的具體疾病和所需作用而改變。一般而言，在約0.03-2.5mg/kg/體重的每日劑量獲得全身性的令人滿意的效果。較大哺乳動物、例如人的適用每日劑量在約0.5mg-約100mg的范圍，方便地例如按照不超過每日4次的分劑量或以延長形式給藥?？诜o藥的合適的單位劑型包括約1-50mg活性組分?？梢酝ㄟ^任意常規(guī)途經(jīng)施用式I化合物，特別是經(jīng)腸，例如口服，例如以片劑或膠嚢形式；或經(jīng)胃腸外，例如以可注射溶液或混懸液形式；經(jīng)局部，例如以洗劑、凝膠、軟膏劑或霜劑形式；或在鼻中給藥或以栓劑形式?？梢园凑粘Ｒ?guī)方式、通過與藥學上可接受的載體或稀釋劑混合來制備包含游離形式或藥學上可接受鹽形式與至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。式I化合物可以以游離形式或藥學上可接受鹽的形式施用，例如如上所述。這類鹽可以按照常規(guī)方式制備并且它們表現(xiàn)出與游離化合物同樣量級的活性。式I化合物可以以游離形式或藥學上可接受鹽的形式施用，例如如上所述。這類鹽可以按照常規(guī)方式制備并且它們表現(xiàn)出與游離化合物同樣量級的活性。按照上述，本發(fā)明進一步提供了1.1在需要此治療的對象中預防或治療例如如上所述由淋巴細胞介導的病癥或疾病的方法，該方法包括對所述對象施用有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；1.2在需要此治療的對象中預防或治療例如如如上所述的急性或慢性移植物排斥或T-細胞介導的炎性或自身免疫疾病的方法，該方法包括對所述對象施用有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽；1.3在有需要的對象中抑制或控制血管生成失調(diào)、例如鞘氨醇-l-磷酸(S1P)介導的血管生成的方法，包括對所迷對象施用治療有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。1.4在有需要的對象中預防或治療由新血管生成過程介導或與血管生成失調(diào)相關的疾病的方法，包括對所述對象施用治療有效量的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。2.游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I化合物，用作藥物，例如在上述1.1-1.4中所示的任意方法中。3.藥物組合物，例如用于上述1.1-1.4中任意方法中、包含游離形式或其藥學上可接受鹽形式的式I化合物與藥學上可接受的稀釋劑或載體。4.游離形式或藥學上可接受鹽形式的式I化合物在制備用于上述1.1-1.4任意方法中的藥物組合物中的用途。式I化合物可以作為單一活性組分或與例如作為佐劑的其它藥物聯(lián)合施用，所述其它藥物例如免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑或其它抗炎劑，例如用于治療或預防同種異體移植物或異種移植物急性或慢性排斥或炎性或自身免疫病癥；或化療劑，例如惡性細胞抗增殖劑。例如，式I化合物可以與如下藥物聯(lián)用釣調(diào)磷酸酶抑制劑，例如環(huán)孢菌素A或FK506;mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、40-O-(2-羥乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578或AP23573;具有免疫抑制特性的子嚢霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷酰胺；咪唑硫嘌呤(azathioprene);曱氨蝶呤；來氟米特；咪唑立賓；霉酚酸；麥考酚酸嗎啉乙酯；15-脫氧精胍菌素或免疫抑制劑同系物、其類似物或衍生物；免疫抑制單克隆抗體，例如白細胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86或其配體；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少部分CTLA4胞外結(jié)構(gòu)域或其突變體的重組結(jié)合分子，例如與非-CTLA4蛋白序列連接的CTLA4的至少胞外部分或其突變體，例如CTLA4Ig(例如命名為ATCC68629)或其突變體，例如LEA29Y;黏著分子抑制劑，例如LFA-1拮抗劑、ICAM-1或-3拮抗劑、VCAM-4拮抗劑或VLA-4拮抗劑；或化療劑。所謂術語"化療劑"意旨任意的化療劑并且包括但不限于i.芳香酶抑制劑；ii.抗雌激素藥、抗雄激素藥(尤其是就前列腺癌而言)或戈那瑞林(gonadorelin)'激動劑；iii.拓樸異構(gòu)酶I抑制劑或拓樸異構(gòu)酶II抑制劑；iv.微管活性劑、烷化劑、抗腫瘤抗代謝物或鉑化合物；v.靶向/降低蛋白或脂質(zhì)激酶活性或蛋白或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物、其它抗血管生成化合物或誘導細胞分化過程的化合物；vi.緩激肽1受體或血管緊張素II拮抗劑；vii.環(huán)加氧酶抑制劑、雙膦酸類、組蛋白脫乙酰酶抑制劑、類肝素酶抑制劑(防止硫酸類肝素降解)，例如PI-88;生物應答改性劑，優(yōu)選淋巴因子或干擾素，例如干擾素口；遍在蛋白化作用抑制劑，或阻滯抗細胞程序死亡路徑的抑制劑；viii.Ras致癌同種型抑制劑，例如H-Ras、K-Ras或N-Ras，或法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，例如L-744、832或DK8G557;ix.端并立酶4中制劑，例如telomestatin;x.蛋白酶抑制劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、甲硫氨酸氨肽酶抑制劑，例如bengamide或其4汙生物，或蛋白體抑制劑，例如PS-341;和/或xi.mTOR4卬制劑。本文所用的術語"芳香酶抑制劑"涉及抑制雌激素產(chǎn)生的化合物，也就是抑制底物雄甾烯二酮和睪酮分別向雌酮和雌二醇的轉(zhuǎn)化的化合物。該術語包括但不限于類固醇，尤其是阿他美坦、依西美坦和福美司坦，特別是非類固醇，尤其是氨魯米特、roglethimide、吡魯米特、曲洛司坦、睪內(nèi)酯、酮康唑(ketokonazole)、伏羅唑、法曲唑、阿那曲唑和來曲唑。包含化學治療劑芳香酶抑制劑的本發(fā)明組合特別可用于治療激素受體陽性腫瘤，例如乳腺腫瘤。本文所用的術語"抗雌激素藥，，涉及在雌激素受體水平拮抗雌激素效應的化合物。該術語包括但不限于他莫昔芬、fulvestrant、雷洛昔芬和鹽酸雷洛昔芬。包含化學治療劑抗雌激素藥的本發(fā)明組合特別可用于治療雌激素受體陽性腫瘤，例如乳腺腫瘤。本文所用的術語"抗雄激素藥"涉及能夠抑制雄性激素生物效應的任意物質(zhì)，包括但不限于比卡魯胺。本文所用的術語"戈那瑞林激動劑"包括但不限于阿巴瑞克(abarelix)、性瑞林和醋酸性瑞林。本文所用的術語"拓樸異構(gòu)酶I抑制劑"包括但不限于托泊替康、伊立替康、9-硝基喜樹堿和大分子喜樹堿綴合物PNU-166148(WO99/17804中的化合物Al)。本文所用的術語"拓樸異構(gòu)酶II抑制劑"包括但不限于蒽環(huán)素類，例如阿霉素、柔紅霉素、表阿霉素、伊達比星和奈莫比星(nemorubicin)，蒽醌類的米托蒽醌和洛索蒽醌(losoxantrone);和鬼臼毒素(podophillotoxine)依托泊苷和替尼泊苷。術語"微管活性劑"涉及微管穩(wěn)定化與微管去穩(wěn)定化劑，包括但不限于紫杉烷類，例如紫杉醇和多西他賽；長春花屬生物堿，例如長春花堿尤其是硫酸長春花堿、長春新堿尤其是硫酸長春新堿，和長春烯堿；海綿內(nèi)酯(discodermolide)和埃坡霉素及其衍生物，例如埃坡霉素B或其衍生物。本文所用的術語"烷基化劑"包括但不限于白消安、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖或亞硝基脲(BCNU或GliadelTM)。術語"抗腫瘤性抗代謝物"包括但不限于5-氟尿嘧啶、卡培他濱、吉西他濱、阿糖胞苷、氟達拉濱、硫鳥嘌呤、甲氨蝶呤和依達曲沙。本文所用的術語"鉑化合物"包括但不限于卡柏、順鉑和奧沙利鉬。本文所用的術語"靶向/降低蛋白或脂質(zhì)激酶活性的化合物或者進一步的抗血管生成化合物，，包括但不限于蛋白酪氨酸激酶和/或絲氨酸和/或蘇氨酸激酶抑制劑或者脂質(zhì)激酶抑制劑，例如耙向、降低或抑制下列物質(zhì)活性的化合物表皮生長因子受體酪氨酸激酶家族(作為均-或雜二聚物的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)、血管內(nèi)皮生長因子受體酪氨酸激酶家族(VEGFR)、血小板衍生的生長因子受體(PDGFR)、成纖維細胞生長因子受體(FGFR)、胰島素樣生長因子受體1(IGF-1R)、Trk受體酪氛酸激酶家族、Axl受體酪氨酸激酶家族、Ret受體酪氨酸激酶、Kit/SCFR受體酪氨酸激酶、c-Abl家族成員與它們的基因融合產(chǎn)物(例如BCR-Abl)、蛋白激酶C(PKC)與Raf家族的絲氨^7蘇氨酸激酶成員、MEK、SRC、JAK、FAK、PDK或PI(3)激酶家族成員或者PI(3)激酶相關激酶家族的成員，和/或細胞周期蛋白依賴性激酶家族(CDK)成員，和它們的活性具有另一種機理(例如與蛋白或脂質(zhì)激酶抑制作用無關)的抗血管生成化合物。靼向、降低或抑制VEGFR活性的化合物尤其是抑制VEGF受體酪氨酸激酶、抑制VEGF受體或與VEGF結(jié)合的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，特別是一般與具體公開在下列文獻中的那些化合物、蛋白質(zhì)或單克隆抗體WO98/35958，例如l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡咬基甲基)酞溱或其藥學上可接受的鹽，例如琥珀酸鹽；WO00/27820，例如N-芳(石克代)鄰氨基苯甲酰胺衍生物，例如2-[(4-吡^^)曱基]氨基-N-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)苯基l苯甲酰胺或2-[(l-氧化-4-吡咬基)甲基氨基-N-[3-三氟曱基苯基苯甲酰胺；或WO00/09495、WO00/59509、WO98/11223、WO00/27819和EP0769947;M.Prewett等在CancerResearchf￡(1999)5209-5218中、F.Yuan等在Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93巻，14765-14770頁，1996年12月中、Z.Zhu等在CancerRes.58，1998，3209-3214中和J.Mordenti等在ToxicologicPathology,27巻，第1期，14-21頁，1999中所述的那些；WO00/37502和WO94/10202;AngiostatinTM，如M.S.O'Reilly等，Cell79，1994，315-328所述；EndostatinTM,如M.S.O'Reilly等，Cell88，1997,277-285所述；鄰氨基苯甲酰胺類；ZD4190;ZD6474;SU5416;SU6668;或者抗-VEGF抗體或抗-VEGF受體抗體，例如RhuMab?？贵w表示完整的單克隆抗體、多克隆抗體、由至少2種完整抗體構(gòu)成的多特異性抗體，和抗體片段，只要它們表現(xiàn)所需的生物活性即可。耙向、降低或抑制表皮生長因子受體家族活性的化合物尤其是這樣的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，它們抑制EGF受體酪氨酸激酶家族的成員，例如EGF受體、ErbB2、ErbB3和ErbB4，或者與EGF或EGF相關配體結(jié)合，或者它們對ErbB和VEGF受體激酶具有雙重抑制效果，特別是一般與具體/〉開在下列文獻中的那些化合物、蛋白質(zhì)或單克隆抗體WO97/02266，例如實施例39化合物，或者EP0564409、WO99/03854、EP0520722、EP0566226、EP0787722、EP0837063、US5,747,498、WO98/10767、WO97/30034、WO97/49688、WO97/38983，尤其是WO96/30347(例如-故稱為CP358774的化合物)、WO96/33980(例如化合物ZD1839)和WO95/03283(例如化合物ZM105180)或PCT/EP02/08780;例如司徒曼布(HerpetinR)、cetuximab、Iressa、OSI-774、CI-1033、EKB-569、GW-2016、El.l、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.ll、E6.3或E7.6.3。靶向、降低或抑制PDGFR活性的化合物尤其是抑制PDGF受體的化合物，例如N-苯基-2-嘧啶-胺4汙生物，例如伊馬替尼(imatinib)。靼向、降低或抑制c-Abl家族成員和它們基因融合產(chǎn)物的化合物例如有N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊馬替尼；PD180970;AG957或NSC680410。靶向、降低或抑制蛋白激酶C、Raf、MEK、SRC、JAK、FAK和PDK家族成員或者PI(3)激酶或PI(3)激酶相關家族成員和/或細胞周期蛋白依賴性激酶家族(CDK)成員的活性的化合物尤其是公開在EP0296110中的那些星形孢菌素衍生物，例如midostaurin;進一步的化合物實例例如包括UCN-Ol、safingol、BAY43-卯06、苫蘚蟲素1、Perifosine;Ilmofosine;RO318220與RO320432;GO6976;Isis3521;或者LY333531/LY379196。進一步的抗血管生成化合物例如有沙利度胺(THALOMID)和TNP-470。靼向、降低或抑制蛋白或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物例如有磷酸酶1、磷酸酶2A、PTEN或CDC25的抑制劑，例如岡田酸(okadaicacid)或其衍生物。誘導細胞分化過程的化合物例如有視黃酸、ot-、P-或y-生育酚或a-、P-或Y-生育三烯酚。本文所用的術語環(huán)加氧酶抑制劑包括但不限于例如塞來昔布(CelebrexR)、洛芬昔布(VioxxR)、依托考昔(etoricoxib)、伐地考昔(valdecoxib)或者5-烷基-2-芳基氨基苯基乙酸，例如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯基乙酸。本文所用的術語"組蛋白脫乙酰酶抑制劑"包括但不限于MS-27-275、SAHA、pyroxamide、FR國卯1228或丙戊酸。本文所用的術語"雙膦酸類"包括但不限于伊曲膦酸、氯膦酸、替魯膦酸、帕米膦酸、阿侖膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑來膦酸。本文所用的術語"基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，，包括但不限于膠原擬肽(peptidomimetic)與非擬肽抑制劑、四環(huán)素衍生物，例如異羥肟酸擬肽抑制劑巴馬司他及其口服生物可利用的類似物馬馬司他、prinomastat、BMS畫279251、BAY12-9566、TAA211或AAJ996。本文所用的術語"mTOR抑制劑"包括但不限于雷帕霉素(西羅莫司)或其衍生物，例如32-脫氧雷帕霉素、16-戊-2-炔氧基-32-脫氧雷帕霉素、16-戊-2-炔氧基-32(S)-二氫雷帕霉素、16-戊-2-炔氧基-32(S)-二氫-40-O-(2-羥乙基)雷帕霉素和更優(yōu)選的40-O-(2-羥乙基)雷帕霉素。雷帕霉素衍生物的進一步實例例如包括CCI779或40-[3-羥基-2-(羥曱基)-2-甲基丙酸酯(propanoate)雷帕霉素或其藥學上可接受的鹽，如USP5,362,718中所公開；ABT578或40-(四唑基)雷帕霉素，特別是40-表-(四唑基)雷帕霉素，例如公開在WO99/15530中；或者雷帕霉素類似物(rapalog)，例如公開在WO98/02441和WO01/14387中，例如AP23573。若式I化合物與其他免疫抑制性/免疫調(diào)控性、抗炎或化學治療療法聯(lián)合施用，則共同施用的免疫抑制性、免疫調(diào)控性、抗炎或化學治療化合物的劑量當然將依賴于所采用的共同藥物類型(例如它是類固醇還是鈣調(diào)磷酸酶抑制劑)、所采用的具體藥物、所治療的病癥等而各不相同。按照上述，本發(fā)明在更進一步的方面提供5.如上所定義的方法，包括共同施用、例如同時或相繼施用治療有效無毒量的式I化合物與至少一種第二藥物物質(zhì)，例如免疫抑制性、免疫調(diào)控性、抗炎或化學治療藥，例如如上所示。6.藥物組合，例如藥盒，包含a)第一活性劑，它是如本文所公開的游離形式或藥學上可接受的鹽形式的式I化合物，和b)至少一種活性助劑，例如免疫抑制性、免疫調(diào)控性、抗炎或化學治療藥，例如如上所公開。該藥盒可以包含其使用說明書。本文所用的術語"共同施用"或"聯(lián)合施用"等表示涵蓋所選擇的治療劑對單一患者的施用，應包括這樣的治療方案，其中各活性劑不必借助相同施用途徑或者在相同時間施用。本文所用的術語"藥物組合"表示這樣一種產(chǎn)品，它由混合或合并一種以上活性成分而得到，包括活性成分的固定與非固定組合。術語"固定組合"意味著活性成分、例如式I化合物和活性助劑都是以單一實體或劑量形式同時對患者施用。術語"非固定組合"意味著活性成分、例如式I化合物和活性助劑都是作為獨立實體同時、并行或沒有特定的時間限制相繼對患者施用，其中這類施用在患者體內(nèi)提供治療有效水平的2種化合物。后者也適用于雞尾酒療法，例如施用3種或3種以上活性成分。制備本發(fā)明化合物的方法
技術領域：
：本發(fā)明也包括制備本發(fā)明免疫調(diào)控性化合物的方法。在所述反應中，若反應性官能團是終產(chǎn)物中所需的，可能有必要進行保護，例如羥基、氨基、亞氨基、硫代基或羧基，以避免它們不可取地參與反應。可以按照標準實踐使用常規(guī)保護基團，例如參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts，"有機化學中的保護基，，，JohnWiley和Sons，1991。式Ia的化合物可以如下列反應方案進行制備A_^N、5+/^，l—R1Pd催化弗，配體^￥"\>，'.或0"(,^_/械，溶術*&la式2式3其中A、B、C、RpR2、L和n如發(fā)明4既述中所定義。式Ia化合物可如下制備在合適的溶劑(例如四氫呋喃等)、合適的堿(例如氟化鉀、碳酸鈉等)、合適的催化劑(乙酸鈀等)和合適的配體(三苯膦等)存在下使式2化合物與式3化合物反應。該反應在約-約150。C的溫度進行并且可能需要約48小時完成。式Ib化合物可以通過實施類似反應方案制備。制備本發(fā)明化合物的另外方法通過使化合物的游離堿形式與藥學上可接受的無機或有機酸反應，可以將本發(fā)明化合物制成藥學上可接受的酸加成鹽。作為替代選擇，本發(fā)明化合物的藥學上可接受的堿加成鹽可以通過使化合物的游離酸形式與藥學上可接受的無機或有機堿反應而制備。作為替代選擇，可以使用原料或中間體的鹽制備本發(fā)明化合物的鹽形式。本發(fā)明化合物的游離酸或游離堿形式可以分別從對應的堿加成鹽或酸加成鹽形式制備。例如，通過用適合的堿(例如氫氧化銨溶液、氫氧化鈉等)處理，可以將酸加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為對應的游離堿。通過用適合的酸(例如鹽酸等)處理，可以將堿加成鹽形式的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為對應的游離酸。未氧化形式的本發(fā)明化合物可以由本發(fā)明化合物的N-氧化物通過用還原劑(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氫化鋰、硼氫化鈉、三氯化砩、三溴化磷等)在適合的惰性有機溶劑(例如乙腈、乙醇、含水二噁烷等)中在0至80°C處理而制備。本發(fā)明化合物的前體藥物衍生物可以借助本領域普通技術人員已知的方法制備(例如關于進一步的細節(jié)，參見Saulnier等，(l"4),BioorganicandMedicinalChemistryLetters,笫4巻，p.1985)。例如，適當?shù)那绑w藥物可以通過使本發(fā)明的非衍生化合物與適合的氨甲酰化試劑(例如l，l-酰氧基烷基碳酰氯(carbanochloridate)、對-硝基苯基碳酸酯等)反應而制備。本發(fā)明化合物的被保護衍生物可以借助本領域普通技術人員已知的手段制備?？捎糜趧?chuàng)建保護基團及其除去的技術的詳細說明可以參見TW.Greene,"有機化學中的保護基"，第3版，JohnWiley和Sons,Inc.,1999。本發(fā)明化合物可以適宜地在本發(fā)明方法期間被制成或生成溶劑合物(例如水合物)。本發(fā)明化合物的水合物可以適宜地通過使用有機溶劑如二氧芑、四氫呋喃或甲醇從水/有機溶劑混合物中重結(jié)晶而制備。通過使化合物的外消旋混合物與旋光活性拆分劑反應，生成一對非對映異構(gòu)化合物，分離非對映體，回收光學純的對映體，可以將本發(fā)明化合物制成它們的個別立體異構(gòu)體。盡管對映體的拆分可以使用本發(fā)明化合物的共價非對映體衍生物進行，不過可離解的配合物是優(yōu)選的(例如結(jié)晶性非對映體鹽)。非對映體具有不同的物理性質(zhì)(例如熔點、沸點、溶解度、反應性等)，可以利用這些相異性容易地分離。非對映體可以借助色譜法分離，或者優(yōu)選借助基于溶解度差異的分離/拆分技術分離。然后借助任意不會導致外消旋化的實用手段回收光學純的對映體以及拆分劑?？捎糜趶钠渫庀旌衔锊鸱只衔锪Ⅲw異構(gòu)體的技術的更詳細說明可以參見JeanJacques,AndreCollet,SamuelILWilen，"對映體、夕卜消4t物及拆分，，，JohnWiley和Sons,Inc.,1981?？傊?，式I化合物可以借助涉及以下的方法制備(a)使式2化合物和式3化合物反應；和(b)任選地將本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為藥學上可接受的鹽；(c)任選地將本發(fā)明化合物的鹽形式轉(zhuǎn)化為非鹽形式；(d)任選地將本發(fā)明化合物的未氧化形式轉(zhuǎn)化為藥學上可接受的N-氧化物；(e)任選地將本發(fā)明化合物的N-氧化物形式轉(zhuǎn)化為其未氧化形式；0)任選地從異構(gòu)體混合物拆分本發(fā)明化合物的個別異構(gòu)體；(g)任選地將非衍生化的本發(fā)明化合物轉(zhuǎn)化為藥學上可接受的前體藥物4汙生物；和00任選地將本發(fā)明化合物的前體藥物衍生物轉(zhuǎn)化為其非衍生化形式。在沒有確切描述原料制備的情形中，這些化合物是已知的或者可以類似于本領域已知的方法或如下文實施例所公開加以制備。本領域技術人員將領會到，上述轉(zhuǎn)化作用僅僅是本發(fā)明化合物制備方法的代表，可以類似地采用其他熟知的方法。實施例下列實施例提供制備代表性化合物的詳細說明，供闡述但不限制本發(fā)明。實施例15-『4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-吡啶-2-曱酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>配體，堿2步驟l:向包含5-溴吡啶曱酸曱酯(0.5(^，2.311111101)、4-(羥甲基)苯基代硼酸(0.53g，3.5mmo1)、乙酸鈀(52mg，0.23mmo1)、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯(0.16g，0.46mmol)和氟化鉀(0.40g，6.9mmol)的圓底燒瓶中加入無水1，4-二噁烷(10ml)。用氬氣凈化燒瓶并且密封。將該混合物在130。C攪拌4小時，冷卻至環(huán)境溫度，然后加入水(20ml)。用EtOAc(20mlx2)萃取該混合物，用MgS04干燥，濃縮。通過硅膠柱色鐠法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，得到5-(4-羥曱基-苯基)-處咬-2-曱酸甲酯1:&NMR(400MHz,DMSO-d6)89.04(d，1H，J=2.4Hz)，8.27(dd，1H，J產(chǎn)2.4Hz，J尸8.8Hz)，8.13(d，1H，J=8.8Hz)，7.78(d，2H，J=8.8Hz)，7.48(d，2H，J=8.8Hz)，5.32(t，1H,J=6.4Hz)4.57(d,2H，J=6.4Hz)，3.09(s，3H);LC-MSm/z:244.1(M+l)。步驟2:向包含4-溴-3-三氟甲基-苯酚(0.50g，2.1mmo1)、2-氟苯基代硼酸(0.58g，4.2mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.44g，0.62mmol)的微波管中加入2N32(:03溶液(7.51111)和THF(7.5ml)。用氬氣凈化該管并且密封。將該反應物在130°C于尸ef^mi/Chemistry微波中加熱1小時。將該混合物冷卻至環(huán)境溫度，此后加入水(20ml)。用EtOAc(20mlx2)萃取該混合物，用MgS04干燥，濃縮。通過珪膠柱色譜法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，得到2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-醇2:&NMR(400MHz，DMSO-d6)810.3(s，1H),7.45(m,1H)，7.23(m，5H)，7.08(m，1H);GC曙MSm/z:256。步驟3:向0。C、氬氣氛下的5-(4-羥曱基-苯基)-吡啶-2-甲酸甲酯1(70mg,0.29mmo1)、2'畫氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-醇2(81mg，0.32mmol)和PPh3(113mg，0.43mmoI)在無水THF(3ml)中的溶液中加入偶氮二甲酸二乙酯(100mg，0.58mmo1)。然后將該混合物溫至室溫并攪拌12小時。除去溶劑，通過硅膠柱色語法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，得到5-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸曱酯3，其中污染有三苯膦氧化物。其不經(jīng)進一步純化用于下一步LC-MS/w/z:482.2(M+l)。步驟4:向上述獲得的5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-曱酸甲酯3在THF-H20(1:1混合物，4ml)中的溶液中加入NaOH(200mg)。將該反應物在室溫攪拌12小時，然后用三氟乙酸酸化。濃縮該反應物并溶于DMSO。將其通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)純化，得到5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡咬-2-甲酸4:^NMR(DMSO-d6)89.06(s，1H)，8.32(d，1H，J=8.0Hz)，8.14(d，1H，J=8.0Hz)，7.88(d,2H,J=8.0Hz),7.68(d，2H，J=8.0Hz)，7.47(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m,3H)，5.35(s,2H);LC-MSim/z468.2(M+1)。實施例25-『2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氣基曱基)-苯基卜吡咬-2-曱酸Pd催化劑配體，堿Pd催化劑配體，堿步驟l:向包含5-溴吡啶甲酸曱酯(0.5(^，2.311111101)、(2-氟-4-甲基苯基)代硼酸(0.53g，3.5mmo1)、乙酸鈀(52mg，0.23mmo1)、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯(0.16g，0.46mmol)和氟化鉀(0.40g，6.9mmol)的圓底燒瓶中加入無水1，4-二噁烷(10ml)。用氬氣凈化燒瓶并且密封。將該混合物在130。C攪拌4小時，然后冷卻至環(huán)境溫度，此后加入水(20ml)。用EtOAc(20mlx2)萃取該混合物，用MgS04干燥，濃縮。通過硅膠柱色語法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，得到5-(2-氟-4-曱基-苯基)-吡啶-2-曱酸曱酯5(0.36g，產(chǎn)率63%):&NMR(400MHz，DMSO-d6)58.88(s，1H)，8.15(m，2H)，7.57(t，1H，J=8.0Hz)，7.24(d，1H，J=11.6Hz)，7.20(d，1H，J=8.0Hz)，3.91(s，3H)，2.39(s3H);LC誦MS一246.0(M+l)。步驟2:將5-(2-氟-4-甲基-苯基)-吡咬-2-甲酸甲酯5(0.20g，0.82mmo1)、N-溴琥珀酰亞胺(0.17g，0.98mmol)和2，2，-偶氮二異丁腈(40mg，0.24mmo1)在CCl4(7ml)中的溶液回流4小時。濃縮該反應物，通過硅膠柱色i普法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，得到5-(4-溴曱基-2-氟-苯基)-吡啶-2-甲酸甲酯6:^NMR(400MHz,DMSO-d6)88.92(s，1H)，8.17(m,2H)，7.69(t，1H，J=8.0Hz)，7.53(d，1H，J=12Hz)，7.40(d，1H，J=8.0Hz)，4.78(s，2H)，3.91(s，3H);LC-MSw/z:323.9(M+l)。步驟3:使用實施例1步驟2中所述的方法使4-溴-3-三氟曱基-苯酚、苯基代硼酸反應，通過珪膠柱色譜法純化(EtOAc/己烷，梯度)后，得到2-三氟曱基誦聯(lián)苯-4-醇7:^NMR(400MHz，DMSO-d6)510.2(s，1H)，7.38(m,3H)，7.25(m，2H)，7.19(d，1H，J=8.8Hz)，7.14(d，1H，J=2.4Hz)，7.06(dd，1H，J尸2.4Hz，J2=8.8Hz);GC醫(yī)MSm/z:238。步驟4:向2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-醇7(45mg，0.19mmol)在無水DMF(2ml)中的溶液中加入NaH(60。/o礦物油分散液，13mg，0.32mmo1)。攪拌10分鐘后，加入5-(4-溴曱基-2-氟-苯基)-吡咬-2-甲酸曱酯6在DMF(lml)中的溶液。將該反應物在室溫攪拌12小時，然后用三氟乙酸酸化。濃縮該反應物并溶于DMSO。通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到5-[2-氟-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸8(28mg，產(chǎn)率39%):NMR(DMSO-d6)38.91(s，1H)，8.22(d,1H,J=7.6Hz)，8.16(d,1H,J=8.0Hz)，7.74(t，1H，J=8.8Hz)，7.54(d，1H，J=10.8Hz)，7.51(d，1H，J=7.6Hz),7.41(m，6H)，7.28(d，2H，J=7.6Hz)，5.35(s，2H);LC畫MS/m/z468.0(M+l)。實施例32-4-(3'-曱基-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-111-咪唑-4-甲酸,CF3,COOHCF3COCHBr2步驟1:向NaOAc.3H2O(0.66g，2.4mmol)在H20(2.2ml)+的溶液中加入1，1，l-三氟-3，3-二溴丙酮(0.66g，4.8mmol)。攪拌該混合物，在115°C油浴中加熱30分鐘。冷卻至室溫后，將該溶液加入到4-羥甲基-苯曱醛(0.30§，2.2mmol)在含有濃氫氧化銨(2.8ml)的甲醇(llml)中的溶液中。將該混合物攪拌5小時，然后濃縮。向殘余物中加入水，用乙酸乙酯萃取該混合物。合并乙酸乙酯層并且干燥。除去溶劑后，獲得[4-(4-三氟甲基-lH-咪唑-2-基)-苯基畫甲醇9:&NMR(DMSO-d6)&13.1(s，1H)，7.92(d，2H，J=8.0Hz)，7.卯(s，1H)，7.42(d，2H，J=8.0Hz)，5.28(t，1H，J=6.0Hz)，4.54(d，2H，J=6.0Hz);LC-MSm/z243.0(M+l)。步驟2:向0。C、氬氣氛下的[4-(4-三氟甲基-lH-咪唑-2-基)-苯基-甲醇9(50mg，0.21mmo1)、3'-曱基國2-三氟甲基-聯(lián)苯畫4-醇(0.10g，0.41mmol)和PPh3(108mg，0.41mmol)在無7jcTHF(3ml)中的溶液中加入偶氮二甲酸二乙酯(72mg，0.41mmo1)。然后將該混合物溫至室溫并攪拌12小時。除去溶劑，通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化殘余物(Ci8柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到2-[4-(3'-曱基-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-4-三氟甲基畫lH-咪唑10:，HNMR(DMSO-d6)S8.02(d,2H，J=8.0Hz)，7.93(s，1H)，7.61(d，2H，J=8.0Hz)，7.41(d，1H,J=3.6Hz)，7.32(m，3H)，7.20(d,1H，J=6.8Hz)，7.09(s，1H)，7.06(d，1H，J=8.0Hz),5.29(s，2H)，2.33(s，3H);LC-MS/m/z:476.2(M+l)。步驟3:將2-[4-(3'-甲基-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-4-三氟甲基-lH-咪唑10(40mg，0.084mmol)在1.5NNaOH水溶液(2ml)中的混懸液在95。C加熱24小時。將其冷卻至室溫，用三氟乙酸酸化。濃縮該溶液并溶于DMSO。通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到2-[4-(3'-甲基-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基I-lH-咪唑-4-曱酸11(9.2mg，產(chǎn)率24%):，HNMR(DMSO-d6)38.16(s，1H)，8.15(d，2H，J=8.0Hz)，7.68(d，2H，J=8.0Hz)，7.41(d，1H,J=3.6Hz)，7.33(m,4H)，7.20(d，1H，J=8.0Hz)，7.09(s，1H)，7.06(d，1H，J=7.6Hz)，5.33(s，2H)，2.33(s,3H);LC掘/m/z453.1(M+l)。實施例4(5-〖4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-吡啶-3-基V乙酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>步驟1:將2'畫氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-醇2(0.40g，1.6mmol)在無水DMF(10ml)中的溶液冷卻至0°C。向該溶液中加入NaH(60。/。礦物油分散液，0.19mg,4.7mmo1)。攪拌10分鐘后，加入l-溴-4-溴甲基-苯在DMF(lml)中的溶液。然后將該反應物溫至室溫并攪拌12小時。用飽和NH4Cl(20ml)猝滅，用乙酸乙酯(10mlx2)萃取。合并乙酸乙酯層，干燥，通過珪膠柱色i普法純化(EtOAc/己烷，梯度)，得到4-(4-溴-芐氧基)-2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯12:&NMR(400MHz，DMSO-d6)8力NMR(DMSO-d6)37.62(d，2H，J=8.0Hz)，7.47(s，1H)，7.46(d，2H,J=8.0Hz),7.43(m，1H)，7.19(m，2H)，7.28(m，3H),5.24(s，2H);LC掘m/z424.9(M+l)。步驟2:用氬氣凈化4-(4-溴-節(jié)氧基)-2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯12(0.10g,0.24mmo1)、雙(頻哪醇)二硼(66mg，0.26mmol)、PdCl2(dppf).CH2Cl2(10mg，0.012mmol)和乙酸鉀(69mg,0.71mmol)在無水DMSO(lml)中的溶液并且密封。將其在80。C加熱12小時。冷卻至室溫后，加入水(10ml)。用乙酸乙酯(10mlx2)萃取。合并乙酸乙酯層，干燥，通過硅膠柱色鐠法(EtOAc/己烷，梯度)純化，得到2-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-4，4，5,5-四甲基-l,3，2I二氧硼雜環(huán)戊烷13:&NMR(400MHz，DMSO-d6)S&NMR(DMSO-d6)S7.72(d，2H，J=8.0Hz)，7.51(s，1H)，7.48(d,2H，J=8.0Hz)，7.45(m，1H)，7.35(m，2H)，7.27(m，3H)，5.30(s，2H)，1.30(s，6H);LC-MSwi/"73.2(M+l)。步驟3:向包含(5-溴-吡啶-3-基)-乙酸甲酯(40mg，0.17mmo1)、2-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-4，4,5，5-四甲基-[l，3，2二氧硼雜環(huán)戊烷13(80mg，0.17mmo1)、乙酸把(6mg，0.026mmo1)、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯(18mg，0.051mmol)和氟化鐘(30mg，0.051mmol)的圓底燒瓶中加入無水1,4-二噁烷(2ml)。用氬氣凈化燒瓶并密封。將該混合物在130。C攪拌12小時，然后冷卻至環(huán)境溫度，此后加入水(5ml)。用EtOAc(10mlx2)萃取該混合物，用MgS04干燥，濃縮。通過硅膠柱色譜法純化殘余物(EtOAc/己烷，梯度)，，得到{5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶畫3國基}-乙酸甲酯14:LC國MS/n/z:496.0(M+l)。步驟4:向上述獲得的{5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶-3-基}-乙酸甲酯14(35mg，0.070mmol)在THF-H20(1:1混合物，5ml)中的溶液中加入NaOH(40mg，l.Ommol)。將該反應物在室溫攪拌12小時，然后用三氟乙酸酸化。濃縮該反應物并溶于DMSO。通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到{5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-吡咬-3-基}-乙酸15:^NMR(DMSO-d6)89.1l(s，1H),8.78(s，1H)，8.64(s,1H),7.89(d，2H，J=8.0Hz)，7.69(d，2H，J=8.0Hz)，7.47(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，3H)，5.36(s，2H)，3.93(s，2H);LC掘wi/z482.1(M+l)。5-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜2-(lH-四唑-5-基)-吡啶將5-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-腈(84mg，0.19mmol)、NH4Cl(30mg，0.56mmol)和NaN3(18mg，0.28mmol)在DMF(lml)中的溶液在120。C攪拌3小時。然后濃縮該溶液，通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(Qs柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到5-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-2-(lH-四唑-5-基)-吡啶&NMR(DMSO-d6)89.14(s，1H)，8.41(dd，1H，J產(chǎn)8.8Hz，J尸1.6Hz)，8.31(d,1H，J=7.6Hz)，7.92(d，2H，J=8.4Hz)，7.68(d，2H，J=8.4Hz)，7.47(m，2H)，實施例57.38(m，2H)，7.27(m，3H)，5'36(s，2H);LC國MSw/z492.0(M+1)。實施例65-『4_(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基1-吡咬-2-曱酰胺H2N'N==^F向0。C、攪拌的5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2畫腈(25mg，0.056mmol)在DMSO(0.5ml)中的溶液中加入30%H202(18pl)和無水K2CO3(10mg)。將該溶液攪拌4小時。除去固體，通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)后，獲得產(chǎn)物NMR(DMSO-d6)88.96(d，1H，J=2.4Hz)，8.29(dd，1H，J產(chǎn)8.8Hz，J2=1.6Hz)，8.16(s,1H)，8.13(d，1H，J=7.2Hz)，7.86(d，2H，J=7.6Hz)，7.69(s，1H)，7.66(d，2H，J=7.6Hz)，7.47(m，2H)，7.38(m，2H)，7.28(m，3H)，5.34(s，2H);LC國MSm/z467.0(M+l)。實施例75-4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基1-1^咪唑-2-甲酸步驟1:向2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-醇(1.55g，6.05mmol)和K2CO3(1.30g,12.1mmol)在無水DMF(15ml)中的混合物中加入l-(4-溴曱基-苯基)-乙酮(1.29&6.05mmol)在無水DMF(6ml)中的溶液。然后將所得混合物在氮氣氛下、室溫攪拌12小時。然后向該混合物中加入水(30ml)。用乙酸乙酯(80mlx3)萃取。合并有機層，用鹽水(50ml)洗滌，用MgS04干燥，濃縮。通過硅膠柱色譜法純化(EtOAc/己烷，梯度)，得到l-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4匿基氧基甲基)畫苯基-乙酮16:力醒R400MHz(CDCl3)§8.01(m，2H)，7.56(d，2H，J=8.4Hz)，7.36(m，2H)，7.25(m，3H)，7.14(m，3H)，5.20(s，2H)，2.63(s，3H);MS/w/z389.1(M+1)，411.1(M+Na)。步驟2:將1-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-乙酮(16，723mg，1.86mmol)溶于乙酸(4ml)。按照滴加方式加入Br2(86jil，1.67mmol)在AcOH(lml)中的溶液。然后將該混合物攪拌4小時。此后將整個混合物傾入水(50ml)中，加入固體碳酸氫鈉以中和至pH7。用乙酸乙酯(3x60ml)萃取該混合物。合并有機層，用鹽水(30ml)洗滌，用MgS04干燥，濃縮，通過硅膠柱色鐠法純化(己烷:乙酸乙酯=10:1)，得到2-溴-l[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基乙酮17:力NMR400MHz(CDCl3)88.05(m，2H)，7.61(d，2H)，7.37(m,2H)，7.26(m，3H)，7.15(m，3H)，5.23(s,2H)，4.24(s，2H);MS/m/z467.0(M+1),489.0(M+Na)。步驟3:在室溫向六亞曱基四胺(252mg，1.8mmol)在氯仿(5ml)中的溶液中滴加2-溴-1-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜乙酮17(700mg,1.5mmol)在氯仿(5ml)中的溶液。然后將該混合物攪拌12小時。此后在真空中除去溶劑。向殘余物中加入己烷/氯仿混合物(l:l，5ml)。過濾該混懸液，收集固體產(chǎn)物，干燥。然后將該固體產(chǎn)物溶于甲醇(10ml)，加入濃鹽酸(0.68ml)。將該混合物在室溫攪拌2小時。通過蒸發(fā)使混合物體積降至5ml。過濾除去白色固體，濃縮獲得的溶液。由此獲得的粗化合物8不經(jīng)進一步純化用于下一步。LC-MSm/z:404.2(M+l)。步驟4:在室溫歷經(jīng)5分鐘向氮氣氛下的2-硫代草氨酸乙基酯(66mg)在二氯曱烷(5ml)中的溶液中滴加三乙基氧鑰四氟硼酸鹽在二氯甲烷(0.75ml)中的l.OM溶液。此后將該混合物攪拌2小時。此后在減壓下蒸出二氯曱烷，將殘余物與乙酸(3ml)、乙酸鈉(81mg)和來自上述步驟的粗產(chǎn)物(400mg)混合。使該混合物在96。C反應3小時。冷卻至室溫后，過濾除去無機鹽，濃縮濾液，然后通過硅膠色傳法純化殘余物(CH2Cl2/乙酸乙酯=10/1),得到純產(chǎn)物5-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-1好-咪唑-2-甲酸乙酯(18)。步驟5:向上述獲得的化合物(18，58mg)在1，4-二噁烷(2ml)中的溶液中加入1NNaOH溶液(1.0ml)。然后將該混合物在60。C攪拌5小時。冷卻至室溫后，加入三氟乙酸(0.5ml)。然后濃縮該混合物，將所得殘余物溶于DMSO，通過制備型質(zhì)量觸發(fā)的HPLC純化(ds柱，用包含0.05%TFA的CH3CN-H20洗脫)，得到所需產(chǎn)物19:1HNMR400MHz(DMSO-d6)87.89(m，3H)，7.52(m,2H)，7.47(m，2H),7.38(m，2H)，7.27(m，3H),5.26(s，2H);MS/w/"57.1(M+l)。通過重復上述實施例中所述的操作步驟，使用適當?shù)脑?，獲得下列表l中鑒定的式I化合物。表l實施例結(jié)構(gòu)物理數(shù)據(jù)8^F3Me&NMR(DMSO-d6)S9.05(s，1H)，8.30(d，1H，J=7.6Hz)，8.13(d，1H，J=7.6Hz)，7.89(d，2H，J=8.0Hz)，7.66(d，2H，J=8.0Hz)，7.42(d，1H，J=2.4Hz)，7.33(m，3H)，7.20(d，1H，J=7.6Hz)，7.09(s，1H)，7.06(d，1H，7.6Hz)，5.33(s，2H)，2.33(s，3H);LC畫MSm/z464.1(M+l).<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>實施例52式I化合物表現(xiàn)生物活性A.體外用于測定GTP[y-35s與自表達人EDG/SlP受體的CHO細胞制備的膜的結(jié)合的閃爍親近測定法(SPA)。EDG-1(S1P1)GTP[3SS結(jié)合測定法由穩(wěn)定表達人EDG-1N-末端c-myc標記的CHO細胞克隆制備膜蛋白混懸液。用DMSO/50mMHC1制備10mM-0.01nM范圍的供試化合物溶液，然后稀釋入測定緩沖液(20mMHEPES，pH7.4,100mMNaCl，10mMMgCl2，0.1%不含脂肪的BSA)。將包含10mMGDP的測定緩沖液與麥胚凝集素-包被的SPA-珠(lmg/孑L)混合，隨后添加人EDG-1膜蛋白混懸液(10ng/孑L)和供試化合物。然后將珠/膜/化合物測定成分在室溫和振蕩器上混合10-15分鐘。將GTP[，35S(200pM)和珠/膜/化合物測定混合物加入到96孑LOptiplateTM的各孔中(最終體積225nl/孔)，密封，在室溫和恒定振蕩下孵育110-120分鐘。離心(2000rpm，IO分鐘)后，用T叩CoimtT^M義測定發(fā)光。使用ORIGINV.6.1劑量響應曲線-擬合工具擬合GTP[，"S結(jié)合曲線(原始數(shù)據(jù))，獲得EC50值。將基礎結(jié)合(無化合物)和用激動劑獲得的GTP[，"S結(jié)合的最高刺激用作擬合范圍。使用7種不同濃度生成濃度響應曲線(每個濃度使用兩個或三個數(shù)據(jù)點)。按照與EDG-1GTP[，"S結(jié)合測定相差無幾的方式，使用來自CHO的膜，或就EDG-8RH7777膜而言其來自穩(wěn)定表達c-末端c-myc標記的或未標記的受體的細胞，進行EDG-3、-5、-6和-801[，358結(jié)合測定。表達EDG受體的膜的濃度在13-19fig/孔的范圍。按照上述測定法測試本發(fā)明的化合物，觀察到它們顯示對EDG-1受體的選擇性。例如，5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸在上述測定法中的ECso為0.9nM，對EDG-1的選擇性至少500倍于其它受體中的一種或多種、包括EDG-3、EDG-5、EDG-6和EDG-8。B.體外FLIPR鉤流測定使用FLIPR鉤流測定法測試本發(fā)明化合物對EDG-1、EDG-3、EDG-5和EDG-6的激動劑活性。簡言之，將表達EDG受體的CHO細胞維持在包含5%FBS與500ug/mlG418的F-12K培養(yǎng)基(ATCC)中，在測定前，將細胞以10,000個細胞/孔/25ji1的密度接種于384孔黑色澄清底平板內(nèi)的包含1。/。FBS的F-12K培養(yǎng)基中。第二天，用洗滌緩沖液將細胞洗滌3次(25jal/孔)。向各孔中加入約25^1染料，在37°C和5%<:02下孵育1小時。然后用洗滌緩沖液將細胞洗滌4次(25|11/每次)。將25plSEQ2871溶液添加到各孔的細胞中后測定釣流。使用表達各個不同EDG受體的細胞進行相同測定。在3-分鐘間隔內(nèi)記錄FLIPR鈣流測定中的滴定過程，定量為對EDG-1活化的最大峰高響應百分比。C.體內(nèi)測定血液淋巴細胞耗竭的篩選試驗循環(huán)、淋巴細力包的測定:將化合物溶于DMSO和PEG300，稀釋至獲得終濃度為2%DMSO和2。/。PEG300(v/v，終濃度)。在短期異氟烷麻醉下以0.01-5mg/kg管飼對Lewis大鼠口服施用化合物溶液。在短期異氟烷麻醉下于施用后6和48小時從眶后竇采血。對全血樣品進行血液學分析。使用自動分析儀測定外周淋巴細胞計數(shù)。用熒光染料-綴合的特異性抗體染色外周血淋巴細胞亞群，使用熒光活化細胞分選儀(Facscalibur)分析。將2-3只大鼠用于評價每種篩選化合物的淋巴細胞耗竭活性。結(jié)果為EDso,將其定義為顯示50%血液淋巴細胞耗竭所需的有效劑量。按照上迷測定法測試本發(fā)明化合物，發(fā)現(xiàn)它們顯示的EDso優(yōu)選低于lmg/kg、更優(yōu)選EDso低于0.5mg/kg。例如，實施例1的化合物顯示的ED50為0.3mg/kg。應理解本文所述的實施例和實施方案僅用于解釋目的，并且可以對本領域技術人員提示依據(jù)其進行各種變型或改變，并且這些變型或改變包括在本申請的實質(zhì)和理解以及待批權(quán)利要求范圍內(nèi)。為所有目的而將本文引述的所有爿^開文獻，專利和專利申請引入本文作為參考。權(quán)利要求1.選自式Ia、Ib、Ic和Id的化合物及其藥學上可接受的鹽id="icf0001"file="S2006800387450C00011.gif"wi="101"he="61"top="50"left="63"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中A選自氰基、-X1C(O)OR3、-X1OP(O)(OR3)2、-X1P(O)(OR3)2、-X1P(O)OR3、-X1S(O)2OR3、-X1P(O)(R3)OR3、-X1C(O)NR3R3、-X1C(O)NR3X1OR3、-X1C(O)NR3X1C(O)OR3、-X1C(O)X1C(O)OR3和1H-四唑-5-基；其中X1各自獨立地選自鍵、C1-3亞烷基和C2-3亞烯基且R3各自獨立地選自氫和C1-6烷基；其中R3和A的任意NR3X1部分中X1的亞烷基氫可以形成環(huán)狀基團；B選自-CR4＝CR5-、-CR4＝N-、-N＝CR4-、-S-和-NR4-；其中R4和R5獨立地選自氫、鹵素和C1-6烷基；C選自＝CR4-和＝N-；其中R4選自氫、鹵素和C1-6烷基；L選自-X2OX3-、-X2NR3X3-、-X2C(O)NR3X3-、-X2NR3C(O)X3-和-X2S(O)0-2X3-；其中X2和X3各自獨立地選自鍵、C1-3亞烷基和C2-3亞烯基；且R3選自氫和C1-6烷基；Y選自鍵、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-NR3-、亞甲基和亞乙基；其中R3選自氫和C1-6烷基；n選自0、1、2和3；R1選自C6-10芳基和C1-10雜芳基；其中R1的任意芳基或雜芳基任選被選自C6-10芳基C0-4烷基、C5-6雜芳基C0-4烷基、C3-8環(huán)烷基C0-4烷基、C3-8雜環(huán)烷基C0-4烷基和C1-10烷基的基團取代；其中R1或R1取代基的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可以任選被1-5個基團取代，所述基團獨立地選自鹵素、C1-10烷基、C1-10烷氧基、鹵素-取代的-C1-10烷基和鹵素-取代的-C1-10烷氧基；且R1的任意烷基可以任選具有被選自-S(O)0-2-、-NR3-和-O-的原子或基團替代的亞甲基；其中R3選自氫和C1-6烷基；R2選自鹵素、氰基、硝基、C1-6烷氧基和C1-6烷基；且式Ia和Ib的苯基環(huán)可以任選具有至多3個被氮替代的＝C-基團。2.權(quán)利要求l的化合物，其中A選自氰基、—X!C(0)0R3、一XiOP(0)(OR3)2、一XJ(0)(OR3)2、-X，P(0)OR3、一&S(0)20R3、-X^(0)(R3)OR3、-XiQO,^、XiC(0)NR3X，OR3、XC(0)NR3X,C(0)OR3、-XjCXO^C^COORs和l好-四喳-5-基；其中X,各自獨立地選自鍵、d-3亞烷基和C2_3亞烯基且R3各自獨立地選自氫和Cw烷基；其中R3和A的任意NR3&部分中X,的亞烷基氬可以形成環(huán)狀基團；n選自0和1;&選自C6.lfl芳基和Cwo雜芳基；其中的任意芳基或雜芳基任選被選自Cw。芳基C(m烷基、C5-6雜芳基C(m烷基、C3-8環(huán)烷基Co-4烷基、C3.8雜環(huán)烷基C(m烷基和Cwo烷基的基團取代；其中或仏取代基的任意芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基可以任選被l-5個基團取代，所述基團獨立地選自卣素、d-m烷基、Cwo烷氧基、卣素-取代的-Cwo烷基和鹵素-取代的-d-k)烷氧基；且&的任意烷基可以任選具有被選自-S(0)。-2-、一NR3一和—O一的原子或基團替代的亞曱基；其中R3選自氫和C^烷基；且R2選自鹵素和d-6烷基。3.權(quán)利要求2的化合物，其中A選自氰基、—COOH、—CH2C(0)OH、-(CH2)2C(0)OH、-C(0)NH2、-C(0)NH(CH2)2OH、-C(0)NH(CH2)3OH、-C(0)NH(CH2)2C(0)OH、-C(0)(CH2)2C(0)OH、3-羥基氮雜環(huán)丁烷-l-羰基和四喳基。4.權(quán)利要求3的化合物，其中Ri為任選被l-2個基團取代的苯基，所述基團獨立地選自囟素、甲基、三氟甲基、噻唑基和任選被囟素或甲基取代的苯基；且R2為鹵素。5.權(quán)利要求4的化合物，選自5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-甲酸；5-[2-氟-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡咬-2-曱酸；2-[4-(3'-曱基-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基]-lH-咪唑_4-甲酸；{5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基I-吡啶-3-基}-乙酸；5-4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-2-(111-四唑-5-基)-吡啶；5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酰胺；5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-lH-咪唑-2-甲酸；5-[4-(3'-曱基-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-2-氯-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜吡啶-2-曱酸；5-4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基l-煙酸；5-[2-氟-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜吡啶-2-甲酸；5-[2-氟-4-(4-瘞喳-2-基-3-三氟曱基-苯氧基甲基)-苯基-吡咬-2-甲酸；5-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基甲氧基)-苯基卜吡啶-2國曱酸；5-[4-(4國環(huán)己基-3-三氟甲基-苯氧基曱基)-2-氟-苯基卜吡啶-2-曱酸；5-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基I-吡啶-2-腈；5-[2-氯-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-1-氧基-吡啶-2-甲酸；4-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-他咬-2-曱酸；{6-[4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡淀-3-基}-乙酸；3-{5-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡啶-2-基}-丙酸；3-{5-[2-氯-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-基}-丙酸；5-[4-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-2-甲基-苯基-吡啶-2-甲酸;5-[3-氟-4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-曱酸；5-[3-氯-4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-甲酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-3-硝基-苯基-吡啶-2-曱酸；3-氟-5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-吡啶-2-甲酸；3-溴-5-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶-2-曱酸；5-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯氧基卜吡啶-2-曱酸；4-(4-辛氧基-苯基)-吡啶-2-甲酸；3-[4-(4-辛氧基-苯基)-吡啶-2-基l-丙酸；3-(5-{2-[4-(5-苯基-戊氧基)-苯基卜乙基}-吡啶-2-基)-丙酸；3-{4-[4-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡唑-1-基}-丙酸；{4-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡唑-1-基}-乙酸；{4-[4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-吡唑-1-基}-乙酸；{4-[2-氟-4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡唑-1-基}-乙酸;5-[4-(2，-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-噻唑-2-甲酸;5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-嗜啶-2-曱酸；5-[4-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡溱-2-曱酸；5-[3-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基]-吡啶-2-甲酸；4-[3-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基1-吡啶-2-甲酸；6-[3-(2'-氟-2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-甲酸；5-[3-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基-煙酸；{5-[3-(2'-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基卜吡啶-3-基}-乙酸；5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-甲酸(2-羥基-乙基)-酰胺；5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基-吡啶-2-甲酸(3-羥基-丙基)-酰胺；3-({5-[2-氟-4-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-苯基卜吡啶-2-羰基)-氨基)-丙酸；{5-[2-氟-4-(2-三氟曱基-聯(lián)苯-4-基氧基曱基)-苯基l-p比咬-2-基}-(3-羥基-氮雜環(huán)丁烷-1-基)-甲酮；5-[2-(2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基)-苯并噁唑-6-基j-吡咬-2-甲酸；和4-[5-(2，-氟-2-三氟甲基-聯(lián)苯-4-基氧基甲基)-P引哚畫l-基卜4畫氧代-丁酸。6.藥物組合物，包含治療有效量的權(quán)利要求l的化合物與藥學上可接受的賦形劑。7.治療動物疾病的方法，其中EDG/S1P受體介導的信號轉(zhuǎn)導改變可以預防、抑制或改善疾病的病理學和/或癥狀學，該方法包括對所述動物施用治療有效量的權(quán)利要求1的化合物。8.在對象中預防或治療淋巴細胞介導的病癥或疾病、治療急性或慢性移植物排斥或T-細胞介導的炎癥或自身免疫疾病、抑制或控制失調(diào)的血管發(fā)生或治療由新血管生成過程介導或與失調(diào)的血管生成相關的疾病的方法，包括對有需要的對象施用有效量的權(quán)利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽。9.權(quán)利要求1的化合物在制備用于治療其中EDG/S1P受體介導的信號轉(zhuǎn)導的改變促進疾病的病理學和/或癥狀學的動物疾病的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及免疫抑制劑、其制備方法、其用途和包含它們的藥物組合物。本發(fā)明提供了一類新的可用于治療或預防由淋巴細胞相互作用介導的疾病或病癥、特別是與EDG受體介導的信號轉(zhuǎn)導相關疾病的化合物。本申請涉及選自式(Ia)、(Ib)、(Ic)和(Id)的化合物。文檔編號C07D213/55GK101291908SQ200680038745公開日2008年10月22日申請日期2006年8月22日優(yōu)先權(quán)日2005年8月23日發(fā)明者J·江,N·S·格雷,S·潘,W·高,Y·萬,毅范申請人:Irm責任有限公司