專利名稱：：薁類化合物的膽堿鹽結(jié)晶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及(1S)-1，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(以下也稱為"奠類化合物A"或簡稱"化合物A")的膽堿鹽、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶，更具體涉及可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶、能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給、保存穩(wěn)定性良好的奠類化合物A的膽堿鹽、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶以及含有它們作為有效成分的作為糖尿病治療劑特別有用的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明人報(bào)道了，以下述化學(xué)結(jié)構(gòu)式表示的(lS)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(奠類化合物A)是可用作醫(yī)藥品、特別是化+-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制劑，例如可用于包括胰島素依賴性糖尿病(I型糖尿病)、非胰島素依賴性糖尿病(n型糖尿病)等糖尿病以及胰島素抗性疾病和肥胖等各種糖尿病相關(guān)疾病的治療以及它們的預(yù)防(參照國際公開第2004/013118號文本(以下稱為專利文獻(xiàn)1):實(shí)施例75)。發(fā)明的揭示上述專利文獻(xiàn)1中雖然記載了奠類化合物A的游離體，但對化合物A的鹽沒有具體記載，因此首先對專利文獻(xiàn)1中記載的化合物A的游離體進(jìn)行了認(rèn)真研究，結(jié)果確認(rèn)存在2種水合物結(jié)晶和5種無水物結(jié)晶。此外，發(fā)現(xiàn)化合物A的游離體的晶形有多種，而且技術(shù)上難以在原料藥的制造工藝中以良好的再現(xiàn)性獲得作為目標(biāo)的單一結(jié)晶。因此，了解到技術(shù)上也難以穩(wěn)定地提供具有一定品質(zhì)
背景技術(shù)：
的原料藥的結(jié)晶，穩(wěn)定地供給該結(jié)晶在成本上也是非常困難的。因此，存在將化合物A的游離體用作醫(yī)藥制造中的原料藥實(shí)際上不可能的問題。接著，對通常被用作醫(yī)藥品或原料藥的Na鹽結(jié)晶、K鹽結(jié)晶、Li鹽結(jié)晶、Ca鹽結(jié)晶進(jìn)行了認(rèn)真研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Na鹽結(jié)晶、K鹽結(jié)晶、Li鹽結(jié)晶分別具有自低溫起揮發(fā)成分就脫離而發(fā)生變化的形態(tài)，因此穩(wěn)定地供給具有一定品質(zhì)的原料藥是非常困難的。此外，發(fā)現(xiàn)l/2Ca鹽的結(jié)晶僅可以二甲基甲酰胺(DMF)合物獲得，因此無法避免腿F產(chǎn)生的毒性的問題。本發(fā)明是為了解決上述問題而完成的，其目的在于提供可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶、能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給且以合理的制造成本供給的可能性高、保存穩(wěn)定性良好的奠類化合物A的結(jié)晶°為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明人對通常未被用作醫(yī)藥品的膽堿[(CH3)3N+CH2CH20H]鹽進(jìn)行了認(rèn)真研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用化合物A的膽堿鹽的情況下，可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶，能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給，保存穩(wěn)定性良好，同時(shí)發(fā)現(xiàn)化合物A的膽堿鹽通過以高濕度處理生成新的化合物A的膽堿鹽的水合物結(jié)晶，該水合物結(jié)晶也可被有效地用作醫(yī)藥品的原料藥，從而完成了本發(fā)明。即，為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下的奠類化合物A的膽堿鹽、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶以及含有它們作為有效成分的作為糖尿病治療劑特別合適的醫(yī)藥組合物。[1](lS)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽。[2]差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194198T:具有吸熱峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(萸-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶。[3]粉末X射線衍射中在2e(°)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶。[4]差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194198'C具有吸熱峰，且粉末X射線衍射中在20(。)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰的(lS)-l，5-脫水-1-[5-(奧-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)曰曰曰o[5]差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中，在78'C附近具有寬的吸熱峰，在195199X:具有吸熱峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶。[6]粉末X射線衍射中在2e(°)5.66、17.08、17.66、19.02、19.58和22.14附近具有主峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶。[7]差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中，在78"C附近具有寬的吸熱峰，在195199。C具有吸熱峰，且粉末X射線衍射中在20(°)5.66、17.08、17.66、19.02、19.58和22.14附近具有主峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶。[8]含有前述[1]所述的膽堿鹽、前述[2][4]中的任一項(xiàng)所述的膽堿鹽結(jié)晶或前述[5][7]中的任一項(xiàng)所述的膽堿鹽水合物結(jié)晶作為有效成分的醫(yī)藥組合物。[9]還含有制藥學(xué)所允許的載體的前述[8]所述的醫(yī)藥組合物。[10]作為糖尿病治療劑的前述[8]或[9]所述的醫(yī)藥組合物。通過本發(fā)明，可以提供可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶，能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給，保存穩(wěn)定性良好的奠類化合物A的膽堿鹽、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶以及含有它們作為有效成分的作為糖尿病治療劑特別合適的醫(yī)藥組合物。附圖的簡單說明圖1為[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨](奠類化合物A的膽堿鹽)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖2為[4-(奠-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨](萸類化合物A的膽堿鹽)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖3為[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨的水合物](奠類化合物A的膽堿鹽水合物)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖4為[4-(萸-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨的水合物](奠類化合物A的膽堿鹽水合物)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖5為[4-(奧-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚鈉](奠類化合物A的鈉鹽)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖6為[4-(奠-2-基甲基)-D-吡喃葡糖基苯酚鈉](萸類化合物A的鈉鹽)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖7為[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鉀](奠類化合物A的鉀鹽)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖8為[4-(奠-2-基甲基)-2-0-D-吡喃葡糖基苯酚鉀](奠類化合物A的鉀鹽)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖9為[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鋰](奧類化合物A的鋰鹽)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖10為[4-(奠-2-基甲基)-2-0-D-吡喃葡糖基苯酚鋰](奠類化合物A的鋰鹽)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖11為[4-(奠-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚半鈣](奠類化合物A的1/2鈣鹽)的結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖12為[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚半鈣](奠類化合物A的1/2鈣鹽)的結(jié)晶的粉末X射線衍射圖。圖13為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-l](奧類化合物A的水合物結(jié)晶-l)的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖14為[(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-l](奠類化合物A的水合物結(jié)晶-l)的粉末X射線衍射圖。圖15為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-2](奠類化合物A的水合物結(jié)晶-2)的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖16為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-2](萸類化合物A的水合物結(jié)晶-2)的粉末X射線衍射圖。圖17為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-l](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-l)的粉末X射線衍射(升溫粉末X射線)圖。圖18為[(lS)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-2](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-2)的粉末X射線衍射(升溫粉末X射線)圖。圖19為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-3](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-3)的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖20為[(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-3](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-3)的粉末X射線衍射圖。圖21為[(lS)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-4](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-4)的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖22為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-4](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-4)的粉末X射線衍射圖。圖23為[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-5](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-5)的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)。圖24為[(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-5](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-5)的粉末X射線衍射圖。實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下，對用于實(shí)施本發(fā)明的最佳方式進(jìn)行具體說明。本發(fā)明的奠類化合物A((1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇)的膽堿鹽、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶(以下也稱為"本發(fā)明結(jié)晶")具有以下所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。此外，本發(fā)明結(jié)晶如上所述與萸類化合物A的游離體的2種水合物結(jié)晶及5種無水物結(jié)晶、Na鹽結(jié)晶、K鹽結(jié)晶、Li鹽結(jié)晶、Ca鹽結(jié)晶不同，可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶，能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給，保存穩(wěn)定性良好。它們的晶形的差異可特別通過差示掃描量熱儀分析(DSC分析)和粉末X射線衍射區(qū)分。另外，"本發(fā)明結(jié)晶"表示除上述的膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶之外，還包括膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶的混合物、膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶的混晶的概念。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>即，本發(fā)明結(jié)晶中，膽堿鹽結(jié)晶于差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194198。C具有吸熱峰，且/或粉末X射線衍射中在2e(°)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰，膽堿鹽水合物結(jié)晶于差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中，在78。C附近具有寬的吸熱峰，在195199。C具有吸熱峰，且/或粉末X射線衍射中在2e(°)5.66、17.08、17.66、19.02、19.58和22.14附近具有主峰。本發(fā)明結(jié)晶中，膽堿鹽結(jié)晶和膽堿鹽水合物結(jié)晶分別具有作為特征的示于表1和表2的粉末X射線衍射圖譜中的衍射角(29(°))和相對強(qiáng)度。另外，粉末X射線衍射從數(shù)據(jù)的性質(zhì)上在結(jié)晶的同一性認(rèn)定中晶格距離和整體的晶格結(jié)構(gòu)是重要的，相對強(qiáng)度根據(jù)結(jié)晶生長的方向、粒子的大小、測定條件稍有變化，所以不應(yīng)解釋為嚴(yán)格符合。[表l]<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>[粉末X射線衍射]和[差示掃描量熱儀分析(DSC分析)]分別通過以下的條件進(jìn)行測定。(粉末X射線衍射)使用[MAC科學(xué)(MACScience)MXP18TAHF22]，以管球Cu、管電流40mA、管電壓40或200kV、采樣間隔O.020°、掃描速度3。/分鐘、波長1.54056A、測定衍射角范圍(2e):3或54(T的條件進(jìn)行測定。(差示掃描量熱儀分析(DSC分析))使用[TA儀器(TAInstrument)TA5000]，以室溫300。C(10。C/分鐘)、N2(50ml/分鐘)、鋁制樣品盤的條件進(jìn)行測定。(制造方法)本發(fā)明結(jié)晶可以由專利文獻(xiàn)1的實(shí)施例75中所記載的奠類化合物A的游離體通過常規(guī)的成鹽反應(yīng)來制造。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物含有上述的本發(fā)明結(jié)晶作為有效成分，還含有制藥學(xué)允許的載體，用作糖尿病治療劑特別有用。含有1種或2種以上的本發(fā)明結(jié)晶作為有效成分的醫(yī)藥組合物使用通常所使用的制劑用的載體或賦形劑、其它添加劑，制成片劑、散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、液劑、注射劑、栓劑、軟膏、貼附劑等，以口服或非口服的方式給藥。本發(fā)明結(jié)晶對人的臨床給藥量考慮所適用的患者的癥狀、體重、年齡和性別等適當(dāng)決定，通常成人每天在口服的情況下為O.lmg500mg，在口服的情況下為0.01mg100mg，將其l次或分?jǐn)?shù)次給予。給藥量根據(jù)各種條件而變化，所以有些情況下比上述給藥量范圍少的量就足夠。作為本發(fā)明結(jié)晶的用于口服的固體組合物，可以使用片劑、散劑、顆粒劑等。這樣的固體組合物中，一種以上的活性物質(zhì)與至少一種惰性的稀釋劑混合，所述稀釋劑有例如乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯垸酮、硅酸鋁鎂等。組合物可以按照常規(guī)方法含有除惰性的稀釋劑以外的添加劑，例如硬脂酸鎂等潤滑劑、纖維素乙醇酸鈣等崩解劑、乳糖等穩(wěn)定劑、谷氨酸或天門冬氨酸等增溶劑或溶解助劑。片劑或丸劑可以根據(jù)需要以蔗糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等的糖衣或者胃溶性或腸溶性物質(zhì)的膜進(jìn)行被膜。用于口服的液體組合物包括藥劑可接受的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、酏劑等，含有常用的惰性的稀釋劑，例如精制水、乙醇。該組合物除了惰性的稀釋劑之外，還可以含有增溶劑、溶解助劑、濕潤劑、懸浮劑等助劑和甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑。作為用于非口服給藥的注射劑，包括無菌的水性或非水性的溶液劑、懸浮劑、乳劑。作為水性的溶液劑、懸浮劑的稀釋劑，例如包括注射用蒸餾水和生理鹽水。作為非水性的溶液劑、懸浮劑的稀釋劑，例如有丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物油，乙醇等醇類，吐溫80(商品名)等。這樣的組合物還可以含有等滲劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑(例如乳糖)、增溶劑或溶解助劑等添加劑。它們用例如通過細(xì)菌濾器的過濾、殺菌劑的摻入或照射而被無菌化。此外，它們也可以制造成無菌的固體組合物，使用前溶解于無菌水或無菌的注射用溶劑后使用。實(shí)施例以下，通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體說明，但這些實(shí)施例并不限定本發(fā)明的范圍。(實(shí)施例l)[4-(奠-2-基甲基)-2-3-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨](奠類化合物A的膽堿鹽)的結(jié)晶于氬氣氣氛下，在(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(1.Og)的甲醇(10mL)溶液中加入膽堿(50%水溶液)(0.6mL)，在室溫下攪拌。減壓下餾去溶劑，再加入甲苯共沸后，減壓干燥。向殘?jiān)尤胍掖?20mL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用乙醇洗滌后，減壓下于5(TC干燥。向得到的固體(l.15g)加入乙醇(46mL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用乙醇洗滌后，減壓下于5(TC干燥，得到4-(奠-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨(1.02g)。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖1，粉末X射線衍射圖示于圖2。(實(shí)施例2)[4-(奠-2-基甲基)--0-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨的水合物](奠類化合物A的膽堿鹽水合物)的結(jié)晶通過將4-(奠-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨(膽堿鹽)(1.00g)在25"的溫度下保存在用硝酸鉀調(diào)濕了的相對濕度93X的干燥器內(nèi)l周，從而得到4-(萸-2-基甲基)-2-P-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨的水合物結(jié)晶(膽堿鹽水合物)(1.04g)。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖3，粉末X射線衍射圖示于圖4。(比較例l)[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鈉](奠類化合物A的鈉鹽)的結(jié)晶向(lS)-l，5-脫水-l-[5-(萸-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(991mg)加入乙醇(10mL)和甲醇(10mL)。加入1M氫氧化鈉水溶液(2.5mL)，在室溫下攪拌。減壓下餾去溶劑，再加入甲苯共沸。將得到的固體在減壓下于55'C干燥。向該固體(360mg)加入2-丙醇水=5:1(7.2mL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用2-丙醇水=5:1洗滌后，減壓下于45'C干燥，得到4-(奠-2-基甲基)-2-0-D-吡喃葡糖基苯酚鈉(193mg)。得到的結(jié)晶由于是自低溫起揮發(fā)成分就脫離而發(fā)生變化的形態(tài)，因此穩(wěn)定地供給具有一定品質(zhì)的制品是非常困難的。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖5，粉末X射線衍射圖示于圖6。(比較例2)[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鉀](奠類化合物A的鉀鹽)的結(jié)晶通過與比較例l同樣的方法，用1M氫氧化鉀水溶液代替1M氫氧化鈉水溶液，得到4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鉀。得到的結(jié)晶由于是自低溫起揮發(fā)成分就脫離而發(fā)生變化的形態(tài)，因此穩(wěn)定地供給具有一定品質(zhì)的制品是非常困難的。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖7，粉末X射線衍射圖示于圖8。(比較例3)[4-(奠-2-基甲基)-2-0-D-吡喃葡糖基苯酚鋰](奠類化合物A的鋰鹽)的結(jié)晶通過與比較例l同樣的方法，用1M氫氧化鋰水溶液代替1M氫氧化鈉水溶液，得到4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚鋰。得到的結(jié)晶由于是自低溫起揮發(fā)成分就脫離而發(fā)生變化的形態(tài)，因此穩(wěn)定地供給具有一定品質(zhì)的制品是非常困難的。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖9，粉末X射線衍射圖示于圖io。(比較例4)[4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚半鈣](奠類化合物A的l/2鈣鹽)的結(jié)晶向(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(850mg)加入甲醇(3.5mL)、1M氫氧化鈉水溶液(2.15mL)，在室溫下攪拌。減壓下餾去溶劑，將殘?jiān)芙庥谒?15mL)。加入將氯化鈣(477rag)溶解于水(2.5mL)而得的溶液，在室溫下攪拌。濾取析出的固體，用水、2-丙醇洗滌。將得到的固體在減壓下干燥。向該固體加入四氫呋喃，濾去不溶物，將濾液濃縮而得的固體在減壓下加熱干燥。向該固體(200mg)加入二甲基甲酰胺(DMF)(l.OmL)、水(2.OmL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用水洗滌后，減壓下于6(TC干燥，得到4-(奠-2-基甲基)-2-3-D-吡喃葡糖基苯酚半鈣(65mg)。結(jié)晶僅以DMF合物獲得，無法避免匿F產(chǎn)生的毒性的問題。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖ll，粉末X射線衍射圖示于圖12。(比較例5)[(1S)-l，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-l](奠類化合物A的水合物結(jié)晶-1)向(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(300mg)加入2-丙醇水=1:2(7.5raL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用2-丙醇水=1:2洗滌后，減壓下于45"干燥，得到(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-1(222mg)。得到的結(jié)晶表現(xiàn)出通過加熱或減壓干燥脫水而轉(zhuǎn)化為奠類化合物A的無水物結(jié)晶-3的性質(zhì)，但其間經(jīng)由的向奠類化合物A的無水物結(jié)晶-1、奠類化合物A的無水物結(jié)晶-2的轉(zhuǎn)化方式在各批間不同，無法獲得重結(jié)晶中的再現(xiàn)性。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖13，粉末X射線衍射圖示于圖14。(比較例6)[(1S)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-2](萸類化合物A的水合物結(jié)晶-2)向(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(500mg)加入乙醇(2.0mL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用乙醇洗滌后，減壓下于45'C干燥，得到(lS)-l,5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]_0-葡糖醇的水合物結(jié)晶-2(122mg)。該結(jié)晶在重結(jié)晶中僅獲得1批，無法再現(xiàn)。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖15，粉末X射線衍射圖示于圖16。(比較例7)[(1S)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-1](奧類化合物A的無水物結(jié)晶-1)將比較例5中得到的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-1在差示掃描量熱儀分析裝置(DSC分析裝置)中填充于專用的鋁制樣品盤，在氮?dú)鈿夥障乱詌(TC/分鐘的升溫速度加熱時(shí)，在約10(TC確認(rèn)(lS)-l，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-l的生成。此外，將比較例5中得到的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-1在升溫粉末X射線衍射裝置中填充于專用的銅制試樣板，氮?dú)鈿夥障略?0(TC的粉末X射線衍射測定中確認(rèn)(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-l的生成。該結(jié)晶在奠類化合物A的水合物結(jié)晶-l的加熱處理中生成，但它是僅在高溫下穩(wěn)定存在的晶形，在室溫下無法分離。該結(jié)晶的粉末X射線衍射(升溫粉末X射線)圖示于圖17。(比較例8)[(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-2](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-2)將比較例5中得到的(IS)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-1在DSC裝置中填充于專用的鋁制樣品盤，在氮?dú)鈿夥障乱詌(TC/分鐘的升溫速度加熱時(shí)，在約14(TC確認(rèn)(lS)-l,5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-2的生成。此外，將比較例5中得到的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-l在升溫粉末X射線衍射裝置中填充于專用的銅制試樣板，氮?dú)鈿夥障略趌40'C的粉末X射線衍射測定中確認(rèn)(lS)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-2的生成。該結(jié)晶在奠類化合物A的水合物結(jié)晶-l的加熱處理中生成，但它是僅在高溫下穩(wěn)定存在的晶形，在室溫下無法分離。該結(jié)晶的粉末X射線衍射(升溫粉末X射線)圖示于圖18。(比較例9)[(1S)-l,5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-3](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-3)將比較例5中得到的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-1在差示掃描量熱儀分析裝置(DSC分析裝置)中填充于專用的鋁制樣品盤，在氮?dú)鈿夥障乱?(TC/分鐘的升溫速度加熱至15CTC,得到(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-3。該結(jié)晶僅在奠類化合物A的水合物結(jié)晶-1的加熱處理中生成，無法由重結(jié)晶獲得。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖19，粉末X射線衍射圖示于圖20。(比較例IO)[(1S)-l，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-4](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-4)將比較例6中得到的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的水合物結(jié)晶-2在差示掃描量熱儀分析裝置(DSC分析裝置)中填充于專用的鋁制樣品盤，在氮?dú)鈿夥障乱?(TC/分鐘的升溫速度加熱至185"C,得到(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-4。該結(jié)晶僅在奠類化合物A的水合物結(jié)晶-2的加熱處理中生成，無法由重結(jié)晶獲得。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖21，粉末X射線衍射圖示于圖22。(比較例ll)[(1S)-1，5-脫水-1-[5-(萸-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-5](奠類化合物A的無水物結(jié)晶-5)向(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇(300mg)加入乙腈(3.0mL)，加熱攪拌至完全溶解。將該混合物放冷至室溫，濾取析出的結(jié)晶，用乙腈洗滌后，減壓下于45。C干燥，得到(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的無水物結(jié)晶-5(101mg)。該結(jié)晶在重結(jié)晶中僅獲得1批，無法再現(xiàn)。另外，差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中確認(rèn)2個(gè)吸熱峰，所以可能無法作為單一結(jié)晶獲得。該結(jié)晶的差示掃描量熱儀分析圖(DSC分析圖)示于圖23，粉末X射線衍射圖示于圖24。(保存穩(wěn)定性試驗(yàn))將4-(奠-2-基甲基)-2-p-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨(46g)裝入聚乙烯袋并用珠帶封閉，再裝入加入了硅膠(12g)的聚乙烯袋并用珠帶封閉，將其裝入金屬罐并密封，在遮光處于溫度4(TC、相對濕度75%的條件下保存6個(gè)月。另外，將4-(萸-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨(10g)裝入開放的褐色容器內(nèi)，在遮光處于溫度4CTC、相對濕度75Q/^的條件下保存6個(gè)月。其結(jié)果示于表3。[表3]<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注*上述的保存條件下確'認(rèn)保存開始后立即轉(zhuǎn)變?yōu)樗衔?。由?可知，在任意保存條件下類緣物質(zhì)的量和定量值都沒有變化，因此4-(奠-2-基甲基)-2-e-D-吡喃葡糖基苯酚(2-羥基乙基)三甲基銨的無水物和水合物都是穩(wěn)定的化合物。由以上的實(shí)施例、比較例的結(jié)果可知，首先奠類化合物A和通常被用作醫(yī)藥品的鈉、鉀、鋰或鈣的與堿類的鹽為在低溫下?lián)]發(fā)性成分也會(huì)脫離而發(fā)生變化的形態(tài)，1/2Ca鹽結(jié)晶的情況下僅能以腿F合物的形式存在，因此存在無法避免匿F產(chǎn)生的毒性的問題，無法使用這些結(jié)晶進(jìn)行作為醫(yī)藥品的制品化。此外，奠類化合物A的游離體存在包括水合物結(jié)晶-1、水合物結(jié)晶-2、無水物結(jié)晶-1、無水物結(jié)晶-2、無水物結(jié)晶-3、無水物結(jié)晶-4和無水物結(jié)晶-5的共計(jì)7種晶形。而且，各結(jié)晶具有轉(zhuǎn)化為其他結(jié)晶的性質(zhì)，或者在重結(jié)晶操作中難以再現(xiàn)，或者僅在高溫下穩(wěn)定存在而無法在室溫下分離，或者僅在加熱處理中生成。而且，這些結(jié)晶存在于規(guī)定的條件、例如特定的條件下可獲得或無法獲得結(jié)晶的缺點(diǎn)，無法控制結(jié)晶多形的生成而獲得單一的結(jié)晶。因此，確認(rèn)奠類化合物A的游離體的結(jié)晶無法作為醫(yī)藥品制品化。另一方面，與上述各種鹽的結(jié)晶和游離體的各種結(jié)晶不同，本發(fā)明結(jié)晶可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶，能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給，保存穩(wěn)牽性良好，由此可以首次實(shí)現(xiàn)作為醫(yī)藥品的制品化。(藥理試驗(yàn))[人化+-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體(人301^2)活性抑制作用確認(rèn)試驗(yàn)]1)人SGLT2表達(dá)載體的制作首先，使用SuperscriptII(吉伯科公司(Gibco社)制)和隨機(jī)六聚物，由來源于人腎臟的全RNA(克隆泰克公司(Clontech社)帝ij)逆轉(zhuǎn)錄l條cDNA鏈。接著，將其作為模板，通過采用PyrobestDNA聚合酶(寶生物工程公司(Takara社)制)的PCR反應(yīng)擴(kuò)增編碼人SGLT2(WellsR.G.等，Am.J.Physiol.，1992，263(3)F459)的DNA片段(使用在該DNA片段的5，端引入了HindlII位點(diǎn)、3'側(cè)引入EcoRI位點(diǎn)的引物)。將擴(kuò)增了的片段用TopoTA克隆試劑盒(英杰公司(Invitrogen社)帝lj)克隆至pCR2.l-Topo載體，導(dǎo)入大腸桿菌JM109株的感受態(tài)細(xì)胞中，將表現(xiàn)出氨芐青霉素抗性的克隆在含氨芐青霉素(100mg/L)的LB培養(yǎng)基進(jìn)行增殖。由增殖了的大腸桿菌通過Hanahan的方法(參照Maniatis等，分子克隆)純化質(zhì)粒，將該質(zhì)粒用HindIII、EcoRI消化，將所得的編碼人SGLT2的DNA片段使用T4DNA連接酶(羅氏診斷公司(RocheDiagnostics社)帝lj)連接到表達(dá)載體pcDNA3.l(英杰公司(Invitrogen社)制)的相同位點(diǎn)，進(jìn)行克隆。將連接了的克條與上述同樣地導(dǎo)入大腸桿菌JM109株的感受態(tài)細(xì)胞中，使其在含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中增殖，通過Hanahan的方法獲得人SGLT2表達(dá)載體。2)人SGLT2穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞的制作將人SGLT2表達(dá)載體用Lipofectamine2000(吉伯科公司(Gibco社)制)導(dǎo)入CH0-Kl細(xì)胞?；?qū)牒螅瑢⒓?xì)胞在含青霉素(50IU/mL，大日本制藥株式會(huì)社(大日本製薬社)制)、鏈霉素(50!xg/mL，大日本制藥株式會(huì)社(大日本製薬社)制)、遺傳霉素(40ug/mL，吉伯科公司(Gibco社)制)和10X牛胎血清的Ham，sF12培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社(日水製薬社)制)以37°。、5%(:02的條件培養(yǎng)2周左右，得到遺傳霉素抗性的克隆。從這些克隆中以相對于正常水平的鈉存在下的糖攝入的比活性為指標(biāo)篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)人SGLT2的細(xì)胞(糖攝入的測定方法的具體內(nèi)容參照以下的段落)。3)甲基-a-D-吡喃葡糖苷攝入抑制活性的測定除去人SGLT2穩(wěn)定表達(dá)CH0細(xì)胞的培養(yǎng)基，每孔加入100uL預(yù)處理用緩沖液(含140mM氯化膽堿、2raM氯化鉀，lmM氯化鈣、lraM氯化鎂、10mM2-[4-(2-羥基乙基)-l-哌嗪基]乙磺酸、5mM三(羥甲基)氨基甲垸的緩沖液，pH7.4)，在37。C靜置20分鐘。在1000uL含試驗(yàn)結(jié)晶的攝入用緩沖液(含140raM氯化鈉、2mM氯化鉀，lmM氯化,丐、lmM氯化鎂、10mM2-[4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸、5mM三(羥甲基)氨基甲烷的緩沖液，pH7.'4)中加入ll"L的甲基-a-D-(U-14C)吡喃葡糖苷(安法瑪西亞生物技術(shù)公司(AmershamPharmaciaBiotech社)制)混合，制成攝入用緩沖液。作為對照組，制成不含試驗(yàn)結(jié)晶的攝入用緩沖液。此外，作為不存在試驗(yàn)結(jié)晶和鈉的條件下的基礎(chǔ)攝入測定用，同樣地制成含有140mM的氯化膽堿代替氯化鈉的基礎(chǔ)攝入用緩沖液。除去預(yù)處理用緩沖液，每孔加入25nL攝入用緩沖液，在37"C靜置2小時(shí)。除去攝入用緩沖液，每孔加入200uL洗滌用緩沖液(含140mM氯化膽堿、2mM氯化鉀，lmM氯化鈣、lmM氯化鎂、10mM甲基-a-D-吡喃葡糖苷、10mM2-[4-(2-羥基乙基)-l-哌嗪基]乙磺酸、5mM三(羥甲基)氨基甲垸的緩沖液，pH7.4)，再迅速除去。再進(jìn)行l(wèi)次該洗滌操作，每孔加入25uL0.5%月桂基硫酸鈉，將細(xì)胞可溶化。向其中加入75uL的t,夕口、乂y^40(帕卡德公司(Packard社)制)，通過微孔板閃爍計(jì)數(shù)器T叩Count(帕卡德公司(Packard社)制)測量放射活性。將對照組的攝入量減去基礎(chǔ)攝入量所得的值作為100%，通過最小二乘法由濃度-抑制曲線算出攝入量的50X抑制濃度(IC5。值)。其結(jié)果為，實(shí)施例l中所示的奠類化合物A的膽堿鹽和實(shí)施例2中所示的奠類化合物A的膽堿鹽水合物顯示出與專利文獻(xiàn)1的表24中的實(shí)施例75所示的值(8.9nM)同等的值。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明結(jié)晶在保存穩(wěn)定性良好的同時(shí)，具有化+-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制作用和降血糖作用，因此可用作醫(yī)藥品、特別是糖尿病治療劑，例如可用于包括胰島素依賴性糖尿病(I型糖尿病)、非胰島素依賴性糖尿病(II型糖尿病)等糖尿病以及胰島素抗性疾病和肥胖的治療以及它們的預(yù)防。本發(fā)明結(jié)晶的良好的保存穩(wěn)定性以及顯著的Na+-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體抑制作用和降血糖作用通過如上所示的保存穩(wěn)定性試驗(yàn)和藥理試驗(yàn)得到確認(rèn)。權(quán)利要求1.(1S)-1，5-脫水-1-[5-(薁-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽。2.(1S)-1，5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶，其特征在于，差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194198t:具有吸熱峰。3.(lS)-l,5-脫水-l-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶，其特征在于，粉末X射線衍射中在20(°)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰。4.(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奧-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶，其特征在于，差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194198"C具有吸熱峰，且粉末X射線衍射中在2e(°)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰。5.(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶，其特征在于，差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中，在78"C附近具有寬的吸熱峰，在195199'C具有吸熱峰。6.(1S)-1，5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶，其特征在于，粉末X射線衍射中在29(°)5.66、17.08、17.66、19.02、19.58和22.14附近具有主峰。7.(1S)-1,5-脫水-1-[5-(奠-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽水合物結(jié)晶，其特征在于，差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中，在78"附近具有寬的吸熱峰，在195199。C具有吸熱峰，且粉末X射線衍射中在29(°)5.66、17.08、17.66、19.02、19.58和22.14附近具有主峰。8.醫(yī)藥組合物，'其特征在于，含有權(quán)利要求l所述的膽堿鹽、權(quán)利要求24中的任一項(xiàng)所述的膽堿鹽結(jié)晶或權(quán)利要求57中的任一項(xiàng)所述的膽堿鹽水合物結(jié)晶作為有效成分。9.如權(quán)利要求8所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，還含有制藥學(xué)所允許的載體。10.如權(quán)利要求8或9所述的醫(yī)藥組合物，其特征在于，所述組合物為糖尿病治療劑。全文摘要通過制成差示掃描量熱儀分析(DSC分析)中在194～198℃具有吸熱峰，且粉末X射線衍射中在2θ(°)5.58、14.72、16.80、17.82、21.02和22.46附近具有主峰的(1S)-1，5-脫水-1-[5-(薁-2-基甲基)-2-羥基苯基]-D-葡糖醇的膽堿鹽結(jié)晶，能夠提供可以良好的再現(xiàn)性獲得具有一定品質(zhì)的單一結(jié)晶、能夠作為用于醫(yī)藥制造的原料藥的結(jié)晶穩(wěn)定地供給且保存穩(wěn)定性良好的薁類化合物的結(jié)晶。文檔編號C07D309/00GK101218220SQ20068002466公開日2008年7月9日申請日期2006年7月6日優(yōu)先權(quán)日2005年7月7日發(fā)明者上林裕始,中村遙,中西慶太,今村雅一,富山泰,村上猛,栗村勇治,湯田真道,鈴木貴之,雨宮奈惠子申請人:安斯泰來制藥有限公司;壽制藥株式會(huì)社