專利名稱：血管病治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療受損的血管和心臟功能的方法和藥劑。本發(fā)明還 提供用于治療各種與血管功能障礙和心功能障礙相關(guān)的生理學(xué)和病理學(xué)表 現(xiàn)的方法和藥劑。
背景技術(shù)：
糖尿病血管并發(fā)癥具有破壞性，可以影響每一個(gè)主要器官。糖尿病患 者有更高的動(dòng)脈粥樣硬化、心血管、外周血管以及腦血管疾病發(fā)病率。血 管并發(fā)癥和血管病是大多數(shù)糖尿病人的死亡和發(fā)病的主要原因。很多因素導(dǎo)致在糖尿病患者中發(fā)生血管病，包括高血糖、高血壓、肥 胖和血脂異常。例如，增高的血糖水平(即高血糖)被認(rèn)為是微血管并發(fā)癥 (包括視網(wǎng)膜病變、腎病和神經(jīng)病)的主要原因，亦被認(rèn)為與過早和加速發(fā) 展的大血管并發(fā)癥(如心血管疾病及外周血管疾病)有關(guān)。增高的血糖水平 和氧化應(yīng)激作為糖尿病微環(huán)境的特征，都會(huì)加速晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE) 的形成。高血糖和AGE可引起內(nèi)皮的正常結(jié)構(gòu)和功能的變化(如損傷)， 并能導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙。此外，高血糖和AGE與各種血管并發(fā)癥(包括對(duì) 人體的微血管系統(tǒng)及大血管系統(tǒng)的損傷)相關(guān)。再者，高血糖和血脂異常 與內(nèi)膜中層厚度相關(guān)，內(nèi)膜中層厚度是公認(rèn)的心血管和腦血管疾病的標(biāo)記。糖尿病心血管并發(fā)癥是嚴(yán)重的，并且是該病發(fā)病率和死亡率的主要原 因。這些并發(fā)癥包括冠心病(CHD)、充血性心力衰竭、中風(fēng)、外周動(dòng)脈疾 病、心肌病、腎病、視網(wǎng)膜病變和神經(jīng)病。血管病在糖尿病患者中可以與其它并發(fā)癥(例如糖尿病腎病)一并發(fā) 生，糖尿性腎病是一種常見且通常很嚴(yán)重的病癥。心血管疾病是患有終末期腎病(ESRD)的糖尿病患者的主要死因(McMillan et al. (1990) BMJ 301:540-544; Hirschl et al. (1992) Am J KidneyDis. 20:564-568禾口 Rischen-Vos et al. (1992) Nephrol Dial Transplant 7:433-437.)。糖尿病患者有嚴(yán)重的充血性心力衰竭風(fēng)險(xiǎn)。若干因素促成糖尿病性心 肌病的高發(fā)病率，包括長期高血壓、慢性高血糖、嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈粥樣硬 化等。糖尿病患者與無糖尿病的患者相比較，中風(fēng)導(dǎo)致的死亡率增加接近 3倍(Stamler et al. (1993) Z)/fl6"e Care 16:434-444.)。此外，糖尿病會(huì)增加 嚴(yán)重頸動(dòng)脈粥樣硬化的可能性(Folsom et al. (1994) Stroke 16:434-444.及 O，Leary et al.(1992) Stroke 25:66-73.)。糖尿病患者患外周血管疾病(PVD)的發(fā)病率比無糖尿病的患者高大約 4倍(參見，例如H.E. Lebovitz, ed" Therapy for diabetes mellitus (3rd edition): pp.290-302.中的Gibbons (1998) Peripheral vascular disease)。夕卜周血管疾病 是由于動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致腿部動(dòng)脈，有時(shí)導(dǎo)致臂部動(dòng)脈變窄的病癥。它導(dǎo) 致下肢漬瘍、傷口愈合不良及抵御感染的能力降低。其原因包括延遲或阻 止將氧(局部缺血)、營養(yǎng)素和抗生素運(yùn)送到受感染的區(qū)域，以及免疫應(yīng)答 受損(參見前述Gibbons)。其它與糖尿病相關(guān)的病癥，如高血壓、肥胖和 血脂異常會(huì)進(jìn)一步增加糖尿病患者發(fā)生PVD的機(jī)會(huì)。目前以治療或減少糖尿病血管并發(fā)癥的進(jìn)展和嚴(yán)重性或以預(yù)防所述并 發(fā)癥的發(fā)生為目標(biāo)的治療策略運(yùn)用了多種方法，包括優(yōu)化血糖控制(通過 改變飲食和/或胰島素治療)、高血壓控制(包括施予血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE )抑制劑和血管緊張素受體阻滯劑(ARB)以降低高血壓)、降膽固醇 治療等。但是，所述療法并非普遍成功，而且往往在逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的 血管并發(fā)癥及病狀(例如，損傷)或在改善受影響血管、器官及組織的功能 方面是無效的。再者，由于例如人口老齡化，以及肥胖和靜坐式生活方式 在美國和全球人口中流行性增加等因素，全世界的糖尿病流行性都在增 加。因此，糖尿病是血管病的一個(gè)全球性的主要風(fēng)險(xiǎn)因素。因此，在所述 技術(shù)領(lǐng)域中有對(duì)治療糖尿病血管并發(fā)癥的方法的需求，也有對(duì)減少這些血 管并發(fā)癥的進(jìn)展和嚴(yán)重性的方法的需求，以及對(duì)預(yù)防這些并發(fā)癥的發(fā)生的 方法的需求。此外，在所述技術(shù)領(lǐng)域中對(duì)有效逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的血管并 發(fā)癥的方法和藥劑也有需求，包括逆轉(zhuǎn)病狀及對(duì)血管的損傷，并改善受與 糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥影響的血管、器官和組織的功能。本發(fā)明首次證實(shí)在糖尿病動(dòng)物模型中，對(duì)CTGF的特異性抑制既 能減輕血管功能障礙又能顯著地改善血管功能，從而可以滿足上述需要。 特別地，本發(fā)明證實(shí)在糖尿病動(dòng)物模型中施用抗CTGF抗體能有效地減輕 血管硬度、血管通透性、外滲(例如水腫)及血管鈣化。本發(fā)明的方法和藥 劑也可有效地逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的病狀及對(duì)血管的損傷。本發(fā)明還證實(shí)對(duì)CTGF的特異性抑制可改善心臟功能。特別地，本發(fā) 明證實(shí)施用抗CTGF抗體可顯著改善心臟功能，這通過以下參數(shù)的改善得 以證實(shí)心室舒張、心室收縮、舒張末壓、舒張末容積、射血分?jǐn)?shù)、動(dòng)脈 彈性、每搏輸出量和心輸出量。


圖1顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地提高心射血 分?jǐn)?shù)。圖2顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低左心室 舒張末壓。圖3顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地提高心肌收縮力。圖4顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地改善心室舒張。圖5顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕頸動(dòng)脈 軸向硬化。圖6顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕頸動(dòng)脈 周向硬化。圖7顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕和逆轉(zhuǎn) 與糖尿病相關(guān)的頸動(dòng)脈軸向硬化。圖8顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕和逆轉(zhuǎn) 與糖尿病相關(guān)的頸動(dòng)脈周向硬化。圖9顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地逆轉(zhuǎn)體內(nèi)軸 向拉伸率的降低。圖10顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地逆轉(zhuǎn)大動(dòng) 脈環(huán)張開角的增加。圖11顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕血管 外水腫。圖12顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低血管 通透性。圖13顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減少和逆 轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的血管通透性及血管外水腫。圖14顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地減輕血管 鈣化。圖15顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在糖尿病動(dòng)物模型中有效地減少心 臟重量。圖16顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低心臟 重量與體重的比率。圖17顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低血液 中低密度脂蛋白(LDL)水平。圖18顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低血液 中HbAlc水平。圖19顯示了本發(fā)明的方法和藥劑在哺乳動(dòng)物對(duì)象中有效地降低血液 中HbAlc水平。圖20顯示了在哺乳動(dòng)物對(duì)象中抗-CTGF抗體結(jié)合血管緊張素受體阻 滯劑(ARB)療法增加了血液中高密度脂蛋白(HDL)水平。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種用于減輕對(duì)象的血管功能障礙或改善血管功能的方 法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊U，從而減輕所述對(duì) 象的血管功能障礙或改善血管功能。在各實(shí)施方式中，所述對(duì)象是患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。在特定的實(shí)施方式中，血管功能可以是微血管功能或大血管功能，或 者與外周血管相關(guān)的血管功能。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法特別可用于降低內(nèi)皮功能障礙、治 療或減輕動(dòng)脈硬化特別是軸向、徑向或周向動(dòng)脈硬化、降低血管通透性、 降低外滲、減少內(nèi)膜中層增厚、或減少頸總動(dòng)脈內(nèi)膜中層增厚。特別地， 本發(fā)明的方法可用于減輕水腫或組織水腫。類似地，本發(fā)明的方法也可用 于減輕對(duì)血管功能的損傷或血管功能障礙；或減輕血管鈣化。 本發(fā)明的方法可特別用于治療與糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥。 所述方法的對(duì)象可以是哺乳動(dòng)物。特別地，所述對(duì)象可以是人。 用于本發(fā)明的方法中的抗CTGF劑可以例如是多肽、多核苷酸或小分 子。特別地，所述抗CTGF劑可以是與CTGF或其片段結(jié)合的抗體、反義 分子、siRNA、或小分子化合物。在特定的實(shí)施方式中，所述抗CTGF劑是針對(duì)CTGF或其片段的單克隆抗體。在其它特定的實(shí)施方式中，所述抗 CTGF劑是WO 2004/108764中描述的CLN-1或其片段。發(fā)明詳述應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于本申請(qǐng)中所描述的特定的方法、方案、細(xì)胞 系、測(cè)定和試劑，因?yàn)樗鼈兛梢园l(fā)生改變。也應(yīng)理解本申請(qǐng)所用術(shù)語意在 描述本發(fā)明的特定實(shí)施方式，而不是為了限制如權(quán)利要求書所示的本發(fā)明 的范圍。必須注意，除非上下文有清楚指示，否則本申請(qǐng)和權(quán)利要求書中所用 的單數(shù)形式"一種"和"所述"包括復(fù)數(shù)形式。因此，例如"一種片段" 包括了眾多這類片段， 一種"抗體"指一或多個(gè)抗體及本領(lǐng)域技術(shù)人員已 知的該抗體的等價(jià)物，等等。除非另有說明，本申請(qǐng)中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所 屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的相同含義。盡管與本申請(qǐng)中描述的方法 和材料類似或等價(jià)的任何方法和材料均可在實(shí)施和測(cè)試本發(fā)明中使用，但 是在本申請(qǐng)中描述的是優(yōu)選的方法、裝置和材料。本申請(qǐng)引用的所有出版 物以其全文引入本申請(qǐng)作為參考，其目的是描述和公開出版物中報(bào)道的可 用于本發(fā)明的方法、試劑和手段。本申請(qǐng)中的任何內(nèi)容均不應(yīng)被視為承認(rèn) 本發(fā)明不先于根據(jù)在先發(fā)明的這種公開。除非特別指明，本發(fā)明的實(shí)施將采用化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、 細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域中的常規(guī)方法。這些技術(shù)在文 獻(xiàn)中有充分解釋。參見，例如Gennaro， A.R.， ed. (1990) Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed" Mack Publishing Co.; Colowick, S. et al.， eds.， Methods In Enzymology, Academic Press, Inc.; Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.， 1986， Blackwell Scientific Publications); Maniatis， T. et al., eds. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Vols. I-III, Cold SpringHarbor Laboratory Press; Ausubel， F.M. et al.， eds. (1999) Short Protocols in Molecular Biology,她edition, John Wiley & Sons; Ream et al.， eds. (1998) Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, Academic Press); PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2nd ed. (Newton & Graham eds.， 1997, Springer Verlag)。本發(fā)明部分涉及一項(xiàng)發(fā)現(xiàn)，所述發(fā)現(xiàn)指結(jié)締組織生長因子(CTGF)在 心血管疾病，包括血管功能受損(即血管功能障礙)和心臟功能受損(即心 功能障礙)的特定方面，發(fā)揮關(guān)鍵作用。本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)CTGF的抑制在治療血管功能障礙和心功能障礙 的多個(gè)具體方面有意料不到的好處。本發(fā)明提供的數(shù)據(jù)證實(shí)，CTGF的抑 制減少了以前認(rèn)為與CTGF無關(guān)的各種心血管疾病的病狀。在某些方面， 本發(fā)明提供的證據(jù)表明，通過抑制CTGF提供了一種用以治療或預(yù)防血管 功能障礙和心功能障礙的特定的生理和病理狀況的治療方法。本發(fā)明提供用于減少、改善或逆轉(zhuǎn)對(duì)象中與多種不同的病理過程相關(guān) 的并發(fā)癥的方法和藥劑，所述多種不同的病理過程與受損的血管功能和受 損的心臟功能相關(guān)。在一些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是動(dòng)物，優(yōu)化地是哺乳 動(dòng)物，最優(yōu)化地是人。本發(fā)明還提供用于本發(fā)明的方法的藥劑。所述藥劑可包括小分子化合 物、肽和蛋白質(zhì)(包括抗體或其功能活性片段)、及多核苷酸(包括小干擾 核糖核酸(siRNA)、小RNA(miRNA)、核酶及反義序列)。(參見，例如 Zeng (2003) Proc Natl Acad Sd USA 100:9779-9784;及Kurreck (2003) Eur J Biochem 270:1628-1644.)菱微鵬勸虔受損的血管功能(例如，血管功能障礙)可由各種異常所導(dǎo)致，包括例 如血管系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和/或功能受到干擾或損傷。受損的血管功能與血管的 各種病變和損傷相關(guān)，造成有害的變化，并導(dǎo)致例如動(dòng)脈硬化、血管通透和血管鈣化。動(dòng)脈硬度包括例如血管膨脹性、順應(yīng)性和彈性模量等特性，并已被證明能很好地預(yù)測(cè)冠心病和心血管疾病死亡率(參見，例如O，Rourke et al (2002) Am J Hypertens 15:426-444; Boutouyrie et al (2002) Hypertension 39:10-15; Blacher et al (1999) Circulation 99:2434-2439)。 一般而言，動(dòng)脈 硬度增加可導(dǎo)致收縮壓增加、心室質(zhì)量增加及舒張期冠脈灌注降低。動(dòng)脈 硬度增加亦與下肢動(dòng)脈流量減少相關(guān)(參見，例如Suzuki et al (2001) Diabetes Care 24:2107-2114)。動(dòng)脈硬度增加(即動(dòng)脈硬化)與包括糖尿病和慢性腎病在內(nèi)的許多疾病 狀態(tài)相關(guān)，同時(shí)也是衰老過程的標(biāo)志。動(dòng)脈硬化在糖尿病或代謝綜合征患 者中特別受關(guān)注，在這些疾病中，動(dòng)脈硬化在所有年齡組一致出現(xiàn)。動(dòng)脈 硬化也是患心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增加的標(biāo)記，所述心血管疾病包括例如心肌梗 死、心力衰竭、總死亡率、中風(fēng)、癡呆和腎病。動(dòng)脈硬化與對(duì)血管和心臟的結(jié)構(gòu)和功能的有害作用相關(guān)。在動(dòng)脈中， 動(dòng)脈硬化影響機(jī)械性血管剌激的變化，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙及血管病。在心 臟中，動(dòng)脈硬化影響心室工作負(fù)荷、心臟射血效率及心臟本身的灌注。動(dòng)脈硬化的臨床替代終點(diǎn)標(biāo)記包括單純收縮期高血壓和脈壓增大。脈 壓差是收縮壓和舒張壓之間的差。動(dòng)脈硬化與脈壓增大相關(guān)。脈壓增大到 高于正常值指示存在動(dòng)脈硬化。脈搏波速度(PWV)測(cè)量也可評(píng)估動(dòng)脈硬 度(參見，例如Lehman etal (1992) Diabetic Med 9:114-119.)。脈搏波速度 是心室射血壓力波離開心臟沿動(dòng)脈前進(jìn)的速度。脈搏波沿動(dòng)脈前進(jìn)速度依 該動(dòng)脈的硬度而定。測(cè)量脈搏波速度通常在頸動(dòng)脈和股動(dòng)脈之間進(jìn)行。慢 波速表示動(dòng)脈有可塑性，而快波速表示動(dòng)脈硬化；因此，脈搏波速度越 高，血管擘的剛度和硬度越高而膨脹性越低(參見，例如Nichols and O，Rourke in McDonald's blood flow in arteries. Theoretical, experimental and clinical principles. Fourth Edition, London, Sydney, Auckland: Arnold E. 1998.)。這些方法及其它用于測(cè)定動(dòng)脈硬度的方法在本技術(shù)領(lǐng)域是眾所周知的并是本領(lǐng)域技術(shù)人員隨時(shí)可得到的。血管鈣化(包括冠狀動(dòng)脈f丐化、瓣膜l 化、主動(dòng)脈f丐化及動(dòng)脈鈣化)對(duì) 血管功能和心臟功能有直接影響。血管鈣化與大血管(例如主動(dòng)脈和頸總 動(dòng)脈)的壁的硬化和膨脹相關(guān)，并通過削弱血管的收縮和舒張而影響血管 功能。血管鈣化是冠狀動(dòng)脈疾病和血管病已確定的指標(biāo)，在心血管疾病 (包括血管功能受損和心臟功能受損)的發(fā)生和發(fā)病機(jī)制中占重要角色，因而與較高風(fēng)險(xiǎn)的心肌梗死和死亡相關(guān)(參見，例如Doherty et al (2004) Endocr Rev 25:629-627.)。血管鈣化在動(dòng)脈內(nèi)膜和動(dòng)脈中膜中均可發(fā)生。本發(fā)明提供可用于治療受損的血管功能的方法和藥劑。在各實(shí)施方式 中，本發(fā)明的方法和藥劑可用于治療受損的血管功能，其中所述受損的血 管功能是動(dòng)脈硬化、血管通透性、外滲及血管鈣化。在某些方面，本發(fā)明涉及用于在患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的 對(duì)象中減輕血管功能障礙和改善血管功能的方法。此外，本發(fā)明涉及用于 在患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中逆轉(zhuǎn)與糖尿病或升高的血糖 水平相關(guān)的血管并發(fā)癥、病狀或損傷的方法。在以下說明的各方法的優(yōu)選 實(shí)施方式中，優(yōu)選的對(duì)象是人。本發(fā)明提供了一種用于在患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中 減輕血管功能障礙的方法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗 CTGF齊U，從而減輕對(duì)象的血管功能障礙。術(shù)語"抗CTGF劑"在本申請(qǐng) 中是指任何抑制CTGF的表達(dá)或活性的藥劑。本發(fā)明亦提供了一種在患有 糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中改善血管功能的方法，所述方法包 括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而改善血管功能。本發(fā)明提供了一種用于在患有與糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥或具有患與 糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中逆轉(zhuǎn)血管并發(fā)癥、病狀或損傷的 方法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而逆轉(zhuǎn)所述 對(duì)象的血管并發(fā)癥、病狀或損傷。由于本申請(qǐng)所描述的有些方法涉及患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象，在判定所述對(duì)象是否患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，可以 使用本領(lǐng)域技述人員所接受和使用的任何方法。例如，血糖水平在約200mg/dL以上的人(通過例如空腹血糖試驗(yàn)、口服葡萄糖耐量試驗(yàn)或隨機(jī) 血糖試驗(yàn)確定)可被視為患有糖尿病的對(duì)象。因此，從某種意義上講，血 糖水平在約200mg/dL以上的人是適于用本發(fā)明所提供的方法或藥物的使 用進(jìn)行治療的對(duì)象?？梢酝ㄟ^評(píng)估一或多個(gè)已知與糖尿病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加有 關(guān)的因素鑒定具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象(例如具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的 人)，所述因素包括家族中有糖尿病的家族史、某些人種群或種族群體、 妊娠糖尿病病史、肥胖(尤其是高水平的內(nèi)臟或腹部脂肪)、靜坐式生活方 式、年齡、高血壓及精神分裂癥等，還包括葡萄糖代謝改變(包括葡萄糖 耐量降低(IGT)或糖尿病前期)。在本發(fā)明的方法的各實(shí)施方式中，所述血管功能障礙是微血管功能障 礙或大血管功能障礙。在某些實(shí)施方式中，所述功能障礙是心血管功能障 礙，或腦血管功能障礙，或與腎病、視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病相關(guān)的血管功能 障礙。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中，所述功能障礙是心室功能障礙，優(yōu)選左 心室功能障礙。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述功能障礙是外周血管功能障礙。本發(fā)明亦包括改善血管功能的方法。 一方面，本發(fā)明提供了用于在患 有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中改善血管功能的方法，所述方法 包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊U，從而改善所述對(duì)象的血管功 能。在本發(fā)明的各方面，所述血管功能是微血管功能或大血管功能。在某 些實(shí)施方式中，所述血管功能是心血管功能或腦血管功能，或是與腎病、 視網(wǎng)膜病變或神經(jīng)病相關(guān)的血管功能。在某方面^f述功能是心室功能，優(yōu) 選左心室功能。 一方面，所述血管功能與外周血管相關(guān)。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于在患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中 減輕內(nèi)皮功能障礙的方法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗 CTGF齊lj，從而減輕所述對(duì)象的內(nèi)皮功能障礙。本發(fā)明亦提供在患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中改善內(nèi)皮功能的方法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而改善內(nèi)皮功能。特別地，本發(fā)明 涉及逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮功能障礙的方法。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用于治療患有糖尿病或具有患 糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中與糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥的方法，所述方法包括 給所述對(duì)象施用抗CTGF劑，從而治療所述血管并發(fā)癥?？笴TGF劑是任 何抑制CTGF的活性和/或表達(dá)的藥劑。本發(fā)明亦提供了在患有糖尿病或 具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中減緩血管并發(fā)癥的進(jìn)程或減輕其嚴(yán)重性的方 法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊lj，從而減緩所述血 管并發(fā)癥的進(jìn)程或減輕其嚴(yán)重性。本發(fā)明進(jìn)一步提供預(yù)防或減慢患有糖尿 病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中的血管并發(fā)癥的發(fā)生的方法，所述方法 包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊)j，從而預(yù)防或減慢血管并發(fā)癥的 發(fā)生。在另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于逆轉(zhuǎn)患有與糖尿病有關(guān)的 血管并發(fā)癥、病狀或損傷的對(duì)象或具有患與糖尿病有關(guān)的血管并發(fā)癥、病 狀或損傷的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象中與糖尿病有關(guān)的血管并發(fā)癥、病狀或損傷的方 法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊ij，從而逆轉(zhuǎn)所述對(duì)象中與糖尿病有關(guān)的血管并發(fā)癥、病狀或損傷。在某些實(shí)施方式中，所述血管并發(fā)癥是大血管并發(fā)癥；在其它實(shí)施方 式中是微血管并發(fā)癥。在各實(shí)施方式中，所述并發(fā)癥選自心臟病、腎病、 神經(jīng)病及視網(wǎng)膜病變。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述并發(fā)癥是心血管并發(fā)癥或 腦血管并發(fā)癥。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述并發(fā)癥是外周血管并發(fā)癥。本發(fā)明還提供了用于治療動(dòng)脈硬化的方法，所述方法包括給患有糖尿 病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象施用有效量的抗CTGF齊U，從而治療動(dòng)脈 硬化。在各方面，所述動(dòng)脈硬化選自軸向、徑向和周向動(dòng)脈硬化。本發(fā)明 包括減少血管通透性、減少外滲(例如水腫或組織水腫)、減輕內(nèi)膜中層增 厚和減輕頸總動(dòng)脈內(nèi)膜中層增厚的方法。在每種情形中，所述方法包括給 患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而達(dá)到所述預(yù)期效果，例如分別為減少血管通透性、減少外滲(例如水腫或 組織水腫)、減輕內(nèi)膜中層增厚和減輕頸總動(dòng)脈內(nèi)膜中層增厚。一方面，本發(fā)明涉及用于減輕患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì) 象中的血管損傷或功能障礙的方法，所述方法包括給患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而減輕所述對(duì)象的血管 損傷或功能障礙。在各方面，所述血管可能是大血管系統(tǒng)中的血管，例如 主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈、頸動(dòng)脈、腦動(dòng)脈血管、腎動(dòng)脈、髂動(dòng)脈、股動(dòng)脈和膶 動(dòng)脈等主要血管；或可能是微血管系統(tǒng)中的血管，例如視網(wǎng)膜小動(dòng)脈、腎 小球小動(dòng)脈、神經(jīng)滋養(yǎng)血管、心臟小動(dòng)脈、以及與眼、腎、心臟以及中樞 和外周神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)的毛細(xì)血管床等的小血管。一方面，本發(fā)明提供了用于減少對(duì)象中的血管鈣化的方法，所述方法 包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而減少所述對(duì)象的血管鈣 化。在某種意義上，如在前述方法中一樣，所述對(duì)象是患有糖尿病或具有 患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物，在最優(yōu)選的實(shí)施方 式中，所述對(duì)象是人。在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是患有糖尿病或具有 患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。"、謝麟銜心臟功能受損(例如心功能障礙)及心臟病可來自各種異常，包括例如 心臟和心肌的收縮和/或舒張受到干擾或損害。從臨床角度來看，心臟功 能受損可視為任何心臟功能異常的狀態(tài)，所述狀態(tài)導(dǎo)致心臟泵血的速度不 能與組織代謝的要求相稱和/或必須以異常偏高的心室舒張期容積才能使 其相稱。心臟功能受損(例如心功能障礙、心力衰竭)可能是心臟收縮功能 障礙或心臟舒張功能障礙(又分別稱為收縮性心力衰竭和舒張性心力衰 竭)。在心臟收縮功能障礙中，主要的異常是心室不能正常收縮及排出充足的血液。心臟收縮功能障礙與心肌收縮力受損相關(guān)，心肌收縮力受損引起 心臟收縮減弱，因而導(dǎo)致每搏輸出量和心輸出量減少、心室排空不足、心 臟擴(kuò)大以及常見的心室舒張壓升高。成年人的心臟收縮功能障礙被定義為左心室射血分?jǐn)?shù)低于45%。在心臟舒張功能障礙中，主要的異常是心室不 能正常舒張和/或充盈。與舒張性心力衰竭相關(guān)的心室舒張和充盈受損會(huì) 導(dǎo)致在任何舒張期容積心室舒張壓都升高。許多心臟功能受損患者的心室 收縮和心室舒張都呈現(xiàn)異常。有數(shù)種技術(shù)可讓本領(lǐng)域技術(shù)人員得以在對(duì)象中鑒定、診斷或評(píng)估心臟 功能受損。 一般來說，這些技術(shù)包括例如心電圖、超聲心動(dòng)圖顯像、心導(dǎo) 管插入術(shù)、血管造影術(shù)、和心臟核成像技術(shù)(包括放射性核素血管顯像 術(shù))。在某些情況中，當(dāng)所述對(duì)象處于靜止且心室舒張末期壓正?；蛏?時(shí)，在存在心功能障礙或心力衰竭的情況下可能呈現(xiàn)心輸出量和每搏輸出 量降低。在許多情況中，心臟功能在靜止時(shí)可能足夠而在作用時(shí)不足。通常通過測(cè)定射血分?jǐn)?shù)評(píng)估心臟功能，即測(cè)定每次搏動(dòng)過程中心臟泵 血的分?jǐn)?shù)。射血分?jǐn)?shù)是每搏輸出量與舒張末期容積的比率，計(jì)算方法是從 心室射出的血液體積(稱為每搏輸出量，SV)除以心室充盈后的血液體積 (舒張末期容積，EDV)。成人對(duì)象射血分?jǐn)?shù)的正常值是50-70%。心臟損傷 會(huì)損害心臟有效射血的能力，因而降低射血分?jǐn)?shù)。射血分?jǐn)?shù)將低在臨床上 可表現(xiàn)為心功能障礙或心力衰竭。射血分?jǐn)?shù)是與心功能障礙相關(guān)的預(yù)后最 重要的預(yù)測(cè)指標(biāo)之一；典型地，射血分?jǐn)?shù)降低的對(duì)象預(yù)后不良。射血分?jǐn)?shù)通常以超聲心動(dòng)圖顯像進(jìn)行測(cè)量，其中在心動(dòng)周期中測(cè)量心 腔(例如心室)的容積。射血分?jǐn)?shù)也可以用心臟MRI、快速掃描心臟軸向 斷層掃描(CT)成像、心室造影術(shù)、門控SPECT、和放射性對(duì)照血管造影 術(shù)或放射性核素血管造影術(shù)來測(cè)量。正常左心室每搏射出其舒張末期容積的50-80%，即其射血分?jǐn)?shù)為 0.50至0.80。在成年人中，左心室容積正常值如下舒張末期容積是72士15mL/m、平均值士標(biāo)準(zhǔn)差)，收縮末期容積是20±8mL/m2。本發(fā)明還包括其他的方法，包括分別改善心臟功能、改善心室舒張、 增加心室收縮力、增加舒張末壓、增加舒張末期容積、提高射血分?jǐn)?shù)、提 高動(dòng)脈彈性、增加每搏輸出量及增加心輸出量的方法。這些方法中的每一 種都包括給患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象施用有效量的抗 CTGF齊l」，從而達(dá)到所期望的效果，例如分別在所述對(duì)象中改善心臟功 能、改善心室舒張、增加心室收縮力、增加舒張末壓、期舒張末期容積、 提高射血分?jǐn)?shù)、提高動(dòng)脈彈性、增加每搏輸出量及增加心輸出量。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用于治療或預(yù)防心臟并發(fā)癥的 方法，所述方法包括給對(duì)象施用抗CTGF齊lj，從而治療或預(yù)防心臟并發(fā) 癥。在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的 對(duì)象。所述方法尤其是可用于治療或預(yù)防選自于心臟肥大、充血性心力衰 竭和心肌病的心臟并發(fā)癥。本發(fā)明的方法也可以通過降低血液中LDL水 平而治療或預(yù)防心臟并發(fā)癥。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物，在最優(yōu)選的實(shí)施方 式中，所述對(duì)象是人。在某些實(shí)施方式中，所述對(duì)象是患有糖尿病或具有 患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象。在上文所描述的任何一種方法中，所述抗CTGF劑特別地可以是多 肽、多核苷酸或小分子，例如與CTGF結(jié)合的抗體、反義分子、siRNA及 小分子化合物等。特別地，抑制CTGF可以通過本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)任何眾所周 知的調(diào)節(jié)CTGF的表達(dá)和活性的方法而實(shí)現(xiàn)。優(yōu)選的方法是使用抗CTGF 劑，例如針對(duì)CTGF的人單克隆抗體，然而任何抑制編碼CTGF的基因的 表達(dá)的方法、抑制CTGF的產(chǎn)生的方法或抑制CTGF活性的方法也可用于 本發(fā)明。本發(fā)明所述方法中使用的示例性抗體在例如US5，408，040 、WO99/07407、 W099/33878及WO00/35936中有描述。本發(fā)明所述方法中 使用的一個(gè)示例性抗體在WO2004/10874中有描述，通過引用將該文獻(xiàn)全 文并入本申請(qǐng)。所述抗體或其片段可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的各種手段 施用。例如經(jīng)常是通過靜脈注射、腹膜內(nèi)注射或皮下注射來注射抗體。本發(fā)明也描述了 CTGF表達(dá)和/或活性的小分子抑制劑；例如WO 96/38172確認(rèn)例如霍亂毒素和8Br-cAMP之類的cAMP調(diào)節(jié)物為CTGF表 達(dá)的抑制劑。因此，被確定為例如前列腺素和/或前列腺環(huán)素類似物如 Iloprost的化合物(參見，例如WO 00/02450; Ricupero et al. (1999) Am J Physiol 277:L1165-1171 ;也參見Ertl et al. (1992) Am Rev Respir Dis 145: A19)和潛在的磷酸二酯酶IV抑制劑(參見，例如Kohyama et al. (2002) Am J Respir Cell Mol Biol 26:694-701)，都可用于調(diào)節(jié)CTGF的表達(dá)。此 外，絲氨酸/蘇氨酸促分裂原活化蛋白激酶抑制劑(尤其是p38)、細(xì)胞周期 蛋白依賴激酶(例如CDK2)、糖原合酶激酶(GSK)-3也可能與CTGF表達(dá) 的降低有關(guān)(參見例如，Matsuoka et al. (2002) Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 283丄103隱L112; Yosimichi et al. (2001) Eur J Biochem 268:6058-6065; WO 01/38532和WO 03/092584)。這些化合物可按本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)既定程序 制備和施用。此外，多核苷酸包括小干擾核糖核酸(siRNA)、微核糖核酸 (miRNA)、核酶及反義序列，可用于本發(fā)明的方法中用以抑制CTGF的表 達(dá)和/或產(chǎn)生(參見例如Kondo et al. (2000) Biochem Biophys Res Commun 278:119-124.)。這些技術(shù)在相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員中是眾所周知的。靶向 CTGF表達(dá)的反義構(gòu)建體已被描述并被用以降低不同類型細(xì)胞中CTGF表 達(dá)(參見例如WO 96/38172;WO 00/27868;WO 00/35936;WO 03/053340; Kothapalli et al. (1997) Cell Growth Differ 8(1 ):61-68; Shimo et al. (1998) J Biochem (Tokyo) 124(1): 130-140;及Uchio et al. (2004) Wound Repair Regen 12:60-66.)。這種反義構(gòu)建體可以用來降低CTGF的表達(dá)，從而減輕或預(yù)防 CTGF誘導(dǎo)的病理過程。這種構(gòu)建體可以用適當(dāng)?shù)妮d體和表達(dá)調(diào)節(jié)物進(jìn)行設(shè)計(jì)用于細(xì)胞特異性或組織特異性表達(dá)以及組成型或誘導(dǎo)型表達(dá)。這種遺 傳構(gòu)建體可按本技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)既定程序制備和施用。因此，在本發(fā)明某些實(shí)施方式中，所述抗CTGF劑是CTGF抗體。在 一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抗體是CTGF單克隆抗體。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施 方式中，所述抗體是人或人源化CTGF抗體。在一個(gè)特定的實(shí)施方式中， 所述抗體是如在WO 2004/108764中所記載的CLN-1 。在另一實(shí)施方式 中，所述藥劑是小分子。在另一實(shí)施方式中，所述藥劑是核酸。在進(jìn)一步 的實(shí)施方式中，所述核酸選自環(huán)狀核苷酸、寡核苷酸或多核苷酸。在特定 的實(shí)施方式中，所述藥劑是反義寡核苷酸或siRNA。本發(fā)明涉及本發(fā)明的方法結(jié)合其它療法的應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方式中， 所述方法與另一療法聯(lián)合使用，例如用以進(jìn)一步增強(qiáng)對(duì)某些病理狀態(tài)的療 效。兩種治療可同時(shí)實(shí)施或相繼實(shí)施，例如在一個(gè)治療時(shí)程期間，或是在 病情惡化和緩解之后。在另一實(shí)施方式中，所述方法與其它具有相似或不 同的作用模式的治療方法(例如ACE抑制劑、ARB、抑制素、高級(jí)糖基化 終產(chǎn)物(AGE)抑制劑等)聯(lián)合使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉治療血管并發(fā)癥 和血管病現(xiàn)有的治療方法，包括例如ACE抑制劑、血管緊張素受體阻滯 劑、抑制素、高級(jí)糖基化終產(chǎn)物抑制劑、鈣通道阻滯劑等。特別地，上述 任何治療劑與本發(fā)明所述方法聯(lián)合使用。已證明緩激肽可以調(diào)節(jié)CTGF表達(dá)，而緩激肽Bl受體拮抗劑降低糖 尿病動(dòng)物的血管通透性(參見例如Ricupero et al. (2000) J Biol Chem 275:12475-12480; Lawson et al. (2005) Regul Pept 124:221-224; Tan et al. (2005) Am J Physiol Renal Physiol 288:F483國F492; Wilkinson-Berka and Fletcher (2004) Curr Pharm Des 10:3313-3330.)。因此，在某種意義上，本 發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)激肽釋放酶-激肽(kallikrien-kinin系統(tǒng)的方法和藥 齊IJ，以調(diào)節(jié)CTGF介導(dǎo)的血管并發(fā)癥，例如血管通透性和外滲。特別地， 單獨(dú)使用調(diào)節(jié)激肽放酶-激肽系統(tǒng)的藥劑和方法，或與抑制CTGF的藥劑 和方法聯(lián)合使用。麟鼓微微徑正如本技術(shù)領(lǐng)域所熟悉，本發(fā)明的組合物可直接施用或于含賦形劑的 藥物組合物中施用。本發(fā)明的治療方法可包括給患有血管功能障礙或心功 能障礙(即血管功能受損或心臟功能受損)或具有患血管功能障礙或心功能 障礙的風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象施用有效量的本發(fā)明的化合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式 中，所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物，在最優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述對(duì)象是人。通過常規(guī)試驗(yàn)可容易地以確定化合物或藥物的有效量(即，劑量)、有 效而方便的給藥途徑和適當(dāng)?shù)呐浞健，F(xiàn)有技術(shù)中提供了各種配方和藥物輸送系統(tǒng)(參見例如上述Gennaro, ed. (2000) Remington's Pharmaceutical Sciences;及上述 Hardman, Limbird， and Gilman, eds. (2001) The Pharmacological Basis of Therapeutics.)。合適的給藥途徑可以包括例如經(jīng)口腔、直腸、局部、鼻、肺、眼、腸 內(nèi)及腸胃外給藥。主要的腸胃外給藥途徑包括靜脈注射、肌肉注射及皮下 注射。次要的給藥途徑包括腹膜內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、心內(nèi)、腦池內(nèi)、皮 內(nèi)、病灶內(nèi)、眼內(nèi)、胸膜內(nèi)、鞘內(nèi)、子宮內(nèi)及心室內(nèi)給藥。待使用的配方 類型和給藥途徑以及是否優(yōu)選局部給藥或全身給藥，根據(jù)待治療的指征與 及藥物的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性而定。本發(fā)明化合物的藥物劑型，可以以瞬間釋放、控釋、緩釋或靶向給藥 等系統(tǒng)提供。常用的劑型包括例如溶液和懸浮液、(微)乳劑、軟膏、凝膠 和貼劑、脂質(zhì)體、片劑、糖衣片、軟或硬膠囊、栓劑、胚珠(ovule)、埋植 劑、無定形或結(jié)晶粉末、氣霧劑和凍干制劑。根據(jù)所用的給藥途徑，可能 需用特定設(shè)備來施用所述藥物，例如針筒和針頭、吸入器、泵、注射筆、 涂藥器或?qū)Ｓ脽?。藥物劑型往往由藥物?一或多種賦形劑和容器/封閉 系統(tǒng)所組成。可將一或多種賦形劑(也稱作惰性成分)添加到本發(fā)明的化合 物中，令所述藥物的生產(chǎn)、穩(wěn)定性、給藥和安全性得以改善或促進(jìn)，并提 供獲得所需的藥物釋放模式的手段。因此，待添加到藥物中的賦形劑的類 型可取決于多種因素，例如藥物的物理和化學(xué)特性、給藥途徑以及制造過程。在本技術(shù)領(lǐng)域中，包括在各藥典中，提供了制藥學(xué)上可接受的賦形劑(參見例如USP， JP, EP及BP, FDA網(wǎng)頁〖www.fda.gov). Inactive Ingredient Guide 1996及Handbook of Pharmaceutical Additives, ed. Ash; Synapse Information Resources, Inc. 2002.)。本發(fā)明化合物的藥物劑型可以本技術(shù)領(lǐng)域中任何熟知的方法制成，例 如傳統(tǒng)的混合、篩分、溶解、熔化、造粒、造糖衣片、壓片、懸浮、擠 壓、噴霧干燥、研磨、乳化、(納/微)膠囊化、包埋或冷凍干燥方法。如上 所述，本發(fā)明的組合物可包括一或多個(gè)生理學(xué)上可接受的惰性成分，所述 惰性成分可促進(jìn)活躍分子形成藥用制劑的過程。適當(dāng)?shù)呐浞饺Q于所需的給藥途經(jīng)。例如在靜脈注射時(shí)，所述組合物 可配制在水溶液中，如有必要可用生理學(xué)上相容的緩沖液(包括例如磷酸 鹽、組氨酸或檸檬酸鹽緩沖液)以調(diào)整配方的pH值，及張度劑(例如氯化 鈉或葡萄糖)。在經(jīng)粘膜或鼻腔給藥時(shí)，優(yōu)選半固態(tài)劑型、液態(tài)劑型或貼 劑，并可能含有穿透促進(jìn)劑。這樣的穿透劑在本技術(shù)領(lǐng)域是廣為人知的。 在口服給藥中，所述化合物可以配制成液體或固體劑型，制成瞬間釋放劑 型、控釋劑型或緩釋劑型。合適的口服劑型包括片劑、丸劑、糖衣片、軟 膠囊和硬膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑、懸浮液和乳劑。所述化合物也 可配制為直腸給藥組合物，例如含有可可脂或其它甘油酯類等常規(guī)栓劑基 質(zhì)的栓劑或保留灌腸劑。固體口服劑型可用賦形劑制成，所述賦形劑可包括填料、崩解劑、 (干、濕)粘合劑、溶解阻延劑、潤滑劑、助流劑、抗粘著劑、陽離子交換 樹脂、濕潤劑、抗氧化劑、防腐劑、著色劑及調(diào)味劑。這些賦形劑可以是 合成的或是天然來源的。所述賦形劑的實(shí)例包括纖維素衍生物、檸檬酸、 磷酸二鈣、明膠、碳酸鎂、十二烷基硫酸鎂/鈉、甘露醇、聚乙二醇、聚 乙烯吡咯烷酮、硅酸鹽、二氧化硅、苯甲酸鈉、山梨醇、淀粉、硬脂酸或 其鹽、糖(即葡萄糖、蔗糖、乳糖等)、滑石、西黃蓍膠漿、(氫化)植物 油、以及蠟。乙醇和水可作為造粒輔佐劑。在某些情況下，需要用例如掩味膜、抗胃酸膜或延釋膜對(duì)片劑進(jìn)行包衣。天然及合成聚合物結(jié)合色素、 糖和有機(jī)溶劑或水，經(jīng)常用于對(duì)片劑進(jìn)行包衣，制成糖衣片。當(dāng)膠囊比片劑優(yōu)選時(shí)，藥物的粉末、懸浮液或其溶液可以置于相容的硬或軟膠囊中。 在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可局部施用，如通過皮膚貼劑、 半固體或液體制劑例如凝膠、(微)乳劑、軟膏、溶液、(納/微)懸浮液或發(fā) 泡劑。藥物穿透入皮膚及深層組織中的過程可通過以下方法調(diào)節(jié)例如使 用穿透促進(jìn)劑；通過親脂性、親水性或兩親性的賦形劑(包括水、有機(jī)溶劑、蠟、油類、合成和天然聚合物、表面活性劑和乳化劑)的適當(dāng)選擇與組合；通過pH值調(diào)節(jié)；以及使用絡(luò)合劑。其它技術(shù)例如離子電滲療法， 可用于調(diào)節(jié)本發(fā)明化合物的皮膚穿透。在例如希望藥物最低限度的全身性 暴露而進(jìn)行局部用藥的情況中，優(yōu)選經(jīng)皮或局部用藥。使用吸入劑或經(jīng)由鼻部給藥時(shí)，方便輸送用于本發(fā)明的化合物的形式 有溶液、懸浮液、乳劑、或來自加壓包或噴霧器的半固態(tài)氣霧劑，所述加 壓包或噴霧器通常會(huì)使用推進(jìn)劑(例如由甲烷和乙烷、二氧化碳或任何其 它合適氣體絎生的鹵化炭)。對(duì)于局部氣霧劑，可以使用碳?xì)浠衔锢?丁烷、異丁烯和戊烷。使用加壓噴霧劑時(shí)，可通過使用閥門輸送經(jīng)測(cè)量的 量來測(cè)定適當(dāng)?shù)膭┝繂挝??？梢灾苽溆糜谖肫骰虼等肫鞯睦缑髂z膠囊 或藥筒。典型地，它們可含有所述化合物的粉末混合和合適的粉末基質(zhì) (如乳糖或淀粉)。配制成通過注射進(jìn)行腸胃外給藥的組合物通常是無菌的并可以單位劑 型提供，例如于安瓿、注射器、注射筆中或于多劑量容器中，后者通常含 有防腐劑。所述組合物可以是懸浮液、溶液、或是在油性或水性載體中的 乳劑，并可以含有配方藥劑(formulatory agents)如緩沖液、張度劑、粘度 增強(qiáng)劑、表面活性劑、懸浮劑及分散劑、抗氧化劑、生物相容性聚合物、 螯合劑和防腐劑。根據(jù)注射部位，所述載體可能含有水、合成油或植物 油、和/或有機(jī)共溶劑。在某些情況下，例如在是凍干制品或濃縮物的情 況下，腸胃外給藥的制劑在給藥前需還原或稀釋。提供控釋或緩釋本發(fā)明化合物的長效制劑可包括納/微顆粒、或納/微或非微粉化晶體的可注射懸 浮液。除了本技術(shù)領(lǐng)域中熟悉的控釋/緩釋基質(zhì)外，亦可使用聚合物例如 聚乳酸、聚乙醇酸、或其共聚物作為控釋/緩釋基質(zhì)。其它長效輸送系統(tǒng) 可以需要切口的埋植劑和泵的形式提供。用于靜脈注射本發(fā)明的分子的合適的載體，在本技術(shù)領(lǐng)域中已為人熟 知，其包括水基溶液例如含有磷酸鹽或組氨酸的緩沖液，該水基溶液含有 基質(zhì)(例如氫氧化鈉)以形成電離化合物、用作張度劑的蔗糖或氯化鈉?？?加入共溶劑，例如聚乙二醇。這些水基系統(tǒng)可有效地溶解本發(fā)明的化合 物，并在全身用藥時(shí)產(chǎn)生低的毒性?？梢韵喈?dāng)大地改變?nèi)芤合到y(tǒng)中各成分 的比例，而不會(huì)對(duì)溶解度和毒性特征造成破壞。此外，成分的特性也可改 變。例如，可以用低毒性的表面活性劑，如聚山梨醇酯或泊洛沙姆，也可 以用聚乙二醇或其它共溶劑，可加入生物相容性聚合物如聚乙烯吡咯垸 酮，且其它糖和多元醇可代替葡萄糖。對(duì)可用于本發(fā)明的治療方法的組合物，可通過本技術(shù)領(lǐng)域中為人熟悉 的各種技術(shù)來初步估計(jì)治療有效劑量。動(dòng)物研究中使用的初始劑量，可依 據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中確立的有效濃度而定。可以使用例如從動(dòng)物研究和細(xì)胞 培養(yǎng)試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)來判定適合人類對(duì)象的劑量范圍。本發(fā)明的化合物、藥劑或藥物的治療有效劑量或量，是指所述化合 物、藥劑或藥物導(dǎo)致對(duì)象中的癥狀改善或生存期延長的劑量或量。所述分 子的毒性和治療效果可通過標(biāo)準(zhǔn)制藥程序在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定，例如測(cè)定LD50 (半數(shù)致死劑量)和ED50 (半數(shù)有效量)。毒性與療效 的劑量比就是治療指數(shù)，該指數(shù)可以用LD50/ED50的比率來表示。以具 有高治療指數(shù)的藥劑為優(yōu)選。有效量或治療有療量是指在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人中引起研究員、獸 醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師期望的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)(例如血管功能改善和 心臟功能改善等)的量。劑量以包括ED50的循環(huán)濃度范圍為佳，并以少有或沒有毒性為佳。劑量可以在這一范圍內(nèi)根據(jù)所用劑型和/或給藥途經(jīng)而有所不同?？紤]對(duì) 象病況的具體細(xì)節(jié)，應(yīng)根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域中已知的方法來選擇確切配方、給 藥途經(jīng)、劑量和劑量間隔。劑量和劑量間隔可以個(gè)別調(diào)整，以提供足以達(dá)到預(yù)期效果(例如血管 功能改善、心臟功能改善等)的血漿中活性成分水平，即最小有效濃度(MEC)。 MEC會(huì)視乎每個(gè)化合物而有所不同，但可根據(jù)例如體外數(shù)據(jù)和動(dòng) 物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行估計(jì)。達(dá)到MEC所必需的劑量取決于個(gè)體特征和給藥途經(jīng)。 在局部給藥或選擇性吸收的情況下，所述藥物的有效局部濃度可能與血液 藥物濃度不相關(guān)。施用的藥劑或組合物的量可取決于多種因素，包括治療對(duì)象的性別、 年齡和體重、疾病的嚴(yán)重性、給藥方式及處方醫(yī)師的判斷。如果需要，本發(fā)明的組合物可在含有活性成分的一或多個(gè)單位劑型的 包裝或配藥裝置中提供。所述包裝或裝置可包含例如金屬箔片或塑料箔片 (例如水泡眼包裝)，或玻璃和橡膠塞(例如于小瓶中)。所述包裝或配藥裝 置可附帶給藥的說明書。也可以將包含本發(fā)明化合物的組合物的配制在一 個(gè)相容性的藥物載體內(nèi)，放置在適當(dāng)?shù)娜萜髦?，并貼上治療適應(yīng)癥標(biāo)簽。這些實(shí)施方式和本發(fā)明的其他實(shí)施方式是本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人 員考慮了本申請(qǐng)披露之后會(huì)容易地想到的。實(shí)施例本發(fā)明參照下述實(shí)施例進(jìn)一步理解，這些實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的示 例。這些實(shí)施例僅僅是為了對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說明。本發(fā)明的范圍不限于僅用 于說明本發(fā)明的某一方面的示例性實(shí)施方式。任何功能等價(jià)的方法均在本 發(fā)明范圍內(nèi)。參照上述描述和附圖，針對(duì)本發(fā)明的描述所做的各種修飾以 及本申請(qǐng)所公開的內(nèi)容對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)是顯然的。這些修飾也落 入權(quán)利要求書保護(hù)的范圍。實(shí)施例1:抗CTGF治療改善血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)及心臟功能如下，將本發(fā)明的方法用于證實(shí)其在動(dòng)物模型中對(duì)與糖尿病相關(guān)的血 管并發(fā)癥的某些方面的廣譜療效。給Sprague Dawley大鼠單次靜脈注射一 劑鏈脲霉素(STZ)(65mg/kg)誘發(fā)糖尿病。大鼠中STZ誘發(fā)的糖尿病導(dǎo)致血 管通透性增加(Lawson et al. (2005) Regul Pept 124:22l-224)及心功能減弱 (Machackova et al (2004) Mol Cell Biochem 261:271-278)。實(shí)驗(yàn)大鼠在第0 天接受0.1M檸檬酸緩沖的鏈脲霉素(pH值4.1)的靜脈注射，劑量 65mg/kg (65mg/ml)。 STZ是否成功誘發(fā)糖尿病以第2天空腹血糖水平的升 高(〉250mg/dl)證實(shí)。將糖尿病動(dòng)物分到各治療組(載體，3mg/kg， 5mg/kg;或10mg/kg抗 CTGF抗體CLN-l )。受治療動(dòng)物每周3次接受腹膜內(nèi)注射載體或抗CTGF 抗體，為期6周。6周結(jié)束時(shí)，將動(dòng)物麻醉，然后將裝有壓力傳感器 (Millar instruments)的微尖電導(dǎo)管放置在左心室測(cè)量心臟功能。用計(jì)算機(jī) 數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(ADI Instruments)記錄壓力容積環(huán)。計(jì)算機(jī)分析壓力容積環(huán) (PVAN system, Millar Instruments),以測(cè)定血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)?；蛘?，對(duì)動(dòng) 物施以輕度麻醉，然后用心臟超聲技術(shù)測(cè)定心臟功能。這種技術(shù)在本領(lǐng)域 技術(shù)人員中是熟悉的。依照各血液動(dòng)力學(xué)和心臟功能參數(shù)所確定，糖尿病動(dòng)物呈現(xiàn)心功能減 弱。與未治療的糖尿病動(dòng)物相比，用抗CTGF抗體治療的糖尿病動(dòng)物呈現(xiàn) 心功能增強(qiáng)。具體來說，用抗CTGF抗體治療的糖尿病動(dòng)物呈現(xiàn)改善的心 室舒張性、心室收縮性、舒張末壓、舒張末期容積、射血分?jǐn)?shù)、動(dòng)脈彈 性、每搏輸出量及心輸出量。綜上，這些結(jié)果表明抑制CTGF提供了治療 與糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥的治療方法，例如改善心臟和血管功能。依照各血液動(dòng)力學(xué)和心臟功能參數(shù)所確定，糖尿病動(dòng)物呈現(xiàn)心功能減 弱。檢測(cè)了抗CTGF治療對(duì)射血分?jǐn)?shù)(每搏輸出量除以總?cè)莘e)的影響。如 圖l所示，糖尿病動(dòng)物的收縮和舒張功能都受損或減弱。特別地，與健康 的對(duì)照組動(dòng)物相比，糖尿病動(dòng)物的射血分?jǐn)?shù)(EF)百分比降低。與未治療的對(duì)照組糖尿病動(dòng)物相比，施用抗CTGF抗體后的糖尿病動(dòng)物射血分?jǐn)?shù)百分 比呈現(xiàn)增加(參見圖1)。施用抗CTGF抗體之后(從第6周至第12周)，糖 尿病動(dòng)物的射血分?jǐn)?shù)百分比與健康的非糖尿病對(duì)照組動(dòng)物中觀察到的射血 分?jǐn)?shù)百分比相似或相當(dāng)。該數(shù)據(jù)表明施用抗CTGF抗體阻止了射血分?jǐn)?shù)降 低。也檢測(cè)了抗CTGF治療對(duì)左室舒張末壓(LVEDP)的影響。糖尿病動(dòng) 物呈現(xiàn)左室舒張末壓增加。如圖2中所示，施用抗CTGF抗體阻止了在未 治療的對(duì)照組糖尿病動(dòng)物中可見的左室舒張末壓增加。施用抗CTGF抗體 之后，糖尿病動(dòng)物的左室舒張末壓與在健康的非糖尿病對(duì)照組動(dòng)物中所觀 察到的結(jié)果相似。這些結(jié)果表明施用抗CTGF抗體阻止了左室舒張末壓的 增加。也檢測(cè)了抗CTGF治療對(duì)心肌收縮性和舒張性的影響。如圖3中所 示，與健康的無糖尿病對(duì)照組動(dòng)物相比，糖尿病動(dòng)物的最大dP/dt下降。 此外，給糖尿病動(dòng)物施用抗CTGF抗體阻止了在未治療的糖尿病動(dòng)物中觀 察到的dP/dt最低收縮性的下降(參見圖4)。最大dP/dt下降和最低dP/dt 下降的減少指示心肌收縮性和舒張性有所改善?？偟膩碚f，這些結(jié)果表明抗CTGF治療在改善心臟功能上是有效的。實(shí)施例2:抗CTGF治療降低動(dòng)脈硬度以上述實(shí)施例1的糖尿病動(dòng)物模型測(cè)量抗CTGF治療對(duì)動(dòng)脈硬度的影 響(動(dòng)脈硬度是血管功能，尤其是大血管功能的量度標(biāo)準(zhǔn))。獲得動(dòng)脈硬度 的各種測(cè)量結(jié)果，其中包括來自頸動(dòng)脈的被動(dòng)和主動(dòng)壓力-容積數(shù)據(jù)。為 了進(jìn)行測(cè)量，將連接著三路活栓的PE-50導(dǎo)管插入左側(cè)頸動(dòng)脈的遠(yuǎn)端部 分。經(jīng)所述插管將改良Krebs緩沖液灌注到頸動(dòng)脈中。用血管封堵器阻塞 頸動(dòng)脈的近端。將壓力傳感器連接到所述三路活栓，測(cè)量灌注緩沖溶液的 過程中產(chǎn)生的力。將所述PE管的末端亦連接到等距力傳感器，以測(cè)量加 壓過程中的等距軸向力。用數(shù)字圖像分析系統(tǒng)來衡量所述動(dòng)脈片段的外半徑的改變。以無02+緩沖液灌注所述動(dòng)脈片段以測(cè)定動(dòng)脈被動(dòng)硬度。在灌 注液中加入血管擴(kuò)張劑和血管收縮劑(例如去甲腎上腺素)來測(cè)定動(dòng)脈壁的 主動(dòng)硬度。在某些實(shí)驗(yàn)中，從動(dòng)物切除動(dòng)脈片段，并以體內(nèi)拉伸長度用類 似儀器進(jìn)行離體評(píng)估。糖尿病大鼠的頸動(dòng)脈硬度增加。如圖5所示，分離的頸動(dòng)脈的力-壓曲 線顯示出在糖尿病動(dòng)物中頸動(dòng)脈軸向硬度增加。以3mg/kg或10mg/kg的 抗CTGF抗體(CLN-1)治療的糖尿病動(dòng)物的頸動(dòng)脈軸向硬度與健康的對(duì)照 組動(dòng)物相似。這些結(jié)果表明抗CTGF抗體治療預(yù)防或降低了糖尿病動(dòng)物頸 動(dòng)脈的軸向硬度(例如，預(yù)防或降低血管功能障礙，尤其是預(yù)防或降低大 血管功能障礙)，且抗CTGF抗體治療令與糖尿病相關(guān)的軸向硬度歸于非 糖尿病對(duì)照組正常水平。此外，壓力半徑曲線分析顯示糖尿病動(dòng)物的頸動(dòng)脈周向(即徑向)硬度 增加。經(jīng)抗CTGF抗體治療的糖尿病動(dòng)物的頸動(dòng)脈周向硬度與無糖尿病動(dòng) 物相似(參見圖6)。綜上，這些數(shù)據(jù)表明，抑制CTGF提供了降低或預(yù)防與糖尿病相關(guān)的 動(dòng)脈和血管硬度增加的方法。因此，抑制CTGF提供了治療與糖尿病相關(guān) 的血管并發(fā)癥和改善血管功能的治療方法。除以上所述實(shí)驗(yàn)外，本發(fā)明的方法和藥劑被用于證明其在動(dòng)物模型 中，對(duì)與糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥的其它方面也有廣譜療效。在一系列實(shí) 驗(yàn)中，用上述實(shí)施例1所述的糖尿病動(dòng)物模型測(cè)量抗CTGF治療對(duì)動(dòng)脈硬 度的影響(動(dòng)脈硬度是血管功能，尤其是大血管功能的量度標(biāo)準(zhǔn))。給 Sprague Dawley大鼠單次靜脈注射0.1M檸檬酸緩沖的(pH4.1)鏈脲霉素 (STZ) (65mg/kg)誘發(fā)糖尿病(I型糖尿病)。STZ處理是否成功誘發(fā)糖尿病 以第2天空腹血糖水平的升高(〉250mg/dl)證實(shí)。大鼠中STZ誘發(fā)的糖尿 病導(dǎo)致血管通透性增加(Lawson et al. (2005) Regul Pept 124:221-224)。在另一系列的實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物注射STZ后，任由糖尿病和與糖尿病相關(guān) 的疾病發(fā)展6周。6周后，將糖尿病動(dòng)物分成以下各治療組人IgG對(duì)照組(10mg/kg，腹膜內(nèi)注射，每周三次，為期6周)、抗CTGF抗體組 (CLN-1， 10mg/kg，腹膜內(nèi)注射，每周三次，為期6周)、卡托普利組 (75mg/kg/天，口服，于飲用水中)。圖7顯示維持體內(nèi)軸向拉伸所需軸向力。圖7中數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn) 差表示；NS-無顯著性差異；重復(fù)測(cè)量的數(shù)據(jù)通過雙向ANOVA進(jìn)行分析 (Tukey post hoc test)。糖尿病大鼠頸動(dòng)脈硬度增加。具體來說，糖尿病令軸向被動(dòng)硬度顯著 增加。如圖7所示，各頸動(dòng)脈的力-壓曲線證實(shí)誘發(fā)糖尿病后6周，糖尿病 動(dòng)物中頸動(dòng)脈軸向硬度增加(參見圖7中"STZ 6周")。如圖7所示，與 無糖尿病對(duì)照組動(dòng)物的軸向被動(dòng)硬度相比，在第6周的(未經(jīng)治療的)糖尿 病動(dòng)物或第12周的(從第6周至第12周經(jīng)對(duì)照組人IgG治療的)糖尿病動(dòng) 物中觀察到的軸向被動(dòng)硬度都有增加。與第6周所觀察到的軸向被動(dòng)硬度 相比，從第6周至第12周經(jīng)對(duì)照組人IgG治療的動(dòng)物，在接受STZ處理 及發(fā)生糖尿病之后第12周被動(dòng)軸向硬度增加。這些結(jié)果表明，糖尿病動(dòng) 物動(dòng)脈硬度增加，這種增加從第6周到第12周會(huì)持續(xù)并惡化。與施用了人IgG對(duì)照的糖尿病動(dòng)物相比，施用了抗CTGF抗體的糖尿 病動(dòng)物呈現(xiàn)軸向被動(dòng)硬度降低或具有降低的軸向被動(dòng)硬度(參見圖7)。注 射STZ及糖尿病發(fā)生后6周開始給糖尿病動(dòng)物施用抗CTGF抗體，此時(shí)動(dòng) 物的軸向硬度與無糖尿病動(dòng)物相比已呈現(xiàn)增加。從第6周至第12周期間 施用抗CTGF抗體之后，動(dòng)物的軸向被動(dòng)硬度測(cè)量值低于在第6周時(shí)所觀 察到的值。這一數(shù)據(jù)表明施用抗CTGF抗體阻止了頸動(dòng)脈軸向被動(dòng)硬化的 進(jìn)展。這一數(shù)據(jù)也表明施用抗CTGF抗體可有效逆轉(zhuǎn)或降低與糖尿病相關(guān) 的軸向硬化。這些結(jié)果表明用抗CTGF抗體治療糖尿病動(dòng)物，可以預(yù)防和降低頸動(dòng) 脈的軸向硬度(例如，預(yù)防和減輕血管功能障礙，尤其是預(yù)防和減輕大血 管功能障礙)，而且抗CTGF抗體治療可有效逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的軸向硬 度。綜上，這些數(shù)據(jù)表明，抑制CTGF提供了用于減少或預(yù)防與糖尿病相 關(guān)的動(dòng)脈及血管硬度的增加的方法。因此，抑制CTGF提供了用于治療與 糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥和改善血管功能的治療方法。此外，這些動(dòng)物的壓力半徑曲線分析表明糖尿病動(dòng)物頸動(dòng)脈周向(即 徑向)硬度增加。圖8中在較高壓力時(shí)壓力半徑曲線左移，表示動(dòng)脈硬度 增加。數(shù)據(jù)表明，與健康的對(duì)照組動(dòng)物相比，第6周的糖尿病動(dòng)物或從第 6周至第12周用對(duì)照組人IgG治療的糖尿病動(dòng)物，都呈現(xiàn)頸動(dòng)脈周向(即 徑向)動(dòng)脈硬度增加(參見圖8)。在圖8中，數(shù)據(jù)以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示； NS-無顯著性差異；重復(fù)測(cè)量的數(shù)據(jù)通過LSD post hoc tests進(jìn)行ANOVA 方差分析。STZ注射及糖尿病發(fā)生后，與用對(duì)照組人IgG治療的動(dòng)物相比，在第 6周至第2周期間經(jīng)抗CTGF抗體治療的糖尿病動(dòng)物的頸動(dòng)脈周向硬度呈 現(xiàn)顯著降低。這些結(jié)果表明，施用抗CTGF抗體能有效降低與糖尿病相關(guān) 的周向動(dòng)脈硬度。此外，這些結(jié)果表明，抗CTGF抗體治療可有效逆轉(zhuǎn)和 改善(例如降低周向動(dòng)脈硬度)與糖尿病相關(guān)的周向被動(dòng)動(dòng)脈硬度。綜上，這些數(shù)據(jù)表明，抑制CTGF提供了減少、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)與糖尿病 相關(guān)的動(dòng)脈和血管硬度的增加(例如減輕或逆轉(zhuǎn)血管功能障礙，特別是減 輕或逆轉(zhuǎn)大血管功能障礙)的方法。因此，抑制CTGF提供了用于治療與 糖尿病相關(guān)的血管并發(fā)癥和改善血管功能的有效的治療方法。此外，這些 結(jié)果表明，本發(fā)明中的方法和化合物能有效地治療、預(yù)防、減少或逆轉(zhuǎn)與 糖尿病相關(guān)的大血管并發(fā)癥，因而有助于改善大血管功能。無棘界微力微嫌僮將本發(fā)明的方法和藥劑用于證實(shí)其在動(dòng)物模型中對(duì)與糖尿病相關(guān)的血 管并發(fā)癥的某些方面的廣譜療效。在一系列實(shí)驗(yàn)中，如下利用糖尿病動(dòng)物 模型測(cè)量抗CTGF治療對(duì)動(dòng)脈硬度的影響(動(dòng)脈硬度是血管功能，尤其是 大血管功能的量度標(biāo)準(zhǔn))。給Sprague Dawley大鼠單次靜脈注射O.IM檸檬酸緩沖的(pH4.1)鏈脲霉素(STZ)(65mg/kg)，誘發(fā)(I型)糖尿病。STZ是否 在動(dòng)物中成功誘發(fā)糖尿病以第2天空腹血糖水平的升高(>250mg/dl)為準(zhǔn) 證實(shí)。注射STZ后，任由糖尿病和與糖尿病相關(guān)的疾病進(jìn)展6周。6周后， 將糖尿病動(dòng)物分成以下不同治療組人IgG對(duì)照組(10mg/kg，腹膜內(nèi)注 射，每周三次，為期6周)；抗CTGF抗體組(CLN-1， 10mg/kg，腹膜內(nèi) 注射，每周三次，為期6周)；卡托普利組(75mg/kg/天，口服，于飲用水 中)；氯沙坦組(20mg/kg/天，于飲用水中)；抗CTGF抗體(CLN-1 ， 10mg/kg，腹膜內(nèi)注射，每周三次，為期6周)+卡托普利(75mg/kg/day， 口服，于飲用水中)組；抗CTGF抗體(CLN-1， 10mg/kg，腹膜內(nèi)注射， 每周三次，為期6周)+氯沙坦(20mg/kg/天，于飲用水中)組。該實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物接受實(shí)施例1中描述的動(dòng)脈力學(xué)性能測(cè)試。在力學(xué)性 能測(cè)試之前，體內(nèi)測(cè)量了動(dòng)脈片段的長度。力學(xué)測(cè)試后20分鐘測(cè)量樣品 長度，以獲取無負(fù)載和零應(yīng)力狀態(tài)數(shù)據(jù)。將這一長度與摘除血管之前測(cè)量 的體內(nèi)片段長度相比較。所得的比例被記錄為體內(nèi)軸向拉伸率。如圖9所 示，到第6周實(shí)驗(yàn)性糖尿病降低了體內(nèi)軸向拉伸率。至第12周，抗CTGF 抗體治療阻止了體內(nèi)軸向拉伸率進(jìn)一步下跌，而載體治療的動(dòng)物中體內(nèi)軸 向拉伸率卻持續(xù)下降。體內(nèi)拉伸率的下降指示動(dòng)脈正發(fā)生硬化?？笴TGF 抗體治療預(yù)防了動(dòng)脈硬化。犬動(dòng)解榮辦微微轉(zhuǎn)從分離的頸動(dòng)脈片段中部切除大動(dòng)脈環(huán)并放置在Krebs溶液中。拍下 在無負(fù)載狀態(tài)下所述環(huán)的截面的數(shù)字照片。循徑向切開所述環(huán)，令它打開 成扇形。20分鐘后拍下數(shù)字照片，讓其發(fā)生粘彈性蠕變。張開角定義為 (分別)連接內(nèi)表面中點(diǎn)與扇形(兩個(gè))內(nèi)端點(diǎn)的連線間所形成的夾角，它是 零應(yīng)力狀態(tài)的特征。如圖IO所示，到第六周實(shí)驗(yàn)性糖尿病增加了張開 角。在第12周，抗CTGF抗體治療令增加的張開角回復(fù)正常，無異于健康對(duì)照組的水平，而在載體治療動(dòng)物中張開角則持續(xù)上升。張開角是動(dòng)脈 壁中有殘余應(yīng)力的指征。這些結(jié)果表明抗CTGF抗體治療糖尿病動(dòng)物預(yù)防和逆轉(zhuǎn)了頸動(dòng)脈壁的 病理變化(例如預(yù)防和減輕了血管功能障礙，尤其是預(yù)防和減輕了大血管 功能障礙)，而且抗CTGF抗體治療能有效逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的硬度。綜 上，這些數(shù)據(jù)表明，抑制CTGF提供了減少、預(yù)防或逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的 動(dòng)脈和血管硬度的增加(例如減輕或逆轉(zhuǎn)血管功能障礙，特別是減輕或逆 轉(zhuǎn)大血管功能障礙)的方法。因此，抑制CTGF提供了治療與糖尿病相關(guān) 的血管并發(fā)癥和改善血管功能的有效治療方法。此外，這些結(jié)果表明，本 發(fā)明的方法和化合物能有效地治療、預(yù)防、減少或逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的大 血管并發(fā)癥，因而有助于改善大血管功能。實(shí)施例3:抗CTGF治療降低血管通透性利用上述實(shí)施例1所述糖尿病動(dòng)物模型測(cè)量抗CTGF治療對(duì)血管通透 性的影響(血管通透性是血管功能，尤其是微血管功能的量度標(biāo)準(zhǔn))。誘發(fā) 糖尿病后，在不同時(shí)間按照如下測(cè)試大鼠的血管通透性(VP)的增加。給未 經(jīng)麻醉的大鼠靜脈注射伊文思藍(lán)(EB)染料(20mg/kg)。 20分鐘后，以過量 麻醉處死動(dòng)物，并摘除心臟。切除并稱量從肩部以后軀干的皮膚片段。在 該檢測(cè)中，血管通透性增加的特征是染料外滲進(jìn)入皮膚。將皮膚浸在24。C 的甲酰胺(4ml/g濕重)24小時(shí)。利用平板讀取器通過分光光度測(cè)定法于 620nm測(cè)量萃取到甲酰胺中的EB染料的吸光度。在該檢測(cè)中，EB染料的 濃度與血管通透性程度成正比。此外，以6毫米活檢穿孔器取得皮膚片 段。稱量這些片段的重量，然后于60°C干燥過夜。稱量干燥樣品的重 量，并確定濕重與干重的比率。濕/干比率增加指示存在組織水腫。如圖11和圖12所示，伊文思藍(lán)外滲增加及組織的濕/干比率增加，證 明在第3周糖尿病動(dòng)物的血管通透性和組織水腫(與對(duì)照組非糖尿病動(dòng)物 相比)已增加。糖尿病動(dòng)物經(jīng)抗CTGF抗體治療后，與未治療的糖尿病動(dòng)物相比，伊文思藍(lán)外滲減少且濕/干比率降低。這些結(jié)果表明，用抗CTGF抗體治療糖尿病動(dòng)物，降低了與糖尿病相 關(guān)的血管通透性并減輕了組織水腫(例如減輕血管功能障礙，尤其是微血 管功能障礙)。綜上，這些結(jié)果表明，本發(fā)明的方法和化合物能有效地治 療、預(yù)防或減少與糖尿病相關(guān)的微血管并發(fā)癥，因而有助于改善微血管功 能。如圖13所示，所述組織的伊文思藍(lán)外滲增加和濕/干比率增加，證明 在STZ注射及糖尿病發(fā)生后，第6周的糖尿病動(dòng)物和從第6周至第12周 期間施用了人IgG對(duì)照的糖尿病動(dòng)物，血管通透性和組織水腫(與對(duì)照組 非糖尿病動(dòng)物相比)增加。(圖13中數(shù)據(jù)先通過ANOVA進(jìn)行分析，然后 通過LSD post hoc tests進(jìn)行分析)。(從第6周到第12周)用抗CTGF抗體 治療的糖尿病動(dòng)物，與未治療的糖尿病動(dòng)物相比，伊文思藍(lán)外滲減少且濕 /干比率降低。此外，從第6周到第12周施用抗CTGF抗體的動(dòng)物，與施 用人IgG對(duì)照的對(duì)照組動(dòng)物比較，顯示出血管通透性降低和組織水腫減 少。這些結(jié)果表明抗CTGF抗體治療能有效改善、減少和逆轉(zhuǎn)與糖尿病相 關(guān)的血管通透性和組織水腫。這些結(jié)果表明，糖尿病動(dòng)物接受抗CTGF抗體治療后能減少和逆轉(zhuǎn)與 糖尿病相關(guān)的血管通透性和組織水腫(例如減輕和逆轉(zhuǎn)血管功能障礙，特 別是減輕和逆轉(zhuǎn)微血管功能障礙)。綜上，這些結(jié)果表明，本發(fā)明的方法 和化合物能有效地治療、預(yù)防、減少或逆轉(zhuǎn)與糖尿病相關(guān)的微血管并發(fā) 癥，因而有助于改善微血管功能。實(shí)施例4:抗CTGF治療減少血管鈣化如下所述，檢測(cè)抗CTGF治療對(duì)血管鈣化的影響。用STZ誘發(fā)糖尿病 后6周，對(duì)由動(dòng)物中取得的頸動(dòng)脈片段作鈣礦物沉積的Von Kossa染色。 將兩厘米長的頸總動(dòng)脈片段置于10"/。鋅福爾馬林(0.1M)中24小時(shí)，用系 列稀釋的乙醇溶液脫水，隨后用石蠟包埋。從所述頸動(dòng)脈組織作3微米厚切片，除去石蠟，在蒸餾水中水化，然后用5% AgN03處理60分鐘。然 后用蒸餾水漂洗頸動(dòng)脈組織樣品并用5% Na2S203處理兩分鐘。然后將所 述標(biāo)本順序在蒸餾水和95%乙醇中漂洗。然后將所述標(biāo)本以曙紅復(fù)染，并 放在光學(xué)顯微鏡下檢查，通過沿血管壁內(nèi)膜層呈現(xiàn)的暗黑色/棕色染色給 血管壁鈣化評(píng)分。所述血管壁在光學(xué)顯微鏡觀察下，以存在或不存在來量 度血管鈣化。該研究的結(jié)果如圖14中所示。誘發(fā)糖尿病后6周，與所述血管相關(guān) 的鈣礦物沉積的von Kossa染色使沿著糖尿病動(dòng)物的頸動(dòng)脈內(nèi)膜層出現(xiàn)強(qiáng) 陽性的黑色/棕色染色區(qū)域；而從無糖尿病動(dòng)物獲取的頸動(dòng)脈則出現(xiàn)很少 或無鈣染色。此外，從經(jīng)人IgG對(duì)照治療的糖尿病動(dòng)物(ii-6)獲取的頸動(dòng) 脈，有一半呈強(qiáng)陽性血管鈣化染色。類似地，在第6周從經(jīng)卡托普利治療 的糖尿病動(dòng)物(n=8)獲取的頸動(dòng)脈，有一半呈現(xiàn)強(qiáng)鈣染色。從施用抗 CTGF抗體(CLN-1， 3mg/kg)的糖尿病動(dòng)物獲取的頸動(dòng)脈呈現(xiàn)鈣礦物沉積 染色減少。具體地，從接受3mg/kg的抗CTGF抗體(CLN-1)治療的糖尿 病動(dòng)物獲取的頸動(dòng)脈，少于一半(43%)在第6周呈現(xiàn)陽性鈣染色。施用較 高劑量抗CTGF抗體(CLN-1， 10mg/kg)能預(yù)防所有從糖尿病動(dòng)物(n=6) 獲取的頸動(dòng)脈切片中的鈣沉積。這些結(jié)果表明用抗CTGF抗體治療糖尿病 動(dòng)物能預(yù)防或減少血管鈣化。這些數(shù)據(jù)表明抗CTGF治療有助于預(yù)防或減 少血管鈣化。實(shí)施例5:抗CTGF治療對(duì)糖尿病動(dòng)物模型中的心血管并發(fā)癥有治療療效 使用8周齡雄性W/必小鼠(C57BLKS/J-/ep^〃ep^^)和他們年齡相 一致的非糖尿病必/+同窩出生的小鼠<^5780^"-^/^必/+) (Jackson Labs， Bar Harbor, ME)。必/必小鼠初始重量約40g。非糖尿病^>/+小鼠初始體重 約20g。在某些實(shí)驗(yàn)組中，飲用水加入200mg/L的氯沙坦，這濃度確保氯 沙坦的輸送率為約2mg/天。純化的多供體人IgG購自Sigma Chemical Corporation(St.Louis， Mo.)，并通過蛋白A層析再純化。立即中和含有人IgG的酸性洗脫液，并用PBS 徹底透析，然后無菌過濾，進(jìn)行檢測(cè)以確定純度和無內(nèi)毒素，并貯存于 4°C直到使用(批號(hào)CML052803或類似，4.67mg/mL)。一旦100%的必/^)小鼠變成高血糖(以血糖水平比必/+對(duì)照組小鼠高 2倍或以上為準(zhǔn))，在8周齡開始實(shí)施抗CTGF單克隆抗體(CLN-1)治療。 以高血糖為準(zhǔn)確定的糖尿病發(fā)生后，將必/^>小鼠隨機(jī)分為每組10只，并 按照如下治療。 一組必/必小鼠接受腹膜內(nèi)注射抗CTGF抗體(3mg/kg)治 療，另一組接受抗CTGF抗體(CLN-1， 10mg/kg)治療，另一組接受同種 型配對(duì)、不相干的人IgG(cIgG， 10mg/kg)治療，另一組接受飲用水中的 氯沙坦(2mg/天)治療，另一組同時(shí)接受飲用水中的氯沙坦(2mg/天)和腹膜 內(nèi)注射clgG (10mg/kg)?？贵w經(jīng)腹膜內(nèi)施藥，最初單次注射量為300微 克，其后是每周3次，共8周的3mg/kg或10mg/kg劑量(注射容積大約 0-5ml)。處死動(dòng)物時(shí)，用肝素化毛細(xì)管自眼眶靜脈叢抽取非空腹血液樣品。以 未分離的肝素化血液進(jìn)行HbAlc及脂質(zhì)水平分析。將血清樣品存放在-8CTC直至分析。從每一個(gè)動(dòng)物摘除左腎和右腎、肝臟和心臟，然后稱重。如下進(jìn)行血脂測(cè)定通過市售檢測(cè)試劑盒(PTS Panels, Polymer Technology Systems, Inc.)測(cè)定總膽固醇(TC)、 HDL和甘油三酯(TG)的水 平。按下列公式計(jì)算LDL的水平LDL=TC-HDL~(TG/5) 用經(jīng)審定的市售HbAlc檢測(cè)試劑盒測(cè)定新鮮全血的糖化血紅素水平(以糖 化血紅素HbAlc的百分比表示)。如圖15所示，施用抗CTGF抗體的糖尿病動(dòng)物與施用IgG對(duì)照的糖 尿病動(dòng)物相比，心臟重量減少。這些結(jié)果表明，抗CTGF治療有利于治療 與糖尿病相關(guān)的心血管疾病，包括心臟肥大、充血性心力衰竭和心肌病。 圖16顯示，在如實(shí)施例1中所述的STZ誘發(fā)的糖尿病大鼠模型中，施用 CTGF抗體能降低心臟重量與體重的比率。如圖17中所示，給糖尿病動(dòng)物施用抗CTGF抗體能降低血液LDL水 平。LDL水平增加是發(fā)生心血管疾病和障礙的風(fēng)險(xiǎn)因素。因此，這些結(jié)果 表明，抗CTGF治療能通過降低LDL水平而有利于降低心血管疾病發(fā)生 的風(fēng)險(xiǎn)或有利于預(yù)防其發(fā)生。圖18顯示給糖尿病動(dòng)物施用抗CTGF抗體能降低HbAlc (糖化血紅素) 水平。圖19顯示，在如實(shí)施例1所述的STZ誘發(fā)的糖尿病大鼠模型中， 施用抗CTGF抗體能降低血液HbAlc水平。糖化血紅素水平測(cè)量能提供 人體最近2至3個(gè)月內(nèi)平均血糖濃度的準(zhǔn)確指標(biāo)。人類的正常(無糖尿病) 糖化血紅素水平在4至6°/。之間。在糖尿病人研究中，DCCT發(fā)現(xiàn)，與具 有較高HbAlc水平的糖尿病人相比，把HbAlc水平降低到或保持在平均 7.2%，可以令心血管疾病減少35%。因此，這些結(jié)果表明，抗CTGF治療 能降低糖化血紅素水平，從而降低心血管疾病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)或防止心血管疾 病的發(fā)生。圖20顯示抗CTGF抗體及ARB結(jié)合治療能有效提高血液HDL水平。參照上述描述，針對(duì)本發(fā)明的描述所做的各種修改對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人 員將會(huì)是明顯的。這些修改均落入權(quán)利要求書保護(hù)的范圍。本申請(qǐng)引用的所有參考文獻(xiàn)以其全文引入本申請(qǐng)作為參考。 以下各參考文獻(xiàn)以其全文引入本申請(qǐng)作為參考。參考文獻(xiàn)1. 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權(quán)利要求
1.一種減輕對(duì)象的血管功能障礙或改善對(duì)象的血管功能的方法，所述方法包括給所述對(duì)象施用有效量的抗CTGF劑，從而減輕對(duì)象的血管功能障礙或改善對(duì)象的血管功能。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述對(duì)象是患有糖尿病或具有患糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的 對(duì)象。
3. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中所述血管功能是微血管功能或大血管功 能。
4. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述血管功能與外周血管相關(guān)。
5. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述方法用于減輕內(nèi)皮功能障礙。
6. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述方法用于治療或降低動(dòng)脈硬 度。
7. 權(quán)利要求6的方法，其中所述動(dòng)脈硬度選自軸向、徑向及周向動(dòng)脈硬度。
8. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述方法用于減少血管通透性、減 少外滲、減少內(nèi)膜中層增厚或減少頸總動(dòng)脈內(nèi)膜中層增厚。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述方法用于減少水腫或組織水腫。
10. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述方法用于減輕對(duì)血管的損傷或 血管功能障礙。
11. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述方法用于減少血管鈣化。
12. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中所述方法用于治療與糖尿病相關(guān)的血管 并發(fā)癥。
13. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中所述對(duì)象是哺乳動(dòng)物。
14. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中所述對(duì)象是人。
15. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中所述抗CTGF劑是多肽、多核苷酸或小 分子。
16. 權(quán)利要求15的方法，其中所述抗CTGF劑是與CTGF結(jié)合的抗體或其片段、反義分子、siRNA或小分子化合物。
17. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗CTGF劑是針對(duì)CTGF的單克隆抗體或 其片段。
18. 權(quán)利要求16的方法，其中所述抗CTGF劑是WO 2004/108764描述的 CLN-1或其片段。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療受損的血管和心臟功能的方法和藥劑。本發(fā)明還提供用于治療各種與血管功能障礙和心功能障礙相關(guān)的生理學(xué)和病理學(xué)表現(xiàn)的方法和藥劑。
文檔編號(hào)C07K16/18GK101218253SQ200680024483
公開日2008年7月9日 申請(qǐng)日期2006年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月5日
發(fā)明者C·T·雅各布, D·Y·劉, I·朗賽特默帕羅伯克 申請(qǐng)人:菲布羅根公司