磷酸膽堿綴合物及其用圖
【專(zhuān)利說(shuō)明】磷酸膽堿綴合物及其用途 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療自身免疫性疾病，特別是與病理學(xué)炎癥相關(guān)的自身性 免疫性疾病的基于磷酸膽堿的劑和包含其的藥物組合物。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 改善的公共衛(wèi)生與自身免疫性綜合征和自身炎性綜合征的患病率的顯著增加之 間的強(qiáng)相關(guān)性已在西方國(guó)家被證實(shí)。此外，報(bào)道了寄生蟲(chóng)（蠕蟲(chóng)）在某些地理區(qū)域的存在 與保護(hù)免受特應(yīng)性、自身免疫性、和自身炎性疾病之間的相關(guān)性。這些研究產(chǎn)生了 "衛(wèi)生 假說(shuō)"，假定，最近自身免疫性疾病在西方國(guó)家發(fā)生率的增加反映了由傳染原（infectious agent)，包括寄生蟲(chóng)在兒童時(shí)期適當(dāng)引發(fā)免疫應(yīng)答的缺乏。
[0004] 在過(guò)去幾十年期間，許多研究報(bào)道了用寄生性蠕蟲(chóng)感染，或用蠕蟲(chóng)提取物的系統(tǒng) 性治療，可減少與自身免疫性疾病，諸如多發(fā)性硬化（MS)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)、I型糖尿 病（TlDM)和炎性腸?。↖BD)相關(guān)的炎癥。
[0005] 盡管此類(lèi)研究是成功的，使用潛在病原體作為治療劑已產(chǎn)生了倫理和安全問(wèn)題。 因此，已花費(fèi)相當(dāng)大的努力鑒定和表征負(fù)責(zé)寄生蟲(chóng)的免疫調(diào)節(jié)的寄生蟲(chóng)來(lái)源的分子。
[0006] 目前最明確定義的線(xiàn)蟲(chóng)來(lái)源的免疫調(diào)節(jié)分子是ES-62。ES-62是具有通過(guò)N型聚 糖附接的磷酸膽堿（PC)部分的四聚體糖蛋白（62kDa亞基）。
[0007] 已提出了，ES-62的免疫調(diào)節(jié)活性歸因于PC部分的存在。關(guān)于PC免疫調(diào)節(jié)活性 的進(jìn)一步支持，在僅表達(dá)PC-免疫調(diào)節(jié)部分的其他寄生性線(xiàn)蟲(chóng)如豬蛔蟲(chóng)（Ascarissuum)中 發(fā)現(xiàn)。
[0008] 美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5, 455, 032公開(kāi)了可用于誘導(dǎo)針對(duì)由病原生物體感染的免疫保護(hù)的 組合物，該病原生物體包含磷酸膽堿抗原，包括肺炎鏈球菌（Streptococcuspneumoniae) 和在其膜或衣殼上具有磷酸膽堿抗原組分的其他微生物。還公開(kāi)了，用于誘導(dǎo)針對(duì)這些病 原生物體感染的免疫保護(hù)的疫苗和方法。
[0009] 美國(guó)專(zhuān)利號(hào)7, 067, 480公開(kāi)了，包含磷酸膽堿的糖蛋白，特別是ES-62在治療或預(yù) 防與異常炎癥相關(guān)的自身免疫性疾病諸如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的用途。
[0010] 美國(guó)專(zhuān)利號(hào)8, 012, 483公開(kāi)了通過(guò)確定針對(duì)磷酸膽堿的抗體，特別是IgM抗體的 存在來(lái)鑒定處于發(fā)展缺血性心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者的方法，并且還公開(kāi)了在治療或 預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化中用于主動(dòng)免疫原或被動(dòng)免疫原的藥物組合物，所述藥物組合物包含磷 酸膽堿綴合物、或具有對(duì)磷酸膽堿綴合物的特異性的抗體。
[0011] 美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)公布號(hào)2010/0303721公開(kāi)了以蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品治療過(guò)度免疫應(yīng) 答，包括異常/增強(qiáng)的Thl應(yīng)答的方法。自身免疫性疾病包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎、類(lèi) 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、紅斑狼瘡、結(jié)節(jié)病、多發(fā)性硬化、自身免疫性甲狀腺炎、過(guò)敏性鼻 炎、結(jié)腸息肉/結(jié)腸癌和哮喘。
[0012] 對(duì)開(kāi)發(fā)作為安全和穩(wěn)定的免疫原、具有最低不良副作用、用于治療自身免疫性疾 病，特別是與異常炎癥相關(guān)的疾病的小分子仍存在需要。
[0013] 發(fā)明概述
[0014] 本發(fā)明提供了包含磷酸膽堿（PC)綴合物的藥物組合物，以及其用于治療和/或預(yù) 防自身免疫性疾病和紊亂，諸如，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、多發(fā)性硬化和炎性腸病的用途，所 述藥物組合物包括疫苗組合物。
[0015] 本發(fā)明部分地基于預(yù)料不到的發(fā)現(xiàn)，S卩，PC-綴合物，諸如，PC-OVA、MPC和PC-促 吞噬素，對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE)的發(fā)展和進(jìn)展顯示體內(nèi)抑制作用。本發(fā)明所基于的另一 個(gè)預(yù)料不到的發(fā)現(xiàn)是，PC-促吞噬素體內(nèi)改善炎性腸病的發(fā)展。
[0016] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了磷酸膽堿綴合物，所述磷酸膽堿綴合物包含至 少一個(gè)磷酸膽堿部分或其衍生物和選自由以下組成的組的至少一種載體：?jiǎn)翁?、寡糖、糖?白、多糖、妝和脂質(zhì)。
[0017] 根據(jù)一些實(shí)施方案，至少一種載體選自促吞噬素和聚糖。
[0018] 根據(jù)一些實(shí)施方案，至少一種載體是聚糖。根據(jù)一些實(shí)施方案，聚糖是N型聚糖 或〇型聚糖。根據(jù)一些實(shí)施方案，聚糖是N型聚糖，所述N型聚糖包括N-乙酰葡糖胺和 GalM-4[Fuca1-3]GlcNAc的至少一種。根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿-聚糖綴合物還包 括ES-62。
[0019] 根據(jù)一些實(shí)施方案，至少一種載體是促吞噬素。
[0020] 根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿綴合物包含連接至載體的一個(gè)磷酸膽堿部分或其衍 生物。
[0021] 根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿綴合物包含連接至載體的多個(gè)磷酸膽堿部分或其衍 生物。
[0022] 根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿綴合物包含連接至磷酸膽堿部分或其衍生物的多個(gè) 載體。
[0023] 根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿部分或其衍生物和載體被間隔物所分離。
[0024] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含磷酸膽堿綴 合物，所述磷酸膽堿綴合物包含連接至選自促吞噬素和聚糖的至少一種載體的至少一個(gè)磷 酸膽堿部分或其衍生物，并且所述藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
[0025] 根據(jù)一些實(shí)施方案，所述藥物組合物是疫苗。根據(jù)一些實(shí)施方案，所述藥物組合物 還包含佐劑。根據(jù)一些實(shí)施方案，佐劑選自由以下組成的組：油包水乳劑、水包油乳劑和脂 質(zhì)體。
[0026] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于治療需要其的受試者中自身免疫性疾病的 方法，所述方法包括向受試者施用疫苗組合物，所述疫苗組合物包含磷酸膽堿綴合物，所述 磷酸膽堿綴合物包含至少一個(gè)磷酸膽堿部分或其衍生物和選自由以下組成的組的至少一 種載體：聚合物、單糖、寡糖、多糖、肽、多肽和脂質(zhì)，從而調(diào)節(jié)所述受試者的免疫應(yīng)答朝向抗 炎表型。
[0027] 根據(jù)一些實(shí)施方案，所述治療包括以下的至少一種：預(yù)防所述自身免疫性疾病的 發(fā)作、減弱所述自身免疫性疾病的進(jìn)展和抑制所述自身免疫性疾病的進(jìn)展。
[0028] 根據(jù)一些實(shí)施方案，所述受試者具有發(fā)展所述自身免疫性疾病的高風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)一 些實(shí)施方案，自身免疫性疾病與異常炎癥相關(guān)。根據(jù)一些實(shí)施方案，自身免疫性疾病選自由 以下組成的組：類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、狼瘡、多發(fā)性硬化、尋常型天皰瘡、抗磷脂綜合征、銀肩病、 自身免疫性肝炎、結(jié)節(jié)病、炎性腸病、結(jié)腸炎、克羅恩病和慢性阻塞性肺疾病。
[0029] 根據(jù)一些實(shí)施方案，疫苗組合物以選自由以下組成的組的施用途徑施用：靜脈內(nèi)、 肌內(nèi)、□服、舌下、粘膜內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻、皮下、局部、皮內(nèi)或經(jīng)皮。
[0030] 根據(jù)一些實(shí)施方案，受試者是哺乳動(dòng)物。根據(jù)一些實(shí)施方案，受試者是人類(lèi)。
[0031] 根據(jù)一些實(shí)施方案，自身免疫性疾病是狼瘡。根據(jù)一些實(shí)施方案，載體選自由以下 組成的組：卵清蛋白、促吞素和2-甲基丙稀酰氧乙基（2-methacryloyloxyethyl)。根據(jù) 一些實(shí)施方案，磷酸膽堿綴合物包括磷酸膽堿-促吞噬素、磷酸膽堿-卵清白蛋白和2-甲 基丙烯酰氧乙基-磷酸膽堿的至少一種。
[0032] 根據(jù)一些實(shí)施方案，自身免疫性疾病是結(jié)腸炎。根據(jù)一些實(shí)施方案，載體是促吞噬 素。根據(jù)一些實(shí)施方案，磷酸膽堿綴合物是磷酸膽堿-促吞噬素。
[0033] 根據(jù)一些實(shí)施方案，自身免疫性疾病是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。根據(jù)一些實(shí)施方案，載體 選自由以下組成的組：促吞噬素、聚糖和2-甲基丙烯酰氧乙基。根據(jù)一些實(shí)施方案，PC-綴 合物包括磷酸膽堿-促吞噬素、磷酸膽堿-聚糖和2-甲基丙烯酰氧乙基-磷酸膽堿的至少 一種。
[0034] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了疫苗組合物用于治療自身免疫性疾病的用途， 所述疫苗組合物包含磷酸膽堿綴合物，所述磷酸膽堿綴合物包含至少一個(gè)磷酸膽堿部分或 其衍生物和選自由以下組成的組的至少一種載體：聚合物、單糖、寡糖、多糖、肽、多肽和脂 質(zhì)。
[0035] 根據(jù)一些實(shí)施方案，本發(fā)明提供了用于治療自身免疫性疾病的試劑盒，所述試劑 盒包含疫苗組合物，所述疫苗組合物包含磷酸膽堿綴合物，所述磷酸膽堿綴合物包含至少 一個(gè)磷酸膽堿部分或其衍生物和選自由以下組成的組的至少一種載體：聚合物、單糖、寡 糖、多糖、肽、多肽和脂質(zhì)。
[0036] 本發(fā)明適用性的另外的實(shí)施方案和全部范圍將從下文給出的詳細(xì)描述變得明顯。 然而，應(yīng)當(dāng)理解，詳細(xì)描述和具體實(shí)施例，雖然指示本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，但僅通過(guò)說(shuō) 明性方式給出，因?yàn)樵诒景l(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改從該詳細(xì)描述對(duì)本領(lǐng)域技 術(shù)人員將是明顯的。
[0037] 附圖簡(jiǎn)述
[0038]圖1示出了在用？(：-0￥4(正方形；* = ?〈0.001)、]\^(：(三角形；？>0.05)或？83(對(duì) 照；菱形）處理的NZBxNZW/Fl小鼠（"狼瘡小鼠"）的血清中抗PC抗體的水平（以405nm 處的光密度，O.D.為單位）。
[0039] 圖2示出了在用PC-OVA(正方形）、MPC(三角形）或PBS(對(duì)照；菱形）處理的狼 瘡小鼠中的蛋白尿進(jìn)展作為尿中至少lOOmg/dl (p〈0. 02)的蛋白水平的百分比。
[0040] 圖3A-3B示出了用PC-OVA處理的狼瘡小鼠的用抗小鼠IgG-FITCFc特異性抗體 探測(cè)（A)、用高碘酸希夫氏（Periodic acid-Schiff，PAS;B)染色的腎切片。
[0041] 圖4A-4B示出了用MPC處理的狼瘡小鼠的用抗小鼠IgG-FITCFc特異性抗體探測(cè) (A)、用高碘酸希夫氏（PAS;B)染色的腎切片。
[0042] 圖5A-5C示出了用PBS處理的對(duì)照狼瘡小鼠的用抗小鼠IgG-FITCFc特異性抗體 探測(cè)（A)、用高碘酸希夫氏（PAS;B-C)染色的腎切片。
[0043] 圖6是示出了用？0(^六（三角形；* = ?〈0.01)、1^(：(正方形；？〈0.04)或？83(對(duì) 照；菱形）處理的狼瘡小鼠的存活的Kaplan-Meier圖。
[0044] 圖7示出了用PC-促吞噬素（TPC)或PBS(對(duì)照）處理的具有蛋白尿（蛋白水平 高于lOOmg/dl)的狼瘡小鼠的百分比，p〈0. 02。
[0045] 圖8A-8B示出了用PBS(對(duì)照；A)或PC-促吞噬素⑶處理的狼瘡小鼠的PAS染 色的腎切片。
[0046] 圖9A-9B示出了用PBS(對(duì)照；A)或PC-促吞噬素⑶處理的狼瘡小鼠的用抗小 鼠IgG-FITCFc特異性抗體探測(cè)的腎切片。
[0047] 圖10示出了在用PC-促吞噬素（TPC)或PBS處理的狼瘡小鼠的脾細(xì)胞中抗炎細(xì)胞 因子TGFP(p〈0. 001)和促炎細(xì)胞因子IFNy(p〈0. 03 ;相對(duì)于P-肌動(dòng)蛋白）的相對(duì)mRNA 表達(dá)水平。
[0048] 圖11示出了在用PC-促吞噬素（TPC)或PBS(對(duì)照）處理的狼瘡小鼠的脾細(xì)胞中 抗炎細(xì)胞因子TGFP和IL-10以及促炎細(xì)胞因子IFNy和IL-17的蛋白水平（以pg/ml為 單位）。* =p〈〇. 001，** =p〈〇. 02。
[0049]圖12示出了在用PC-促吞噬素（TPC;