專利名稱：：抗干擾素γ抗體及其使用方法
技術領域：
：本發(fā)明通常關于全人抗干擾素Y抗體及其〗吏用方法。技術背景人干4尤素Y(IFNy,IFN-gamma)是由活化T-淋巴細胞和天然殺傷細月包產生的一種淋巴細月包因子。經i正實，它能夠抗增殖、4i:病毒、具有免疫調節(jié)活性并能夠結合作為免疫系統(tǒng)的大多^:初級細胞上的異二聚體受體的IFNy-R,并引發(fā)一連串導致炎癥的事件。IFNy的抗病-桊和免疫調節(jié)活性對許多臨床病癥有效是周知的。然而，存在許多臨床調整，其中IFNy-活性具有有毒效應是周知的。例如，自身免疫性疾病與血液中和自體免疫患者患病組織中IFNY高7jc平相關。IFNY-活性也與惡病質和膿毒性Y木克疾病狀態(tài)相關聯。因此，對于靶向IFNy活性的療法存在需要,:.
發(fā)明內容本發(fā)明提供了特異性針對千擾素,這里也統(tǒng)稱為IFN-gamma)的全人單克隆抗體。示范性單克隆抗體包括這里描述的N1-0501;AC1.2R3P2—A6(這里也統(tǒng)稱為"A6"):AC1.2R3P2JB4(這里也統(tǒng)稱為"B4");AD1.4R4PUB9(這里也統(tǒng)稱為"B9");ADl.4R4P2—C9(這里也統(tǒng)稱為"C9");AC1.4R4P2—Cl0(這里也統(tǒng)稱為"C10");AC1.2R3P7_D3(這里也統(tǒng)稱為"D3");AD1.2R2P2JD6(這里也統(tǒng)稱為"D6");AC1.2R2P2—D8(這里也統(tǒng)稱為"D8");AD1.3R3P6JB1(這里也統(tǒng)稱為"E1");AD1.3R3P5—F8(這里也統(tǒng)稱為"F8");AD1.3R3P6—F9(這里也統(tǒng)稱為"F9");AD1.4R4P2—G7(這里也統(tǒng)稱為"G7");AD1.R3P3_G9(這里也纟克稱為"G9");和AD1.3R3P6—G10(這里也統(tǒng)稱為"G10")。作為選擇，單克隆抗體是能夠結合與KI-0501;AC1.2R3P2JB4;AD1.4R4PUB9;AD1.4R4P2一C9;AC1.4R4P2—C10;AC丄2R3P7一D3;AD1.2R2P2一D6;AC1.2R2P2—D8;AD1.3R3P6—El;AD1.3R3P5JF8;AD1.3R3P6—F9;AD1.4R4P2—G7;AD11R3P3J39;或AD1.3R3P6—G10相同的表位的抗體。該抗體在這里分別統(tǒng)稱為huIFNy抗體。IiuIFNy抗體包含具有SEQIDNOS:2、12、20、28、36、42、51、58、63、68、75、81、88、94、或103氨基酉菱序列的重牽t可變區(qū)考口具有SEQIDNOS:7、15、23、3]、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。優(yōu)選地，三個重鏈互補決定區(qū)(CDRs)包括的氨基酸序列與選自由SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5);DHSSGWYVISGMDV(SEQIDNO:13);DLTVGGPWYYFDY(SEQIDN0:21);DGWNALGWLES(SEQIDNO:29);SNAMS(SEQIDN0:43);TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQIDNO:44);GTF丄VGGGI一DN(SEQIDNO:45);RSFDSGGSFEY(SEQIDNO-.64);VGSWYLEDFDI(SEQIDNO:69);GGNYGDYFDYFDY(SEQIDNO:76);和DFWVITSGNDY(SEQIDNO:89)所組成的組的序列有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同源性。輕纟連具有三個互補決定區(qū)，這三個互補決定區(qū)包括的氨基酸序列與選自由TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8);EDNQRPS(SEQIDNO:9);QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10):TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);EDNQRPS(SEQIDNO:17);QSNDSDNVV(SEQIDNO:18);DDDQRPS(SEQIDNO:25);QSYDSSNVV(SEQIDNO:26);TRSGGSIGSYYVQ(SEQIDNO:32);DDKKRPS(SEQIDNO:33);QSYDS麗LW(SEQIDNO:34);TRSSGTIASNYVQ(SEQIDNO:39);QSYDNSNHWV(SEQIDNO:40);TGSGGSIATNYVQ(SEQIDNO:48);QSYDSDNHHVV(SEQIDNO:49);TGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:55);QSYDSSNQEVV(SEQIDNO-.56);QSYDSNNFWV(SEQIDNO:61);TRSSGSIASNYVH(SEQIDNO:72);QSSDTTYHGGW(SEQIDNO:73);QSYEGF(SEQIDNO:79);TGRNGNIASNYVQ(SEQIDNO:84);EDTQRPS(SEQIDNO:85);QSSDSNRVL(SEQIDNO:86);QSFDSTNLW(SEQIDNO:92);AGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:97);QSYSYNNQW(SEQIDNO:98);TRSSGSIVSNYVQ(SEQIDNO:106);EDNRRPS(SEQIDNO:107)所組成的組的序列有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同源性。該抗體結合IFNy.本發(fā)明的huIFNy抗體包括由氨基酸序列SYAMS(SEQIDNO:3)或SNAMS(SEQIDNO:43)組成的VHCDR1區(qū)域；由氨基酉臾序歹'jAISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQIDNO:44)組成的VHCDR2區(qū)域,和包括選自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5);DHSSGWYVTSGMDV(SEQIDNO:13);DLTVGGPWYYFDY(SEQIDNO:21);DGWNALGWLES(SEQIDNO:29);GTELVGGGLDN(SEQIDNO:45);RSFDSGGSFEY(SEQIDNO:64);VGSWYLEDFDI(SEQIDNO:69);GGNYGDYFDYFDY(SEQIDNO:76);和DFWVITSGNDY(SEQIDNO:89)組成組的氨基酸序列的VHCDR3區(qū)i或。huIFNY抗體包括包括選自由TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8);TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);TRSGGSIGSYYVQ(SEQIDNO.32);TRSSGTIASNYVQ(SEQIDNO:39);TGSGGSIATNYVQ(SEQIDNO:48);TGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:55);TRSSGSIASNYVH(SEQIDNO:72);TGRNGNIASNYVQ(SEQIDNO:84);AGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO.97)和TRSSGSrVSNYVQ(SEQIDNO:106)組成的氨基酸序列的VLCDR1區(qū)域；包括選自由EDNQRPS(SEQIDNO:9);EDNQRPS(SEQIDNO:17);DDDQRPS(SEQIDNO:25);DDKKRPS(SEQIDNO:33);EDTQRPS(SEQIDNO:85)和EDNRRPS(SEQIDNO:107)組成組的氨基酸序列的VLCDR2區(qū)域；和包括選自由QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10);QSNDSDNVV(SEQIDNO:18);QSYDSSNW(SEQIDNO:26);QSYDS麗LVV(SEQIDNO:34);QSYDNSNHWV(SEQIDNO:40);QSYDSD麗HW(SEQIDNO:49);QSYDSSNQEW(SEQIDNO:56);QSYDS麗FWV(SEQIDNO:61);QSSDTTYHGGW(SEQIDNO:73);QSYEGF(SEQIDNO:79);QSSDSNRVL(SEQIDNO:86);QSFDSTNLVV(SEQIDNO:92);和QSYSYNNQW(SEQIDNO:98)組成組的氨基酸序列的VL,CDR3區(qū)域。huIFNy抗體包括，例如，由氨基酸序歹'JSYAMS(SEQIDNO:3)或SNAMS(SEQIDNO:43)組成的VHCDR1區(qū)i或；由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQIDNO:44)組成的VC[)R2區(qū)域；包括選自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5);DHSSGWYVISGMDV(SEQIDNO:13);DLTVGGPWYYFDY(SEQIDN0:21);DGWNALGWLES(SEQIDNO:29);GTELVGGGLDN(SEQIDNO:45);RSFDSGGSFEY(SEQIDNO:64);VGSWYLEDFDI(SEQIDNO:69);GGNYGDYFDYFDY(SEQIDNO:76);和DFWVITSGNDY(SEQIDNO:89)組成組的氨基酸序歹!j的VHCDR3區(qū)域；包括選自由TRSSGS1ASNYVQ(SEQIDN0:8);TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);TRSGGSIGSYYVQ(SEQIDNO:32);TRSSGTIASNYVQ(SEQIDNO:39);TGSGGSIATNYVQ(SEQIDNO:48);TGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:55);TRSSGSIASNYVH(SEQIDNO-.72);TGRNGNIASNYVQ(SEQIDNO:84);AGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:97)和TRSSGSIVSNYVQ(SEQIDNO:106)組成組的氨基酸序列的VLCDR1區(qū)域；包括選自由EDNQRPS(SEQIDNO:9);EDNQRPS(SEQIDNO.17);DDDQRPS(SEQIDNO:25);DDKKRPS(SEQIDNO:33);EDTQRPS(SEQIDNO:85)和EDNRRPS(SEQIDNO:107)組成組的氨基酸序列的V—CDR2區(qū)域；和包括選自由QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10);QSNDSDNVV(SEQIDNO:18);QSYDSSNVV(SEQIDNO:26);QSYDSNNLW(SEQIDNO:34);QSYDNSNHWV(SEQIDNO:40);QSYDSDNHHVV(SEQIDNO:49);QSYDSSNQEVV(SEQIDNO:56);QSYDSNNFWV(SEQIDN0:61);QSSDTTYHGGW(SEQIDNO:73);QSYEGF(SEQIDNO:79);QSSDSNRVL(SEQIDNO:86);QSFDSTNLW(SEQIDNO:92);和QSYSYNNQW(SEQIDNO:98)纟且成組的-氤基酸序列的VLCDR3區(qū)域。huIFNy抗體的重鏈源自胚系V(可變)基因，例如DP47(IGHV3-23)胚系基因(GenBankAccessionNo.M99660)或與人DP47胚系基因序列同源的核酸序列。DP47(IGHV3-23)胚系基因的核酸序列包4舌，例4口，如下所示4亥酉吏序列TTACTGTGCGAAAGA(SEQIDNO:99)huIFNy抗體的輕《連源自1gX輕鏈可變區(qū)胚系基因如IGLV6-57或VI-22(GenBankAccessionNo.Z73673)或與人IGLV6-57胚系基因序列同源的核酸序列。IGLV6-57胚系基因的核酸序列包4舌如下所示一亥酸序列ATAGCAGCAATCA(SEQIDNO:108)在另一方面，本發(fā)明提供了通過對主體進行huIFNY抗體給藥來治療、預防或減輕免疫相關紊亂的癥狀的方法。例如，hulFNY抗體被用于治療、預防或減輕免疫相關紊亂如Crohn's疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干癬、結節(jié)病、類風濕性關節(jié)炎、血管炎、異位性皮炎和繼發(fā)-進展型多發(fā)性》更化的癥狀。優(yōu)選地，對主體進一步進4亍第二種試劑《會藥如，^旦不限于，識別細月包因子:^白細月包介素1(IL-I)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL畫13、IL-15、IL畫17、IL-18、IL-20、IL國21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31和趨化因子^口MIP1(x、MIP1(3、RANTES、MCP1、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的抗細胞因子或抗體趨化因子試劑。該主體正患有或易于發(fā)展成為免疫相關疾病，如自體免疫疾病或炎癥紊^L。圖1為huIFNy抗體NI-0501和ACL2R3P2_A6的輕《連可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖1A描述了編碼NI-0501重鏈可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖IB表示圖1A中顯示的核苦酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖IB中用下劃線標出。圖IC描述了編碼NI-0501重嗜連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖1D表示了圖1C中顯示的核普酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖ID中用下劃線標出。圖IE描述了編碼AC1.2R3P2—A6重4連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖IF表示圖IE中顯示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖1F中用下劃線標出。圖1G描述了編碼AC1.2R3P2—A6輕4連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖1H表示圖1G中顯示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖IH中用下劃線標出。圖2為huIFNy抗J本ACl.2R3P2—B4的輕《連可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖2A描述了編碼重鏈可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖2B表示圖2A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖2B中用下劃線標出。圖2C描述了編碼輕4連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖2D表示了圖2C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖2D中用下劃線標出。圖3為huIFNy抗體AD1.4R4P1—B9的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖3A描述了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖3B表示圖3A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖3B中用下劃線標出。圖3C描述了編碼輕4連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖3D表示了圖3C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖3D中用下劃線標出。圖4為huIFNy抗體AD1.4R4P2_C9的輕鏈可變區(qū)和重4連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖4A描述了編石馬重鏈可變區(qū)的沖亥苦酸序列，并且圖4B表示圖4A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖4B中用下劃線標出。圖4C描述了編碼輕《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖4D表示了圖4C中所示的核苦酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖4D中用下劃線標出。圖5為huIFNy抗體AC1.4R4P2—CIO的輕4連可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核香酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖5A描述了編石馬重4連可變區(qū)的核苷酉吏序列，并且圖5B表示圖5A中所示的沖亥苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖5B中用下劃線標出。圖5C描述了編碼輕4連可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖5D表示了圖5C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖5D中用下劃線標出。圖6為huIFNy抗體AC1.2R3P7—D3的輕鏈可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核普酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖6A描述了編碼重《連可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖6B表示圖6A中所示的核苦酸序列編石馬的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖6B中用下劃線標出。圖6C描述了編；馬輕《連可變區(qū)的核香酸序列，并且圖6D表示了圖6C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖6D中用下劃線標出。圖7為huIFNY抗體AD1.2R2P2一D6的輕鏈可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖7A描述了編碼重鏈可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖7B表示圖7A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖7B中用下劃線標出。圖7C描述了編^^輕鏈可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖7D表示了圖7C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖7D中用下劃線標出。圖8為huIFHy抗體AC1.2R2P2—D8的輕《連可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖8A描述了編碼重鏈可變區(qū)的核香酸序列，并且圖8B表示圖8A中所示的核苦酸序列編碼的-氤基酸序列?；パa決定區(qū)在圖8B中用下劃線標出。圖8C描述了編碼輕《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖8D表示了圖8C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖8D中用下劃線標出。圖9為huIFNy抗體AD1.3R3P6—El的輕4連可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苦S吏序列和氨基酸序列的一系列.表達。圖9A描述了編碼重《連可變區(qū)的4玄苷酸序列，并且圖9B表示圖9A中所示的牙亥苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖9B中用下劃線標出。圖9C描述了編；馬輕《連可變區(qū)的核苦酉復序列，并且圖9D表示了圖9C中所示的核苦酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖9D中用下劃線標出。圖10為hulFNy抗體ADl.3R3P5—F8的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖IOA描述了編碼重《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖IOB表示圖10A中所示的核苦酸序列編^碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖10B中用下劃線標出。圖10C描述了編碼輕鏈可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖10D表示了圖10C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖10D中用下劃線標出。圖11為hulFNy抗體AD1.3R3P6—F9的輕4連可變區(qū)和重《連可變區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖IIA描述了編石馬重《連可變區(qū)的^t苦酉臾序列，并且圖IIB表示圖11A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖11B中用下劃線標出。圖11C描述了編碼輕鏈可變區(qū)的核香酸序列，并且圖]1D表示了圖11C中所示的核香酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖11D中用下劃線標出。圖12為huIFNy抗體AD1.4R4P2—G7的輕鏈可變區(qū)和重4連可變區(qū)的核苦酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖12A描述了編碼重《連可變區(qū)的核香酸序列，并且圖12B表示圖12A中所示的核香酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖12B中用下劃線標出。圖12C描述了編碼輕《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖12D表示了圖12C中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖12D中用下劃線*出。圖13為huIFNy抗體AD1JR3P3—G9的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苦酸序列和氨基酸序列的一系列表達。圖13A描述了編石馬重《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖13B表示圖13A中所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖13B中用下劃線標出。圖13C描述了編石馬輕《連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖13D表示了圖13C中所示的核苦酸序列編碼的氨基酸序列?；パa決定區(qū)在圖13D中用下劃線標出。圖14為huIFNy抗體AD1.3R3P6_G10的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的核苷酸序列和-氮基酸序列的一系列表達。圖14A描述了編碼重4連可變區(qū)的核苷酸序列，并且圖4B表示圖14A中所示的核苷酸序列編石馬的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖14B中用下劃線標出。圖14C描述了編碼輕《連可變區(qū)的核苦酸序列，并且圖14D表示了圖]4C中所示的核苦酸序列編碼的氨基酸序列。互補決定區(qū)在圖14D中用下劃線標出。圖15為描述釆用scFv周質提取物抑制IFNY誘導受體基因的曲線圖。定量的scFv提取物按劑量依賴性模式抑制IFNy-誘導受體基因。對于每個scFv克隆，如每個克隆名稱上的柱形所示的不同纟農度(2.7、0.68、0.17、0.043和0.011nM)一皮測i式(乂人左向右^f衣次降低濃度，參見下表3)。圖16.1-12組為描述采用scFv提取物抑制黑素瘤細胞上IFNY-誘導MHCII類表達的一系列曲線圖。提純的全人scFv抑制黑素瘤細胞上IFN誘導MHCII類表達。對scFv克隆()和小鼠抗人IFNymAb16C3(…)進行了描述。圖17.1-7組為描述采用scFv提取物抑制黑素瘤細胞上IFN誘導MHCII類表達的一系列曲線圖，scFv提取物在全人IgG骨架上重建。提純的全人IgGmAbs抑制黑素瘤細胞上IFNy-誘導MIICII類表達。對全人IgG克隆(-X-)和小鼠抗人IFNymAb16C3(-▲-),和R&D系統(tǒng)，Inc.(Minneapolis,MN)小鼠抗人1FNyMAB285(-)進行了描述。圖18為描述Nl-0501hulFNY對人IFNy親和性的曲線圖。圖19為只于比由A6和NI-0501(這里也統(tǒng)稱為"胚系的A6回復突變"或"回復突變的A6"克隆生成的抗體的活性的曲線圖。圖20為描述天然人IFNy上NI-0501huIFNy抗體的活性的曲線圖。圖21A-21F為描述NI-0501huIFNy抗體與不同種類的重組IFNy結合的一系列曲線圖。圖22為描述NI-0501huIFNY抗體中和由天然食蟹猴IFNy誘導的MHCII類上調的能力的一種曲線圖。圖23為描述NI-0501huIFNy抗體阻滯全血中IFNy-"i秀導的IP-10生成的能力的曲線圖。具體實施方式該抗體在這里一致統(tǒng)稱為huIFNy抗體。HuIFNy4元體是，例3。能夠調節(jié)至少一種IFNy生物活性的IFNy拮抗劑或抑制劑。IFNy的生物活性包括，例如結合IFNy受體(IFNy-R)、調節(jié)，如減少或抑制，纟田胞表面上主要組織相容性復合體(MHC)II類表達，和調節(jié)，如減少或抑制，細胞增殖。例如，huIFNy抗體通過全部或局部阻滯IFNy與IFNy受體(IFNy-R)結合來完全或部分抑制IFNy活性。與不結合這里描述的hulFNy抗體情況下IFNy活性水平相比，huIFNy抗體存在下，當IFNy活性水平減少至少95%,如96%、97%、98%、99%或100%時，IFNy抗體被認為完全抑制IFNy活性。與不結合這里描述的huIFNy4元體情況下IFNy活性7j^平相比，huIFNy去t^本存在下，當IFNy活性K平減少小于95%，4卩10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或90%時，1FNy抗體被認為部分抑制IFNy活性。另外，本發(fā)明的huIFNy抗體抑制細胞上IFNi秀導MHCII類表達(參見，如實施例4和5)。優(yōu)選地，huIFNy抗體在濃度至少為0.02nM時，能夠承p制人黑素瘤細月包線Me67.8內大于50%的IFN^誘導的MHCII類表達。例如，抗體顯示出濃度在O.O22nM到0.044nM范圍內，例3口在0.022nM、0.028nM或0.044nM濃度下抑制Me67.8細胞線內IFNy-誘導MHCII類表達大于50%。huIFNy抗體調節(jié)主體內的一種免疫反應，例如，在人主體內的一種免疫反應。優(yōu)選地，huIFNy抗體調節(jié)主體內適應性免疫反應。更優(yōu)選地，huIFNy抗體調節(jié)細月包或細月包介導免疫反應，如周知的Thl-型或Thl-介導反應。例如，這里描述的huIFNy抗體調節(jié)，如減少、抑制或預防過度Thl-介導免疫反應，例如與自體免疫或炎性紊亂如Crohn's疾病、系統(tǒng)性紅斑《良癡、干癬、結節(jié)病、類風濕性關節(jié)炎、血管炎、異位性皮炎和繼發(fā)-進展型多發(fā)性硬化相關的過度Thl-介導免疫反應。如這里4吏用的，術語"過度"Thl-介導免疫反應統(tǒng)指與因子生成水平進行對比，主體內Thl細胞因子如IL-2、IL-3、TNF-alpha(TNFa)和1FNy的提高？K平。為了對作為過度反應的Thl-介導免疫反應進行分類，如通過ELISA或其他測試測量和分析分泌的細胞因子的水平評估Thl細胞因子生成反應的水平。這里描述的huIFNy^t體調節(jié)，如4中制、減少或預防類別4爭換到IgG類型，如IFNY-誘導類型轉換。這些huIFNy抗體調節(jié)，例如，抑制、預防或減少Thl-介導反應并隨后減少IFNY-誘導轉換。通過采用IFNy,例如小鼠或人IFNy(參見，如GenbankAccessionNo.X13274)或其免疫原性片段、書亍生物或變異體對動物進行免疫而產生本發(fā)明的huIFNY抗體。作為選擇，釆用含有編碼IFNy的核酸分子的載體轉染的細胞對該動物進行免疫，使得IFNY在轉染細胞表面進行表達并與其聯合?；蛘撸ㄟ^篩選包含抗體或結合與IFNy的結構域序列結合的抗原的一種文庫得到該抗體。該文庫在如作為與噬菌體外殼蛋白融合的蛋白質或肽的噬菌體中制得，噬菌體外殼蛋白在組合的噬菌體顆粒表面上被表達并且編碼DNA序列包含在噬菌體顆粒(例如，"噬菌體展示文庫")內。本發(fā)明的huIFNy抗體包括，例如，下表1所示的重煉互補確定區(qū)(CDRs)、表2中所示的輕鏈CDRs,和其組合物。表1.結合和中和IFNy的抗體的VH序歹'J<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表2.結合和中和IFNy的抗體的VL序列<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>一種示范性huIFNy單克隆抗體為這里描述的ni-0501抗體。ni-0501抗體為ac1.2r3.p2—a6抗體的回復突變型式。如這里使用的，術語"回復突變"統(tǒng)指使核苷酸或氨基酸殘基突變回復到在胚系序列中相應位置上的核苷酸或殘基。ni-0501抗體包括seqIDNO:l所示核酸序列編碼的重鏈可變區(qū)(seqIDn0:2)，和seQIDNO:6(圖1A-1D)中所示核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:7)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的互補決定區(qū)(CDR)的氨基酸在圖IB和ID中用下劃線標出。(參見，Chothia，C，etal,Nature342:877-883(1989);Kabat,EA,etai,SequencesofProteinofimmunologicalinterest,Fifth.Edition,USDepartmentofHealthandHumanServices,USGovernmentPrintingOffice(1991))。A6抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)。A6抗體的輕《連CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8);EDNQRPS(SEQIDNO:9);和QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)。另一種示范性huIFNy單克隆抗體為這里描述的AC1.2R3.P2—A6^t體("A6")。A6氺t體包4舌SEQIDNO:.02中所示的4亥酉臾序列編石馬的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:103)，和SEQIDNO:104中所示的的核酸序列編^;的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:105)(圖1E-1H)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的互補決定區(qū)(CDR)的氨基酸在圖IF和1H中用下劃線標出。(參見，Chothia,C,etal，Nature342:877-883(1989);Kabat,EA,etal,Seq職cesofProteinofimmunologicalinterest,FifthEdition,USDepartmentofHealthandHumanServices,USGovernmentPrintingOffice(1991))。A6抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)。A6抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8);EDNQRPS(SEQIDNO:9);和QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)。AC1.2R3P2_B4抗體(這里也統(tǒng)稱為"B4")包括SEQIDNO:11中所示的核酸序列編碼的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:12),和SEQIDNO:14中所示的的核酸序列編爿碼的輕《連可變區(qū)(SEQIDNO:15)(圖2A-2D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖2B和2D中用下劃線標出。B4抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DHSSGWYVISGMDV(SEQIDNO:13)。B4抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSNDSDNVV(SEQIDNO:18)。AD1.4R4P1—B9抗體(這里也統(tǒng)稱為"B9")包括SEQIDNO:19中所示的核酸序列編碼的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:20),和SEQIDNO:22中所示的的核酸序列編碼的輕《連可變區(qū)(SEQIDNO:23)(圖3A陽3D)。包4舌3。Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖3B和3D中用下劃線標出。B9抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DLTVGGPWYYFDY(SEQIDNO:21)。B4抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIVSNYVQ(SEQIDNO:8);DDDQRPS(SEQIDNO:25);和QSYDSSNVV(SEQIDNO:26)。AD1.4R4P2—C9抗體(這里也統(tǒng)稱為"C9")包括SEQIDNO:27中所示的核酸序列編石馬的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:28)，和SEQIDNO:30中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:31)(圖4A-4D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖4B和4D中用下劃線標出。C9抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGWNALGWLES(SEQIDNO:29)。C94元體的輕4連CDRs具有下列序列TRSGGSIGSYYVQ(SEQIDNO-.32);DDKKRPS(SEQIDNO:33);和QSYDS麗LW(SEQIDNO:34)。AC1.4R4P2—C10抗體(這里也統(tǒng)稱為"C10")包4舌SEQIDNO:35中所示的核酸序列編碼的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:36)，和SEQIDNO:37中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:38)(圖5A-5D)。包4舌如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖5B和5D中用下劃線標出。C104元體的重！連CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)。C10抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGTIASNYVQ(SEQIDNO:39);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSYDNSNHWV(SEQIDNO.40)。AC1.2R3P7JD3抗體(這里也統(tǒng)稱為"D3")包括SEQIDNO:41中所示的4亥酸序列編石馬的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:42),和SEQIDNO:46中所示的的核酸序列編碼的輕《連可變區(qū)(SEQIDNO:47)(圖6A-6D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖6B和6D中用下劃線標出。D3抗體的重鏈CDRs具有下列序列:SNAMS(SEQIDNO:43);TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQIDNO:44);和GTELVGGGLDN(SEQIDNO:45)。D3抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TGSGGSIATNYVQ(SEQIDNO:48);EDNQRPS(SEQIDNO:17)和QSYDSDNHHW(SEQIDNO:49)。AD1.2R2P2—D6抗體(這里也統(tǒng)稱為"D6")包括SEQIDNO:50中所示的核酸序列編碼的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:51),和SEQIDNO:53中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:54)(圖7A-7D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖7B和7D中用下劃線標出。D6抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGWNALGWLES(SEQIDNO:29)。D6抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:55);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSYDSSNQEVV(SEQIDNO:56)。AC1.2R2P2—D8抗體(這里也統(tǒng)稱為"D8")包4舌SEQIDNO:57中所示的核酸序列編碼的重4連可變區(qū)(SEQIDNO:58)，和SEQIDNO:59中所示的的核酸序列編碼的輕嗜連可變區(qū)(SEQIDNO:60)(圖8A-8D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖8B和8D中用下劃線標出。D8抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)。D8抗體的輕寺連CDRs具有下列序列TRSSGSrVSNYVQ(SEQIDNO:8);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSYDSNNFWV(SEQIDNO:61)。AD1.3R3P6J31抗體(這里也統(tǒng)稱為"El")包括SEQIDNO:62中所示的核酸序列編碼的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:63),和SEQIDNO:65中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:66)(圖9A-9D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖9B和9D中用下劃線標出。El抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和RSFDSGGSFEY(SEQIDN():64)。El抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSrVSNYVQ(SEQIDNO:8);DDDQRPS(SEQIDNO:25);和QSYDSSNW(SEQIDNO:26)。AD1.3R3P5—F8抗體(這里也統(tǒng)稱為"F8")包括SEQIDNO:67中所示的核酸序列編碼的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:68)，和SEQIDNO:70中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:71)(圖10A-10D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖10B和IOD中用下劃線標出。F8抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和VGSWYLEDFDI(SEQIDNO:69)。F8抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVH(SEQIDNO:72);EDNRRPS(SEQIDNO:9);和QSSDTTYHGGVV(SEQIDNO:73)。AD1.3R3P6—F9抗體(這里也統(tǒng)稱為"F9")包括SEQIDNO:74中所示的4亥S吏序列編石馬的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:75),和SEQIDNO:77中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:78)(圖11A-11D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖11B和IID中用下劃線標出。F9^t體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和GGNYGDYFDYFDY(SEQIDNO:76)。F9抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSYEGF(SEQIDNO:79)。AD1.4R4P2—G7抗體(這里也統(tǒng)稱為"G7")包括SEQIDNO:80中所示的核酸序列編碼的重鏈可變區(qū)(SEQIDNO:81),和SEQIDNO:82中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:83)(圖12A-12D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖12B和12D中用下劃線標出。G7抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGWNALGWLES(SEQIDNO:29)。G7抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TG.RNGNIASNYVQ(SEQIDNO:84);EDTQRPS(SEQIDNO:85);和QSSDSNRVL(SEQIDNO:86)。AD1.1R3P3_G9抗體(這里也統(tǒng)稱為"G9")包括SEQIDNO:87中所示的核酸序列編碼的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:88)，和SEQIDNO:90中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:91)(圖13A-13D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖13B和13D中用下劃線標出。G9抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DFWVITSGNDY(SEQIDNO:89)。G9抗體的輕鏈CDRs具有下列序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);EDNRRPS(SEQIDNO:9);和QSFDSTNLVV(SEQIDNO:92)。AD1.3R3P6—G10抗體(這里也統(tǒng)稱為"G10")包括SEQIDNO:93中戶斤示的4t酸序列編碼的重《連可變區(qū)(SEQIDNO:94),和SEQIDNO:95中所示的的核酸序列編碼的輕鏈可變區(qū)(SEQIDNO:96)(圖]4A-14D)。包括如Chothia等和E.A.Kabat等定義的CDR的氨基酸在圖14B和14D中用下劃線標出。Gl0抗體的重鏈CDRs具有下列序列SYAMS(SEQIDNO:3);AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4);和DGWNALGWLES(SEQIDNO:29)。G10抗體的輕鏈CDRs具有下列序列AGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:97);EDNQRPS(SEQIDNO:17);和QSYSYNNQW(SEQIDNO:98)。本發(fā)明的huIFNy抗體也包括重鏈可變氨基酸序列與SEQIDNO:2、12、20、28、36、42、51、58、63、68、75、81、88、94、或103(圖l-14)的氨基酸序列有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同源和/或輕4連可變氨基酉臾與SEQIDNO:7、〗5、23、31、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105(圖1-14)的氨基酸序列有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或更多同源的4元體?；蛘?，單克隆4元體為結合與NI-0501、A6、B4、B9、C9、CIO、D3、D6、D8、El、F8、F9、G7、G9或G10—才羊的表4立的抗體。除非另外定義，結合本發(fā)明使用的科學技術術語應該具有本領域普通沖支術人員普遍理解的含義。另外，除非前后文必需，單數術語應包括復數并且復數術語應包括單數。通常，與這里描述的細胞核組織培養(yǎng)、分子生物學、和蛋白質和寡核香酸或多聚核苷酸化學和雜交相關的術語和:技術是本領域中眾所周知的和普遍采用的。標準一l術用于重組DNA、寡核苷酸合成、和組織i咅養(yǎng)和轉化(例如，電穿孔、脂質體)。酶反應和提純技術按照廠商i兌明書或按照本領i或中普遍采用的或按照這里描述的進4亍實施。現有技術和方法通常按照本領域中眾所周知的常*見方法和在被51用的和在本詳述中討i侖的多種通常和更特異'l"生參考文獻中4笛述的進4亍實施。參見，例嗩口Sambrooketal.MolecularCloning:ALaboratoryManual(2ded.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1989))。這里描述的與分析化學、有才幾合成化學、和藥物和制藥化學相關的術i吾和實-驗室工作程序和4支術是本領域中眾所周知的并普遍采用的。標準4支術用于化學合成、化學分析、藥物制備、配制、和輸送、和患者治療。如依照本公開采用的,下列術語,除非另外指出，應理解為具有下列含義如這里^吏用的，術語"去i:體"統(tǒng)指免疫3求蛋白分子和免疫5求蛋白分子(Ig)的免疫活性部分，例如該免疫球蛋白分子含有特異性結合(與發(fā)生免疫反應)一種抗原的分子。這種抗體包括，但不限于，多克隆、單克隆、嵌合、單鏈、Fab、Fab,和FU')2片段、和Fab表達文庫。"特異性結合"或"與發(fā)生免疫反應"意指該抗體與預期抗原的一種或一種以上抗原決定簇并不與其它多肽反應(例如，結合)或按照更低親和力(Kd〉10—6)結合其它多肽。眾所周知，基本抗體結構單元包括一種四聚體。每個四聚體由兩對相同的多肽《連，每對具有一種"輕"4連(約25kDa)和一種"重"鏈(約50-70kDa)。每個鏈的氨基末端部分包括約100到110個或更多個主要負責抗原識別的氨基酸可變區(qū)。每個鏈的羧基末端部分確定主要負責效應因子功能的恒定區(qū)。人輕嗜連分為K和X輕《連。重《連分為p、S、Y、(X、或￡,并一夸^t體類型分別定義為IgM、IgD、IgA、和IgE。在輕《連和重4連內，可變區(qū)和恒定區(qū)通過約12個或更多氨基酸的"J"區(qū)結合起來，重鏈也包括約10個或更多氨基酉臾的"D"區(qū)。一4殳參見FmidamentalImmunologyCh.7(Paul,W.,ea.,2nded.RavenPress,N.Y.(1989))。每個輕/重鏈對的可變區(qū)形成抗體結合位。如這里采用的，術語"單克隆抗體"(MAb)或"單克隆抗體組合物"，統(tǒng)指由一組獨特的輕一漣基因產物和獨特的重鏈基因產物組成的抗體分子。特另'J地，單克隆抗體的互補性決定區(qū)(CDRs)在所有該組分子中是相同的。Mabs包含能與4元原的特$朱表位—進行免疫反應的抗原結合位，該抗原其特征在于具有獨特結合親和性。一般來說,人的抗體分子是關于IgG、IgM、IgA、IgE和IgD類的任何一種，因分子中重鏈性質而彼此不同。該種類也具有亞類，如IgG,、IgC;2和其他的,.此外，在人體內，輕鏈可為K-鏈或X鏈。術語"抗原結合位"、或"結合部分"統(tǒng)指參與抗原結合的免疫球蛋白分子的一部分。抗原結合位由重("H")鏈和輕("L")鏈N-末端可變("V")區(qū)的氨基酸殘基組成。重鏈和輕鏈V區(qū)內的三個高度分支，統(tǒng)稱為"高變區(qū)"，插入到被稱為"骨架區(qū)"或"FRs"的更保守側枝之間。因此，術語"FR"統(tǒng)指在免疫球蛋白內高變區(qū)之間、和鄰接高變區(qū)天然發(fā)現的氨基酸序列。在抗體分子內，一種輕鏈的三個高變區(qū)和一種重《連的三個高變區(qū)相對于三維空間內;f皮此傾向于形成一種抗原結合面。抗原結合面互補于一皮結合抗原的抗原結合面，并且重《連和輕鏈的每一種的三個高變區(qū)統(tǒng)稱為"互補性決定區(qū)"或"CDRs"。分配給每個結構域的氨基酸與具有免疫學重要性的蛋白質的Kabat序列的定義一致(NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1987and1991))，orChothia&LeskJ.Mol.Biol.196:901-917(1987),Chotliiaetal.Nature342:878-883(1989)。如這里采用的，術語"表位"包括能夠特異性結合免疫球蛋白、scFv、T-細胞受體的任何蛋白質決定簇。術語"表位"包括能夠特異性結合免疫球蛋白、或T-細胞受體的任何蛋白質決定簇。表位決定簇通常組成分子如氨基酸或糖側鏈的化學活性面基團并通常具有特殊的三維結構特征，以及荷質比特征。當離解常數<1jiM;優(yōu)選<:100nM,最優(yōu)選<10nM時，抗體被認為特異性結合一種抗原。如這里采用的，術語"免疫球蛋白結合"，和"免疫球蛋白結合性質"統(tǒng)指該類型的非共價作用，其發(fā)生在免疫球蛋白分子和對免疫球蛋白具有特異性的抗原之間。免疫球蛋白結合作用的強度、或親和性可釆用相互作用的離解常數(Kd)表示，其中較小Kd.表示H大親和性。一皮篩選多肽的免疫J求蛋白結合性質采用本領域中眾所周知的方法進行量化。該種方法需要測量抗原-結合位/抗原復合體形成和離解的速度，其中該速度取決于復合體配對的濃度、相互作用的親和力、和同等影響兩種反應方向速度的幾何參數。因此，"結合速率"(K。n)和"離解速率"(K。ff)可通過濃度計算和離解的和實際速率進行確定。(參見Nature361:186-87(1993))。K。ff/K化比值取消與親和力不相關的所有參數，等于離解常數Kd。(通常參見，Daviesetal.(1990)AnnualRevBiochem59:439-473)。依氺居纟至觀'H式4口本々頁i或的4支術人員周^口的》文射酉己基纟吉合法或類似方法進行測量，當平衡結合常數(Kd)isjaM,優(yōu)選<100nM,更優(yōu)選100pM，最優(yōu)選<100pM到約1pM,本發(fā)明抗體蜂皮認為特異性結合IFNy表位。本領域的4支術人員將^人識到，在沒有不適當實-驗的情況下，有可能通過是否先前的阻止后面的結合I.FNy抗原多肽來確定是否人單克隆抗體具有與本發(fā)明的人單克隆抗體(例如，單克隆抗體N-0501、A6、B4、B9、C9、CIO、D3、D6、D8、El、F8、F9、G7、G9或G10)相同特異性。依據本發(fā)明的人單克隆抗體結合的降低顯示出，是否被測試的人單克隆抗體與本發(fā)明的單克隆抗體竟爭，兩種單克隆抗體結合相同的、或緊密相關的表位。確定是否人單克隆抗體具有本發(fā)明的人單克隆抗體特異性的另一種方法是采用具有正常反應活性的IFNy抗原多肽前培養(yǎng)本發(fā)明的單克隆抗體，然后加入進4于測試的人單克隆抗體來確定是否被測試的人單克隆抗體被抑制其結合IFNy抗原多肽的能力。如果測試的人單克隆抗體被抑制，那么，它多半具有本發(fā)明單克隆抗體相同的、或功能等同的表位特異性。本領i或中周知的多種方法一皮用于制備抗蛋白如IFNy蛋白、或抗彩f生物、片革殳、類似物、同系物或其同源物的單克隆抗體。(參見，如Antibodies:A'LaboratoryManual,HarlowE,and.LaneD,1988,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,incorporatedhereinbyreference)。全人抗體為抗體分子，其中包括CDRs的輕鏈和重鏈的完整序列源自人基因。這種抗體稱為"人抗體，,，或"全人抗體'。，人單克隆抗體3皮制備出，例如，采用下面提供的實施例中進行描述的方法。人單克隆抗體也能采用三體瘤技術；人B-細胞雜種瘤技術制得(參見，Kozbor,etal.,1983ImmunolToday4:72);采用EBV雜種瘤才支術制-備人單克隆抗體(參見，Cole,etal.,1985In:MONOCLONALANTIBODIESANDCANCERTHERAPY,AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96)。人單克隆抗體可一皮采用并可采用人雜種瘤(參見，Cote,etal.,1983.ProcNatlAcadSciUSA80:2026-2030)或通過用EB病毒體外轉化人B-細胞制得(參見Cole,etal.,1985In:MONOCLONALANTIBODIESANDCANCERTHERAPY:AlanR.Liss,Inc.,pp.77-96)。采用眾所周知的技術，如采用蛋白A或蛋白G的親和層一斤法才是純抗體，該親和層析法主要沖是供免疫血清的IgG片斷。隨即，或可供選擇地，特異性抗原可被固定在一種層析柱上通過免疫親和層析法提純免疫特異性抗體，該特異性抗原為免疫球蛋白的靶點，或其表位。如D.Wilkinson對免疫球蛋白的提純進行了討論(TheScientist,publishedbyTheScientist,Inc.,PhiladelphiaPA,Vol.14,No.8(April17,2000),pp.25-28)。可預期的是，修飾本發(fā)明抗體的效應子功能，以致-提高，如進行免疫相關疾病治療中抗體的功效。例如，半胱氨酸殘基可被引入到Fc區(qū)，從而使得該區(qū)域內《連間二硫4建形成。因此，生成的同型二聚體抗體可改善內化能力和/或^是高補體介導細胞殺傷和抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。(參見，Caroneta.，J.ExpMed.,176:1191-1195(1992)和Shopes,J.Immunol"148:2918-2922(1992))?；蛘?，抗體可遺傳工程學方法生產出，其具有雙Fc區(qū)并從而可提高補體融解和ADCC性能(參見，Stevensonetal.,Anti-CancerDrugDesign,3:219-230(1989))。本發(fā)明也包括Fv,Fab，F化,和F(ab')2huIFNy片段、單鏈huIFNy抗體、雙特異性huIFNy抗體和偶耳關物huIFNy抗體。雙特異性抗體是對至少兩種不同抗原具有結合特異性的抗體。在本發(fā)明中，結合特異性中的一種是針對IFNy。第二個結合靶點為任何其他抗原，并且優(yōu)勢為細胞表面蛋白或受體或受體亞單位。制備雙特異性抗體的方法是本領域中周知的。傳統(tǒng)上，^又特異性抗體的重組制備是基于兩種免疫球蛋白重鏈/輕鏈對的共表達，兩個重4連具有不同特異性(MilsteinandCuello,Nature,305:537-539(1983))。由于隨才幾分類的免疫球蛋白重鏈和輕鏈，這些雜種瘤(四源雜交瘤)生成十個不同抗體分子的潛在混合物，^又其中一種具有正確的雙特異性結構。正確分子的才是純通常采用親和層沖斤法步-驟完成。類似、的方法在1993年5月13日7>布的WO93/08829和Trauneckeretal.,EMBOJ.,10:3655-3659(1991)中被公開。具有預期結合特異性(抗體-抗原結合部位)的抗體可變結構域可融合免疫5求蛋白恒定結構i或序列。該融合優(yōu)選具有免疫J求7蛋白重鏈結構域，包括至少CH2和CH3鉸鏈區(qū)。優(yōu)選具有包含在至少一種融合中輕《連結合位的第一種重鏈恒定區(qū)(CH1)。編碼免疫球蛋白重鏈融合的DNA和必要時，免疫球蛋白輕鏈，一皮插入到分離的表達栽體,并共轉染到適宜的宿主有^L體內。對于生成雙特異性抗體的進一步詳情參見，Sureshetal.，MethodsinEnzym()logy,121:210(1986)。依據WO96/27011中描述的另一種方法，一對抗體分子間的界面可纟皮遺傳工程學方法最大化二聚體的百分率，該二聚體由重組細胞培養(yǎng)物中得到。優(yōu)選界面包括至少抗體恒定結構域CH3區(qū)域的一部分。在該方法中，第一種抗體分子的界面的一種或一種以上小氨基酸側鏈一皮4支大側《連(例如，酪氨酸或色氨酸)耳又代。通過采用4交小氨基酸側4連(例如，丙氨酸或蘇氨酸)耳又代4交大氨基酸側鏈，等同于或類似于較大側鏈尺寸的代償性空腔建立在第二個抗體分子界面上。這提供了提高異型二聚體產量超過其他不必要的最后產物如同型二聚體的機理。雙特異性^t體可制成全長^L體或抗體片IS:(例力口，F(ab')2又又行了描述。例如，雙特異性抗體可采用化學4建合制得。Brermanetal"Science229:81(1985)描述了一種方法，其中完整抗體被蛋白裂解而生成F(ab')2片^殳。這些片^殳在二巰基配位助劑亞砷酸鈉存在下被還原來穩(wěn)定鄰近的巰基并阻止分子內二硫化物形成。然后，生成的Fab'片^a被轉變成硫代硝基笨(TNB)衍生物。然后，Fab'-TNB衍生物中的一種通過采用巰基乙胺還原而被轉變成Fab'—巰基并與等摩爾量的其他Fab'-TNB衍生物混合形成雙特異性抗體。制備的雙特異性抗體可用作酶的選4奪性固定的試劑。此夕卜，Fab'片段可直接從E.coli中得到并化學結合形成雙特異性抗體。Shalabyetal"J.Exp.Med.175:217-225(1992)描述了全人性化雙特異性抗體F(ab')2分子的制備。每個Fab'片段從E.coli中分泌出并經過體外直接化學結合形成雙特異性抗體。該形成的雙特異性抗體能夠結合過表達ErbB2受體的細胞和正常人T纟田月包，以及引發(fā)抗人乳月泉腫瘤耙點的人細月包毒素淋巴細月包的細J包溶解酶活性。制備和從重組細胞培養(yǎng)物中直接分離雙特異性抗體的多種技術已經進行了描述。例如，采用亮氨酸拉鏈制備雙特異性抗體。Kostelnyetal"J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)。Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈肽通過基因融合連接到兩個不同抗體的Fab'部分?？贵w同型二聚體在鉸鏈區(qū)被還原形成單體，然后再氧化形成抗體異型二聚體。這種方法也可被用于制備抗體同型二聚體。Hollingeretal"Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)描述的"雙鏈抗體"技術已經提供了制備雙特異性抗體片段的可供選擇機理。該片段包括與通過一種接頭與輕鏈可變區(qū)(V0連接的重鏈可變區(qū)(VH),該4妄頭太短以至于在同一4連上的兩個結構域之間不能配對。因此，一種片4殳的Vh和V一結構域不強行與另一種片4炎的Vj^和VH結構:威配對，乂人而形成兩個抗原結合位。通過使用單鏈Fv(sFv)二聚體制備雙特異性抗體片段的另一種策田各已經進4亍了才艮道。參見Gmberetal.,J.Immunol.152:5368(1994)。具有大于2價的抗體也在考察中。例如，三特異性抗體可被制得。Tuttetal.，丄Immunol.147:60(1991)。示范性雙特異性抗體可結合兩個不同的表位，至少其中一種存在于本發(fā)明的蛋白質抗原中。或者，一種免疫球蛋白分子的抗-抗原臂可與一種結合白細胞如T-細胞受體分子(例如，CD2、IFNy、CD28、或B7)、或IgG的Fc受體(FcyR)嗦口FcyRI(CD64)、FcyRII(IFNy2)和FcyRIII(CD16)上的i秀導分子的一種臂結合使細胞防御機理焦點引入到細胞表達特殊抗原上。雙特異性抗體也可用于表達一種特殊抗原的細胞的直接細胞毒類藥物。這些抗體具有一種抗原結合臂和結合一種細胞毒類藥物或一種放射性核素螯合劑如EOTUBE、DPTA、DOTA、或TETA的結合臂。另一種重要的雙特異性抗體結合這里描述的蛋白抗原并進一步結合《且織因子(TF)。偶聯物抗體也在本發(fā)明界定的范圍內。偶聯物抗體由兩個共價鍵連接的抗體組成。這種抗體，例如被提出使免疫系統(tǒng)細胞耙向不必要細月包(美國專利No.4，676,980),并治療HIV感染(WO91/00360;WO92/200373;EP03089)。可期望的是，該抗體可采用合成蛋白化學中周知的方法在體外制得，包括涉及交聯劑的那些。例如，免疫毒素可采用二石克化物交換反應或通過形成一種為乾醚4建而構成。用于本目的的適宜試劑的實施例包括亞氨基石克西f和methyl-4-mercaptobutyrimidate禾口嗦口在美國專利No.4,676,980中7>開的那些。本發(fā)明也關于包括與細胞毒類藥物如一種毒素(例如，細菌、真菌、植物、或動物的酶活性毒素免疫偶聯物，或其片段)，或放射性同位素(例如，放射性偶聯物)?？刹捎玫拿富钚远舅睾推淦伟ò缀鞟鏈、白喉毒素的非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單胞菌)、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮素A4連、a-八疊J求菌、油桐蛋白、康乃馨蛋白、垂序商陸蛋白(PAPI、PAPII、和PAP-S)、苦瓜承卩制劑、瀉果素、巴豆毒素、月巴皂草抑制劑、gelonin、mitogillin、restrictocin、酚霉素、依諾霉素、和鐮刀菌毒素。多種》文射性核對生產》文射性偶聯物抗體是可利用的。實施例包括^Bi、1311、mIn、9()Y、和186Re。抗體和細胞毒素藥物的偶聯物采用多種雙功能蛋白偶聯劑如N-琥珀酰亞胺-3-(2-嘧p定二石危)丙酸酯(SPDP)、亞氨石克醇(IT)、酰亞胺酯的雙功能衍生物(例如，己二(亞胺)酸二曱酯鹽酸鹽)、活性酯(例如，辛二酸二琥珀酰亞胺酯)、醛(例如，戊二醛)、雙疊氮化合物(例如，雙(p-疊氮苯曱?；?已二胺、雙重氮衍生物(例如，雙-(p-重氮苯甲?；?-乙二胺、二異氰酸酯(例如，曱苯-2,6-二異氰酸酯)和雙-活性氟化合物(例如，1,5-二氟-2，4-二硝基苯)制得。例如，蓖麻蛋白免疫毒素可依據Vitettaetal.,Science238:1098(1987)中4苗述的方法制4尋。石友—14才示記的l-異硫氰基苯曱基-3-甲基二乙烯三胺五乙酸(MX-DTPA)為^:射性核苷酸與抗體偶耳關用的一種示范性螯合劑。(參見W094/11026)。本領域中的那些普通技術人員將認識到大量可能基團可與生成的抗體偶聯或與本發(fā)明的其他分子偶聯。(參見，例如，"ConjugateVaccines",ContributionstoMicrobiologyandImmunology,J.M.CruseandR.E.Lewis,Jr(eds),CargerPress,NewYork,(1989),全部內容通過引述合并于本文中)。偶耳關通過一些化學反應實現，該化學反應將結合兩個分子只要抗體和另一種基團保持其各自活性。該鏈接可包括許多化學機理，例如共價結合、親和性結合、插入、g己位結合和絡合作用。然而，優(yōu)選的結合為共價結合。共價結合或者經現有側鏈直接縮合或經插入外部橋接分子而得到。對于其他分子，許多二價或多價連接試劑在偶聯蛋白質分子例如本發(fā)明的抗體中是有效的。例如，代表性偶聯劑可包4舌有才幾化合物例如石克酯、-友二亞胺、琥珀酰亞胺酯、二異氰酸酯、戊二醛、重氮苯和己二胺。該列表目的不在于羅列在本領域中多種類型的偶耳關劑，而是示范出更普通偶聯劑。(參見KillenandLindstrom,Jour.Imm亂133:1335-2549(1984);Jansenetal"ImmunologicalReviews62:185-216(1982);和Vitettaetal"Science238:1098(1987)。優(yōu)選的接頭在文獻中進4亍了描述(參見，例戈口Ramakrishnan,S.etal.,CancerRes.44:201-208(1984)描述了MBS(M-maleimidobenzoyl畫N-hydroxysuccinimideester)的Y吏用)。也參見，美國專矛JNo.5,030,719，描述了與一種抗體通過寡肽接頭偶聯的卣化乙酰肼衍生物。尤其優(yōu)選接頭包括(i)EDC(1-乙基-3-(3-二曱基氨基-丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽；(ii)SMPT(4-琥珀酰亞胺基氧基羰基-a-曱基-a-(2-吡啶基-二石克)隱甲苯(PierceChem.Co.,Cat.(21558G);(iii)SPDP(琥珀酰亞胺基-6[3-(2-吡啶基二碌u代)丙酰胺基]己酸酉旨(PierceChem.Co.,Cat#21651G);(iv)硫代-LC-SPDP(硫代琥珀酰亞胺基6[3-(2-吡啶二巰基)-丙酰胺]己酸硫代琥珀酰亞胺酯(PierceChem.Co.Cat.#2165-G);和(v)與EDC偶聯的碌"<-NHS(N-羥基碌u^畫琥珀酰亞胺PierceChem.Co.,Cat.#24510)。上面描述的接頭包含具有不同特征的組分，因此導致區(qū)別生理化學性質的偶耳關物。例如，烷基羧酸酯的石充代-NHS酯比芳香族羧酸酯的硫代-NHS酯更穩(wěn)定。進一步，接頭SMPT包含空間位組二硫鍵，并可形成具有提高穩(wěn)定性的偶聯物。雙硫鍵一般沒有其他鏈4妻穩(wěn)定，因為雙石克4建在體外被切割，導致更少的可利用的偶聯物。特殊地，硫代-NHS可提高碳化二亞胺偶聯的穩(wěn)定性。當在與石克代-NHS偶聯中被使用時，碳化二亞胺偶聯(例如，EDC)形成酯，這種酯比單獨的碳化二亞胺偶聯反應更耐水解。這里采用的術語"分離的多聚核苦酸"應意指基因組、cDNA或人造起源或其一些組合的多聚核苦酸，由于其起源"分離多聚核苷酸"(l)與所有或部分的多聚核苷酸相關，其中"分離多聚核苷酸"自然界中不存在，(2)可與多聚核苷酸鏈接，其在自然界中不鏈接，或(3)作為較大序列的一部分在自然界中不存在。這里提到的術語"分離的蛋白"意指cDNA、重組RNA、或人造起源或其一些組合物的一種蛋白質，由于其起源"分離多聚核苷酸"(l)與自然界發(fā)現的蛋白質不相關，(2)無相同來源的其他蛋白質，例如，無月交原蛋白，(3)由來自不同種類的細胞表達，或(4)在自然界中不存在。術語"多肽"在這里被用作專業(yè)術語統(tǒng)指天然蛋白質、多肽序列的片段、或類似物。因此，天然蛋白質片段、和類似物為多肽類的種類。依照本發(fā)明優(yōu)選的多肽包括圖1B、2B、3B和4B表示的人重鏈免疫球蛋白分子和圖1D、2D、3D和4D表示的輕鏈免疫球蛋白分子，以及包括重鏈免疫球蛋白分子與輕鏈免疫球蛋白分子例如K輕《連免疫5求蛋白分子結合形成的抗體分子，反之亦然，以及其片)殳和類似、物。這里采用的用于對象的術語"天然生成"統(tǒng)指能在自然界中自然發(fā)現對象的事實。例如，多肽或多聚核苷酸序列，多肽或多聚核苷酸序列存在于有才幾體中(包括病毒)，可從自然界內的一種來源中分離出不經過人在實-驗室中人為》務飾，則是天然生成。這里采用的術語"可纟喿作鏈4妄"統(tǒng)指被描述的組分位置處于^吏其能夠按照目的方式發(fā)揮作用的關聯中。與編碼序列可操作鏈接的對照序列以在與對照序列兼容的條件下獲得編碼序列表達的方式一皮結合。這里采用的術i吾"對照序列"統(tǒng)指對影響其結合的編石馬序列的.表達和處理所必需的多聚核苦酸序列。依據原核生物中宿主有木乙體，這種對照序列的性質不同，這種對照序列通常包括啟動子、核糖體結合位、和真核細胞中轉錄終止序列，通常，這種對照序列包括啟動子和轉錄終止序列,.,術語"對照序列"目的最小化包括對表達和處理必要的所有組分，并且也可包括對如前導序列和融合部分序列有利的其他組分。如這里提到的術語"多聚核苷酸"意指一種聚合的長度至少10個-成基的核苷酸、或核糖核苦酸或脫氧核苷酸或任一類型核苷酸的-f'務飾形式。該術語包括單《連或雙《連的DNA。這里提到的術語寡核香酸包括經天然生成的寡核苦酸鏈、和天然生成寡核苷酸4連連4姿在一起的{奮飾的核苦酸、和非天然形成的寡核苷酸鏈。寡核苷酸為多聚核苷酸亞型，通常包括200個堿基或更少堿基的長度。優(yōu)選的寡核芬酸長度為10到60個堿基對，最《尤選12、3、14、15、16、17、18、19、或20到40個;咸基。盡管寡核苷酸可為雙鏈，例如用在基因突變構建中，寡核苷酸通常為單鏈，例如，纟冢針的寡核苷酸。本發(fā)明的寡核苷酸或者正義寡核苷酸或反義寡核苷酸。這里纟是到的術語"天然生成的核苦"包4舌脫氧核并唐核苷和核沖唐核苦。這里通指的術語"修飾核苦酸"包4舌具有^f奮飾的或耳又代的糖基和類似基團的核苷酸。這里提到的術語"寡核苷酸鏈接"包括寡核苦酸4建合例如碌b^R/粦酸酯、二石克石粦酸酯、phosphoroselerloate、phosphorodiselenoate、phosphoroanilothioate,phoshoraniladate,phosphoronmidate詳口類4以凈勿。參見^口LaPlancheetal.Nucl.AcidsRes.4:9081(1986);Stecetal.J.Am.Chem.Soc.106:6077(1984),Steinetal.NucLAcidsRes.16:3209(1988),Zonetal.AntiCancerDrugDesign6:539(1991);Zonetal.OligonucleotidesandAnalogues:APracticalApproach,pp.87-108(:F.Eckstein,Ed.,OxfordUniversityPress,OxfordEngland(1991));Stecetal.U.S.PatentNo.5,151，510;UhlmannandPeymanChemicalReviews90:543(1990)。必要時，寡核苦酸可包4舌監(jiān)測用標記物。這里提到的術語"選擇性雜化"意指直接和特定結合。依據本發(fā)明的多聚核苷酸、寡核苷酸和其片4殳在雜化和清洗條件下選4奪性雜化核酸鏈，這種條件最小化可估量的對非特異性核酸可探測結合。高嚴謹條件可用于得到本領域中和這里討論的周知的選擇性雜化條件。通常，多聚核苷酸、寡核苷酸、和本發(fā)明的片段之間的核酸序列和主體的一種^亥S史序列^1夸有至少80%，更典型至少85%、90%、95%、99%、和100%的優(yōu)選一皮才是高的同源性。兩個氨基酸序列是同源的，如果其序列之間有局部或全部等同。例^口，85%同源寸生意才旨兩沖、序歹」4安月、最.大匹商己進4亍4#歹寸日于，85%的氨基酸是相同的?？障?進行匹配的兩個序列中的任何一種內)允許在最大匹配中，5個或小于5個的空隙長度是優(yōu)選的,具有2個或小于2個的空隙長度是更優(yōu)選的?？晒┻x纟奪地和優(yōu)選地，兩個蛋白序列(或源自它們的具有至少30個氨基酸長度的多肽序列)是同源的，如術i吾在這里^皮采用，如果它們具有大于5(標準偏差單位內)的比對分數，采用具有突變數據矩陣和空隙罰分6或大于6的禾呈序ALIGN。參見Dayhoff,M.O.,inAtlasofProteinSequenceandStructure,pp.101-110(Volume5,NationalBiomedicalResearch.Foundation(1972》andSupplement2tothisvolume,pp.1-10。如果當釆用ALIGN程序進行最佳排列時，它們的氨基酸大于或等于50%的等同，兩個序列或其部分更優(yōu)選同源。術語"相應于"在這里被采用意指一種多聚核苷酸序列與所有或部分參考多聚核苷酸序列同源(例如，等同的，非嚴才各進化相關的)，或者意指一種多肽序列與參考多肽序列等同。相反，術語"互補于"在這里一皮采用意指該互補性序列與所有或者部分參考多聚核苷酸序列同源。舉個例子，核苷酸序列"TATAC"對應于參考序列"TATAC"并與參考序列"GTATA"互補。下列術語用于描述兩個或多個多聚核苷酸或氨J^酸序列之間的順序關系"參考序列"、"比對窗口"、"序列一致性""序列一致性百分比"、和"高度同源"。"參考序列"為作為序列比對基礎的確定序列，參考序列為4交大序列的亞集,例如,全長cDNA或序列列表中給出的基因序列的片斷或者可包括完整cDNA或基因序列。一般地，參考序列為至少18個核苷酸或6個氨基酸長度，常常為至少48個核苷酸或16個氨基酸長度。因為兩個多聚核苷酸或氨基酸序列每一種可(l)包括兩個分子間相似的序列(例如，完整多聚核苷酸或氨基酸序列的一部分)，和(2)可進一步包括兩個核苷酸或氨基酸序列之間不同的序列，兩個(或更多)分子之間的序列比對典型地通過在"比對窗"比對兩個分子的序列來鑒別和比對序列相似性的局部區(qū)而完成。"比對窗",如這里采用的，統(tǒng)指至少18個鄰4妄核苷酸位置或6個氨基酸的方案片斷，其中多聚核苷酸序列或氨基酸序列可與至少18個核苷酸或6個氨基酸序列進行比對并且其中，與兩個序列優(yōu)化比對算法的參考序列(不包括添加或缺失)對比，比對窗中的多聚核苷酸序列的一部分可包括20%或更少(例如，空隙)的添力。、缺失、耳又代、和類似處理。排列比對窗的序列優(yōu)化比對算法可通過localhomologyalgorithmofSmithandWatermanAdv.Appl.Math.2:482(1981)、homologyalignmentalgorithmofNeedlemanandWimschJ.Mol.Biol.48:443(1970)、thesearchforsimilaritymethodofPearsonandLipmanProc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)85:2444(1988)、運算方法(Wisconsin遺傳學軟件包7.0版(GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.,Madison,Wis.)中GAP、BESTFIT、FASTA、和TFASTA)、Geneworks,orMacVectorsoftwarepackages)、或通過7見察來進4亍處理，經多種方法生成的最佳比對算法(例如，生成比對窗中同源的最高百分比)^皮選4奪。術語"序列一致性"是指比對窗上兩個多聚核苷酸或氨基酸序列是等同的(例如，在核苷酸連著核苷酸或殘基連著殘基上)。術語"序列一致性百分比"是通過比對比對窗上兩個最佳排列序列、確定等同核酸石成基(例如，A、T、C、G、U或I)或殘基存在于兩個序列中生成匹配部分的數量、區(qū)分比對窗(例如，窗口尺寸)內部分的全部數量與匹配部位的數量，將結合乘以100得到序列以致性的百分比。這里采用的術語"高度同源"是指多聚核苦酸或氨基酸序列的一種特征，其中與具有至少18個核苷酸(6個氨基酸)位點，經常在至少24-48個核苷酸(8-16個氨基酸)位點的對比窗上參考序列進行比較，多聚核苷酸或氨基酸包括具有至少85%序列一致性，優(yōu)選至少90到95%序列一致性，更經常至少99%序列一致性的序列，其中序列一致性通過將參考序列與可包括缺失或添加對比窗上參考序列的20%或小于20%的序列進行比對而計算得到參考序列可為較大序列的亞集。如這里使用的，20個常失見氨基酸和其縮寫4耍照常^見用法。參見Immunology-ASynthesis(2ndEdition,E.S.GolubandD.R.Gren,Eds"SinauerAssociates,SunderlandMass.(1991))。20個常規(guī)氨基酸、非天然氨基酸如a-,a-二取代氨基酸、N-垸基氨基酸、乳酸、和其他非常失見氨基酸的立體異構體(例如，D-氨基酸)也可為本發(fā)明多聚核苷酸的適宜組分。非常規(guī)氨基酸的實施例包括4羥(基)脯氨酸、y-羧基谷氨酸，s-N,N,N-三甲基賴氨酸，s-N-乙?；嚢彼?，O-磷酸絲氨酸，N-乙?；z氨酸，N-曱酰曱硫氨酸，3-曱基組氨酸，5-羥(基)賴氨酸，cj-N-曱基精氨酸,和其他類似氨基酸和亞氨酸(例如，4-羥(基)脯氨酸)。在這里一皮采用的多肽表示法中，^f衣據標準用法和常一見，左箭頭為-氮基末端方向，右箭頭為羧基末端方向。類似地，除非另外指定，單鏈多聚核苷酸序列的左手末端為5'端，雙鏈多聚核苷酸序列的左手末端為稱為5'方向。初生RNA凈爭錄的5'到3'添加的方向稱為轉錄方向，與RNA具有相同序列的DNA鏈上序列區(qū)和5'到RNA轉錄的5'末端稱為"上游序列"，與RNA具有相同序列的DNA鏈上序列區(qū)和3'到RNA轉錄的3'末端稱為"下游序列"。如對多肽使用的，術語"高度同源"是指兩個肽序列,當進行優(yōu)化比對時,如通過程序GAP或BESTFIT采用缺省gapweight,具有至少80%序列同源，優(yōu)選至少90%序列同源，更優(yōu)選至少95%序列同源，最4尤選至少99%序列同源。優(yōu)選地，不相同的殘基部分經保守氨基酸耳又代進行區(qū)分。保守氨基酸取代統(tǒng)指具有相似側鏈的殘基的可交換性。例如，具有脂肪族側鏈的一組氨基酸為氨基乙酸、丙胺酸、纈氨酸、亮氨酸、和異亮氨酸；具有脂肪族-羥基側4連的一組氨基酸為絲氨酸和蘇氨酸；具有含有酰胺的側鏈的一組氨基酸為天冬酰胺酸和谷氨酸鹽；具有芳族側4連的一組氨基酸為苯基丙氨酸、酪氨酸、和色氨酸；具有堿性側鏈的一組氨基酸為賴氨酸、精氨酸、和組氨酸；和具有含有石克側《連的一《且氨基酸為半月光氨酸和曱好u氨酉殳。優(yōu)選的保守氨基酸取代基團為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯基丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙胺酸纈氨S吏、谷氨酸-天(門)冬氨酸、和天冬酰胺酸-谷氨酸鹽。如這里討論的，抗體或免疫球蛋白分子的氨基酸序列中最小變化包括在本發(fā)明內，但是氨基酸序列中的變化保持至少75%,更優(yōu)選至少80%、90%、95%，最優(yōu)選99%。特殊地，保守氨基酸取代被考慮。保守氨基酸取代為在氨基酸家族內存在的那些，氨基酸家族是側鏈中相關聯的。遺傳編碼氨基酸通常分為兩個家族(l)酸性氨基酸為天(門)冬氨酸酯、谷氨酸酯；(2)堿性氨基酸為賴氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性氨基酸為丙胺酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯基丙氨酸、曱硫氨酸、色氨酸，和(4)不帶電的極性氨基酸為氨基乙酸、天冬酰胺酸、谷氨酸鹽、半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸。親水性氨基酸包括4青氨酸、天冬酰胺酸、天(門)冬氨酸酯、谷氨酸鹽、谷氨酸酯、組氨酸、賴氨酸、絲氨酸、和蘇氨酸。憎水性氨基酸包括丙胺酸、半胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。其他家族氨基酸包括(i)絲氨酸和蘇氨酸，其脂肪族-羥基家族；(ii)天冬酰胺酸和谷氨酸鹽，其為含酰胺的家力臭；(iii)丙胺酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸，其為脂肪力矣家族；和(iv)苯基丙氨酸、色氨酸、和酪氨酸，其為芳香族家族。例如，可合理預期的是，用異亮氨酸或纈氨酸單獨耳又代亮氨酸，用谷氨酸酯單獨取代天(門)冬氨酸酯，用絲氨酸單獨取代蘇氨酸，或用具有結構相關氨基酸相似耳又代一種氨基酸，不會對生成的分子的結合或性質產生主要影響，尤其如果取代不涉及顧家位點內氨基酸。是否氨基酸改變產生功能肽能通過評估多肽衍生物的特殊活性而確定出。評估在這里進行了詳細描述?？贵w或免疫J求蛋白分子的片段或類似物可通過本領域普通技術人員制備得到。片段或類似物的優(yōu)選氨基-和羧基-端存在于功能結構域邊界附近。結構和功能結構域可通過核苦酸和/或氨基酸序列tt據與>共或專有序列l(wèi)t據庫進^f亍比對而^皮鑒別出。優(yōu)選地，計算4幾比對方法被用于鑒別序列基序或已知結構和/或功能的其他蛋白中存在的預期蛋白構形結構域。鑒別出折疊成已知三維結構的蛋白序列的方法是周^口的。Bowieetal.Science253:164(1991)。因此,現有實施例證實本領域技術人員能識別序列基序和結構構形，依據本發(fā)明，該結構構形可用于確定結構和功能結構域。優(yōu)選的氨基酸取代為那些(l)減少蛋白質水解的敏感性，(2)減少氧化的每t感性，(3)改變形成蛋白復合體的結合親和性，(4)改變結^^親和性，和(4)f武予或f務改這種類似物的其他物理化學或功能性質。類似物能包括除了天然生成肽序列之外的一種序列的多種突變蛋白。例如，單個或多個氨基酸取代(優(yōu)選卩果守氨基酸耳又代)可能在天然生成序列(優(yōu)選在形成分子內4妄觸的結構域外部分多肽內)中進行。保守氨基酸取代不應該大體上改變母序列的結構特4正(例如，耳又代氨基酸不應該趨向4斤斷母體序列中的螺旋，或破壞其他類型的表征母序列的二級結構)。領域/>認的多月太二級禾口三級纟吉沖勾的實施例在Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton,Ed.，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.BrandenandJ.Tooze,eds.,GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(199l));andThorntonetat.Nature354:105(1991)中進4亍了4苗述。如這里采用的術語"多肽片4炎"統(tǒng)指具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽，而剩余氨基酸序列與推導出的天然生成序列中相對應位點是同源的，例如,來自全長cDNA序列。典型地，片—敬具有至少5、6、8或10個氨基酸長，優(yōu)選至少14個氨基酸長，更優(yōu)選至少20個氨基酸長，通常至少50個氨基酸長，并甚至更優(yōu)選至少70個氨基酸長。這里采用的術語"類似物"統(tǒng)指由至少25個氨基酸片斷組成的多肽，該多肽與部分的^皮推導的氨基酸序列有大體上同源性并具有至少下列性質中的一種(l)在適宜的結合條件下，特異性結合IFNY，(2)具有阻斷適宜的IFNy結合的能力，或者(3)具有體外或體內抑制IFNy-表達細胞增長的能力。典型地，多肽類似物包括天然生成序列的保守氨基酸取代(或者添加或者缺失)。典型地，類似物為具有至少20個氨基酸長，優(yōu)選至少50個氨基酸長或更長，并通常能與全長天然生成多肽一樣長。肽類似物普遍在制藥企業(yè)中使用作為具有類似于模版肽性質的非肽類藥物。這些類型的非肽類化合物稱為"肽模擬分子"或;擬狀物質"。Fauchere,J.Adv.DrugRes.15:29(1986),VeberandFreidingerTINSp.392(1985);andEvansetal.J.Med.Chem.30:1229(1987)。這種化合物經常在計算4幾分子才莫擬幫助下形成。結構類似于藥物用肽的肽才莫擬分子可用于產生相等治療功效或預防功效。一43:地，擬肽物質結構類似于示范性多肽(例如，具有生物4匕學或藥理活性的多月太)，例如人#元體，^旦具有一種或一種以上由選自由-CH2NH-、-CH2S-、-CH2-CH2-、CH=CH-(cisandtrans)、-COCH2-、CH(OH)CH2-、和-CH2SO國組成組的鏈4妻經本領域中眾所周知方法^壬選:f又代的肽《連。用同一類型的D-氨基酸系統(tǒng)取代一致序列的一種或一種以上氨基酸(例如，D-賴氨酸耳又代L-賴氨酸)可用于制備更穩(wěn)定肽。此外，包4舌一致序列或大體同源的一致序列變化的限制性肽可通過本領域中周知的方法制備4尋到(RizoandGieraschAnn.Rev.Biochem.61:387(1992));例如，通過加入內半月光氨酸殘基，該內半月光氨酸殘基能夠形成使肽形成環(huán)的分子內二硫鍵。術語"試劑"在這里被釆用表示一種化學化合物、化學化合物的混合物、生物大分子、生物原料中得到的一種提取物。如這里釆用的，術語"標記"或"標記的"統(tǒng)指加入可^:測的標記物，例如通過加入ii射性標記氨基酸或附著上可#皮標i己抗生物素蛋白(例如，含焚光標記物或可通過光學或量熱方法一皮纟笨測的酶活性的鏈霉親和素)檢測出的生物素基團的多肽。在某一情況中，標記或標記物也可具有治療性的。標記多肽和糖蛋白的多種方法在本領域中是周知的并可被采用。多肽標記的實施例包括，但不限于，下列放射性同位素或放射性核(例如，3H、14C、15N、35S、9°Y、"Tc、mIn、125I、mI)、熒光標記物(例如，FITC、若丹明、鑭系元素磷)、酶標記(例如，辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、焚光素酶、石成性磷酸酶)、化學發(fā)光的、生物素基團、二級受體(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二級抗體的結合位、金屬結合結構i或、表J立附加標i己)識別的預先確定多肽表4立。在一些實施方案中，標記被附著在不同長度的間隔臂減少潛在空間位阻。如這里采用的術語"制藥試劑或藥物"統(tǒng)指當正確對一種患者進行給藥時，能夠引發(fā)預期治療功效的一種化學化合物或組合物。依據本領域中常規(guī)用法，這里的也可以使用其他的化學術語,如TheMcGraw-HillDictionaryofChemicalTerms(Parker,S.,Ed.,McGraw-Hill，SanFrancisco(1985))中所例舉的。在這里使用的術語"抗腫瘤藥物"統(tǒng)指抑制人體內腫瘤、尤其惡性病變(癌癥的)例如癌一牛、惡性毒瘤、、淋巴瘤、或白血病形成或發(fā)展的功能性質的藥物。轉移的抑制通常為抗腫瘤藥物的一種性質。如這里采用的，"大體上純凈的"是指目標種類為存在的主要種類(例如，以摩爾計，它比組合物中任何其^也單個種類更多)，優(yōu)選地，大體純4b組分為一種組合物，其中目沖示種類包4舌至少約所有存在的大分子種類的50%(以摩爾計)。%,更優(yōu)選地大于約85%、90%、95%、和99%的大分子種類。最優(yōu)選地，目標種類一皮純化成基本均一性(經傳統(tǒng)4全測方法不能斗企測出組合物中的污染物種類)，其中組合物基本由單一大分子種類組成。術語患者包括人和獸醫(yī)醫(yī)學對象。術語對象包括人和其他哺乳動物。人抗體和抗體的人性化例如，采用下面實施例中描述的方法制備4尋到huIFNy抗體。通過將scFv克隆轉化成IgG形式制備得到IgGhuIFNy抗體(參見，實施例6)?；蛘?，例如，采用噬菌體-展示方法、〗義含人序列的抗體形成huIFNY抗體。這種方法在本領域中是重所周知的，侈寸^口，在WO92/01047禾口美國專矛jNo.6,521,404,通過引述合并于本文中。在該方法中，采用IFNy或其片革史的天然或重組原料來源，對實行輕鏈和重鏈隨機配對的嗟菌體的組合文庫進行篩選。通過一種方法制備得到一種huIFNy抗體，其中至少該方法的一種步驟包括對具有人IFNy蛋白的基因改造的、非人動物進行免疫。異基因非人動物的內生重鏈和/或k輕鏈位點的一些已經喪失和不能夠進行必需的重組而產生編碼響應一種抗原的免疫5求蛋白的基因。it匕外，至少一種人重《連位點和至少一種人輕《連^f立點已經穩(wěn)、定轉染到動物體內。因此，響應癥合藥的抗原，人位點進行重組而提供編碼對該抗原免疫特異性的人可變區(qū)的基因。因此，一經進行免疫，轉基因鼠產生分泌全人免疫^求蛋白的B-細月包。制備異基因非人動物的多種技術在本領域中是眾所周知的。侈寸^口，參見美國專矛jNo.6,075,181,口No.6,150,584。通過一種方案，異基因(人)重鏈和輕鏈免疫球蛋白基因被引入到宿主胚系(例如，精子或卵母細胞)中并且，在兩步中，采用同源重組進4亍失活處理致-使對應的宿主基因的非功能化。人重鏈和輕《連免建，生成的DNA片段被引入到適宜的宿主內，例如，原核受精小鼠卵母細胞或胚胎干細胞。通過在宿主細胞內，尤其在胚胎干細胞或原核受精小鼠卵母細萬包內同源重組進4亍革巴向,皮壞適宜的位點使內生宿主免疫球蛋白位點失活。耙向破壞可能涉及在把向位點內引入病變或刪除，或在靶向位點內刪除同時插入位點，例如插入可選擇的標記物。在胚胎干細胞中，制備得到嵌合動物，其部分源自〗f飾的胚胎干細"包并能夠通過胚系傳遞遺傳^修飾。宿主內生位點的雜交將產生動物，其抗體是純粹異基因的，例如，人。在可供選4奪的方案中，至少部分的人重《連和輕鏈免疫J求蛋白位點被用于通過在胚胎干細胞內同源重組直4妻取代對應內生免疫J求蛋白位點。這導致失活和內生免疫^求蛋白的同時發(fā)生。由此生成嵌合動物，其中胚胎干細月包書于生的細月包可能有助于胚系細胞。例如，表達人抗-IFNy抗體的B細胞克隆蜂皮從異基因非人動物中除去并依據本領域中周知的多種方法被永生化。這種B細胞可直接源自動物的血液或淋巴組織，包括但不限于脾、扁桃腺、淋巴結、和骨髓。合成的、永生化B細胞可被擴大并在體外培養(yǎng)而生成較大、臨床用量的huIFNY抗體?；蛘?，編碼具有一種或一種以上人可變區(qū)免疫球蛋白的基因可獲得并以不同細月包類型被表達，包括f旦不限于哺乳動物細胞培養(yǎng)體系，為了直4妄獲得由單鏈Fv分子組成的抗體或其單《連。此外，由異基因非人動物產生的整組全人抗-IFNy抗體可萍皮篩選出鑒別一種具有最佳特征的這種克隆。該特征包括，例如，對人IFNy蛋白的結合性、相互作用的穩(wěn)定性以及同型的全人抗-IFNy抗體。那么，具有預期特4正的整組克隆一皮用作編碼預期可變區(qū)的核苦酸序列原津+來源，用于進一步在可供選4奪的細月包體系中，采用傳統(tǒng)重組或轉基因^支術生成具有這些特征的抗體。對制備第一種轉基因小鼠tm菌抹相關的一般方案進行了說明。參見Greenetal.NatureGenetics7:13-21(1994)。i玄方';去進一步進4亍了討^侖并在1990年1月12日才是出的美國專利申i青SerialNos.07/466,008、1990年11月8日提出的07/610,515、1992年7月24日才是出的07/919,297、1992年7月30日沖是出的07/922,649、1993年3月15曰才是出的08/031,801、1993年8月27曰4是出的08/112,848、1994年4月28曰才是出的08/234,145、1995年1月20日才是出的08/376,279、1995年4月27日^是出的08/430,938、1995年6月5曰提出的08/464,584、1995年6月5曰4是出的08/464,582、1995年6月5曰#是出的08/463,191、1995年6月5日4是出的08/462,837、1995年6月5日才是出的08/486,853、1995年6月5日才是出的08/486,857、1995年6月5日才是出的08/486,859、1995年6月5日4是出的08/462,513、1996年10月2日提出的08/724,752、和1996年12月3日提出的08/759,620和美國專利jNos.6,162,963、6,150,584、6,114,598、6,075,181、禾口5,939,598禾口日本專利Nos.3068180B2、3068506B2、和3068507B2。也參見Mendezetal.NatureGenetics15:146-156(1997)和GreenandJakobovitsJ.Exp.Med.:188:483-495(1998).也參見1996年6月12日準予^>開的歐洲專利No"EP0463151Bl、1994年2月3日/>開的國際專利申i青No.，WO94/02602、1996年10月31日7>開的國際專利中{青No"WO96/34096、1998年6月11曰公開的WO98/24893、2000年12月21日/>開的WO00/76310。在可供選4奪的方法中，其他的利用"微小位點"方法。在微小位點方法中，內生Ig位點經包含Ig位點片段(單個基因)被模擬出。因此，一種或一種以上VH基因、一種或一種以上Dw基因、一種或一種以上JH基因、(a恒定區(qū)、和第二個恒定區(qū)(優(yōu)選Y'l"亙定區(qū))纟且成4悉入動4勿體內的^勾成4勿。i亥方法在Suranietal^是出的美國專利No.5,545,807禾口LonbergandKay才是出的每個美國專矛jNos.5,545,806、5,625,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,877,397、5,874,299、禾口6,255,458,Krimpenfort牙口Berns4是出的美國專利No.5,591,669和6,023.010,Bernsetal4是出的美國專利Nos.5,612,205、5,721,367、禾口5,789,215，Choi禾口Dunn^是出的美國專利No.5,643,763,牙口1990年8月29曰4是出的GenPharm國際、美國專利申i青SerialNos.07/574,748、1990年8月31日才是出的07/575,962、1991年12月17曰才是出的07/810,279、1992年3月18日4是出的07/853,408、1992年6月23日4是出的07/904,068、1992年12月16日才是出的07/990,860、1993年4月26日才是出的08/053,131、1993年7月22曰^是出的08/096,762、1993年11月18日沖是出的08/155,301、1993年12月3日才是出的081161,739、1993年12月10日才是出的08/165,699、1994年3月9日4是出的08/209,741。也參見E欠洲專利No.0546073Bl、國際專矛J申請Nos.WO92/03918、WO92/22645、WO92/22647、WO92/22670、WO93/12227、WO94/00569、WO94/25585、WO96/14436、WO97/13852、和WO98/24884和美國專利No.5,981,175。進一步參見Tayloretal,1992，Chenetal,1993,Tuaillonetal,1993,Choietal,1993,Lonbergetal,(1994)，Tayloretal，(1994)，和Tuaillonetal，(1995)，Fishwildetal,(1996)。最小位點方法的一種優(yōu)勢是迅速生成包:l舌部分Ig位點的構建并將其引入到動物體內。然而，相當地，最小位點方法的一種重要優(yōu)勢為，理論上，通過包含小量的V、D、和J基因引入少量的多樣性。事實上，已作的工作顯示出支持該觀點。通過采用最小位點方法得到的動物的B-細/泡形成和4元體生成顯示出成長受到妨礙。因此，圍繞本發(fā)明的研究始終如一地關注于引入Ig位點的大部分為了獲得更大多樣性并努力重組動物的全部免疫能力。已經證實經微小細胞融合、大片染色體或整個染色體引入等方法，可以從老鼠身上制備人抗體。參見歐洲專利申請Nos.773288和843961。人抗小鼠抗體(HAMA)反應已經工業(yè)化制備得到嵌合抗體或其他人抗體。然而，嵌合抗體具有一種人恒定區(qū)和免疫可變區(qū)，可預期的是，確定的人抗-嵌合抗體(HACA)反應將被觀察到，尤其在慢性的或多劑利用該抗體中。因此，將預期的是，提供抗IFNy的全人抗體為了4吏HAMA的關注目標和/或影響或HACA反應的無歲丈。文庫的展示技術實現。應理解的是，小鼠抗體或來自其他種類的抗體可被人性化處理或采用本領域中眾所周知的方法進行靈長猿4匕處3里。參見，例^口WinterandHarrisImmunolToday14:4346(1993)和Wrightetal.Crit,ReviewsinImmunol.12125-168(1992)。主體抗體可通過重組DNA技術進行基因改造，用相應的人序列取代CH1、CH2、CH3、4t隨區(qū)、和/或骨架區(qū)(參見，WO92102190禾口美國專矛JNos.5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,792、5,714,350、和5,777,085)。采用IgcDNA構建嵌合免疫i求蛋白基因也是本領域中周知的(Liuetal.P.N.A.S.84:3439(1987)andJ.Immunol.139:3521(1987))。mRNA乂人雜種瘤或其4也產生抗體的細l包中分離并用于生產cDNA。主體的cDNA可通過釆用特異性引物經聚合酶鏈反應進行擴增(美國專利Nos.4,683,195和4,683,202)。或者，構建一種文庫并》于其進4亍篩選分離出主體序列。然后，編碼4元體可變區(qū)的DNA序列被融合到人恒定區(qū)序列上。人恒定區(qū)基因的序列可在Kabateta1.(1991)SequencesofProteinsofimmunologicalInterest,N丄H.publicationno.91-3242中得到。人C區(qū)基因容易從已知克隆中得到。同型選4,將受到預期的效應子功能如補體結合、或抗體依賴性細胞毒性的引導。優(yōu)選同型為IgGl、IgG3和IgG4。人輕鏈恒定區(qū)、K或X中的任一種可被利用。嵌合的、人性化抗體通過傳統(tǒng)方法進行表達?？贵w片l殳，如Fv、F(ab')2和Fab可通過完整蛋白的切割，例如，通過蛋白酶或化學切割制得?；蛘撸环N截短型基因^皮i殳計出。例如，編碼F(ab')2片段的一部分的嵌合基因將包括編碼CHl結構域和H鏈鉸鏈區(qū)的DNA序列，以及得到截短型分子的一種翻i奪纟冬止密；馬子。H和LJ區(qū)的一致序列可用于設計寡核普酸,其作為探針引導有效限制位點進入到V區(qū)片斷和人C片斷的后生鏈4妻的J區(qū)。C區(qū)cDNA可通過定點突變技術將一種限制性位點放置在人序列中的類似位點處來進行修飾。表達載體包括質粒體、逆轉錄酶病毒、YACs、EBV衍生游離基因、和類似物。一種方便性載體為編碼功能完整人CH或CL免疫球蛋白序列的載體，采用基因改造的適宜的限制性位點4吏得一些VH或VL-31序列可容易一皮插入并被表達。在這種載體內，4并接通常發(fā)生在插入J區(qū)內的剪4妄供體位點和人C區(qū)前的剪接接受位之間，并也在存在人CH外顯子內的剪接區(qū)。多聚腺香酸化和轉錄終止發(fā)生在編碼區(qū)下游的天然染色體位點。得到的嵌合抗體可與任何強啟動子連接，包括逆轉錄病毒LTRs,例如，SV-40病毒早期啟動子(Okayamaetal.MoLCell.Bio.3:280(1983))，Rous肉瘤病毒(Gormanetal.P.N.A.S.79:6777(1982)),和小鼠莫洛尼氏白血病毒LTR(Grosschedletal.Cell41:885(1985))。4安照理解的，天然Ig啟動子和類^f以物可一皮采用。進一步，人抗體或來自其他種類的抗體可通過展示類型牙支術，包括，但不限于，展示文庫、逆轉錄病毒展示、核糖體展示、和其他:技術，采用本領域中眾所周知的4支術制得，生成的分子可能經過附加的成熟，如親和力成熟，該技術是本領域中周知的。WrightandHarris,supra.,HanesandPlucthauPEASUSA94:4937—4942(1997)(核糖體展示)、ParmleyandSmithGene73:305-318(1988)(謹菌體展示)、ScottTIB517:241-245(1992)、Cwirlaetal.PNASUSA87:6378-6382(1990)、RusseletalNucl.AcidsResearch21:1081-1085(1993)、Hoganboometal.Imm.unol..Reviews130:43-68(1992)、Chi.swell.andMcCaffertyTIBTECH;10:80-8A(1992),禾口美國專矛jNo.5,733,743。3口果展示才支術用于制備非人抗體，這種抗體可按照上面描述的方法進行人性化。采用:逸些4支術,抗體可制成IFNy表達細月包，IFNy,IFNy形式，表位或其肽，和其表達文庫(參見,例如，美國專利No.5,內容根據上面描述的活性對該文庫進行篩選。其4也療法的"i殳計和產生依據本發(fā)明和基于這里制備和表征的與IFNy相關抗體的活性，促進了抗體基團之外的其他治療形式的設計。這種形式包括，但不限于，先進的抗體治療，如雙特異性抗體、免疫毒素、和反射性標記療法、肽療法的生成、基因治療、顯著的內抗體、反義療法、和小分子。例如，關于雙特異性抗體，能制得雙特異性抗體，其包括(i)兩個抗體，一種對IFNy具有特異性并且另一種與第二個分子結合在一起，(ii)一種單個抗體，具有對IFNy特異性的一種《連和對第二個分子具有特異性的第二個鏈，或者(iii)一種單鏈抗體，其對IFNy和另一種分子具有特異性。釆用眾所周知的方法制得這種雙特異性抗體，例如關于(i)和(ii)，參見，例如Fangeretal.ImmunolMethods4:72-81('1994)andWrightandHarris,supra，關于(iii),參;L,仿j^口Trauneckeretal.Int.丄Cancer(Suppi.)7:51-52(1992)。關于免疫毒素,采用本領域中眾所周知的方法可將抗體修飾來起到免疫毒素作用。參見，例如VitettaImmunolToday14:252(1993)。也參見美國專利No.5,194,594。關于力文射性抗體的制參見，例如Junghansetal.inCancerChemotherapyandBiotherapy655-686(2dedition,ChafherandLongo,eds.,LippincottRaven(1996))。也參見美國專利4,681,581、4,735,210、5,101,827、5,102,990(RE35,500)、5,648,471、和5,697,902。免疫毒素和放射性標記分子中的每一種將可能殺死表達IFNy細胞，尤其本發(fā)明抗體有效的那些細胞。關于治療肽的生成，通過利用IFNy和抗體的結構信息，例如本發(fā)明抗體或篩選肽文庫，針對IFNy的治療肽可被制得。肽治療的i殳計和篩選在Houghtenetal.Biotechniques13:412-421(1992)、HoughtenPNASUSA82:5131-5135(1985)、Pinallaetal.Biotechniques13:901-905(1992)、BlakeandLitzi-DavisBioConjugateChem.3:510-513(1992)中進行了討論。按照類似方法，連同上面討論的與抗體相關的肽類基團，免疫毒素和放射性標記分子也可被制得。假定IFNy分子(或一種形式，如剪接變異體或可替換形式)在疾病過程中具有活性，也可能通過傳統(tǒng)方法i殳計基因和反義治療劑。這種形式可用于調節(jié)1FNy功能。關于本發(fā)明抗體使設計和其相關功能測試的使用更便捷。反義治療劑的設計和方案在國際專利申請No.WO94/29444中進行了詳細討^侖?；蛑委煹脑O計和方案是眾所周知的。然而，特殊地，關于內抗體的基因治療方法的采用可能證明具有顯著優(yōu)勢。參見，如Chenetal.HumanGeneTherapy5:595-601(1994)andMarascoGeneTherapy4:11-15(1997)。關于基因治療劑的一4殳設計和考慮也在國際專利申請No.WO97/38137進4亍了討i侖。IFNy分子結構和其與依據本發(fā)明其他分子如本發(fā)明抗體的相互作用中收集到信息，并且其他可能用于合理設計另外的治療形式。在這點上，合理的藥物設計技術如X射線結晶學、計算機輔助(或幫助)分子建模(CAMM)、定量或定性結構-或活性關系(QSAR)、和類似方法可用于關注藥物發(fā)明活動。合理i殳計實3見了蛋白或合成結構的預測，合成結構可能與分子或其特殊形式相互作用，該特殊形式可用于修飾或調節(jié)IFNy活性。這種結構可3皮化學合成或在生物體系中表達。該方法在Capseyetal.GeneticallyEngineeredHumanTherapeuticDrags(StocktonPress,NY(1988))進4亍了討-論。進一步，組合文庫可^皮i殳計和合成并在篩選程序中4吏用，如高通量篩選活動。治療劑纟合藥和配制應了解，依據本發(fā)明，治療劑給藥將與適宜載體、賦形劑一起給藥，其他試劑被添加到制劑中來提供改善的轉移、輸送、耐受性和類似性質。許多適宜的配方可在所有制藥藥劑師周知的藥典中找到Remington'sPharmaceuticalSciences(15thed,MackPublishingCompany,Easton,PA(1975)),尤其在Blaug,Seymour編寫的第87章。這些配方包i舌，例如，4分末、貼劑、藥膏、凝膠劑、蠟、油、月旨質、含小泡的脂質(例如，LipofectinTM)、DNA偶聯物、無7jc吸收貼劑、水包油和油包水乳劑、乳劑碳蠟(不同分子量的聚乙二醇)、半固態(tài)凝膠、和含有碳蠟的半固態(tài)混合物。假如制劑中的活性組分經配制不失活并且制劑與給藥路線生理上兼容并具有耐受性，現有混合物中的任何一種可能在本發(fā)明的處王里禾口治療中有歲文。也參j^，BaldrickP."Pharmaceuticalexcipientdevelopment:theneedforpreclinicalguidance."Regul.ToxicolPharmacol.32(2):210-8(2000),WangW."Lyophilizationanddevelopmentofsolidproteinpharmaceuticals."Int.J.Pharni.203(1-2):1-60(2000),CharmanWN"Lipids,lipophilicdrugs,andoraldrugdelivery-someemergingconcepts."JPhartnSci.89(8):967-78(2000),Powelletal."Compendiumofexcipientsforparenteralformulations"PDAJPharmSciTechnol.52:238-311(1998)和與制藥藥劑師周知的制劑、j陚形劑和載體相關的引用的附加信息。本發(fā)明的治療劑，包括本發(fā)明的huIFNy抗體，用于治療或纟爰解免疫相關紊亂的綜合癥，例如，自體免疫疾病或炎性紊亂。例如，對患有Crohn's疾病(CD)的主體進行huIFNy抗體《會藥可能直接作用在引發(fā)疾病的免疫細胞上，從而提供最小抑制免疫系統(tǒng)的快速干預。對患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的主體進4亍huIFNy抗體給藥是另一種提供修飾引發(fā)疾病的免疫細胞的醫(yī)學指征。對患有牛皮癬的主體進行huIFNY抗體、全人蛋白給藥避免了運用更強烈藥物治療患者的需要，這種藥物具有經i正實不必要的副作用(例如，肝損傷)。對患有風濕性關節(jié)炎的主體進行huIFNY抗體給藥為提供機會來調節(jié)下游生長和誘導Thl-介導反應的疾病的功能。自體免疫疾病包4舌，例如，獲4尋性免疫擊夾陷綜合癥(AIDS,自體免疫組分的病毒性疾病)、斑禿、僵直性脊推炎、抗;岸脂抗體綜合癥，自體免疫阿狄森氏病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內耳病(AIED)、自身免疫性淋巴增生綜合癥(ALPS)、自身免疫性血小板減少性紫癜(ATP)、貝西氏病、心肌病、腹腔口炎性腹瀉-皰滲樣皮炎；慢性疲勞和免疫功能不全癥候群(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經病(CIPD)、瘢痕性類天皰掩、冷湊是集素病、CREST綜合癥、克隆氏癥、Degos病、幼年型皮肌炎、盤狀紅斑、特發(fā)性混合性冷球蛋白血癥、纖維肌痛-纖維織炎、葛瑞芙氏癥、格林-巴利綜合癥、橋本氏曱狀腺炎、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、胰島素非依賴性糖尿病、幼年慢性關節(jié)炎(史提爾氏病)、幼年型類風濕性關節(jié)炎、坤每尼爾氏癥、混合結締《且織病、多發(fā)性石更4匕癥、重癥肌無力、惡性貧血癥、結節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合癥、風濕性多肌痛、多肌炎及皮肌炎、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、銀屑病、銀屑病關節(jié)炎、雷諾現象、萊特爾綜合癥、風濕熱、風濕性關節(jié)炎、結節(jié)病、硬皮病(進行性系統(tǒng)性硬化癥(PSS)、也命名為系統(tǒng)性硬皮病(SS))、干燥綜合癥、僵人綜合癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、大動脈炎、顳動脈炎/巨細胞血管炎、潰瘍性結腸炎、葡萄膜炎、白癲風和韋格納肉芽腫。炎性紊亂包括，例如，慢性和急性炎性紊亂。炎性紊亂的實施例包括阿爾茨海默病，哮喘，特異反應性過4文，過每丈，動脈硬化癥，支氣管哮喘，濕疹，血管^求性腎炎，移4直物抗宿主病，溶血性貧血，骨關節(jié)炎，膿血癥，中風，組織和器官移植，血管炎，糖尿病型視網膜病和呼吸機誘發(fā)性肺損傷。huIFNy抗體調節(jié)主體內，例如人主體內的免疫反應。例如，這里描述的huIFNy抗體調節(jié)，例如減少、抑制或預防放大的Th1-介導免疫反應如與自體免疫或炎性紊亂如，克隆氏癥，全身性紅斑性狼癡，《艮屑病，類肉狀瘤病，風濕性關節(jié)炎，血管炎，異位性皮炎和繼發(fā)-進展型多發(fā)性硬化相關的放大的Thl-介導免疫反應。在放大的Thl-介導免疫反應中，Thl細胞因子，如IL-2、IL-3、TNF-alpha(TNFa)和IFNY,存在于主體內的？K平高于沒有患有與》文大的Thl-免疫反應相關的疾病或紊亂的主體內Thl細胞因子產生水平。為了將Thl-介導免疫反應分類放大反應，采用ELISA或其他測試，通過測量和分析分析細胞因子水平評估Thi細月包因子產生反應7JC平。在這里描述的huIFNy抗體也用于調節(jié)，如抑制、減少或預防，類型轉變成IgG同型，例如IFNY-i秀導的類別轉換。這些huIFNy抗體調節(jié)，例如，抑制、預防或減少Thl-介導反應，,人而降低IFN誘導轉換。在一種實施方案中，用于治療免疫相關紊亂的huIFNy抗體組合物聯合許多抗-細胞因子試劑或抗-趨化因子試劑中的4壬<可一種一起癥會藥。適宜的抗-細月包因子或抗趨化因子試劑識別，例如，細月包因子如白細月包介素l(IL-I)、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31,和/或趨化因子如MIPla、MIP1|3、RANTES、MCPl、IP-10、ITAC、MIG、SDF和趨4匕因子。本發(fā)明也提供了治療或緩解免疫紊亂相關綜合癥的方法。例如，本發(fā)明組合物用于治療或纟爰解這里描述的自體免疫疾病和炎性紊亂中任何一種的綜合癥。免疫相關紊亂的綜合癥包括，例如，炎癥、發(fā)燒、食欲不振、體重降低、腹部癥狀如，腹部疼痛、腹瀉或便秘，關節(jié)疼痛或疼痛(關節(jié)痛)，疲勞，皮疹，貧血癥，對寒冷才及其壽文感(雷i若氏現象)，月幾肉庫欠弱，月幾肉疲勞，皮月夫或組織狀態(tài)改變、呼吸短促或其他非正常呼吸型，胸疼或胸部肌肉收縮、心跳不正常(例如，才是高或降^氐)，感光性，才莫糊或其它一見覺失常、和器官功能減弱。huIFNy抗體的治療制劑對患有免疫相關紊亂，如自體免疫疾病或炎性紊亂的主體進行給藥。患有自體免疫疾病或炎性紊亂的主體經本領域中周知的方法鑒別出。例如，患有自體免疫疾病如克隆氏癥、狼瘡或銀屑癬的主體采用許多臨床和/或實驗室測試如身體纟僉查、放射性;險查、和血液、尿液和糞i^更分析評價免疫狀態(tài)來鑒別出。例如，患有狼瘡的患者通過采用如抗核抗體測試(ANA)確定是否細胞核的自體抗體存在于血液中來鑒別出?；加锌寺∈习Y的患者采用如上腸胃道纟聶影術和/或分別評^介小腸和大腸的結腸鏡檢查來鑒別出?；加秀y屑癬的患者采用如從受影響皮膚貼片中取得的組織進行顯樣i鏡4全查來鑒定出，然而患有風濕性關節(jié)炎的患者采用如血液測試和/或X射線或其他影像評估進行鑒定。如果許多實驗室或臨床結果的任何一些被得到，對患有免疫相關紊亂如自體免疫疾病或炎性紊亂的患者進行huIFNy抗體給藥。例如，對患有免疫相關紊亂如自體免疫疾病或炎性紊亂的患者進行huIFNY抗體給藥被成功地考慮過，與紊亂相關的綜合癥中的一種或一種以上被緩解、減少、抑制或不發(fā)展到進一步如惡化狀態(tài)。對患有免疫相關紊亂如自體免疫疾病或炎性紊亂的患者進行huIFNy抗體給藥被成功地考慮，如果該紊亂，例如自體免疫紊亂，癥狀緩解或不發(fā)展到進一步如惡化狀態(tài)。i會斷和預防制劑本發(fā)明的全人抗-IFNYMabs在診斷和預防制劑中使用。在一種實施方案中，將本發(fā)明的huIFNYMab對存在患上一種前述自體免疫疾病風險的患者進行鄉(xiāng)會藥。對易患有一種或一種以上前述自體免疫疾病的患者可采用基因型、血清學或生物化學標記物進行給藥。在本發(fā)明的另一種實施方案中，將huIFNy抗體對診斷患有一種或一種以上前述自體免疫疾病的人個體進行給藥。一經診斷，進行huIFNy抗體給藥來減輕或消除自體免疫影響。本發(fā)明抗體也在監(jiān)測患者樣本中1FNy中有效并因此作為診斷劑。例如，本發(fā)明的huIFNy抗體在體外測試如EUSA中使用來^r測患者樣本中IFNy水平。在一種實施方案中，本發(fā)明的hulFN丫抗體固定在固體支撐體上(例如，4敬升培養(yǎng)本的孔槽中)。被固定抗體起到可能存在于測試樣本中任何IFNy的捕獲抗體的作用。在4姿觸患者樣本的固定抗體之前,將固體支撐體清洗并用阻滯劑如水貂蛋白或白蛋白進行處理來預防凈皮分析物的非特異性吸收。隨即，將孔槽用懷疑含有抗原的測試樣本，或含有標準量的抗原的溶液進行處理。這種樣本為，如來自懷疑具有病理學診斷水平的循環(huán)抗原的主體中取得血清樣本。在沖洗測試樣本或標準物，將固體支撐體用可探測標記的第二個抗體進行處理。標記的第二個抗體起到纟罙測抗體的作用?？涉y標記的水平凈皮測量出，并且測試樣本中1FNy抗原的濃度通過與標準樣本中得到的標準曲線進4于^f比而一皮確定。應理解的，基于體外i貪斷測試中采用本發(fā)明hulFNy抗體得到的結果，將主體患有的一種疾病(例如，自體免疫或炎性紊亂)以IFNy抗原的表達水平為基礎來分出階段。對于給定疾病，從i貪斷為處于疾病發(fā)展中不同階_度，和/或該疾病治療中不同禾呈度的主體中抽取血液樣本。采用提供發(fā)展或治療的每個階段統(tǒng)計學顯著性結果的一組樣本，可評i"介每個階l殳特征的抗原濃度范圍被指定出。這里引用的所有出版物和專利論文通過引述合并于文本中，似乎每個出版物或論文進行特別和單獨說明通過引述合并于本文中。引用出版物和專利論文目的不是承"i人任何一種是相關現有技術，也不等同于承認同樣的內容或日期。采用描述對本發(fā)明進行了描述，本領域中的技術人員將認識到本發(fā)明可在多種實施方案和前述描述中實施并且下列實施例是為了說明目的而不是限制沖又力要求書。實施例下列實施例提供了指導性試驗和達到的結果，這些試驗和結果僅為了起到舉例說明目的并作為本發(fā)明的限制。實施例1:人干擾素Y的克隆、表達和提純克隆.對應于人干4尤素Y(hlFNy，hulFN力的成熟序列的序列經聚合酶鏈反應(PCR)采用特異性寡核苷酸從人cDNA中進行擴增。將擴增產物凝月交才是純并克隆進pET41c表達載體內(Novagen,SanDiegoCA)。進一步，經蛋白體內生物素化和經IMAC(固定化金屬離子親和層析法)提純將載體進行修飾而引入Avitag(Avidity,DenverCO)和在hlFNy的C-末端處引入八-組氨酸標簽。表達.大腸桿菌BL21細胞與pET41c-hlFNy和pACYC184-BirA載體共轉化，pACYC184-BirA載體編碼AvitagTM序列體內生物素化的BhA酶。抗卡那霉素(50嗎/ml)和氯霉素(10jig/ml)的單菌落—皮篩選出并用于4妻種LB(Kan50pg/mi/Cm10jag/ml)中的[起子]培養(yǎng)物并在37。C培養(yǎng)。第二天，將i咅養(yǎng)物用于^妻種一種添加50[iM生物素的LB(Kan50pg/ml/Cm10jnig/ml)的400ml;咅養(yǎng)物。將該i條養(yǎng)物在37t:下經振蕩培養(yǎng)直到OD,為0.6。在那個階段，將異丙基-p-D-半乳糖苦(IPTG)加入達到最后濃度1mM,將該i咅養(yǎng)物進一步在相同條件下培養(yǎng)3小時。將纟田胞在4000rpm轉速下離心分離20分鐘，將顆粒狀物在-2(TC下冷凍。在這些條件下，基本上所有h1FNy是不溶的并在包含體內找到。提純.將細菌顆粒狀物解凍并重新懸浮在含有8^tlBenzonaze(Novagen)的Bugbusteri式劑并在室溫下i咅養(yǎng)30分4中。4"C下，將15'000g的該溶液離心分離。含有包含體的顆粒狀物重新懸浮在7ml增溶緩沖液中(50mMTris-HCLpH7.4,300mMNaCl,20mM口米唑，5mMp-巰基乙醇，6M胍-HCl)。將15'000g的重新懸浮物質在4'C下離心分離30分鐘。兩個5ml的HiTrapChelatingcolumn(Amersham,Buckinghamshire,England),裝載NiS04，用增溶緩沖液平tf,l衣據廠商i兌明書連4妾在一起。離心分離后的上清液經0.45jim孔徑膜過濾并用蠕動泵按lml/min速度裝載在柱上。然后，將該柱置于AKTAprime色語系統(tǒng)用于柱上蛋白折疊和洗-提。用35ml增溶緩沖液以1ml/min流速沖洗固定的蛋白質。具有漸增濃度的refoldingbuffer的線性梯度增溶纟爰沖液4要1ml/min速度^吏用1分鐘直到達到100%refoldingbuffer。然后，將折疊蛋白從柱中用洗提緩沖液中洗4是出來(50mMTris-HCl、300mMNaCl、400mM咪唑)。含片段的蛋白質被冷凍起來并在用PBS平衡的PD10柱(Amersham)上進行脫鹽。然后，將脫鹽的蛋白質等分并在-80。C下〗諸存。實施例2:細胞表面上的細胞表達干擾素y用c-myc-標記的人IFNy穩(wěn)定轉染中國倉鼠卵母(CHO)纟田胞(從ATCC中4尋到)。將cDNA亞克隆到含新霉素4元性基因的pCDNA3.1質粒體內(Invitrogen,CarlsbadCA)。采用抗-6xHis(Sigma)抗體篩選轉染子。人IFNy的表面表達經流式細胞術采用抗-IFNymAb(cloneB27,BectonDickinson,FranklinLakesNJ)得到i正實。實施例3:人scFv文庫的篩選人scFv文庫的構建和沖喿4乍的一^:方法在Vaughanetal.,(Nat.Biotech.1996,14:309-314)中進行了描述，因此通過全部引述一皮合并于本文中。依才居下面方法，人scFv文庫^皮篩選抗hlFNy。液相篩選.室溫下，在回轉式混合才幾中，采用舍3%(w/v)月充脂乳的PBS對經Cambridge抗體^支術得到的scFv噬菌體文庫(1012Pfu)的等分量阻斷一種小時。然后，室溫下，被阻斷噬菌體在纟連親合素石茲^朱(DynalM-280)上耳又消選4奪1小時。室溫下，取消選定的噬菌體于回轉式混合機上用生物素化hEFNY(100nM)體內培養(yǎng)兩個小時。采用磁性表座將小球捕獲，隨即用PBS/0.1%Tween20清洗4次，用PBS清洗3次。然后，將小球直接加入到10ml成指數增長的TGI細胞中并在37。C經緩'隄振蕩(100rpm)培養(yǎng)一種小時。被感染的TGI等分物被連續(xù)稀釋來測定篩選產物。剩余的被感染TGI按3000rpm轉速下自璇15分鐘并重新懸浮在0.5ml2xTY-AG(含有100嗎/ml氨千青霉素和2%葡萄糖的2xTY介質)并涂在2xTYAG瓊脂生物測試板上。3(rC下過夜培養(yǎng)后，將10ml2xTYAG加入到培養(yǎng)板上并將細胞從表面刮4寮下來并轉移到50ml聚丙烯試管中。將含有50%丙三醇的2xTYAG加入到細胞懸浮液中來得到最終濃度為17%的丙三醇。篩選循環(huán)得到的等分物保存在-80。C下。細胞表面篩選.室溫下，在回轉式混合機中，采用含3%(w/v)脫月旨乳的PBS對經Cambridge抗體技術得到的scFv噬菌體文庫(1012Pfu)的等分量阻斷一種小時。然后，在37°C/5%C02條件下，一皮阻斷p藍菌體在emptypDisplayvector轉染和含2%(w/v)脫月旨乳的PBS阻斷的CHO細胞上取消選4奪1小時(在T75燒弁瓦中80%confluence)。室溫下，取消選定的噬菌體經平緩振蕩在CHO-pDisplay-hlFNY載體上培養(yǎng)一種小時。用PBS經細胞清洗10次。將10ml成指數增長的TGI細胞添加到T75燒并瓦中洗4是^皮結合噬菌體并且在37。C經緩慢振蕩將其培養(yǎng)一種小時。被感染的TGI等分物被連續(xù)稀釋來測定篩選產物。剩余的被感染TGI按3000rpm轉速下自璇15分鐘并重新懸浮在0.5ml2xTY-AG(含有100(ig/m氨芐青霉素和2%葡萄#唐的2xTY介質)并涂在2xTYAG瓊脂生物測試才反上。30下過夜培養(yǎng)后，將10ml2xTYAG力口入到培養(yǎng)+反上并將細胞從表面刮4察下來并轉移到50ml聚丙烯試管中。將含有50%丙三醇的2xTYAG加入到細胞懸浮液中來得到最終濃度為7%的丙三醇。篩選循環(huán)得到的等分物保存在-8(TC下。噬菌體搶,故從先前篩選循環(huán)中得到的100)il纟田月包懸浮液,皮力o入到20ml2xTYAG中并在37。C震蕩(240rpm)i咅養(yǎng)直至'jOD600為0.3至'J0.5。將培養(yǎng)物用3.3x101QMK13K07輔助噬菌體重疊感染并在37。C下培養(yǎng)1小時(15()rpm)。.通過按2000rpm轉速將細月包離心分離10分^中改變該介質，除去該介質并4尋顆^i物重新懸浮在20m12xTY-AK(]00|ig/ml氨節(jié)青霉素；50昭/ml卡那霉素)。然后，將培養(yǎng)物在30。C(240rpm)培養(yǎng)過夜。將單克隆挑選到每個孔槽內含有150jil2xTYAG介質(2%葡萄糖)的微升培養(yǎng)板內(100-120rpm)5-6小時。M13K07輔助噬菌體一皮加入到每個孔槽內得到多重感染的IO(例如，培養(yǎng)物中每個細i包的10個噬菌體)并在37°C(100rpm)下培養(yǎng)1小時。培養(yǎng)后，將培養(yǎng)板按3,200rpm轉速離心分離10min。將上清液1子細除去，細月包重新懸浮在150jal2xTYAK介質中并在30。C(120rpm)下培養(yǎng)過夜。對于ELISA,通過加入含有5%脫脂乳粉末的150jal2x濃縮PBS阻斷嗟菌體，隨即在室溫下^咅養(yǎng)1小時。然后，將培養(yǎng)板按3000rpm轉速下離心分離IO分鐘并且噬菌體含有ELISA用的上清液。逸菌體ELISA.將ELISA培養(yǎng)一反(Maxisorb,NUNC)用含有2(ig/mlhlFNyPBS涂敷過夜。對照培養(yǎng)板被涂敷2|ig/mlBSA。然后，用3%脫脂乳/PBS于室溫下封閉]小時。在轉移經過封閉噬菌體上層清液之前用PBS0.05%Tween20清洗3次并且在室溫下培養(yǎng)1小時。然后，用PBS0.05%Tween20清洗3次。每個孑L槽內50ji1含有(HRP)-偶聯抗M13抗體(Amersham，稀釋成1:10,000)的3%1^脂乳/PBS。室溫下i咅養(yǎng)1小時之后，^!尋i咅養(yǎng)氺反用PBS0.05%Tween20清洗5次。然后，力口入TMB(Sigma)和50|jl2NH2S()4使ELISA終止反應。在450nm處讀出吸收強度.,噬菌體克隆排序單克隆被放入到微升培養(yǎng)板內并在30°C(l20rpm)下培養(yǎng)過夜，該培養(yǎng)板的每個孔內含有150[il2xTYAG介質(2。/。葡萄糖)。第二天,將5jil培養(yǎng)物轉移到含有45yldH20的另一種培養(yǎng)板內并進4亍混合。然后，將該i咅養(yǎng)^反在-20。C下冷凍。解凍后，1jal該懸浮液用于PCR擴增，采用標準PCR協(xié)i義，利用對pCANTAB6:mycseq,5'-CTCTTCTGAGATGAGTTTTTG-3"(SEQIDNO:100)禾口基因3前導序歹'J,5'誦TTATTATTCGCAATTCCTTTAGTTGTTCCT-S'(SEQIDNO:101)具有特異性引物。采用MontagePCRp96系統(tǒng)(Millipore),將PCR反應在96孔板內提純。采用mycseq和基因3前導引物對5f^H皮洗提DNA進行排序。功能測試用ScFv周質制備.將單克隆4妻種到每個孔槽內含有0.9ml2xTYAG介質(0.1%葡萄糖)的深孔槽的孩i升培養(yǎng)板內5-6小時(250卬m)。然后，向每個100孔槽內加入舍有0.2mMIPTG的2xTY介質達到最纟冬濃/復0.02mMIPTG。然后，^]尋;咅養(yǎng)澤反在30。C4要250rpm振蕩培養(yǎng)過夜。在2,500rpm壽爭速下4f^罙孑L才曹;^養(yǎng)4反離心分離10分鐘，仔細將上層清液除去。顆粒物重新懸浮在15(^1TES緩沖液(50mMTris/HC1(Ph=8),1mMEDTA(pH=8)、20%蔗糖、加入完整蛋白酶抑制劑，Roche)中。通過加入150pl稀釋的TES緩沖液(1:5:TES:水稀I奪液)產生低滲透壓沖擊并在冰上培養(yǎng)30分4中。然后，一奪i咅養(yǎng)^反在4000rpm專爭速下離心分離10分鐘除去細胞和石爭片。仔細將上層清液轉移到另一種樣i升培養(yǎng)才反內并it置于;水上在功能實3會或ELISA中即刻測試。大規(guī)模scFv提純1ml2xTYAG[起子]培養(yǎng)物與新切線2xTYAG瓊指平板上的單菌落接種并在37。C振蕩(240rpm)培養(yǎng)5小時。0.9ml該培養(yǎng)物用于與同一介質的400ml培養(yǎng)物接種并在30。C下劇烈振蕩(300rpm)下培養(yǎng)過夜。第二天，向i咅養(yǎng)物中力卩入400plIMIPTG進4亍i秀導并繼續(xù)培養(yǎng)3小時。4。C下，按5,000rpm轉速離心分離收集該細胞。顆粒狀細胞重新懸浮在加入上面描述的蛋白酶抑制劑的10ml冰冷TES緩沖液中。通過加入15m4姿比例5稀釋的TES緩沖液產生滲壓震擾并在冰上培養(yǎng)1小時。仔細將上層清液轉移到一種新試管中。向上層清液中加入。米。坐到最纟冬濃度為10mM。向每個試管中加入1mlPBS內平《耔的Ni-NTAresin(Qiagen)并在4。C下，》走轉式混合器上培養(yǎng)1小時。卄尋i式管在2,000rpm4爭速下離心分離5分4中并仔細除去上層清液。將顆粒狀樹脂重新懸浮在]0ml冷卻的(4。C)清洗緩沖液中(50mMNaH2P04、300mMNaCl、10mM口米唑，pH為8.0)。將懸浮液力口入到polyprep柱(Biorad)內。8ml冷卻的清洗IC沖液用于經自然流動來清洗該柱。采用2ml洗提緩沖液(50mMNaH2P()4、300i"MNaCl、250mM咪唑、pH為8.0)從該柱上洗提出scFv。經280nm處吸收分離餾分并在緩沖液在PBS平衡的PD10脫鹽柱(Amersham)上交換之前將含餾分蛋白質集中在一起。采用SDS-PAGE分析含scFv的PBS并通過280隱處吸收確定其值。將4是純的scFv等分并在-20。C和4。C下存儲。實施例4:scFv提取物抑制干才尤素Y-誘導受體基因表達不同的huIFNY抗體的周質scFv提取物按照上面描述的方法制得。高通量篩選細胞基測試用于鑒別IFNy活性的單鏈可變片)殳(scFv)阻滯劑。一種受到1FN可誘導GBP1啟動子支配的受體基因被轉染到人黑素瘤細月包系中，Me67.8。scFv和IFNy兩者都共同加入到細胞培養(yǎng)物中。6小時培養(yǎng)時間之后，實施熒光素酶測試。發(fā)現抑制螢火蟲熒光素酶感應的scFv^皮保留用于進一步確認。一些scFv提取物抑制劑量依賴模式的IFNy-誘導受體基因(圖15)。對于圖15中顯示的每個scFv克隆，多種濃度(2.7、0.68、0.17、0.043和0.011nM)4姿照上面每個克隆命名的4主顯示的進行測量(從左向右降^氐濃度)。這些濃度下的每個scFv4是取物顯示的抑制百分率在下表3中顯示出。表3:周質scFV提取物抑制1FNy-誘導受體基因表達的百分率<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>實施例5:干擾素y-誘導MHC類II表達的scFv抑制表達實施流式細胞術試驗來鑒別全人IgG抗體、或其片段，能夠封閉IFN誘導MHCII類分子表達。涂覆Me67.8細胞之后，在不同濃度的后備全人抗IFNy羊克隆抗體存在下，5ng/ml重組人IFNY被加入到培養(yǎng)物中。培養(yǎng)48小時后，用熒光標記抗-人MHCII類抗體(HL.A-DR)進行染色并采用FACSCalibu,進行分析。因此，IC50(50%的IFNy-誘導MHCII類表達被抑制，如50%的抑制濃度)，每個后備抗體被測量。按照上面實施例1中描述的方法制得提純的人scFv。采用上面描述的實施流式細力包術試-險對scFv對黑素瘤細胞上IFNy-i秀導MHCII類表達的影響進行評估。這些scFv抑制了黑素瘤細胞上IFNy-誘導MHCII類表達。(圖16,1-12組)。這些scFv克隆抑制黑素瘤細胞上IFNy-誘導MHCII類表達的能力與這里統(tǒng)稱為16C3的小鼠抗人IFNymAb進行對比。scFv克隆(一)和小鼠抗人lFNymAb16C3(…)在圖16中進行了描述。實施例6:將scFv重新才備式化成IgG形式按照上面實施例1中描述的方法制得提純的全人scFv。采用誘導前導序列的特異性寡核苷酸和5'端處的HindIII限制性位點擴增篩選的scFv的VH和Vl序歹'J。Apal或Avrll位點分別,皮引入到重鏈和輕鏈序列的3'端。擴增的Vh序列被分解掉Hindlll/Apal并一皮克隆進pConjl表達載體(LONZA,Basel,Switzerland)中。擴增的Vl序列被分解掉Hindlll/Apal并被克隆進pCon—表達載體(LONZA)中。通過轉染至哺乳動物細胞內進行排序之前檢驗該構建。采用Fugene6專爭染i式劑(Roche,Basel,Switzerland),其適宜表達栽體內的VH和VL(,I)NA序列被轉染至哺乳動物細胞內。簡單地說，峰值量細胞在含有胎牛血清的2ml培養(yǎng)介質的6-孔槽培養(yǎng)板中以每孔6x105個細胞的濃度進行培養(yǎng)。按照廠商說明書，采用Fugene6轉染試劑，將編碼后備VH和V^序列的表達載體共轉染至細胞內。轉染后的1天，將i咅養(yǎng)物吸出，將3m1新無血清介質加入到細胞內并在37。C下培養(yǎng)三天。培養(yǎng)三天之后，上層清液一皮用于收集蛋白G柱上4是純的IgG。依據廠商說明書，采用蛋白質G-G-Sepharose4Bfastflowcolumn(Sigma,St.Louis,MO),將重新格式化全1gG從轉染細胞內無血清上層清液中^是純出。簡單地說，轉染細胞的上層清液與ImmunoPure(G)IgG結合1￡沖液(Pierce,RockfordIL)在4°C下i備養(yǎng)過4文。然后，才羊本通過蛋白G-Sepharose4B快速4主并且釆用洗4是緩沖液4是純IgG。然后，洗4是的IgG餾分用PBS透析并在280nm初吸收確定IgG含量。經SDS畫PAGE4企-驗純度和IgG完整性。實施例7:重建scFv抑制干擾素Y-誘導MHCII類表達4安照上面描述的方法，scFv纟皮重新4各式化成IgG形式。采用上面實施例2中描述的流式細胞術試-瞼對scFv對黑素瘤細胞上IFNy-誘導MHCII類表達的影響進行評估。如圖17，1-7組中顯示的，這些IgG克隆抑制了黑素瘤細胞上IFNy-誘導MHCII類表達。這些IgG克隆抑制黑素瘤細胞上IFNy-誘導MHCII類表達的能力與小鼠抗人IFNymAbl6C3和R&D系統(tǒng)小鼠抗人IFNy抗體MAB285進行對比。對全人克隆(-X-)、小鼠抗人1FNymAb16C3(-▲-)、R&D系統(tǒng)，Inc.(Minneapolis,MN)小鼠抗人IFNyMAB285(--)進行了描述。這些IgG克隆的ICs。值在下表4中顯示出。表4.全人抗-1FNy單克隆抗體的IC5。分析IgGmAbMHCII抑制細胞基測試ic鄰6C3100pMMAB285400pMAC1.2R3P2一A641pMAD14誇1—B9322pMAC1.4R4P2—C10203pMAC1.2R3P2—D8708pMAD1.3R3P5一F81525pMAD1.3R3P6一F9185pMAD14R4P2—G7233pM實施例8:huIFNY抗體克隆到胚系序列的回復突變在這里描述的研究中，A6克隆的核酸和氨基酸序列中核苷酸和氨基酸殘基突變到相應的胚系序列中核苷酸或氨基酸。該過程在這里統(tǒng)稱為"回復突變"。A6重鏈抗體A6的免疫球蛋白重鏈可變基因具有與人胚系DP-47或IGHV3-23(GenBank登錄號M99660)100。/。同源'1"生。一奪A6免疫球蛋白重鏈連接區(qū)(1GHJ)與6個人功能性免疫球蛋白重鏈連接區(qū)比較。A6免疫球蛋白重鏈連接區(qū)(IGHJ)定義為IGHJ2(下表5A),但具有與IGHJ5-02(下表5B)更全面同源性。因此，A6初始IGHJ區(qū)突變到相應IGHJ5-02序歹'J上，但僅對于CDR3外的序列。突變核苷酸和氨基酸殘基在表5A和5B中列出，并且CDR區(qū)用下劃線標出。表5A:A6和人功能性IGHJ2基因之間的對比~§~^FD^WGRGTLVTVSS(seqidno:iio)CTACTGGTACTTCGATCTCTGGGGCCGTGGCACCCTGGTCACTGTCTCCTCAIGHJ2(seqidno:111)YWYFD3jWGRGTLVTVSS(seqidtra:u2)CDR3表5B:A6和人功能性IGHJ5-02基因之間的對比^gACTGGTTCGACCCCTGGGQC,GGGgACCCTGGTCACCGTCTC|GAGl|A6<seqidno:113)gWFDPWG目GTLVTVSS(seqidno:ii4)ACAACTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAighjs-02(seqidmo:115)NWFDPWGQGTLVTVSS(seqidmo:i;ls)-CDR3A6輕鏈抗體A6的免疫球蛋白X可變基因(VL)屬于IGLV6-57或VI-22子群(GenBankAccessionNumberZ73673),與IGLV6-57對比，A6-VL有7個突變，CDRs中有3個突變，骨架區(qū)有4個突變(下表6)。突變核苷酸和氨基酸殘基在表6中框中列出，CDR區(qū)用下劃線才示出。骨架區(qū)中的4個突變?yōu)镵abaH立點43處骨架區(qū)2中Ser到A]a;Kabat位點72處骨架區(qū)3中Ser到Thr;Kabat位點79和80處骨架區(qū)3中Lys到GIu和Thr到Ala。骨架區(qū)的4個突變首先分別被改變，然后所有都回復到相應的人胚系殘基。對比于A6抗體，回復到相應的人胚系氨基酸的這4個殘基的突變不以任何方式改變NI-0501抗體對其把點抗原的結合親和性，NI-0501抗體在這里也統(tǒng)稱為"回復突變的A6"。從A6VL序列到CDR1(Ala到Val)和CDR2(GIn到Arg)相應胚系殘基的突變被完成，并且相對于A6抗體，顯示出不改變NI-0501抗體的huIFNy的完整親浮o寸生表6:A6和人功能性IGHV6-57基因之間的對比cdri回cd;r2humanigl"v6-57nfmltqphsvsestoktvt工sctrssgsi間shyvqwyqqrpgsgpttv工yed順rpsgvp60as-vlnfm;ltqphsvsespgktvt工sct;rssgs工網snyvqwyqqrpgs因pttv工ye:d嘲rpsgvpso回17^8olcrm3HumanIGLV6-S7DRFSGSIDSSSN(^lASLT工SGL網EDEADYYCQSYD[^SN--------------98(SEQIDNO:117)A6-VLDRFSGS工DSSSNHASLTISGL網EDEADYYCQSYD^ISN;R鵬FGGGTKLTVLG112(SEQIDNO:118)NI-05CH重4連和輕《連的完整序列在圖]A-1D中列出。核苷酸和回復突變而產生NI-0501抗體(例如，那些核苷酸和從初始A6序列的殘基)的氨基酸殘基用下劃線標出并在圖1A和iC中用斜體字標出,，實施例9:huIFNy抗體的親和性和結合動力學huIFNy抗體的親和性和結合動力學用Biacore2000instmment(BiacoreAB,Uppsala,Sweden)表征出。NI-0501的200RU經EDC/NHS化學固定在CIBiacorechip上。通過在濃度200nM和lnM之間的HBS-EPIC沖液中通過hlFNy(R&DSystems)測量結合性。流速為100(il/minute并溫度設置為25°C。依據1:1Langmuir才莫型和確定的K。n,K。ff和Kd但(圖18)設置數據。實施例10:huIFNy抗體活性NI-050]huIFNy4元體的活性與克j奮A6(例4口，A6huIFNy抗體)產生的抗體活性進行比庫交。在這研究中，對每個huIFNy抗體抑制人黑素瘤細胞系，Me67.8上重組人IFNy(rhuIFNy)-誘導MHCII類上調的能力進4亍評估。簡單地-說，在NI-0501或A6huIFNy抗體存在下，Me67.8黑素瘤細胞與rhuIFNy—起培養(yǎng)48-72小時。二接照上面實;^例5中描述的方法測量MHCII類上調。兩種抗體出現類似活性，證實Nl-0501huIFNy抗體中回復突變不改變抗體活性(圖19)。在初始IFNy上測試NI-0501huIFNY抗體活性。在該研究中，釆用1jig/ml分裂素PHA活化人周質血單核細胞(PBMCs)48小時，并經ELISA，上層清液被測試原始IFNy的存在。然后，將上層清液用于促進Me67.8細胞上MHC1I類上調。NI-0501能中和由原始人IFNY誘導的MHCII類上調(圖20)。實施例11:huIFNy抗體的交叉反應性結合性測試采用SandwichELISA形式試驗測試NI-0501結合IFNy的能力。簡單地說，采用經過涂覆NI-0501(-▲-)或對照抗種類IFNymAb(-畫-)捕獲圖21中列出的每個曲線圖題目中4是到種類中的IFNY。采用對測試中IFNy具有特異性的多克隆抗體4冢測每個種類的IFNy。如圖21中顯示的，結合老鼠IFNy的N1-0501與對照抗體相似，4旦不對其他種類，除了食蟹《吳之外。IFNy活性的中和對抗體NI-0501測試其中和或抑制幾個不同種類的重組IFNy蛋白的能力。簡單地說，NI-0501存在或不存在情況下，不同測試種類的重《且IFNy一皮放入具有Me67.8細月包的培養(yǎng)物中48-72小時。4姿照上面實施例5中描述的方法測量MHCII類上調。通過抑制人黑素瘤細胞，Me67.8上MHCII類上調來i正實食蟹賓吳IFNy的交叉反應'性和中和(圖21)。NI-0501能夠抑制食蟹猴的IFNY但不能中和其他測試種類的IFNy,證實無這些種類抗體的交叉活性(表7)。表7:N1-0501的交叉反應<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>NhiF^一刀始人IFNyrhu:重組人IFNync『初始食蟹猴IFNyrcy=重組食蟹賓吳IFNyrd=重組狗IFNyrc=重組貓IFNyrr=重l且老鼠IFNyrm=重組小鼠IFNy+=交叉反應-=不交叉反應*=未觀^式的此外，采用1ng/ml分裂素PHA活化食蟹浙美周質血單核細胞(PBMCs)48小時，并經ELISA，上層清液被測試原始IFNy的存在。然后，將上層清液用于促進Me67.8細胞上MHCII類上調。NI-0501能中和由原始食蟹猴IFNy誘導的MHCII類上調(圖22)。實施例1.2:huIFNY抗體的生物活性將這里描述的研究"i殳計成一經對食蟹賓吳纟會藥就測試NI-0501huIFNY抗體的生物活性。才艮才居這里描述的安全性和藥物動力學研究選擇NI-0501，因為該huIFNY抗體被發(fā)現與食蟹猴的IFNy交叉反應,如這里描述的。為評估多重靜脈灌輸之后的不良臨床反應，用下列劑量給猴子進行灌輸30mg/kg、100mg/kg和200mg/kg。在具有分裂基因的小鼠中，觀察到KLH免疫的反應中IgG2a水平降低和igGl水平的^是高，證實IFNy和IgG反應之間的相關性。在13周主要毒理學研究期間，用含有KLH的弗氏不完全佐劑(IFA)對猴子進行免疫。猴子體內KLH/IFA的典型免疫反應，用安慰劑共處理，得出血清中可^l冢測的特異性IgM和IgG反應。S夸這些研究i殳計成評估是否在NI-0501治療的f吳子體內中和IFNY,該猴子用含有KLH的IFA進3亍免疫，改變KLH-特異性IgG效價。實施例13:采用huIFNy抗體調節(jié)IFNy活性經幾個不同細胞系中IFNy上調趨化因子IP-10的產生。基于該觀察，形成全血測試。在該全血測試中，幾個供體中得到的全血樣本與固定濃度的IFNy和不同濃度的NI-0501混合。培養(yǎng)之后，采用ELISA測量IP-10水平，作為一種評估抗-IFNy抗體封閉IP-10產生的功效的方法(圖23)。其4也實施方式雖然結合詳細描述對本發(fā)明進行了介紹，但前面描述的目的在于i兌明而不是限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍由所附^又利要求的范圍來定義。其他的方面、優(yōu)勢、和修改在下列權利要求書界定的范圍內。權利要求1.一種分離的全人單克隆抗-IFNγ抗體或其片段，其中所述抗體包括(a)一種包括氨基酸序列SYAMS(SEQIDNO3)或SNAMS(SEQIDNO43)的VHCDR1區(qū)；(b)一種包括氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO4)或TLTGSGGTAYYADSVEG(SEQIDNO44)的VHCDR2區(qū)；和(c)一種選自由DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO5)；DHSSGWYVISGMDV(SEQIDNO13)；DLTVGGPWYYFDY(SEQIDNO21)；DGWNALGWLES(SEQIDNO29)；GTELVGGGLDN(SEQIDNO45)；RSFDSGGSFEY(SEQIDNO64)；VGSWYLEDFDI(SEQIDNO69)；GGNYGDYFDYFDY(SEQIDNO76)；和DFWVITSGNDY(SEQIDNO89)組成組的氨基酸序列的VHCDR3區(qū)，其中，所述抗體結合IFNγ。2.恨據4又利要求1所述的抗體，其中所述抗體進一步包括(d)—種VLCDR1區(qū)，包括選自由TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8);TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:16);TRSGGSIGSYYVQ(SEQIDNO:32);TRSSGTIASNYVQ(SEQIDN():39):TGSGGSIATNYVQ(SEQIDNO:48);TOSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:55);TRSSGSIASNYVH(SEQIDNO:72);TGRNGNIASNYVQ(SEQIDNO:84);AGSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:97)和TRSSGS1VSNYVQ(SEQIDNO:]06)和組成組的-氮基酸序列；(e)—種VL,CDR2區(qū)，包括選自由EDNQRPS(SEQIDNO:9);EDNQRPS(SEQIDNO:17);DDDQRPS(SEQIDNO:25);DDKKRPS(SEQIDNO:33);EDTQRPS(SEQIDNO:85)和EDNRRPS(SEQIDNO:107)組成組的氨基酸序列；和(f)一種VLCDR3區(qū)，包括選自由QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10);QSNDSDNVV(SEQIDNO:18);QSYDSSNVV(SEQIDNO:26);QSYDSNNLW(SEQIDNO:34);QSYDNS麗WV(SEQIDNO:40);QSYDSDNHHW(SEQIDNO:49);QSYDSSNQEVV(SEQIDNO:56);QSYDSNNFWV(SEQIDNO:61);QSSDTTYHGGW(SEQIDN0:73);QSYEGF(SEQIDNO:79);QSSDSNRVL(SEQIDNO:86);QSFDSTNLVV(SEQIDNO:92);andQSYSYNNQW(SEQIDNO:98)組成組的氨基酸序列。3.才艮據權利要求1所述的抗體，其中所述抗體為IgG同型體。4.根據4又利要求2所述的抗體，其中所述抗體包括一種由享、基酸序列SYAMS(SEQIDNO:3)組成的VnCDR1區(qū)；一種由氨基酉臾序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)組成的VHCDR2區(qū)；一種由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)組成的VHCDR3區(qū)；一種由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQII)N():8)組成的VtCDR1區(qū)；一種由氨基酸序列FX)NQRPS(SEQIDNO:9)組成的VLCDR2區(qū)；一種由氨基S交序列QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)組成的VLCDR3區(qū)。5.根據權利要求1所述的抗體,其中所述抗體為NI-0501。6.—種分離的全人單克隆抗體，其中所述抗體包括一種選自由SEQIDNOS:2、12、20、28、36、42、51、58、63、68、75、81、88、94或103組成組的重《連可變羞、基酸序列，其中所述抗體結合IFNy。7.4艮據^又利要求6所述的抗體，其中所述抗體進一步包括一種選自由SEQIDNOS:7、15、23、31、38、47、54、60、66、71、78、83、91、96或105組成組的輕鏈可變氨基酸序列，其中所述3元體結合1FNy。8.才艮據斥又利要求7所述的抗體，其中所述抗體包括一種由氨基酸序歹'JSYAMS(SEQIDNO:3)組成的VHCDR1區(qū)；一種由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)組成的VHCDR2區(qū)；一種由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)組成的VHCDR3區(qū)；一種由氨基酸序歹'JTRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8)纟且成的VLCDR1區(qū)；一種由氨基酸序列EDNQRPS(SEQIDNO:9)組成的VLCDR2區(qū)；和一種由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)纟且成的VLCDR3區(qū)。9.根據權利要求4所述的抗體，其中所述抗體為IgG同型。10.—種藥物組合物，包括權利要求1所述抗體和一種載體。11.一種藥物組合物，包括權利要求4所述的一種抗體和一種載體。12.—種》差解自體免疫疾病或炎性紊亂綜合癥的方法，該方法包括對需要的主體給藥足量的權利要求1所述的抗體，從而緩解主體體內自體免疫疾病或炎性紊亂綜合癥。13.才艮據權利要求12所述的方法，其中所述主體是人。14.根據4又利要求12所述的方法，其中所述抗體包4舌一種由婁、基酸序歹ilSYAMS(SEQIDNO:3)組成的VHCDR1區(qū)；一種由氨基酸序列AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)組成的VHCDR2區(qū)；一種由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)組成的VHCDR3區(qū)；一種由氨基酸序列TRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8)纟且成的VLCDR1區(qū)；一種由氨基酸序歹'JEDNQRPS(SEQIDNO:9)組成的VL,CDR2區(qū)；和一種由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)纟且成的VLCDR3區(qū)。15.根據權利要求14所述的方法，其中所述抗體為NI-0501。16.根據權利要求12所述的方法，其中所述自體免疫疾病或炎性紊亂選自由Crohn's疾病、系統(tǒng)性紅斑《良瘙、干褲、類風濕性關節(jié)炎、血管炎、異位性皮炎和繼發(fā)-進展型多發(fā)性硬化所組成的組。17.才艮據4又利要求12所述的方法，其中對所述抗體進行l(wèi)爭月永纟會藥。18.4艮據4又利要求12所述的方法，其中所述抗體與一種第二試劑共同給藥，所述第二試劑選自(a)—種識別選自白細月包介素1(IL-1)、IL-2、IL-4、IL畫6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一種或一種以上細胞因子的杏t細月包因子；(b)一種識別選自1L-1、IL畫2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-5、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一種或一種以上細胞因子的抗體趨化因子試劑；(c)一種選自MIP1a、MIP1p、RANTES、MCP、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的趨化因子。19.一種減少細胞上MHCII類表達的方法，該方法包4舌用足夠劑量的權利要求1所述的抗體接觸細胞來減少所述細胞上Mhcn類表達。20.根據權利要求19所述的方法，其中所述細胞為人黑素瘤細月包。21.根據權利要求19所述的方法，其中所述抗體包括一種由氨基&復序歹'JSYAMS(SEQIDNO:3)組成的VHCDR1區(qū)；一種由氨基酸序歹i)AISGSGGSTYYADSVKG(SEQIDNO:4)組成的VHCDR2區(qū)；一種由氨基酸序列DGSSGWYVPHWFDP(SEQIDNO:5)組成的VHCDR3區(qū)；一種由氨基酸序歹'jTRSSGSIASNYVQ(SEQIDNO:8)組成的CDR1區(qū)；一種由氨基酸序列EDNQRPS(SEQIDNO:9)組成的VLCDR2區(qū)；和一種由氨基酸序列QSYDGSNRWM(SEQIDNO:10)組成的VLCDR3區(qū)。22.根據權利要求21所述的方法，其中所述抗體為NI-0501。23.根據權利要求19所述的方法，其中所述細胞與一種第二試劑接觸，所述第二試劑選自(a)一種識別選自由白細胞介素1(IL-1)、IL-2,IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一種或一種以上細胞因子的抗細^^因子；(b)一種識別選自由IL-I、11,2、IL-4、IL-6、IL-12、IL-13、IL-15、1L畫17、IL-18、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-27和IL-31的一種或一種以上細胞因子的抗體趨化因子試劑；(c)一種選自MlPIa、MIPIp、RANTES,MCPl、IP-10、ITAC、MIG、SDF和fractalkine的趨化因子。全文摘要本發(fā)明涉及能夠結合人干擾素γ(IFNγ)，調節(jié)IFNγ與其受體IFNγ-R之間的相互作用，和/或調節(jié)IFNγ的生物活性的全人抗體和其片段。本發(fā)明還涉及在預防或治療免疫相關紊亂和在改善與免疫相關紊亂有關的綜合癥中的使用這種抗IFNγ抗體。文檔編號C07K16/24GK101151277SQ200680009962公開日2008年3月26日申請日期2006年1月27日優(yōu)先權日2005年1月27日發(fā)明者奧利維爾·萊格,尼古拉斯·費希爾,格雷·艾爾森,沃爾特·弗林申請人:諾維莫尼公司