專利名稱：治療病毒性疾病和肝纖維化的干擾素藥物治療的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及黃病毒感染、尤其是西尼羅病毒感染和丙肝病毒感染領域，并涉及肝纖維化領域。
背景技術：
目前美國西尼羅病毒感染的人數(shù)正在上升。像丙肝病毒一樣，西尼羅病毒是α樣黃病毒屬的成員。大多數(shù)α樣病毒，包括丙肝病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒，對I型干擾素治療是高度敏感的。西尼羅病毒的美國似乎將成為地方性的，因為它具有鳥類宿主并通過蚊子傳播。西尼羅病毒可以造成嚴重的自限性發(fā)熱、身體疼痛、腦腫脹、昏迷、癱瘓和死亡。盡管通常認為西尼羅病毒疾病導致死亡的概率僅有1/40,000，在美國死亡率似乎較高。尤其是，最近報道在路易斯安那州有5名死者?？赡苊绹木甓拘愿鼜?，或者美國人群在遺傳上易患更嚴重的臨床病程。在中東國家，幾個世紀以來，西尼羅病毒已經(jīng)成為地方性的，這樣可允許自然選擇產(chǎn)生具有病毒抗性的人群。對這種疾病現(xiàn)在還沒有有效治療。
在美國，丙肝病毒(HCV)感染是最常見的慢性血液傳播感染。雖然新的感染數(shù)在減少，但慢性感染的負擔是相當大的，疾病控制中心估計在美國有三百九十萬感染的人(1.8％)。慢性肝病是引起美國成人死亡的第10個主要原因，每年大約有25,000人死亡，或占所有死亡人數(shù)的約1％。研究表明40％的慢性肝病是HCV相關的，每年估計導致8000-10000人死亡。與HCV相關的末期肝病是成人中肝移植的最常見的指征。
近十年來快速地發(fā)展了慢性丙肝的抗病毒療法，在治療效果上已經(jīng)得到了明顯的改善。不過，即使用PEG化的IFN-α加上三氮唑核苷的組合療法，仍有40-50％患者治療失敗，即為無應答者或復發(fā)者。這些患者目前沒有有效的替代療法。特別是在肝活組織檢查中發(fā)現(xiàn)晚期纖維化或肝硬化的患者處于形成晚期肝病的并發(fā)癥的顯著危險，包括形成腹水、黃疸、靜脈曲張出血、腦病和進行性肝衰竭，以及肝細胞癌的風險明顯增加。
慢性HCV感染的高流行對于美國未來的慢性肝臟疾病的負擔是一個重要的公共健康問題。來自國家健康和營養(yǎng)檢測調(diào)查(NHANES III)的數(shù)據(jù)表明從20世紀60年代后期到20世紀80年代初期，特別在20-40歲的人中，新的HCV感染率大幅度上升。據(jù)估計患有20年或更長的長期HCV感染的人數(shù)從1990年到2015年會上升4倍多，從750,000到三百萬以上。30或40歲感染的人的比甚至更多。由于HCV相關的慢性肝病的風險與感染的持續(xù)時間有關，對于感染20年以上的患者具有肝硬化進行性增加的危險，這將導致在1965-1985年間感染的患者中，與肝硬化有關的發(fā)病率和死亡率明顯增加。
由于對肝臟的慢性毒損傷，如丙肝病毒(HCV)感染、自體免疫損傷和長期暴露于毒物，如酒精會引發(fā)肝纖維化。慢性毒損傷導致肝細胞損傷和伴隨慢性炎癥的修復的重復循環(huán)。在不定的時段里，由于宿主創(chuàng)傷修復反應的結果使異常的細胞外基質(zhì)進行性地積累。留下未檢測的導致纖維物質(zhì)沉積增加，直至肝臟結構被扭曲，并危及肝臟的再生能力。瘢痕組織在肝臟內(nèi)進行性地積聚最終引起組織病理學上所描繪的肝硬化，定義為纖維間隔的形成，它遍布于具有小結節(jié)形成的肝臟。
本領域需要治療黃病毒感染，例如西尼羅病毒感染、丙肝病毒感染、登革熱病毒感染、黃熱病毒感染，以及治療肝纖維化的改進方法。本發(fā)明旨在解決該需求。
文獻METAVIR(1994)Hepatology 2015-20；Brunt(2000)Hepatol.31241-246；Alpini(1997)J.Hepatol.27371-380；Baroni等，(1996)Hepatol.231189-1199；Czaja等，(1989)Hepatol.10795-800；Grossman等，(1998)J.Gastroenterol.Hepatol.131058-1060；Rockey和Chung(1994)J.Invest.Med.42660-670；Sakaida等，(1998)J.Hepatol.28471-479；Shi等，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9410663-10668；Baroni等，(1999)Liver 19212-219；Lortat-Jacob等，(1997)J.Hepatol.26894-903；Llorent等，(1996)J.Hepatol.24555-563；美國專利No.5,082,659；歐洲專利申請EP294,160；美國專利No.4,806,347；Balish等，(1992)J.Infect.Diseases 1661401-1403；Katayama等，(2001)J.ViralHepatitis 8180-185；美國專利No.5,082,659；美國專利No.5,190,751；美國專利No.4,806,347；Wandl等，(1992)Br.J.Haematol.81516-519；歐洲專利申請No.294,160；加拿大專利No.1,321,348；歐洲專利申請No.276,120；Wandl等，(1992)Sem.Oncol.1988-94；Balish等，(1992)J.Infectious Diseases 1661401-1403；Van Dijk等，(1994)Int.J.Cancer 56262-268；Sundmacher等，(1987)Current EyeRes.6273-276；美國專利Nos.6,172,046；6,245,740；5,824,784；5,372,808；5,980,884；公開的國際專利申請W096/21468；WO96/11953；Torre等，(2001)J.Med.Virol.64455-459；Bekkering等，(2001)J.Hepa tol.34435-440；Zeuzem等，(2001)Gastroenterol.1201438-1447；Zeuzem(1999)J.Hepatol.3161-64；Keeffe和Hollinger(1997)Hepatol.26101S-107S；Wills(1990)Clin.Pharmacokinet.19390-399；Heathcote等，(2000)New Engl.J.Med.3431673-1680；Husa和Husova(2001)Bratisl.Lek.Listy 102248-252；Glue等，(2000)Clin.Pharmacol.68556-567；Bailon等，(2001)Bioconj.Chem.12195-202；以及Neumann等，(2001)Science 282103；Zalipsky(1995)Adv.Drug Delivery ReviewsS.16，157-182；Mann等，(2001)Lancet 358958-965；Zeuzem等，(2000)NewEngt.J.Med.3431666-1672；美國專利Nos.5,985,265；5,908,121；6,177,074；5,985,263；5,711,944；5,382,657和5,908,121；Osborn等，(2002)J.PharmaCol.Exp.Therap.303540-548；Sheppard等，(2003)Nat.Immunol.463-68；Chang等，(1999)Nat.Biotechnol.17793-797；Adolf(1995)Multiple Sclerosis增補本1，1S44-S47。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療α病毒感染的方法；治療丙肝病毒(HCV)感染的方法；治療西尼羅病毒感染的方法；治療登革熱病毒感染的方法；治療黃熱病毒感染的方法；減少肝纖維化的方法；在患有肝纖維化的個體中增加肝功能的方法；降低與HCV和肝硬化相關的并發(fā)癥的發(fā)病率的方法；以及在受病毒感染的患者中降低病毒負荷、或減少病毒清除的時間、或降低臨床發(fā)病率或死亡率的方法。這些方法通常包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療病毒感染或肝纖維化。
發(fā)明特征本發(fā)明的特征是治療α病毒感染的方法，所述方法通常包括共施用給個體IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，其劑量能有效緩解此病的臨床病程。本發(fā)明另一特征是通過給予個體協(xié)同有效量的IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，以緩解此病的臨床病程從而治療α病毒感染的方法。
本發(fā)明的特征是治療西尼羅病毒感染的方法，所述方法通常包括給予個體I型或III型干擾素受體激動劑、IFN-γ或同時給予IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，其劑量能有效減少病毒清除時間，或降低臨床發(fā)病率或死亡率。本發(fā)明另一特征是通過給予個體協(xié)同性有效劑量的IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，以減少病毒清除時間或降低臨床發(fā)病率或死亡率從而治療西尼羅病毒感染的方法。
本發(fā)明的特征是治療登革熱病毒感染的方法，所述方法通常包括給予個體I型或III型干擾素受體激動劑、IFN-γ或同時給予IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，其劑量能有效減少病毒清除時間，或降低臨床發(fā)病率或死亡率。本發(fā)明另一特征是通過給予個體協(xié)同性有效劑量的IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，以減少病毒清除時間或降低臨床發(fā)病率或死亡率從而治療登革熱病毒感染的方法。
本發(fā)明的特征是治療黃熱病毒(YFV)感染的方法，所述方法通常包括給予個體I型或III型干擾素受體激動劑、IFN-γ或同時給予IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，其劑量能有效減少病毒清除時間，或降低臨床發(fā)病率或死亡率。本發(fā)明另一特征是通過給予個體協(xié)同性有效劑量的IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，以減少病毒清除時間或降低臨床發(fā)病率或死亡率從而治療YFV感染的方法。
本發(fā)明的特征是治療丙肝病毒(HCV)感染的方法，所述方法通常包括共施用給個體IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑，其劑量能有效獲得持續(xù)病毒應答。本發(fā)明另一特征是通過給予個體協(xié)同有效量的IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑以實現(xiàn)持續(xù)病毒應答，從而治療HCV感染的方法。
本發(fā)明的特征是減少個體肝纖維化的方法，所述方法通常包括同時給予減少肝纖維化有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應或減少肝纖維化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。本發(fā)明的另一個特征是通過給予協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ來減少個體肝纖維化的方法，任選包括同時給予患者由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應或減少肝纖維化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物。在一些實施方案中，肝纖維化的程度通過肝活組織檢查的預處理和后處理分階段測定，其中在將預處理的肝活組織檢查與后處理的活性檢查相比時，如通過標準化的評分系統(tǒng)所測定的，肝纖維化的階段減少至少一個單位。
本發(fā)明的特征是在患有肝纖維化的個體中增加肝功能的方法，所述方法通常包括同時給予增加肝功能有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的增加肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。本發(fā)明的另一個特征是通過給予協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ來增加肝功能的方法，任選包括同時給予患者由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應和增加肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物。肝功能可通過測定選自血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、血清膽紅素水平、血小板數(shù)、血清白蛋白水平、門靜脈壓的改善、腹水的減少、腦病水平的下降和內(nèi)靜脈曲張的程度下降等參數(shù)來顯示。
本發(fā)明的特征是減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的方法，所述方法通常包括同時給予減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。本發(fā)明的另一個特征是通過給予協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ來減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的方法，任選包括同時給予患者由I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療實現(xiàn)的減少肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物。肝硬化并發(fā)癥的例子是門靜脈壓高壓癥、進行性肝功能不全和肝細胞癌。
如上所述，實施聯(lián)合治療個體α病毒感染、丙肝病毒感染、西尼羅病毒感染、登革熱病毒感染、YFV感染和/或肝纖維化的方法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。在一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。在其它實施方案中，以分開的制劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當以分開的制劑給予時，基本上可同時給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，或可在24小時內(nèi)順次給予。在許多實施方案中，皮下多劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，以受控藥物輸送裝置給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，基本上連續(xù)地或經(jīng)可控藥物輸送裝置連續(xù)地給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，此受控藥物輸送裝置是一種可植入的灌注泵，此灌注泵可通過皮下灌注向個體輸送I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
在一些采用聯(lián)合療法的實施方案中，在I型或III型干擾素受體激動劑治療的整個過程期間給予IFN-γ。在其它實施方案中，給予IFN-γ的時間與I型或III型干擾素受體激動劑治療時間重疊。例如，IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑治療結束前結束；IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始后開始，并在IFN-γ治療結束后結束；IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑開始后開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑結束前結束；或IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑治療結束后結束；或IFN-γ治療可在IFN-α治療開始前開始并在I型或III型干擾素激動劑治療結束后結束。在一些采用共同給予吡非尼酮或吡非尼酮類似物的實施方案中，可在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的連續(xù)時間可與吡非尼酮或吡非尼酮類似物治療的持續(xù)時間共同存在。在其它實施方案中，用吡非尼酮或吡非尼酮類似物治療的過程可與I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的過程重疊，例如，吡非尼酮或吡非尼酮類似物治療可在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療結束前結束；吡非尼酮治療可在IFN-α和/或IFN-γ治療開始后開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療結束前結束；或吡非尼酮治療可在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療結束后結束。
在其它實施方案中，三氮唑核苷與I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ共同給予。再在其它實施方案中，三氮唑核苷與I型或III型干擾素受體激動劑、IFN-γ和吡非尼酮(或特定的吡非尼酮類似物)共同給予。
在許多實施方案中，上述任何方法包括給予IFN-α和IFN-γ。在這些實施方案中，所述方法包括共同給予三氮唑核苷、IFN-α和IFN-γ。在其它實施方案中，所述方法包括共同給予IFN-α、IFN-γ和吡非尼酮或吡非尼酮類似物。
在許多實施方案中，上述任何方法包括給予聚乙二醇化的(PEG化的)IFN-α偶聯(lián)物。在一些實施方案中，PEG化IFN-α偶聯(lián)物是單PEG化的IFN-α。在其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是通過IFN-α多肽的賴氨酸殘基或N-末端氨基酸殘基共價連接于單一PEG部分。在其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽，通過其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG部分的活化羧基之間的酰胺鍵共價連接于一個PEG部分。在其它實施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價連接于一個線性PEG部分。在其它實施方案中，該單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價連接于一個線性30kD PEG部分(“單PEG(30kD，線性)化的IFN-α”)。在其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽通過其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG部分的活化羧基之間的酰胺鍵共價連接于一個線性30kDPEG部分。在其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽通過其賴氨酸殘基的ε-氨基或α-氨基與PEG部分的活化丙?；g的酰胺鍵共價連接于一個線性30kD PEG在。其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽共價連接于一個線性單甲氧基-PEG(mPEG)。在其它實施方案中，單PEG化IFN-α偶聯(lián)物是IFN-α多肽和線性琥珀酰亞胺丙酸酯活化的30kD mPEG之間縮合反應的產(chǎn)物。在采用PEG化IFN-α偶聯(lián)物的上述任何方法中，IFN-α多肽可以是共有干擾素(CIFN)多肽。在采用PEG化IFN-α偶聯(lián)物的上述任何方法中，IFN-α多肽可以是干擾素alfacon-1的CIFN多肽。
附圖簡述

圖1描述了在皮下注射西尼羅病毒前一天給予干擾素-αB/D和AmpligenTM對4-5周齡的雌性BALB/c小鼠血漿WNV滴度的影響。血漿在感染后3天收集。
圖2描述了A549細胞中IFN-alfacon 1和IFN-γ1b抗VSV的劑量效應。
圖3描述了A549細胞中干擾素的細胞毒測定結果。
圖4a和4b描述了A549細胞中IFN-alfacon 1/IFN-γ1b的組合物(圖4a比例為1∶120；圖4b比例為1∶60)抗VSV的直接抗病毒效應。
圖5a和5b描述了VSV/A549模型中對IFN-alfacon 1和IFN-γ1b組合物(圖5a比例為1∶120；圖5b比例為1∶60)抗病毒活性的EC-50、EC-75和EC 90濃度進行等效線圖(isobologram)分析。
定義本文使用的術語“肝纖維化”指在慢性肝炎感染中發(fā)生的肝臟中瘢痕組織的生長。
術語“個體”、“宿主”、“受試者”和“患者”本文可互換使用，指哺乳動物，包括但不限于靈長動物，包括猿猴和人。
本文使用的術語“α病毒”及其語法上的變體指具有以下特征的一組病毒(i)RNA基因組，(ii)在宿主細胞的細胞質(zhì)中的病毒復制，和(iii)病毒復制周期中出現(xiàn)的非DNA階段。
本文使用的術語“肝功能”指肝的正常功能，包括但不限于，合成功能，包括但不限于，合成蛋白質(zhì)，如血清蛋白(如白蛋白，凝固因子，堿性磷酸酶，氨基轉移酶(如丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰轉肽酶等)，合成膽紅素，合成膽固醇和合成膽酸；肝的代謝功能，包括，但不限于，碳水化合物代謝，氨基酸和氨代謝，激素代謝和脂肪代謝；外源藥物的去毒；血液動力學功能，包括內(nèi)臟和門靜脈的血液動力等。
術語“持續(xù)病毒應答”(SVR；也稱作“持續(xù)應答”或“持久應答”)在這里是指個體對HCV感染治療方案的反應，用血清HCV滴度表示。通常，“持續(xù)病毒應答”指在治療結束后的至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月或至少約6個月的一段時間在患者血清內(nèi)未發(fā)現(xiàn)可檢測的HCV RNA(例如，每毫升血清小于約500、小于約200或小于約100個基因組拷貝)。
“治療失敗患者”在這里通常是指在對以前的HCV治療無反應的HCV感染者(稱為“無應答者”)，或最初對以前的治療有反應但治療效果無法持續(xù)的HCV感染者(稱為“復發(fā)者”)。以前的治療通?？砂ㄓ肐FN-α單獨療法或IFN-α聯(lián)合療法進行治療，所述聯(lián)合療法可包括給予IFN-α和一種抗病毒劑，如三氮唑核苷。
本文使用的術語“治療”、“治療的”指獲得所需藥理和/或生理效果。該效果就完全或部分預防疾病或其癥狀來說可能是預防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或由該疾病引起的副作用來說可能是治療性的。本文使用的術語“治療”包括對哺乳動物，特別是人的疾病的治療，包括(a)預防可能易患疾病但尚未診斷出患有此病的受試者中出現(xiàn)的疾??；(b)抑制疾病，即阻止其發(fā)展；和(c)減輕疾病，即使疾病消退。
本文交替使用的術語“個體”、“宿主”、“受試者”和“患者”指哺乳動物，包括，但不限于，鼠、猿、人、哺乳動物家畜、哺乳動物和哺乳動物寵物。
“特定的吡非尼酮類似物”及其所有語法上的變化是指，但不限于，表1中列出的每個和所有的吡非尼酮類似物。
本文所用術語“I型干擾素受體激動劑”，指人的I型干擾素受體的任何天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的、能通過受體結合并引起信號轉導的配體。I型干擾素受體激動劑包括的干擾素有天然產(chǎn)生的干擾素、修飾的干擾素、合成的干擾素、PEG化干擾素、含有干擾素和異源蛋白的融合蛋白、改組的干擾素、對干擾素受體特異的抗體、非肽化學激動劑等。
本文所用術語“III型干擾素受體激動劑”指人IL-28受體α(“IL-28R”)的任何天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的配體，其氨基酸序列見Sheppark等人描述，能通過該受體結合并引起信號轉導。
本文的術語“給藥事件”指對需要的患者給予抗病毒劑，該事件涵蓋來自藥物分發(fā)裝置的一個或多個抗病毒劑的發(fā)放。這樣，本文使用的術語“給藥事件”包括，但不限于連續(xù)輸遞裝置的安裝(如，泵或其它控釋的可注射系統(tǒng))；和單皮下注射接著連續(xù)輸遞系統(tǒng)的安裝。
本文所用術語“連續(xù)輸送”(如“向某組織連續(xù)輸送”)，意思指將藥物運送至要輸送的部位，如組織中；其方式是，在所選時間段向該組織不斷輸送所需量的藥物，在所選時間段期間患者每分鐘接受大約相同量的藥物。
本文所用“可控性釋放”(如“可控性藥物釋放”)，意為基本上不受使用環(huán)境影響以選擇的速度或可控制的速度、間隔、和/或劑量釋放藥物(如I型或III型干擾素受體激動劑，如IFN-α)。因此“可控性釋放”包括但不一定限于基本上持續(xù)地遞送和模式遞送(如一段時間的間歇性輸送，定期或不定期間隔)。
本文所用“模式的”或“暫時的”指通常以基本上有規(guī)律的模式在預先選擇的時間內(nèi)輸送藥物(如除了與例如推注相關的時間)。“模式的”或“暫時的”藥物輸送，包括以遞增、遞減，基本恒定或脈沖性速度輸送藥物(如每單位時間的給藥量、每單位時間給藥的體積)，還包括持續(xù)或基本上持續(xù)或長期輸送藥物。
術語“可控藥物輸送裝置”指包括其中含有的藥物或其它所需物質(zhì)受該裝置本身的控制或決定而釋放(如釋放速度、時間)，并且基本上不受用藥環(huán)境影響，或在用藥環(huán)境中以可重復性速度釋放藥物的任何裝置。
本文所用“基本上持續(xù)性”，例如“基本上持續(xù)性輸注”或“基本上持續(xù)性輸送”指輸送藥物的方式是在預定的藥物輸送期間基本上不停頓地輸送藥物，患者在該預定期間任何8小時間隔內(nèi)所接受的藥量從不下降至零。另外，“基本上持續(xù)性”藥物輸送還可包括以基本恒定的、預先選擇的速度或速度范圍(如每單位時間的輸藥量，單位時間輸藥的體積)輸送藥物，在所選的藥物輸送期間基本上不停頓地輸藥。
“基本穩(wěn)定狀態(tài)”在這里用于可隨時間變化的生物學參數(shù)，指在一段時程后具有基本恒定值的生物學參數(shù)，這樣，由時程中任何8小時內(nèi)作為時間函數(shù)的生物學參數(shù)值確定的曲線下面積(AUC8小時)不會比時程中8小時內(nèi)生物學參數(shù)的曲線下面積(AUC8小時平均)高或低約20％，優(yōu)選不會高或低約15％，最優(yōu)選不會高或低約10％。AUC8小時平均被定義為整個時程內(nèi)生物學參數(shù)曲線下的面積(AUC總和)與時程內(nèi)8小時間隔數(shù)(t總和1/3天)的商(q)，即q＝(AUC總和)/(t總和1/3天)。例如，在藥物的血清濃度范圍，當時程中任何8小時內(nèi)藥物血清濃度曲線下面積(AUC8小時)不比時程中8小時內(nèi)藥物血清濃度曲線下的平均面積(AUG8小時平均)高或低20％，即就藥物血清濃度與時程而言，AUC8小時不比AUC8小時平均高或低20％，則藥物的血清濃度在時程中基本保持在穩(wěn)定狀態(tài)。
在進一步闡述本發(fā)明前，應當理解，本發(fā)明不為描述的特定實施方案所限定，當然可以有所變化。也應當理解，本文使用的術語僅供闡述特定的實施方案，并非用來限定，因為本發(fā)明的范圍僅由所附的權利要求書限定。
在提供了數(shù)值范圍的情況下，應當理解，除非文中清楚地指出，否則各個居中值，直到下限單位的十分之一，在該范圍的上限和下限之間，并且在該設定范圍中的任何設定或居中值包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。可獨立地包含在較小范圍里的這些較小范圍的上限和下限也包含在本發(fā)明中，它們服從于任何設定范圍里特定的排除性限定。當設定的范圍包括一個或兩個限定值，排除兩個包含的限定值中的任何一個的范圍也包括在本發(fā)明中。
除非另作定義，本文所有的科技術語與本發(fā)明所屬技術領域里常用的含義相同。雖然在實施或試驗本發(fā)明時也可使用與本文所述的相似或等同的任何方法和材料，但現(xiàn)在描述的是優(yōu)選的方法和材料。本文所提及的所有出版物引入以做參考，以揭示和描述與引用的出版物有關的方法和/或材料。
必須注意到，除非文中清楚地指出，本文和權利要求所用的單數(shù)形式“一種”和“該”包括復數(shù)。因此，例如，“一種方法”包括多個這類方法，“一種劑量”包括本領域熟練的技術人員已知的一種或多種劑量和其等價物，等等。
本文僅提供在本發(fā)明申請之日前公開的出版物。根據(jù)先前的發(fā)明，文中沒有任何內(nèi)容用于解釋承認本發(fā)明沒有資格在這些出版物之前的時間里提交。此外，提供的出版日期可能與實際的出版日期不同，這需要單獨確認。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了治療α病毒感染的方法，包括治療西尼羅病毒感染的方法、治療登革熱病毒感染的方法、治療YFV感染的方法和治療HCV感染的方法；以及治療肝纖維化的方法，包括減少臨床肝纖維化，降低肝纖維化發(fā)生的可能性，降低與肝纖維化有關的參數(shù)。這些方法通常涉及對需要的個體給予有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。在許多實施例中，特別感興趣的是治療人。
肝纖維化是與肝硬化有關的并發(fā)癥，如門靜脈高壓癥、進行性的肝功能不全和肝細胞癌等的先兆。降低肝纖維化因此可降低這類并發(fā)癥的發(fā)病率。因此，本發(fā)明進一步提供了降低個體形成與肝硬化有關的并發(fā)癥的可能性的方法。
本方法一般包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ以治療西尼羅病毒感染。本文使用的“治療有效量的”I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ表示治療西尼羅病毒感染有效量的I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ。
本發(fā)明的其它方法一般包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。本文使用的“治療有效量的”I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ表示這樣的量，它能有效治療α病毒感染，或治療西尼羅病毒感染，或治療HCV感染，或在HCV感染中獲得持續(xù)病毒應答，或減少肝纖維化，或降低個體發(fā)展成肝纖維化的可能性，或降低與肝纖維化有關的參數(shù)，或減少與肝硬化有關的疾病。
在某些實施方案中，本方法包括給予協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。本文使用的與具體疾病的聯(lián)合治療中使用的“協(xié)同有效量的”I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，以及其任何語法上的等價形式，表示這樣的量，當這種量的I型或III型干擾素受體激動劑和這種量的IFN-γ聯(lián)合使用時，其效果高于用于疾病單一療法的相同量的I型或III型干擾素受體激動劑和用于疾病單一療法的相同量的IFN-γ的簡單相加效果。
例如，在某些實施方案中，這些方法涉及給予協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ。本文使用的“協(xié)同有效量的”IFN-α和IFN-γ，以及其任何語法上的等價形式，表示這樣的量，當這種量的IFN-α和這種量的IFN-γ聯(lián)合使用時，其效果高于用于疾病單一療法的相同量的IFN-α和用于疾病單一療法的相同量的IFN-γ的簡單相加效果。
在本發(fā)明的一些實施方案中，當用于疾病的聯(lián)合療法時，選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑和選擇量的IFN-γ是有效的，但當用于疾病單一療法時，所述選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑和/或選擇量的IFN-γ是無效的。因此，本發(fā)明包括(1)一種治療方案，其中，當用于疾病的聯(lián)合療法時，選擇量的IFN-γ增強了選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑的療效，其中所述選擇量的IFN-γ當用于疾病單一療法時未提供治療益處，(2)一種治療方案，其中，當用于疾病的聯(lián)合療法時，選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑增強了選擇量的IFN-γ的療效，其中所述選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑當用于疾病單一療法時未提供治療益處，(3)一種治療方案，其中，當用于疾病的聯(lián)合療法時，選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑和選擇量的IFN-γ提供了治療益處，而當選擇量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ分別單獨用于疾病單一療法時未提供治療益處。本文使用的“協(xié)同有效量的”I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，以及其任何語法上的等價形式，應該理解為包括上述(1)-(3)任一項所述的任何方案。
α病毒本發(fā)明提供了治療α病毒感染的方法。該方法一般包括給予個體改善疾病臨床病程有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
所述方法是否可有效治療α病毒感染可通過住院期次數(shù)或長度的減少、病毒清除時間的減少或臨床發(fā)病率或死亡率的降低、或疾病應答的其它指標來確定。
總之，有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是這樣的量，它能有效(i)減少病毒清除時間，(ii)降低疾病臨床病程中的發(fā)病率或死亡率，或(iii)降低患者的病毒負荷。
西尼羅病毒本發(fā)明提供了治療西尼羅病毒感染的方法。該方法一般包括給予個體減少個體內(nèi)病毒清除時間和/或改善疾病臨床病程有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，或IFN-γ，或I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
所述方法是否可有效治療西尼羅病毒感染可通過住院期次數(shù)或長度的減少、病毒清除時間的減少或臨床發(fā)病率或死亡率的降低、或疾病應答的其它指標來確定。
總之，有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是這樣的量，它能有效減少病毒清除時間，或有效降低疾病臨床病程中的發(fā)病率或死亡率。
登革熱病毒本發(fā)明提供了治療登革熱病毒感染的方法。該方法一般包括給予個體減少個體內(nèi)病毒清除時間和/或改善疾病臨床病程有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，或IFN-γ，或I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
所述方法是否可有效治療登革熱病毒感染可通過住院期次數(shù)或長度的減少、病毒清除時間的減少或臨床發(fā)病率或死亡率的降低、或疾病應答的其它指標來確定。
總之，有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是這樣的量，它能有效減少病毒清除時間，或有效降低疾病臨床病程中的發(fā)病率或死亡率。
黃熱病毒本發(fā)明提供了治療黃熱病毒(YFV)感染的方法。該方法一般包括給予個體減少個體內(nèi)病毒清除時間和/或改善疾病臨床病程有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，或IFN-γ，或I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
所述方法是否可有效治療YFV感染可通過住院期次數(shù)或長度的減少、病毒清除時間的減少或臨床發(fā)病率或死亡率的降低、或疾病應答的其它指標來確定。
總之，有效量的I型或III型干擾素受體激動劑，有效量的IFN-γ，或有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是這樣的量，它能有效減少病毒清除時間，或有效降低疾病臨床病程中的發(fā)病率或死亡率。
丙肝病毒本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法。該方法一般包括給予個體減少個體內(nèi)病毒負荷并實現(xiàn)持續(xù)病毒應答有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
所述方法是否可有效治療HCV感染可通過測量病毒負荷，或通過測量與HCV感染有關的參數(shù)，包括但不限于肝纖維化、血清轉氨酶水平的升高以及肝臟中壞死炎性活性(necroinflammatory activity)來確定。肝纖維化的指標將在下面詳細討論。
病毒負荷可通過測量血清中的病毒滴度或水平來測定。這些方法包括，但不限于，定量聚合酶鏈式反應(PCR)和分支DNA(bDNA)試驗。已經(jīng)開發(fā)了測量HCV RNA的病毒負荷(滴度)的定量測定法。許多此類測定法可通過商業(yè)獲得，其中包括定量反轉錄PCR(RT-PCR)(Amplicor HCV MonitorTM，Roche Molecular Systems，新澤西)；和分支DNA(脫氧核糖核酸)信號擴增測定(QuantiplexTMHCV RNA Assay(bDNA)，Chiron公司，Emeryville，加州)。參見，例如，Gretch等，(1995)Ann.Intern.Med.123321-329。
總之，有效量的IFNα和IFNγ是這樣的量，它能降低病毒負荷到不可檢測的水平，例如，到小于約5000、小于約1000、小于約500或小于約200基因組拷貝/mL血清。在一些實施方案中，有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ是可有效降低病毒負荷至小于100基因組拷貝/mL血清的量。在許多實施方案中，本發(fā)明的方法實現(xiàn)了持續(xù)病毒應答，例如，在治療結束后的至少約1個月、至少約2個月、至少約3個月、至少約4個月、至少約5個月或至少約6個月病毒負荷被降低至不可檢測的水平。
所述方法是否可有效治療HCV感染可通過測量與HCV感染有關的參數(shù)(如肝纖維化)來確定。測量肝纖維化程度的方法將在下面詳細討論。在一些實施方案中，肝纖維化的血清標記水平說明了肝纖維化的程度。
作為一個非限制性的實施例，用標準測定法測量了血清丙氨酸轉氨酶(ALT)水平。總之，ALT水平小于約45國際單位被認為是正常的。在一些實施方案中，有效量的IFNα和IFNγ是能有效將ALT水平降低至小于約45U/ml血清的量。
治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是這樣的量，與未經(jīng)治療的個體或接受安慰劑治療的個體的標記物水平相比，它能將肝纖維化標記物的血清水平有效降低至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％或至少約80％，或更多。測量血清標記物的方法包括基于免疫學的方法，例如酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定等，采用對所給血清標記物特異的抗體。
纖維化用I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療是否能有效地降低肝纖維化通過許多成熟的檢測肝纖維化和肝功能的任何技術來測定。是否減少了肝纖維化通過分析肝活組織檢查樣品來決定。肝的活組織檢查的分析包括評估兩個主要部分通過“分級”評估壞死炎癥來測定疾病的嚴重程度和進展中的疾病活動性，通過分“階段”來評估纖維化的損害和實質(zhì)或脈管改變的損傷以反應長期疾病的進展。參見，如Brunt(2000)Hepatol.31241-246；和METAVIR(1994)Hepatology 2015-20。基于肝活組織檢查的分析可給出評分。有許多標準化的評分系統(tǒng)，它們可定量地評估纖維化的程度和嚴重性。這些評分系統(tǒng)包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak評分系統(tǒng)。
METAVIR評分系統(tǒng)基于肝活組織檢查的各種特征分析，包括纖維化(門靜脈纖維化、小葉中心纖維化和硬化)；壞死(粉碎性和裂片性壞死，嗜酸性收縮和氣脹變性)；炎癥(門靜脈管炎癥、門靜脈淋巴聚合和門靜脈炎癥的分布)；膽管改變；和Knodell指數(shù)(對外周門靜脈壞死、小葉壞死、門靜脈炎癥、纖維化和總體疾病活性的評分)。METAVIR系統(tǒng)中的每個階段的定義如下0分，沒有纖維化；1分，門靜脈管星狀擴張但沒有形成隔膜；2分，門靜脈管擴張，有少量隔膜形成；3分，有許多隔膜，沒有硬化；4分，硬化。
Knodell評分系統(tǒng)也稱為肝炎活性指數(shù)，根據(jù)組織學特征分為4類I.外周門靜脈和/或橋壞死；II.小葉內(nèi)變性，灶性壞死；III.門靜脈炎癥；和IV.纖維化。在Knodell分階段系統(tǒng)中，評分如下0分，沒有纖維化；1分，輕度纖維化(纖維性門靜脈擴張)；2分，中度纖維化；3分，嚴重纖維化(橋纖維化)；4分，硬化。分數(shù)越高，肝組織損傷越嚴重。Knodell(1981)Hepatol.1431。
Scheuer評分系統(tǒng)的評分如下0分，沒有纖維化；1分，擴大的、纖維化的門靜脈管；2分；外周門靜脈或門靜脈一門靜脈隔膜，但具有完整的結構；3分，纖維化，結構被扭曲，但沒有明顯的硬化；4分，可能或肯定硬化。Scheuer(1991)J.Hepatol.13372。
Ishak評分系統(tǒng)如Ishak(1995)J.Hepatol.22696-699所述。階段0，沒有纖維化；階段1，一些門靜脈區(qū)域纖維性擴張，有或沒有短纖維隔膜；階段2，大多數(shù)門靜脈區(qū)域有纖維性擴張，有或沒有短纖維隔膜；階段3，大多數(shù)門靜脈區(qū)域有纖維性擴張，偶有門靜脈到門靜脈(P-P)橋；階段4，門靜脈區(qū)域纖維性擴張，有明顯的p-p橋和門靜脈到中心(P-C)橋；階段5，明顯的p-p和P-C橋，偶有小節(jié)結(不完全硬化)；階段6，硬化，可能的或肯定的?？估w維療法的益處也可用Child-Pugh評分系統(tǒng)進行測定和評估，該評分系統(tǒng)包括一個多組成點系統(tǒng)，該系統(tǒng)基于血清膽紅素水平異常，血清白蛋白水平異常，凝血酶原時間異常，腹水的存在和嚴重程度，和腦病的存在和嚴重程度。根據(jù)這些參數(shù)異常性的存在和嚴重程度，患者可分為三類A、B或C，其嚴重程度遞增。
在一些實施方案中，治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是能使治療前和治療后肝活組織檢查比較中纖維化階段改變一個單位或更多單位的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的量。在特定的實施方案中，治療有效量I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ能減少肝纖維化程度至少一個單位(METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig或Ishak評分系統(tǒng)中的單位)。
次要的或非直接的肝功能指數(shù)也可用來評估I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療的效果。根據(jù)特定的膠原質(zhì)著色和/或肝纖維化的血清標記對肝臟纖維化定量程度的形態(tài)測定計算機化的半自動評估也可作為受試者治療方法的效果的指征進行測定。次要的肝功能指數(shù)包括，但不限于，血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、膽紅素水平、血小板數(shù)、門靜脈壓、白蛋白水平和Child-Pugh評分的評估。
與未治療的個體或安慰劑治療的個體的肝功能指數(shù)相比，有效量的IFN-α和IFN-γ是使肝功能指數(shù)增加至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。本領域的熟練的技術人員可使用標準的分析方法(許多都可市售，且在臨床上常規(guī)使用)容易地測得這類肝功能指數(shù)。
肝纖維化的血清標記也可作為受試者治療方法的效果的指征進行測量。肝纖維化的血清標記物包括，但不限于，透明質(zhì)酸鹽、N-末端前膠原III肽、7S域的IV型膠原、C-末端前膠原I肽和層粘連蛋白。另外的肝纖維化的生物化學標記物包括α-2-巨球蛋白、結合珠蛋白、γ球蛋白、載脂蛋白A和γ谷氨酰轉肽酶。
與未治療個體或用安慰劑治療的個體的肝纖維化的標記物的血清水平相比，治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是使標記物的血清水平降低至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。本領域熟練的技術人員可使用標準的分析方法(許多都可市售，且在臨床上常規(guī)使用)容易地測得這類肝纖維化的血清標記物。測量血清標記物的方法包括基于免疫的方法，如酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫分析等，它們使用對給定的血清標記物具有特異性的抗體。
也可使用功能性肝保留的定量試驗來評估用I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療的效果。這些試驗包括靛藍清除(ICG)、半乳糖消除能力(GEC)、氨基比林呼吸試驗(ABT)、安替比林清除試驗、單乙基甘氨酸-二甲代苯胺(MEG-X)清除試驗和咖啡因清除試驗。
本文使用的“與肝硬化有關的并發(fā)癥”指失代償性肝病的后遺癥的疾病，即它們在肝纖維化后發(fā)生，并是肝纖維化發(fā)展的結果，它們包括，但不限于，形成腹水、靜脈曲張出血、門靜脈高壓、黃疸、進行性肝功能不全、腦病、肝細胞癌、肝衰竭需要肝移植和與肝有關的死亡。
治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是與未治療個體或安慰劑治療的個體相比，能有效減少與肝硬化有關的疾病(如個體形成這些疾病的可能性)的發(fā)病率至少約10％，至少約20％，至少約25％，至少約30％，至少約35％，至少約40％，至少約45％，至少約50％，至少約55％，至少約60％，至少約65％，至少約70％，至少約75％，或至少約80％或更多的量。
用I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療是否能有效地減少與肝硬化有關的疾病的發(fā)病率可由本領域熟練的技術人員容易地測定。
肝纖維化減少能增加肝功能。因此，本發(fā)明提供了提高肝功能的方法，一般涉及給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。肝功能包括，但不限于，合成蛋白質(zhì)，如血清蛋白(如白蛋白，凝固因子，堿性磷酸酶，氨基轉移酶(如丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶)，5’-核苷酶，γ-谷氨酰胺酰轉肽酶等)，合成膽紅素，合成膽固醇和合成膽酸；肝的代謝功能，包括，但不限于，碳水化合物代謝，氨基酸和氨代謝，激素代謝和脂肪代謝；外源藥物的去毒；血流動力功能，包括內(nèi)臟和門靜脈血流動力學等。
肝功能是否增加可由本領域熟練的技術人員使用成熟的肝功能試驗容易地確定。這樣，如白蛋白，堿性磷酸酶，丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、膽紅素等肝功能標記物的合成可通過用標準的免疫和酶分析測量血清中這些標記物的水平進行評估。用標準方法通過門靜脈楔入壓和/或耐受力可測量內(nèi)臟循環(huán)和門靜脈血流動力學。代謝功能可通過測量血清中氨水平進行測定。
肝臟通常分泌的血清蛋白是否在正常的范圍內(nèi)可通過使用標準的免疫和酶分析方法測量這類蛋白質(zhì)的水平來確定。本領域熟練的技術人員知道這類血清蛋白的正常范圍。下列是非限制性實施例。丙氨酸轉氨酶的正常范圍是約45單位/升血清。天冬氨酸轉氨酶的正常范圍是約5-40單位/升血清。膽紅素用標準分析測量。正常的膽紅素水平通常低于約1.2mg/dL。血清白蛋白水平用標準分析測量。正常的血清白蛋白范圍是約35-55g/L。用標準分析測定凝血酶原時間的延長。正常的凝血酶原時間比對照長約不足4秒。
治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是能有效提高肝功能至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量。例如，治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ是能將肝功能的血清標記物的升高水平有效減少至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量，或將肝功能的血清標記物水平降低到正常范圍里。治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ也是能將肝功能的血清標記物的降低水平有效增加至少約10％，至少約20％，至少約30％，至少約40％，至少約50％，至少約60％，至少約70％，至少約80％或更多的量，或將肝功能的血清標記物水平提高到正常范圍內(nèi)。
I型干擾素受體激動劑在上述任一方法中，某些實施方案給予I型干擾素受體激動劑，I型干擾素受體激動劑包括IFN-α、IFN-β、IFN-τ、IFN-ω、對I型干擾素受體特異的抗體激動劑；和包括非多肽激動劑的任何其它I型干擾素受體激動劑。
干擾素-α任何已知的IFN-α可用于本發(fā)明。本文所用術語“干擾素-α”指能抑制病毒復制和細胞增殖及調(diào)節(jié)免疫應答的相關多肽家族。術語“IFN-α”包括天然產(chǎn)生的IFN-α、合成的IFN-α、衍生的IFN-α(如PEG化IFN-α、糖基化IFN-α等)和天然產(chǎn)生或合成的IFN-α類似物；基本上具有天然產(chǎn)生的IFN-α所述抗病毒性能的任何IFN-α。
合適的α干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-α(包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-α2a、IFN-α2b)、重組IFN-α2b，如Schering公司(Kenilworth，NJ)的Intron-A干擾素、Hoffmann Roche，Nulley NJ的重組IFN-α2a，如Roferon干擾素；BoehringerIngelheim制藥公司(Ridgefield，Conn)的重組IFN-α2c，如Berofor α2干擾素；日本Sumitomo的天然α干擾素的純化混合的IFNα-n1，如Sumiferon或Glaxo-Wellcome公司(英國倫敦)的Wellferon IFNα-n1(INS)和Interferon Sciences制備的可從Purdue Frederick公司，Norwalk Conn購得的天然IFN-α的IFNαn3混合物，其商標名為Alferon。
術語“IFN-α”，還包括共有IFN-α。共有IFN-α(也稱為“CIFN”和“IFN-con”和“共有干擾素”)包括但不限于美國專利4,695,623和4,897,471中所公開的命名為IFN-con1、IFN-con2和IFN-con3的氨基酸序列，和通過測定天然產(chǎn)生的IFN-α的共有序列而確定的共有干擾素(如Infergen，InterMune公司，Brisbane，Caiif)。IFN-con1是Infergenalfacon-1產(chǎn)品中的共有干擾素制劑。Infergen共有干擾素產(chǎn)品本文以其商品名(Infergen)或以其屬名(IFN-alfacon 1)稱呼?？扇缟鲜鰧＠龌蚱渌鼧藴史椒ê铣删幋aIFN-con的DNA序列。特別感興趣采用CIFN。
也適用于本發(fā)明的是含IFN-α和異源多肽的融合多肽。合適的IFN-α融合多肽包括但不限于Albuferon-αTM(一種人白蛋白和IFN-α的融合產(chǎn)品；人GenomeSciences；見例如Osborn等，J Pharmacol Exp.Therap 303540-548.2002)。也適合用于本發(fā)明的是IFN-α的基因改組形式，見例如Masci等，Curr.Oncol Rep，5108-113.2003。
PEG化IFN-α術語“IFN-α”，還包括IFN-α的衍生物，它們是衍生的(如化學修飾的)而改變某些性能如血清半衰期。因此，術語“IFN-α”包括糖基化IFN-α、聚乙二醇衍生的IFN-α(PEG化IFN-α)等。PEG化IFN-α及其制備方法見例如美國專利5,382,657；5,981,709和5,951,974。PEG化IFN-α包括PEG和上述IFN-α分子任一的偶聯(lián)物，包括但不限于PEG與IFN-α-2a(Referon Hoffman La-Roche，Nutley，新澤西州)、IFN-α-2b(Intro，Schering-Plough，Madison，新澤西州)、IFN-α2c(Berofor-α，Boehriager Ingelheim，Ingelheim，德國)偶聯(lián)；以及與通過測定天然產(chǎn)生的IFN-α的共有序列所確定的共有干擾素(Infergen，InterMune Inc，Brisbane，Caiif)偶聯(lián)。
上述任何IFN-α多肽可用一個或多個聚乙二醇部分修飾，即PEG化。PEG化IFN-α多肽的PEG部分偶聯(lián)于IFN-α多肽的一個或多個氨基酸側鏈。一些實施方案中，PEG化IFN-α只在一個氨基酸上含有PEG部分。其它實施方案中，PEG化IFN-α在二個或多個氨基酸上含有PEG部分，如該IFN-α含有結合于2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或者10個不同氨基酸殘基的PEG部分。
IFN-α可通過氨基、巰基、羥基或羧基直接與PEG偶聯(lián)(即無接頭基團)。
在某些實施方案中，PEG化IFN-α是在IFN-α多肽的氨基端(N-端)或附近PEG化。例如，PEG部分偶聯(lián)于IFN-α多肽的氨基酸1-4或氨基酸5-10的1個或多個氨基酸殘基。
其它實施方案中，PEG化IFN-α是在約10-28位的一個或多個氨基酸殘基上被PEG化。
在其它實施方案中，PEG化IFN-α是IFN-α多肽的羧基端(C-端)或附近的PEG化，例如，氨基酸156-166或150-155位的一個或多個殘基處的PEG化。
其它實施方案中PEG化IFN-α是氨基酸100-114位的一個或多個氨基酸殘基的PEG化。
IFN-α蛋白質(zhì)的受體結合域和/或活性位點域中或附近的氨基酸殘基的聚乙二醇化衍生，可能破壞這些結構域的功能。本發(fā)明的某些實施方案中，要避免被PEG化的氨基酸，包括氨基酸30-40位的氨基酸殘基和氨基酸113-149位的氨基酸殘基。
某些實施方案中，PEG通過接頭基團結合于IFN-α。此種接頭基團是任何生物相容的接頭基團。其中“生物相容性”表示此化合物或基團無毒性，可用于體外或體內(nèi)但不引起損傷、惡心、疾病或死亡，例如，PEG可通過醚鍵、脂鍵、硫醇鍵或胺鍵與該接頭基團結合。合適的生物相容性接頭基團包括但不限于酯基、酰胺基、氨甲?；?、羧基、羥基、糖基、琥珀酰亞胺基(例如包括琥珀酰亞胺琥珀酸(SS)、琥珀酰亞胺丙酸(SPA)、琥珀酰亞胺丁酸(SBA)、琥珀酰亞胺羧甲醇鹽(SCM)、琥珀酰亞胺琥珀酰胺(SSA)或N-羥基琥珀酰亞胺(NHS))、環(huán)氧基、氧羰咪唑基(例如，包括羰基二咪達唑(CDI))、硝苯基(例如包括硝基苯碳酸鹽(NPC)或三氯苯碳酸鹽(TPC))、trysylate、醛基、異氰酸基、乙烯砜基、酪氨酸基、半胱氨酸基、組氨酸基或伯氨基。
制備琥珀酰亞胺丙酸(SPA)和琥珀酰亞胺丁酸(SBA)酯活化的PEG的方法見美國專利5,672,662(Harris等)和WO97/03106所述。
使PEG連接于IFN-α多肽的方法是本領域已知的，可采用任何已知的方法，參見例如Park等，Anticancer Res.，1373-76，1981；Zaplipsky和Lee，《聚乙二醇化學生物技術和生物醫(yī)學應用》(Polyethylene Glycol Chemistry；Biotechnicaland Biomedical Applications)，J.M.Harris編；Plenum Press NY.第21章，1992；美國專利5,985,265；5,672,662(Harris等，)和WO97/03106。
PEG化IFN-α及其制備方法見美國專利5,382,657；5,981,709；5,985,265和5,951,974中所述。PEG化IFN-α包括PEG與任何上述IFN-α分子的偶聯(lián)物，包括但不限于PEG與IFN-α-2a(Referon，Hoffman.LaRoche，Nutley，N.J.)偶聯(lián)，此PEG化的Roferon稱為Pegasys(Hoffman LaRoche)；與IFN-α-2b(Intron，Schering-plough，Madison，N.J)偶聯(lián)，此PEG化Intron稱為PEG-Intro(Schering-Plough)；與IFNα-2c(Berofor Alpha，Boehringer Ingelheim，Ingelheim，德國)偶聯(lián)，以及與通過測定天然產(chǎn)生的IFN-α的共有序列所確定的共有干擾素CIFN(Infergen，InterMune公司，Brisbane，Calif)偶聯(lián)，此PEG化Infergen稱為PEG-Infergen。
許多實施方案中，此PEG是能與IFN-α多肽上的伯氨基反應的單甲氧PEG分子。用單甲氧PEG通過還原性烷化修飾多肽的方法是本領域已知的，可參見如Chamow等，Bioconj Chem，5133-140，1994。
在一非限制性實施例中，PEG通過SPA接頭基與IFN-α連接。PEG的SPA酯及其制備方法見美國專利5,672,662中所述。SPA鍵提供了在IFN-α多肽上與游離胺基連接。
例如，PEG部分通過PEG的丙基和IFN-α多肽中表面暴露的賴氨酸殘基的ε氨基之間的酰胺鍵的鍵而共價連接。這類鍵可通過例如PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的縮合而形成(mPEGspa)。
作為一非限制性實施例，優(yōu)選用于本文的一種單PEG化CIFN偶聯(lián)物具有約30kD的線性PEG部分，通過共價鍵連接于CIFN多肽，其中的共價鍵是PEG部分的丙?；虲IFN多肽中表面暴露的賴氨酸殘基的ε氨基之間的酰胺鍵，其中表面暴露的賴氨酸殘基選自lys31、lys50、lys71、lys84、lys121、lys122、lys134、1ys135和lys165，通過PEG的α甲氧基，ω丙酸活化酯的縮合而形成酰胺鍵。
聚乙二醇適合與IFN-α多肽偶聯(lián)的聚乙二醇是室溫時水溶性的，具有通式R(O-CH2-CH2)nO-R，其中R是氫或烷基或鏈烷醇基等保護基，n是1-1000的整數(shù)。其中R是通常1-8個碳的保護基團。
許多實施方案中，PEG至少具有一個羥基如末端羥基，可修飾此羥基以產(chǎn)生與氨基如賴氨酸殘基的ε氨基，多肽的N端游離氨基或其它任何氨基如天冬酰胺、谷氨酰胺，精氨酸或組氨酸的氨基反應的功能基團。
其它實施方案中，衍生PEG，使其與IFN-α多肽中的游離羧基，如IFN-α多肽羧基端的游離羧基反應。與IFN-α羧基端的游離羧基反應的合適的PEG衍生物包括但不限于PEG的PEG胺和肼衍生物(如PEG-NH-NH2)。
其它實施方案中，衍生PEG，使其含有末端硫代羧酸基-COSH，它選擇性地與氨基反應產(chǎn)生酰胺衍生物。由于硫羰酸的反應特性，可實現(xiàn)某些氨基的對其它氨基的選擇性。例如-SH在適合的PH條件下顯示與N端氨基反應中充分離去基團能力，這樣質(zhì)子化了賴氨酸中的ε氨基并保留了非親核性。另一方面，在合適的PH條件下反應可選擇性使一些可接近的賴氨酸殘基反應。
其它實施方案中，PEG含有反應性酯，如PEG鏈末端處的N-羥基琥珀酰酸酯。這類含N-羥基琥珀酰酸酯的PEG分子能在特定PH，如中性6.5-7.5條件下，與選擇的氨基反應。例如，可在中性PH條件下選擇性修飾N端氨基。然而，如果該試劑的反應性極強，也可與賴氨酸的游離-NH2基反應。
可將PEG直接或通過一接頭偶聯(lián)于IFN-α多肽。某些實施方案中，在IFN-α多肽上加一接頭，形成接頭修飾的IFN-α多肽。這類接頭提供了多種官能度，如巰基、胺基或羧基以將PEG試劑與接頭修飾的IFN-α多肽相偶聯(lián)。
某些實施方案中，偶聯(lián)于IFN-α多肽的PEG是線性的。其它實施方案中，偶聯(lián)于IFN-α多肽的PEG是分支的。分支PEG衍生物見美國專利5,643,575中所述。“星形PEG(star-PEG)”和多臂PEG(multi-armed PEG)見Shearwater Polymers有限公司的目錄“聚乙二醇衍生物1997-1998”中所述。本領域包括美國專利6,046,305中描述的星形PEG。
通常所用的PEG部分量范圍為約2kDa-100kDa。在PEG之后，術語“約”指聚乙二醇制劑中某些分子的分子量高于或略低于標明的分子量，例如適合于與IFN-α偶聯(lián)的PEG的分子量約2kDa-5kDa，約5kDa-10kDa，約10kDa-15kDa，約15kDa-20kDa，約20kDa-25kDa，約25kDa-30kDa，約30kDa-40kDa，約40kDa-50kDa，約50kDa-60kDa，約60kDa-70kDa，約70kDa-80kDa，約80kDa-90kDa，約90kDa-100kDa。
制備PEG-IFN-α偶聯(lián)物如上所述，PEG部分可直接或通過一接頭與IFN-α多肽N端或附近，內(nèi)部或C端或附近的氨基酸殘基連接。可在溶液中或固相中進行偶聯(lián)。
N-末端連接使PEG部分連接于IFN-α多肽N端或附近的氨基酸殘基的方法是本領域已知的，例如見美國專利5,985,265。
一些實施方案中，采用了已知的選擇性獲得N端化學修飾的IFN-α的方法。例如，可采用還原性烷化修飾蛋白質(zhì)的方法，使具體蛋白質(zhì)中可用于衍生的不同類型伯氨基(賴氨酸對的N端)發(fā)生差異反應性。在適當?shù)姆磻獥l件下可實現(xiàn)該蛋白質(zhì)N端與含羰基聚合物的基本上選擇性衍生。此反應在有利于賴氨酸殘基的ε氨基和蛋白質(zhì)N端殘基的α氨基之間存在pKa差異的PH條件下進行。通過這種選擇性衍生可控制PEG部分與IFN-α的連接，與聚合物的偶聯(lián)優(yōu)先發(fā)生在IFN-α的N端，而其它反應基團如賴氨酸側鏈氨基不發(fā)生明顯修飾。
C-末端連接美國專利5,985,265描述的N端特異性偶聯(lián)方法提供了占優(yōu)勢的單PEG化產(chǎn)物。然而，純化方法的目的是去除過量的試劑和少量的多種PEG化產(chǎn)物，去除N端封閉的多肽。就治療而言，這種方法使制造成本明顯增加。例如，對表征良好的InfergenAlfacon-1CIFN多肽氨基酸序列結構的檢測，揭示羧基端的剪修約為5％，因而只有一條主要的C端序列。因此，在一些實施方案中未采用N端PEG化的IFN-α，代替的是C端PEG化的IFN-α多肽。
因此預想獲得單PEG化Infergen產(chǎn)品的有效合成和治療方法如下可選擇性制備C端有或沒有間隔的PEG試劑。如一端為甲酯另一端具有氨基功能的修飾的聚乙二醇可用作起始材料。
可制備或獲得水溶性碳二亞胺作為縮合劑。用水溶性碳二亞胺作為縮合劑偶聯(lián)IFN-α(如InfergenAlfacon-1 CIFN或共有干擾素)，通常在具有合適緩沖液最優(yōu)PH值的水介質(zhì)中進行，能有效形成酰胺鍵?？蓪⒏叻肿恿縋EG共價地加到蛋白質(zhì)上以提高分子量。
試劑選擇取決于方法優(yōu)化研究。合適試劑的非限制性例子是EDAC或1-乙基-(3-二甲氨丙基)碳二亞胺。EDAC的水溶性允許直接加入反應物中無需先溶解有機溶劑。過量試劑和形成的交聯(lián)反應副產(chǎn)品異脲都是水溶性的，可通過透析或凝膠過濾容易去除。制備濃縮的EADC水溶液有利于在反應物中加入小摩爾量EDAC。鑒于試劑的水不穩(wěn)定性，制備貯備液并立即使用。文獻中大多數(shù)合成方案提出最佳反應介質(zhì)的PH在4.7-6.0之間。然而縮合反應在高達PH7.5時進行，產(chǎn)量不會明顯損失?？捎盟鳛槿軇?。鑒于考慮采用Infergen，優(yōu)選介質(zhì)為預先滴定到PH4.7-6.0之間的2-(N-嗎啉)乙烷磺酸緩沖液。然而由于產(chǎn)品溶于同一緩沖液中，也可采用PH7-7.5的0.1M磷酸緩沖液。優(yōu)化PEG胺與IFN-α分子的比例，使C端羧基殘基選擇性地PEG化以產(chǎn)生單PEG化衍生物。
即使采用上述名稱或結構的PEG胺，這類衍生物只是示范性的，其它基團如肼基衍生物PEG-NH-NH2也可與IFN-α蛋白質(zhì)的羧基縮合。除水相外，反應也可在固相上進行?？蓮姆肿恿?00-40000范圍的化合物清單中選擇聚乙二醇。也可根據(jù)偶聯(lián)效率、純化衍生物的體外和體內(nèi)生物性能，即循環(huán)時間、抗病毒活性等來選擇不同的聚乙二醇。
此外，可將合適的試劑間隔加入蛋白的C端。間隔可含有反應基團如SH、NH2或COOH，能與適當?shù)腜EG偶聯(lián)提供高分子量IFN-α衍生物?？缮婕奥?lián)合的固/液相方法來制備C端PEG化干擾素。例如用Gly-Gly-Cys-NH2間隔在固相上延伸IFN-α的C端，然后用適當分子量的活化二硫吡啶基PEG試劑在溶液中單PEG化。由于C端偶聯(lián)不依賴于N端封閉，設想的方法和產(chǎn)品在成本上(不象N端PEG化方法要浪費1/3蛋白質(zhì))有利，并對治療慢性丙肝感染、肝纖維化等的經(jīng)濟療法有貢獻。
除IFN-α的C端-COOH基團外，在與PEG試劑反應導致單PEG化或導致多種PEG化的分子中，某位點的氨基酸殘基可能有更具反應性的羧基。預想這些反應最好是由于分子C端的空間自由度和碳二亞胺及如在支鏈分子中PEG試劑施加的空間位阻，將是最小的。因此Infergen和類似的在宿主系統(tǒng)中天然或表達的蛋白質(zhì)的優(yōu)選PEG修飾模式，其N端可能不同程度被封閉，以提高效率和保持較高的體內(nèi)生物活性。
獲得C端PEG化的另一方法如下；可采用能排斥與埋藏在IFN-α螺旋中或內(nèi)部的羧基殘基反應的空間位阻試劑，獲得C末端PEG化的選擇性。例如，一種這樣的試劑可以是分子量約40KD的支鏈PEG，此試劑可按以下方法合成用合適的試劑，如二環(huán)已基碳二亞胺或水溶性EDC，縮合OH3C-(CH2CH2O)n-CH2CH2NH2+谷氨酸(即HOCO-CH2CH2CH(NH2)-COOH)以得到支鏈PEG 試劑OH3C-(CH2CH2O)nCH2CH2NHCOCH(NH2)CH2OCH33-(CH2CH2O)n-CH2CH2NHCOCH2。
此試劑可過量使用，將氨基與IFN-α的游離和撓性羧基偶聯(lián)形成肽鍵。
如需要可用任何已知方法使PEG化的IFN-α與末PEG化的IFN-α分開。這些方法包括但不限于離子交換層析、大小排阻層析、或二者聯(lián)合。例如，當PEG-IFN-α偶聯(lián)物是單PEG化IFN-α時，先用離子交換層析分離產(chǎn)物得到具有單PEG化物質(zhì)的電荷特征的物質(zhì)(可能存在具有相同表觀電荷的其它多種PEG化物質(zhì))，然后用大小排阻層析分離單PEG化物質(zhì)。
IFN-β術語干擾素-β(“IFN-β”)包括天然產(chǎn)生的，非天然產(chǎn)生的IFN-β多肽及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-β抗病毒活性的類似物。
可通過本發(fā)明連續(xù)輸送方法輸送各種IFN-β中任何一種。合適的β干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-β；IFN-β1a，如Avonex(Biogen Inc.)和Rebif(Serono.SA)；IFN-β1b(Betaseron，Berlex)等。
IFN-β制劑可含有N-端封閉的種類，其中N-端氨基酸被一?；缂柞；?、乙酰基、丙二?；弱；Ｒ策m合采用共有IFN-β。
可用任何已知方法生產(chǎn)IFN-β多肽，可用標準方法合成編碼IFN-β的DNA序列。許多實施方案中，IFN-β多肽是制備的DNA序列轉化或轉染細菌宿主如大腸桿菌或真核宿主細胞(如酵母菌、哺乳動物細胞如CHO細胞等)后表達的產(chǎn)物。這些實施例中，IFN-β是“重組IFN-β”，宿主細胞是細菌宿主細胞，IFN-β被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-β可含有一個或多個修飾的氨基酸如糖基化、化學修飾等。
IFN-τIFN-τ包括天然產(chǎn)生的、非天然產(chǎn)生的IFN-τ多肽、及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-τ的抗病毒活性的類似物。
合適的τ干擾素包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-τ；Tauferon(Pepgen公司)等。
IFN-τ可含有GenBank登錄號P15696，P56828，P56832，P56829，P56831，Q29429，Q28595，Q28594，S08072，Q08071，Q08070，Q08053，P56830，P28169，P28172和P28171中任何一項所示的氨基酸序列?？捎帽绢I域已知的各種方法改變?nèi)魏我阎腎FN-τ多肽的序列，以產(chǎn)生序列中的尋靶變化。變體多肽通常基本上類似于本文提供的序列，即至少有一個氨基酸不同，可能至少有二個但不超過10個氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學衍生，如乙?；螋然?；導入或去除糖基化位點的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工期間改變多肽的糖基化模式，或在進一步加工步驟中如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動物糖基化或去糖基化酶)，改變多肽的糖基化模式。還包括具有磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
IFN-τ制劑可含有N-封閉的種類，其中N-端氨基酸被一?；?，如甲?；?、乙酰基、丙二酰基等?；?，也適合采用共有IFN-τ。
可用任何已知方法生產(chǎn)IFN-τ多肽?？捎脴藴史椒ê铣删幋aIFN-τ的DNA序列。許多實施方案中，IFN-τ多肽是制備的DNA序列轉化或轉染入細菌宿主如大腸桿菌或真核宿主細胞(如酵母菌、哺乳動物細胞如CHO細胞等)中表達的產(chǎn)物。這些實施例中，IFN-τ是“重組IFN-τ”。宿主細胞是細菌宿主細胞時，IFN-τ被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已知如本文所述IFN-τ可含有一個或多個修飾的氨基酸殘基如糖基化、化學修飾等。
IFN-ω干擾素ω(“IFN-ω”)包括天然產(chǎn)生的、非天然產(chǎn)生的IFN-ω多肽、及保留了親代天然產(chǎn)生的或非天然產(chǎn)生的IFN-ω的抗病毒活性的類似物。任何已知的ω干擾素可通過本發(fā)明的連續(xù)輸送方法輸送。合適的IFN-ω包括但不限于天然產(chǎn)生的IFN-ω、重組的IFN-ω，如Biomed 510(BioMedicines)等。
IFN-ω可含有GenBank登錄號NP_002168或AAA70091所示的氨基酸序列?？梢员绢I域域已知的各種方法改變?nèi)魏我阎狪FN-ω多肽的序列。變體多肽通常具有與上述序列基本上相似的序列，即至少一個氨基酸不同，可能至少二個但不超過10個氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級氨基酸序列的感興趣修飾，包括多肽的化學衍生，如乙?；螋然?；導入或去除糖基化位點的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工時改變多肽的糖基化模式，或在進一步加工步驟如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動物糖基化或去糖基化酶)中，改變多肽的糖基化模式。還包括具有磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
IFN-ω制劑可含有N-封閉的種類，其中N-端氨基酸被一?；?，如甲酰基、乙?；⒈；弱；?，也適合采用共有IFN-ω?？捎萌魏我阎椒ㄉa(chǎn)IFN-ω多肽。
可用標準方法合成編碼IFN-ω的DNA序列。許多實施方案中，IFN-ω多肽是制備的DNA序列轉化或轉染入細菌宿主如大腸桿菌或在真核宿主細胞(如酵母菌、哺乳動物細胞如CHO細胞等)中表達的產(chǎn)物。在這些實施例中，IFN-ω是“重組IFN-ω”。宿主細胞是細菌宿主細胞時，IFN-ω被修飾而含有N-端甲硫氨酸。
已了解如本文所述IFN-ω可含有一個或多個修飾的氨基酸殘基如糖基化、化學修飾等。
III型干擾素受體激動劑在任何上述的方法或裝置中，干擾素受體激動劑在一些實施方案中是III型干擾素受體激動劑(如“III型干擾素激動劑”)。III型干擾素激動劑包括IL-286多肽、IL-28a多肽、IL-29多肽、III型干擾素受體的特異性抗體、和任何其它III型干擾素受體激動劑包括非肽激動劑。
IL-28A、IL-28B和L-29(本文統(tǒng)稱為“III型干擾素”或“III型IFN”)見Sheppard等，Nature 463-68，2003所述。各多肽能結合由IL-10受體β鏈和IL-28受體α鏈組成的異二聚體受體。(Sheppard等，Nature 463-68.2003)?？煞謩e在GenBank登錄號NP_742150、NP_742151和NP_742152中找到IL-28A、IL-28B和IL-29的氨基酸序列。
可用本領域已知的各種方法改變III型IFN多肽的氨基酸序列，以產(chǎn)生序列中的靶向變化。變體多肽通常基本上類似于本文提供的序列，即至少一個氨基酸不同，可能至少有二個但不超過10個氨基酸不同。序列變化可以是取代、插入或缺失。系統(tǒng)地倒入丙氨酸或其它殘基的掃描突變可用來確定關鍵氨基酸。感興趣的特定氨基酸取代包括保守性和非保守性改變。保守性氨基酸取代通常包括以下組內(nèi)的取代(甘氨酸、丙氨酸)；(纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸)；(天冬氨酸、谷氨酸)；(天冬酰胺、谷氨酰胺)；(絲氨酸、蘇氨酸)；(賴氨酸、精氨酸)或(苯丙氨酸、酪氨酸)。
可能或不可能改變一級氨基酸序列的感興趣修飾包括多肽的化學衍生，如乙?；螋然?；導入或去除糖基化位點的氨基酸序列變化；使蛋白質(zhì)易于PEG化的氨基酸序列變化等。還包括糖基化修飾，如合成和加工期間改變多肽的糖基化模式，或在進一步加工步驟中如使多肽接觸能影響糖基化的酶(如哺乳動物糖基化或去糖基化酶)，改變多肽的糖基化模式。還包括具有磷酸化氨基酸殘基如磷酸酪氨酸，磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸的序列。
本發(fā)明包括用常規(guī)化學技術修飾多肽，以改進其對蛋白酶降解的抗性、優(yōu)化溶解性能或使它們更適合用作治療藥物。例如，可環(huán)化肽的骨架以提高穩(wěn)定性(見Friedler等，J.Biol.Chem，27523783-9.2000)。可采用的類似物包括天然產(chǎn)生的L氨基酸以外的殘基，如D-氨基酸或非天然產(chǎn)生的合成氨基酸。可PEG化此蛋白以提高穩(wěn)定性。可將多肽與白蛋白融合。
可用本領域已知的常規(guī)方法如重組方法，體外合成制備此多肽；或可從導入的細胞或天然產(chǎn)生此蛋白的細胞分離此多肽。具體序列和制備方式可根據(jù)方便性、經(jīng)濟性、純度要求等確定。如需要，可在合成或表達期間在多肽中導入各種基團，使其與其它分子或表面連接。這樣，可利用半胱氨酸制備硫醚，利用組氨酸與金屬離子復合物連接，利用羧基形成酰胺或酯鍵，利用氨基形成酰胺鍵等。
干擾素-γ可從公共數(shù)據(jù)庫，如Genbank，雜志出版物等得到編碼IFN-γ多肽的核酸序列。雖然對各種哺乳動物的IFN-γ多肽感興趣，但對于治療人體疾病，一般使用人蛋白。人IFN-γ編碼序列可在Genbank中找到，登記號為X13274；V00543和NM_000619。在Genbank中可發(fā)現(xiàn)相應的基因組序列，登記號J00219；M37265和V00536。參見，例如，Gray等(1982)Nature 295501(Genbank X13274)和Rinderknecht等(1984)J.B.C.2596790。
IFN-γ1b(Actimmune；人干擾素)是140個氨基酸的單鏈多肽。它在大腸桿菌中重組制備，且是未糖基化的。Rinderknecht等(1984)J.Biol.Chem.2596790-6797。
用于本發(fā)明方法的IFN-γ可為任何天然的IFN-γ、重組IFN-γ及其衍生物，只要它們具有IFN-γ活性，特別是人IFN-γ活性即可。如本技術領域所知，人IFN-γ顯示了抗病毒和抗增殖性質(zhì)，干擾素的特性，以及許多其它免疫調(diào)節(jié)活性。雖然IFN-γ基于上述提供的序列，但蛋白質(zhì)的形成和蛋白酶解加工可導致加工其變體。由Gray等(同上)提供的未加工的序列由166個氨基酸(aa)構成。雖然在大腸桿菌中產(chǎn)生的重組IFN-γ最初被認為有146個氨基酸(在氨基酸20開始)，但接著發(fā)現(xiàn)天然的人IFN-γ在殘基23后酶切，產(chǎn)生143個氨基酸的蛋白質(zhì)，或144個氨基酸(若如細菌表達所需存在末端甲硫氨酸)。在純化過程中，成熟蛋白質(zhì)在殘基162(參見Gray等序列)后的C末端處酶切，得到139個氨基酸的蛋白質(zhì)或140個氨基酸的蛋白質(zhì)(若存在起始的甲硫氨酸，如若需要細菌表達)。N-末端的甲硫氨酸是由mRNA翻譯的“起始”信號AUG編碼的人工制品，AUG在大腸桿菌表達的具體情況下不會被加工而損失。在其它的微生物系統(tǒng)或真核表達系統(tǒng)中，可除去甲硫氨酸。
對于用于患者的方法，可使用任何天然的IFN-γ肽、它們的修飾物和變體，或一種或多種肽的組合。感興趣的IFN-γ肽包括片段，并可在相對于全序列的羧基末端進行各種截斷。只要氨基酸24-約149(從未加工的多肽殘基開始計數(shù))存在，這類片段就繼續(xù)展示人γ干擾素的特性。在氨基酸155后可用外來的序列代替氨基酸序列而不會喪失活性。參見，例如美國專利5,690,925，在此引入供參考。天然IFN-γ部分包括分別從氨基酸殘基24-150；24-151；24-152；24-153；24-155和24-157擴展出來的分子。任何這些變體，和本領域已知且具有IFN-γ活性的其它變體可用于本發(fā)明的方法。
IFN-γ多肽序列可用本領域已知的各種方法進行改變，以產(chǎn)生序列中靶向的變化。變體多肽通常與這里提供的序列基本上相似，即至少一個氨基酸不同，或可能至少兩個氨基酸不同，但不超過約10個氨基酸。序列改變可以是取代、插入或缺失。系統(tǒng)地引入丙氨酸或其它殘基的掃描變化可用來測定關鍵的氨基酸。感興趣的特定氨基酸替代包括保守和非保守的改變。保守氨基酸替代典型地包括下列基團(甘氨酸，丙氨基)；(纈氨酸，異亮氨酸，亮氨酸)；(天冬氨酸，谷氨酸)；(天冬酰胺，谷氨酰胺)；(絲氨酸，蘇氨酸)；(賴氨酸，精氨酸)；或(苯丙氨酸，酪氨酸)。
可以或不能改變初級氨基酸序列的感興趣的修飾包括多肽的化學衍生作用，如乙?；螋然?；引入或除去糖基化位點的氨基酸序列的改變；使蛋白質(zhì)對PEG化敏感的氨基酸序列的改變等。在一個實施方案中，本發(fā)明考慮使用具有一個或多個天然產(chǎn)生的糖基化和/或聚乙二醇化位點的IFN-γ變體，改變IFN-γ變體以提供具有減少血清清除率的糖基和/或PEG衍生的多肽。如國際專利出版號WO01/36001描述的IFN-γ多肽變體。還包括糖基化修飾，如通過在其合成和加工過程中或進一步加工的步驟中修飾多肽的糖基化方式進行的修飾，例如，通過將多肽暴露于影響糖基化的酶，如哺乳動物糖基化或去糖基化的酶。也包含具有磷酸化氨基酸殘基的序列，如，磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸。
包括在本發(fā)明中是業(yè)已用普通化學技術修飾的多肽，以改進它們對蛋白水解降解的耐受性，使其溶解度最優(yōu)化，或使它們更適合作為治療劑。例如，可環(huán)化肽的骨架以增加穩(wěn)定性(參見Friedler等(2000)J.Biol.CHem.27523783-23789)?？墒褂玫念愃莆锇ǚ翘烊划a(chǎn)生的L-氨基酸殘基，如D-氨基酸或非天然產(chǎn)生的合成氨基酸。蛋白質(zhì)可被PEG化以增加穩(wěn)定性。
使用本領域已知的常規(guī)方法，通過重組方法體外合成制備多肽，或從誘導的或天然產(chǎn)生蛋白質(zhì)的細胞中分離得到多肽。具體的序列和制備方法可由其方便性、經(jīng)濟性、所需的純度等來決定。如果需要，在合成期間或表達期間可向多肽中引入各種基團，這可使其與其它分子或表面連接。這樣，半胱氨酸可用來制備供與金屬離子絡合物連接的硫醚、組氨酸，形成酰胺或酯的羧基，形成酰胺的氨基等等。
也可根據(jù)常規(guī)的重組體合成方法來分離和純化多肽。可從表達宿主中制備溶解產(chǎn)物，用HPLC、排阻層析、凝膠電泳、親和層析或其它純化技術來純化溶解產(chǎn)物。大多數(shù)情況下，使用的組合物包含至少20％重量的所需產(chǎn)品，更通常的是至少約75％重量，優(yōu)選的是至少95％重量的所需產(chǎn)品，對于治療用組合物，相對于制備和純化方法中產(chǎn)生的污染來說，通常包含至少約99.5％重量的所需產(chǎn)品。通常情況下，百分數(shù)是基于總蛋白的百分數(shù)。
吡非尼酮及其類似物吡非尼酮(5-甲基-1-苯基-2-(1H)-吡啶酮)和吡非尼酮類似物已被揭示可用于治療纖維變性疾病?！袄w維變性疾病”是一種應該通過給予具有抗纖維化活性的化合物來治療的癥狀。
吡非尼酮 吡非尼酮類似物 對取代基R1、R2、X的描述R1碳環(huán)(飽和和不飽和的)、雜環(huán)(飽和或不飽和的)、烷基(飽和和不飽和的)。其例子包括苯基、芐基、吡啶基、萘基、吲哚基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、環(huán)己基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、環(huán)己烯基、丁間二烯基等。
R1還可以包括在碳環(huán)或雜環(huán)部分上有以下取代基的取代基，如鹵素、硝基、氨基、羥基、烷氧基、羧基、氰基、硫代、烷基、芳基、雜烷基、雜芳基以及它們的組合，例如4-硝基苯基、3-氯苯基、2，5-二硝基苯基、4-甲氧基苯基、5-甲基-吡咯基、2，5-二氯環(huán)己基、胍基-環(huán)己烯基等。
R2烷基、碳環(huán)、芳基、雜環(huán)。其例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、苯基、4-硝基苯基、噻吩基等。
X可以是碳環(huán)或雜環(huán)上任意數(shù)目(1-3)的取代基。這些取代基可以是相同或不同的。所述取代基可包括氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基、鹵代、硝基、羧基、羥基、氰基、氨基、硫代、烷氨基、鹵代芳基等。
所述取代基還可任選被1-3個選自以下一組的取代基取代烷基、芳基、硝基、烷氧基、羥基和鹵代基團。其例子包括甲基、2，3-二甲基、苯基、對-甲苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，5-二氯苯基、呋喃基、噻吩基等。
具體的例子包括表1
美國專利3,974,281；3,839,346；4,042,699；4,052,509；5,310,562；5,518,729；5,716,632和6,090,822描述了合成和制備適合用于本發(fā)明所述方法的藥物組合物中的吡非尼酮和吡非尼酮類似物的方法。
劑量、配方和給藥途徑I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可與藥學上可接受的賦形劑一起配制給予個體。本技術領域已知各種藥學上可接受的賦形劑，在此不需要詳細討論。藥學上可接受的賦形劑在各種公開物(如A.Gennaro(2000)，《雷明頓制藥科學與實踐》(RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy)，第20版，Lippincott，Williams，&Wilkins；《藥物劑型和藥物傳遞系統(tǒng)》(Pharmaceutical Dosage Formsand Drug Delivery Systems)，(1999)H.C.Ansel等編，第7版，Lippincott，Williams，&Wilkins和《藥物賦形劑手冊》(Handbook of Pharmaceutical Excipients)(2000)A.H.Kibbe等編，第3版，Amer.Pharmaceutical Assoc.)中業(yè)已作了大量的描述。
藥學上可接受的賦形劑如運載體、輔佐劑、載體或稀釋劑公眾不難獲得。此外藥學上可接受的輔助物質(zhì)，如PH調(diào)節(jié)和緩沖劑、滲透調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑等公眾也不難獲得。
本文中，可采用能產(chǎn)生所需治療效果的任何方便方法給予宿主此活性藥物，可將這些藥物加入到治療用的各種配方中。更具體說，本發(fā)明的制劑可與適當?shù)乃帉W上可接受的載體或稀釋劑組合配制成藥物組合物，可配制成固體、半固體、液體或氣體形式的制品，如片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、軟膏劑、溶液、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。
因此，可以各種途徑實現(xiàn)該制劑的給藥，包括口服、含服、直腸、非腸胃道、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、透皮、氣管內(nèi)等給藥。一些實施方案中，可采用兩種不同途徑給藥。一些實施方案中，皮下給予IFN-α，并經(jīng)口給予吡非尼酮或吡非尼酮類似物。
可采用標準方法和裝置；如針頭和注射器、皮下注射罐輸送系統(tǒng)等進行I型或III型干擾素受體激動劑的皮下給藥。參見美國專利3,547,119；4,755,173；4,531,937；4,311,137和6,017,328。將IFN-α通過貯罐給予個體的皮下注射罐和裝置組合，本文稱為“皮下注射罐輸送系統(tǒng)”。一些實施方案中，可通過針頭和注射器輸送藥物，然后用連續(xù)輸送系統(tǒng)組合進行皮下給藥。
一些實施方案中，通過連續(xù)輸送系統(tǒng)輸送I型或III型干擾素受體激動劑。本文中術語“連續(xù)輸送系統(tǒng)”可與“可控輸送系統(tǒng)”互換使用。包括持續(xù)(可控的)輸送裝置(如泵)與導管注射裝置和本領域已知的各種各樣裝置的組合。
機械泵或電子機械灌注泵也可適合用于本發(fā)明。這類裝置的例子包括例如美國專利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,360,019；4,725,852；5,820,589；5,643,207；6,198,966等中所述的裝置?？傊?，可用各種可再填裝泵系統(tǒng)進行本發(fā)明的藥物輸送方法。泵可按時間提供均勻一致的可控性藥物釋放。通常，此制劑(I型或III型干擾素受體激動劑，例如IFN-α)以液體劑型裝在藥物不能滲透的貯罐中連續(xù)輸送給個體。
一實施方案中，此藥物輸送系統(tǒng)至少是一種可部分植入的裝置，可用本領域熟知的方法和設備將此可植入裝置植入在適合植入的部位。植入部位是患者體內(nèi)導入和安置藥物輸送裝置的部位。可植入部位包括但不一定限于真皮下，皮下、肌肉內(nèi)或患者體內(nèi)其它適合的部位。通常優(yōu)選皮下植入部位，因為植入和取出該藥物輸送裝置很方便。
適合用于本發(fā)明的藥物釋放裝置可依據(jù)各種操作模式之任何一種。例如，此藥物釋放裝置可依據(jù)一種擴散系統(tǒng)、傳送系統(tǒng)或易腐蝕系統(tǒng)(如基于腐蝕的系統(tǒng))。例如，此藥物釋放裝置可以是電子化學泵、滲透泵、電子滲透泵、蒸氣壓力泵或滲透崩裂基質(zhì)。如當將藥物加入一聚合物中，隨著充滿藥物的聚合物材料(如生物可降解性充滿藥物的多聚體材料)降解的同時，此聚合物釋放出藥物制劑。其它實施方案中，此藥物釋放裝置依據(jù)電子擴散系統(tǒng)，一種電解泵、發(fā)泡泵、壓電泵、水解系統(tǒng)等。
以機械或電子機械灌注泵為基礎的藥物釋放裝置也適合用于本發(fā)明。此裝置的例子包括例如美國專利4,692,147；4,360,019；4,487,603；4,725,852等中所述的裝置?？傊?，可采用各種可再填充的、非互換泵系統(tǒng)進行本發(fā)明的藥物輸送方法。通常優(yōu)選泵和其它傳遞系統(tǒng)，因為它們可按時間提供均勻一致的可控性釋放。特別優(yōu)選滲透泵，因為它們聯(lián)合了更一致的可控釋放和較小體積二種優(yōu)點(例如見PCT出版物WO97/27840和美國專利5,985,305和5,728,396)。適合用于本發(fā)明的示范性滲透壓驅動裝置包括但不一定限于美國專利3,760,984；3,845,770；3,916,899；3,923,426；3,987,790；3,995,631；3,916,899；4,016,880；4,036,288；4,111,202；4,111,203；4,203,440；4,203,442；4,210,139；4,327,725；4,627,850；4,865,845；5,507,318；5,059,423；5,112,614；5,137,727；5,234,692；5,234,693；5,728,396等中所述裝置。
一些實施方案中，此藥物輸送裝置是一種可植入裝置?？捎帽绢I域熟知的方法和設備將此可植入裝置植入在適合植入的部位。植入部位是患者體內(nèi)導入和安置藥物輸送裝置的部位?？芍踩氩课话ǖ灰欢ㄏ抻诒砥は?，皮下、肌肉內(nèi)或患者體內(nèi)其它適合的部位。
一些實施方案中，用可植入藥物輸送系統(tǒng)，如可編程的給予I型或III型干擾素受體激動劑的系統(tǒng)，輸送I型或III型干擾素受體激動劑。示范性的可編程系統(tǒng)包括可植入入灌注泵。用于與此類泵連接的示范性可植入泵或裝置見例如美國專利4,350,155；5,443,450；5,814,019；5,976,109；6,017,328；6,171,276；6,241,704；6,464,687；6,475,180和6,512,954中所述。其它可能適用于本發(fā)明的示范性裝置是同步灌注泵(Medtronic)。
藥物劑量形式中，此制劑可以其藥學上可接受的鹽形式給藥，它們可單獨使用或與其它藥物學活性化合物組合使用。以下方法和賦形劑只是示范性而非任何方式限于這些方法。
對于口服制品，此制劑可單獨服用或與適當?shù)奶砑觿┲瞥善瑒?、粉劑、顆粒劑或膠囊劑組合服用。例如常規(guī)添加劑有乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉、土豆淀粉；粘合劑有結晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或明膠；崩解劑如玉米淀粉、土豆淀粉或羧甲基纖維素鈉；潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂。如需要可加入稀釋劑、緩沖劑、防腐劑和調(diào)味劑。
此制劑可配制成注射用制品，通過溶于懸浮于或乳化于水或非水溶液中，如植物油或其它類似的油，合成的脂肪酸甘油脂，高級脂肪酸或丙乙醇脂中。如需要可加入常規(guī)的添加劑，如助溶劑、等滲劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
另外，此制劑通過與各種堿如乳化堿或水溶性堿混合可制成栓劑，可通過栓劑直腸給予本發(fā)明的化合物。栓劑可含有運載體如可可脂、Carbowax、聚乙二醇，它們在體溫時融化，在室溫中仍為固體。
可提供口服或直腸給藥的單位劑型如糖漿劑、酏劑和懸液。例如，每劑量單位為一茶匙，一大湯匙，片劑或栓劑，含有預先定量的此組合物和一種或多種抑制劑。與此相似，注射或靜脈給藥的單位劑型在組合物中含有抑制劑，為無菌水、生理鹽水或其它藥學上可接受載體的溶液。
本文中術語“單位劑型”指適合人與動物患者一次劑量的物理上分開的單位，各單位含有經(jīng)計算預先定量的本發(fā)明化合物。當與藥學上可接受的稀釋液、載體或運載體合用時，此含量能充分產(chǎn)生所需的效應。本發(fā)明的新的單位劑型的確定，取決于所用的具體化合物和要達到的效果及各化合物在宿主中的相關藥物的動力學。
一些實施方案中，給予至少一個劑量的IFN-γ，同時，給予至少一個劑量的I型或III型干擾素受體激動劑。本文所用術語“同時”，表示IFN-α和I型或III型干擾素受體激動劑分別給予，和相互間隔約5-15秒、約15-30秒、約30-60秒、約1-5分鐘、約5-15分鐘、約15-30分鐘、約30-60分鐘、約1-2小時、約2-6小時、約6-12小時、約12-24小時、約24-48小時內(nèi)給予。
一些實施方案中，在I型或III型干擾素受體激動劑治療整個期間，給予IFN-γ。其它實施方案中，給予IFN-γ的時間與I型或III型干擾素受體激動劑治療相重疊。例如，IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑治療結束前結束；IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始后開始，并在I型或I II型干擾素受體激動劑治療結束后結束；IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑開始后開始，并在IFN-γ治療結束后結束；IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始后開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑治療結束前結束，或IFN-γ治療可在I型或III型干擾素受體激動劑治療開始前開始，并在I型或III型干擾素受體激動劑治療結束后結束。
與本文所述每一種方法有關，本發(fā)明提供的實施例中，以可控藥物輸送裝置給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ。一些實施方案中，通過可控藥物輸送裝置基本上持續(xù)地或持續(xù)地向個體輸送I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ。任選地，采用可植入性灌注泵向個體基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下灌注輸送I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ。
其它實施方案中，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ，以達到和維持I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ的理想每日平均血清濃度，使其在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療期間，處于基本上穩(wěn)定的狀態(tài)。任選地，采用可植入性灌注泵向個體皮下灌注輸送I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ。以達到和維持I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ的理想每日平均血清濃度，使其在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療期間，處于基本上穩(wěn)定的狀態(tài)。
IFN-γ的有效量范圍約0.5-500μg/m2，通常為1.5-200μg/m2，取決于個體的塊頭大?。黄浠钚詾槊?0微克蛋白質(zhì)106國際單位(U)?？擅咳找淮?、隔天一次、一周三次或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予IFN-γ。
感興趣的特別實施例中，給予個體的IFN-γ單位劑型為約25-500μg，約50-400μg，約100-300μg，在具體感興趣實施例中，此劑量約為200μg IFN-γ。許多感興趣實施例中，給予IFN-γ1b。
當每劑的劑量為200μg IFN-γ時，每單位體重的IFN-γ給藥量(估計體重為約45-135kg)范圍約4.4-1.48μg IFN-γ/kg體重。
患者的體表面積范圍通常是約1.33-2.50m2。因此，許多實施方案中，IFN-γ的劑量范圍是約150-20μg/m2。例如IFN-γ的劑量范圍約20-30μg/m2、30-40μg/m2、40-50μg/m2、50-60μg/m2、60-70μg/m2、70-80μg/m2、80-90μg/m2、90-100μg/m2、100-110μg/m2、110-120μg/m2、120-130μg/m2、130-140μg/m2、140-150μg/m2。一些實施方案中，此劑量范圍約25-100μg/m2。其它實施方案中，此劑量范圍約25-50μg/m2。
每日、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予I型或III型干擾素受體激動劑。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α，其有效劑量范圍是約1-30μg、3-27μg、1-20 MU、3-10 MU、約90-180μg或約18-90μg。
Infergen共有IFN-γ的有效劑量，包括每劑藥物約3、6、9、15、18、27μg。IFN-α2a和IFN-α2b的有效劑量范圍每劑3百萬單位(MU)到10MU。PEG化IFN-α2a的有效劑量含有每劑約90-180μg或約135μg的量。PEG化IFN-α2b的有效劑量每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)的有效劑量含有每劑約18-90μg、或約27-60μg、或約45μg的CIFN氨基酸量。可每日一次、隔天一次、一周一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予IFN-α。
一些實施方案中，以第一劑量方案，然后以第二劑量方案給予I型或III型干擾素受體激動劑。I型或III型干擾素受體激動劑的第一劑量方案(也稱為“誘導方案”)通常涉及給予較高劑量的I型或III型干擾素受體激動劑。例如，Infergen共有IFN-γ(CIFN)，其第一劑量方案包括給予約9、15、18或約27μg的CIFN。此第一劑量方案可包括單劑或至少二劑或更多劑。I型或III型干擾素受體激動劑的第一劑量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
給予I型或III型干擾素受體激動劑的第一劑量方案一段時間，此時間至少約4周、至少約8周、或至少約12周。
I型或III型干擾素受體激動劑的第二劑量方案(“維持劑量”)通常涉及給予較低劑量的I型或III型干擾素受體激動劑。例如。CIFN，其第二劑量方案包括給予至少約3μg、至少約9μg、至少約15μg、至少約18μg CIFN，此第二劑量可包括單劑或至少二劑或更多劑。
I型或III型干擾素受體激動劑的第二劑量方案可每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，給予I型或III型干擾素受體激動劑的“誘導/維持”劑量方案時，包括給予“致敏”劑量的IFN-γ。這些實施例中，給予IFN-γ的時間在開始用I型或III型干擾素受體激動劑前約1-14天、約2-10天或約3-7天給予。此段時間稱為“致敏”期。在若干這些實施例中，在用I型或III型干擾素受體激動劑治療的整個期間，持續(xù)給予IFN-γ治療。其它實施方案中，在用I型或III型干擾素受體激動劑治療結束前停止IFN-γ治療。這些實施例中，用IFN-γ治療的總時間(包括“致敏“期)是約2-30天、約4-25天、約8-20天、約10-18天、約12-16天。其它實施方案中，一旦開始I型或III型干擾素受體激動劑治療即停止IFN-γ治療。
其它實施方案中，以單劑方案給予I型或III型干擾素受體激動劑。例如CIFN，其劑量范圍一般約3-15μg、或約9-15μg。通常每日一次、隔天一次、一周三次、隔周一次、每月三次、每月一次、基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予單一劑量的I型或III型干擾素受體激動劑。給予I型或III型干擾素受體激動劑的時間，例如可以至少約24-48周或更長。
一些實施方案中，給予I型或III型干擾素受體激動劑的單劑方案包括給予“致敏”劑量的IFN-γ。這些實施例中，在開始用I型或III型干擾素受體激動劑治療前給予IFN-γ約1-14天、約2-10天、約3-7天，此段時間稱為“致敏”期。在若干這些實施例中，在用I型或III型干擾素受體激動劑治療的整個期間持續(xù)給予IFN-γ治療。其它實施方案中，在用IFN-α治療結束前停止IFN-γ治療。在這些實施方案中，在用IFN-γ治療的總時間(包括“致敏”期)約2-30天、約4-25天、約8-20天、約10-18天、約12-16天。其它實施方案中，一旦開始I型或III型干擾素受體激動劑治療即停止IFN-γ治療。
本領域技術人員不難理解，此劑量水平可以改變，視具體化合物、患者癥狀的嚴重程序和對副作用的易感性而變化。本領域技術人員可通過各種方法不難確定某給定化合物的優(yōu)選劑量。
本領域技術人員不難理解，此劑量水平可以改變，視具體化合物、患者癥狀的嚴重程序和對副作用的易感性而變化。本領域技術人員可通過各種方法不難確定某給定化合物的優(yōu)選劑量。優(yōu)選方法是測定某給定化合物的生理性潛能。
一些實施方案中，在同一制劑中同時給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，分別例如在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。在若干這些實施例中，分別或同時給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，IFN-γ和I型或III型干擾素受體激動劑分別給予，和相互間隔約5-15秒、約15-30秒、約30-60秒、約1-5分鐘、約5-15分鐘、約15-30分鐘、約30-60分鐘、約1-2小時、約2-6小時、約6-12小時、約12-24小時、約24-48小時內(nèi)給予。
可給予多劑I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。例如，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可每月一次、每月二次、每月三次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周6次，或每天、一天至一周、二周至四周、一月至二月、二月至四月、四月至6月、6至8月、8月至1年、1年至2年、2年至4年或更多給藥。在特別感興趣的實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ在約48周內(nèi)每周給藥三次。
某些實施方案中，給予IFN-α和IFN-γ聯(lián)合治療，將IFN-α和IFN-γ共同配制在一液體制劑中，其含有藥物輸送裝置所用的一貯存器。因此，本發(fā)明提供的一種藥物制劑含單一劑量的IFN-α和單一劑量的IFN-γ。本發(fā)明提供的藥物貯存器或其它容器，它們裝有共同配制在液體中的IFN-α和IFN-γ，該制劑中存在的IFN-α和IFN-γ量適合于每次一劑。此劑量如本文所述?？梢匀魏涡问教峁┵A存器，包括但不限于藥盒、針筒、連續(xù)輸送裝置的貯存器等。本發(fā)明還提供貯存器中含有預先裝有單一劑量的IFN-α和單一劑量的IFN-γ的液體制劑的藥物輸送裝置。示范性非限制藥物輸送裝置包括注射裝置如筆式注射器、針頭/針筒裝置、連續(xù)輸送裝置等。任何劑量包括本文所述用于該藥物制劑、貯存器或藥物輸送裝置中的協(xié)同有效量。
其它實施方案中，給予IFN-α和IFN-γ聯(lián)合治療，IFN-α和IFN-γ是裝在同一藥物輸送裝置中不同貯存器的分開的藥物制劑。本發(fā)明還提供預先裝載有分開的貯存器的藥物輸送裝置，一貯存器裝有含一個劑量的IFN-α的液體制劑，另一貯存器裝有含一個劑量的IFN-γ的液體制劑。在該藥物制劑、貯存器、或藥物輸送裝置中可采用任何劑量，包括本文所述的協(xié)同有效量。
本文所述治療方法的一些實施方案中，干擾素受體激動劑是IFN-α，本方法在IFN-α治療期間還共施用給個體有效量的IFN-γ。一實施方案中，通過推注給予個體IFN-α。另一實施方案中，通過藥物輸送裝置給予IFN-α和IFN-γ。任選地，用這種裝置向個體基本上連續(xù)地或連續(xù)地給藥輸送IFN-α，并通過tiw、biw、qod、或qd作藥液主處心積向個體輸送IFN-γ。任選地，用此裝置，以相同給藥方式，如基本上連續(xù)地或持續(xù)地向個體輸送IFN-α和IFN-γ。任選地，IFN-α和IFN-γ含在此藥物輸送裝置的不同貯存器中。任選地，將IFN-α和IFN-γ共同配制在一液體制劑中，裝在該藥物輸送裝置的一貯存器中。
其中，該藥物是多肽、多核苷酸(如編碼I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ的多核苷酸)，可通過許多方法，包括病毒感染、顯微注射、或載體融合將其導入組織或宿主細胞。也可用噴射注射進行肌肉內(nèi)給藥，見Furth等，Anal.Biochem.205365-368，1992?？蓪NA涂在金微粒上并用文獻中所述的粒子轟擊裝置或“基因槍”皮內(nèi)輸送(見例如Tang等，Nature，356152-154，1992)，其中，涂有治療性DNA的金微粒被轟入皮膚細胞。在這些實施方案中，特別感興趣的是使用肝臟特異性啟動子以驅動操作性連接的IFN-α和IFN-γ編碼序列在肝細胞中優(yōu)先轉錄。
其它治療藥物在一些實施方案中，本發(fā)明方法還包括給予吡非尼酮或吡非尼酮類似物。吡非尼酮或吡非尼酮類似物可每月一次、每月二次、每月三次、每周一次、每周二次、每周三次、每周四次、每周五次、每周6次、每天給藥，或將日劑量分為每天一次至每天5此，為期一天至一周、二周至四周、一月至二月、二月至四月、四月至6月、6至8月、8月至1年、1年至2年、或2年至4年或更長時間。
吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物的有效劑量包括一種基于體重的劑量，其范圍約5mg/kg/天-125mg/kg/天，或是一種固定的劑量，每天約400mg-3600mg，或每天約800mg-2400mg，或每天約1000mg-1800mg，或每天約1200mg-1600mg，所述劑量經(jīng)口給予。適合治療纖維化疾病的吡非尼酮和特定的吡非尼酮類似物的其它劑量和制劑描述在美國專利5,310,562；5,518,729；5,716,632和6,090,822中。
在一些實施方案中，吡非尼酮或吡非尼酮類似物在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的整個階段都給予。在其它實施方案中，吡非尼酮或吡非尼酮類似物未在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療整個階段給予，例如，僅在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的第一階段給予，僅在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的第二階段給予，或I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療方案的其它一些階段。
一些實施方案中，此方法還包括給予三氮唑核苷，即1-β-D-核糖呋喃糖基-1H-1，2，4-三唑-3-酰胺，可從ICM制藥公司(Costa，Mesa，Calif)購得，見Merck索引，化合物NO.8199，第11版中所述。其制造和配方見美國專利4,211,711中所述。本發(fā)明還考慮采用三氮唑核苷的衍生物(見美國專利6,277,830)。以膠囊或片劑形式，或以與I型或III型干擾素受體激動劑相同或不同的給藥形式和相同或不同的途徑口服給予三氮唑核苷。當然，此三種藥物的其它給藥方式如果可行，如鼻噴霧、經(jīng)皮、靜脈內(nèi)、栓劑、緩釋劑型等也可考慮，只要能輸送適當劑量而不破壞活性成分，任何給藥的形式都會其作用。
三氮唑核苷通常給藥量范圍是每kg體重每日約30-60mg、約60-125mg、約125-200mg、約200-300mg、約300-400mg、約400-1200mg、約600-1000mg、約700-900mg、或每日約10mg/kg。
在一些實施方案中，三氮唑核苷在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的整個階段都給予。在其它實施方案中，三氮唑核苷未在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療整個階段給予，例如，僅在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的第一階段給予，僅在I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療的第二階段給予，或I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ治療方案的其它一些階段。
治療方法1.治療α病毒感染本發(fā)明提供了通過給予有此需要的個體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ來治療α病毒感染的方法。用本發(fā)明方法治療的個體包括臨床診斷為感染α病毒的個體，以及已出現(xiàn)臨床感染的一種或多種體癥和癥狀，但尚未診斷為α病毒感染的個體。
在上述個體內(nèi)開展α病毒感染的聯(lián)合療法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當在分開的制劑中給藥時，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可基本上同時給予，或可彼此在約24小時內(nèi)給予。許多實施方案中，可同時多劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。
許多實施方案中，給予I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。
一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療患者的α病毒感染。一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染。一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-30μg藥量的INFERGEN劑量，每日一次(qd)、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有9μg藥量的INFERGEN劑量物，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約4-60μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的α病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約18-24μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為一百萬單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μgIFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療α病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供了治療α病毒感染的方法，其中在上述任何I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法中加入了三氮唑核苷治療。在一些實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服10mg三氮唑核苷/kg體重的三氮唑核苷療法。三氮唑核苷的日劑量可每天一劑給予或分劑給予，包括每天一、二、三或四劑。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(monoPEG)(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd或tiw給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了α病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予α病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
2.治療西尼羅病毒感染本發(fā)明提供了通過給予有此需要的個體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ來治療西尼羅病毒感染的方法。用本發(fā)明方法治療的個體包括臨床診斷為感染西尼羅病毒的個體，以及已出現(xiàn)臨床感染的一種或多種體癥和癥狀，但尚未診斷為西尼羅病毒感染的個體。
在上述個體內(nèi)開展西尼羅病毒感染的單一療法時，給予需要這種治療的個體I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。一些實施方案中，所述劑量是皮下給予的。
在上述個體內(nèi)開展西尼羅病毒感染的聯(lián)合療法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當在分開的制劑中給藥時，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可基本上同時給予，或可彼此在約24小時內(nèi)給予。許多實施方案中，可同時多劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)一10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α和/或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。
一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療患者的西尼羅病毒感染。一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療患者的西尼羅病毒感染。一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治療患者的西尼羅病毒感染。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的西尼羅病毒(WNV)感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約4-60μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的WNV感染，包括皮下給予患者每劑含有約18-24μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為一百萬單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20 MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、b iw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療WNV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供了治療WNV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法中加入了三氮唑核苷治療。在一些實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服10mg三氮唑核苷/kg體重的三氮唑核苷療法。日劑量可每天一劑給予或分劑給予，包括每天一、二、三或四劑。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的50μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的100μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μgActimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的25μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的200μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的25μgActimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd或tiw給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了WNV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予WNV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
3.治療登革熱病毒感染本發(fā)明提供了通過給予有此需要的個體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ來治療登革熱病毒感染的方法。用本發(fā)明方法治療的個體包括臨床診斷為感染登革熱病毒的個體，以及已出現(xiàn)臨床感染的一種或多種體癥和癥狀，但尚未診斷為登革熱病毒感染的個體。
在上述個體內(nèi)開展登革熱病毒感染的單一療法時，給予需要這種治療的個體I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。一些實施方案中，所述劑量是皮下給予的。
在上述個體內(nèi)開展登革熱病毒感染的聯(lián)合療法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當在分開的制劑中給藥時，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可基本上同時給予，或可彼此在約24小時內(nèi)給予。許多實施方案中，可多劑量皮下給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α和/或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。
一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染。一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染。一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約有9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約4-60μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的登革熱病毒感染，包括皮下給予患者每劑含有約18-24μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為一百萬單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療登革熱病毒感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供了治療登革熱病毒感染的方法，其中在上述任何I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法中加入了三氮唑核苷治療。在一些實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服10mg三氮唑核苷/kg體重的三氮唑核苷療法。日劑量可每天一劑給予或分劑給予，包括每天一、二、三或四劑。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd或tiw給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了登革熱病毒感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予登革熱病毒感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
4.治療黃熱病毒感染本發(fā)明提供了通過給予有此需要的個體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ來治療黃熱病毒(YFV)感染的方法。用本發(fā)明方法治療的個體包括臨床診斷為感染YFV的個體，以及已出現(xiàn)臨床感染的一種或多種體癥和癥狀，但尚未診斷為YFV感染的個體。
在上述個體內(nèi)開展YFV感染的單一療法時，給予需要這種治療的個體I型或III型干擾素受體激動劑或IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。一些實施方案中，所述劑量是皮下給予的。
在上述個體內(nèi)開展YFV感染的聯(lián)合療法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當在分開的制劑中給藥時，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可基本上同時給予，或可彼此在約24小時內(nèi)給予。許多實施方案中，可同時多劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α和/或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。
一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療患者的YFV感染。一些實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染。一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約4-60μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的YFV感染，包括皮下給予患者每劑含有約18-24μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為一百萬單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約I0MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療YFV感染的患者，此方法包括皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
本發(fā)明還提供了治療YFV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法中加入了三氮唑核苷治療。在一些實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服10mg三氮唑核苷/kg體重的三氮唑核苷療法。日劑量可每天一劑給予或分劑給予，包括每天一、二、三或四劑。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的50μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的100μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μgActimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的25μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的200μgActimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的25μgActimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd或tiw給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
一實施方案中，本發(fā)明提供了YFV感染的治療方法，包括在所需治療期內(nèi)給予YFV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法。
5.治療丙肝病毒感染本發(fā)明提供了通過給予有此需要的個體治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ來治療丙肝病毒感染的方法。用本發(fā)明方法治療的個體包括臨床診斷為感染丙肝病毒的個體。被HCV感染的個體被定義為在他們的血液中具有HCV RNA，和/或在他們的血清中具有抗-HCV抗體。
臨床診斷為感染HCV的個體包括天然個體(例如以前未對HCV進行治療的個體)和在以前的HCV治療中失敗的個體(“治療失敗”患者)。治療失敗患者包括無應答者(例如，通過以前的HCV治療其HCV滴度未顯著或充分降低的個體)；和復發(fā)者(例如，以前接受HCV治療的個體，其HCV滴度降低，但隨后又升高)。
特別感興趣的實施方案中，個體的HCV滴度至少為每毫升血清有約5×105，或至少約106，或至少約2×106個HCV基因組拷貝。患者可被任何HCV基因型(基因型1，包括1a和1b，2，3，4，6等，以及亞型(例如2a，2b，3a等))感染，尤其難治療的基因型如HCV基因型1，特別是HCV亞型和準種。
同樣感興趣的還有HCV陽性個體(如上所述)，該個體由于慢性HCV感染而具有嚴重纖維化或早期肝硬化(非失代償性的，Child-Pugh級別A或更低)，或程度更加嚴重肝硬化(失代償性的，Child-Pugh級別B或C)，并且無論以前是否用基于IFN-α的療法進行抗病毒治療或者該個體無法耐受基于IFN-α的療法或該個體對這種療法具有禁忌癥，它都出現(xiàn)病毒血癥癥狀。在特別感興趣的實施方案中，根據(jù)METAVIR評分系統(tǒng)，處于第三或第四階段的HCV陽性個體適合用本發(fā)明的方法治療。在其它實施方案中，適合用本發(fā)明的方法治療的個體是具有失代償性肝硬化臨床表現(xiàn)的患者，包括肝硬化程度非常嚴重的患者，包括那些等待肝移植的患者。再在其它實施方案中，適合用本發(fā)明的方法治療的個體包括具有輕微肝硬化程度的患者，包括那些早期肝硬化患者(METAVIR、Ludwig和Scheuer評分系統(tǒng)中的階段1和2；或Ishak評分系統(tǒng)中的階段1、2或3)。
在上述個體內(nèi)開展丙肝病毒感染的聯(lián)合療法時，給予個體I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一些實施方案中，在同一制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。其它實施方案中，在分開的制劑中給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。當在分開的制劑中給藥時，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ可基本上同時給予，或可彼此在約24小時內(nèi)給予。許多實施方案中，可同時多劑給予I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
Infergen共有IFN-α的有效劑量每劑含有約3、9、15、18或27μg的藥量。有效劑量的IFN-α2a和IFN-α2b可含有每劑約3百萬單位(MU)-10百萬單位(MU)的藥量。有效劑量的PEGASYSPEG化IFN-α2a可含有每劑約90-180μg或約135μg的藥量。有效劑量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b可含有每劑約0.5-1.5μg/kg體重的藥量。有效劑量的PEG化共有干擾素(PEG-CIFN)可含有每劑約18-90μg或約27-60μg或約45μg的CIFN氨基酸量的PEG-CIFN藥量。許多實施方案中，給予IFN-α和/或IFN-γ的時間約1-7天，約1-2周，或2-3周，或3-4周，或1-2月，或3-4月，或4-6月，或6-8月，或8-12月，或至少一年；可給予更長時間。劑量方案可包括tid、bid、qd、qod、biw、tiw、qw、qow、每月三次、或每月給予。
某些實施方案中，用于治療HCV患者的具體藥物治療方案是根據(jù)患者所表現(xiàn)出來的某些疾病參數(shù)(如病毒負荷、患者的HCV感染基因型、肝臟組織學和/或患者肝纖維化階段)來選擇的。一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別肝纖維化程度處于如Knodell評分3或4所測定的晚期或嚴重階段的患者，然后(2)給予患者治療有效量的IFN-α和IFN-γ，為期約24周-60周，或約30周-1年，或約36周-50周，或約40周-48周，或至少約24周，或至少約30周，或至少約36周，或至少約40周，或至少約48周，或至少約60周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別肝纖維化程度處于如Knodell評分3或4所測定的發(fā)展階段或嚴重階段的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約40周-50周，或約48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷大于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約24周-60周，或約30周-1年，或約36周-50周，或約40周-48周，或至少約24周，或至少約30周，或至少約36周，或至少約40周，或至少約48周，或至少約60周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷大于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約40周-50周，或約48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷大于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清，且如Knodell記分0、1或2所測的沒有或早期階段的肝纖維化的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約24周-60周，或約30周-1年，或約36周-50周，或約40周-48周，或至少約24周，或至少約30周，或至少約36周，或至少約40周，或至少約48周，或至少約60周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷大于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清，且如Knodell記分0、1或2所測的沒有或早期階段的肝纖維化的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約40周-50周，或約48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷小于或等于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約20周-50周，或約24周-48周，或約30周-40周，或至多20周，或至多24周，或至多30周，或至多36周，或至多48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷小于或等于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約20周-24周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型1的感染，且最初的病毒負荷小于或等于2百萬個病毒基因組拷貝/毫升患者血清的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約24周-48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約24周-60周，或約30周-1年，或約36周-50周，或約40周-48周，或至少約24周，或至少約30周，或至少約36周，或至少約40周，或至少約48周，或至少約60周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約20周-50周，或約24周-48周，或約30周-40周，或至多20周，或至多24周，或至多30周，或至多36周，或至多48周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約20周-24周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型2或3的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期至少約24周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型4的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約24周-60周，或約30周-1年，或約36周-50周，或約40周-48周，或至少約24周，或至少約30周，或至少約36周，或至少約40周，或至少約48周，或至少約60周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型5、6、7、8或9中任一種的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期約20周-50周。
另一實施方案中，本發(fā)明提供了治療HCV感染的方法，該方法包括以下步驟(1)鑒別具有HCV基因型5、6、7、8或9中任一種的感染的患者，然后(2)給予患者治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ，為期至少約24周，至多約48周。
對上述具有特定HCV基因型和/或最初病毒負荷的患者采用本發(fā)明的方法時，臨床上將給予在治療期間獲得持續(xù)病毒應答有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的約3μg、約9μg、約15μg、約18μg或約27μg INFERGEN共有IFN-α的IFN-α療法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的約3μg、約9μg、約15μg、約18μg或約27μg INFERGEN共有IFN-α的IFN-α療法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的約3百萬單位(MU)-10MU IFN-α2a或IFN-α2b的IFN-α療法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的25μg-300μgIFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的約3百萬單位(MU)-10MU IFN-α2a或IFN-α2b的IFN-α療法，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的100μg-200μgIFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用PEGASYSPEG化的IFN-α2a的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者，每劑皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的PEGASYSPEG化的IFN-α2a提供約90μg-180μg，或約135μg藥量。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用PEGASYSPEG化的IFN-α2a的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者，每劑皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的PEGASYSPEG化的IFN-α2a提供約90μg-180μg，或約135μg藥量。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的約0.5μg PEG-INTRONPEG化的IFN-α2b/千克體重-1.5μg PEG-INTRON/千克體重的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的約0.5μg PEG-INTRONPEG化的IFN-α2b/千克體重-1.5μg PEG-INTRON/千克體重的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用PEG化的共有干擾素(PEG-CIFN)的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的25μg-300μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者，每劑皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的PEG-CIFN提供約18μg-90μg，或約27μg-60μg，或約45μg CIFN氨基酸藥量。
另一實施方案中，該方法在所需治療期內(nèi)用PEG化的共有干擾素(PEG-CIFN)的IFN-α方案，和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次或每月一次給予的100μg-200μg IFN-γ的IFN-γ療法來治療患者，每劑皮下qw、qow、每月三次或每月一次給予的PEG-CIFN提供約18μg-90μg，或約27μg-60μg，或約45μg CIFN氨基酸藥量。
在一些實施方案中，本發(fā)明提供了用協(xié)同有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療丙肝病毒感染患者的方法。在一些實施方案中，本發(fā)明提供了用協(xié)同有效量的IFN-α和IFN-γ治療丙肝病毒感染患者的方法。一實施方案中，本發(fā)明提供了用協(xié)同有效量的共有IFN-α和IFN-γ治療丙肝病毒感染患者的方法。
一般，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效量的共有干擾素(CIFN)和IFN-γ，以劑量比1μg CIFN10μg IFN-γ提供，其中有CIFN和IFN-γ均為非PEG化和非糖基化的。
一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的丙肝病毒(HCV)感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1-9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有1μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約10-50μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約有9μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約90-100μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的INFERGEN共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約30μg藥量的INFERGEN劑量，qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予，與之聯(lián)用的IFN-γ劑量為每劑含有約200-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約4-60μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法，采用協(xié)同有效量的PEG化共有IFN-α和IFN-γ治療患者的HCV感染，包括皮下給予患者每劑含有約18-24μg CIFN氨基酸藥量的PEG化的共有IFN-α(PEG-CIFN)，qw、qow、每月三次、每月一次；與之聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量為分劑每周含有約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需的治療期間，皮下qd、qod、tiw、biw、或基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
通常，適用于本發(fā)明方法的協(xié)同有效劑量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ的劑量比為一百萬單位(MU)IFN-α2a或2b或2c30μg IFN-γ，其中IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ都是非PEG化和非糖基化的。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw、或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約1MU-20MU的IFN-α2a或2b或2c；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約30-600μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約3MU的IFN-α2a；聯(lián)用的每周IFN-γ劑量含每劑約100μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的IFN-α2a或2b或2c和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地皮下給予患者每劑含IFN-α2a或2b或2c約10MU的IFN-α2a；聯(lián)用的IFN-γ劑量含每劑約300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw、biw或每天基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約90-360μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEGASYSPEG化IFN-α2a和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約180μg的PEGASYS藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約。0.75-3.0μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約30-1000μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
另一實施方案中，本發(fā)明提供的方法采用協(xié)同有效量的PEG-INTRONPEG化IFN-α2b和IFN-γ治療HCV感染的患者，此方法包括皮下qd、qod、每月三次或每月給予患者每劑含約1.5μg/kg體重的PEG-INTRON藥量；聯(lián)用的IFN-γ每周總劑量含每周約100-300μg的IFN-γ藥量，在所需治療期內(nèi)皮下qd、qod、tiw或biw或基本上持續(xù)地或持續(xù)地分劑給予。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的25μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下qd或tiw給予的9μg INFERGEN共有IFN-α；和皮下tiw給予的200μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd或tiw給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的100μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的150μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α，和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b；和經(jīng)口qd給予的三氮唑核苷的療法，治療期為48周。該實施方案中，三氮唑核苷的給藥量為個體體重小于75千克為1000mg，個體體重大于等于75千克為1200mg。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的50μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
一實施方案中，本發(fā)明提供了HCV感染的治療方法，包括給予HCV感染的個體皮下每10天或qw給予的200μg單PEG(30kD，線性)化的共有IFN-α；和皮下tiw給予的100μg Actimmune人IFN-γ1b的療法，治療期為48周。
任何上述治療方案可施用于對以前的HCV感染治療失敗的個體(“治療失敗患者”，包括無應答者和復發(fā)者)。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在治療失敗的患者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在治療失敗的患者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在無應答患者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在無應答患者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。其它實施方案中，本發(fā)明提供了在復發(fā)者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在復發(fā)者內(nèi)治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。
任何上述治療方案可施用于被HCV基因型1感染的未經(jīng)治療的患者。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型1感染的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型1感染的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。
任何上述治療方案可施用于被HCV基因型4感染的未經(jīng)治療的患者。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型4感染的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型4感染的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。
任何上述治療方案可施用于被HCV基因型1感染的未經(jīng)治療的患者，所述患者具有高病毒負荷(HVL)，這里“HVL”表示高于2×106個HCV基因組拷貝/mL血清的HCV病毒負荷。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型1感染并具有高病毒負荷的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α和有效量的IFN-γ，為期48周。在其它實施方案中，本發(fā)明提供了在被HCV基因型1感染并具有高病毒負荷的未經(jīng)治療的患者中治療HCV感染的方法，該方法包括給予有效量的IFN-α、有效量的IFN-γ和有效量的三氮唑核苷，為期48周。
本發(fā)明還提供了治療HCV感染的方法，其中在上述任何I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法中加入了三氮唑核苷治療。在一些實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服800mg-1200mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服1000mg三氮唑核苷的三氮唑核苷療法。在其它實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ聯(lián)合療法經(jīng)過改進，包括在特定的治療階段qd口服10mg三氮唑核苷/kg體重的三氮唑核苷療法。日三氮唑核苷劑量可每天一劑給予或分劑給予，包括每天一、二、三或四劑。
7.治療肝纖維化適合用本發(fā)明的方法治療的肝纖維化個體包括臨床診斷為肝纖維化的個體，以及被認為具有發(fā)展成肝纖維化的風險但臨床上尚未發(fā)展成肝纖維化的個體。這種個體包括，但不限于，感染HCV的個體；感染HBV的個體；感染曼森血吸蟲(Schistosonianiaizsoni)的個體；曾接觸已知會導致肝纖維化的化學試劑的個體；被診斷為威爾遜病的個體；被診斷為血色素沉著病的個體；以及酒精性肝病個體；非酒精性脂肪肝個體；自身免疫性肝炎個體；原發(fā)性硬化性膽管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、或α-1-抗胰蛋白酶缺乏個體。
一方面，本發(fā)明提供了治療肝纖維化患者的方法，包括給予該患者有效減少肝纖維化量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應或減少肝纖維化有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。
另一方面，本發(fā)明提供了增強肝纖維化患者肝功能的方法，包括給予該患者有效增強肝功能量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應或增強肝功能有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。
另一方面，本發(fā)明提供了降低肝纖維化患者肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率的方法，包括給予患者降低肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ。任選地，本發(fā)明的方法包括與由I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ治療實現(xiàn)的增強抗纖維化效應或降低肝硬化并發(fā)癥發(fā)病率有效量的吡非尼酮或吡非尼酮類似物一起，給予患者I型或III型干擾素受體激動劑和IFN-γ的組合物。
IFN-γ的有效劑量范圍每劑約25-300μg、約有10-100μg、或約100-1000μg。
I型或III型干擾素受體激動劑可每天、隔天一次、每周一次、每周三次、隔周一次、每月三次、每月一次基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予。
一些實施方案中，I型干擾素受體激動劑是IFN-α。IFN-α的有效劑量范圍約1-30μg、約3-27μg、約1MU-20MU、約3MU-10MU、約90-180μg、約18-90μg。
一實施方案中，上述本發(fā)明的治療肝纖維化的方法可通過皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-γ劑量和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者INFERGEN共有IFN-α劑量來進行，所述IFN-γ劑量每劑含有約25-300μg、或約100μg-200μg藥量的IFN-γ，INFERGEN共有IFN-α劑量每劑含有約3μg、約9μg、約15μg、約18μg或約27μg藥量的INFERGEN。這種方案的抗纖維化效應或其它治療效果可通過在IFN-α和IFN-γ治療期間經(jīng)口qd同時給予患者約5mg/kg體重-125mg/kg體重基于體重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物劑量，或約400mg-3600mg、或約800mg-2400mg、或約1000mg-1800mg、或約1200mg-1600mg固定劑量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物來增強。
另一實施方案中，上述本發(fā)明的治療肝纖維化的方法可通過皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-γ劑量和皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-α2a或IFN-α2b劑量來進行，所述IFN-γ劑量每劑含有約25-300μg、或約100μg-200μg藥量的IFN-γ，IFN-α2a或IFN-α2b劑量每劑含有約3百萬單位(MU)-10MU藥量的IFN-α2a或IFN-α2b。這種方案的抗纖維化效應或其它治療效果可通過在IFN-α和IFN-γ治療期間經(jīng)口qd同時給予患者約5mg/kg體重-125mg/kg體重基于體重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物劑量，或約400mg-3600mg、或約800mg-2400mg、或約1000mg-1800mg、或約1200mg-1600mg固定劑量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物來增強。
另一實施方案中，上述本發(fā)明的治療肝纖維化的方法可通過皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-γ劑量和皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者PEGASYSPEG化的IFN-α2a劑量來進行，所述IFN-γ劑量每劑含有約25-300μg、或約100μg-200μg藥量的IFN-γ，PEG化的IFN-α2a劑量每劑含有約90μg-180μg、或約135μg藥量的PEGASYS。這種方案的抗纖維化效應或其它治療效果可通過在IFN-α和IFN-γ治療期間經(jīng)口qd同時給予患者約5mg/kg體重-125mg/kg體重基于體重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物劑量，或約400mg-3600mg、或約800mg-2400mg、或約1000mg-1800mg、或約1200mg-1600mg固定劑量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物來增強。
另一實施方案中，上述本發(fā)明的治療肝纖維化的方法可通過皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-γ劑量和皮下qw、qow、每月三次、每月給予患者INTRONPEG化的IFN-α2b劑量來進行，所述IFN-γ劑量每劑含有約25-300μg、或約100μg-200μg藥量的IFN-γ，PEG化的IFN-α2b劑量每劑含有約0.5μg-1.5μg藥量的INTRON。這種方案的抗纖維化效應或其它治療效果可通過在IFN-α和IFN-γ治療期間經(jīng)口qd同時給予患者約5mg/kg體重-125mg/kg體重基于體重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物劑量，或約400mg-3600mg、或約800mg-2400mg、或約1000mg-1800mg、或約1200mg-1600mg固定劑量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物來增強。
另一實施方案中，上述本發(fā)明的治療肝纖維化的方法可通過皮下qd、qod、tiw、biw、qw、qow、每月三次、每月一次或每日基本上持續(xù)地或持續(xù)地給予患者IFN-γ劑量和皮下qw、qow、每月三次或每月給予患者PEG化的共有干擾素(PEG-CIFN)劑量來進行，所述IFN-γ劑量每劑含有約25-300μg、或約100μg-200μg藥量的IFN-γ，PEG-CIFN劑量每劑含有約18μg-90μg、或約27μg-60μg、或約45μg藥量的CIFN氨基酸。
這種方案的抗纖維化效應或其它治療效果可通過在IFN-α和IFN-γ治療期間經(jīng)口qd同時給予患者約5mg/kg體重-125mg/kg體重基于體重的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物劑量，或約400mg-3600mg、或約800mg-2400mg、或約1000mg-1800mg、或約1200mg-1600mg固定劑量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物來增強。
在許多實施方案中，I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ的用藥期約1天-7天、或約1周-2周、或約2周-3周、或約3周-4周、或約1個月-2個月、或約3個月-4個月、或約4個月-6個月、或約6個月-8個月、或約8個月-12個月、或至少1年，并且可用藥更長時間。在共同施用吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物的實施方案中，吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物的治療期可與I型或III型干擾素受體激動劑和/或IFN-γ的治療期相一致。
實施例列出了以下實施例為本領域的一般技術人員提供如何制造和使用本發(fā)明的完整揭示和描述，這些實施例不是要限制發(fā)明者認為是其發(fā)明的本發(fā)明的范圍，也不是說以下實驗是所有或唯一使用的實施例。發(fā)明者盡量確保所用數(shù)值(如量、溫度等)的準確性，但一些試驗誤差和偏差是可以理解的。除非另有說明，份是以重量表示的份，分子量是重均分子量，溫度是攝氏度，壓力是或接近大氣壓。
實施例1CIFN和IFN-γ的抗病毒活性特征材料和方法使Hela細胞生長在補充有10％熱失活血清(按需要使用牛血清或胎牛血清)(Hyclone Laboratories公司，Logan，UT)、L-谷氨酰胺(2mM)、鏈霉素(100μg/ml)和青霉素(100u/ml)的DMEM或RPMI-1640培養(yǎng)基中。使細胞在37℃、5％CO2濕潤培養(yǎng)箱中生長。加入病毒之前用IFN處理Hela細胞(96孔微量滴定板的每孔2×104個細胞)24小時。加入MOI為0.1的病毒并再將平板培育48小時。此時，用以20％(體積比)甲醇配的0.5％結晶紫染色細胞單層。所有細胞病變效應(CPE)抑制測定一式兩份。1單位IFN被定義為以50％抑制CPE的IFN量。用NIH標準人IFN-α(Namalwa/Sendai)(Ga23-901-532)測量所有IFN的活性。
結果測定數(shù)據(jù)列在下面的表2中。
表2Infergen、Intron A和Actimmune抗西尼羅病毒的活性
*這里所用的值來自獨立毒性研究，由于已經(jīng)被充分稀釋，故無需在該平板上證實毒性作用。
EC50＝有效濃度。表示抗病毒功效IC50＝抑制濃度。只用于藥物而不用于病毒。表示藥物的毒性。
SI＝選擇指數(shù)。IC50/EC50。高SI是某種藥物值得進一步測試的標準指標。
HeLa/VSV的測定結果表明，Infergen和IFN-γ對西尼羅病毒具有高度協(xié)同的抗病毒生長抑制活性?？紤]到自然發(fā)生的干擾素在免疫系統(tǒng)中的作用，可能干擾素的抗病毒特性不特異于或限于特殊的病毒。我們認為Infergen(和其它干擾素-α)和IFN-γ將對丙肝病毒和其它α病毒具有協(xié)同的抗病毒活性。
實施例2IFN-α和干擾素誘導物在細胞培養(yǎng)物和小鼠及倉鼠模型中對西尼羅病毒的作用材料和方法病毒和動物使用WNV的紐約烏鴉腦分離物(NY，CDC996625，V1 D3 11/10/1999)。用含有5％胎牛血清(FBS)、0.1％NaHCO3的199培養(yǎng)基，在非洲綠猴腎(Vero 76，ATCCCCL1587)細胞中增殖登革熱病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒。在抗病毒測定中用含有1％FBS、0.1％NaHCO3和50μg/mL慶大霉素(Sigma，St.Louis，MO)的MEM維持細胞。在96孔微量滴定板內(nèi)亞融合(subconfluent)的Vero細胞中滴定病毒。使用雌性4-5周齡的BALB/c小鼠(Simonsen Laboratories，Gilroy，CA或Harlan Sprague Dawley，Indianapolis，IN)和雌性4-5周齡或大于7周齡的敘利亞金倉鼠。用稀釋在MEM中的10450％細胞培養(yǎng)物感染劑量(CCID50)皮下激發(fā)動物。動物被隨機分組。
化合物人雜合干擾素-αB/D(IFN-αB/D)獲得自David Gangemi博士(ClemsonUniversity)或Johnson Lau博士(Ribapharm公司，Costa Mesa，加利福尼亞)。已知IFN-αB/D對小鼠具有活性。Wintergerst等，(1999)Antiviral Res44(1)75-8；Gangemi等，(1989)9(3)275-83；Brooks等，(1999)Antiviral Res 41(1)57-64；和Gangemi等，(1989)9(2)227-37。InfergenTM(#P002586，干擾素alfacon-1，Intermune公司，Brisbane，CA)是第二代細胞因子，它在非等位干擾素α亞型中含有出現(xiàn)頻率最高的氨基酸。在細胞培養(yǎng)物模型中，與天然產(chǎn)生的1型干擾素相比，Infergen確實比較有效，在與天然產(chǎn)生的1型干擾素的對比臨床試驗中，它是丙肝病毒復制更有效的抑制劑。Infergen對倉鼠具有活性，但對小鼠沒有活性。Fish等，(1986)Antimicrob Agents Chemother 30(1)52-6。干擾素-α2b(IFN-α2b)和干擾素-γ(IFN-γ)也都來自Intermune公司。為進行聯(lián)合研究，將適當劑量的Infergen和三氮唑核苷混合在同樣的注射瓶中，并在試驗過程中保存于4℃。皮下同時注射藥物。AmpligenTM水溶液(30μg/mL)獲自William M.Mitchell(Vanderbilt大學醫(yī)學病理學學院)。AmpligenTM是一種由雙鏈polyIpolyC12U構成的RNA樣分子，其中，polyC鏈中的尿苷酸取代產(chǎn)生了非氫鍵區(qū)。AmpligenTM誘導2-5A合成酶產(chǎn)生和活化，這種酶反過來可激活RNA酶L，從而破壞病毒RNA。由于AmpligenTM是一種RNA樣的分子，需要注意使用不含RNA酶的物質(zhì)和DEPC處理的水以防止被RNA酶污染。Ampligen被等分并冷凍直到使用。AldaraTM(咪喹莫特；一種刺激制造干擾素的化合物)獲自制藥廠，為局部使用的乳膏，每250mg包裝乳膏中含有12.5mg咪喹莫特。將一個包裝的乳膏涂抹在9只小鼠或10只倉鼠切開的背部，涂抹面積為2.2cm2。這樣可分別在小鼠和倉鼠內(nèi)產(chǎn)生1.4和1.3mg/2.2cm2的劑量。
細胞培養(yǎng)測定法WNV的細胞病變效應(CPE)測定法已經(jīng)描述過。Morrey等，(2002)55107-116；Smee等，(1988)10253-262。簡言之，在96孔微板中亞融合的Vero76細胞中加入測試化合物的連續(xù)稀釋液，之后加入5-50％細胞培養(yǎng)物感染劑量(CCID50)的WNV和50CCID50黃熱病毒和登革熱病毒。每個96孔板上的對照是未感染的細胞、被感染但使用藥物的細胞和未感染但用藥物處理的細胞。每種藥物濃度的毒性對照有兩份，測試樣品有三份。在視覺上對細胞進行CPE評分。采用每種化合物濃度的平均CPE效價進行回歸分析來計算50％有效濃度(EC50)和50％抑制毒性濃度(IC50)。用IC50÷EC50來計算選擇指數(shù)(SI)。用中性紅(NR)活體染料來鑒別視覺CPE測試以及提供更加量化的結果。Morrey等，(2002)，同上；和Smee等，(1988)，同上。視覺閱讀CPE之后，將細胞與中性紅染料一起在37℃培養(yǎng)2-3小時。從孔中洗去游離染料，并用微板閱讀器(Bio-Tek EL 1309，BioTek，Burlington，VT)在540和405nm吸光度下量化吸取的染料。吸光值表示為占對照的百分比，并通過回歸分析計算IC50和EC50值。
用病毒生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物測定法(Morrey等，(2002)，同上)來測定組織或血漿的病毒滴度，其中，特定體積的組織勻漿或血漿被加入一系列稀釋試管中的第一個試管中。進行連續(xù)稀釋并加到Vero細胞中。6天后用CPE來鑒別感染終點。Sidwell等，(1971)22797-801。用四個復制品來計算每毫升血漿或每克組織的感染劑量。
攀登試驗將倉鼠置于42°的斜坡(4英寸寬、6英寸高)下端。記錄倉鼠在15秒的指定時間內(nèi)通過的距離。在晚上和白天對未經(jīng)感染的倉鼠進行測量，測量之前先搖晃籠子以喚醒倉鼠，兩次測量結果是類似的。包括有病的倉鼠在內(nèi)，所有倉鼠似乎都具有走上斜面的動機。該測試反映了疾病體征，如肌無力、打轉、平衡和后肢麻痹。Xiao等，(2001)Emerg Infect Dis，7(4)714-21；和Chowers等，(2001)Emerg InfectDis.7(4)675-8。
注射病毒后-1天或-4至-6小時對小鼠的治療在-1dpi(注射病毒后天數(shù))，雌性BALB/c小鼠(4-5周齡)用隔天(eod)腹膜內(nèi)(ip)給予的Ampligen(13mg/kg)治療直到9dpi，用局部給予的咪喹莫特治療(1.4mg/2.2cm2)，qd×7天，或用ip IFN-αB/D治療(6.5×107U/kg)(Johnson Lau，Ribapharm公司)，qd×7天。用鹽水作為Ampligen和IFN-αB/D的載體。WNV感染組和未感染未治療組中分別有10個動物，毒性對照組中有6個動物?；?1dpi仍然存活的動物數(shù)計算百分存活率。
在-4至-6hpi(注射病毒后小時數(shù))，雌性BALB/c小鼠(4-5周齡)也用隔天(eod)ip給予的Ampligen(15或4.8mg/kg)治療直到6dpi，或用ip給予的IFN-αB/D治療(1.5×107或1.5×106U/kg)(David Gangemi，Clemson University)，qd×5天。用鹽水作為載體?；?3dpi仍然存活的動物數(shù)計算百分存活率。
-4至-6hpi對倉鼠的治療在-4至-6hpi，雌性倉鼠(4-5周齡)用隔天(eod)ip給予的Ampligen(10或3.2mg/kg)治療，直到6dpi，或用sc給予的Infergen治療(10或1μg/kg)，qd×7天。用鹽水作為載體對照組。分別基于13dpi仍然存活的動物數(shù)和-2和7dpi之間的差異來計算百分存活率和重量變化。每個治療試驗的最高劑量組和感染的鹽水對照組有9只倉鼠。較低劑量組和毒性對照組有7只倉鼠。
Infergen和三氮唑核苷的聯(lián)合研究病毒侵襲2天后(2dpi)開始對倉鼠進行皮下治療?；?和7dpi的重量差異來計算平均增重，并確定直至12dpi的存活率。將Infergen(5、0.5、0.05和0μg/kg)和三氮唑核苷(75、7.5和0mg/kg)的所有組合物一起皮下注射給每組中10只7-8周齡的倉鼠。試驗1中用安慰劑感染的對照組中有17個動物。每組有3只倉鼠的未感染的對照組包括5、0.5和0μg/kg Infergen和三氮唑核苷(75和0mg/kg)的所有組合。用5μg/kg Infergen和75mg/kg三氮唑核苷將試驗過程重復一次(試驗2)。
結果當在病毒侵襲之前1天給予干擾素時**，通過視覺CPE測定和NR測定發(fā)現(xiàn)，干擾素在培養(yǎng)物中具有抗WNV的活性(表3)。
表3.采用Vero 76細胞，干擾素抗黃病毒、西尼羅病毒、登革熱病毒和黃熱病毒的活性。
aWNV-西尼羅病毒，DV-登革熱病毒，YFV-黃熱病毒疫苗b50％有效濃度c50％細胞毒濃度d選擇指數(shù)(IC50÷EC50)Infergen是最具活性的，其平均EC50＝0.026ng/mL。IFN-αB/D和IFN-α2b的活性比Infergen低3-5倍。IFN-γ是干擾素中活性最低的，其EC50＝2.8ng/μL。核苷類似物6-氮尿苷(表3)具有與IFN-γ一樣的活性級別。三氮唑核苷的活性最低。在Vero細胞中，相同的活性模式與其它黃病毒、登革熱病毒和黃熱病毒類似(表3)，即相比IFN-αB/D，Infergen對這些病毒更有活性。已知這些干擾素在細胞培養(yǎng)物中是有活性的，用Infergen和IFN-αB/D進行動物研究。動物中的劑量和治療方案是基于以前發(fā)表的在倉鼠中對Infergen的研究(Fish等，(1996)Antimicrob AgentsChemoher。30(1)52-6)；在小鼠中對IFN-αB/D的研究(Gangemi等，(1989)JInterferon Res.9(3)275-83；和Gangemi等，(1989)J Interferon Res.9(2)277-37)；在小鼠中對Ampligen的研究(Leyssen等，(2003)Antimicrob AgentsChemother.47(2)777-82；和Sidwell等(1994)Antiviral Res.25(2)105-22)；以及咪喹莫特的藥品說明書。
在皮下注射病毒1天前開始腹膜內(nèi)給予IFN-αB/D(6.5×107U/kg)和Ampligen(13mg/kg)可防止小鼠100％死亡(P≤0.01)，而用鹽水治療的感染的對照小鼠的死亡率分別為20％和10％。已知當局部給予時可誘導IFN-α、IFN-β和其它細胞因子的生物反應調(diào)節(jié)物咪喹莫特可有效防止70％受感染的小鼠死亡(P≤0.01)(表4)表4.皮下注射西尼羅病毒前1天給予干擾素-αB/D和干擾素誘導物對4-5周齡的雌性BALB/c小鼠存活率的影響
a直至病毒感染后11天b治療從-1dpi(注射病毒后天數(shù))開始，qd(每日一次)，eod(隔天)c與用鹽水ip，-1dpi，eod治療的感染的鹽水對照動物的統(tǒng)計學比較**與相應的感染對照相比，P≤0.01在注射病毒3天后收集的用IFN-αB/D或Ampligen治療的小鼠的血漿病毒滴度，將病毒滴度降低至低于檢出限(P≤0.001)與藥物功效相關。而鹽水安慰劑樣品則為5log WNV滴度。
在一個也采用BALB/c小鼠的獨立實驗中，-4至-6hpi(注射病毒后小時數(shù))腹膜內(nèi)給予的IFN-αB/D或Ampligen沒有統(tǒng)計學上提高存活率(表5)，盡管用Ampligen(15和4.8mg/kg)和較低兩個劑量的IFN-αB/D(1.5×106U/kg)治療的小鼠的存活率都略有提高。但在-4至-6hpi中，將治療延遲-1dpi大大減少了IFN-αB/D和Ampligen的功效。
表5.皮下注射西尼羅病毒4-6小時前給予干擾素-αB/D和Ampligen對4～5周齡的雌性BALB/c小鼠存活率的影響
a直至病毒感染后13天b治療從hpi(注射病毒后小時數(shù))開始，qd(每日一次)，eod(隔天)感染的治療動物與感染的對照動物無統(tǒng)計學差異與鹽水安慰劑對照相比，-4至-6hpi給予的Infergen、Ampligen和咪喹莫特可提高4-5周齡倉鼠的存活率，然而，只有咪喹莫特組的存活率(66％)與鹽水對照的存活率(11％)是有統(tǒng)計差異的(P≤0.05)(表6)。
表6.皮下注射西尼羅病毒4-6小時前給予Infergen，Ampligen and咪喹莫特對4-5周齡的雌性倉鼠存活率和重量變化的影響
a治療從hpi(注射病毒后小時數(shù))開始，qd(每日一次)，sc(皮下)，ip(腹膜內(nèi))，eod(隔天)b直至病毒感染后13天c通過比較-2和7dpi時倉鼠的個體重量進行統(tǒng)計分析。未跟蹤每個個體的重量，因此無法確定每個個體的平均重量變化*采用x方分析，與鹽水感染的對照相比P≤0.05
當受病毒感染時，倉鼠的體重降低很大，這是檢測藥物功效的一個有用參數(shù)。與鹽水對照組相比，所有治療都改善了重量變化(表6)。用Ampligen和咪喹莫特治療的動物的重量變化與對照相比是統(tǒng)計學上有差異的。倉鼠的重量變化是除存活率之外證實這些治療抗WNV效果的另一個參數(shù)。
為確定注射病毒之后給予的IFN-α對發(fā)病率和死亡率的影響，在注射WNV2天后給予7-8周齡的倉鼠Infergen。使用年齡較大的倉鼠是因為與較年輕的小鼠或倉鼠相比他們具有更顯著的疾病體征。Xiao等，(2001)Emerg Infect Dis.7(4)714-21。在該研究中評價了聯(lián)合使用三氮唑核苷。Infergen和三氮唑核苷(在注射病毒2天后同時皮下給予)的聯(lián)合治療未協(xié)同性地提高存活率、攀登斜坡的能力或重量變化(表7)。
表7.皮下注射西尼羅病毒+2天后皮下給予Infergen和三氮唑核苷對大于7周齡的雌性敘利亞金倉鼠的存活率和疾病體征的影響的聯(lián)合研究
a將Infergen和三氮唑核苷混合在一起單次皮下注射，qd×7天，從注射病毒后+2天開始b直至12dpic注射病毒后7天和3天之間的重量(g)變化d15秒內(nèi)在42°斜坡上通過的英寸數(shù)與感染的安慰劑對照值相比，*P≤0.05，**P≤0.01，***P≤0.001
然而，在沒有三氮唑核苷時，將Infergen的治療劑量增加至5μg/kg具有改善所有測定參數(shù)的劑量-反應趨勢。用最高劑量(5μg/kg)Infergen治療的倉鼠有90％存活，而那些用安慰劑治療的倉鼠的存活率僅為59％，但這種差異不是統(tǒng)計顯著的。當從2dpi開始治療時，為證實Infergen的明顯活性，以及為證實三氮唑核苷在受感染動物中明顯的有害作用，進行了第二次試驗。與試驗1相比，在試驗2中觀察到了Infergen治療的動物接近90％的相同存活率以及安慰劑治療的動物50％的存活率，這證實了Infergen治療的功效。
用低劑量三氮唑核苷(7.5mg/kg)和5μg/kg Infergen治療的動物的重量損失較對照動物少(P≤0.001)(表7)。不使三用氮唑核苷，用5或0.5μg/kg Infergen治療的動物能比對照動物明顯地更好爬上42°的斜坡(P≤0.01)?？傊?，Infergen治療改善了死亡率和發(fā)病率。然而，所有用最高劑量三氮唑核苷(75mg/kg)治療的組都有明顯高于所有其它組的死亡率。當用最高劑量的三氮唑核苷治療感染W(wǎng)NV的動物時，存活率低得多。試驗2證實了這一結果(表7)。死亡率增加不是由于三氮唑核苷在未感染動物中的毒性，這是因為與未感染且未經(jīng)治療的對照相比，未感染但經(jīng)過治療的動物也有同樣的存活率、重量增加和攀登能力。
在試驗2中，測定了血漿、腦、腎和脾內(nèi)的WNV滴度以確定這些參數(shù)是否與Infergen的療效有關。在3dpi獲自Infergen治療的倉鼠的血漿WNV滴度(＜3.9log10細胞培養(yǎng)物感染單位/mL)低于用鹽水治療的動物的滴度(6.2log10細胞培養(yǎng)物感染單位/mL)(表8)。
表8.皮下注射西尼羅病毒+2天后皮下給予Infergen和三氮唑核苷對大于7周齡的雌性敘利亞金倉鼠的病毒滴度的影響個體WNV滴度-log10細胞培養(yǎng)物感染單位/血漿的毫升數(shù)或組織的克數(shù)(平均值)
a將Infergen和三氮唑核苷混合在一起單次注射，qd×7天，從注射病毒后+2天開始b在3dpi和治療開始后1天采集的血漿c在7dpi采集的組織d斜體表示滴度低于檢出限。由加入細胞單層的血漿或勻漿組織的毒性得到的細胞培養(yǎng)物的滴度是有限的的在Infergen治療的動物中觀察到在7dpi獲得的WNV陽性組織的滴度和數(shù)目略微降低的趨勢，盡管差異不是統(tǒng)計學上顯著的。血漿和組織WNV滴度似乎與Infergen治療有關。
實施例3IFN alfacon 1(IFN-alfacon 1)和IFNγ1b(IFN-γ1b)的組合活性材料和方法干擾素得到的干擾素alfacon-1或IFN alfacon 1，IFN alfacon 1(Intermune，Brisbane，CA)是一種無菌、澄清、無色、不含防腐劑的液體，其藥物濃度為30μg/mL(填裝體積為0.5mL)。得到的干擾素γ-1b或IFNγ1b(Intermune，Brisbane，CA)是一種無菌。澄清、無色溶液，其藥物濃度為200μg/mL(填裝體積為0.5mL)。
細胞毒性和穩(wěn)定性研究為建立劑量連續(xù)稀釋液，我們分別采用基于100μg和15μg劑量的IFN-γ1b和IFN-alfacon 1的Cmax濃度。這些Cmax濃度是在人類一期臨床研究中確定的。在設計用來測試兩種IFN的組合的試驗中使用這些數(shù)據(jù)以進行細胞毒性研究，對IFNalfacon 1和IFNγ1b都采用100倍Cmax濃度的劑量。用Celltiter 96Aqueous單溶液細胞增殖測定法來確定細胞毒性測定中活細胞的數(shù)目(Promega，Madison，Wisconsin)。按照制造商的說明，在96孔板內(nèi)的A549細胞中加入各種濃度的IFNalfacon 1和IFNγ1b以及它們的組合，然后加入MTS。將細胞處理24小時。
細胞培養(yǎng)方法將大約4×104個A549細胞接種到96孔板，并維持在補充有10％胎牛血清(GibcoBRL)、青霉素G(100U/ml)和鏈霉素(100ug/ml)的培養(yǎng)基，在37℃、5％CO2下培養(yǎng)。
病毒原液的制備該研究所用的水泡性口炎印第安納病毒是Indiana大學的微生物學教授MiltonTaylor博士惠贈的。病毒原液是通過以下方法獲得的將VERO細胞單層培養(yǎng)在75cm2組織培養(yǎng)燒瓶中，以1∶500的比例將病毒稀釋在1ml DMEM/10％FBS中。產(chǎn)生細胞病變效應(CPE)后，通過小心的移液收獲細胞和上清液。離心除去細胞碎片，將病毒上清液等分并保存在-80℃。
病毒滴定用VERO細胞作為宿主，通過嗜菌斑測定法滴定病毒產(chǎn)物。將VERO細胞接種到在含有10％FBS的DMEM中的6孔(6×105細胞/孔)平板上，在37℃放置24小時。除去培養(yǎng)基并將病毒上清液的連續(xù)稀釋液加入含有5％FBS的DMEM中，1小時后在37℃培育。吸收步驟結束時加入含有5％FBS和1％低熔點瓊脂糖(3ml/孔，用于6孔平板)的DMEM，并將該平板在37℃培育30-48小時。當病毒形成肉眼可見的嗜菌斑時，除去瓊脂糖塞子并用含有1％結晶紫溶液的20％乙醇簡單將平板染色。以PFU/毫升來確定病毒濃度。
活細胞感染和抑制測定接種后1天，用PBS洗滌細胞一次，并用含有各種劑量濃度的IFN alfacon 1(從40pg/ml 1∶2連續(xù)稀釋至0.3125pg/ml)和IFNγ1b(從4800pg/ml 1∶2連續(xù)稀釋至18.75pg/ml)的培養(yǎng)基代替原來的培養(yǎng)基，進行單劑量研究。為進行聯(lián)合研究，以1∶120和1∶60的比例加入IFN alfacon 1和IFNγ1b。培養(yǎng)24小時后，細胞用PBS洗滌三次，并在各個平板中加入VSV，M.0.1.＝0.1。每種治療方案重復四次。
RT-PCR的寡核苷酸設計引物和探針設計用Primer Express寡核苷酸設計軟件(Appiied Biosystems，F(xiàn)oster City，加利福尼亞)來識別與VSV序列相當?shù)囊?探針對。采用這些引物和探針可知，VSV印第安那血清型(J02428)擴增子位于核苷酸1764和1810之間，具有以下引物/探針組正向引物5’CGG CCA AGG ATT GAA GTC A(SEQ ID NO01)，反向引物ATA ACC TAA GAACTG GCC CAT AAC TC(SEQ ID NO02)，探針6FAM-ATT GAT TAC GAA AAA TGG AAT AACCAC CAA AGG A-MGBNFQ(SEQ ID NO03)。(MGBNFQ分子溝結合非熒光染料猝滅劑)。
RNA提取和標準病毒RNAVSV病毒RNA收獲自不同濃度感染的細胞，并用QIAamp Viral RNA Kit(Qiagen公司，Valencia，加利福尼亞)按照制造商的說明來提取總的RNA。病毒滴度表示為嗜菌斑形成單位(PFU)/ml，該值等于每毫升的拷貝數(shù)。用受感染的Hela細胞的VSVRNA樣品的連續(xù)稀釋液作為標準。通過嗜菌斑測定已經(jīng)預先將這些樣品的病毒滴度確定在6和6×106pfu/ml(10)之間。
實時定量RT-PCR采用實時PCR，用等分的5μL VSV病毒RNA來定量。采用TaqMan Gold RT-PCR試劑盒(Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，加利福尼亞)進行單試管反應。對RNA標準物和樣品進行重復三次的反應，每次反應有50μl體積和5μl病毒RNA。RT步驟為48℃30分鐘，然后95℃10分鐘，再然后95℃15秒、60℃1分鐘循環(huán)40次。
協(xié)同作用的分析對數(shù)據(jù)進行分析，假設藥物是相互不排斥的，即兩種藥物有不同的或非依賴型的作用機制。通過測量與它們各自的對照相比的病毒拷貝數(shù)來計算病毒復制抑制百分比用于每種組合和單一療法組合。試驗至少重復三次以驗證結果。采用Chau-Talalay法(11)，用CalcuSyn(Biosoft，英國劍橋)軟件來確定組合指數(shù)(Combination Indice，CI)，以分析抗病毒劑的協(xié)同作用、累加作用或拮抗作用。CI值＜0.1表示有非常強的協(xié)同作用，CI值在0.1-0.3之間表示有強協(xié)同作用，CI值在0.3-0.7之間表示有協(xié)同活性。CI＝1的藥物組合有累加作用，而CI值＞1表示有拮抗作用。CI值的大小直接與組合中相互作用的量成比例。為更完整地分析所有作用表面，還用保守的等效線圖解法分析了數(shù)據(jù)以將協(xié)同作用或拮抗作用的程度量化。具體地說，選擇一種具體的作用水平(包括最大值的50％、75％和90％)，并將得到這種作用的IFN alfacon1和IFNγ1b的劑量(單獨進行)作為軸點在笛卡兒圖上標出。連接IFN alfacon 1和IFNγ1b的向上凸起的曲線(保守的)是簡單相加的組合中能產(chǎn)生這種作用的區(qū)域。如果組合數(shù)據(jù)點落在曲線上，表示有累加作用；如果點落在左下方，表示有協(xié)同作用；如果點落在右上方，表示有拮抗作用。
結果對VSV的研究在VSV/A549系統(tǒng)中，用IFN-alfacon 1和IFN-γ1b單一療法的劑量反應示于圖2中。
由圖2可見，IFN-alfacon 1和IFN-γ都能對VSV感染的A549細胞產(chǎn)生劑量反應，IFN alfacon 1的50％有效濃度(EC-50)約為5pg/mL，IFN-γ1b的EC-50約為300pg/mL。為證實IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的表觀抗病毒效應不是由于這些細胞因子的直接抗增殖作用，在與抗病毒測定所用相同的濃度下進行細胞增殖測定。重要的是，約90％的最大抑制(1log10降低)是在每種IFN單一療法的最高劑量時獲得的，任何劑量的單一療法在24小時時間點都無法獲得＞90％的降低值。
圖3證實，用于抗病毒測定的各IFN劑量都沒有見到抗增殖作用，表明對VSV的抗病毒應答是由于各IFN對直接抗病毒狀態(tài)的誘導。
為確定IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的組合是否會產(chǎn)生協(xié)同作用、累加作用或拮抗作用，以1∶120和1∶60的比例將這兩種IFN組合，并在VSV/A549抗病毒測定系統(tǒng)中進行評價(圖4a和4b)。
由圖4a和4b可見，IFN-alfacon 1和IFN-γ的聯(lián)合療法可在體外在A549細胞內(nèi)抵抗VSV，結果產(chǎn)生了驚人的劑量反應效應。更具體地說，與單一療法不同，可獲得大于1log10的降低值。例如，當比例為1∶120時可得到2、3和5log10的降低值(見圖4a)。
用Chau-Talalay法在VSV/A549系統(tǒng)中對IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的組合協(xié)同作用的分析證實在一定劑量范圍內(nèi)有非常強的協(xié)同作用(所有觀測的CI小于0.1)。在這種方法中，Chau-Talalay分析計算了組合指數(shù)(CI)值。CI值＜1說明是協(xié)同性組合，而CI值＞1說明有拮抗作用。進一步而言，CI＜0.01說明協(xié)同作用非常強，而CI值＜0.1說明協(xié)同作用強。對VSV/A549測定的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b劑量范圍(圖4a和4b)計算的CI值列在下面的表9中
由表9可見，VSV/A549系統(tǒng)中，比例為1∶120(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)和1∶60(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b的組合使所得CI值都小于1。在這些劑量范圍內(nèi)，所有值都說明有非常強的協(xié)同作用或強協(xié)同作用(表9)。
除Chau-Talalay分析，在評價協(xié)同作用時可采用等效線圖解法繪圖以確定治療劑的組合是否是累加的、協(xié)同的或拮抗的。圖5a和5b是VSV/A549抗病毒活性模型中EC-50、EC-75和EC 90濃度的IFN-alfacon 1和IFN-γ1b組合的等效線圖解繪圖。EC值落在每種IFN劑量濃度線之下(左下)被認為是協(xié)同濃度，落在線上表示是累加的，落在線之上則的拮抗的。由圖5a和5b可見，在比例為1∶120(IFN-alfacon1IFN-γ1b)和1∶60(IFN-alfacon 1IFN-γ1b)時，所有的EC值都落在單一療法劑量反應曲線之下，表明通過等線條圖解法分析，這兩種藥物有強協(xié)同作用。
雖然本發(fā)明參照其特定的實施方案進行了描述，本領域技術人員應當理解，在不背離本發(fā)明的真實精神和范圍的情況下可進行各種改變和替代等價物。此外，可進行許多修改以使具體的情況、材料、組成、方法、加工步驟或步驟適應本發(fā)明的目的、精神和范圍。所有這種修改都在本發(fā)明權利要求的范圍內(nèi)。
序列表<110>L.M.布拉特(Blatt，Lawrence M.)H.H.蘇(HSU，HENRY H.)<120>治療病毒性疾病和肝纖維化的干擾素藥物治療<130>INTM-021W02<140>未指定<141>2003-12-23<150>US03/32539<151>2003-10-14<150>US03/06687<151>2003-02-28<160>3<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>1cggccaagga ttgaagtca 19<210>2<211>26<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物<400>2ataacctaag aactggccca taactc 26<210>3<211>34<212>DNA<213>人工序列
<220>
<223>探針<400>3attgattacg aaaaatggaa taaccaccaa agga 3權利要求
1.一種在個體中減少肝纖維化的方法，其特征在于，所述方法包括給予減少肝纖維化的有效量的IFN-α和IFN-γ。
2.一種在個體中治療丙肝病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予實現(xiàn)持續(xù)病毒應答有效量的IFN-α和IFN-γ。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，肝纖維化的程度通過分階段測定，如通過標準化的評分系統(tǒng)所測定的，肝纖維化的階段減少至少一個單位。
4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是同時給予的。
5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ的給藥間隔在24小時之內(nèi)。
6.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以多劑量給予的。
7.一種增強肝纖維化個體肝功能的方法，其特征在于，所述方法包括給予增強肝功能有效量的IFN-α和IFN-γ。
8.如權利要求7所述的方法，其中，所述肝功能可通過測定選自血清轉氨酶水平、凝血酶原時間、血清膽紅素水平、血小板數(shù)、病毒負荷和血清白蛋白水平的參數(shù)來顯示。
9.如權利要求7所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以連續(xù)劑量給予的。
10.一種降低肝硬化并發(fā)癥的發(fā)病率的方法，其特征在于，所述方法包括給予肝纖維化個體降低肝硬化并發(fā)癥的發(fā)病率有效量的IFN-α和IFN-γ的組合。
11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以多劑量給予的。
12.一種在個體內(nèi)治療丙肝病毒(HCV)的方法，其特征在于，所述方法包括給予治療有效量的IFN-α和IFN-γ。
13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述丙氨酸轉氨酶的水平被降低至每毫升血清低于約45國際單位。
14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述個體的病毒負荷被降低至每毫升血清低于約500個HCV基因組拷貝。
15.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是同時給予的。
16.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是獨立給予的。
17.如權利要求12所述的方法，其特征在于，IFN-γ以每劑約25μg-300μg的量皮下給予，IFN-α以約3μg-27μg的量皮下給予，且其中所述IFN-α和IFN-γ是以連續(xù)劑量給予的。
18.一種降低丙肝病毒個體病毒負荷的方法，其特征在于，所述方法包括給予降低病毒負荷有效量的IFN-α和IFN-γ。
19.一種在個體內(nèi)治療丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(a)鑒別被基因型1丙肝病毒(HCV)感染，且最初的病毒負荷大于2百萬個HCV基因組拷貝/毫升血清的個體，和(b)給予個體有效量的IFN-α和IFN-γ，為期約48周。
20.如權利要求19所述的方法，其特征在于，所述步驟(a)中對個體的鑒別還要求個體無肝纖維化或處于早期肝纖維化，如Knodell評分0、1或2所測定。
21.一種在個體內(nèi)治療丙肝病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟(a)鑒別被基因型1丙肝病毒(HCV)感染，且最初的病毒負荷小于或等于2百萬個HCV基因組拷貝/毫升血清的個體，和(b)給予個體有效量的IFN-α和IFN-γ，為期約24-48周。
22.一種在個體內(nèi)治療丙肝病毒的方法，包括以下步驟(a)鑒別被基因型2或3的丙肝病毒(HCV)感染的個體；和(b)給予個體有效量的IFN-α和IFN-γ，為期約24-48周。
23.如權利要求12-22中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干擾素。
24.如權利要求12-23中任一項所述的方法，還包括在IFN-α和IFN-γ治療期間共施用給個體有效量的三氮唑核苷。
25.如權利要求12-24中任一項所述的方法，個體接受了協(xié)同量的IFN-α和IFN-γ。
26.如權利要求12-25中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
27.如權利要求12-26中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是通過泵控連續(xù)輸注皮下給予的。
28.一種在個體內(nèi)治療α病毒感染的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效量的IFN-α和IFN-γ。
29.如權利要求28所述的方法，其特征在于，所述個體接受了協(xié)同量的IFN-α和IFN-γ。
30.如權利要求28或29所述的方法，還包括在IFN-α和IFN-γ治療期間共施用給個體有效量的三氮唑核苷。
31.如權利要求28-30中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干擾素。
32.如權利要求28-31中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
33.一種治療感染西尼羅病毒的個體的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效量的共有干擾素(CIFN)。
34.一種治療感染西尼羅病毒的個體的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效量的IFN-γ。
35.一種治療感染西尼羅病毒的個體的方法，其特征在于，所述方法包括給予個體有效量的IFN-α和IFN-γ。
36.如權利要求35所述的方法，其特征在于，所述個體接受了協(xié)同量的IFN-α和IFN-γ。
37.如權利要求35或36所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干擾素。
38.如權利要求35-37中任一項所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
39.如權利要求33-38中任一項所述的方法，還包括在IFN-α或IFN-γ治療期間共施用給個體有效量的三氮唑核苷。
40.如權利要求1-11中任一項所述的方法，其特征在于，所述個體接受協(xié)同量的IFN-α和IFN-γ。
41.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是共有干擾素。
42.如權利要求40或41所述的方法，其特征在于，所述IFN-α是PEG化的IFN-α。
43.如權利要求1和40-42中任一項所述的方法，還包括在IFN-α和IFN-γ治療期間共施用給個體有效量的吡非尼酮或特定的吡非尼酮類似物。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療α病毒感染的方法；治療丙肝病毒(HCV)感染的方法；治療西尼羅病毒感染的方法；治療登革熱病毒感染的方法；治療黃熱病毒感染的方法；減少肝纖維化的方法；在患有肝纖維化的個體中增加肝功能的方法；降低與HCV和肝硬化有關的并發(fā)癥的發(fā)病率的方法；以及在受病毒感染的患者中降低病毒負荷、或減少病毒清除的時間、或降低臨床發(fā)病率或死亡率的方法。這些方法通常包括給予治療有效量的I型或III型干擾素受體激動劑和IFN－γ來治療病毒感染或肝纖維化。
文檔編號A61K38/21GK1764475SQ200380110241
公開日2006年4月26日 申請日期2003年12月23日 優(yōu)先權日2003年2月28日
發(fā)明者L·M·布拉特, H·H·蘇 申請人:印特繆恩股份有限公司