專利名稱：一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及從植物中提取二氫槲皮素，具體涉及從落葉松中提取二氫槲皮素。
背景技術：
二氫槲皮素(Dihydroquercetin；2-(3，4-dihydroxyphenyl)-2，3-dihydro-3，5，7-trihydroxy-4H-benzopyran-4-one)，化學分子式C15H12O7，結(jié)構式如下 二氫槲皮素是生物類黃酮之一，是一種強效抗氧化劑，可在工業(yè)上用于發(fā)動機原料和噴氣原料的抗震劑及其穩(wěn)定劑，也可廣泛用作食品的防腐劑，還可在醫(yī)藥上用于提高紅細胞的活性，以延緩肌體的衰老。俄羅斯2003年藥典中介紹了二氫槲皮素對人的循環(huán)系統(tǒng)疾病、缺血性心臟病、缺血性動脈硬化、肝活動障礙、眼科病、糖尿病以及預防和治療腫瘤中都有很好的療效。
2004年，金建忠等人公開了一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法(參見“落葉松中二氫槲皮素的提取及鑒定”，金建忠等，《浙江林業(yè)科技》，Vol.24，No.5，Sep.2004)該方法的基本步驟為1.在80℃下用水對落葉松進行兩次提取，合并提取液；2.用沉淀劑將二氫槲皮素提取出來；3.加鹽酸溶解，用乙酸乙酯萃取，濃縮；4.用熱水溶解，冷卻結(jié)晶。此方法盡管所得產(chǎn)品中二氫槲皮素的純度可大97％，但由于其沉淀劑使用量太大(為產(chǎn)品量的1000倍)，因此嚴重影響了產(chǎn)品的產(chǎn)率，僅能得到0.29％的產(chǎn)率；此外，工藝流程中關鍵的技術內(nèi)容，即所使用的沉淀劑沒有公開。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提高從落葉松中提取二氫槲皮素的提取率。
本發(fā)明解決上述問題的技術解決方案是一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，包括以下步驟(1)取地面以上0.0m～1.5m的興安落葉松樹段，破碎成碎屑；(2)70～90℃下，用6～10倍的水或者上個工藝流程的二次提取液連續(xù)提取兩次，每次0.5～1.5小時，依次得到一次提取液I和二次提取液II；(3)40～50℃下，按10∶1～2體積比加甲基叔丁基醚萃取提取液I或者提取液I和提取液II的混合液，去水相，得萃取液；(4)所得萃取液按0.5～1.0kg/100L的配比加入吸附劑，室溫下吸附脫色，過濾；(5)脫色過濾后的萃取液濾液在初始溫度為35℃，最終溫度為85℃條件范圍，0.015MPa的真空下脫出溶劑，濃縮至膏狀；(6)所得膏狀物按10～30L/g的比例加入水，在70～90℃下溶解，再冷卻至3～8℃結(jié)晶，過濾，室溫干燥得二氫槲皮素粗制品。
本發(fā)明上述技術方案所得的粗制品用10～20倍水70～90℃下溶解，冷卻至3～8℃重結(jié)晶，然后過濾，干燥得二氫槲皮素精制品。
本發(fā)明所述的方法，步驟(3)所述的提取液I或者提取液I和提取液II的混合液與甲基叔丁基醚的體積比較好為10∶1.4～2。
本發(fā)明所述的方法，步驟(4)所述的吸附劑為活性碳或白土，較好為活性碳。所述的吸附劑的用量較好為0.7～1.0kg/100L。
本發(fā)明所述的將落葉松碎屑是按常規(guī)方式破碎得到，也可是落葉松鋸末或者刨花。
本發(fā)明所述的落葉松產(chǎn)地可以是大興安嶺、小興安嶺，以大興安嶺的興安落葉松為佳。所述的落葉松樹齡在40年以上，取地面以上0.0m～1.5m樹段，距伐樹的時間也以不超過2年為佳。
本發(fā)明所述的上個工藝流程產(chǎn)生的二次提取液是指在上一個工藝流程步驟(2)中所得的提取液II。這樣做的第一個優(yōu)點的節(jié)約水，第二個優(yōu)點是反復提取提高原料的提盡度。
本發(fā)明所述的二氫槲皮素粗制品可以作為食品“功能性添加劑”，所述的二氫槲皮素精制品可以作為“具有保健功能的藥物原料”。
本發(fā)明所述方法較現(xiàn)有技術具有下列突出的優(yōu)點和顯著的技術效果1、產(chǎn)品穩(wěn)定性好、純度高，粗制品純度可達95％～96％，精制品純度可達99％；2、由于本發(fā)明選取興安落葉松地面以上0.0m～1.5m的樹段為原料，并采用了液—液低溫萃取技術，將水中溶解的二氫槲皮素最大限度地萃取到甲基叔丁基醚中，從而使產(chǎn)品的收率高達1.69％～2.0％；3、萃取劑甲基叔丁基醚，不僅其價格相對便宜，無毒，難溶于水，而且沸點低(僅為52℃)，使生產(chǎn)過程是在低溫下進行，所得到的二氫槲皮素具有天然的結(jié)構；4、萃取劑甲基叔丁基醚，相對于現(xiàn)有技術所用的乙酸乙酯、丙酮等溶劑閃點高，所以安全性好。


圖1為俄羅斯購買的標準樣品的高效液相色譜圖譜；
圖2為下述實施例1所得二氫槲皮素粗制品的高效液相色譜圖譜。
具體實施例方式
以下通過具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述，使本領域技術人員更全面理解本發(fā)明，但并不對本發(fā)明做任何形式的限制。
實施例1取地面以上0.0m～1.5m樹段落的小興安嶺落葉松鋸末1kg置于容積為40L的不銹鋼容器中，加入水10L(10倍水)，在85℃下浸泡40分鐘，離心分離得含有0.21％二氫槲皮素一次提取液(提取液I)8.4L，提取液I中；再往殘渣中加進入8.5L水，在87℃下浸泡30分鐘后，離心分離得含有0.045％二氫槲皮素的二次提取液(提取液II)9.0L，作為下一次新的落葉松碎屑的浸泡液。在45℃下，往一次提取液中加入甲基叔丁基醚1.2L，攪拌30分鐘，靜止30分鐘，分離得有機相甲基叔丁基醚萃取液1.13L。然后向有機相中加入10g活性炭并攪拌脫色30分鐘，過濾后置入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在真空狀態(tài)下(0.015MPa)初始溫度為40℃，最終溫度為80℃的條件下脫出溶劑，得膏狀物45.5g。最后再加入1000mL 85℃水，攪拌15分鐘，降溫至5℃，待淺黃色的二氫槲皮素結(jié)晶析出，過濾得濾餅在室溫下進行干燥得到淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品17.8g。
將所得的淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品先用FTIR-8300型傅利葉紅外光譜儀(日本)進行檢測，得到IR(KBr)cm-13430，1639，1613，1514，1475，972，778；再用上海產(chǎn)的WRS-1型熔點測定儀測定產(chǎn)品熔點是228℃。所得到的這兩組數(shù)據(jù)與文獻“落葉松中二氫槲皮素的提取及鑒定”(金建忠等，《浙江林業(yè)科技》，Vol.24，No.5，Sep.2004)中二氫槲皮素數(shù)據(jù)一致，故確定為二氫槲皮素。
又將所得到的二氫槲皮素粗制品以俄羅斯布市的“擬維他命生物制品有限公司”標準樣品為標樣(含量為95％)，采用C8柱液相色譜，室溫條件下，以甲醇∶水＝85∶15為流動相，檢測波長254nm進行對比檢測，得到俄羅斯購買的標準樣品的高效液相色譜圖譜如圖1所示，得到本實施例所得二氫槲皮素粗制品的高效液相色譜圖譜如圖2所示。圖1在保留時間為3.744min處有吸收峰，其相對峰面積為93.89％，圖2在保留時間為3.745min處有吸收峰，其相對峰面積為94.35％，故標定本實施例所得二氫槲皮素粗制品純度為95％。再進一步以投入原料落葉松鋸末重量計算出二氫槲皮素產(chǎn)率為1.69％。
實施例2取地面以上0.0m～1.5m樹段落的大興安嶺落葉松樹段破碎成平均粒徑為尺寸為3×3×3mm的碎屑，取1kg碎屑置于容積為40L的不銹鋼容器中，加入實施例1中的二次提取液9.0L，在82℃下浸泡30分鐘，分離得一次提取液7.8L；濾渣中加入9.0L水進行二次提取，過濾得9.0L二次提取液，作為下一次新的落葉松碎屑的浸泡液。
42℃下往上述一次提取液中加入甲基叔丁基醚1.5L，攪拌20分鐘，靜置20分鐘，分離得有機相甲基叔丁基醚萃取液1.41L。向有機相中加入10g活性炭并攪拌脫色30分鐘，過濾后的有機相濾液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在真空狀態(tài)下(0.015MPa)初始溫度為40℃，最終溫度為85℃的條件下脫出溶劑，得膏狀物63.7g；加入800mL 85℃水，攪拌15分鐘后，降溫至3℃，待淺黃色二氫槲皮素結(jié)晶析出，過濾得濾餅在室溫下進行干燥，得到淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品21.2g。所得到的二氫槲皮素粗制品采用實施例1所述方法測得其純度為96％，產(chǎn)率為2.04％，產(chǎn)品熔點為227℃。
將上述二氫槲皮素粗制品加入到300mL85℃的水中，攪拌15分鐘，降溫至3℃，過濾干燥后得二氫槲皮素精制品20.1g，采用實施例1所述方法測得純度為99％，產(chǎn)品熔點是225℃，產(chǎn)率為2.0％。
實施例3取地面以上0.0m～1.5m樹段落的大興安嶺落葉松刨花1kg，加入實施例2中的二次提取液6.0L，在90℃下浸泡60分鐘，離心分離得一次提取液5.3L；濾渣中加入6.0L水進行二次提取，得5.9L二次提取液，所得的二次提取液作為下一次新的落葉松碎屑的浸泡液。
向40℃的一次提取液中加入甲基叔丁基醚0.6L，攪拌15分鐘，靜置20分鐘，分離得甲基叔丁基醚醚萃取液0.56L；加入30g活性炭攪拌脫色30分鐘，過濾。
將濾液在真空狀態(tài)下(0.015MPa)，初始溫度為50℃，最終溫度為70℃的條件下脫出溶劑，得膏狀物58.5g，往膏狀物中加入1.5L 70℃的水，攪拌10分鐘，降溫至8℃，過濾得的濾餅在室溫下進行干燥，得淺黃色粉末狀二氫槲皮素22.1g。所得到的二氫槲皮素粗制品采用實施例1所述方法測得其純度為95％，產(chǎn)率為2.1％，產(chǎn)品熔點是228℃。
將上述二氫槲皮素粗制品加入到225mL 70℃的水中，攪拌10分鐘，降溫至8℃，過濾干燥后得二氫槲皮素精制品21.3g，采用實施例1所述方法測得純度為99％，產(chǎn)品熔點是225℃，產(chǎn)率為2.11％。
實施例4取地面以上0.0m～1.5m樹段落的大興安嶺落葉松鋸末1kg，加入實施例3中的二次提取液7.0L，在70℃下浸泡100分鐘，離心分離得一次提取液6.3L；向濾渣中加入7.0L水進行二次提取，得7.1L二次提取液，所得的二次提取液作為下一次新的落葉松碎屑的浸泡液。
在43℃下向一次提取液中加入甲基叔丁基醚0.9L，攪拌，靜置分層，分離得有機相甲基叔丁基醚醚萃取液0.83L；向上述有機相中加入31g活性炭，攪拌脫色30分鐘，過濾；濾液在真空狀態(tài)下(0.015MPa)，初始溫度為40℃，最終溫度為80℃的條件脫出溶劑，得膏狀物60.5g。向膏狀物中加入0.9L 80℃水中，攪拌10分鐘，降溫至6℃，過濾得濾餅，室溫下對濾餅進行干燥，得淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品22.4g，采用實施例1所述方法測得純度為95.5％，產(chǎn)品熔點是227℃，產(chǎn)率為2.14％。
將上述二氫槲皮素粗制品加入到0.4L 80℃的水中，攪拌10分鐘，降溫至6℃，過濾干燥后得二氫槲皮素精制品21.0g，采用實施例1所述方法測得純度為99％，產(chǎn)品熔點是225℃。產(chǎn)率為2.08％。
實施例5取地面以上0.0m～1.5m樹段落的大興安嶺落葉松刨花1kg置于容積為40L的不銹鋼容器中，加入實施例4中的二次提取液7.0L，在85℃下浸泡60分鐘，過濾分離得一次提取液6.3L；濾渣中加入10L水進行二次提取，過濾得到的9.7L二次提取液可以作為新鮮落葉松碎屑的浸泡液。
在42℃下往上述一次提取液中加入甲基叔丁基醚1.0L，攪拌30分鐘，靜置30分鐘，分層得甲基叔丁基醚萃取液0.7L。向甲基叔丁基醚萃取液中加入5g活性白土，攪拌脫色35分鐘后過濾，濾液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在真空狀態(tài)下(0.015MPa)，初始溫度為45℃，最終溫度為80℃的條件下脫出溶劑，得膏狀物65.1g；加入0.8L 80℃水，攪拌20分鐘后，降溫至5℃，待淺黃色二氫槲皮素結(jié)晶析出，過濾得到的濾餅在室溫下進行干燥，干燥得到淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品19.8g。所得到的二氫槲皮素粗制品采用實施例1所述方法測得其純度為95％，產(chǎn)率為1.81％，產(chǎn)品熔點為228℃。
實施例6取地面以上0.0m～1.5m樹段落的小興安嶺落葉松鋸末1kg置于容積為40L的不銹鋼容器中，加入10L水，在90℃下浸泡40分鐘，過濾得含有0.20％二氫槲皮素一次提取液(提取液I)8.6L；再往殘渣中加進入10L水，在85℃下浸泡40分鐘后，過濾得含有0.036％二氫槲皮素的二次提取液(提取液II)10L，將上述二次的提取液合并，得含有0.112％二氫槲皮素的混合提取液18.6L。
在45℃下，往上述18.6L提取液中加入甲基叔丁基醚3.5L，攪拌30分鐘，靜止50分鐘，分離得有機相甲基叔丁基醚萃取液2.7L。然后向有機相中加入20g活性炭并攪拌脫色30分鐘，過濾后置入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在真空狀態(tài)下(0.015MPa)初始溫度為40℃，最終溫度為80℃的條件下脫出溶劑，得膏狀物53.7g。最后再加入1.5L 80℃水，攪拌15分鐘，降溫至5℃，待淺黃色的二氫槲皮素結(jié)晶析出，過濾得濾餅在室溫下進行干燥得到淺黃色粉末狀二氫槲皮素粗制品22.3g。所得到的二氫槲皮素粗制品采用實施例1所述方法測得其純度為95.3％，產(chǎn)品熔點為226℃，產(chǎn)品收率為2.13％。
將上述二氫槲皮素粗制品加入到0.44L 80℃的水中，攪拌15分鐘，降溫至5℃，過濾干燥后得二氫槲皮素精制品21.2g，采用實施例1所述方法測得純度為99％，產(chǎn)品熔點是225℃。產(chǎn)率為2.1％。
權利要求
1.一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，包括以下步驟(1)取地面以上0.0m～1.5m的興安落葉松樹段，破碎成碎屑；(2)70～90℃下，用6～10倍的水或者上個工藝流程的二次提取液連續(xù)提取兩次，每次0.5～1.5小時，依次得到一次提取液I和二次提取液II；(3)40～50℃下，按10∶1～2體積比加甲基叔丁基醚萃取提取液I或者提取液I和提取液II的混合液，去水相，得萃取液；(4)所得萃取液按0.5～1.0kg/100L的配比加入吸附劑，室溫下吸附脫色，過濾；(5)脫色過濾后的萃取液濾液在初始溫度為35℃，最終溫度為85℃條件范圍，0.015MPa的真空下脫出溶劑，濃縮至膏狀；(6)所得膏狀物按10～30L/g的比例加入水，在70～90℃下溶解，再冷卻至3～8℃結(jié)晶，過濾，室溫干燥得二氫槲皮素粗制品。
2.依據(jù)權利要求1所述的一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，其特征是所得的粗制品再用10～20倍水70～90℃下溶解，冷卻至3～8℃重結(jié)晶，然后過濾，干燥得二氫槲皮素精制品。
3.依據(jù)權利要求1所述的方法，其特征是，步驟(3)所述的提取液I或者提取液I和提取液II的混合液與甲基叔丁基醚的體積比為10∶1.4～2。
4.依據(jù)權利要求1所述的一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，其特征是步驟(4)所述的吸附劑為活性碳或白土。
5.依據(jù)權利要求4所述的一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，其特征是所述的吸附劑為活性碳。
6.依據(jù)權利要求1、4或5所述的一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，其特征是所述的吸附劑的用.量為0.7～1.0kg/100L。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從落葉松中提取二氫槲皮素的方法，該方法以水為提取劑，對含有二氫槲皮素的興安落葉松進行提取，對所得的水性提取液以甲基叔丁基醚為萃取劑進行液液萃取，采活性炭或活性白土對甲基叔丁基醚萃取液進行吸附脫色，對脫色后甲基叔丁基醚萃取液在真空條件下進行溶劑的脫除，脫除溶劑后的膏狀物用水進行結(jié)晶純化制得二氫槲皮素粗制品。根據(jù)需要，本發(fā)明所得到的二氫槲皮素粗制品可以用水進行重結(jié)晶純化，便得到二氫槲皮素精制品。本發(fā)明所述方法的技術效果尤為顯著，不僅產(chǎn)率高達1.69％～2.0％，而且所得二氫槲皮素粗制品純度可達95％～96％，純化后的二氫槲皮素精制品純度可達99％。
文檔編號C07C311/00GK1844095SQ200610035280
公開日2006年10月11日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權日2006年4月29日
發(fā)明者王正平, 劉瑩 申請人:廣州大學