專利名稱：中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白B.b.PGRP及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白(B.b.pgrp)基因及其編碼的蛋白B.b.PGRP，，以及該蛋白在制備治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用。。
背景技術(shù)：
中國(guó)文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtauense)作為在物種進(jìn)化地位上處于轉(zhuǎn)折地位的原始脊索動(dòng)物-頭索動(dòng)物，一直以來(lái)是研究脊椎動(dòng)物發(fā)育的好材料。近年來(lái)，對(duì)文昌魚的免疫的研究引起了廣泛的重視，在其中發(fā)現(xiàn)了不少具有重要意義的免疫基因。
肽聚糖(peptidoglycan PGN)是幾乎所有細(xì)菌的細(xì)胞壁的主要成分之一，尤其富含于革蘭氏陽(yáng)性菌中，肽聚糖識(shí)別蛋白(peptidoglycan recognition protein PGRP)就是負(fù)責(zé)識(shí)別這種微生物細(xì)胞壁上獨(dú)有的分子從而起著免疫作用。第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)并被命名的肽聚糖識(shí)別蛋白是1996年的Yoshida等人發(fā)現(xiàn)的在蠶中的約19Kda的蛋白。這個(gè)PGRP被發(fā)現(xiàn)是活化昆蟲中獨(dú)有的酚氧化酶原級(jí)聯(lián)反應(yīng)。接著在蛾、果蠅、蚊等昆蟲，以及哺乳動(dòng)物中的小鼠、大鼠、人、牛、豬、駱駝等動(dòng)物中也相繼被發(fā)現(xiàn)并命名。這類蛋白都具有相同的肽聚糖識(shí)別的結(jié)構(gòu)域，通過(guò)系統(tǒng)發(fā)育的同源比較，說(shuō)明這類蛋白在進(jìn)化上是保守的。
Choe KM等人發(fā)現(xiàn)，果蠅胞外蛋白PGRP-SA參與識(shí)別革蘭氏陽(yáng)性菌，并活化Toll通路中的蛋白酶，該酶降解Toll受體spaetzle，從而引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄因子Dorsal和Dif，(這同源于哺乳動(dòng)物的NF-κB)，轉(zhuǎn)錄出一系列抗菌肽，如Drosomysin等，從而起到殺菌作用。果蠅的跨膜蛋白PGRP-LC和PGRP-LE卻參與了另外一條通路，“Imd”通路，它們識(shí)別革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌中的桿菌。這條通路類似哺乳類動(dòng)物中的TNF通路，引起Rel家族中的成員Relish，轉(zhuǎn)錄出Dipterincin等抗菌肽。此外，這個(gè)分子也被推測(cè)參與吞噬革蘭氏陰性菌的作用。除了這些識(shí)別受體作用的PGRP，另一類的PGRP被Steiner H等人發(fā)現(xiàn)具有酰胺酶作用，果蠅的PGRP-SClB，具有從L-乙酰胞壁酸和L-丙氨酸之間切開(kāi)的酶催化活性，被證實(shí)了降低PGN的免疫原型作用，從而在細(xì)胞外起到清道夫的作用。
在哺乳動(dòng)物中，除了S和L外，還有兩種PGRP，就是PGRP-Iα和PGRP-Iβ。小鼠PGRP-S在細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)下抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。最高表達(dá)量在骨髓，而在多型白細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞中的顆粒內(nèi)起殺菌作用。哺乳動(dòng)物的PGRP-L主要在肝臟表達(dá)，被認(rèn)為和果蠅的酶類PGRP一樣，具有酶活性。PGRP-Iα和PGRP-Iβ主要在食管中表達(dá)，被證實(shí)位于TLR2、TLR4，及NOD1(nucleotide-binding oligomerization domain)和NOD2等通路的上游。
通過(guò)序列同源分析，發(fā)現(xiàn)這類蛋白具有類似溶菌酶的性質(zhì)即具有降解肽聚糖的酶活性位點(diǎn)，提示在對(duì)抗外來(lái)病原中起著重要作用，成為潛在的抑菌天然活性蛋白，并且具有成為高效天然的抗菌藥物的開(kāi)發(fā)價(jià)值。在種養(yǎng)殖業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生等各行業(yè)具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的天然抗菌蛋白B.b.PGRP和編碼該蛋白的基因B.b.pgrp。
本發(fā)明的另一目的在于提供該蛋白的生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供該蛋白在制備治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明通過(guò)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和大規(guī)模測(cè)序的方法從中國(guó)文昌魚總RNA中分離得到的中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白基因B.b.pgrp，其DNA序列如序列表中<400>1序列所示。
本發(fā)明所述基因編碼的蛋白B.b.PGRP，其氨基酸序列如序列表中<400>2序列所示；該蛋白等電點(diǎn)為7.60，分子量為27,102道爾頓。
該蛋白可以通過(guò)表達(dá)載體pGEX-B.b.pgrp在大腸桿菌以胞內(nèi)可溶形式表達(dá)。
所述表達(dá)載體pGEX-B.b.pgrp是建立谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶為融合伴體，中間插入凝血酶識(shí)別位點(diǎn)的高效表達(dá)載體，該系統(tǒng)使B.b.PGRP在大腸桿菌中以胞內(nèi)可溶的形式表達(dá)。
本發(fā)明所選擇的青島文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtauense)采集于山東省沙子口水域。
本發(fā)明通過(guò)對(duì)文庫(kù)重組克隆大規(guī)模序列測(cè)定，從中得到了1個(gè)新的編碼文昌魚B.b.PGRP的克隆，命名為B.b.pgrp(其DNA序列如序列表中<400>1序列所示)。新基因編碼255個(gè)氨基酸(其氨基酸序列如序列表中<400>2序列所示)，等電點(diǎn)為7.60，分子量為27,102道爾頓，具有保守的PGRP的酰胺酶活性位點(diǎn)。
本發(fā)明通過(guò)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，將編碼新基因B.b.pgrp克隆到原核融合表達(dá)載體pGEX-4T(Amersham公司)上，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒并將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)。此表達(dá)載體(pGEX-B.b.pgrp)以谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST為分子融合伴體，幫助重組蛋白正確折疊，以可溶的形式表達(dá)，GST的C端有柔鏈區(qū)結(jié)構(gòu)，便于利用體親和層析進(jìn)行純化。GST的C端含有凝血酶酶切位點(diǎn)，利于外源蛋白單體的獲得。該融合蛋白編碼467個(gè)氨基酸，等電點(diǎn)為7.2，分子量為51,804道爾頓。通過(guò)對(duì)培養(yǎng)時(shí)間，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度等條件的摸索和優(yōu)化，B.b.PGRP融合蛋白的表達(dá)量較高，大部分處于可溶狀態(tài)。
本發(fā)明還摸索和優(yōu)化了重組B.b.PGRP蛋白的純化條件，表達(dá)產(chǎn)物的超聲裂解液經(jīng)GST Sepharose 4B親和色譜層析，得到較純的融合蛋白。
本發(fā)明的表達(dá)質(zhì)粒復(fù)制方法參照Sambrook(Sambrook，et al.1989，Molecularcloing.Cold Spring Harbor Labroratory Press.USA)方法，用CaCl2的方法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli.DH5α或BL21(DE3)菌株，用含氨芐青霉素(100μg/mL)的LB培養(yǎng)基培養(yǎng)轉(zhuǎn)化菌株，用Omega公司試劑盒提取質(zhì)粒。
本發(fā)明初步證明了該具有溶菌的活性。融合蛋白通過(guò)與金黃色葡萄球菌提取的肽聚糖進(jìn)行親和孵育，再用GST蛋白單克隆抗體進(jìn)行Western-blocking檢測(cè)結(jié)合在不溶的肽聚糖沉淀的結(jié)合蛋白的方法，證明了該融合蛋白能特異結(jié)合細(xì)菌表面的生物大分子肽聚糖。
通過(guò)氯仿溶菌的方法初步證明了該融合蛋白具有溶菌活性，方法是按照傳統(tǒng)驗(yàn)證噬菌體溶菌酶成功在大腸桿菌表達(dá)的溶菌實(shí)驗(yàn)。


圖1為本發(fā)明的中國(guó)文昌魚蛋白和其它物種PGRP蛋白的比較結(jié)果，其中“*”表示相同；“”表示差異較?。弧?”表示差異明顯；空格表示完全不同。
圖2為文昌魚消化道總RNA。1DNAmarker DL2000(Takara)；2總RNA圖3雙鏈cDNA電泳結(jié)果。1雙鏈cDNA PCR電泳；2DNA marker widerange(Takara)。
圖4為基因B.bpgrp的重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-B.b.pgrp構(gòu)建圖。
圖5為重組B.b.PGRP蛋白誘導(dǎo)表達(dá)、親和層析電泳圖。1低分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)marker；2未經(jīng)誘導(dǎo)的pGEX-B.b.pgrp菌體總蛋白；3經(jīng)IPTG誘導(dǎo)的pGEX-B.b.pgrp菌體總蛋白；4誘導(dǎo)菌超聲上清總蛋白；5穿流峰；610mM還原型谷胱甘肽洗脫峰；7過(guò)G-25分子篩后除去谷胱甘肽。
圖6為B.b.PGRP1的肽聚糖結(jié)合活性1蛋白Marker；2B.b.PGRP1-GST融合蛋白超聲上清上樣對(duì)照，GST單抗檢測(cè)；3從肽聚糖上洗脫下來(lái)的B.b.PGRP1-GST融合蛋白，GST單抗檢測(cè)；4B.b.PGRP1-GST融合洗脫上清，GST單抗檢測(cè)5空載體GST蛋白超聲上清上樣對(duì)照，GST單抗檢測(cè)；6從肽聚糖上洗脫下來(lái)的空載體GST蛋白，GST單抗檢測(cè)；7空載體GST蛋白洗脫上清，GST單抗檢測(cè)。
圖7為B.b.PGRP1的溶菌活性GST空載蛋白；GST-PGRP融合蛋白；BEFORE加1％(v/v)氯仿前；AFTER加1％(v/v)氯仿十分鐘后。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施將有助于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1中國(guó)文昌魚消化道總RNA的提取和cDNA的合成總RNA的提取和cDNA合成收集中國(guó)文昌魚消化道，采用Trizol試劑法(Invitrogen公司)提取消化道總RNA，酚/氯仿抽提去除蛋白質(zhì)，獲得中國(guó)文昌魚消化道總RNA，其A260/A280＝1.96，經(jīng)1％甲醛變性膠電泳檢測(cè)可見(jiàn)清晰的18s和28s兩條帶，比值＞1(見(jiàn)圖2)，表明總RNA完整性較好、純度也較高。取1ug總RNA，以SMARTIII olignuclotide(5′-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGGCCATTATGGCCGGG-3′)和CDSIII/3′PCR引物(5′-ATTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACATG-d(T)30N-1N-3′)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈，得到10μl一鏈cDNA產(chǎn)物。
取2ul cDNA一鏈產(chǎn)物，以5’PCR Primer(5’-TTCCACCCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTGG-3’)和3’PCR Primer(5’-GTATCGATGCCCACCCTCTAGAGGCCGAGGCGGCCGACA-3’)為引物進(jìn)行LD-PCR合成二鏈cDNA。
實(shí)施例2中國(guó)文昌魚消化道B.b.pgrp基因序列的測(cè)定和分析將二鏈cDNA連接至pcDNA3.0載體(購(gòu)自Invitrogen公司)，轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌(購(gòu)自Invitrogen公司)，挑選重組克隆測(cè)序。Blast同源分析表明，獲得了編碼全長(zhǎng)B.b.pgrp基因的EST序列，基因長(zhǎng)度都是765bp，編碼255個(gè)氨基酸的B.b.PGRP蛋白，是1個(gè)新的PGRP蛋白。
用ClustalW分析軟件，對(duì)已報(bào)導(dǎo)的不同物種的PGRP蛋白序列比較，結(jié)果如圖1所示。
從圖1可以看出，PGRP在不同的物種中是較為保守的。
實(shí)施例3重組pGEX-B.b.pgrp表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建依據(jù)B.b.pgrp基因的兩端序列合成一對(duì)引物，上游引物含BamHI切割位點(diǎn)，下游引物含NotI切割位點(diǎn)。
上游引物(P1)5’CGCGGATCCCAGCGGTGGCGCAGTGACG3’BamH I下游引物(P2)5′CGTGCGGCCGCGCCAACGTATCGTCCCCAGGA3′Not I以含B.b.pgrp基因的pcDNA3.0質(zhì)粒(購(gòu)自Invitrogen公司)為模板，P1、P2為引物PCR擴(kuò)增，得到特異擴(kuò)增的單一條帶，產(chǎn)物大小在750bp左右。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到原核融合表達(dá)載體pGEX(購(gòu)自Aersham公司)上，得到重組表達(dá)載體pGEX-B.b.pgrp(其構(gòu)建過(guò)程如圖4所示)。表達(dá)載體pGEX-B.b.pgrp中的外源基因經(jīng)測(cè)序鑒定正確。
實(shí)施例4中國(guó)文昌魚B.b.PGRP融合蛋白的表達(dá)將pGEX-B.b.pgrp轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)(購(gòu)自Invitrogen公司)?；蚬こ叹暳呀馍锨逡航?jīng)SDS-PAGE電泳分析表明，菌株經(jīng)誘導(dǎo)后有明顯的特異表達(dá)產(chǎn)物帶，分子量與用軟件DNATOOLS6.0預(yù)測(cè)的理論值52kD相符(圖5)。
對(duì)培養(yǎng)時(shí)間，誘導(dǎo)濃度，溫度等條件的摸索得出。基因工程菌的培養(yǎng)條件為接單菌落于50ml氨芐抗性LB液體培養(yǎng)基中，37℃，250rpm培養(yǎng)過(guò)夜，取過(guò)夜培養(yǎng)物10ml接種于1L的氨芐抗性LB培養(yǎng)基中，37℃，250rpm培養(yǎng)至OD600＝0.6(擴(kuò)大培養(yǎng)約4h)，加入100mM IPTG至終濃度分別為0.2mM，18℃，250rpm誘導(dǎo)培養(yǎng)16h后離心收集菌體。經(jīng)SDS-PAGE電泳分析表明，在此條件下B.b.PGRP融合蛋白的表達(dá)量占菌體總蛋白的40％以上，處于可溶狀態(tài)(圖5)。
實(shí)施例5中國(guó)重組文昌魚B.b.PGRP融合蛋白的純化將總菌體用50mM Tris.Cl，100mM NaCl(pH8.0)洗滌，再用適量的50mMTris.Cl，100mM NaCl(pH8.0)懸浮，超聲處理后，裂解上清液GST Sepharose 4B親和色譜層析純化，SDS-PAGE分析融合蛋白的表達(dá)和層析的結(jié)果。從SDS-PAGE結(jié)果可以得出GST-B.b.PGRP能被親和柱所吸附，用10mM的還原型谷胱甘肽洗柱時(shí)，能把目的蛋白GST-B.b.PGRP洗下。收集得到重組蛋白的洗脫峰。
洗脫液過(guò)G25凝膠柱除去蛋白中的還原型谷胱甘肽，得到成分比較單一的蛋白(圖5)。
實(shí)施例6B.b.PGRP重組蛋白的結(jié)合肽聚糖活性將得到的表達(dá)菌的超聲上清與不溶的從金黃色葡萄球菌中提取的肽聚糖在50mMTris.Cl，100mM NaCl(PH8.0)中4℃溫和旋轉(zhuǎn)1小時(shí)，后8000g離心5分鐘，去上清，再用50mM Tris.Cl，100mM NaCl(PH8.0)洗滌四次，盡量去除非特異結(jié)合的蛋白，沉淀和上清分別加loading buffer，連同超聲上清蛋白上樣進(jìn)行SDS-聚丙烯酰氨電泳，轉(zhuǎn)膜，用GST單抗進(jìn)行Western-block分析，與對(duì)照相比，在肽聚糖上洗脫下來(lái)了目的B.b.PGRPl-GST融合蛋白條帶，說(shuō)明該融合蛋白具有結(jié)合肽聚糖的活性。
實(shí)施例7B.b.PGRP重組蛋白活性分析通過(guò)氯仿溶菌的方法初步證明了該融合蛋白在表達(dá)菌株就具有溶菌活性，方法是按照傳統(tǒng)驗(yàn)證噬菌體溶菌酶成功在大腸桿菌表達(dá)的溶菌實(shí)驗(yàn)。在已經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)的新鮮菌液中加入1％的氯仿，使細(xì)菌的細(xì)胞壁裂解，融合蛋白釋放出來(lái)并降解肽聚糖，從而使菌液變澄清，十分鐘后稀釋10倍測(cè)OD600的值。肉眼可以看出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組(GST空載蛋白)的區(qū)別十分明顯(圖6)。
序列表<110>中山大學(xué)<120>中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白B.bPGRP基因及其應(yīng)用<160>2<210>1<211>765<212>DNA<213>文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtauense)<220>
<221>peptide<222>(1)…(765)<400>11 ATG GAG ACG AAA GGA CTA GTC ATC CTT TTG TGC CTG CTG CCA TAC GCG GCT GCC CAG CGG 601 M E T K G L V I L L C L L P Y A A A Q R2061 TGG CGC AGT GAC GGC CGC TGC GGC CCG AAC TAC CCC TCC CCT GAC GCC AAC CCG GGC GAG 12021 W R S D G R C G P N Y P S P D A N P G E40121 TGT AAC CCG CAC GCC GTG GAC CAC TGC TGC TCG GAG TGG GGC TGG TGT GGC CGG GAG ACC 18041 C N P H A V D H CC S E W GW C G R E T60181 ACA CAC TGT ACC TGC TCT CGC TGC GTG GAC TAT TCC GCG GGT GGT GGC TCT TCG GGA GGC 24061 T H C T C S R C V D Y S A G G G S S G G80241 TCG ACA GTC GTC GTC AGC AGC TCG GGA ACT TGT CCC AGG ATC GTG TCC AAG TCG GAA TGG 30081 S T V V V S S S G T C P R I V S K S E W 100301 GGT TCC CGG GCC ACC AAC TAT AAC GTG TTT CTC AGC CTG CCG GTC CCA AAG GTT GTG ATC 360101 G S R A T N Y N V F L S L P V P K V V I 120361 CAC CAC TCG GCG GGC GCC ACG TGC AGT ACC CAG TCG TCC TGT TCT CTA CAG GTC AGG AAC 420
121 H H S A G A T C S T Q S S C S L Q V R N 140421 ATC CAG AAC TAC CAC ATG GAC GGC AGA GGC TAC AGC GAC ATC GGC TAC AAC TTC CTG GTC 480141 I Q N Y H M D G R G Y S D I G Y N F L V 160481 GGT AAC GAT GGC AAC GTG TAC GAA GGG CGC GGC TGG GAC AGG AGA GGT GCG CAT GCG CTT 540161 G N D G N V Y E G R G W D R R G A H A L 180541 AAC GTC AAC ACC GAG TCC ATC GGG ATC TGC TTC ATG GGA GAC TTC ACC AGT CAG AAG CCG 600181 N V N T E S I G I C F M G D F T S Q K P 200601 ACC GCC TCC GCC ATC GCC GCC GCC AAG AGC CTC ATC TCA TGC GGG GTG TCC CTG GGC AAG 660201 T A S A I A A A K S L I S C G V S L G K 220661 ATC AGG TCG GGC TAC TCC CTG TAC GGA CAT CGT GAC GTC GGC TCC ACA GCC TGC CCT GGG 720221 I R S G Y S L Y G H R D V G S T A C P G 240721 AAC CTG CTC TAT GAT GAC ATC AAG TCC TGG GGA CGA TAC GTT GGC TGA 768241 N L L Y D D I K S W G R Y V G * 256<210>2<211>255<212>PRT<213>文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtauense)<220>
<221>peptide<222>(1)…(255)<400>21 METKGLVILL CLLPYAAAQR WRSDGRCGPN YPSPDANPGE CNPHAVDHCC51 SEWGWCGRET THCTCSRCVD YSAGGGSSGG STVVVSSSGT CPRIVSKSEW101 GSRATNYNVF LSLPVPKVVI HHSAGATCST QSSCSLQVRN IQNYHMDGRG151 YSDIGYNFLV GNDGNVYEGR GWDRRGAHAL NVNTESIGIC FMGDFTSQKP201 TASAIAAAKS LISCGVSLGK IRSGYSLYGH RDVGSTACPG NLLYDDIKSW251 GRYVG*
權(quán)利要求
1.從中國(guó)文昌魚的消化道總RNA中分離得到的中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白基因B.b.pgrp，其DNA序列如序列表中<400>1序列所示。
2.權(quán)利要求1所述基因編碼的氨基酸序列，如序列表中<400>2序列所示。
3.一種氨基酸序列，其特征在于其含有權(quán)利要求2所述的氨基酸序列。
4.蛋白B.b.PGRP的生產(chǎn)方法，按以下步驟進(jìn)行(1)將權(quán)利要求1所述的基因B.b.pgrp克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pGEX-4T上，得到重組表達(dá)載體pGEX-B.b.pgrp；(2)將pGEX-B.b.pgrp轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株BL21(DE3)；(3)對(duì)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21(DE3)在液體培養(yǎng)基加富LB進(jìn)行培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)三小時(shí)后加入終濃度為0.2mM的IPTG18℃誘導(dǎo)過(guò)夜；(4)重組中國(guó)文昌魚B.b.PGRP融合蛋白的純化，具體是將菌液離心收集菌體，進(jìn)行超聲破碎，離心取上清，上GST Sepharose 4B親和層析柱，可以得到較純的蛋白。
5.權(quán)利要求2所述的蛋白在作為天然的抑菌活性蛋白以及制備治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白B.b.PGRP及其制備方法和應(yīng)用。主要涉及中國(guó)文昌魚肽聚糖識(shí)別蛋白基因及其編碼的蛋白B.b.PGRP，以及該蛋白在制備治療感染性疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)cDNA文庫(kù)構(gòu)建和大規(guī)模測(cè)序的方法，從中國(guó)文昌魚的消化道中分離得到文昌魚B.b.pgrp基因，其DNA序列如序列表中<400>1序列所示。該基因編碼的蛋白(B.b.PGRP)，其氨基酸序列如序列表中<400>2序列所示。本發(fā)明的肽聚糖識(shí)別蛋白的粗蛋白初步驗(yàn)證能特異結(jié)合細(xì)菌表面的生物大分子肽聚糖，并且該融合蛋白對(duì)表達(dá)菌株有明顯的溶菌作用，可用于作為天然的抑菌活性物質(zhì)以及制備治療感染性疾病的藥物。
文檔編號(hào)C07K14/46GK1982456SQ200610035310
公開(kāi)日2007年6月20日 申請(qǐng)日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者徐安龍, 顏慶瑜, 于萃玲, 周琴, 董美玲 申請(qǐng)人:中山大學(xué)