專利名稱：卟啉金屬絡合物與清蛋白的包合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種能夠可逆地吸附解吸氧的氧載體，其在醫(yī)療領(lǐng)域中用于向缺血部位或腫瘤組織供氧、用于大量出血患者的輸血、作為器官保存灌注液、體外循環(huán)液、細胞培養(yǎng)液使用。
更詳細地，涉及以清蛋白包合作為氧吸附解吸部位的卟啉金屬絡合物而成的新化合物、以及以該新化合物作為有效成分的氧載體。
背景技術(shù)：
為了恢復患者的出血性休克，以往采用補充與活體血液幾乎相等膠體滲透壓的血漿增量劑的方法。但是，伴有循環(huán)血液量的30％以上的出血量時，向末梢組織的供氧變得不足，投與血漿增量劑之外，必須再投與氧載體。
以往，作為這樣的氧載體，使用含有天然紅血球的天然血液或紅血球濃縮液。但是，為了避免由抗原抗體反應引起的凝血，必須使供血者與受血者的血型一致，使用時必須進行交叉配血試驗，另外，這樣的天然血液或紅血球濃縮液，其有效保存期較短，為3周(4℃)，而通過冷凍保存可長期保存的冷凍血液，存在成本高和使用時由于滲透壓休克而容易溶血的問題。還有發(fā)生肝炎或艾滋病等傳染疾病的擔心。
作為解決這些問題的氧載體，存在于血紅蛋白和肌紅蛋白中的卟啉鐵(II)絡合物，由于可以可逆地吸附解吸氧分子而被關(guān)注。因此，使用類似于這樣的天然卟啉鐵(II)絡合物的合成絡合物而成的氧載體的研究，一直以來被大量報道(例如，參照非專利文獻1和2等)。
不過，使用合成化合物(特別是合成的卟啉金屬絡合物等)，在生理條件下(生理鹽水溶液(pH 7.4)中、室溫至37℃)使其功能再現(xiàn)，在醫(yī)療用途，例如在用于人造紅血球、器官保存液或人工肺等中的供氧液中使用時，以下的條件是必須的。
(i)為了使氧結(jié)合能力增大，通常必須存在軸向堿基配體，但作為這樣的配體廣泛使用的咪唑衍生物中存在具有藥理作用的物質(zhì)，存在活體內(nèi)毒性高的物質(zhì)，所以要將其濃度限制在最小限度。
(ii)卟啉金屬絡合物不僅可溶于水中，而且通過將其包埋·固定在微觀疏水性環(huán)境內(nèi)，防止中心金屬的質(zhì)子引起的氧化以及經(jīng)由μ-氧絡二聚體的氧化，而穩(wěn)定地保持氧配位絡合物。
關(guān)于上述條件(i)，已經(jīng)合成了將咪唑基通過共價鍵結(jié)合到卟啉環(huán)上而成的卟啉化合物，即，分子內(nèi)具有軸向堿基的取代卟啉化合物(將卟啉/咪唑的摩爾比抑制為1∶1的最小必需量)，并明確了該化合物可形成穩(wěn)定的氧配位絡合物(參照專利文獻1)。
在該卟啉絡合物中，特別是通過酯鍵結(jié)合軸向堿基的情況下，已知生物降解性也高，成為在活體內(nèi)給藥時極其有利的物質(zhì)，作為安全性高的氧結(jié)合部位(卟啉金屬絡合物)是有用的。
關(guān)于上述條件(ii)，已知利用由表面活性劑形成的膠束或由磷脂形成的雙分子層小泡。但是，膠束的形態(tài)是動態(tài)的，與雙分子層小泡相比穩(wěn)定性差，并且所形成的疏水環(huán)境的疏水性也低。因此，形狀比較穩(wěn)定、并可提供充分的疏水性區(qū)域的雙分子層小泡經(jīng)常用作為絡合物提供疏水環(huán)境的載體，通過使卟啉金屬絡合物以高的取向性分散在磷脂小泡的雙分子層之間，在生理條件下也可以穩(wěn)定地輸送氧的氧載體的開發(fā)繼續(xù)被推進著。
如果在卟啉環(huán)上導入末端親水性烷基取代基，賦予卟啉兩性結(jié)構(gòu)，則可以以高取向性包埋到磷脂雙分子層的疏水環(huán)境中，基于這樣的想法，各種兩性卟啉鐵絡合物已被合成出，并通過在磷脂雙分子層中包埋·取向這些卟啉絡合物，開發(fā)出在水相體系中有效的一系列氧載體(例如，參照專利文獻2)。
但是，這些氧載體因為使用大量的磷脂，所以，在工業(yè)規(guī)模的制造方面、以及包括代謝的活體適應性方面存在問題。
另一方面，作為不使用磷脂的氧載體，清蛋白與血紅素的包含物(清蛋白-血紅素)作為氧載體而被研究。作為清蛋白-血紅素的一個例子，可以列舉將作為四苯基卟啉鐵衍生物的2-[8-[N-(2-甲基咪唑基)]辛酰氧基甲基]-5，10，15，20-四(α，α，α，α-o-特戊?；被?苯基卟啉鐵絡合物等包合在清蛋白疏水袋的物質(zhì)(參照非專利文獻3)等。
但是，即使在這些氧載體中，在包括代謝的活體適應性方面和工業(yè)規(guī)模的制造方面還有改善的余地。
專利文獻1日本專利公開特開平6-271577號公報專利文獻2日本專利公開特開昭58-213777號公報非專利文獻1J.P.Collman，Accounts of Chemical Research，10，p.265(1977)非專利文獻2F.Basolo，B.M.Hoffman，J.A.Ibers，Accountsof Chemical Research，8，p.384(1975)非專利文獻3E.Tsuchida，et al.，Bioconjugate Chemistry，vol.8，534-538，1997發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的課題是提供一種新化合物及其制造方法，該化合物是含有卟啉金屬絡合物作為氧吸附解吸部位的氧載體，其活體適應性更優(yōu)異、工業(yè)規(guī)模的制造也比較容易。
本發(fā)明人們?yōu)榱私鉀Q上述課題，反復研究了在生理條件下可以穩(wěn)定地運輸氧的氧載體(卟啉金屬絡合物)的分子設計和功能表現(xiàn)以及可對卟啉金屬絡合物提供疏水環(huán)境的活體適應性高的載體。
其結(jié)果，制造了將下述通式(1)所示的具有2位側(cè)鏈的四苯基卟啉金屬絡合物與清蛋白進行包合而成的化合物，其中清蛋白占有血漿蛋白質(zhì)的50～55％且在活體內(nèi)承擔各種化合物的運輸，發(fā)現(xiàn)該化合物作為活體適應性優(yōu)異的氧載體是有用的。
通式(1)式中，R1表示含有環(huán)己基的取代基，R2表示取代基，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子，X-表示鹵離子，X-的個數(shù)是從金屬離子的價數(shù)減2的數(shù)。
即，本發(fā)明涉及(1)將上述通式(1)所示的具有2位側(cè)鏈的四苯基卟啉金屬絡合物用清蛋白包合而得到的新的包合物；(2)如上述(1)記載的包合物，該包含物以下述通式(2)表示 通式(2)
式中，R2表示取代基，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子，X-表示鹵離子，X-的個數(shù)是從金屬離子的價數(shù)減2的數(shù)；(3)如上述(1)記載的包合物，其中，R2以下述通式(3)表示 通式(3)式中，R3表示C1～C18的烷基或通式(4)所示的基團， 通式(4)式中，R4表示不阻礙其所結(jié)合著的咪唑?qū)χ行慕饘倥湮坏幕鶊F，R5表示亞烷基；(4)如上述(1)記載的包合物，其中M是鐵、鈷或鉻(5)如上述(1)記載的包合物，其中M是+2價的鐵、+3價的鐵或+2價的鈷；(6)如上述(3)記載的包合物，其中R4是氫、甲基、乙基或丙基；(7)如上述(3)記載的包合物，其中R5是C1～C10的亞烷基；(8)如上述(1)記載的包合物，其中清蛋白是人血清清蛋白或重組人血清清蛋白；(9)包含上述(1)記載的包合物作為有效成分的氧載體；(10)包含上述(9)記載的氧載體的醫(yī)藥組合物。
含有本發(fā)明的卟啉金屬絡合物與清蛋白的包合物(以下簡稱為卟啉-清蛋白包合物)的氧載體，活體適應性優(yōu)異，即使在生理條件下也顯示出優(yōu)異的氧吸附解吸能力。
另外，本發(fā)明的卟啉-清蛋白包合物和將其作為有效成分的氧載體，也可以比較容易地進行工業(yè)規(guī)模的制造。
另外，本發(fā)明的卟啉-清蛋白包合物中，因為作為氧吸附部位的卟啉金屬絡合物被固定在清蛋白的內(nèi)部疏水環(huán)境內(nèi)，所以完全抑制了中心金屬的質(zhì)子引起的氧化以及經(jīng)由μ-氧絡二聚體的氧化劣化過程，其結(jié)果，本發(fā)明的包合物在水相體系中也可以保持穩(wěn)定的氧配位絡合物。
另外，本發(fā)明的卟啉-清蛋白包合物，與氧一接觸就迅速地生成穩(wěn)定的氧配位絡合物。而且，該氧配位絡合物可以根據(jù)氧分壓來吸附解吸氧。該氧的吸附解吸可以通過氧分壓差可逆地重復穩(wěn)定地進行。另外，氧結(jié)合解離迅速，本發(fā)明的包合物可以作為即使在活體內(nèi)的血流中也能高效率地運輸氧的半人造類氧載體，另外在使用重組人血清清蛋白時作為全合成類氧載體發(fā)揮作用。
進一步，本發(fā)明的卟啉-清蛋白包合物，其制造簡單，特別是在使用重組人血清清蛋白的情況下等，適合于工業(yè)規(guī)模的生產(chǎn)。


圖1是表示在實施例1中血液交換后的體重的變化的圖。
圖2是表示在實施例1中血液交換后的血液生物化學檢測值的圖。
具體實施例方式
本發(fā)明中可以使用的卟啉金屬絡合物，是如上述通式(1)所示那樣的在卟啉環(huán)衍生物中配位有中心金屬的、具有2位側(cè)鏈的四苯基卟啉金屬絡合物。所謂卟啉環(huán)是4個吡咯環(huán)以α位與4個次甲基交替地結(jié)合而成的大環(huán)狀化合物及其衍生物。
本發(fā)明的卟啉金屬絡合物，其特征為，在上述通式(1)中，R1是含有環(huán)己基的取代基。作為取代基R1，優(yōu)選是以上述通式(2)所示那樣的取代基。
另外，在上述通式(1)中，作為2位的取代基(R2)，可以列舉下述通式(3)所示的基團。
通式(3) 通式(3)式中，R3表示C1～C18的烷基或以下述通式(4)表示的基團。
通式(4)式中，R4表示不阻礙其所結(jié)合著的咪唑?qū)χ行慕饘倥湮坏幕鶊F，R5表示亞烷基。
在上述通式(4)中，作為R4優(yōu)選氫、或甲基、乙基、或丙基等的低級烷基，作為R5優(yōu)選C1～C10的亞烷基。
在本發(fā)明的上述通式(1)所示的四苯基卟啉金屬絡合物中，具體的可以結(jié)合氧的絡合物是中心金屬(M)處于+2價的狀態(tài)、且配位有一個堿基的絡合物，這些絡合物優(yōu)選下述通式(5)或通式(6)所示的物質(zhì)。
通式(5)另外，在上述通式(5)中，L表示咪唑衍生物等的氮類軸向配體。
通式(6)在本發(fā)明的上述通式(1)所示的四苯基卟啉金屬絡合物中，如上所述成為有效的氧吸附解吸劑或氧載體的物質(zhì)是中心金屬(M)為+2價的絡合物結(jié)構(gòu)。并且，在2位的取代基本身是作為軸向堿基發(fā)揮功能的咪唑衍生物的情況下，分子內(nèi)咪唑可以和卟啉中心金屬(M)配位，因此無需從外部添加大量過剩的軸向堿基，其本身就可以發(fā)揮氧結(jié)合能力。換言之，分子內(nèi)結(jié)合有軸向堿基的卟啉化合物不需要大量添加咪唑衍生物作為軸向堿基，考慮活體內(nèi)給藥時，成為大幅降低軸向堿基濃度的有用的原料。
本發(fā)明的卟啉金屬絡合物中的中心金屬(上述通式(1)中的M)是元素周期表第6～10族的過渡金屬原子，也可以是金屬離子的形態(tài)。其中，優(yōu)選鐵、鈷、鉻等，更優(yōu)選+2價的鐵(鐵(II))、+3價的鐵(鐵(III))或+2價的鈷(鈷(II))。在中心金屬為鐵的情況下，該鐵處于+2價的狀態(tài)時具有氧吸附解吸能力。
本發(fā)明的卟啉金屬絡合物中，具有鐵(III)絡合物的形態(tài)時，只要用適當?shù)倪€原劑(連二亞硫酸鈉、抗壞血酸等)，由常規(guī)方法將鐵從3價還原到2價，就可以賦予氧結(jié)合活性。
作為本發(fā)明的卟啉金屬絡合物，特別優(yōu)選下述通式(7)所示那樣的卟啉環(huán)中配位有過渡金屬原子的四苯基卟啉金屬絡合物。
式中，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子。
通式(7)式中，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子，R4表示不阻礙其所結(jié)合著的咪唑?qū)χ行慕饘倥湮坏幕鶊F，R5表示亞烷基。
在這些卟啉金屬絡合物中，特別優(yōu)選在下述通式(8)所示的2-[8-(2-甲基-1-咪唑基)辛酰氧基甲基]-5，10，15，20-四[α，α，α，α-o-(1-甲基環(huán)己基?；被?苯基卟啉]的中心配位有鐵的絡合物。
通式(8)上述通式(8)所示的卟啉金屬絡合物，重要的一點是其烷基咪唑基結(jié)合在卟啉環(huán)的2-位上。根據(jù)本發(fā)明人們的研究，在分子內(nèi)不具有這樣的咪唑基的卟啉絡合物，即使從外部添加稍過剩的咪唑衍生物(例如，1-甲基咪唑)，也不能在水相體系中生成穩(wěn)定的氧絡合物，而立即劣化。
本發(fā)明的卟啉金屬絡合物與清蛋白的包合物，是卟啉金屬絡合物被包埋·固定(包合)在由清蛋白形成的內(nèi)部疏水區(qū)域內(nèi)而成的化合物。相對于1摩爾的清蛋白(例如人血清清蛋白)，卟啉金屬絡合物的結(jié)合數(shù)通常是約1～8。1摩爾的清蛋白中所包合·結(jié)合的卟啉金屬絡合物的數(shù)，可以通過例如制作Scatchard圖(C.J.Halfman，T.Nishida，Biochemistry，11，p.3493(1972))等來決定。
本發(fā)明中使用的清蛋白是人血清清蛋白、重組人血清清蛋白、牛血清清蛋白等，其來源沒有限制?？紤]到對人的適用，優(yōu)選為人血清清蛋白或通過基因重組技術(shù)制造的人血清清蛋白(以下稱為“重組人血清清蛋白”)，特別優(yōu)選重組人血清清蛋白。
近年來，隨著基因重組技術(shù)的發(fā)展，開發(fā)出結(jié)構(gòu)、組成和物理化學特征與人血清清蛋白完全相同的高純度的重組人血清清蛋白(參照橫山、大村，臨床分子醫(yī)學，1，939頁(1993))，在該重組人血清清蛋白中包合取代卟啉金屬絡合物而形成的卟啉金屬絡合物-重組人血清清蛋白包合物，可以作為全合成類提供，因此工業(yè)規(guī)模的制造也比較容易。
另外，因為清蛋白是血漿蛋白質(zhì)，所以，相關(guān)于對活體的適用、特別是用作紅血球替代物，與使用磷脂小泡的體系相比格外有利。
清蛋白在血液中是以調(diào)整膠體滲透壓為主要作用的單純蛋白質(zhì)，另外也作為營養(yǎng)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物或藥物等的運輸?shù)鞍踪|(zhì)發(fā)揮功能。本發(fā)明是著眼于這樣的在其它蛋白質(zhì)中沒有發(fā)現(xiàn)的清蛋白的非特異性結(jié)合能力而完成的。
本發(fā)明的所謂氧載體，是包含將上述卟啉金屬絡合物包合于清蛋白中而形成的包合物的化合物或結(jié)構(gòu)物，被用作輸血時的紅血球替代物、缺血部位的組織障礙防止劑、心肌梗塞等缺血性疾病的治療劑、腫瘤的放射線治療中的增感劑。
另外，含有這樣的氧載體并添加穩(wěn)定劑等而成的各種醫(yī)藥組合物也被包括在本申請發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的通式(1)所示的四苯基卟啉金屬絡合物，可以用各種公知的制造方法制造。例如，上述通式(8)所示的2-[8-(2-甲基-1-咪唑基)辛酰氧基甲基]-5，10，15，20-四[α，α，α，α-o-(1-甲基環(huán)己基?；被?苯基]卟啉鐵絡合物，可以通過T.komatsu et al.Bioconjugate Chemistry 13，p.397-402，2002中所記載的制造方法制造。
接著，為了配制本發(fā)明的卟啉金屬絡合物與清蛋白的包合物，首先，將卟啉金屬絡合物溶解在溶劑(例如乙醇、甲醇等)中，在其中加入清蛋白(例如，人血清清蛋白)的水溶液(作為溶劑，例如是水、磷酸緩沖液(pH 5～9)、生理鹽水、Krebs-Ringer溶液等)后，輕輕振蕩。通過超濾(例如使用超濾分子量20000～40000的超濾膜)將得到的水分散液濃縮到總量的10％左右，然后重復再加入水等、進行超濾的操作，就可以得到卟啉金屬絡合物-清蛋白包合物。該分散液在4～35℃下保存幾個月后，未觀察到沉淀、凝集等，是穩(wěn)定的。
另外，卟啉金屬絡合物的中心金屬是鐵(III)時，優(yōu)選通過添加還原劑(例如連二亞硫酸鈉、抗壞血酸等的水溶液)等的常規(guī)方法，將中心鐵從3價還原到2價，從而賦予氧結(jié)合活性。
該還原不僅可以通過添加還原劑進行，也可以通過鈀碳/氫氣進行。例如，通過將卟啉鐵(III)絡合物溶解在干燥二氯甲烷、苯、甲苯等中，添加少量的鈀碳之后，在室溫下向混合液中充分地吹入氫氣，可以還原中心鐵。還原后濾除鈀碳，并真空干燥濾液之后可以使用。
以上的還原優(yōu)選在包含反應之前進行。
以下舉出實施例，更詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不限定于這些實施例。
實施例1卟啉金屬絡合物的制造得到利用T.komatsu et al.Bioconjugate Chemistry 13，p.397-402，2002中記載的制造方法制造的2-[8-(2-甲基-1-咪唑基)辛酰氧基甲基]-5，10，15，20-四[α，α，α，α-o-(1-甲基環(huán)己基?；被?苯基]卟啉鐵絡合物。
卟啉金屬絡合物與清蛋白的包合在一氧化碳氣氛下，在2-[8-(2-甲基-1-咪唑基)辛酰氧基甲基]-5，10，15，20-四[α，α，α，α-o-(1-甲基環(huán)己基?；被?苯基]卟啉鐵絡合物(1.07mM)的乙醇溶液1.5L中，添加1.5L 0.6M的L-抗壞血酸水溶液進行還原，將該液加入到含有0.27mM基因重組人血清清蛋白(以下稱為rH SA)的磷酸緩沖水溶液(pH 7.4、1/30mM)6.5L中，攪拌。在該混合液中邊加入60L磷酸緩沖液(pH 7.4、1/30mM)，邊用超濾裝置(ミリポア制造的超濾膜超濾分子量30000)，進行定容量超濾透析，除去包含在混合液中的乙醇。將該混合液濃縮至300mL，得到所希望的卟啉金屬絡合物-清蛋白包合物的分散液(以下簡稱為rHSA-FecycP)。rHSA-FecycP(CO結(jié)合體)即使在室溫或4℃下保存幾個月也沒有觀察到沉淀·凝集等，極其穩(wěn)定。
將rHSA-FecycP(CO結(jié)合體)稀釋到1/50，測定紫外可見吸收光譜，在波長427nm處顯示最大吸收。
邊對rHSA-FecycP(CO結(jié)合體)進行光照射(500W)，邊通氧氣，光譜就立即發(fā)生變化，在波長424nm處顯示最大吸收。這表示包合在清蛋白中的卟啉鐵(II)絡合物成為氧化絡合物。在rHSA-FecycP(O2結(jié)合體)中通氮氣，光譜就立即發(fā)生變化，在波長443nm處顯示最大吸收。這表示氧從包合在清蛋白中的卟啉鐵(II)中除去。在rHSA-FecycP(脫氧體)中通氧氣，可見吸收光譜向氧化型光譜變化，由此可確認氧的吸附解吸是可逆地發(fā)生的。另外，通過重復氧氣和氮氣的交替通氣，可以重復地進行氧的吸附解吸。
rHSA-FecycP的氧親合力(P1/2(O2)維持卟啉金屬絡合物整體的1/2處于與氧結(jié)合的狀態(tài)所必需的氧分壓)是35托(37℃)。通過氧結(jié)合解離平衡曲線估計的肺(110托)-末梢組織(40托)之間的氧運輸效率約為20％(37℃)，表示本包合物作為用于代替紅血球的氧載體有效地起作用。另外，從氧結(jié)合的焓/熵變化可知，本包合物中的氧配位絡合物的行為與向紅血球中的血紅蛋白大致相同。
試驗例1對實施例1中得到的rHSA-FecycP，采用大鼠血液交換模型，以體重變化和血液生物化學值為指標來評價其在體內(nèi)(in vivo)的安全性。
被測物質(zhì)和對照物質(zhì)作為被測物質(zhì)使用實施例1中得到的rHSA-FecycP，作為對照物質(zhì)使用基因重組人血清清蛋白(25％制劑，以下稱rHSA，株式會社バイフア制造)。被測物質(zhì)經(jīng)氧化后，在4℃下保存，并在8小時以內(nèi)使用。另外，使用時將25％rHSA用生理鹽水(大塚制藥工場制造、大塚生食注)5倍稀釋后，配制成5％的濃度，作為給藥溶液。
使用藥物和試劑被測物質(zhì)和對照物質(zhì)之外所使用的藥物和試劑如下乙醚(和光純藥工業(yè)制造)、七氟醚(丸石制藥制造、商品名セボフレン)、肝素(アベンテイスフア一マ制造、商品名ノボ·ヘパリン注1000)和生理鹽水(大塚制藥工場制造，商品名大塚生食注)。
使用動物從日本チヤ一ルス·リバ一購入CrjWistar類雄性大鼠(7周歲)，將36只發(fā)育良好的動物供給試驗。動物設定為對照組(不進行血液交換)、rHSA組(使用rHSA進行血液交換)與cyc組(使用rHSA-FecycP進行血液交換)共3組，各組分別分配12只。但是，各組12只中6只在血液交換結(jié)束1日后、另外剩余6只在血液交換結(jié)束7日后，對還生存著的大鼠進行采血。
手術(shù)用醚導入麻醉后，將大鼠在七氟醚(丸石制藥制造、商品名セボフレン，吸入2.0％)麻醉下，固定在背位，用動物用理發(fā)推子剃掉手術(shù)部位的毛。切開右大腿部分，在右大腿靜脈內(nèi)插入充滿50U/mL肝素的導液管的前端，作為取血途徑。對rHSA組與cyc組，對動物進行20％的血液交換。即，從右大腿采出1mL后，通過右大腿投與1mL的被測物質(zhì)及對照物質(zhì)，將這些操作作為1次，重復進行4次。在血液交換結(jié)束1日及7日后，通過腹部大靜脈進行采血。
一般癥狀觀察在血液交換前以及在血液交換結(jié)束1日、3日及7日后進行一般癥狀的觀察。3組都沒有觀察到一般癥狀上的變化。
體重變化量在血液交換前以及在血液交換結(jié)束1日、3日及7日后測定體重。另外，從1日、3日及7日后的體重減去血液交換前的體重，計算體重變化量(g)。圖1表示各組到血液交換7日后為止的體重的變化。觀察進行到血液交換結(jié)束7日后，對照組、rHSA組及cyc組之間沒有觀察到顯著性差異。
血液生物化學檢查對血漿中的AST、ALT、LDH、LAP、CRN、BUN進行定量。圖2表示各組的血液交換結(jié)束1日及7日后的結(jié)果。采取的靜脈血經(jīng)離心分離后采取血漿，迅速冷凍保存(設定溫度-20℃)。
血液交換結(jié)束1日后3組都沒有觀察到血漿中的AST、ALT、LDH、LAP、CRN、BUN量有顯著性差異。
血液交換結(jié)束7日后3組都沒有觀察到血漿中的AST、ALT、LDH、LAP、CRN、BUN量有顯著性差異。
從以上的試驗例1和2可知，實施例1中得到的rHSA-FecycP，在生理條件下也顯示出優(yōu)異的氧吸附解吸能力，并顯示活體適應性也高。
工業(yè)上的可利用性本發(fā)明的包合物可以作為氧載體使用于各種醫(yī)療用用途，例如可以用于輸血時的紅血球替代物、缺血部位的組織障礙防止劑、心肌梗塞等缺血性疾病的治療劑、腫瘤放射線治療中的增感劑這樣的用途。
權(quán)利要求
1.一種新的包合物，是用清蛋白包合下述通式(1)所示的具有2位側(cè)鏈的四苯基卟啉金屬絡合物而得到的， 通式(1)式中，R1表示含有環(huán)己基的取代基，R2表示取代基，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子，X-表示鹵離子，X-的個數(shù)是從金屬離子的價數(shù)減2的數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包合物，以下述通式(2)表示 通式(2)式中，R2表示取代基，M表示元素周期表第6～10族的過渡金屬原子或金屬離子，X-表示鹵離子，X-的個數(shù)是從金屬離子的價數(shù)減2的數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包合物，所述R2是通式(3)或通式(4)所示的基團 通式(3)式中，R3表示C1～C18的烷基； 通式(4)式中，R4表示不阻礙其所結(jié)合著的咪唑?qū)χ行慕饘倥湮坏幕鶊F，R5表示亞烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包合物，所述M是鐵、鈷或鉻。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包合物，所述M是+2價的鐵、+3價的鐵或+2價的鈷。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的包合物，所述R4是氫、甲基、乙基或丙基。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的包合物，所述R5是C1～C10的亞烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包合物，所述清蛋白是人血清清蛋白或重組人血清清蛋白。
9.一種氧載體，該氧載體含有權(quán)利要求1所述的包合物作為有效成分。
10.一種醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物含有權(quán)利要求9所述的氧載體。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的化合物及其制造方法，該化合物是含有卟啉金屬絡合物作為氧吸附解吸部位的氧載體，其活體適應性更優(yōu)異、工業(yè)規(guī)模的制造也比較容易。以清蛋白包合下述通式(1)所示的具有2位側(cè)鏈的四苯基卟啉金屬絡合物而得到的新的包合物。式中，R
文檔編號C07F15/02GK1810250SQ20061000168
公開日2006年8月2日 申請日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月25日
發(fā)明者木田善規(guī), 福富一平, 片山直久, 甲斐俊哉 申請人:尼普洛株式會社