專利名稱：用作s1p受體激動劑的2－(芳基)氮雜環(huán)甲基羧酸酯、磺酸酯、膦酸酯、次膦酸酯和雜環(huán)化合物的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及是S1P1/Edg1受體激動劑并且因此通過調(diào)控白細(xì)胞通量、螯合二級淋巴組織中的淋巴細(xì)胞和提高血管完整性而具有免疫抑制、抗炎和止血活性的化合物。本發(fā)明還涉及包含該類化合物的藥物組合物以及治療或預(yù)防方法。
已經(jīng)表明免疫抑制劑和抗炎劑可用于許多自身免疫和慢性炎性疾病，包括全身性紅斑狼瘡、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、多發(fā)性硬化和其它病癥如克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、大皰性類天皰瘡、肉樣瘤病、牛皮癬、自身免疫性肌炎、韋格納氏肉芽腫、魚鱗病、格雷夫斯氏眼病、特應(yīng)性皮炎和哮喘、慢性肺病、急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征和膿毒癥。還證明其可用作用于治療癌癥、淋巴瘤和白血病的化療方案的一部分。
雖然這些病癥中各病癥發(fā)病機(jī)理的基礎(chǔ)可能完全不同，但是其都出現(xiàn)大量自身抗體、自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞和/或涉及天然免疫的細(xì)胞激活。該類自身反應(yīng)性可能部分是由于喪失了正常免疫系統(tǒng)在其下進(jìn)行運(yùn)轉(zhuǎn)的穩(wěn)態(tài)控制而造成的。類似地，在骨髓或器官移植后，宿主淋巴細(xì)胞識別該外來的組織抗原并開始產(chǎn)生細(xì)胞和體液響應(yīng)，包括抗體、細(xì)胞因子和細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，其導(dǎo)致了移植物排斥。
自身免疫或排斥過程的一種最終結(jié)果是由于其所釋放的炎性細(xì)胞和介質(zhì)而造成組織破壞。抗炎劑如NSAID主要通過阻斷這些介質(zhì)的作用或分泌來起作用，但是其并不會改變所說疾病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。另一方面，細(xì)胞毒素劑如環(huán)磷酰胺以一種非特異性方式起作用，從而使得既切斷了正常響應(yīng)又切斷了自身免疫響應(yīng)。因?yàn)楦腥臼瞧渥陨砻庖咝约膊。杂迷擃惙翘禺愋悦庖咭种苿┻M(jìn)行治療的患者實(shí)際上很可能會死于感染。
環(huán)孢菌素A是一種被用來預(yù)防移植器官排斥的藥物。FK-506是另一種被批準(zhǔn)用于預(yù)防移植器官排斥并且特別是肝移植排斥的藥物。環(huán)孢菌素A和FK-506是通過抑制機(jī)體的免疫系統(tǒng)使之不能調(diào)動其排斥移植性外來蛋白的天然保護(hù)劑的巨大儲庫而起作用的。環(huán)孢菌素A被批準(zhǔn)用于治療嚴(yán)重的牛皮癬并且已經(jīng)被一些歐洲管理機(jī)構(gòu)(Europeanregulatory agencies)批準(zhǔn)用于治療特應(yīng)性皮炎。
雖然可有效延遲或抑制移植排斥，但是已知環(huán)孢菌素A和FK-506可造成幾種不希望出現(xiàn)的副作用，包括腎毒性、神經(jīng)毒性和腸胃不適。因此，仍然需要并且十分希望研制一種沒有這些副作用的免疫抑制劑。
免疫抑制性化合物FTY720是目前正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的淋巴細(xì)胞螯合劑。FTY720在哺乳動物體內(nèi)被代謝成是有效的鞘氨醇1-磷酸酯受體激動劑的化合物。鞘氨醇1-磷酸酯受體的激動調(diào)控著白細(xì)胞通量、在沒有淋巴細(xì)胞耗竭(lymphodepletion)的情況下誘導(dǎo)了淋巴結(jié)和派伊爾班中淋巴細(xì)胞(T-細(xì)胞和B-細(xì)胞)的螯合和破壞了脾的體系結(jié)構(gòu)，從而干擾了T細(xì)胞依賴性和非T細(xì)胞依賴性抗體響應(yīng)。通過提高內(nèi)皮完整性和抑制作為免疫系統(tǒng)激活后果的血管損害，S1P受體激動劑還具有抗炎性質(zhì)。這樣的免疫抑制和抗炎作用在下列方面是所希望的預(yù)防器官移植后的排斥，治療自身免疫性病癥，以及治療在血管完整性方面具有病因性缺陷的病癥例如急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征和膿毒癥，-參見Groeneveld，A.B.J.2003.Vascular Pharm.39247-256。
鞘氨醇1-磷酸酯是一種由造血細(xì)胞分泌和儲存并由被活化的血小板釋放的生物活性的鞘脂代謝物。Yatomi，Y.，T.Ohmori，G.Rile，F(xiàn).Kazama，H.Okamoto，T.Sano，K.Satoh，S.Kume，G.Tigyi，Y.Igarashi，and Y.Ozaki.2000.Blood.963431-8。其可作為G蛋白-偶合的受體族的激動劑來調(diào)節(jié)細(xì)胞增生、分化、存活、和能動性。Fukushima，N.，I.Ishii，J.J.A.Contos，J.A.Weiner，and J.Chun.2001.Lysophospholipidreceptors.Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41507-34；Hla，T.，M.-J.Lee，N.Ancellin，J.H.Paik，and M.J.Kluk.2001.溶血磷脂受體(Lysophospholipids Receptor).Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.41507-34；Hla，T.，M.-J.Lee，N.Ancellin，J.H.Paik，and M.J.Kluk.2001.溶血磷脂-受體啟示(Lysophospholipids-Receptor revelations).Science.2941875-1878；Spiegel，S.，和S.Milstien.2000.新鞘氨醇-1-磷酸酯受體族的功能(Functions of a new family of sphingosine-1-phosphatereceptors).Biochim.Biophys.Acta.1484107-16；Pyne，S.，和N.Pyne.2000.通過G-蛋白偶合的受體的內(nèi)皮分化基因族發(fā)信號的鞘氨醇1-磷酸酯(Sphingosine 1-phosphate signalling via the endothelialdifferentiation gene family of G-protein coupled receptors).Pharm.&Therapeutics.88115-131。已經(jīng)鑒定出了五種鞘氨醇1-磷酸酯受體(S1P1、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5，也被稱為內(nèi)皮分化基因Edg1、Edg5、Edg3、Edg6、Edg8)，其廣泛分布在細(xì)胞和組織中并且在人和嚙齒動物種屬體內(nèi)被良好保存(見表)。與S1P受體的結(jié)合引起了通過Gq-、Gi/o、G12-、G13-、和Rho-依賴性途徑進(jìn)行的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。已經(jīng)表明配體誘導(dǎo)的S1P1和S1P3的活化促進(jìn)了通過Rac-和Rho-進(jìn)行的血管生成、趨化性、和粘附連接集合，見Lee，M.-J.，S.Thangada，K.P.Claffey，N.Ancellin，C.H.Liu，M.Kluk，M.Volpi，R.I.Sha′afi，和T.Hla.1999.Cell.99301-12。S1P通過以下方式來提高內(nèi)皮屏障完整性經(jīng)由S1P受體，主要是S1P1來裝配皮層肌動蛋白細(xì)胞骨骼結(jié)構(gòu)和加強(qiáng)細(xì)胞細(xì)胞連接以及細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)相互作用-，參見Garcia，J.G.N，F(xiàn).Liu，A.D.Verin，A.Birukova，M.A.Dechert，W.T.Gerthoffer，J.R.Bamburg，D.English，2001.J.Clin.Invest.108689-701，并且S1P受體激動劑，包括FTY720，在小鼠中可以抑制由VEGGF誘導(dǎo)的血管滲透性，參見Sanchez，T.，T.Estrada-Hernandez，J.-H.Paik，M.-T.Wu，K.Venkataraman，V.Brinkmann，K.Claffey，and T.Hla.2003.J.Biol.Chem.27847281-47290。
給動物施用鞘氨醇1-磷酸酯誘導(dǎo)了全身外周血淋巴細(xì)胞螯合到二級淋巴器官中，從而產(chǎn)生了治療學(xué)上有用的免疫抑制，參見Mandala，S.，R.Hajdu，J.Bergstrom，E.Quackenbush，J.Xie，J.Milligan，R.Thornton，G.-J.Shei，D.Card，C.Keohane，M.Rosenbach，J.Hale，C.L.Lynch，K.Rupprecht，W.Parsons，H.Rosen.2002.Science.296346-349。但是，鞘氨醇1-磷酸酯也具有一些限制其作為治療劑的實(shí)用性的心血管和支氣管收縮作用。鞘氨醇1-磷酸酯的靜脈內(nèi)給藥降低了大鼠的心率、心室收縮和血壓，參見Sugiyama，A.，N.N.Aye，Y.Yatomi，Y.Ozaki，and K.Hashimoto.2000.jpn.J.Pharmacol.82338-342。在人氣道平滑肌細(xì)胞中，鞘氨醇1-磷酸酯調(diào)控著收縮、細(xì)胞生長和促進(jìn)支氣管收縮的細(xì)胞因子產(chǎn)生、氣道炎癥和哮喘中的改型，參見Ammit，A.J.，A.T.Hastie，L.C.Edsall，R.K.Hoffman，Y.Amrani，V.P.Krymskaya，S.A.Kane，S.P.Peters，R.B.Penn，S.Spiegel，R.A.Panettieri.Jr.2001，F(xiàn)ASEB J.151212-1214。該不希望出現(xiàn)的鞘氨醇1-磷酸酯的作用與其無選擇性地對所有的S1P受體都具有有效的激動劑活性有關(guān)。
本發(fā)明包括是S1P1/Edg1受體激動劑的選擇性高于S1P3/Edg3受體的化合物。S1P1/Edg1受體選擇性激動劑具有優(yōu)于目前療法的優(yōu)點(diǎn)并且擴(kuò)大了淋巴細(xì)胞螯合劑和血管完整劑的治療窗，治療窗的擴(kuò)大使得可以耐受更高的劑量并且從而改善了其作為單一療法的效力。
雖然免疫抑制劑和抗炎劑的主要應(yīng)用是用于治療骨髓、器官和移植排斥，但是該類化合物的其它應(yīng)用還包括可用于治療關(guān)節(jié)炎，特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胰島素和非胰島素依賴性糖尿病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、炎性腸病、克羅恩氏病、紅斑狼瘡、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、慢性肺病、急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥等等。
因此，本發(fā)明的目的在于提供比現(xiàn)有技術(shù)化合物更安全更有效的免疫抑制劑和血管完整性化合物。通過本文詳細(xì)描述，本發(fā)明的這些和其它目的對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言將是明顯的。
S1P受體的概述
發(fā)明概述本發(fā)明包括式I化合物
及其可藥用鹽。本發(fā)明化合物是S1P1/Edg1受體激動劑并且因此通過調(diào)控白細(xì)胞通量、螯合二級淋巴組織中的淋巴細(xì)胞和提高血管完整性而具有免疫抑制、抗炎和止血活性。本發(fā)明還涉及包含該類化合物的藥物組合物以及治療或預(yù)防方法。
發(fā)明詳述本發(fā)明包括式I化合物 或其可藥用鹽，其中n是0、1或2；m是0、1或2，這樣當(dāng)m是0時，A直接鍵合在式I中所示的氮雜環(huán)丁烷(n＝0)、吡咯烷(n＝1)或哌啶(n＝2)上；R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自-H、-F、C1-C4烷基、C1-C4全氟代烷基、-Cl、-Br、C1-C8烷氧基和-OCF3；R5和R6獨(dú)立地選自-H、-OH、-F、C1-C4烷基和C1-C4全氟代烷基；R7選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基和噻吩基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR8R9、-NO2、苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C2-C6酰氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C1-C6酰氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基；R8和R9獨(dú)立地選自C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基和C1-C6炔基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基，或者R8和R9可以與它們所連接的氮原子一起形成任選含有1或2個氧原子的具有3-8個原子的飽和單環(huán)，所述環(huán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基；X、Y和Z獨(dú)立地選自-C＝、-CH-、-O-、-N＝、-NH-、-N(R10)-和-S-，這樣所得環(huán)是芳雜環(huán)；R10選自C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基和C1-C6炔基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基；A選自-CO2H、-PO3H2、-PO2H2、-SO3H、-CONHSO2R11、-PO(R11)OH、
R11選自C1-C4烷基、苯基、-CH2OH和CH(OH)-苯基；并且每個R12獨(dú)立地選自-H和-CH3。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案包括其中A是-CO2H的式I化合物。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括其中n是1的式I化合物。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括其中m是1的式I化合物。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括定義如下的式I化合物其中X是-N＝，Y是-N＝，且Z是-O-，這樣所形成的環(huán)是1，2，4-二唑。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括定義如下的式I化合物其中R7是苯基，所述苯基任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR7R8、-NO2、苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C2-C6酰氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C1-C6酰氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括式Ia代表的化合物 或其可藥用鹽，其中p是0、1或2；Ra選自苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6環(huán)烷氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6環(huán)烷氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I和-OH；且Rb選自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案包括定義如下的式Ia化合物其中p是0或1，且Rb選自-F、-Cl和-CF3。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案包括定義如下的式Ia化合物其中Ra選自C3-C5烷基、環(huán)戊基、環(huán)己基、C2-C4烷氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個氟取代。
在下列實(shí)施例中進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明。
本發(fā)明還包括一種治療需要該類治療的哺乳動物患者中免疫調(diào)節(jié)異常的方法，所述方法包括以有效治療所述免疫調(diào)節(jié)異常的量給所述患者施用式I化合物。
在這種實(shí)施方案中包括其中所述免疫調(diào)節(jié)異常是選自全身性紅斑狼瘡、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、大皰性類天皰瘡、肉樣瘤病、牛皮癬、自身免疫性肌炎、韋格納氏肉芽腫、魚鱗病、格雷夫斯氏眼病和哮喘的自身免疫性或慢性炎性疾病的上述方法。
在這種實(shí)施方案中還包括其中所述免疫調(diào)節(jié)異常是骨髓或器官移植排斥或移植物抗宿主疾病的上述方法。
在這種實(shí)施方案中還包括其中所述免疫調(diào)節(jié)異常選自下列病癥的上述方法器官或組織的移植、由移植造成的移植物抗宿主疾病、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡在內(nèi)的自身免疫性綜合征、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、變應(yīng)性腦脊髓炎、腎小球性腎炎、包括風(fēng)濕熱和感染后的腎小球性腎炎在內(nèi)的感染后的自身免疫性疾病、炎性和過度增生性皮膚病、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、大皰性表皮松懈癥、蕁麻疹、血管性水腫、結(jié)節(jié)性脈管炎、紅斑、皮膚上的嗜曙紅細(xì)胞增多、紅斑狼瘡、痤瘡、斑禿、角膜結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、與貝切特氏病有關(guān)的葡萄膜炎、角膜炎、皰疹性角膜炎、圓錐形角膜、角膜上皮營養(yǎng)不良(dystrophia epithelialis corneae)、角膜白斑、眼天皰瘡、莫倫氏潰瘍、鞏膜炎、格雷夫斯氏眼病(Graves’opthalmopathy)、伏格特-小柳-原田三氏綜合征、肉樣瘤病、花粉變態(tài)反應(yīng)、可逆性阻塞性氣道疾病、支氣管哮喘、變應(yīng)性哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、慢性或慢性頑固性哮喘、晚期哮喘(late asthma)和氣道高反應(yīng)性、支氣管炎、胃潰瘍、由局部缺血性疾病和血栓形成造成的血管損害、局部缺血性腸疾病、炎性腸病、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱灼傷有關(guān)的小腸損害、腹部疾病、直腸炎、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、肥大細(xì)胞增生病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、偏頭痛、鼻炎、濕疹、間質(zhì)性腎炎、肺出血腎炎綜合征、溶血性尿毒癥綜合征、糖尿病腎病、糖多發(fā)性肌炎、格-巴二氏綜合征、美尼爾氏病、多發(fā)性神經(jīng)炎、多神經(jīng)炎、單神經(jīng)炎、神經(jīng)根病、甲狀腺功能亢進(jìn)、巴塞多氏病、單純性紅細(xì)胞再生障礙、再生障礙性貧血、再生不良性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥、惡性貧血、巨幼紅細(xì)胞貧血、紅細(xì)胞發(fā)生不能、骨質(zhì)疏松癥、肉樣瘤病、纖維化肺、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、皮膚肌炎、尋常性白斑病、尋常性魚鱗病、光變應(yīng)性敏感性、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、動脈硬化、動脈粥樣硬化、大動脈炎綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、非炎性心肌病、硬皮病、韋格納氏壞死性肉芽腫、口腔干燥-風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、肥胖癥、嗜曙紅細(xì)胞性筋膜炎、齦、牙周組織、牙槽骨的損害、substantia ossea dentis、腎小球性腎炎、男性型脫發(fā)或老年性脫發(fā)(通過預(yù)防脫發(fā)或提供頭發(fā)萌芽和/或促進(jìn)頭發(fā)產(chǎn)生和頭發(fā)生長)、肌營養(yǎng)不良、膿皮病和賽雜瑞氏綜合征、阿狄森氏綜合征、在保護(hù)、移植或局部缺血性疾病時發(fā)生的器官的局部缺血-再灌注性損傷、內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎、由藥物或輻射造成的結(jié)腸炎、局部缺血性急性腎功能不全、慢性腎功能不全、由肺-氧或藥物造成的毒素病、肺癌、肺氣腫、白內(nèi)障、鐵塵肺、視網(wǎng)膜色素變性、老年性黃斑變性、vitreal瘢痕形成、角膜強(qiáng)堿燒傷、多形性紅斑皮炎(dermatitiserythema multiforme)、linear IgA ballous dermatitis和cementdermatitis、齒齦炎、牙周炎、膿毒癥、胰腺炎、由環(huán)境污染造成的疾病、衰老、癌發(fā)生、癌轉(zhuǎn)移和高空病、由組胺或白三烯-C4釋放造成的疾病、貝切特氏病、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、硬化性膽管炎、部分肝切除術(shù)、急性肝壞死、由毒素造成的壞死、病毒性肝炎、休克、或缺氧癥、B-病毒肝炎、非-A/非-B型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、肝衰竭、暴發(fā)性肝功能衰竭、晚期發(fā)作的肝衰竭(late-onsethepatic failure)、“acute-on-chronic”肝衰竭、化療作用的強(qiáng)化、巨細(xì)胞病毒感染、HCMV感染、AIDS、癌癥、老年性癡呆、創(chuàng)傷和慢性細(xì)菌感染。
這種實(shí)施方案中還包括其中免疫調(diào)節(jié)異常選自下列病癥的上述方法1)多發(fā)性硬化，2)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，3)全身性紅斑狼瘡，4)牛皮癬，5)移植器官或組織的排斥，6)炎性腸病，
7)淋巴來源的惡性腫瘤，8)急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤以及9)胰島素和非胰島素依賴性糖尿病。
本發(fā)明還包括一種抑制需要免疫抑制的哺乳動物患者中免疫系統(tǒng)的方法，所述方法包括給所述患者施用免疫抑制有效量的式I化合物。
本發(fā)明還包括一種包含式I化合物和可藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明還包括一種治療需要該類治療的哺乳動物患者中呼吸疾病或病癥的方法，所述方法包括以可有效治療所述呼吸疾病或病癥的量給所述患者施用式I化合物。在這種實(shí)施方案中包括其中所述呼吸疾病或病癥選自下列的上述方法哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、嬰兒呼吸窘迫綜合征、咳嗽、嗜酸細(xì)胞性肉芽腫、呼吸道合胞體病毒細(xì)支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、特發(fā)性肺纖維化、急性肺損傷和阻塞性細(xì)支氣管炎組織肺炎(bronchiolitis obliteransorganizing pneumonia)。
本發(fā)明還包括治療在有此需要的患者中涉及血管完整性的疾病或病癥的方法，其中所述疾病或病癥選自血管水腫、結(jié)節(jié)性脈管炎、由缺血性疾病和血栓形成引起的血管損傷、缺血性腸病、炎性腸病、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱燒傷引起的腸損傷、動脈硬化、動脈粥樣硬化、主動脈炎綜合征，在保藏、移植或缺血性疾病期間發(fā)生的缺血-再灌注損傷，內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎、由藥物或放射引起的結(jié)腸炎、缺血性急性腎功能不全、慢性腎功能不全、由肺氧或藥物引起的毒素病、膿毒癥、胰腺炎、由組胺或白三烯-C4釋放引起的疾病、由毒素引起的壞死、病毒性肝炎、休克或缺氧癥、老年癡呆和創(chuàng)傷，所述方法包括給所述患者施用能有效治療疾病或病癥的量的式I化合物。
本發(fā)明還包括治療有此需要的患者中與腦或肺水腫有關(guān)的疾病或病癥的方法，所述方法包括給所述患者施用能有效治療疾病或病癥的量的式I化合物。該實(shí)施方案包括選自下列的疾病或病癥休克、膿毒癥、急性呼吸窘迫綜合征和腦水腫。
在這種實(shí)施方案中還包括其中所述患者還患有呼吸疾病或病癥的上述方法。
在這種實(shí)施方案中還包括其中所述患者還患有心血管疾病或病癥的上述方法。
除非另有說明，使用下列定義來描述本發(fā)明。
當(dāng)?shù)釉诒菊f明書的式中出現(xiàn)時，應(yīng)當(dāng)理解的是存在滿足該氮原子效價的足夠的氫原子或取代基。
術(shù)語“鹵素”或“鹵代”包括F、Cl、Br和I。
術(shù)語“烷基”指的是具有所示碳原子數(shù)的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)及其組合。因此，例如C1-6烷基包括甲基、乙基、丙基、2-丙基、仲-和叔-丁基、丁基、戊基、己基、1，1-二甲基乙基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
術(shù)語“鏈烯基”是指具有所示數(shù)目碳原子的具有至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)或其組合，其中氫可以被另外的碳-碳雙鍵替代。C2-6鏈烯基包括例如乙烯基、丙烯基、1-甲基乙烯基、丁烯基等。
術(shù)語“炔基”是指具有所示數(shù)目碳原子的具有至少一個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)或其組合。C3-6炔基包括例如丙炔基、1-甲基乙炔基、丁炔基等。
術(shù)語“烷氧基”指的是具有所示碳原子數(shù)的直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷氧基。例如，C1-6烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基等。
術(shù)語“烷硫基”指的是具有所示碳原子數(shù)的直鏈、支鏈或環(huán)狀構(gòu)型的烷硫基。例如，C1-6烷氧基包括甲硫基、丙硫基、異丙硫基等。
術(shù)語“環(huán)烷基”指的是具有所示碳原子數(shù)的任選地組合有直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)的單-、二-或三-環(huán)結(jié)構(gòu)。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)庚基、金剛烷基、環(huán)十二烷基甲基、2-乙基-1-二環(huán)[4.4.0]癸基、環(huán)丁基甲基、環(huán)丙基甲基等。
術(shù)語“環(huán)烷氧基”是指通過氧原子與分子連接的如上所定義的環(huán)烷基(環(huán)烷基-O)，并且包括例如環(huán)戊氧基、環(huán)丙基甲氧基等。
術(shù)語“?；笔侵竿ㄟ^除去羥基而衍生自有機(jī)酸的有機(jī)基團(tuán)，并且具有通式R-C(O)-，其中R是直鏈或支鏈烷基，所述阿案卷與羰基一起具有所示碳原子數(shù)目。例如，C2-4?；ㄒ阴；⒈；投□；?。術(shù)語“酰氧基”是指通過氧原子與分子連接的如上所定義的酰基(?；?O)，并且包括例如乙酰氧基等。
短語“R8和R9可以與它們所連接的氮原子一起形成任選含有1或2個氧原子的具有3-8個原子的飽和單環(huán)”是指例如吡咯烷、哌啶、嗎啉、氮雜環(huán)丁烷等。
術(shù)語“全氟代烷基”是指所有氫原子都已經(jīng)被氟原子代替的如上所定義的烷基。
對于本說明書，下列縮寫具有指定的含義Me＝甲基Et＝乙基n-Pr＝正丙基i-Pr＝異丙基n-Bu＝正丁基i-Bu＝異丁基s-Bu＝仲丁基t-Bu＝叔丁基c-Pr＝環(huán)丙基c-Bu＝環(huán)丁基c-Pen＝環(huán)戊基c-Hex＝環(huán)己基術(shù)語“治療”不僅包括治療，患者用于緩解患者疾病或病癥的跡象和癥狀，而且還包括對無癥狀患者進(jìn)行的用于防止所說疾病或病癥開始或阻止其進(jìn)程的預(yù)防性治療。術(shù)語“治療有效量”指的是將引起研究人員、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的組織、系統(tǒng)、動物或人的生物或醫(yī)學(xué)響應(yīng)的藥物或藥學(xué)活性劑的數(shù)量。該術(shù)語還包括研究人員、獸醫(yī)、內(nèi)科醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師尋求的將防止組織、系統(tǒng)、動物或人出現(xiàn)生物學(xué)或醫(yī)學(xué)事件的風(fēng)險予以防止或降低的藥物的量。
這里所述的本發(fā)明包括可藥用的鹽以及水合物?？伤幱玫柠}既包括金屬(無機(jī))鹽又包括有機(jī)鹽；在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，第1418頁(1985)中給出了其目錄。本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的是，適宜鹽形式的選擇是以物理和化學(xué)穩(wěn)定性、可流動性、吸濕性以及溶解度為基礎(chǔ)的。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的那樣，可藥用的鹽非限制性地包括無機(jī)酸的鹽如鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、氫溴化物、以及硝酸鹽或有機(jī)酸的鹽如蘋果酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、甲磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽或撲酸鹽、水楊酸鹽和硬脂酸鹽。相似地，可藥用的陽離子非限制性地包括鈉、鉀、鈣、鋁、鋰和銨(尤其是與仲胺形成的銨鹽)。由于上面所列舉的理由，本發(fā)明優(yōu)選的鹽包括鉀、鈉、鈣和銨鹽。本發(fā)明的范圍內(nèi)還包括式I化合物的結(jié)晶形式、水合物和溶劑化物。
對于本說明書的目的而言，“可藥用的水合物”指的是本發(fā)明化合物與一分子或多分子水一起結(jié)晶從而形成的一種水合的形式。
式I化合物可含有一個或多個不對稱中心，并且可以因此作為外消旋體和外消旋混合物、單獨(dú)對映體、非對映體混合物以及單獨(dú)非對映體存在。本發(fā)明意欲包括式I化合物的所有這樣的異構(gòu)體形式。
本文描述的某些化合物含有烯屬雙鍵，并且除非另有說明，意欲包括E和Z幾何異構(gòu)體。
某些本文描述的化合物可以具有不同的與氫連接的位點(diǎn)，稱為互變異構(gòu)體。這樣的實(shí)例可以是酮及其烯醇形式，稱為酮基-烯醇互變異構(gòu)體。式I化合物包括單獨(dú)的互變異構(gòu)體及其混合物。
式I化合物可以通過例如以下方法分離成對映體的非對映體對從合適的溶劑例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物中分步結(jié)晶。由此獲得的對映體對可以通過常規(guī)方法例如通過使用旋光性酸作為拆分劑來分離成單獨(dú)的立體異構(gòu)體。
或者，通式I化合物的對映體可以通過使用具有已知構(gòu)型的旋光純原料或試劑進(jìn)行立體特異性合成來獲得。
本發(fā)明還包括一種或多種立體異構(gòu)體形式、基本上純形式或立體異構(gòu)體混合物形式的式I化合物。所有這樣的異構(gòu)體都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
由于其S1P1/Edg1激動劑活性，本發(fā)明化合物是用于治療或預(yù)防自身免疫性或慢性炎性疾病的免疫調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明化合物可用于抑制其中免疫抑制狀況井然有序情況中的免疫系統(tǒng)如可用于骨髓、器官或移植排斥、自身免疫性和慢性炎性疾病，包括全身性紅斑狼瘡、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、大皰性類天皰瘡、肉樣瘤病、牛皮癬、自身免疫性肌炎、韋格納氏肉芽腫、魚鱗病、格雷夫斯氏眼病和哮喘。本發(fā)明化合物也可用于提高血管完整性。
本發(fā)明的化合物更具體地可用于治療或預(yù)防選自下列的疾病或病癥器官或組織的移植、由移植造成的移植物抗宿主疾病、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡在內(nèi)的自身免疫性綜合征、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、變應(yīng)性腦脊髓炎、腎小球性腎炎、包括風(fēng)濕熱和感染后的腎小球性腎炎在內(nèi)的感染后的自身免疫性疾病、炎性和過度增生性皮膚病、牛皮癬，特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、大皰性表皮松懈癥、蕁麻疹、血管性水腫、結(jié)節(jié)性脈管炎、紅斑、皮膚上的嗜曙紅細(xì)胞增多、紅斑狼瘡、痤瘡、斑禿、角膜結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、與貝切特氏病有關(guān)的葡萄膜炎、角膜炎、皰疹性角膜炎、圓錐形角膜、角膜上皮營養(yǎng)不良(dystrophiaepithelialis corneae)、角膜白斑、眼天皰瘡、莫倫氏潰瘍、鞏膜炎、格雷夫斯氏眼病(Graves’opthalmopathy)、伏格特-小柳-原田三氏綜合征、肉樣瘤病、花粉變態(tài)反應(yīng)、可逆性阻塞性氣道疾病、支氣管哮喘、變應(yīng)性哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、慢性或慢性頑固性哮喘、晚期哮喘和氣道高反應(yīng)性、支氣管炎、胃潰瘍、由局部缺血性疾病和血栓形成造成的血管損害、局部缺血性腸疾病、炎性腸病、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱灼傷有關(guān)的小腸損害、腹部疾病、直腸炎、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、肥大細(xì)胞增生病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、偏頭痛、鼻炎、濕疹、間質(zhì)性腎炎、肺出血腎炎綜合征、溶血性尿毒癥綜合征、糖尿病腎病、糖多發(fā)性肌炎、格-巴二氏綜合征、美尼爾氏病、多發(fā)性神經(jīng)炎、多神經(jīng)炎、單神經(jīng)炎、神經(jīng)根病、甲狀腺功能亢進(jìn)、巴塞多氏病、單純性紅細(xì)胞再生障礙、再生障礙性貧血、再生不良性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥、惡性貧血、巨幼紅細(xì)胞貧血、紅細(xì)胞發(fā)生不能、骨質(zhì)疏松癥、肉樣瘤病、纖維化肺、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、皮膚肌炎、尋常性白斑病、尋常性魚鱗病、光變應(yīng)性敏感性、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、動脈硬化、動脈粥樣硬化、大動脈炎綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、非炎性心肌病、硬皮病、韋格納氏壞死性肉芽腫、口腔干燥-風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、肥胖癥、嗜曙紅細(xì)胞性筋膜炎、齦、牙周組織、牙槽骨的損害、substantiaossea dentis、腎小球性腎炎、男性型脫發(fā)或老年性脫發(fā)(通過預(yù)防脫發(fā)或提供頭發(fā)萌芽和/或促進(jìn)頭發(fā)產(chǎn)生和頭發(fā)生長)、肌營養(yǎng)不良、膿皮病和賽雜瑞氏綜合征、阿狄森氏綜合征、在保護(hù)、移植或局部缺血性疾病時發(fā)生的器官的局部缺血-再灌注性損傷、內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎、由藥物或輻射造成的結(jié)腸炎、局部缺血性急性腎功能不全、慢性腎功能不全、由肺-氧或藥物造成的毒素病、肺癌、肺氣腫、白內(nèi)障、鐵塵肺、視網(wǎng)膜色素變性、老年性黃斑變性、vitreal瘢痕形成、，角膜強(qiáng)堿燒傷、多形性紅斑皮炎(dermatitis erythema multiforme)、linearIgA ballous dermatitis和cement dermatitis、齒齦炎、牙周炎、膿毒癥、胰腺炎、由環(huán)境污染造成的疾病、衰老、癌發(fā)生、癌轉(zhuǎn)移和由組胺或白三烯-C4釋放造成的高空病、貝切特氏病、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、硬化性膽管炎、部分肝切除術(shù)、急性肝壞死、由毒素造成的壞死、病毒性肝炎、休克、或缺氧癥、B-病毒肝炎、非-A/非-B型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、肝衰竭、暴發(fā)性肝功能衰竭、晚期發(fā)作的肝衰竭、“acute-on-chronic”肝衰竭、化療作用的強(qiáng)化、巨細(xì)胞病毒感染、HCMV感染、AIDS、癌癥、老年性癡呆、創(chuàng)傷和慢性細(xì)菌感染的。
本發(fā)明的化合物還可用于治療或預(yù)防阿爾茨海默氏病。
本發(fā)明還包括一種預(yù)防或治療需要該類預(yù)防或治療的哺乳動物患者對器官或組織移植的耐受性或移植排斥的方法，其包括施用治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案是一種抑制需要該類抑制的哺乳動物患者的免疫系統(tǒng)的方法，所述方法包括給該患者施用可抑制免疫系統(tǒng)量的式I化合物。
這里所述的方法最特定地包括一種治療或預(yù)防骨髓或器官移植排斥的方法，所述方法包括以可以有效治療或預(yù)防骨髓或器官移植排斥的量給需要該類治療或預(yù)防的哺乳動物患者施用式I化合物或其可藥用的鹽或其水合物。
本發(fā)明化合物還可用于治療呼吸疾病或病癥，如哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、成人呼吸窘迫綜合征、嬰兒呼吸窘迫綜合征、咳嗽、嗜酸細(xì)胞性肉芽腫、呼吸道合胞體病毒細(xì)支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、特發(fā)性肺纖維化、急性肺損傷和阻塞性細(xì)支氣管炎組織肺炎。
此外，本發(fā)明化合物還是具有超過對S1P3/Edg3受體選擇性的S1P1/Edg1受體選擇性激動劑。Edg1選擇性激動劑具有優(yōu)于目前療法的優(yōu)點(diǎn)并且擴(kuò)大了淋巴細(xì)胞螯合劑的治療窗，治療窗的擴(kuò)大使得可以耐受更高的劑量并且從而改善了其作為單一療法的效力。
本發(fā)明還包括包含可藥用載體和式I化合物或其可藥用鹽或水合物的藥物制劑。所說制劑一種優(yōu)選的實(shí)施方案是一種其中還包括第二種免疫抑制劑的制劑。該類第二種免疫抑制劑的實(shí)例非限制性地包括硫唑嘌呤、布喹那鈉、脫氧精胍菌素、mizaribine、霉酚酸嗎啉酯、環(huán)孢菌素、FK-506、雷帕霉素、FTY720和ISAtx247(Isotechnika)。本發(fā)明還包括將式I化合物與包括一種或多種上述物質(zhì)在內(nèi)的第二種免疫抑制劑共同給藥的方法。
本發(fā)明的化合物包括其鹽和水合物可用于治療自身免疫性疾病，包括用于預(yù)防骨髓移植物、外來器官移植物的排斥和/或相關(guān)的折磨、疾病和病患。
可以用可使該活性成分化合物與溫血動物體內(nèi)的作用部位相接觸的任何方法來將本發(fā)明的化合物進(jìn)行給藥。例如，可以將其口服給藥、局部給藥，包括經(jīng)皮給藥、眼睛給藥、頰給藥、鼻內(nèi)給藥、吸入給藥、陰道內(nèi)給藥、直腸給藥、腦池內(nèi)給藥和胃腸外給藥。這里所用的術(shù)語“胃腸外”指的是包括皮下、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)注射或輸入、胸骨內(nèi)和腹膜內(nèi)的給藥模式。
可以用任何適于以單個治療劑或治療劑聯(lián)合形式與藥物聯(lián)合應(yīng)用的任何可獲得的方便手段來將所述化合物進(jìn)行給藥。其可以被單獨(dú)給藥，但是通常是與在所選擇的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐的基礎(chǔ)上所選擇的藥用載體一起進(jìn)行給藥。
給藥劑量將取決于接受者的年齡、健康和體重、疾病的程度、如果存在的話的并行治療的種類、所需的治療頻率和作用性質(zhì)?；钚猿煞只衔锏娜談┝客ǔ槊刻旒s0.1-2000毫克。一般地，每天一次或分多次應(yīng)用的1至100毫克活性化合物可有效獲得所需的結(jié)果。這些劑量是治療自身免疫性疾病、預(yù)防外來器官移植物的排斥和/或相關(guān)的痛苦、疾病和病患的有效量。
所述活性成分可以以固體劑型或液體劑型形式被口服給藥，所述固體劑型如膠囊、片劑、錠劑、糖錠劑、顆粒和粉劑，所述液體劑型如酏劑、糖漿劑、乳劑、分散體、和混懸液。所述活性成分還可以以無菌液體劑型如分散體、混懸液或溶液的形式被胃腸外給藥?？梢杂糜趯⑺f活性成分進(jìn)行給藥的其它劑型還有用于局部給藥的軟膏、乳膏、滴劑、經(jīng)皮貼劑或粉；用于眼睛給藥的眼用溶液或混懸液形式，即滴眼液；用于吸入或鼻內(nèi)給藥的氣霧劑噴霧劑或粉末組合物、或用于直腸或陰道給藥的乳膏、軟膏、噴霧或栓劑。
明膠膠囊包含活性成分和粉狀載體，如乳糖、淀粉、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、硬脂酸等等。還可以用相似的稀釋劑來制備壓縮片。片劑和膠囊都可以被制備成用于在數(shù)小時內(nèi)提供藥物的持續(xù)釋放的緩釋產(chǎn)品?？梢詫嚎s片包糖衣或包膜衣以掩蓋任何令人不愉快的味道和保護(hù)該片劑不受大氣影響，或者可以對其包腸衣以選擇性在胃腸道內(nèi)崩解。
用于口服給藥的液體劑型可包含著色劑和矯味劑以增加患者的接受性。
一般而言，水、適宜的油、鹽水、水性右旋糖(葡萄糖)、以及相關(guān)的糖溶液和二醇如丙二醇或聚乙二醇是適用于胃腸外溶液的載體。用于胃腸外給藥的溶液優(yōu)選地包含活性成分的水溶性鹽、適宜的穩(wěn)定劑、和如果需要的話的緩沖物質(zhì)。適宜的抗氧化劑例如單獨(dú)或聯(lián)合使用的亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、或抗壞血酸，是適宜的穩(wěn)定劑。還可以使用枸櫞酸以及其鹽和EDTA鈉。此外，胃腸外溶液還可以包含防腐劑，如苯扎氯銨、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯、和氯丁醇。
在Remington′s Pharmaceutical Sciences，A.Osol(本領(lǐng)域中的一種標(biāo)準(zhǔn)參考教科書)中對適宜的藥用載體進(jìn)行了描述。
對于吸入給藥而言，本發(fā)明的化合物可以方便地從加壓包裝或噴霧器中以氣霧劑噴霧形式被傳遞。該化合物還可以以進(jìn)行了配制的粉末形式被傳遞，并且可以在吹入粉末吸入器裝置的幫助下來吸入所述粉末組合物。對于吸入而言，優(yōu)選的傳遞系統(tǒng)是一種計(jì)量劑量的吸入(MDI)氣霧劑，其可以被制備成式I的化合物在適宜推進(jìn)劑如碳氟化合物或烴中的混懸液或溶液的形式。
對于眼睛給藥而言，眼用制劑可以用在適宜的眼用基質(zhì)中具有適宜重量百分比式I化合物的溶液或混懸液來進(jìn)行制備，從而使得所述化合物可以與眼睛表面接觸足夠的時間從而使得該化合物可以滲透到眼睛的角膜和內(nèi)部區(qū)域中。
可用于將本發(fā)明化合物進(jìn)行給藥的藥物劑型如下所述膠囊通過用100毫克粉狀活性成分、150毫克乳糖、50毫克纖維素和6毫克硬脂酸鎂對各標(biāo)準(zhǔn)的兩部分式硬明膠膠囊進(jìn)行填充來制備許多單位膠囊。
軟明膠膠囊制備活性成分在可消化的油如豆油、棉子油或橄欖油中的混合物并通過容積泵將其注射到明膠中從而形成包含100毫克活性成分的軟明膠膠囊。對這些膠囊進(jìn)行洗滌和干燥。
片劑用常規(guī)方法制備許多片劑從而使得該劑量單位為100毫克活性成分、0.2毫克膠體二氧化硅、5毫克硬脂酸鎂、275毫克微晶纖維素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖?？梢詰?yīng)用適宜的包衣以增加其適口性或延遲吸收。
可注射的制劑通過將1.5％重量的活性成分在10％體積的丙二醇中進(jìn)行攪拌來制備一種適于注射給藥的胃腸外組合物。用注射用水將該溶液的體積調(diào)節(jié)至足量并對其進(jìn)行滅菌。
混懸液制備一種用于口服給藥的水性混懸液，從而使得每5毫升混懸液包含100毫克分割得很細(xì)的活性成分、100毫克羧甲基纖維素鈉、5毫克苯甲酸鈉、1.0克山梨醇溶液U.S.P.和0.025毫升香草醛。
當(dāng)本發(fā)明的化合物被逐步給藥或者與另一種治療劑聯(lián)用時，通常可以使用相同的劑型。當(dāng)這些藥物以物理組合形式被給藥時，可以根據(jù)所合并藥物的相容性來對劑型和給藥途徑進(jìn)行選擇。因此，術(shù)語共同給藥被理解為包括將兩種活性劑相伴給藥或相繼給藥，或者以兩種活性組分固定劑量組合物的形式進(jìn)行給藥。
合成方法在下列反應(yīng)方案和實(shí)施例中描述了制備本發(fā)明化合物的幾種方法。原料和中間體是由已知方法或者如本文所示制得的。
反應(yīng)方案1描繪了制備本發(fā)明中通式結(jié)構(gòu)1-11的(5-(1，2，4-二唑-3-基)苯基吡咯烷-3-基)乙酸化合物的適宜方法。將適當(dāng)取代的茴香醚1-1用焦谷氨酸1-2于高溫在三氟甲磺酸酐(Bull.Korean Chem.Soc.1999，20，1253-1254)或五氧化磷或甲磺酸存在下處理(Tetrahedron Lett.1989，30，7057-7060)，獲得內(nèi)酰胺1-3。1-3的5-甲氧基轉(zhuǎn)化成1-4的腈可以在三步驟順序中完成1)在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，使用強(qiáng)路易斯酸例如TMSI、AlCl3、BCl3或BBr3將1-3去甲基化，獲得苯酚；2)在合適的溶劑例如二氯甲烷、二氯乙烷、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺中，在合適的堿例如N，N-二異丙基乙胺、三乙胺、吡啶或二甲基吡啶存在下，使用三氟甲磺酸酐、2-(N，N-二(三氟甲基磺?；?氨基)-5-氯吡啶或N-苯基-二(三氟甲磺酰亞胺)形成三氟甲烷磺酸酯(即三氟甲磺酸酯)；和3)在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如四氫呋喃、二氧雜環(huán)己烷、N-甲基吡咯烷酮或N，N-二甲基甲酰胺中，將該三氟甲磺酸酯用氰化鋅或氰化銅以及采用合適的配體例如三苯基膦或1，1’-二(二苯基膦基)二茂鐵的鈀催化劑(0)處理。在兩步驟順序中實(shí)現(xiàn)烯丙基的引入以提供1-51)將1-4的內(nèi)酰胺用合適的保護(hù)基(P)例如Boc、Cbz、Fmoc或三氟乙酰基保護(hù)；和2)將所得N-保護(hù)的內(nèi)酰胺用強(qiáng)堿例如N，N-二異丙基氨基鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨基鉀、二(三甲基甲硅烷基)氨基鈉或氫化鈉處理，然后加入烯丙型親電子試劑?？梢垣@得反式和順式加成物的混合物，并且這兩種立體異構(gòu)體可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法例如硅膠色譜法、HPLC或結(jié)晶而容易地分離。當(dāng)采用烯丙基碘和N，N-二異丙基氨基鋰時，可主要形成反式加成物。順式加成物可通過從反應(yīng)混合物中分離或者使用上述強(qiáng)堿將反式加成物差向異構(gòu)化而容易地獲得。1-5的烯烴轉(zhuǎn)化成1-6的酯可在兩步驟順序中實(shí)現(xiàn)1)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將1-5的烯烴氧化裂解成羧酸，所述方法已經(jīng)在文獻(xiàn)中綜述(參見March，J.，“Oxidative Cleavage of Double Bonds and Aromatic Rings”，pp.1181-1183 in Advanced Organic Chemistry，John Wiley & Sons，1992)；和2)在強(qiáng)酸例如H2SO4或HCl存在下，使用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷、重氮甲烷或者M(jìn)eOH或EtOH將所得羧酸酯化，獲得1-6。除去保護(hù)基P可以可以根據(jù)P的化學(xué)性質(zhì)來完成。例如，如果P是Boc基團(tuán)，則使用強(qiáng)酸例如三氟乙酸或鹽酸將1-6水解，生成內(nèi)酰胺1-7。在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如MeOH或EtOH中，在合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸氫鈉存在下，用羥基胺鹽酸鹽處理腈1-7，獲得脒肟1-8，在合適的堿和溶劑存在下將其用活化羧酸處理，獲得通式1-9的N-酰氧基脒。在該反應(yīng)中的羧酸可以通過以下方式進(jìn)行用于?；幕罨谌軇├?，2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、THF、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮中，在合適的堿(如果需要的話)例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺或碳酸氫鈉存在下，用試劑例如N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(EDC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、1，1’-羰基二咪唑或二(2-氧代-3-唑烷基)膦酰氯將其活化?；蛘撸梢栽谏鲜鰤A和溶劑存在下使用酰氯、酸酐、酰基咪唑或五氟苯基羧酸酯來提供1-9。中間體1-9可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法例如硅膠色譜、HPLC或結(jié)晶來進(jìn)行分離，并且在隨后的步驟中，通過在隨后的步驟中，在合適的溶劑例如1，2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、THF、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮中溫?zé)醽憝h(huán)合/脫水，以生成通式1-10的1，2，4-二唑。將1-9轉(zhuǎn)化成1-10可需要加入合適的堿例如吡啶、N’N-二異丙基乙胺或氟化四丁基銨。不分離N-酰氧基脒1-9可能是更方便或可取的，這樣1-8轉(zhuǎn)化成1-10可以作為連續(xù)方法來進(jìn)行。制備1，2，4-二唑的其它方法是與本發(fā)明潛在相關(guān)的，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，已經(jīng)在文獻(xiàn)中綜述(參見Clapp，L.B.，“1，2，3-和1，2，4-二唑”，pp.366-91，ComprehensiveHeterocyclic Chemistry，Volume 6，Potts，K.T.，Editor，Pergamon Press，1984)。最終的化合物1-11可以由1-10在三步順序中獲得1)在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，使用四氟硼酸三甲基氧、甲磺酰氟或硫酸二甲酯將1-10的內(nèi)酰胺轉(zhuǎn)化成亞氨基醚；2)在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，于4-5的pH范圍內(nèi)(如果需要的話)，使用合適的還原劑例如氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉將亞氨基醚還原；和3)根據(jù)-CO2A的化學(xué)結(jié)構(gòu)，將羧酸酯水解成羧酸(即-CO2A→-CO2H)。這樣的代表性實(shí)例包括(但不限于)如果-A是-CH3或-CH2CH3，則在室溫或室溫以上的溫度，在合適的助溶劑例如甲醇、乙醇、二氧雜環(huán)己烷或THF中，用氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀來進(jìn)行處理，以生成1-11。
反應(yīng)方案1 反應(yīng)方案2描述了制備脒肟中間體例如2-2、2-4和2-6的3種方法。這些中間體可以以類似于反應(yīng)方案1的中間體1-8的方式，來與羧酸或活化羧酸稠合以形成1，2，4-二唑中間體，例如反應(yīng)方案1中的1-10，然后可以按照類似于反應(yīng)方案1中描述的方法來進(jìn)行合適的官能團(tuán)轉(zhuǎn)化，以生成本發(fā)明中描述的通式1-11的化合物。根據(jù)P的化學(xué)性質(zhì)，1-5的保護(hù)基P的除去可以在酸性或堿性條件下完成(反應(yīng)方案2-1)。例如，如果P是Boc基團(tuán)，則使用強(qiáng)酸例如三氟乙酸或鹽酸將1-5水解，生成內(nèi)酰胺2-1。在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如MeOH或EtOH中，在合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸氫鈉存在下，用羥基胺鹽酸鹽處理內(nèi)酰胺2-1，獲得脒肟2-2。然后可以使用類似于反應(yīng)方案1中描述的用于將1-8轉(zhuǎn)化成1-11的適當(dāng)方法的組合，將脒肟2-2(以及在本反應(yīng)方案中列出的其它脒肟)轉(zhuǎn)化成如本發(fā)明所述的化合物。另一方面，還可以在三步順序中將內(nèi)酰胺2-1轉(zhuǎn)化成保護(hù)的吡咯烷1)在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，使用四氟硼酸三甲基氧、甲磺酰氟或硫酸二甲酯將2-1的內(nèi)酰胺轉(zhuǎn)化成亞氨基醚；2)在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，于4-5的pH范圍內(nèi)(如果需要的話)，使用合適的還原劑例如氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉將亞氨基醚還原；和3)將所得吡咯烷用合適的保護(hù)基(P’)例如Boc、Cbz、Fmoc或三氟乙?；Ｗo(hù)(反應(yīng)方案2-2)。然后在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如MeOH或EtOH中，在合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸氫鈉存在下，用羥基胺鹽酸鹽處理吡咯烷2-3，獲得脒肟2-4。類似地，在四步驟順序中將N-保護(hù)的內(nèi)酰胺1-6轉(zhuǎn)化成N-保護(hù)的吡咯烷2-5(反應(yīng)方案2-3)1)根據(jù)P的化學(xué)性質(zhì)，可如上所述在堿性或酸性條件下完成1-6的保護(hù)基P的除去(反應(yīng)方案2-1)；2)在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，使用四氟硼酸三甲基氧、甲磺酰氟或硫酸二甲酯將所得內(nèi)酰胺轉(zhuǎn)化成亞氨基醚；3)在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，于4-5的pH范圍內(nèi)(如果需要的話)，使用合適的還原劑例如氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉將亞氨基醚還原；和4)將所得吡咯烷用合適的保護(hù)基(P’)例如Boc、Cbz、Fmoc或三氟乙?；Ｗo(hù)。最后，在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如MeOH或EtOH中，在合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、碳酸鈉、碳酸鉀或碳酸氫鈉存在下，用羥基胺鹽酸鹽處理吡咯烷2-5，獲得脒肟2-6。
反應(yīng)方案2 按照類似于反應(yīng)方案1的1-3中描述的方法，反應(yīng)方案3描繪了合成5-芳基-吡咯烷酮或6-芳基-哌啶酮的兩種不同方法。首先，在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，在合適的路易斯酸例如三氯化鋁、氯化鐵、氯化鋅或三氟化硼存在下，將適當(dāng)取代的茴香醚1-1用琥珀酸酐或谷氨酸酐3-1?；?，生成酮基羧酸，然后在0℃或0℃以上，在合適的酸例如四氟硼酸、鹽酸或濃硫酸存在下，將其用甲醇處理，生成甲酯3-2(反應(yīng)方案3-1)。在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，在合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀或乙酸鈉存在下，將酮3-2用羥基胺鹽酸鹽處理，生成酮肟3-3。在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或乙酸中，在質(zhì)子酸例如鹽酸或乙酸(如果需要的話)存在下，使用合適的催化劑例如披鈀碳、以碳為載體的氫氧化鈀、氧化鉑(IV)或阮內(nèi)鎳，將酮肟3-3氫化，生成胺，然后在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如THF、醚、吡啶或甲苯中，將該胺用合適的堿例如三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、吡啶、二甲基吡啶、碳酸鉀或碳酸鈉處理，以生成類似于1-3的吡咯烷酮或哌啶酮?；蛘撸蓪⑦m當(dāng)取代的苯基鹵化鎂與5-乙氧基-2-吡咯烷酮(Org.Prep.Proc.Int.1993，25，255-258)或6-乙氧基-2-哌啶酮(J.Heterocyclic Chem.1970，7，615-622)反應(yīng)，以分別生成類似于1-3的吡咯烷酮或哌啶酮。格式試劑3-4可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制得，并且已經(jīng)綜述在文獻(xiàn)中(參見March，J.，“Aliphatic ElectrophilicSubstitution”，pp.622-625 in Advanced Organic Chemistry，John Wiley& Sons，1992，and Knochel，P.等人，“Functionalized Main-GroupOrganometallics for Organic Synthesis”Pure Appl.Chem.2002，74，11-17)。R1至R4和R12是與反應(yīng)條件相容的官能團(tuán)，并且使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法可以很容易地將后者轉(zhuǎn)化成脒肟來用于隨后的二唑的合成。
反應(yīng)方案3 反應(yīng)方案4描繪了將乙酸官能團(tuán)引入吡咯烷酮或哌啶酮環(huán)內(nèi)的三種方法。首先，在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如二氯甲烷、二氯乙烷、THF、醚或甲苯中，可將適當(dāng)取代的5-芳基-吡咯烷酮或6-芳基-哌啶酮4-1用強(qiáng)堿例如N，N-二異丙基氨基鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨基鉀、二(三甲基甲硅烷基)氨基鈉或氫化鈉處理，然后加入2-鹵代乙酸烷基酯或2-三氟磺酰氧基乙酸烷基酯，其中烷基可以是甲基、乙基或叔丁基，并且鹵素可以是氯、溴或碘，獲得4-2(反應(yīng)方案4-1)。內(nèi)酰胺4-2轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知并且類似于反應(yīng)方案1酯描述的方法來完成。或者，可以在室溫，在合適的溶劑例如二氯甲烷、二氯乙烷、THF、醚或甲苯中，將吡咯烷酮或哌啶酮4-1用上述強(qiáng)堿處理，然后加入氯甲酸烷基酯，其中烷基可以是甲基、乙基或異丙基，獲得4-3?？梢栽谌襟E順序中將吡咯烷酮或哌啶酮4-3轉(zhuǎn)化成吡咯烷或哌啶4-4(反應(yīng)方案4-2)1)在合適的溶劑例如二氯甲烷或二氯乙烷中，使用四氟硼酸三甲基氧、甲磺酰氟或硫酸二甲酯將4-3的內(nèi)酰胺轉(zhuǎn)化成亞氨基醚；2)在合適的溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，于4-5的pH范圍內(nèi)(如果需要的話)，使用合適的還原劑例如氰基硼氫化鈉或硼氫化鈉將亞氨基醚還原；和3)將所得吡咯烷用合適的保護(hù)基(P’)例如Boc、Cbz、Fmoc或三氟乙?；Ｗo(hù)。4-4的酯的還原可以在低溫下，在合適的溶劑例如二氯甲烷、二氯乙烷、甲苯、THF或醚中，使用合適的還原劑例如氫化鋰鋁、氫化二異丁基鋁或三乙基硼氫化鋰來實(shí)現(xiàn)?？梢栽趦刹襟E順序中將4-5的羥基轉(zhuǎn)化成氰化物4-61)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，將羥基轉(zhuǎn)化成合適的離去基團(tuán)例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯、溴化物或碘化物；和2)在室溫或室溫以上溫度，在合適的溶劑例如甲基亞砜、N，N-二甲基甲酰胺或丙酮中，使用氰化鈉、氰化鉀或氰化四丁基銨將所得離去基團(tuán)置換。4-6的氰化物基團(tuán)的水解可以在高溫下，在合適的助溶劑例如甲醇、乙醇或異丙醇中，使用氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液來完成。最后，可以在合適的溶劑例如二氯甲烷、二氯乙烷、THF、醚或甲苯中，將吡咯烷酮或哌啶酮4-1用上述強(qiáng)堿處理，然后加入醛或酮，之后加入合適的質(zhì)子酸例如鹽酸，獲得4-8(反應(yīng)方案4-3)。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的在反應(yīng)方案1和反應(yīng)方案4中描述的方法可很容易地將羥基轉(zhuǎn)化成羧酸。
反應(yīng)方案4 最后，反應(yīng)方案5描繪了兩種雜[2+3]環(huán)加成方法，以制備2-芳基-4-吡咯烷，該吡咯烷具有可容易地轉(zhuǎn)化成乙酸的官能團(tuán)?？梢栽诿芊獾姆磻?yīng)管(如果需要的話)中，在高溫下，在合適的溶劑例如乙腈、二氯甲烷、二氯乙烷、苯、甲苯或二甲苯中，將6，6-二甲基-4，8-二氧雜-1-亞甲基螺[2，5]辛烷5-1與適當(dāng)取代的苯甲醛O-甲基肟5-2反應(yīng)，生成烯酮縮醇5-3(J.Org.Chem.1998，63，1694-1703)。在合適的溶劑例如THF或乙腈中，在合適的質(zhì)子酸例如乙酸或鹽酸的水溶液存在下來完成烯酮縮醇5-3的水解。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法可將吡咯烷5-4轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。另一方面，可以在高溫下，在合適的溶劑例如THF或二氧雜環(huán)己烷中，在采用合適的配體例如三苯基膦或亞磷酸三異丙酯的鈀(0)催化劑存在下，將N-甲苯磺?；鶃啺?-5與乙酸((三甲基甲硅烷基)甲基)烯丙基酯5-6反應(yīng)(J.Am.Chem.Soc.1993，115，6636-6645)?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法將吡咯烷5-7轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物。
反應(yīng)方案5 代表性實(shí)施例如下所述舉例說明本發(fā)明化合物一般方法對于水分或空氣敏感的反應(yīng)是用無水溶劑和試劑在氮?dú)饣驓鍤庀逻M(jìn)行的。反應(yīng)進(jìn)程是通過LC-MS或分析薄層色譜(TLC)確定的，薄層色譜是用E.Merck預(yù)涂布TLC平板，硅膠60F-254，層厚0.25mm進(jìn)行的。溶液的濃縮是用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于減壓條件下進(jìn)行的?？焖偕V法是用Biotage Flash Chromatography裝置(Dyax Corp.)在硅膠(32-63mM，60孔徑)上在預(yù)先填充的指定尺寸筒中進(jìn)行的。除非另有說明，1H NMR光譜是在CDCl3溶液中在500MHz光譜計(jì)上獲得的?；瘜W(xué)位移是以百萬份數(shù)報道的。在CD3Cl溶液中，使用四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)，在CD3OD溶液中，使用殘余CH3OH峰或TMS作為內(nèi)標(biāo)。偶聯(lián)常數(shù)(J)是以赫茲(Hz)報道的?？s寫乙酸乙酯(EtOAc)，乙醚(醚或Et2O)，三乙胺(TEA)，N，N-二異丙基乙胺(DIEA)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，四氫呋喃(THF)，三氟乙酸(TFA)，飽和水溶液(飽和)，室溫(rt)，小時(s)(h或hr)，和分鐘(min)。高效液相色譜(HPLC)是在ADV731020 100×20mm柱上進(jìn)行的，梯度為10∶90-95∶5 v/vCH3CN/H2O+v0.05％TFA，23分鐘，保持在95∶5 v/v CH3CN/H2O+0.05％TFA，7分鐘；10mL/分鐘，254nm。
制備脒肟中間體脒肟1反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯步驟A5-(4-三氟甲磺?；趸交?-2-吡咯烷酮把DIEA (2.89mL，16.6mmol)加到5-(4-羥基苯基)-2-吡咯烷酮(1.47g，8.30mmol)和N-苯基三氟甲磺酰亞胺(4.45g，12.45mmol)在10mLDMF的溶液中，并將該溶液于室溫?cái)嚢柽^夜。將該反應(yīng)混合物用EtOAc(100mL)洗滌，并用鹽水(50mL)、H2O(3×50mL)和鹽水(50mL)洗滌。將有機(jī)層分離，用MgSO4干燥，并濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用EtOAc作為洗脫劑，獲得2.45g(96％)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ1.90-1.98(m，1H)，2.38-2.51(m，2H)，2.57-2.65(m，1H)，4.81(t，J＝7.1，1H)，6.92(br.s，1H)，7.27-7.30(m，2H)，7.38-7.42(m，2H).
步驟B5-(4-氰基苯基)-2-吡咯烷酮將5-(4-三氟甲磺?；趸交?-2-吡咯烷酮(2.45g，8.22mmol)、四(三苯基膦)鈀(475mg，0.41mmol)和氰化鋅(1.45g，12.3mmol)在10mLDMF中的溶液用氮?dú)獯祾呷危缓笥?0℃攪拌。3小時后，將該化合物冷卻至室溫，用EtOAc(10mL)稀釋，并通過硅藻土餅過濾。用EtOAc洗滌固體，合并濾液并濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用9∶1 v/v EtOAc/CH3OH作為洗脫劑，獲得含有微量DMF的2.68g(100％)本標(biāo)題化合物1H NMR(CD3OD)δ1.90-1.97(m，1H)，2.43-2.51(m，2H)，2.60-2.67(m，1H)，4.85(t，J＝7.2，1H)，7.41(d，J＝8.8，2H)，7.65(d，J＝8.5，2H).
步驟CN-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-吡咯烷酮把4-(二甲基氨基)吡啶(50mg，0.41mmol)加到上述腈(2.68g，8.22mmol)和二碳酸二叔丁酯(3.59g，16.4mmol)向20mL CH2Cl2內(nèi)的溶液中。將該混合物于室溫?cái)嚢?，然后濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用9∶11 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得1.16g(74％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.30(s，9H)，1.82-1.89(m，1H)，2.48-2.69(m，3H)，5.19(dd，J＝4.2，8.3，1H)，7.35(d，J＝8.2，2H)，7.68(d，J＝8.3，2H).
步驟D反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮把剛制備的二異丙基氨基化鋰(2.80mmol)在10mL THF中的溶液于-78℃滴加到N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-吡咯烷酮(763mg，2.67mmol)在10mL THF內(nèi)的溶液中。于-78℃攪拌1小時后，加入烯丙基碘(488μL，5.33mmol)。將該混合物在-78℃攪拌1小時，然后用5.0mL飽和NH4Cl溶液中止。把該混合物倒入鹽水(20mL)和CH2Cl2(20mL)的混合物中，分離水層并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶4 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得745mg(86％)本標(biāo)題化合物1HNMRδ1.35(s，9H)，1.99-2.05(m，1H)，2.21-2.29(m，1H)，2.63-2.76(m，2H)，5.06-5.11(m，2H)，5.17-5.20(m，1H)，5.68-5.77(m，1H)，7.32(d，J＝8.2，2H)，7.67(d，J＝8.4，2H).
步驟E反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸把氯化釕(III)水合物(3.5mg，0.02mmol)加到反式N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮(252mg，0.77mmol)和高碘酸鈉(744mg，3.48mmol)在2∶2∶3 v/v/v CCl4/CH3CN/H2O的混合溶劑(14.0mL)內(nèi)的溶液中。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時后，然后在H2O(20mL)和CH2Cl2(20mL)之間分配。將水層分離并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制酸，為無色漿液，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
步驟F反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯把(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M在己烷中的溶液，580μL，1.16mmol)加到上述粗制酸在7∶2 v/v的苯/CH3OH的混合溶劑中的溶液(18mL)內(nèi)。30分鐘后，將該反應(yīng)混合物濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用9∶11 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得261mg(94％兩步)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ1.36(s，9H)，2.21(ddd，J＝1.1，8.7，13.0，1H)，2.29-2.36(m，1H)，2.52(dd，J＝8.7，17.2，1H)，2.92(dd，J＝4.2，17.1，1H)，3.02-3.06(m，1H)，3.68(s，3H)，5.24(d，J＝8.4，1H)，7.32(d，J＝8.2，2H)，7.68(d，J＝8.5，2H).
步驟G反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯將上述甲基酯(261mg，0.73mmol)在10mL 20％TFA在CH2Cl2中的溶液于室溫?cái)嚢?小時。將該混合物濃縮，并把殘余物溶解在CH2Cl2(50mL)中，并用飽和NaHCO3溶液(10mL×2)和鹽水(10mL)洗滌。將有機(jī)層用Na2SO4干燥并濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用4∶1 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得167mg(89％)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ2.25-2.31(m，1H)，2.42-2.54(m，2H)，2.82-2.92(m，2H)，3.68(s，3H)，4.84(dd，J＝2.4，8.8，1H)，7.07(s，1H)，7.40(d，J＝8.2，2H)，7.67(d，J＝8.2，2H).
步驟H反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯把羥胺鹽酸鹽(45mg，0.65mmol)加到所得內(nèi)酰胺(167mg，0.65mmol)和碳酸氫鈉(272mg，3.24mmol)在10mL CH3OH內(nèi)的溶液中。將該混合物回流5小時，然后冷卻至室溫。將沉淀物通過0.2μ濾器過濾，并用CH3OH(100mL)充分洗滌。將濾液濃縮，獲得所需脒肟，為白色固體，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
脒肟2順式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯步驟A順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮把剛制備的二異丙基氨基化鋰(0.75mmol)在5mL THF中的溶液于-78℃滴加到反式N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮(223mg，0.68mmol)在5mL THF內(nèi)的溶液中。于-78℃攪拌1小時后，通過加入5.0mL飽和NH4Cl溶液將反應(yīng)中止。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，倒入鹽水(20mL)和CH2Cl2(20mL)的混合物中。將水層分離并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶3 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得103mg(46％)本標(biāo)題化合物和120mg(54％)起始材料1HNMRδ1.24(s，9H)，1.50-1.57(m，1H)，2.22-2.28(m，1H)，2.56-2.77(m，3H)，4.94-5.07(m，3H)，5.71-5.78(m，1H)，7.36(d，J＝8.2，2H)，7.66(d，J＝8.2，2H).
步驟B順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸使用類似于脒肟1、步驟E中描述的方法，用順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮代替反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制酸用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
步驟C順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟1、步驟F中描述的方法，用順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸代替反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.24(s，9H)，1.62-1.69(m，1H)，2.62(dd，J＝8.1，17.2，1H)，2.69-2.76(m，1H)，2.92(dd，J＝3.9，17.4，1H)，2.98-3.04(m，1H)，3.69(s，3H)，4.98(dd，J＝7.5，9.5，1H)，7.43(d，J＝8.3，2H)，7.67(d，J＝8.4，2H).
步驟D順式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟1、步驟G中描述的方法，用順式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯代替反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯1H NMRδ1.67-1.74(m，1H)，2.52(dd，J＝8.6，17.1，1H)，2.80-2.98(m，3H)，3.68(s，3H)，4.75(dd，J＝6.8，9.3，1H)，6.51(s，1H)，7.48(d，J＝8.2，2H)，7.67(d，J＝8.2，2H).
步驟E順式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯代替順式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟不予進(jìn)一步純化而進(jìn)行使用。
脒肟3反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷步驟A反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟1、步驟G中描述的方法，用反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷代替反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物1HNMRδ2.05-2.12(m，1H)，2.23-2.29(m，1H)，2.38-2.44(m，1H)，2.54-2.64(m，2H)，4.77(dd，J＝4.3，8.6，1H)，5.08-5.14(m，2H)，5.74-5.80(m，1H)，6.55(br.s，1H)，7.40(d，J＝8.2，2H)，7.66(d，J＝8.3，2H).
步驟B反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟不予進(jìn)一步純化而使用。
脒肟4反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯步驟A反式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-吡咯烷乙酸甲酯將反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯(參見脒肟1，步驟E)(196mg，0.76mmol)和四氟硼酸三甲基氧(135mg，0.91mmol)在10mL CH2Cl2中的溶液于室溫?cái)嚢柽^夜。將該混合物用用20mL飽和NaHCO3洗滌，并將水層用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得所需甲氧基亞胺(207mg，100％)，為無色漿液1H NMRδ2.15-2.21(m，1H)，2.33-2.39(m，1H)，2.46(dd，J＝9.5，16.2，1H)，2.75(dd，J＝4.7，16.2，1H)，3.22-3.28(m，1H)，3.70(s，3H)，3.93(s，3H)，5.06(dd，J＝5.3，8.3，1H)，7.36(d，J＝8.2，2H)，7.61(d，J＝8.3，2H).
步驟B反式-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯把氰基硼氫化鈉(1.0M in THF，7.6mL，7.6mmol)加到甲氧基亞胺(207mg，0.76mmol)和少量溴甲酚綠在CH3OH(10mL)內(nèi)的溶液中。把HCl在1，4-二氧雜環(huán)己烷(2.0M)中的溶液加到該反應(yīng)混合物中，以便將顏色保持黃色，并將該反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時。倒入飽和NaHCO3溶液和CH2Cl2中，并將水層進(jìn)一步用CH2Cl2(3×20mL)萃取。把將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制胺(158mg，85％)，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
步驟C反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯把二碳酸二叔丁酯(170mg，0.78mmol)加到所得胺(158mg，0.65mmol)和催化量的4-二甲基氨基吡啶在CH2Cl2(10mL)內(nèi)的溶液中。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時。將該混合物濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用3∶7 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得208mg(93％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.20-1.45(m，9H)，1.99-2.14(m，2H)，2.37-2.63(m，3H)，3.17-3.27(m，1H)，3.67(s，3H)，3.86-3.88(m，1H)，4.87-4.89(m，1H)，7.28(d，J＝8.2，2H)，7.61(d，J＝8.0，2H).
步驟D反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟進(jìn)行使用而不予進(jìn)一步純化。
脒肟5順式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯步驟A順式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟4、步驟A中描述的方法，用順式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯(參見脒肟2，步驟C)代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.51-1.58(m，1H)2.41(dd，J＝8.8，16.6，1H)，2.79(dd，J＝4.5，16.6，1H)，2.83-2.90(m，1H)，3.27-3.34(m，1H)，3.68(s，3H)，3.93(s，3H)，4.88(t，J＝8.2，1H)，7.44(d，J＝8.2，2H)，7.62(d，J＝8.3，2H).
步驟B順式-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟4、步驟B中描述的方法，用順式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-吡咯烷乙酸甲酯代替甲基反式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。
步驟C順式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟4、步驟C中描述的方法，用順式-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯代替甲基反式-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.12-1.51(m，10H)，2.35-2.64(m，4H)，3.15(t，J＝9.9，1H)，3.68(s，3H)，4.02-4.08(m，1H)，4.72-4.81(m，1H)，7.30(d，J＝8.1，2H)，7.60(d，J＝8.2，2H).
步驟D反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用順式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯代替甲基反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟進(jìn)行使用而不予進(jìn)一步純化。
脒肟6反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷步驟A反式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟4、步驟A中描述的方法，用反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮(參見脒肟1，步驟C)代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制產(chǎn)物用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
步驟B反式-2-(4-氰基苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟4、步驟B中描述的方法，用反式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-(2-丙烯基)-吡咯烷代替反式-2-(4-氰基苯基)-2-H-3，4-二氫-5-甲氧基-4-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。
步驟C反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟4、步驟C中描述的方法，用反式-2-(4-氰基苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷代替反式-2-(4-氰基苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.20-1.46(m，9H)，1.89-2.28(m，5H)，3.14-3.27(m，1H)，3.71-3.81(m，1H)，5.00-5.07(m，3H)，5.68-5.77(m，1H)，7.27(d，J＝8.2，2H)，7.60(d，J＝8.0，2H).
步驟D反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-氰基苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟進(jìn)行使用而不予進(jìn)一步純化。
脒肟7反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)-3-甲基-苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷步驟A5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-2-吡咯烷酮把2-吡咯烷酮-5-甲酸(2.0g，15.5mmol)和2-甲基苯甲醚(2.1mL，17.0mmol)加到1.0g(3.52mmol)五氧化磷和6.7mL的甲磺酸的混合物中。將該混合物于100℃加熱2小時，冷卻至室溫，并倒入H2O和CH2Cl2的混合物中。將水層分離，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用飽和NaHCO3溶液洗滌，用MgSO4干燥，濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用4∶1 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得1.78g(56％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.88-1.97(m，1H)，2.21(s，3H)，2.35-2.54(m，3H)，3.81(s，3H)，4.66(t，J＝7.1，1H)，6.53(br.s，1H)，6.79(d，J＝8.6，1H)，7.05-7.09(m，2H).
步驟BN-叔丁氧基羰基-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-2-吡咯烷酮使用類似于脒肟1、步驟C中描述的方法，用5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-2-吡咯烷酮代替5-(4-氰基苯基)-2-吡咯烷酮，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.29(s，9H)，1.84-1.90(m，1H)，2.20(s，3H)，2.39-2.53(m，2H)，2.64-2.71(m，1H)，3.82(s，3H)，5.07(dd，J＝3.6，8.3，1H)，6.78(d，J＝8.3，1H)，6.98-7.00(m，2H).
步驟C反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮使用類似于脒肟1、步驟D中描述的方法，用N-叔丁氧基羰基-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-2-吡咯烷酮代替反式N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.34(s，9H)，2.00-2.04(m，1H)，2.12-2.24(m，5H)，2.63-2.68(m，1H)，2.74-2.81(m，1H)，3.82(s，3H)，5.03-5.10(m，3H)，5.69-5.77(m，1H)，6.76(d，J＝8.3，1H)，6.94-6.97(m，2H).
步驟D反式-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮使用類似于脒肟1、步驟E中描述的方法，用反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮代替反式-N-叔丁氧基羰基-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ2.07-2.13(m，1H)，2.21(s，3H)，2.22-2.33(m，2H)，2.55-2.60(m，1H)，2.62-2.66(m，1H)，3.82(s，3H)，4.61-4.63(m，1H)，5.06-5.14(m，2H)，5.77-5.82(m，1H)，5.99(br.s，1H)，6.78(d，J＝8.0，1H)，7.03-7.06(m，2H).
步驟E反式-5-(4-羥基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮把三溴化硼(10.1mL，1.0M在CH2Cl2中的溶液，10.1mmol)于-78℃滴加到反式-5-(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮(1.13g，4.61mmol)在10.0mL CH2Cl2的溶液中。將該混合物于-78℃攪拌30分鐘，然后于0℃攪拌1小時。通過加入20mL H2O將反應(yīng)中止。把該混合物倒入乙醚和EtOAc的混合物(1∶1，50.0mL)中，并用2.0NNaOH(3×30mL)萃取。把水層合并，用5.0N HCl酸化，并用EtOAc(3×50mL)萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮，獲得940mg(88％)粗制的本標(biāo)題化合物，為淡褐色固體，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
步驟F反式-5-(4-三氟甲磺?；趸?3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮使用類似于脒肟1、步驟A中描述的方法，用反式-5-(4-羥基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮代替5-(4-羥基苯基)-2-吡咯烷酮，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ2.08-2.29(m，1H)，2.23-2.29(m，1H)，2.34-2.40(m，4H)，2.55-2.66(m，2H)，4.68-4.71(m，1H)，5.08-5.15(m，2H)，5.75-5.83(m，1H)，6.33(br.s，1H)，7.16(dd，J＝2.3，8.5，1H)，7.21-7.24(m，2H).
步驟G反式-5-(4-氰基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮使用類似于脒肟1、步驟B描述的方法，用反式-5-(4-三氟甲磺?；趸?3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮代替5-(4-三氟甲磺?；趸交?-2-吡咯烷酮，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ2.06-2.11(m，1H)，2.23-2.29(m，1H)，2.36-2.42(m，1H)，2.55-2.64(m，5H)，4.71-4.73(m，1H)，5.08-5.14(m，2H)，5.74-5.80(m，1H)，6.41(br.s，1H)，7.18(d，J＝8.0，1H)，7.23(br.s，1H)，7.59(d，J＝7.8，1H).
步驟H反式-5-(4-(氨基(羥基亞氨基)甲基)-3-甲基-苯基)-2-氧代-3-(2-丙烯基)-吡咯烷使用類似于脒肟1、步驟H中描述的方法，用反式-5-(4-氰基-3-甲基-苯基)-3-(2-丙烯基)-2-吡咯烷酮代替反式-5-(4-氰基苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯，制得本標(biāo)題化合物。將該粗制脒肟進(jìn)行使用而不予進(jìn)一步純化。
制備羧酸中間體羧酸14-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸步驟A(E/Z)-(2-(4-氟苯基)-3-氯-4，4，4-三氟-2-丁醛于0℃把磷酰氯(6.8mL，74mmol)加到25mL DMF中。將所得混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時。加入1，1，1-三氟甲基-3-(4-氟苯基)-2-丙酮(5.1g，24.8mmol)在10mL DMF中的溶液，并將所得混合物在70℃攪拌20小時。把反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒在100g冰上，并加入乙酸鈉(6.0g)。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時，然后用乙醚(3×100mL)萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶19 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得4.0g(64％)本標(biāo)題化合物。
步驟B(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基)噻吩-2-甲酸乙酯向巰基乙酸乙酯(2.1mL，19.1mmol)和氫化鈉(482mg，19.1mmol)在20mL THF的懸浮液中于0℃加入(E/Z)-(2-(4-氟苯基)-3-氯-4，4，4-三氟-2-丁醛(4.0g，15.9mmol)。于室溫?cái)嚢柽^夜后，用50mL飽和NH4Cl溶液中止反應(yīng)。將該混合物在250mL乙醚和100mL水之間分配。將有機(jī)層分離，用Na2SO4干燥并濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶19 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得4.4g(86％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.39(t，J＝7.1，3H)，4.39(q，J＝7.2，2H)，7.12(t，J＝8.7，2H)，7.39(dd，J＝5.3，8.5，2H)，7.70(d，J＝1.4，1H).
步驟C4-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸向(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基)噻吩-2-乙酸甲酯(948mg，3.0mmol)在10mL EtOH內(nèi)的溶液中加入氫氧化鈉(358mg，8.9mmol)。攪拌3小時后，除去溶劑，并將殘余物稀HCl(100mL，pH＝3)和1∶1 v/v EtOAc∶乙醚的混合物(200mL)之間分配。將水層分離并進(jìn)一步用乙醚(2×50mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得本標(biāo)題化合物1HNMRδ7.14(t，J＝8.5，2H)，7.39(dd，J＝5.3，8.5，2H)，7.70(d，J＝1.4，1H)，10.6(br.s，1H).
羧酸23-氟-4-異丁基苯甲酸步驟A3-氟-4-異丁基苯甲酸甲酯向4-溴-3-氟苯甲酸甲酯(322mg，1.38mmol)和異丁基溴化鋅(4.1mL，0.5M in THF)在10mL THF內(nèi)的溶液中加入二(三-叔丁基膦)鈀(0)(14mg，0.03mmol)。將該混合物用氮?dú)獯祾呷危缓笥谑覝財(cái)嚢柽^夜。通過加入5.0mL 1.0N HCl溶液將該反應(yīng)中止，并用Et2O(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用鹽水洗滌，用MgSO4干燥，濃縮。在Biotage40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶99 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得243mg(84％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ0.92(d，J＝6.6，6H)，1.93(m，1H)，2.56(d，J＝6.1，2H)，3.91(s，3H)，7.21(t，J＝7.6，1H)，7.67(dd，J＝1.5，10.2，1H)，7.74(dd，J＝1.6，7.8，1H).
步驟B3-氟-4-異丁基苯甲酸向3-氟-4-異丁基苯甲酸甲酯(243mg，1.16mmol)在10mL EtOH內(nèi)的溶液中，加入氫氧化鈉(2.3mL，5.0N)。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時，然后濃縮。將該混合物在稀HCl(10mL)和Et2O(10mL)之間分配。將水層分離并進(jìn)一步用Et2O(2×10mL)萃取。并有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮，獲得212mg(93％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ0.93(d，J＝6.6，6H)，1.95(m，1H)，2.58(d，J＝7.4，2H)，7.26(m，1H)，7.74(dd，J＝1.4，10.1，1H)，7.82(dd，J＝1.5，7.9，1H)，11.2(br.s，1H).
羧酸33-氟-4-(3-甲基丁基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸2所描述的方法，在步驟A中用3-甲基丁基溴化鋅代替異丁基溴化鋅，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ0.95(d，J＝6.4，6H)，1.51(m，2H)，1.52(m，1H)，2.70(t，J＝8.0，2H)，7.30(t，J＝7.6，1H)，7.72(dd，J＝1.3，10.2，1H)，7.82(dd，J＝1.4，7.8，1H).
羧酸44-((R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯甲酸步驟A(3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊酮在氮?dú)庀孪?.2g(35.8mmol)4-溴苯基硼酸、186mg(0.72mmol)乙?；宜岫?亞乙基)銠(I)和446mg(0.71mmol)(R)-2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘(BINAP)在60mL二氧雜環(huán)己烷和6mL H2O中的混合物內(nèi)，加入1.0mL(11.9mmol)2-環(huán)戊烯-1-酮。回流5.5小時后，將該反應(yīng)濃縮。將殘余物在300mL EtOAc和300mL 1N NaHCO3之間分配。把相分離后，將有機(jī)層用300mL鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮。將殘余物在40M Biotage住上進(jìn)行純化，用9∶1 v/v己烷/EtOAc作為洗脫劑，獲得1.90g本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ1.97(m，1H)，2.29-2.37(m，2H)，2.43-2.52(m，2H)，2.69(m，1H)，3.40(m，1H)，7.16(d，J＝8.5，2H)，7.49(d，J＝8.5，2H).
步驟B(R)-3-(4-溴苯基)-1，1-二氟環(huán)戊烷于0℃將2.1mL(11.4mmol)[二(2-甲氧基乙基)氨基]三氟化硫和0.10mL(0.7mmol)三氟化乙醚合物在7mL甲苯中的溶液在不時地?cái)嚢柘路胖?.3小時。加入1.9g(7.9mmol)(R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊酮(得自步驟A)在13mL甲苯中的溶液。將該反應(yīng)在55℃攪拌2天。冷卻后，于0℃把該混合物加到加到250mL 2N NaOH和250mL Et2O中。攪拌30分鐘后，把相分離。將有機(jī)層用250mL 1N NaOH和250mL H2O洗滌，用MgSO4干燥并濃縮。把殘余物在40M Biotage柱上進(jìn)行純化，用49∶1 v/v己烷/Et2O作為洗脫劑，獲得1.47g本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.85(m，1H)，2.09-2.26(m，3H)，2.35(m，1H)，2.56(m，1H)，3.30(m，1H)，7.13(d，J＝8.3，2H)，7.46(d，J＝8.3，2H).
步驟C4-((R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯甲酸將1.0g(3.8mmol)(R)-3-(4-溴苯基)-1，1-二氟環(huán)戊烷(得自步驟B)在15mL THF中的溶液于-78℃用1.6mL(4.0mmol)2.5M Bu Li在己烷中的混合物處理。攪拌15分鐘后，把該反應(yīng)加到干冰在200mL Et2O中的懸浮液內(nèi)。使該混合物溫?zé)嶂潦覝?。將該反?yīng)混合物用100mL 1NNaOH萃取。把相分離后，將水層用濃HCl酸化至pH 1-2。將水相用3×100mL CH2Cl2萃取。把合并的有機(jī)相干燥并濃縮，獲得0.67g本標(biāo)題化合物1H NMR(CD3OD)δ1.87(m，1H)，2.13-2.37(m，4H)，2.54(m，1H)，3.41(m，1H)，7.39(d，J＝8.2，2H)，7.97(d，J＝8.2，2H).
羧酸54-((S)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸4所描述的方法，在步驟A中用(S)-2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’聯(lián)萘(BINAP)代替(R)-2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’聯(lián)萘(BINAP)1H NMR(CD3OD)δ1.87(m，1H)，2.13-2.37(m，4H)，2.54(m，1H)，3.41(m，1H)，7.39(d，J＝8.2，2H)，7.97(d，J＝8.2，2H).
羧酸64-((R)-3，3-二氟環(huán)己基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸4所描述的方法，在步驟A中用2-環(huán)己烯-1-酮代替2-環(huán)戊烯-1-酮，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.47(m，1H)，1.66-1.96(m，5H)，2.19(m，1H)，2.31(m，1H)，2.96(m，1H)，7.32(d，J＝8.3，2H)，8.07(d，J＝8.2，2H).
羧酸74-((S)-3，3-二氟環(huán)己基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸6所描述的方法，用(S)-2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’聯(lián)萘(BINAP)代替(R)-2，2’-二(二苯基膦基)-1，1’聯(lián)萘(BINAP)，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.47(m，1H)，1.66-1.96(m，5H)，2.19(m，1H)，2.31(m，1H)，2.96(m，1H)，7.32(d，J＝8.3，2H)，8.07(d，J＝8.2，2H).
羧酸84-((1R，3R)-3-氟環(huán)戊基)苯甲酸步驟A(3S)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇向(3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊酮(1.14g，4.77mmol，羧酸4，步驟A)在10mL CH2Cl2內(nèi)的溶液中于-78℃加入二異丁基氫化鋁(7.2mL，1.0M在CH2Cl2中的溶液)。將該混合物在-78℃攪拌1小時，然后加入5.0mL飽和羅謝爾鹽水溶液。把該混合物倒入稀HCl溶液中并用CH2Cl2(3×10mL)萃取。將有機(jī)層合并，用飽和NaHCO3和鹽水洗滌。將有機(jī)層用MgSO4干燥并濃縮，獲得1.16g(100％)本標(biāo)題化合物，為1∶1比例的非對映混合物，其不能夠用色譜法進(jìn)行分離。
步驟B乙酸(1R，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊基酯和(1S，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇將(3S)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇(1.01g，4.19mmol)和Porcine PancreasLipase(PPL，1.0g，Sigma)在20.0mL 1∶1 v/v 乙酸乙烯酯/己烷中的懸浮液于室溫?cái)嚢柽^夜。將酶通過硅藻土餅過濾并用EtOAc和己烷洗滌。把濾液濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶19 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得536mg(45％)乙酸(1R，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊基酯1H NMRδ1.59(m，1H)，1.77-1.89(m，2H)，2.05(s，3H)，2.12-2.29(m，3H)，3.25(m，1H)，5.30(m，1H)，7.09(d，J＝8.2，2H)，7.41(d，J＝8.3，2H)，并且用1∶3 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得503mg(50％)(1S，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇1H NMRδ1.61(m，2H)，1.77-1.94(m，3H)，2.04(m，1H)，2.45(m，1H)，3.01(m，1H)，4.45(m，1H)，7.16(d，J＝8.3，2H)，7.40(d，J＝8.5，2H).
步驟C1-溴-4-((1R，3R)-3-氟環(huán)戊基)苯向(1S，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇(503mg，2.09mmol)在10mL CH2Cl2內(nèi)的溶液中于-78℃加入(二(2-甲氧基乙基)氨基)三氟化硫(Deoxo-Fluor，462μL，2.50mmol)。使該混合物逐漸溫?zé)嶂潦覝剡^夜，然后倒入飽和NaHCO3溶液中(20mL)。將水層用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層用MgSO4干燥并濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用己烷作為洗脫劑，獲得383mg(76％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.53-1.78(m，2H)，1.95-2.39(m，4H)，3.35(m，1H)，5.19-5.32(m，1H)，7.09(d，J＝8.5，2H)，7.40(d，J＝8.2，2H).
步驟D4-((1R，3R)-3-氟環(huán)戊基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸4所描述的方法，在步驟D中用1-溴-4-((1R，3R)-3-氟環(huán)戊基)苯代替1-溴-4-((1R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.65-1.87(m，2H)，1.99-2.46(m，4H)，3.47(m，1H)，5.23-5.36(m，1H)，7.33(d，J＝8.2，2H)，8.05(d，J＝8.2，2H).
羧酸94-((1R，3S)-3-氟環(huán)戊基)苯甲酸步驟A(1R，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇向乙酸(1R，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊基酯(羧酸8，步驟B，536mg，1.9mmol)在5.0mL EtOH內(nèi)的溶液中，加入氫氧化鈉(1.9mL，5.0N)。于室溫?cái)嚢?0分鐘，除去溶劑，并將殘余物在飽和NaHCO3溶液(50mL)和CH2Cl2(50mL)之間分配。把水層分離并用CH2Cl2(2×50mL)萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用7∶3 v/v己烷/EtOAc作為洗脫劑，獲得445mg(97％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.49(br.s，1H)，1.56-1.81(m，2H)，2.05-2.27(m，4H)，3.35(m，1H)，4.52(m，1H)，7.09(d，J＝8.2，2H)，7.40(d，J＝8.3，2H).
步驟B4-((1R，3S)-3-氟環(huán)戊基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸8所描述的方法，在步驟C中用(1R，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇代替(1S，3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊醇，制得本標(biāo)題化合物。
羧酸103-氟-4-環(huán)戊基苯甲酸將0.45g(1.45mmol)3-氟-4-溴苯甲酸芐酯(0.45g，1.45mmol)在4.4mL 0.5M溴化環(huán)戊基鋅在THF中的溶液中的溶液用～5mg二(三叔丁基膦)鈀(0)處理，并將所得混合物于室溫?cái)嚢?4小時。將該反應(yīng)混合物直接在Biotage 40S筒上是進(jìn)行純化，用1∶1己烷/EtOAc作為洗脫劑。將所得固體(0.27g，0.91mmol)和10％Pd/C在5mL MeOH中的混合物在1atm H2下攪拌3小時。將該反應(yīng)過濾并濃縮。通過HPLC B純化，獲得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.58-1.90(m，6H)，2.05-2.14(m，2H)，3.30(m，1H)，7.36(t，J＝7.7，1H)，7.72(dd，J＝1.6，10.5，1H)，7.83(dd，J＝1.6，8.0，1H).
羧酸112-氟-4-環(huán)戊基苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸10所描述的方法，用2-氟-4-溴苯甲酸芐酯代替芐基3-氟-4-溴苯甲酸芐酯1H NMRδ1.57-1.85(m，6H)，2.07-2.13(m，2H)，3.05(m，1H)，7.03(dd，J＝1.1，12.4，1H)，7.10(dd，J＝1.4，8.2，1H)，7.94(t，J＝8.0，1H).
羧酸123-三氟甲基-4-(((1S)-1-甲基丙基)氧基)苯甲酸步驟A3-三氟甲基-4-(2-(S)-丁氧基)芐腈將1.1g(5.9mmol)4-氟-3-三氟甲基芐腈和485mg(6.5mmol)(S)-(+)-2-丁醇在10mL THF中的溶液于-10℃用235mg(5.9mmol)氫化鈉處理。將所得混合物在冷條件下攪拌2小時，然后用10mL H2O中止反應(yīng)。將該中止反應(yīng)的溶液用Et2O萃取，用MgSO4干燥并濃縮。在Biotage 40M筒上進(jìn)行色譜法純化，用4∶1 v/v己烷/乙酸乙酯作為洗脫劑，獲得550mg本標(biāo)題化合物1H NMRδ0.99(t，J＝7.6，3H)，1.35(d，J＝6.2，3H)，1.58-1.83(m，2H)，4.51(七重峰，1H)，7.04(d，J＝8.7，1H)，7.75(d，J＝8.7，1H)，7.85(s，1H).
步驟B3-三氟甲基-4-(2-(S)-丁氧基)苯甲酸將550mg(2.2mmol)3-三氟甲基-4-(2-(S)-甲基丙氧基)芐腈(得自步驟A)在5mL乙醇中的溶液用1.5mL 5.0N NaOH處理，并加熱至80℃3小時。將該反應(yīng)濃縮，用2N HCl處理，用30mL EtOAc萃取，干燥并濃縮，獲得600mg本標(biāo)題化合物1H NMRδ0.99(t，J＝7.3，3H)，1.43(d，J＝5.9，3H)，1.73-1.83(m，2H)，4.54(七重峰，1H)，7.02(d，J＝8.9，1H)，8.21(d，J＝8.9，1H)，8.32(s，1H).
羧酸133-氯-4-異丙氧基苯甲酸步驟A3-氯-4-異丙氧基苯甲酸甲酯向1.42g(7.63mmol)3-氯-4-羥基苯甲酸甲酯、585μL(7.63mmol)2-丙醇和3.0g(11.45mmol)三苯基膦在20mL THF內(nèi)的溶液中于0℃加入2.25mL(11.45mmol)偶氮二甲酸二異丙酯。使該混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪?6小時。除去溶劑。在Biotage 40+M筒上進(jìn)行色譜純化，用1∶19 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得1.77g(100％)本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.41(d，J＝6.2，6H)，4.63-4.70(m，1H)，6.93(d，J＝8.7，1H)，7.89(dd，J＝2.2，8.6，1H)，8.05(d，J＝2.0，1H).
步驟B3-氯-4-異丙氧基苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸2所描述的方法，在步驟B中用3-氰基-4-異丙氧基苯甲酸甲酯代替3-氟-4-異丁基苯甲酸甲酯1H NMRδ1.43(d，J＝5.9，6H)，4.66-4.73(m，1H)，6.96(d，J＝8.9，1H)，7.97(dd，J＝2.1，8.7，1H)，8.12(d，J＝2.0，1H)，11.7(br.s，1H).
羧酸14-15使用類似于有關(guān)羧酸13所描述的方法，在步驟A中用適宜的純化代替2-丙醇，制得以下的羧酸中間體。
羧酸164-(4，4-二氟環(huán)己基)苯甲酸步驟A三氟甲磺酸1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯向N，N-二異丙基氨基鋰(30.6mmol)在30mL THF內(nèi)的溶液中，于-78℃滴加1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(4.06g，26.0mmol)在15mLTHF中的溶液。將所得混合物在-78℃攪拌25分鐘，然后把2-(N，N-二(三氟甲基磺酰基)氨基)-5-氯吡啶(12.0g，30.5mmol)在15mL THF中的溶液滴加入其中。于-78℃攪拌2.5小時后，通過加入10mL 1NNaHCO3水溶液中止反應(yīng)。將該混合物在Et2O(200mL)和1N NaHCO3(200mL)之間分配。將有機(jī)層分離，用MgSO4干燥，并濃縮。在Biotage40M筒上進(jìn)行色譜法純化，用1∶9 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得4.62g(61％)本標(biāo)題化合物。
步驟B4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯甲酸向4-羧基苯基硼酸(0.69g，3.53mmol)和三氟甲磺酸1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基酯(1.02g，3.53mmol)在14mL DMF內(nèi)的溶液中，加入7mL 2N Na2CO3水溶液、三苯基膦(159mg，0.61mmol)和三(二亞芐基丙酮)鈀(0)(68mg，74.2μmol)。于80℃攪拌3小時然后于室溫?cái)嚢?6小時后，將該混合物濃縮并在100mL Et2O和150mL H2O水之間分配。把水層分離，用濃HCl酸化至pH～2-3，并用CH2Cl2(2×100mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮。將殘余物從10mL EtOAc中再結(jié)晶，獲得353mg(38％)本標(biāo)題化合物。
步驟C4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯甲酸甲酯將4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯甲酸(572mg，2.20mmol)、碘甲烷(140μL，2.24mmol)和碳酸銫(710mg，2.17mmol)在6mL DMF中的混合物于室溫?cái)嚢?6小時。將該混合物用H2O(10mL)稀釋，并用Et2O(100mL)萃取。將有機(jī)層分離，用MgSO4干燥，并濃縮。在Biotage 40S筒上是進(jìn)行色譜法純化，用3∶17 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得399mg(72％)本標(biāo)題化合物。
步驟D4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)苯甲酸甲酯將4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-7-烯-8-基)苯甲酸甲酯(514mg，1.87mmol)和10％Pd/C(127mg)在15mL 1∶2 v/v EtOAc/CH3OH中的混合物在45Psi H2下用帕爾搖動器搖動6.5小時。將催化劑通過硅藻土餅過濾，并用大量EtOAc洗滌。將濾液濃縮，獲得480mg本標(biāo)題化合物。
步驟E4-(4-氧代環(huán)己基)苯甲酸甲酯向4-(1，4-二氧雜螺[4.5]癸-8-基)苯甲酸甲酯(480mg，1.73mmol)在8mL THF內(nèi)的溶液中，加入4mL 1N HCl水溶液。將該混合物于室溫?cái)嚢?1小時并濃縮。把殘余物在50mL Et2O和50mL 1N NaHCO3水溶液之間分配。將有機(jī)層分離，用MgSO4干燥，并濃縮。在Biotage40S筒上進(jìn)行色譜法純化，用1∶9 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得343mg(85％)本標(biāo)題化合物。
步驟F4-(4，4-二氟環(huán)己基)苯甲酸甲酯使用類似于有關(guān)羧酸4所描述的方法，在步驟B中用4-(4-氧代環(huán)己基)苯甲酸甲酯代替(3R)-3-(4-溴苯基)環(huán)戊酮，制得本標(biāo)題化合物。
步驟G4-(4，4-二氟環(huán)己基)苯甲酸使用類似于有關(guān)羧酸1所描述的方法，在步驟C中用4-(4，4-二氟環(huán)己基)苯甲酸甲酯代替(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基)噻吩-2-甲酸乙酯，制得本標(biāo)題化合物1H NMR(CD3OD)δ1.82(m，2H)，1.94(m，4H)，2.16(m，2H)，2.78(m，1H)，7.36(d，J＝8.2，2H)，7.96(d，J＝8.2，2H).
實(shí)施例的制備實(shí)施例1反式-2-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸步驟A反式-5-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-2-氧代-3-吡咯烷乙酸甲酯將脒肟1，4-(2-甲基丙基)苯甲酸(127mg，0.71mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(149mg，0.78mmol)和1-羥基苯并三唑水合物(44mg，0.32mmol)在乙腈(10mL)中的溶液于室溫?cái)嚢?小時。將該混合物濃縮，并在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用EtOAc作為洗脫劑，獲得酯中間體。
將上述酯在二甲苯(10mL)中的溶液回流2小時然后濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用3∶2 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得63mg(22％三步)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ0.94(d，J＝6.7，6H)，1.92-1.97(m，1H)，2.33-2.59(m，5H)，2.89(dd，J＝4.0，16.9，1H)，2.97-3.00(m，1H)，3.70(s，3H)，4.85(dd，J＝3.0，8.7，1H)，6.08(br.s，1H)，7.33(d，J＝8.2，2H)，7.42(d，J＝8.2，2H)，8.12(d，J＝8.2，2H)，8.18(d，J＝8.3，2H).
步驟B反式-2-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸將上述內(nèi)酰胺(63mg，0.15mmol)和氟硼酸三甲基氧(26mg，0.17mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液于室溫?cái)嚢柽^夜。然后將該反應(yīng)混合物用飽和NaHCO3溶液(20mL)洗滌。把水層分離，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用MgSO4干燥，濃縮，獲得亞氨基醚，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
把氰基硼氫鈉溶液(1.0M in THF中的溶液，727μL，0.73mmol)加到所得亞氨基醚和少量溴甲酚綠在CH3OH(10mL)內(nèi)的溶液中。把HCl在1，4-二氧雜環(huán)己烷(2.0M)中的溶液加到該反應(yīng)混合物中，以便將顏色保持黃色(pH～3-4)，并將所得混合物于室溫?cái)嚢?小時。把該混合物倒入飽和NaHCO3溶液(20mL)和CH2Cl2(20mL)中，并將水層進(jìn)一步用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制的胺(70mg)。
把氫氧化鈉(5.0N，110μL)加到粗制胺(23mg，0.05mmol)在EtOH(5.0mL)內(nèi)的溶液中，并于室溫?cái)嚢?0分鐘。將反應(yīng)混合物濃縮，并將殘余物用HPLC純化，獲得實(shí)施例1(9.7mg，44％)1H NMR(CD3OD)δ0.88(s，6H)，1.86-1.91(m，1H)，2.23-2.29(m，1H)，2.44-2.64(m，5H)，2.93-2.99(m，1H)，3.12(dd，J＝7.9，11.8，1H)，3.70(dd，J＝7.6，11.8，1H)，4.85(t，J＝8.6，1H)，7.35(d，J＝8.3，2H)，7.60(d，J＝8.5，2H)，8.06(d，J＝8.5，2H)，8.18(d，J＝8.5，2H).
實(shí)施例2順式-2-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸用類似于實(shí)施例1中描述的方法，在步驟A中用脒肟2代替脒肟1，制得實(shí)施例21H NMR(CD3OD)δ1.38(s，9H)，2.07(q，J＝12.3，23.8，1H)，2.61-2.74(m，3H)，2.89-3.00(m，1H)，3.23-3.27(m，1H)，3.72-3.76(m，1H)，4.79-4.83(m，1H)，7.66(d，J＝8.5，2H)，7.69(d，J＝8.5，2H)，8.14(d，J＝8.5，2H)，8.23(d，J＝8.5，2H).
實(shí)施例3反式-1-甲基-2-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸將反式-2-(4-(5-(4-(2-甲基丙基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯(實(shí)施例1，步驟B，18mg，0.04mmol)、碘甲烷(3μL，0.05mmol)和碳酸鉀(30mg，0.21mmol)在2.0mL DMF中的混合物于100℃1小時。冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混合物通過硅藻土餅過濾，并將殘余物用CH2Cl2(50mL)洗滌。將濾液用鹽水洗滌，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制的胺。
向上述粗制胺在EtOH(4.0mL)內(nèi)的溶液中加入NaOH(86μL 5.0N NaOH，0.43mmol)。于室溫?cái)嚢?6小時后，內(nèi)所得反應(yīng)混合物濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用具有1.0％NH4OH的3∶17 v/vCH3OH/CH2Cl2作為洗脫劑，獲得8.0mg(44％兩步)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ0.88(d，J＝6.7，6H)，1.88(m，1H)，2.28(m，1H)，2.52-2.61(m，5H)，2.69(s，3H)，2.99(m，2H)，3.91(dd，J＝6.9，10.8，1H)，4.43(t，J＝9.1，1H)，7.36(d，J＝8.2，2H)，7.63(d，J＝8.2，2H)，8.07(d，J＝8.2，2H)，8.21(d，J＝8.5，2H).
實(shí)施例4反式-2-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸步驟A反式-3-烯丙基-5-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)吡咯烷-2-酮用類似于實(shí)施例1中描述的方法，在步驟A中分別用脒肟3代替脒肟1，用4-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸代替4-(2-甲基丙基)苯甲酸，制得本標(biāo)題化合物1H NMR(CD3OD)δ2.16(m，1H)，2.28(m，1H)，2.42(m，1H)，2.63(m，2H)，4.79(m，1H)，5.12(m，2H)，5.80(m，1H)，6.01(s，1H)，7.17(t，J＝8.7，2H)，7.44(m，4H)，7.88(m，1H)，8.14(d，J＝8.4，2H).
步驟B反式-2-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯把氯化釕(III)水合物(1mg，4.4mol)加到反式3-烯丙基-5-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)吡咯烷-2-酮(103mg，0.20mmol)和高碘酸鈉(193mg，0.90mmol)在2∶2∶3 v/v/vCCl4/CH3CN/H2O的混合溶劑(7.0mL)中的溶液中。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時，然后在H2O(20mL)和CH2Cl2(20mL)之間分配。將水層分離，并用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制的酸，為無色漿液。
把(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M在己烷中的溶液，48μL，0.10mmol)加到粗制酸在7∶2 v/v 苯/CH3OH的混合溶劑(9mL)內(nèi)的溶液中。30分鐘后，將該反應(yīng)混合物濃縮。在Biotage 40+S筒上進(jìn)行色譜純化，用3∶2 v/v EtOAc/己烷作為洗脫劑，獲得20.0mg(18％兩步)本標(biāo)題化合物，為白色固體1H NMRδ2.36(m，1H)，2.44-2.58(m，2H)，2.90(dd，J＝4.0，7.0，1H)，2.98(m，1H)，3.71(s，3H)，4.85(dd，J＝2.9，9.0，1H)，5.89(s，1H)，7.17(d，J＝8.6，2H)，7.42-7.47(m.4H)，7.89(m，1H)，8.15(d，J＝8.2，2H).
步驟C反式-2-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸將反式-2-(4-(5-(4-(4-氟苯基)-5-三氟甲基-2-噻吩基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯(20mg，0.04mmol)和氟硼酸三甲基氧(6.5mg，0.04mmol)在5mL CH2Cl2中的溶液于室溫?cái)嚢柽^夜。將該混合物用20mL飽和NaHCO3洗滌，并將水層用CH2Cl2(3×20mL)萃取。把有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得亞氨基醚，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
把氰基硼氫鈉溶液(1.0M在THF中的溶液，367μL，0.37mmol)加到上述亞氨基醚和少量溴甲酚綠在CH3OH(10mL)內(nèi)的溶液中。把HCl在1，4-二氧雜環(huán)己烷(2.0M)中的溶液加到該反應(yīng)混合物中，以便將混合物的顏色保持黃色。將所得混合物于室溫?cái)嚢?小時。倒入飽和NaHCO3溶液和CH2Cl2中，并將水層進(jìn)一步用CH2Cl2(3×20mL)萃取。將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制的胺，將其用于下一步驟而不予進(jìn)一步純化。
把氫氧化鈉(5.0N，94μL)加到上述胺在EtOH(4.0mL)內(nèi)的溶液中，并于室溫?cái)嚢柽^夜。將反應(yīng)混合物直接用HPLC進(jìn)行純化，獲得本標(biāo)題化合物(11mg，58％三步)1H NMR(CD3OD)δ2.26(m，1H)，2.49(m，1H)，2.61(m，1H)，2.96(m，1H)，3.13(m，1H)，3.71(dd，J＝7.7，11.8，1H)，4.85(t，J＝8.6，1H)，7.16-7.20(m，2H)，7.46-7.50(m，2H)，7.61(d，J＝8.4，2H)，8.00(m，1H)，8.18(d，J＝8.2，2H).
實(shí)施例5反式-2-(4-(5-(4-環(huán)戊基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸步驟A反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(5-(4-環(huán)戊基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯用類似于實(shí)施例1中描述的方法，在步驟A中分別用脒肟4代替脒肟1，用4-環(huán)戊基苯甲酸代替4-(2-甲基丙基)苯甲酸，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.21(s，9H)，1.47-1.87(m，6H)，2.05-2.15(m，3H)，2.41-2.48(m，2H)，2.70(m，1H)，3.06-3.31(m，2H)，3.67(s，3H)，3.93(m，1H)，4.91(m，1H)，5.07(m，1H)，7.30(d，J＝8.0，2H)，7.41(d，J＝8.3，2H)，8.12(m，4H).
步驟B反式-2-(4-(5-(4-環(huán)戊基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸將反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(5-(4-環(huán)戊基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯(4.4mg，8.3mol)在2.5mL 20％TFA在CH2Cl2內(nèi)的溶液中的溶液于室溫?cái)嚢?小時，然后濃縮。把殘余物再溶解在5.0mL EtOH中，并加入氫氧化鈉(189μL，5.0N，0.95mmol)。于室溫?cái)嚢?小時后，把反應(yīng)混合物濃縮，并將殘余物用HPLC進(jìn)行純化，獲得3.5mg(100％)本標(biāo)題化合物1H NMR(CD3OD)δ1.60(m，2H)，1.69(m，2H)，1.81(m，2H)，2.06(m，2H)，2.26(m，1H)，2.46(m，1H)，2.58(m，2H)，2.96(m，1H)，3.07(m，1H)，3.12(dd，J＝7.7，11.9，1H)，3.70(dd，J＝7.7，11.8，1H)，4.84(t，J＝8.6，1H)，7.44(d，J＝8.2，2H)，7.60(d，J＝8.4，2H)，8.06(d，J＝8.4，2H)，8.18(d，J＝8.2，2H).
實(shí)施例6-19以下實(shí)施例是使用類似于實(shí)施例5中描述的方法，在步驟A中用適宜的羧酸代替4-(2-甲基丙基)苯甲酸制備的。實(shí)施例9和10的前體-實(shí)施例5，步驟A中的產(chǎn)物是在Chiralcel OD 20×250mm柱上分離的，用85∶15 v/v 庚烷/EtOH等度洗脫30分鐘，流速為8.0mL/分鐘，UV波長在254nm。在該分離條件下，實(shí)施例9的前體的保留時間比實(shí)施例10的前體短。


實(shí)施例20-27以下實(shí)施例是使用類似于實(shí)施例5中描述的方法，在步驟A中用脒肟5代替脒肟4，用使用的羧酸代替4-環(huán)戊基苯甲酸制備的。

實(shí)施例28反式-2-(4-(5-(4-環(huán)己基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸步驟A反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(5-(4-環(huán)己基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷用類似于實(shí)施例1中描述的方法，在步驟A中分別用脒肟6代替脒肟1，用4-環(huán)己基苯甲酸代替4-(2-甲基丙基)苯甲酸，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.13-1.58(m，15H)，1.77-1.96(m，7H)，2.05-2.63(m，3H)，3.25(m，1H)，3.83(m，1H)，4.91-5.07(m，3H)，5.74(m，1H)，7.29(d，J＝8.0，2H)，7.38(d，J＝8.3，2H)，8.12(m，4H).
步驟B反式-2-(4-(5-(4-環(huán)己基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-吡咯烷乙酸把氯化釕(III)水合物(0.1mg，0.5mol)加到反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(5-(4-環(huán)己基苯基)-1，2，4-二唑-3-基)苯基)-4-(2-丙烯基)-吡咯烷(12mg，0.02mmol)將高碘酸鈉(23mg，0.11mmol)在2∶2∶3 v/v/vCCl4/CH3CN/H2O的混合物溶劑(7.0mL)內(nèi)的溶液中。將該混合物于室溫?cái)嚢?小時后，然后在H2O(10mL)和CH2Cl2(10mL)之間分配。把水層分離，并用CH2Cl2(3×10mL)萃取。將將有機(jī)層合并，用Na2SO4干燥并濃縮，獲得粗制的酸，為無色漿液。
將上述粗制酸在2.5mL 20％三氟乙酸的CH2Cl2溶液中的溶液于室溫?cái)嚢?0分鐘。除去溶劑，并將殘余物用HPLC進(jìn)行純化1H NMRδ1.26(m，2H)，1.43(m，4H)，1.74(m，2H)，1.83(m，4H)，2.25(m，1H)，2.55(m，4H)，2.95(m，1H)，3.12(dd，J＝8.0，11.8，1H)，3.69(dd，J＝7.7，12.3，1H)，4.83(m，1H)，7.41(d，J＝8.3，2H)，7.60(d，J＝8.3，2H)，8.07(d，J＝8.3，2H)，8.18(d，J＝8.3，2H).
實(shí)施例29-32以下實(shí)施例是使用類似于實(shí)施例18中描述的方法，在步驟A中用適宜的羧酸代替4-環(huán)己基苯甲酸制備的。

實(shí)施例33反式-2-(4-(5-(4-((1R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)-3-甲基-苯基)-4-吡咯烷乙酸用類似于實(shí)施例4中描述的方法，在步驟A中分別用脒肟7代替脒肟3，用4-((1R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯甲酸代替4-(4-氟苯基)-5-(三氟甲基)噻吩-2-甲酸，制得本標(biāo)題化合物1H NMRδ1.87(m，1H)，2.25(m，5H)，2.46(m，3H)，2.61(m，1H)，2.65(s，3H)，2.96(m，1H)，3.12(dd，J＝7.9，10.8，1H)，3.41(m，1H)，3.71(dd，J＝7.7，12.0，1H)，4.81(m，1H)，7.40-7.50(m，4H)，8.10-8.12(m，3H).
實(shí)施例34，35這些實(shí)施例是實(shí)施例33的非對映異構(gòu)體。實(shí)施例33的前體-反式-N-叔丁氧基羰基-2-(4-(5-(4-((R)-3，3-二氟環(huán)戊基)苯基)-1，2，4-二唑-3-基)-3-甲基-苯基)-4-吡咯烷乙酸甲酯是在Chiralpak AD 20×250mm柱上分離的，用50∶50 v/v 庚烷/EtOH等度洗脫50分鐘，流速為7.0mL/分鐘，UV波長在254nm。在該分離條件下，實(shí)施例34的前體的保留時間比實(shí)施例35的前體的保留時間短。

生物學(xué)活性用下面的試驗(yàn)可以對本發(fā)明化合物的S1P1/Edg1、S1P3，/Edg3、S1P2/Edg5、S1P4/Edg6或S1P5/Edg8活性進(jìn)行評估配體與Edg/S1P受體的結(jié)合試驗(yàn)用具有鞘氨醇激酶活性的粗酵母菌提取物在包含50mMKH2PO4、1mM巰基乙醇、1mM Na3VO4、25mM KF、2mM氨基脲1mM Na2EDTA、5mM MgCl2、50mM鞘氨醇、0.1％ TritonX-114、和1mCi γ33P-ATP(NEN；比活度3000Ci/mmol)的反應(yīng)混合物中由γ33P-ATP和鞘氨醇來進(jìn)行33P-鞘氨醇-1-磷酸酯的酶合成。用丁醇對該反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行萃取并用HPLC對33P-鞘氨醇-1-磷酸酯進(jìn)行純化。
用不含酶的解離溶液(Specialty Media，Lavallette，NJ)來收獲表達(dá)EDG/S1P受體的細(xì)胞。將其在冷PBS中洗滌一次并將其混懸于由50mM HEPES-Na，pH 7.5、5mM MgCl2、1mM CaCl2和0.5％不含脂肪酸的BSA所組成的結(jié)合試驗(yàn)緩沖劑中。將33P-鞘氨醇-1-磷酸酯與0.1nM鞘氨醇-1-磷酸酯一起在結(jié)合試驗(yàn)緩沖劑中進(jìn)行聲處理；向位于96孔微量滴定皿中的100μl細(xì)胞(1×106個細(xì)胞/ml)中加入100μl所述配體混合物。在溫和混合的情況下使其在室溫下結(jié)合60分鐘。然后，用Packard Filtermate Universal Harvester將細(xì)胞收集到GF/B濾板上。在將該濾板干燥30分鐘后，向各孔中加入40μl Microscint 20并在Wallac Microbeta閃爍計(jì)數(shù)器上對結(jié)合進(jìn)行測定。非特異性結(jié)合被定義為在存在0.5μM冷鞘氨醇-1-磷酸酯的情況下剩余的放射性活性的量。
或者，在由表達(dá)Edg/S1P受體的細(xì)胞制備的膜上進(jìn)行配體結(jié)合試驗(yàn)。用不含酶的解離溶液來收獲細(xì)胞并將其在冷PBS中洗滌一次。通過用Kinematica polytron在冰冷的20mM HEPES pH 7.4、10mMEDTA中進(jìn)行勻化(標(biāo)度5，10秒)來破碎這些細(xì)胞。將這些勻漿在48,000×g下在4℃下離心15min并將小丸混懸于20mM HEPES pH 7.4，0.1mM EDTA中。在第二次離心后，將該最后的小丸混懸于20mM HEPESpH 7.4，100mM NaCl，10mM MgCl2中。用0.5至2μg膜蛋白如上所述的那樣進(jìn)行配體結(jié)合試驗(yàn)。
可以在該該33P-鞘氨醇-1-磷酸酯結(jié)合試驗(yàn)中確定Edg/S1P受體的激動劑和拮抗劑。將用DMSO、甲醇或其它溶劑稀釋的化合物與包含33P-鞘氨醇-1-磷酸酯的探針和結(jié)合試驗(yàn)緩沖劑在微量滴定皿中進(jìn)行混合。向其中加入由表達(dá)Edg/S1P受體的細(xì)胞制備的膜，并如所示那樣進(jìn)行與33P-鞘氨醇-1-磷酸酯的結(jié)合。測定存在各種濃度化合物情況下的結(jié)合數(shù)量并用非線性回歸軟件如MRLCalc(Merck ResearchLaboratories)或PRISM(GraphPad軟件)對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析以測量這些化合物對所說受體的親合力。通過用由被各受體(S1P1/Edg1，S1P3/Edg3，S1P2/Edg5，S1P4/Edg6，S1P5/Edg8)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞制得的膜在存在所說化合物的情況下測量33P-鞘氨醇-1-磷酸酯結(jié)合的水平來測定化合物對Edg/S1P受體的選擇性。
35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)用35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)測量S1P/Edg受體與G蛋白的功能性偶合。將如配體與Edg/S1P受體結(jié)合試驗(yàn)中所述那樣制備的膜(1-10μg膜蛋白)在200μl包含20mM HEPES pH 7.4，100mM NaCl，10mMMgCl2，5μM GDP，0.1％不含脂肪酸的BSA(Sigma，catalog A8806)，各種濃度的鞘氨醇-1-磷酸酯，和125pM35S-GTPγS(NEN；比活度1250Ci/mmol)的體積中在96孔微量滴定皿中進(jìn)行培養(yǎng)。將其在溫和混合的情況下在室溫下進(jìn)行1小時的結(jié)合，通過用Packard FiltermateUniversal Harvester將該膜收集到GF/B濾板上來終止結(jié)合。在將該濾板干燥30min后，向各孔中加入40μl Microscint 20并在WallacMicrobeta閃爍計(jì)數(shù)器對結(jié)合進(jìn)行測量。
可以在所述35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)中確定S1P/Edg受體的激動劑和拮抗劑。將用DMSO、甲醇或其它溶劑稀釋的化合物加入到微量滴定皿中從而得到0.01nM至10μM的最終濃度。向其中加入由表達(dá)S1P/Edg受體的細(xì)胞制備的膜，并如所述的那樣與35S-GTPγS進(jìn)行結(jié)合。當(dāng)在不存在天然配體或其它已知激動劑的情況下進(jìn)行試驗(yàn)時，認(rèn)為在高于內(nèi)源性水平的水平上刺激35S-GTPγS結(jié)合的化合物是激動劑，而認(rèn)為抑制35S-GTPγS結(jié)合的內(nèi)源性水平的化合物是反相激動劑。在存在低于最大水平的天然配體或已知的S1P/Edg受體激動劑的情況下用35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)來探測拮抗劑，在這種情況中這些化合物降低了35S-GTPγS結(jié)合的水平。用在存在各種濃度化合物的情況下測定的結(jié)合數(shù)量來測量化合物作為S1P/Edg受體的激動劑、反相激動劑、或拮抗劑的效力。為了對激動劑進(jìn)行評估，將高于基準(zhǔn)的刺激百分比計(jì)算為在存在化合物情況下的結(jié)合除以不存在配體情況下的結(jié)合再乘以100的形式。用非線性回歸曲線擬合程序MRLCalc(Merck ResearchLaboratories)作劑量響應(yīng)曲線，并將EC50值定義為獲得其自身最大刺激50％所需的激動劑濃度。通過用由各受體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞制得的膜測量存在化合物情況下35S-GTPγS的結(jié)合水平來測定化合物對S1P/Edg受體的選擇性。
細(xì)胞內(nèi)鈣通量試驗(yàn)用FLIPR(熒光成像板讀數(shù)器，分子裝置(Fluorescence ImagingPlate Reader，Molecular Devices))測量與細(xì)胞內(nèi)鈣活動有關(guān)的S1P/Edg受體與G蛋白的功能性偶合。收獲表達(dá)S1P/Edg受體的細(xì)胞并將其用試驗(yàn)緩沖劑(包含20mM HEPES，0.1％BSA和710μg/ml丙磺舒(probenicid)的Hanks Buffered鹽水溶液(BRL)(Sigma))洗滌一次。在37℃和5％CO2下在包含500nM鈣敏感的染料Fluo-4(分子探針)的相同緩沖劑中對這些細(xì)胞標(biāo)記1小時。用緩沖劑將這些細(xì)胞洗滌兩次，然后將其以每孔1.5×105的數(shù)量(90μl)涂鍍在涂覆了多熔素的96孔黑色微量滴定皿中。通過用200μl試驗(yàn)緩沖劑將鞘氨醇-1-磷酸酯或其它激動劑稀釋至為最終試驗(yàn)濃度2倍的濃度來制備一種96-孔配體板。將該配體板和細(xì)胞板負(fù)載到該FLIPR儀器上以對其進(jìn)行分析。使這些板平衡至37℃。通過將等體積的配體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞板中來開始試驗(yàn)，并以3min的間隔記錄鈣通量。以面積(總和)或最大峰高(max)的形式對細(xì)胞響應(yīng)進(jìn)行定量。在不存在天然配體的情況下，通過用適宜的溶劑對化合物進(jìn)行稀釋并將其轉(zhuǎn)移到Fluo-4標(biāo)記的細(xì)胞中來對激動劑進(jìn)行評估。在通過加入天然配體或其它S1P/Edg受體激動劑來開始鈣流出之前通過用各種濃度的化合物對該Fluo-4標(biāo)記的細(xì)胞預(yù)處理15分鐘來對拮抗劑進(jìn)行評估。
表達(dá)S1P/Edg受體細(xì)胞的制備可以用許多方法中的任何一種來克隆S1P1/Edg1、S1P3/Edg3、S1P2/Edg5、S1P4/Edg6或S1P5/Edg8。這些方法非限制性地包括(1)RACE PCR克隆技術(shù)(Frohman等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA858998-9002)?？梢杂?′和/或3′RACE來產(chǎn)生全長型cDNA序列；(2)在適宜的表達(dá)載體系統(tǒng)中在構(gòu)建了包含S1P/Edg的cDNA文庫后Edg/S1P cDNA的直接功能性表達(dá)；(3)用由該S1P/Edg蛋白的氨基酸序列設(shè)計(jì)的進(jìn)行了標(biāo)記的簡并寡核苷酸探針對在噬菌體或質(zhì)粒穿梭載體中構(gòu)建的包含S1P/Edg的cDNA文庫進(jìn)行篩選；(4)用編碼所述S1P/Edg蛋白的不完全cDNA對在噬菌體或質(zhì)粒穿梭載體中構(gòu)建的包含S1P/Edg的cDNA文庫進(jìn)行篩選。這種不完全cDNA是通過設(shè)計(jì)得自與S1P/Edg蛋白相關(guān)的其它蛋白已知的氨基酸序列的簡并寡核苷酸引發(fā)劑由S1P/Edg DNA片斷的特定PCR擴(kuò)增而獲得的；(5)用與哺乳動物S1P/Edg蛋白具有同源性的部分cDNA或寡核苷酸對在噬菌體或質(zhì)粒穿梭載體重構(gòu)建的包含S1P/Edg的cDNA文庫進(jìn)行篩選。對于S1P/EdgcDNA的PCR擴(kuò)增而言，這種策略可能還涉及使用基因特異性的寡核苷酸引發(fā)劑；或(6)用S1P/Edg核苷酸序列作為模板設(shè)計(jì)5′和3′基因特異性的寡核苷酸，從而使得可以用已知的RACE技術(shù)來產(chǎn)生全長型cDNA，或者可以用這些用于產(chǎn)生和分離出一種部分編碼區(qū)域的相同已知RACE技術(shù)來產(chǎn)生編碼區(qū)域的一部分并用其作為用于從許多類cDNA和/或基因組文庫中篩選出一種的探針，從而分離出編碼S1P/Edg的核苷酸序列的全長型版本。
本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是可以用其它類型的文庫以及由其它細(xì)胞類型或種屬類型構(gòu)建的數(shù)據(jù)庫來分離編碼S1P/Edg的DNA或S1P/Edg同系物。其它類型的文庫非限制性地包括得自其它細(xì)胞的cDNA文庫。
本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是可以由具有S1P/Edg活性的細(xì)胞或細(xì)胞系制備適宜的cDNA文庫。可以通過首先用用于該類目的的任何可獲得的已知試驗(yàn)測量與細(xì)胞有關(guān)的S1P/Edg活性來對用于制備用來分離出編碼S1P/Edg的cDNA的cDNA文庫的細(xì)胞或細(xì)胞系進(jìn)行選擇。
可以用現(xiàn)有技術(shù)公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來進(jìn)行cDNA文庫的制備。例如可以在Sambrook等人，1989，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(Molecular CloningA Laboratory Manual)；Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor，紐約中找到眾所周知的cDNA文庫構(gòu)建技術(shù)。互補(bǔ)DNA文庫還可以由許多商業(yè)來源獲得，所述商業(yè)來源非限制性地包括ClontechLaboratories，Inc.和Stratagene。
對于S1P/Edg在重組宿主細(xì)胞中的表達(dá)而言，可以使用包含編碼S1P/Edg-樣蛋白的DNA的表達(dá)載體。可以將該類重組宿主細(xì)胞在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)從而制備出S1P/Edg或生物學(xué)等值的形式。表達(dá)載體可以非限制性地包括克隆載體、改性的克隆載體、特定設(shè)計(jì)的質(zhì)?；虿《尽Ｍㄟ^商業(yè)途徑獲得的哺乳動物表達(dá)載體可能適用于重組的S1P/Edg表達(dá)。
重組的宿主細(xì)胞可以是原核或真核細(xì)胞，非限制性地包括細(xì)菌如大腸桿菌、真菌細(xì)胞如酵母菌、哺乳動物細(xì)胞，非限制性地包括牛、豬、猴子和嚙齒動物源的細(xì)胞系；和昆蟲細(xì)胞，非限制性地包括得自果蠅和蠶的細(xì)胞系。
各種S1P/Edg受體的核苷酸序列在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。例如可參見下面的文獻(xiàn)S1P1/Edg1人Ela，T.和T.Maciag 1990，在分化的人內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)的大量轉(zhuǎn)錄物編碼了具有與G-蛋白偶合受體的結(jié)構(gòu)相似結(jié)構(gòu)的多肽(An abundanttranscript induced in differentiating human endothelial cells encodes apolypeptide with structural similarities to G-protein coupled receptors).J.Biol Chem.2659308-9313，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P1/Edg1大鼠Lado，D.C.，C.S.Browe，A.A.Gaskin，J.M.Borden，和A.J.MacLennan.1994，大鼠edg-1即早基因的克隆表達(dá)方式表明了功能的多樣性(Cloning of the rat edg-1 immediate-early geneexpressionpattern suggests diverse functions).Gene 149331-336，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P3/Edg3人An，S.，T.Bleu，W.Huang，O.G.Hallmark，S.R.Coughlin，E.J.Goetzl 1997，編碼溶血磷脂(lysosphingolipids)FEBS的兩種G-蛋白偶合受體的cDNAs的鑒定(Identification of cDNAs encoding two G protein-coupled receptors for lysosphingolipids FEBS)Lett.417279-282，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P2/Edg5人An，S.，Y.Zheng，T.Bleu 2000鞘氨醇1-磷酸酯誘導(dǎo)的細(xì)胞增生、存活和G-蛋白偶合受體Edg3和Edg5介導(dǎo)的相關(guān)發(fā)信號事件(Sphingosine 1-Phosphate-induced cell proliferation，survival，andrelated signaling events mediated by G Protein-coupled receptors Edg3and Edg5).J.Biol.Chem 275288-296，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P4/Edg6人Graler，M.H.，G.Bernhardt，M.Lipp 1998 EDG6，一種在淋巴組織中被特定表達(dá)的與生物活性溶血磷脂受體有關(guān)的新型G蛋白偶合受體(a novel G-protein-coupled receptor related to receptors for bioactivelysophospholipids，is specifically expressed in lymphoid tissue).Genomics53164-169，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P5/Edg8人Im，D.-S.，J.Clemens，T.L.Macdonald，K.R.Lynch 2001，人和小鼠鞘氨醇1-磷酸酯受體，S1P5(Edg-8)的特性鞘氨醇1-磷酸酯受體的結(jié)構(gòu)-活性的關(guān)系(Characterization of the human and mouse sphingosine1-phsophate receptors，S1P5(Edg-8)Structure-Activity relationship ofsphingosine 1-phsophate receptors).Biochemistry 4014053-14060，其在這里被全部引入作為參考。
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S1P5/Edg8大鼠Im，D.-S.，C.E.Heise，N.Ancellin，B.F.O′Dowd，G.-J.Shei，R.P.Heavens，M.R.Rigby，T.Hla，S.Mandala，G.McAllister，S.R.George，K.R.Lynch 2000，新型鞘氨醇1-磷酸酯受體，Edg-8的特性(Characterizationof a novel sphingosine 1-phsophate receptors，Edg-8).J.Biol.Cbem.27514281-14286，其在這里被全部引入作為參考。
WO 01/05829，公開于2001年1月25日，其在這里被全部引入作為參考。
心血管作用的測量可以用下面的方法來評估本發(fā)明化合物對心血管參數(shù)的作用用具有股動脈和靜脈導(dǎo)管的儀器裝備成年雄性大鼠(體重大約為350g)來分別測量動脈壓和靜脈內(nèi)給藥化合物。將動物用戊巴比妥(55mg/kg，ip)麻醉。在Gould Po-Ne-Mah數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)上記錄其血壓和心率。心率是由動脈脈沖波獲得的。在適應(yīng)期后，進(jìn)行基準(zhǔn)讀數(shù)(大約20分鐘)并將該數(shù)據(jù)平均。將化合物靜脈內(nèi)給藥(大約5秒的推注或持續(xù)輸注15分鐘)，在將化合物給藥后每隔一分鐘對數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，記錄60分鐘。以心率中的峰改變或平均動脈壓的形式來對數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算或者用心率或血壓改變對時間作圖的曲線下面積形式來進(jìn)行計(jì)算。將數(shù)據(jù)表示為均值±SEM。用單側(cè)斯圖登成對t-檢驗(yàn)來將其與基準(zhǔn)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，并且認(rèn)為在p＜0.05下有顯著意義。
在Sugiyama，A.，N.N.Aye，Y.Yatomi，Y.Ozaki，K.Hashimoto 2000鞘氨醇-1-磷酸酯——一種天然存在的生物學(xué)活性溶血磷脂對大鼠心血管系統(tǒng)的作用(Effects of Sphingosine-1-Phosphate，a naturally occurringbiologically active lysophospholipid，on the rat cardiovascular system).Jpn.J.Pharmacol.82338-342中對S1P對大鼠心血管系統(tǒng)的作用進(jìn)行了描述，其在這里被全部引入作為參考。
小鼠急性毒性的測量用0.1ml被溶解于無毒基質(zhì)中的試驗(yàn)化合物對每只小鼠靜脈內(nèi)(尾靜脈)給藥并觀察其毒性跡象。嚴(yán)重的跡象可能包括死亡、癲癇發(fā)作、麻痹或喪失意識(unconciousness)。還可能會發(fā)現(xiàn)輕微的中毒跡象，輕微的中毒跡象可以包括共濟(jì)失調(diào)、呼吸緩慢、生氣或相對于正常小鼠而言活性降低。在注意到這些跡象時，用相同的基質(zhì)對給藥溶液進(jìn)行稀釋。以相同的方式將該被稀釋了的劑量給藥于第二只小鼠并同樣觀察其跡象。重復(fù)該過程直至達(dá)到不產(chǎn)生任何跡象的劑量。認(rèn)為其是估算的無作用的水平。以這種水平對另外一只小鼠進(jìn)行給藥以證實(shí)不存在跡象。
淋巴細(xì)胞減少的評估如小鼠急性毒性測量中所述的那樣將化合物進(jìn)行給藥并在給藥后3小時如下所述那樣對小鼠的淋巴細(xì)胞減少進(jìn)行評估。在用CO2使小鼠喪失意識時，打開其胸部，通過直接心臟穿刺取0.5ml血，立即用EDTA對血液進(jìn)行穩(wěn)定并用已進(jìn)行了校準(zhǔn)的用于進(jìn)行鼠科動物白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的臨床血液學(xué)自動分析儀(H2000，CARESIDE，Culver City CA)對其血液學(xué)進(jìn)行評估。通過將三只小鼠的血液學(xué)參數(shù)與三只用基質(zhì)處理的小鼠進(jìn)行比較來確定試驗(yàn)治療中淋巴細(xì)胞的降低。用上述稀釋方法的變型通過耐受性來確定這種評估所用的劑量。對于此目的而言，希望無作用，可接受有輕微的作用，將產(chǎn)生嚴(yán)重毒性的劑量連續(xù)稀釋至僅產(chǎn)生輕微的作用的水平。
實(shí)施例的體外活性正如通過在上述試驗(yàn)中測量出來的其作為S1P1/Edg1受體有效的選擇性激動劑(相對于S1PR3/Edg3受體而言)活性所證明的那樣，這里所公開的實(shí)施例可用作免疫調(diào)節(jié)劑。如在上述35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)中估算的對S1P1/Edg1受體的EC50與對S1P3/Edg3受體的EC50的比例測得的那樣，這里所公開的實(shí)施例特別是對S1P1/Edg1受體的選擇性比對S1PR3/Edg3受體的選擇性高100倍以上并且如通過上述35S-GTPγS結(jié)合試驗(yàn)估算出來的那樣，其對S1P1/Edg1受體的結(jié)合的EC50低于50nM。
權(quán)利要求
1.式I化合物 或其可藥用鹽，其中n是0、1或2；m是0、1或2，這樣當(dāng)m是0時，A直接鍵合在式I中所示的氮雜環(huán)丁烷(n＝0)、吡咯烷(n＝1)或哌啶(n＝2)上；R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自-H、-F、C1-C4烷基、C1-C4全氟代烷基、-Cl、-Br、C1-C8烷氧基和-OCF3；R5和R6獨(dú)立地選自-H、-OH、-F、C1-C4烷基和C1-C4全氟代烷基；R7選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基和噻吩基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR8R9、-NO2、苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C2-C6酰氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C1-C6酰氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基；R8和R9獨(dú)立地選自C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基和C1-C6炔基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基，或者R8和R9可以與它們所連接的氮原子一起形成任選含有1或2個氧原子的具有3-8個原子的飽和單環(huán)，所述環(huán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-5烷氧基；X、Y和Z獨(dú)立地選自-C＝、-CH-、-O-、-N＝、-NH-、-N(R10)-和-S-，這樣所得環(huán)是芳雜環(huán)；R10選自C1-C6烷基、C1-C6鏈烯基和C1-C6炔基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基；A選自-CO2H、-PO3H2、-PO2H2、-SO3H、-CONHSO2R11、-PO(R11)OH、 R11選自C1-C4烷基、苯基、-CH2OH和CH(OH)-苯基；并且每個R12獨(dú)立地選自-H和-CH3。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中A是-CO2H。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中n是1。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中m是1。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中X是-N＝，Y是-N＝，且Z是-O-，這樣所形成的環(huán)是1，2，4-二唑。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R7是苯基，所述苯基任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-OH、-NR7R8、-NO2、苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C2-C6酰氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷氧基、C1-C6烷硫基和C1-C6酰氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I、-OH和C1-C5烷氧基。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式Ia代表的化合物 或其可藥用鹽，其中p是0、1或2；Ra選自苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6環(huán)烷氧基，其中所述苯基、C1-C6烷基、C3-C6環(huán)烷基、C1-C6烷氧基和C3-C6環(huán)烷氧基分別任選被1-3個獨(dú)立地選自下列的取代基取代-F、-Cl、-Br、-I和-OH；且Rb選自-F、-Cl、-Br、-I、-CN、-CH3、-OCH3、-CF3、乙炔基、-NO2和-NH2。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中p是0或1，且Rb選自-F、-Cl和-CF3。
9.權(quán)利要求8的化合物，其中Ra選自C3-C5烷基、環(huán)戊基、環(huán)己基、C2-C4烷氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基，每一所述基團(tuán)任選被1-3個氟取代。
10.選自下表的化合物的立體異構(gòu)體混合物或不含其它立體異構(gòu)體的基本上純形式的單獨(dú)立體異構(gòu)體 或任何上述化合物的可藥用鹽。
11.治療需要該類治療的哺乳動物患者中免疫調(diào)節(jié)異常的方法，所述方法包括以有效治療所述免疫調(diào)節(jié)異常的量給所述患者施用權(quán)利要求1的式I化合物。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)異常是選自全身性紅斑狼瘡、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、I型糖尿病、炎性腸病、膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、多發(fā)性硬化、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、大皰性類天皰瘡、肉樣瘤病、牛皮癬、自身免疫性肌炎、韋格納氏肉芽腫、魚鱗病、格雷夫斯氏眼病和哮喘的自身免疫性或慢性炎性疾病。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)異常是骨髓或器官移植排斥或移植物抗宿主疾病。
14.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)異常選自器官或組織的移植、由移植造成的移植物抗宿主疾病、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡在內(nèi)的自身免疫性綜合征、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、I型糖尿病、葡萄膜炎、后葡萄膜炎、變應(yīng)性腦脊髓炎、腎小球性腎炎、包括風(fēng)濕熱和感染后的腎小球性腎炎在內(nèi)的感染后的自身免疫性疾病、炎性和過度增生性皮膚病、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、大皰性表皮松懈癥、蕁麻疹、血管性水腫、結(jié)節(jié)性脈管炎、紅斑、皮膚上的嗜曙紅細(xì)胞增多、紅斑狼瘡、痤瘡、斑禿、角膜結(jié)膜炎、春季結(jié)膜炎、與貝切特氏病有關(guān)的葡萄膜炎、角膜炎、皰疹性角膜炎、圓錐形角膜、角膜上皮營養(yǎng)不良、角膜白斑、眼天皰瘡、莫倫氏潰瘍、鞏膜炎、格雷夫斯氏眼病、伏格特-小柳-原田三氏綜合征、肉樣瘤病、花粉變態(tài)反應(yīng)、可逆性阻塞性氣道疾病、支氣管哮喘、變應(yīng)性哮喘、內(nèi)源性哮喘、外源性哮喘、粉塵性哮喘、慢性或慢性頑固性哮喘、晚期哮喘和氣道高反應(yīng)性、支氣管炎、胃潰瘍、由局部缺血性疾病和血栓形成造成的血管損害、局部缺血性腸疾病、炎性腸病、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱灼傷有關(guān)的小腸損害、腹部疾病、直腸炎、嗜酸細(xì)胞性胃腸炎、肥大細(xì)胞增生病、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、偏頭痛、鼻炎、濕疹、間質(zhì)性腎炎、肺出血腎炎綜合征、溶血性尿毒癥綜合征、糖尿病腎病、糖多發(fā)性肌炎、格-巴二氏綜合征、美尼爾氏病、多發(fā)性神經(jīng)炎、多神經(jīng)炎、單神經(jīng)炎、神經(jīng)根病、甲狀腺功能亢進(jìn)、巴塞多氏病、單純性紅細(xì)胞再生障礙、再生障礙性貧血、再生不良性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫性溶血性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥、惡性貧血、巨幼紅細(xì)胞貧血、紅細(xì)胞發(fā)生不能、骨質(zhì)疏松癥、肉樣瘤病、纖維化肺、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、皮膚肌炎、尋常性白斑病、尋常性魚鱗病、光變應(yīng)性敏感性、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、動脈硬化、動脈粥樣硬化、大動脈炎綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎、非炎性心肌病、硬皮病、韋格納氏壞死性肉芽腫、口腔干燥-風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎綜合征、肥胖癥、嗜曙紅細(xì)胞性筋膜炎、齦、牙周組織、牙槽骨的損害、substantia ossea dentis、腎小球性腎炎、男性型脫發(fā)或老年性脫發(fā)(通過預(yù)防脫發(fā)或提供頭發(fā)萌芽和/或促進(jìn)頭發(fā)產(chǎn)生和頭發(fā)生長)、肌營養(yǎng)不良、膿皮病和賽雜瑞氏綜合征、阿狄森氏綜合征、在保護(hù)、移植或局部缺血性疾病時發(fā)生的器官的局部缺血-再灌注性損傷、內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎、由藥物或輻射造成的結(jié)腸炎、局部缺血性急性腎功能不全、慢性腎功能不全、由肺-氧或藥物造成的毒素病、肺癌、肺氣腫、白內(nèi)障、鐵塵肺、視網(wǎng)膜色素變性、老年性黃斑變性、vitreal瘢痕形成、角膜強(qiáng)堿燒傷、多形性紅斑皮炎、linear IgA ballous dermatitis和cement dermatitis、齒齦炎、牙周炎、膿毒癥、胰腺炎、由環(huán)境污染造成的疾病、衰老、癌發(fā)生、癌轉(zhuǎn)移和高空病、由組胺或白三烯-C4釋放造成的疾病、貝切特氏病、自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、硬化性膽管炎、部分肝切除術(shù)、急性肝壞死、由毒素造成的壞死、病毒性肝炎、休克、或缺氧癥、B-病毒肝炎、非-A/非-B型肝炎、肝硬化、酒精性肝硬化、肝衰竭、暴發(fā)性肝功能衰竭、晚期發(fā)作的肝衰竭、“acute-on-chronic”肝衰竭、化療作用的強(qiáng)化、巨細(xì)胞病毒感染、HCMV感染、AIDS、癌癥、老年性癡呆、創(chuàng)傷和慢性細(xì)菌感染。
15.權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)異常選自下列病癥1)多發(fā)性硬化，2)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，3)全身性紅斑狼瘡，4)牛皮癬，5)移植器官或組織的排斥，6)炎性腸病，7)淋巴來源的惡性腫瘤，8)急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤以及9)胰島素和非胰島素依賴性糖尿病。
16.一種抑制需要免疫抑制的哺乳動物患者中免疫系統(tǒng)的方法，所述方法包括給所述患者施用免疫抑制有效量的權(quán)利要求1的化合物。
17.包含權(quán)利要求1的化合物和可藥用載體的藥物組合物。
18.一種治療需要該類治療的哺乳動物患者中呼吸疾病或病癥的方法，所述方法包括以可有效治療所述呼吸疾病或病癥的量給所述患者施用權(quán)利要求1的化合物。
19.權(quán)利要求18的化合物，其中所述呼吸疾病或病癥選自下列的上述方法哮喘、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、嬰兒呼吸窘迫綜合征、咳嗽、嗜酸細(xì)胞性肉芽腫、呼吸道合胞體病毒細(xì)支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、特發(fā)性肺纖維化、急性肺損傷和阻塞性細(xì)支氣管炎組織肺炎。
20.治療在有此需要的患者中涉及血管完整性的疾病或病癥的方法，其中所述疾病或病癥選自血管水腫、結(jié)節(jié)性脈管炎、由缺血性疾病和血栓形成引起的血管損傷、缺血性腸病、炎性腸病、壞死性小腸結(jié)腸炎、與熱燒傷引起的腸損傷、動脈硬化、動脈粥樣硬化、主動脈炎綜合征，在保藏、移植或缺血性疾病期間發(fā)生的缺血-再灌注損傷，內(nèi)毒素休克、假膜性結(jié)腸炎、由藥物或放射引起的結(jié)腸炎、缺血性急性腎功能不全、慢性腎功能不全、由肺氧或藥物引起的毒素病、膿毒癥、胰腺炎、由組胺或白三烯-C4釋放引起的疾病、由毒素引起的壞死、病毒性肝炎、休克或缺氧癥、老年癡呆和創(chuàng)傷，所述方法包括給所述患者施用能有效治療疾病或病癥的量的權(quán)利要求1的化合物。
21.治療有此需要的患者中與腦或肺水腫有關(guān)的疾病或病癥的方法，所述方法包括給所述患者施用能有效治療疾病或病癥的量的權(quán)利要求1的化合物。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述疾病或病癥選自休克、膿毒癥、急性呼吸窘迫綜合征和腦水腫。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I化合物及其可藥用鹽。所述化合物是S1P
文檔編號C07D413/12GK101043887SQ200580036265
公開日2007年9月26日 申請日期2005年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月22日
發(fā)明者J·J·哈爾, 嚴(yán)林 申請人:默克公司